KR20070046851A - 키나제 억제제인 트리플루오로메틸 치환된 벤즈아미드 - Google Patents

Abstract

본 발명은 화학식 I의 트리플루오로메틸 치환된 벤즈아미드 화합물, 이들 화합물을 포함하는 제약, 제약 (특히, 단백질 키나제의 억제제, 및(또는) 단백질 키나제 활성에 의해 매개되는 증상, 장애 또는 질환 상태 및(또는) 증식성 질환의 치료제)으로서의 또는 이러한 제약 제조를 위한 이들의 용도, 화합물의 투여를 포함하는 (특히 치료성 및 예방성) 치료 방법, 화합물 및 신규 중간체의 제조 방법 및 이들 합성을 위한 일부 단계에 관한 것이다.

<화학식 I>

트리플루오로메틸 치환된 벤즈아미드 화합물, 단백질 키나제의 억제제, 증식성 질환

Description

키나제 억제제인 트리플루오로메틸 치환된 벤즈아미드 {Trifluoromethyl Substituted Benzamide As Kinase Inhibitors}

<발명의 요약>

본 발명은 트리플루오로메틸 치환된 벤즈아미드 화합물, 이들 화합물을 포함하는 제약, 제약으로서 또는 제약 제조를 위한 이들의 용도, 특히 단백질 키나제 (예컨대 c-abl, Flt-3, KDR, c-Src, c-kit, FGFR-1, c-Raf, b-Raf, cdk-1, Ins-R, Tek, KDR 및(또는) RET 키나제) 및(또는) 이의 돌연변이형의 억제제로서 또는 이들 제조를 위한 이들의 용도, 및(또는) 단백질 키나제 활성에 의해 매개되는 증상, 장애 또는 질환 상태, 및(또는) 증식성 질환의 치료제로서 또는 이의 제조를 위한 이들의 용도, 화합물의 투여를 포함하는 치료 방법, 특히 치료성 및 예방성 치료 방법, 화합물 및 신규 중간체의 제조 방법 및 이들 합성을 위한 일부 단계에 관한 것이다.

특정 융합된 헤테로아릴 유도체의 예를 들어 류마티스 관절염의 치료에 있어서 P38 키나제 억제제로서의 용도에 대해 기술되어 있으며, 이에 관하여 WO 2004/010995를 참고하라. 상기 출원의 초점은 시클로프로필 치환된 유도체에 맞춰져 있다.

많은 단백질 키나제 및 다수의 증식성 및 다른 단백질 키나제-관련 질환에 있어, 단백질 키나제 억제제로서 및 이에 따른 PTK (단백질 티로신 키나제) 관련 질환에 유용한 신규한 화합물의 클래스를 제공할 필요가 여전히 존재한다. 제약상 이로운 PTK 억제 화합물의 신규한 클래스가 요구된다.

시클로프로필 잔기 대신 (추가 치환된 또는 비치환된) 트리플루오로메틸 페닐 잔기를 갖는 화합물은 하기 언급하는 일 이상의 키나제에, 특히 바람직하게 언급되는 것들에, 적어도 활성을, 바람직하게는 선택적으로 활성을 보여준다. 따라서 상기 잔기는 효능있는 키나제 억제제의 디자인을 위한 기초로 사용될 수 있다. 나아가, 이들은 또다른 이로운 제약상 유용한 성질을 보여준다.

<발명의 일반적 기술>

트리플루오로메틸 치환된 벤즈아미드 화합물, 특히 하기 기술하는 것들의 신규 클래스는 키나제의 특정한 타입 또는 클래스 또는 군, (특히 c-Abl, Bcr-Abl, c-Kit, c-Raf, Flt-1, Flt-3, PDGFR-키나제, c-Src, FGF-R1, FGF-R2, FGF-R3, FGF-R4, 카제인 키나제 (CK-1, CK-2, G-CK), Pak, ALK, ZAP70, Jak1, Jak2, Axl, Cdk1, cdk4, cdk5, Met, FAK, Pyk2, Syk, 인슐린 수용체 키나제, Tie-2 중 일 이상) 또는 키나제 (활성 키나제) (예컨대 Bcr-Abl, c-Kit, c-Raf, Flt-3, FGF-R3, PDGF-수용체, 및(또는) Met)의 구성적 활성 돌연변이에 대한 억제를 보인다. 특히 바람직하게는, 이들은 c-abl, c-kit, FGFR (예를 들어 FGFR-1), Ins-R, Tek, HER-1, 더욱 바람직하게는 c-Src, Tie/Tek, KDR 키나제, c-Abl, c-Raf, b-Raf, RET-수용체 키나제 또는 에프린 수용체 키나제; 또는 이들 중 임의의 일 이상의 돌연변이형 (예를 들어 Bcr-Abl, RET/MEN2A, RET/MEN2B, RET/PTC1-9 또는 b-raf(V599E))에 대한 억제 를 보여준다.

이들 활성에 비추어, 화합물은 상기 타입의 키나제, 특별하게는, 언급되는 것들, 가장 특별하게는, 바람직하게 언급되는 것들의 이상(異常) 또는 과다 활성에 특히 관련있는 질환의 치료에 사용될 수 있다.

본 발명은 특히 일 이상의 염-형성기가 존재하는 화학식 I의 트리플루오로메틸 치환된 벤즈아미드 화합물 또는 이의 (바람직하게는 제약상 허용되는) 염에 관한 것이다.

(상기식에서,

R₁은 수소 또는 -N(R₆R₇)이고, 여기서 R₆ 및 R₇ 각각은 알킬이거나 또는 R₆ 및 R₇은 이들에 결합하는 질소와 함께, 5- 내지 7-원 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 또다른 고리 원자는 탄소, 및 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 0, 1 또는 2 헤테로원자로부터 선택되고, 고리는 비치환되거나 또는 또다른 질소 고리 원자가 존재하는 경우, 그 질소에 알킬로 치환되거나 또는 비치환되고;

R₂는 수소 또는 -CH₂-N(R₆R₇)이고, 여기서 R₆ 및 R₇ 각각은 알킬이거나 또는 R₆ 및 R₇은 이들에 결합하는 질소와 함께, 5- 내지 7-원 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 또다른 고리 원자는 탄소, 및 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 0, 1 또는 2 헤테로원자로부터 선택되고, 고리는 비치환되거나 또는 또다른 질소 고리 원자가 존재하는 경우, 그 질소에 알킬로 치환되거나 또는 비치환되고;

조건부로, R₁ 및 R₂ 중 일 이상은 수소이고;

R₃은 할로 또는 C₁-C₇-알킬이고;

R₄는

(여기서

X는 CH, N 또는 C-NH₂이고;

Y는 CH 또는 N이고;

조건부로 X 및 Y 양자가 동시에 N는 아니고;

및 R₅는 수소, C₁-C₇-알킬 또는 비치환된 또는 치환된 페닐임);

로 이루어지는 군으로부터 선택되는 비시클릭 헤테로시클릴이고,

A는 -C(=O)-NH- (화학식 I 중 Q 및 Z를 포함하는 고리에 결합된 -NH-를 가짐) 또는 -NH-C(=O)- (화학식 I 중 Q 및 Z를 포함하는 고리에 결합된 -C(=O)-를 가 짐)이고;

Z는 CH 또는 N이고; 및

Q는 -S- 또는 -CH=CH-이다)

본 발명은 또한 화학식 I의 화합물을 온혈 동물, 특히 인간에게 투여하는 것을 포함하는 키나제 의존성 및(또는) 증식성 질환의 치료 방법, 및 특히 키나제 의존성 질환 또는 장애 치료를 위한 화학식 I의 화합물의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 특히, 키나제 의존성 질환 또는 장애 치료를 위한 화학식 I의 화합물을 포함하는 제약 제제, 화학식 I의 화합물의 제조 방법, 및 이들의 제조를 위한 신규한 출발 물질 및 중간체에 관한 것이다. 본 발명은 또한 키나제 의존성 질환의 치료를 위한 제약 제제의 제조에 있어서의 화학식 I의 화합물의 용도에 관한 것이다.

상기 및 하기 사용되는 일반 용어 또는 기호는, 달리 나타내지 않는다면, 본 명세서의 문맥에서 다음의 의미를 가진다:

결합에 대해 수직인 파선을 사용하는 각각의 경우에, 이것은 주어진 잔기가 해당 분자의 나머지에 결합하는 결합을 표시한다.

용어 "저급" 또는 "C₁-C₇-"은 최대 7 이하, 특히, 최대 4 이하의 탄소수를 갖는, 분지쇄 또는 직쇄인 잔기를 의미한다. 저급 또는 C₁-C₇-알킬은, 예를 들어, n-펜틸, n-헥실 또는 n-헵틸 또는 바람직하게는 C₁-C₄-알킬, 특히 메틸, 에틸, n-프로필, sec-프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸이다.

비치환된 또는 치환된 페닐은 비치환되거나 또는 일 이상, 바람직하게는 일 또는 이 치환기로 치환되며, 치환기는 다음을 포함하는 임의의 일 이상의 관능기로부터 독립적으로 선택된다: 할로, 저급 알킬, 치환된 저급 알킬, 예컨대 할로 저급 알킬 예를 들어 트리플루오로메틸, 저급 알케닐, 저급 알키닐, 저급 알카노일, 저급 알콕시, 히드록시, 에테르화 또는 에스테르화 히드록시, 아미노, 일- 또는 이치환된 아미노, 예컨대 모노- 또는 디-저급 알킬아미노, 아미노 저급 알콕시; 저급 알카노일아미노; 아미디노, 니트로, 시아노, 시아노-저급 알킬, 카르복시, 에스테르화 카르복시, 특히 저급 알콕시 카르보닐, 예를 들어 메톡시 카르보닐, n-프로폭시 카르보닐 또는 이소-프로폭시 카르보닐, 저급 알카노일, 벤조일, 카르바모일, N-일치환- 또는 N,N-이치환된 카르바모일, 예컨대 N-모노- 또는 N,N-디-저급 알킬카르바모일 또는 N-모노- 또는 N,N-디-(히드록시-저급 알킬)-카르바모일, 아미디노, 구아니디노, 우레이도, 메르캅토, 술포, 저급 알킬티오, 술폰아미도, 벤조술폰아미도, 술포노, 페닐, 페닐-저급 알킬, 예컨대 벤질, 페녹시, 페닐-저급 알콕시, 예컨대 벤질록시, 페닐티오, 페닐-저급 알킬티오, 저급 알킬페닐티오, 저급 알킬술피닐, 페닐술피닐, 페닐-저급 알킬술피닐, 알킬페닐술피닐, 저급 알칸술포닐, 페닐술포닐, 페닐-저급 알킬술포닐, 알킬페닐술포닐, 할로겐-저급 알킬메르캅토, 할로겐-저급 알킬술포닐, 예컨대 트리플루오로메탄 술포닐, 디히드록시보라 (-B(OH)₂), 고리의 인접한 C-원자에 결합된 저급 알킬렌 디옥시, 예컨대 메틸렌 디옥시, 포스포노 (-P(=O)(OH)₂), 히드록시-저급 알콕시 포스포릴 또는 디-저급 알콕시포스포릴, 또는 -NR_aR_b (여기서 R_a 및 R_b는 동일하거나 또는 상이할 수 있으며 독립적으로 H; 저급 알킬 (예를 들어 메틸, 에틸 또는 프로필)이거나; 또는 R_a 및 R_b는 N 원자와 함께 1-4 질소, 산소 또는 황 원자를 함유하는 3- 내지 8-원 헤테로시클릭 고리를 형성함 (예를 들어 피페라지닐, 저급 알킬-피페라지닐, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디노, 모르폴리닐, 이미다졸리닐)).

알킬은 바람직하게는 탄소수 1 내지 12이거나 또는 특별하게는 탄소수 7 이하, 바람직하게는 1 내지 5 이하의 선형 또는 분지된 저급 알킬이고; 바람직하게는, 상기 정의된 바와 같은 저급 알킬이다.

할로 또는 할로겐은 바람직하게는 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도, 가장 바람직하게는 플루오로, 클로로 또는 브로모이다.

염은 특히 화학식 I의 화합물의 제약상 허용되는 염이다. 이들은 예를 들어, 수용액 중 4 내지 10 범위의 pH에서 적어도 부분적으로 해리된 형태로 존재할 수 있거나 특히 고체 형태로 단리될 수 있는 염형성 기, 예컨대 염기성 또는 산성 기가 존재하는 곳에서 형성될 수 있다.

이러한 염은 예를 들어, 염기성 질소 원자를 갖는 화학식 I의 화합물로부터, 바람직하게는 유기 또는 무기 산에 의해 산 부가 염으로, 특히, 제약상 허용되는 염으로 형성된다. 적합한 무기 산은 예를 들어, 할로겐 산, 예컨대 염산, 황산, 또는 인산이다. 적합한 유기 산은 예를 들어, 카르복실산, 포스폰산, 술폰산 또는 술팜산, 예를 들어 아세트산, 프로피온산, 락트산, 푸마르산, 숙신산, 시트르산, 아미노 산, 예컨대 글루탐산 또는 아스파르트산, 말레산, 히드록시말레산, 메틸말레산, 벤조산, 메탄- 또는 에탄-술폰산, 에탄-1,2-디술폰산, 벤젠술폰산, 2-나프탈렌술폰산, 1,5-나프탈렌-디술폰산, N-시클로헥실술팜산, N-메틸-, N-에틸- 또는 N-프로필-술팜산, 또는 기타 유기 프로톤산, 예컨대 아스코르브산이다.

음전하를 띈 라디칼, 예컨대 카르복시 또는 술포의 존재하에, 염은 염기와 함께 형성될 수 있거나 (예를 들어 금속 또는 암모늄 염, 예컨대 알칼리 금속 또는알칼리 토금속 염 (예를 들어 나트륨, 칼륨, 마그네슘 또는 칼슘 염), 또는 암모니아 또는 적합한 유기 아민 (예컨대 3급 모노아민, 예를 들어 트리에틸아민 또는 트리(2-히드록시에틸)아민)을 갖는 암모늄 염), 또는 헤테로시클릭 염기 (예를 들어 N-에틸-피페리딘 또는 N,N'-디메틸피페라진)와 함께 형성될 수 있다.

염기성 기 및 산 기가 동일한 분자내에 존재할 때, 화학식 I의 화합물은 또한 내부 염을 형성할 수 있다.

단리 또는 정제 목적을 위해, 제약상 허용되지 않는 염, 예를 들어 피크레이트 또는 퍼클로레이트를 사용하는 것 또한 가능하다. 치료 용도를 위해서는, 단지 제약상 허용되는 염 또는 유리 화합물만이 사용되므로 (제약 제제 중에 포함되는 것이 가능한 경우), 이들이 바람직하다.

유리형 중의 화합물과 이들의 염 형태 (예를 들어, 화합물 또는 이의 염의 정제 또는 확인에 있어, 중간체로서 사용될 수 있는 염을 포함)의 화합물 간의 밀접한 관계에 비추어, 상기 및 하기의 "화합물", 특히 화학식 I의 화합물(들)은 적절하고 적당하게는, 달리 언급하지 않는다면, 일 이상의 이의 염 또는 유리 화합물 및 일 이상의 이의 염의 혼합물로도 또한 지칭되는 것으로 이해된다.

복수형이 화합물, 염, 제약 제제, 질환, 장애 등에 사용되는 경우, 이는 단일 화합물, 염, 제약 제제, 질환 등을 또한 의미하는 것으로도 또한 의도되며, 반대의 경우도 또한 같다.

화학식 I의 화합물은 중요한 약리상 성질을 가지며, 키나제 의존성 질환의 치료, 예를 들어, 일 이상의 증식성 질환 치료를 위한 약물로 유용하다.

용어 "치료 (treatment/therapy)"는 (특히 티로신 단백질 키나제 의존성 질환 또는 장애의 치료) 상기 질환, 특히 하기 언급하는 질환의 예방성 또는 바람직하게는 치료성 (경감, 치료(curing), 증상-완화, 증상-감소, 키나제-조절 및(또는) 키나제-억제를 비제한적으로 포함함) 치료를 지칭한다.

(화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용되는 염의 용도에 관련되는) 하기 또는 상기 용어 "용도(use)"가 (동사로서나 또는 명사로서) 언급되는 경우, 이는 (문맥에서 달리 나타내지 않는다면) 임의의 일 이상의 본 발명의 다음의 실시태양을, (달리 언급하지 않는다면) 각각, 적절하고 적당하게 포함한다: (특히 티로신) 단백질 키나제 의존성 질환 치료의 용도, 단백질 키나제 의존성 질환 치료에 사용하기 위한 제약 조성물 제조에 있어서의 용도, 단백질 키나제 의존성 및(또는) 증식성 질환의 치료에 있어 일 이상의 화학식 I의 화합물의 사용 방법, 단백질 키나제 의존성 질환의 치료를 위한 일 이상의 화학식 I의 화합물을 포함하는 제약 제제, 및 단백질 키나제 의존성 질환 치료에 있어서의 일 이상의 화학식 I의 화합물. 특히, 치료되어지며 화학식 I의 화합물의 "용도"에 바람직한 질환은 하기 언급되는 (특히 티로신) 단백질 키나제 의존성 ("의존성"이란 "단순한 의존성" 뿐 아니라, "보조하는" 경우도 의미함) 질환, 특히 하기 언급되는 증식성 질환, 더욱 특히 c-Abl, Bcr-Abl, c-Kit, c-Raf, FIt-1, Flt-3, PDGFR-키나제, c-Src, FGF-R1, FGF-R2, FGF-R3, FGF-R4, 카제인 키나제 (CK-1, CK-2, G-CK), Pak, ALK, ZAP70, Jak1, Jak2, Axl, Cdk1, cdk4, cdk5, Met, FAK, Pyk2, Syk, 인슐린 수용체 키나제, Tie-2 또는 키나제 (활성 키나제) (예컨대 Bcr-Abl, c-Kit, c-Raf, b-Raf, Flt-3, FGF-R3, PDGF-수용체 및(또는) Met)의 구성적 활성 돌연변이, (이하 "상기 키나제") 중 일 이상, 및 더욱 특히, c-Raf, b-Raf, c-src, c-Abl, Tie/Tek, 및 가장 특히, KDR, RET-수용체 키나제, 및(또는) 에프린 수용체 키나제, 또는 이들 중 임의의 일 이상의 돌연변이에 의존하는 임의의 일 이상의 상기 질환 또는 다른 질환으로부터 선택되고, 따라서 (특히, 이상(異常)적으로 과-발현되거나, 구성적으로 활성이거나 및(또는) 돌연변이된 키나제의 경우) 상기 키나제-의존성 질환이 상기 키나제 경로 또는 언급된 키나제 중 둘 이상의 임의의 조합에 의존성인 경우, 화학식 I의 화합물을 키나제 의존성 질환, 특히 상기 및 하기 언급되는 키나제에 의존하는 일 이상의 질환 치료에 사용할 수 있다.

키나제 의존성 질환 또는 장애를 언급하는 경우, 이는 바람직하게는, 상기 및(또는) 하기 언급되는 키나제에 대해 광범위한 의미에 있어, 임의의 일 이상의 c-Abl, c-kit, FGFR (예를 들어 FGFR-1), c-Raf, b-Raf, c-Src, Tie/Tek, c-abl 및 가장 특히 KDR, RET-수용체 키나제, 및(또는) 에프린 수용체 키나제 수용체 키나제 의존성인 임의의 일 이상의 질환 또는 장애, 이들 키나제 중 임의의 일 이상의 돌 연변이형에 의존하는 임의의 일 이상의 질환 또는 장애를 지칭한다.

화학식 I의 화합물은 중요한 약리상 성질을 가지며, 단백질 키나제 의존성 질환의 치료에, 예를 들어, 증식성 질환의 치료에 있어서의 약물로서 사용될 수 있다.

하기의 통상적인 예시적 시험 시스템의 기술에 있어, 하기의 약어는 다음의 의미를 가진다: DMSO = 디메틸 술폭시드; DTT = 디티오트레이톨; EDTA = 에틸렌 디아민 테트라아세테이트; MOI = 감염 다중도; PMSF = p-톨루엔술포닐 플루오라이드; Tris = 트리스(히드록시메틸)아미노메탄. "억제제"는 달리 언급하지 않는다면, 화학식 I의 시험 화합물이다.

KDR 단백질-티로신 키나제 활성의 억제제로서의 본 발명 화합물의 효능은 다음과 같이 입증될 수 있다: 6-웰 세포-배양 플레이트 중의 완전 배양 배지 (10% 소태아 혈청 = FCS가 있음)에 시딩시, 약 80% 조밀성을 보일 때까지 5% CO₂하 37℃에서 인큐베이션되는, 영구적으로 인간 VEGF-R2 수용체 (KDR)를 발현하는 형질감염된 CHO 세포와 같은 세포에서 VEGF-유도 수용체 자가인산화의 억제를 확인할 수 있다. 이 때 시험되는 화합물을 배양 배지 (FCS는 없고, 0.1% 소 혈청 알부민이 있음)에 희석시켜 세포에 첨가한다. 대조군은 시험 화합물이 없는 배지를 포함한다. 37℃에서 2 h 인큐베이션 후, 재조합 VEGF를 첨가한다; 최종 VEGF 농도는 20 ng/ml이다. 37℃에서 추가 5 분간 인큐베이션 후, 세포를 빙냉 PBS (포스페이트-완충 염수)로 두번 세척하고 웰 당 100 ㎕ 용균 완충액에 즉시 용해시킨다. 그 후 용해물 을 원심분리하여 세포 핵을 제거하여, 상등액의 단백질 농도를 상업적 단백질 분석법 (BIORAD)을 사용하여 결정한다. 이때의 용해물은 즉시 사용할 수 있고, 또는 필요하다면 -20℃에 저장할 수 있다. 이러한 프로토콜을 사용하여, 화학식 I의 화합물이 KDR 억제에 대해 0.005-20 μM의 범위, 바람직하게는 0.005 내지 20 μM의 범위, 더욱 바람직하게는 0.005 내지 0.5 μM의 범위의 IC₅₀ 값을 보임을 확인할 수 있다.

RET의 억제도를 다음과 같이 측정할 수 있다: 활성 루프 M918T에서의 활성 돌연변이에 의해 wtRET와 상이해진, RET (wtRET) 및 RET-Men2B의 야생형 키나제 도메인에 상응하는 인간 RET-Men2A의 세포질내 키나제 도메인의 아미노산 영역 658-1072 (스위스 프로트(Swiss prot) 번호 Q9BTB0)를 발현하는 재조합 바큘로바이러스를 생산하는데 바큘로바이러스 공여자 벡터 pFB-GSTX3을 사용한다 ([D. S. Acton et al., Oncogene 19, 3121 (2000)]). wtRET 및 RET-Men2B의 세포질 도메인에 대한 코딩 서열은 플라스미드 pBABEpuro RET-Men2A 및 pBABEpuro RET-Men2B로부터 PCR에 의해 증폭된다. 증폭된 DNA 단편 및 pFB-GSTX3 벡터는 Sall 및 Kpnl로 소화시킴으로써 라이게이션하는데 적합해진다. 이들 DNA 단편의 라이게이션은 각각, 바큘로바이러스 공여자 플라스미드 pFB-GX3-RET-Men2A 및 pFB-GX3-RET-Men2B에서 일어난다.

바이러스의 생산: 키나제 도메인을 함유하는 전이 벡터를 DH10Bac 세포주 (GIBCO) 내에서 형질감염시키고 선택적 한천 플레이트 상에 도말된다. (박테리아 에 의해 운반되는) 바이러스 게놈 내로의 융합 서열의 삽입이 없는 콜로니는 청색이다. 단일한, 백색 콜로니를 가려내어, 표준 플라스미드 정제법에 의해, 바이러스 DNA (바크미드)를 박테리아로부터 단리한다. 그 후 Sf9 세포 또는 Sf21 (미국 미생물 보존 센터, American Type Culture Collection) 세포를 셀펙틴 (Cellfectin) 시약을 사용하여 바이러스 DNA가 들어있는 25 cm² 플라스크 내에서 형질감염시킨다.

Sf9 세포에서 소규모 단백질 발현의 결정: 바이러스-함유 배지를 형질감염된 세포 배양물로부터 모아서 감염을 통해 이의 역가를 증가시킨다. 두번 감염 후 얻어진 바이러스-함유 배지를 대규모 단백질 발현에 사용한다. 대규모 단백질 발현에 있어, 100 cm² 둥근 조직 배양 플레이트를 5 x 10⁷ 세포/플레이트로 시딩하고 1 mL의 바이러스-함유 배지 (대략 5 MOI)로 감염시킨다. 3일 후, 세포를 플레이트로부터 스크래핑하고 500 rpm에서 5 분 동안 원심분리시킨다. 10-20의 100 cm² 플레이트로부터의 세포 펠렛을 50 mL의 빙냉 용균 완충액 (25 mM Tris-HCl, pH 7.5, 2 mM EDTA, 1% NP-40, 1 mM DTT, 1 mM PMSF)에 재현탁시킨다. 세포를 15 분 동안 얼음상에서 교반시킨 후, 5,000 rpm에서 20 분 동안 원심분리시킨다.

GST-태그 부착 단백질의 정제: 원심분리된 세포 용해물을 2 mL 글루타티온-세파로스 컬럼 (파마시아, Pharmacia) 상에 로딩시키고 10 mL의 25 mM Tris-HCl, pH 7.5, 2 mM EDTA, 1 mM DTT, 200 mM NaCl로 3번 세척한다. 그 후 GST-태그 부착 단백질을 25 mM Tris-HCl, pH 7.5, 10 mM 환원형-글로타티온, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 10% 글리세롤로 10번 (각각 1 mL) 용리하고 -70℃에 저장한다.

효소 활성의 측정: GST-wtRET 또는 GST-RET-Men2B 단백질 15 ng, 20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 1 mM MnCl₂, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 3 μg/mL 폴리(Glu.Tyr) 4:1, 1% DMSO, 2.0 μM ATP (γ-[³³P]-ATP 0.1 μCi)을 함유하는 30 ㎕의 최종 부피에서 정제된 GST-wtRET 또는 GST-RET-Men2B 단백질로 티로신 단백질 키나제 분석을 수행한다. [γ³³P] ATP로부터의 폴리(Glu,Tyr) 4:1로의 ³³P의 혼입을 측정함으로써, 억제제의 존재 또는 부존재에서의 활성을 분석한다. 하기 기술되는 조건 하에, 15 분 동안 상온의 96-웰 플레이트에서 분석을 수행하고, 20 ㎕의 125 mM EDTA를 첨가함으로써 분석을 종결시킨다. 이어서, 40 ㎕의 반응 혼합물을 미리 메탄올로 5 분 동안 침지시킨 임모빌론(Immobilon)-PVDF 막 (밀리포르, Millipore) 상에 옮기고, 물로 세정한 후, 0.5% H₃PO₄로 5 분 동안 침지시키고, 진공원과 분리된 진공 다기관 상에 장착시킨다. 모든 시료를 점적한 후, 진공을 연결하고 각각의 웰을 200 ㎕ 0.5% H₃PO₄로 세정한다. 막을 제거하고 진탕기 상에서 1.0% H₃PO₄로 4번, 메탄올로 한번 세척하였다. 상온에서 건조시킨 후, 막을 계수하고, 패커드 탑카운트 (Packard TopCount) 96-웰 프레임에 장착시키고, 10 ㎕/웰의 마이크로신트 TM (Microscint TM) (패커드)를 첨가한다. 2벌의 4가지 농도에서 (보통 0.01, 0.1, 1 및 10 μM) 각각의 화합물의 억제도 백분율을 선형 회귀 분석하여 IC₅₀ 값을 계산한다. 1 유닛의 단백질 키나제 활성을 37℃에서 [γ³³P] ATP로부터 단백질의 기질 단백질/분/mg로 전달되는 1 nmole의 ³³P ATP로 정의된다.

IC₅₀ 계산:

입력: 세척하지 않은 임모빌론 막 상에서 종결된 3 x 4 ㎕ 분석.

백그라운드 (3 웰): 효소 대신 H₂O로 분석.

양성 대조군 (4 웰): 화합물 대신 3% DMSO.

조(Bath) 대조군 (1 웰): 반응 혼합물이 없음.

4가지 농도에서 (보통 10 μM에서 시작하여 3배 또는 10배 희석) 각각의 화합물의 억제도 백분율을 대수 회귀 분석하여 IC₅₀ 값을 계산한다. 각각의 실험에서, 기준 화합물에 의한 실제 억제도를 기준 억제제의 평균 값을 기초로 하는 IC₅₀ 값의 표준화(normalization)에 사용한다:

표준화 IC₅₀ = 측정된 IC₅₀ 평균 기준 IC₅₀/측정된 기준 IC₅₀

예: 실험에서 기준 억제제 0.4 μM, 평균 0.3 μM;

실험에서 시험 화합물 1.0 μM, 표준화: 0.3/0.4 = 0.75 μM.

예를 들어, 스타우로스포린 또는 합성 스타우로스포린 유도체를 기준 화합물로 사용한다. 상기 프로토콜을 사용하여, 화학식 I의 화합물이 0.001-10 μM의 범위, 바람직하게는 0.01-1 μM의 범위의 RET 억제에 대한 IC₅₀ 값을 보임을 알 수 있다.

화학식 I의 화합물은 또한 다른 티로신 단백질 키나제 예컨대 특히 c-Src 키 나제, c-Kit 및(또는) FGFR을 억제하는데, 이들 모두는 동물, 특히 인간 세포를 포함하는 포유류 세포에서 성장 조절 및 형절전환에 일정한 역할을 한다. 적절한 분석에 대해서는 문헌 [Andrejauskas-Buchdunger et al., Cancer Res. 52, 5353-8 (1992)]에 기술되어 있다. 상기 시험 시스템을 사용시, 화학식 I의 화합물은 0.005 내지 100 μM, 보통 0.01 내지 5 μM 범위의 c-Src 억제에 대한 IC₅₀ 값을 보일 수 있다.

Tek의 억제도는 다음과 같이 결정될 수 있다: 이들 키나제의 발현, 정제 및 분석 과정은 문헌 [Fabbro et al., Pharmacol. Ther. 82(2-3) 293-301 (1999)]에 기술되어 있다. 개괄하자면, pAcG1 벡터 (파르민겐, Pharmingen)로부터의 글루타티온 S-트랜스퍼라제 (GST) 유전자를 EcoRV 및 EcoRI로 절제하고, Fast-Bac 바큘로바이러스 벡터 (GIBCO)의 클로닝 부위에 삽입하여 pAcG1 융합 벡터 (FBG0)로부터 유도된 N-말단 클로닝 부위를 갖는 5530 bp 벡터를 생산하였다. C-말단 클로닝 부위는 사용되는 N-말단 클로닝 부위 중 (Fast-Bac 벡터로부터의) 임의의 클로닝 하류 부위일 수 있다. N-말단 GST-융합된 (pAcG1, Pharmingen) KDR 또는 Tek 키나제 도메인은 독일, 프라이버그에 위치하는 프로퀴나제사 (ProQinase)로부터 입수한다. EcoRI 절제 및 EcoRI 소화된 FBG1로의 라이게이션을 통해 Tek를 FBG 1 벡터 내로 재클로닝시킨다 (FBG1-Tek). c-Kit (aa 544-976) 및 c-Fms (aa 538-972)의 전체 세포질 도메인의 코딩 서열을 각각 인간 자궁 및 인간 골수 cDNA 라이브러리 (클론테크, Clontech)로부터 PCR로 증폭시킨다. 증폭된 DNA 단편을 BamHI-EcoRI 삽입을 통해 FBG 1 내로 클로닝시켜 GST와 융합하여, FBG 1-c-Kit 및 FBG 1-c-Fms를 수득한다. Tek를 EcoRI 절제 및 EcoRI 소화된 FBG0으로의 라이게이션을 통해 FBGO 전이 벡터 내로 재클로닝시킨다 (FBG-Tie2/Tek). FGFR-1 및 c-met 키나제 도메인을 인간 A431 세포로부터 PCR을 통해 얻는다. N-말단 프라이머는 돌출(overhanging) EcoRI 부위를 포함하며, C-말단 프라이머는 Xhol 부위를 포함하여 전이 벡터로의 클로닝을 돕는다. PCR 단편 및 FBGO 모두의 소화 후의 절단 산물들은 겔-정제되고 함께 라이게이션되어 키나제 구조물 (FBG-Met, FBG-FGFR-1)을 형성한다.

키나제에 대한 바이러스를 GIBCO에서 공급되는 프로토콜에 따라 제조한다. 개괄하자면, 키나제 도메인 함유 전이 벡터를 DH10Bac 세포주 (GIBCO) 내로 형질감염시키고, 추천되는 농도의 Blue-Gal, IPTG, 카나마이신, 테트라시클린, 및 겐타마이신을 함유하는 한천 플레이트에 도말한다. 박테리아에 의해 운반되는 바이러스 게놈 내로의 융합 서열의 삽입이 없는 콜로니는 청색이다. 보통 단일 백색 콜로니를 가려내어 바이러스 DNA (바크미드)를 표준 플라스미드 미니 프렙 (mini prep) 방법으로 단리시킨다. 그 후 셀펙틴 시약 및 Bac-to-Bac kit (GIBCO)와 함께 공급되는 프로토콜을 사용하여, Sf9 세포 또는 High Five 세포 (GIBCO)를 바이러스 DNA가 있는 25 cm² 플라스크 중에서 형질감염시킨다. 바이러스 함유 배지를 형질감염된 세포 배양물로부터 모아서 감염을 통해 이의 역가를 증가시킨다. 두번 감염 후 얻어진 바이러스 함유 배지를 대규모 단백질 발현에 사용한다. 대규모 단백질 발현에 있어, 100 cm² 둥근 조직 배양 플레이트를 5 x 10⁷ 세포/플레이트로 시딩하고 1 mL의 바이러스-함유 배지 (대략 5 MOI)로 감염시킨다. 3일 후, 세포를 플레이트로부터 스크래핑하고 500 rpm에서 5 분 동안 원심분리시킨다.

10-20의 100 cm² 플레이트로부터의 세포 펠렛을 50 mL의 빙냉 용균 완충액 (25 mM Tris-HCl, pH 7.5, 2 mM EDTA, 1% NP-40, 1 mM DTT, 1 mM PMSF)에 재현탁시킨다. 세포를 15 분 동안 얼음상에서 교반시킨 후, 5,000 rpm에서 20 분 동안 원심분리시킨다. 상등액을 2 ml 글루타티온-세파로스 컬럼 상에 로딩하고 10 mL의 25 mM Tris-HCl, pH 7.5, 2 mM EDTA, 1 mM DTT, 200 mM NaCl로 3번 세척한다. 그 후 GST-태그 부착 단백질을 25 mM Tris-HCl, pH 7.5, 10 mM 환원형-글로타티온, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 10% 글리세롤로 10번 (각각 1 mL) 용리하고 -70℃에 저장한다.

분석물 (30 ㎕)은 200-1800 ng의 효소 단백질 (비 활성(specific activity)에 의존), 20 mM Tris-HCl, pH 7.6, 3 mM MnCl₂, 3 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 10 μM Na₃VO₄, 3 μg/ml 폴리(Glu.Tyr) 4:1, 8 μM ATP (γ-[³³P]-ATP 0.1 μCi)을 함유한다. 반응을 20 분 동안 상온에서 인큐베이션 시킨 후, 25 ㎕ 0.25 M EDTA (pH 7.0)을 첨가하여 종결시킨다. 저 진공원에 연결된 밀리포르 마이크로타이터 필터 (Millipore Microtiter filter) 다기관에 장착된 임모빌론 P 막 상에, 다채널 분배기로 40 ㎕의 분취액을 점적시킨다. 액체의 제거 후, 막을 옮겨 0.5% H₃PO₄를 함유하는 조로 4번 세척하고, EtOH로 1번 세척 (각각, 10 분 마다 진탕 인큐베이션함) 하고, 건조시키고, 10 ㎕ 마이크로신트® 첨가된 휴렛 패커드 탑카운트 (Hewlett Packard TopCount) 다기관에 장착시키고 계수한다. 선형 회귀 분석으로 계산시, 화학식 I의 화합물은 약 0.01-100 μM, 바람직하게는 0.1 내지 10 μM의 Tek 억제에 대한 IC₅₀ 값을 보일 수 있다.

c-Raf-1의 억제도를 다음과 같이 결정할 수 있다: 활성 c-Raf-1 키나제 산물을 위해 요구되는 v-Src 및 v-Ras 재조합 바큘로바이러스와 함께 GST-c-Raf-1 재조합 바큘로바이러스로 Sf21 세포를 3번 감염시켜 재조합 c-Raf-1 단백질 산물을 얻는다 ([Williams et al., PNAS 1992; 89: 2922-2926]). 활성 Ras (v-Ras)는 세포 막에 c-Raf-1을 보충하기 위해 요구되며 v-Src는 c-Raf-1을 인산화시켜 이를 완전히 활성화시키기 위해 요구된다 ([Williams et al., PNAS 1992; 89: 2922-2926]). 세포를 150 mm 접시 당 2.5 x 10⁷ 세포로 시딩하여 실온(RT)에서 1 시간 동안 150 mm 접시에 부착되도록 한다. 배지 (10 % FBS 함유 SF900II)를 흡인시키고 재조합 바큘로바이러스; GST-C-Raf-1, v-Ras 및 v-Src를 각각, 3.0, 2.5 및 2.5의 MOI로 총 부피가 4-5 ml가 되도록 첨가한다. 세포를 RT에서 1 시간 동안 인큐베이션시킨 후, 15 mL의 배지를 첨가한다. 감염된 세포를 27℃에서 48-72 시간 동안 인큐베이션시킨다. 감염된 Sf21 세포를 스크랩핑시키고 50 mL 튜브에 모아 소르볼(Sorvall) 원심분리기에서 4℃ 10 분 동안 1100 g로 원심분리시킨다. 세포 펠렛을 빙냉 PBS로 1번 세척하고 2.5 x 10⁷ 세포 당 0.6 mL 용균 완충액으로 용해시킨다. 얼음 상에서 10 분 후 간헐적인 피페팅(pipetting)을 통해 세포를 완전히 용 해시킨다. 세포 용해물을 SS-34 회전자가 있는 소르볼 원심분리기에서 4℃ 10 분 동안 14,500 g에서 원심분리시키고 상등액을 새 튜브로 옮겨 -8O℃에 저장한다. 2.5 x 10⁷ 세포 당 빙냉 PBS에서 평형화된 100 ㎕의 패킹된 글루타티온-세파로스 4B 비드를 사용하여 세포 용해물로부터 c-Raf-1을 정제한다. GST-c-Raf-1을 4℃에서 1 시간 동안 록킹(rocking)으로 비드에 결합되게 한다. 비드와 결합된 GST-c-Raf-1을 컬럼에 옮긴다. 컬럼을 용균 완충액으로 1번 세척하고 빙냉 Tris 완충 염수로 2번 세척한다. 빙냉 용리 완충액을 첨가하고 컬럼 흐름을 멈추어 유리 글루타티온이 GST-c-Raf-1과 글루타티온 세파로스 비드와의 상호반응을 방해하도록 한다. 분획물 (1 mL)을 사전에 냉각시킨 튜브에 모은다. 각각의 튜브는 10 % 글리세롤 (최종 농도)을 함유하여 동결 해동 주기 동안 키나제 활성을 유지시킨다. 정제된 GST-c-Raf-1 키나제 단백질의 분획물을 -8O℃에 저장한다.

IκB를 c-Raf-1 키나제에 대한 기질로 사용하였다. IκB는 (바젤에 위치한 노바티스사(Novartis) ABM의 에더 박사 (Dr. Eder)에 의해 클로닝되어 적합하게 제공된) His-태그 부착 단백질로서 박테리아 내에서 발현된다. IκB 플라스미드를 함유하는 BL21 LysS 박테리아를 LB 배지에서 0.6 OD₆₀₀까지 성장시킨 후 37℃에서 3 시간 동안 IPTG (최종 농도 1mM)로 kb의 발현을 유도하고, 그 후 초음파처리 (초음파처리 완충액 [50 mM Tris pH 8.0, 1 mM DTT, 1 mM EDTA] 중에 각각 1 분에 3 회로 마이크로팁 제한 설정함)를 통해 박테리아를 용해시키고 10,000g 에서 15 분 동안 원심분리시킨다. 상등액을 황산 암모늄과 혼합하여 30 %의 최종 농도를 얻는 다. 이 혼합물을 4℃에서 15 분 동안 로킹시킨 후, 10,000g에서 15 분 동안 회전시킨다. 펠렛을 10 mM BSA를 함유하는 결합 완충액 (노바겐, Novagen)에 재현탁시킨다. 이 용액을 Ni-아가로스 (노바겐)에 가하고 노바겐 메뉴얼에 따라 세척한다. IκB를 용리 완충액 (0.4 M 이미다졸, 0.2 M NaCl, 8 mM Tris pH 7.9)을 사용하는 컬럼으로부터 용리시킨다. 단백질을 함유하는 분획물을 50 mM Tris pH 8, 1 mM DTT에서 투석시킨다.

c-Raf-1, b-Raf 및 b-Raf(V599E) 단백질 키나제의 활성을, 억제제의 존재 또는 부존재 하에 [γ³³P] ATP로부터 IκB로의 ³³P의 혼입을 측정함으로써 분석한다. 분석은 96-웰 플레이트 중 상온에서 60 분 동안 수행한다. 이것은 1 % DMSO의 존재하에 600 ng IκB를 사용하며 c-raf-1, b-Raf 또는 b-Raf(V599E) 키나제 (400-600 ng), 25 mM Tris-HCl, pH 7.5, 5 mM MgCl₂, 5 mM MnCl₂, 10 μM Na₃VO₄, 1 mM DTT 및 0.3 μCi/분석 [γ33 P]-ATP (10 μM ATP)를 함유 (총 부피 30 ㎕)한다. 10 ㎕의 250 mM EDTA를 첨가함으로써 반응을 종결시키고 30 ㎕의 반응 혼합물을 메탄올로 사전에 5 분 동안 침지된 임모빌론-PVDF 막 (미국 마이아미주 베드포드에 위치하는 밀리포르사의 제품) 상에 옮기고, 물로 세정후, 0.5 % H₃PO₄로 5 분 동안 침지시키고 진공원과 분리된 진공 다기관 상에 장착시킨다. 모든 시료를 점적한 후, 진공을 연결하고 각각의 웰을 200 ㎕ 0.5 % H₃PO₄로 세정한다. 막을 제거하고 진탕기 상에서 0.5 % H₃PO₄로 4 번, 에탄올로 1 번 세척한다. 상온에서 건조시킨 후, 막을 계수하고, 패커드 탑카운트 96-웰 프레임에 장착시키고, 마이크로신트 TM (패커드)의 10 ㎕/웰을 첨가한다. 화학식 I의 화합물은 0.01-50 μM, 바람직하게는 0.01 내지 10 μM의 범위의 c-Raf-1, b-Raf 또는 b-Raf(V599E) 억제도를 보일 수 있다.

본 발명의 화합물의 c-Abl 단백질-티로신 키나제 활성 억제제로서의 효능을 다음과 같이 입증할 수 있다:

문헌 [Geissler et al. in Cancer Res. 1992; 52:4492-4498]에 기술된 바와 같은 필터 결합 분석법에 다음의 변형을 가하여, 96-웰 플레이트에서 시험관내 효소 분석을 수행한다. 문헌 [Bhat et al. in J.Biol.Chem. 1997; 272:16170-16175]에 기술된 바와 같이 c-Abl의 His-태그 부착 키나제 도메인을 바큘로바이러스/Sf9 시스템에서 클로닝시키고 발현시킨다. 37 kD 단백질을 (c-Abl 키나제) 2-단계 과정을 통해 코발트 금속 킬레이트 컬럼에서 정제시킨 후 음이온 교환 컬럼으로 정제하여 1-2 mg/L의 Sf9 세포를 수득한다 (Bhat et al., 상기 문헌). c-Abl 키나제의 순도는 쿠마시 블루 염색 후 SDS-PAGE로 판단시 90% 초과이다. 이 분석법은 1 % DMSO의 존재하여 30 μg/mL 폴리-Ala,Glu,Lys,Tyr-6:2:5:1 (Poly-AEKY, Sigma P1152)를 사용하며 c-Abl 키나제 (50 ng), 20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 10 mM MgCl₂, 10 μM Na₃VO₄, 1 mM DTT 및 0.06 μCi/분석 [γ33 P]-ATP (5 μM ATP) (총 부피 30 ㎕)를 함유한다. 10 ㎕의 250 mM EDTA를 첨가함으로써 반응을 종결시키고 30 ㎕의 반응 혼합물을 메탄올로 사전에 5 분 동안 침지된 임모빌론-PVDF 막 (미국 마이 아미주 베드포드에 위치하는 밀리포르사의 제품) 상에 옮기고, 물로 세정후, 0.5 % H₃PO₄로 5 분 동안 침지시키고 진공원과 분리된 진공 다기관 상에 장착시킨다. 모든 시료를 점적한 후, 진공을 연결하고 각각의 웰을 200 ㎕ 0.5 % H₃PO₄로 세정한다. 막을 제거하고 진탕기 상에서 0.5 % H₃PO₄ (4 번), 에탄올로 1번 세척한다. 상온에서 건조시킨 후, 막을 계수하고, 패커드 탑카운트 96-웰 프레임에 장착시키고 마이크로신트 TM (패커드)의 10 ㎕/웰을 첨가한다. 이러한 시험 시스템을 사용시, 화학식 I의 화합물은 0.002 내지 100 μM, 보통 0.002 내지 5 μM의 범위의 c-Abl 억제에 대한 IC₅₀ 값을 보일 수 있다.

또한 생체내 화학식 I의 화합물의 항종양 활성을 입증하는 실험이 있다.

예를 들어, 화학식 I의 화합물 (예를 들어, 하기 실시예 1의 화합물)이 생체내에서 VEGF-매개 신혈관형성을 억제하는지를 시험하기 위해, 마우스에서의 성장 인자 이식 모델에서 VEGF로 유도되는 혈관형성 반응에 대한 이의 효과를 시험한다: 헤파린 (20 유닛/ml)을 함유하며 성장 인자 (2 μg/ml 인간 VEGF)가 있거나 또는 없는 0.8 % w/v 한천으로 채워진 다공성 테플론(Teflon) 챔버 (부피 0.5 mL)를 C57/C6 마우스의 등쪽 옆구리에 피하 이식한다. 챔버를 이식한 당일에 시험 화합물 (예를 들어 25, 50 또는 100 mg/kg 경구, 하루에 한번) 또는 비히클로 마우스를 처리하고 이를 4일 동안 계속한다. 처리가 끝나며, 마우스를 사멸시키고, 챔버를 제거한다. 챔버 주변에 성장한 혈관신생된 조직을 조심스레 제거하여 무게를 달고, 조직의 헤모글로빈 함량을 측정하여 혈액 함량을 평가한다 (독일 다이센호펜에 위치한 시그마(Sigma) 사의 드랩킨스법 (Drabkins method)). 이들 성장 인자는 챔버 주위에서 성장한 상기 조직 (조직학적으로 섬유모세포 및 소혈관을 함유하는 것에 특징이 있음)의 무게 및 혈액 함량에 있어, 용량-의존성 증가를 유도하며, 이러한 반응은 구체적으로 VEGF를 중화하는 항체에 의해 차단됨이 이미 알려져있다 (문헌 [Wood JM et al. Cancer Res. 60(8), 2178-2189, (2000)] 및 [Schlaeppi et al., J. Cacner Res. Clin. Oncol. 125. 336-342, (1999))] 참고). 이러한 모델로, 화학식 I의 화합물에 관한 억제도를 알 수 있다.

본 발명의 광범위한 의미에서, 화학식 I의 화합물을 사용할 수 있는 키나제 의존성 질환은 과증식성 증상, 예컨대 백혈병, 과다증식증, 섬유화 (특히 폐, 나아가 다른 타입의 섬유화, 예컨대 신장 섬유화), 신혈관형성, 건선, 죽상동맥경화증 및 혈관에서의 평활근 증식증, 예컨대 혈관성형술 후의 협착증 또는 재협착증을 포함하는 증식성 질환일 수 있다. 또한, 화학식 I의 화합물을 혈전증, 건선, 피부경화증 및 섬유화의 치료에 사용할 수 있다.

바람직하게는, 화학식 I의 화합물을 종양 또는 암 질환으로부터 선택되는 증식성 장애, 특히 바람직하게는 양성 또는 특히 악성 종양 또는 암 질환, 더욱 바람직하게는 뇌, 신장, 간, 부신, 방광, 가슴, 위 (특히 위 종양), 난소, 결장, 직장, 전립선, 췌장, 폐, 질, 갑상선의 암종, 육종, 교모세포종, 다발골수종 또는 위장관 암, 특히 결장 암종 또는 결장직장 샘종, 또는 목 및 머리의 종양, 표피성 과증식, 특히 건선, 전립선 과다증식증, (특히 표피성 특징의) 신생물, 바람직하게는 유선 암종, 또는 백혈병의 치료 (예방을 포함)에 사용할 수 있다.

화학식 I의 화합물을 종양의 퇴행을 일으키는데 사용할 수 있으며, 종양 전이의 형성 및 전이 (나아가 미세전이)의 성장을 예방하는데 사용할 수 있다. 또한, 표피 과증식 (예를 들어 건선), 전립선 과다증식증, 및 (특히 표피성 특징의) 신생물, 예를 들어 유선 암종의 치료에 사용할 수 있다. 몇몇의, 또는 특히, 개개의 티로신 단백질 키나제가 관련되는 한, 면역계 질환 치료에 화학식 I의 화합물을 사용하는 것 또한 가능하며, 나아가, 화학식 I의 화합물은 또한 일 이상의 티로신 단백질 키나제, 특히 구체적으로 언급한 것들에 의한 신호 전달이 관련되는 중추 또는 말초 신경계의 질환의 치료에 사용될 수 있다.

만성 골수성 백혈병 (CML)에서, 조혈 줄기 세포 (HSC)에서 상호 균형을 이루는 염색체 전위는 BCR-ABL 하이브리드 유전자를 생산한다. 이 유전자는 종양원성 Bcr-Abl 융합 단백질을 코딩한다. 세포 증식, 부착 및 아폽토시스를 조절하는데 근본적인 역할을 하는 ABL은 강력하게 조절된 단백질 티로신 키나제를 코딩하고, BCR-ABL 융합 유전자는 HSC를 형질전환시켜 조절되지 않는 클론 증식을 보이며, 골수 기질에 부착하는 능력의 감소를 보이며, 돌연병이성 자극에 대한 아폽토시스성 반응의 감소를 보이는 표현형을 생산하는 구성적 활성 키나제를 코딩하는데, 이는 점점더 악성 전환형질을 축적시킬 수 있다. 생성된 과립구는 성숙한 림프구로 발달되지 못하며, 순환 중으로 방출되어, 성숙한 세포의 결핍을 유발하고 감염에 대한 감수성을 증가시킨다. Bcr-Abl의 ATP-경쟁 억제제는 키나제를 분열촉진의 활성화 및 항-아폽토시스성 경로 (예를 들어 P-3 키나제 및 STAT5)로부터 막는 것으로 알려져 있는데, 이는 BCR-ABL 표현형 세포의 사멸을 유발하여 CML에 대한 유효한 치료를 제공한다. 따라서, 본 발명에서 Bcr-Abl 억제제로서 유용한 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 유도체, 특히, 화학식 I의 화합물은 이의 과발현과 관련된 질환, 특히 백혈병, 예컨대 CML 또는 ALL과 같은 백혈병의 치료에 특히 적절하다.

화학식 I의 화합물은 종양 성장을 느리게 하거나 또는 종양 퇴행에 작용하여 종양 전이의 형성 및 미세전이의 성장을 막을 수 있다. 이들은 특히 표피 과증식 (건선)의 경우에, 고형 암, 예를 들어 (예, 비소세포) 폐암, 편평성 암종 (머리 및 목), 가슴, 위, 난소, 결장 및 전립선 암 뿐 아니라 신경아교종의 치료에, 그리고 백혈병, 특히 급성 골수성 백혈병 (AML) 및 만성 골수성 백혈병 (CML)의 치료에 사용될 수 있다. 나아가, 화학식 I의 화합물은 몇몇의, 또는 특히, 개개의 티로신 단백질 키나제 및(또는) (나아가) 세린/트레오닌 단백질 키나제가 관련되는 면역계 장애의 치료에 사용될 수 있으며, 화학식 I의 화합물은 또한 몇몇의 또는, 특히 단일 티로신 단백질 키나제(들) 및(또는) (나아가) 세린/트레오닌 단백질 키나제(들)에 의한 신호 전달이 관련되는 중추 또는 말초 신경계 장애의 치료에 사용될 수 있다.

신혈관형성은 최대 약 1-2 mm의 지름 이하로 성장하는 종양에 절대적 필요 조건으로 여겨지며, 이러한 제한 이하에서, 산소 및 영양소는 확산에 의해 종양 세포로 공급될 수 있다. 따라서 기원 및 유래와 관계없이, 모든 종양은 이것이 어떠한 크기에 도달한 후에는 이의 성장을 신혈관형성에 의존한다. 3가지 원리의 메카니즘이 종양에 대한 신혈관형성 억제제의 활성에 중요한 역할을 한다: 1) 혈관, 특 히 모세혈관의 무혈관 안정 종양(avascular resting tumor)내로의 성장 억제 (아폽토시스과 증식 사이에서 이루어진 균형으로 인해, 어떠한 순(純) 종양 성장도 없게 된다); 2) 종양에서의 혈류 및 종양으로부터의 혈류의 부재로 인한 종양 세포의 이동의 예방; 및 3) 내피 세포 증식의 억제 (이에 따라 일반적으로 혈관을 연결하는 내피 세포에 의해 주변 조직에 나타나는 측분비 성장-자극 효과를 피하게 된다).

KDR을 억제하여 신혈관형성을 조정하는 능력으로 인해, 화학식 I의 화합물은 VEGF 수용체 티로신 키나제 과발현과 관련되는 질환의 치료에 특히 적절하다. 이들 질환 중에서, 특히 (예를 들어 허혈성) 망막병증, (예를 들어 노화 관련) 황반 퇴행, 건선, 비만, 혈관모세포종, 혈관종, 염증성 질환, 예컨대 류마티스성 (rheumatoid/rheumatic) 염증성 질환, 특히 관절염, 예컨대 류마티스 관절염, 또는 다른 만성 염증성 장애, 예컨대 만성 천식, 동맥 또는 이식후 죽상동맥경화증, 자궁내막증, 및 특히 신생물성 질환, 예를 들어 소위 고형 종양 (특히 위장관, 췌장, 가슴, 위, 자궁경부, 방광, 신장, 전립선, 난소, 자궁내막, 폐, 뇌의 암, 흑색종, 카포시 육종(Kaposi's sarcoma), 머리 및 목의 편평 세포 암종, 악성 흉막 중피종, 림프종 또는 다발골수종) 및 나아가 액체 종양 (예를 들어 백혈병)이 특히 중요하다.

본 발명은 또한 지속성 신혈관형성, 예컨대 재협착증, 예를 들어, 스텐트-유도 재협착증; 크론병 (Crohn's disease); 호지킨 질병 (Hodgkin's disease); 눈 질환, 예컨대 당뇨병성 망막병증 및 신생혈관 녹내장; 신장 질환, 예컨대 사구체신염; 당뇨병성 신장병증; 염증성 장 질환; 악성 신장경화증; 혈전성 미세혈관병성 증후군; (예를 들어 만성) 이식 거부 및 사구체병증; 섬유증 질환, 예컨대 간경화증; 혈관사이 세포-증식성 질환; 신경 조직 손상에 의해 촉발되는 질환의 예방 또는 치료에 사용될 수 있고; 풍선 카테터 치료 후, 혈관 내에 보형물을 사용하는 동안 또는 혈관을 열려진 상태로 두기 위한 기계적 장치, 예를 들어, 스텐트의 삽입 후에 혈관 재폐색을 억제하는데 면역억제제로서, 흉터-없는 상처 치료의 보조제로서 사용될 수 있으며, 검버섯 및 접촉성 피부염을 치료하는데 사용될 수 있다.

바람직하게는, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염은 본원에서 언급하는 고형 종양 및(또는) 본원에서 언급하는 액체 종양, 예를 들어 백혈병의 치료에 유용하다.

제조 방법

화학식 I의 화합물을, 다른 화합물에 대해 당업계에 주로 공지된 방법과 유사하게, 바람직하게는 화학식 II의 보론산 유도체를 화학식 III의 커플링 파트너와 반응시켜 제조하고, 필요하다면, 화학식 I의 화합물을 화학식 I의 상이한 화합물로 변형시키고(거나), 화학식 I의 수득가능한 화합물의 염을 유리 화합물 또는 상이한 염으로 변형시키고(거나), 화학식 I의 수득가능한 유리 화합물을 이의 염으로 변형시킨다.

(상기식에서 D₁ 및 D₂는 히드록시 또는 치환된 히드록시이거나, 또는 결합한 붕소 원자 및 두개의 결합한 산소 원자와 함께 화학식 IIA의 고리를 형성함)

(상기식에서 E는 알킬렌, 치환된 알킬렌, 비치환된 또는 치환된 시클로알킬렌, 비치환된 또는 치환된 비시클로알킬렌 또는 비치환된 또는 치환된 트리시클로알킬렌임)

(상기식에서 R₄는 화학식 I의 화합물에 대해 상기 또는 하기 정의한 바와 같고 L은 이탈기임)

반응은 바람직하게는 예를 들어, 스즈끼-미야우라 (Suzuki-Miyaura) 교차-커 플링 (예를 들어, 문헌 [Miyaura et al., Chem. Rev. 95, 2457 (1995)] 참고)을 위한 통상적인 조건하에, 적절한 (바람직하게는 무수 (water free = absolute)) 용매, 예를 들어 예를 들어 에테르 (예컨대 에틸렌 글리콜 디메틸 에테르 또는 디옥산), 탄화수소 (예컨대 헥산 또는 톨루엔), 또는 알콜, (예컨대 에탄올), 또는 이들 중 임의의 둘 이상의 혼합물의 존재하에, 촉매, 특히 불활성 금속 착물 촉매, 예를 들어 이리듐, 로듐 또는 바람직하게는 팔라듐 촉매 (예컨대 테트라키스(트리페닐포스핀)-팔라듐 (Pd(PPh₃)₄), 이는 또한 예를 들어 팔라듐 염 (예컨대 팔라듐 아세테이트), 및 착물 리간드 (예를 들어 트리페닐포스핀)로부터 계내에서 형성될 수 있음)의 존재하에, 염기, 예를 들어, 금속의 산 부가 염, 예컨대 무기 산의 알칼리 금속 염 (예를 들어 (예를 들어 소듐 또는 포타슘) 포스페이트 또는 카르보네이트), 또는 카르본산의 알칼리 금속 염 (예를 들어 (예를 들어 소듐 또는 포타슘) 저급 알카노에이트, 예컨대 아세테이트)의 존재하에, 바람직하게는 승온에서, 예를 들어 25℃ 내지 환류 온도에서, 예를 들어, 75 내지 95℃에서 일어난다. 반응은 바람직하게는 비활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 일어난다.

D₁ 및 D₂ 각각이 치환된 히드록시일 경우, 이 때 치환된 히드록시는 바람직하게는 알킬록시, 특히 저급 알킬록시, 아릴록시, 특히 상기 정의한 바와 같이 치환된 또는 비치환된 페닐을 갖는 페닐록시, 또는 시클로알킬록시 (이 때 시클로알킬은 바람직하게는 C₃-C₈-시클로알킬, 예컨대 시클로펜틸 또는 시클로헥실임)이다.

(바람직하게는) D₁ 및 D₂가 결합한 붕소 원자 및 산소원자와 함께 고리 또는 상기 나타낸 화학식 IIA를 형성하는 경우, 이 때 E는 바람직하게는 공간적으로 근처에 또는 이웃한 탄소 원자, 예를 들어 비시날 ("1,2-") 또는 "1,3"-위치 (서로 상대적임)의 두개의 상이한 탄소 원자 상에, 붕소 원자에 결합된 두 개의 산소 원자를 수반한다.

알킬렌은 바람직하게는 기술한 바와 같은 두개의 상이한 탄소 원자를 통해, 바람직하게는 비시날 또는 "1,3"-위치에서 결합되는 비분지된 C₂-C₁₂-, 바람직하게는 C₂-C₇알킬렌 잔기, 예를 들어 에틸렌, 또는 프로필렌이며, 광범위한 면에서, 부틸렌, 펜틸렌 또는 헥실렌이다. (바람직한) 치환된 알킬렌은 1 이상, 특히 4 이하로 치환되거나 또는 비치환된 상기 정의된 바와 같은 비분지된 저급 알킬렌 잔기가 바람직하며, 치환기는 바람직하게는 메틸 또는 에틸과 같은 저급 알킬, 예를 들어 1-메틸에틸렌, 1,2-디메틸에틸렌, (바람직하게는) 2,2-디메틸프로필렌 (네오펜틸렌) 또는 (특히 바람직하게는) 1,1,2,2-테트라메틸에틸렌으로부터 선택되거나, 또는 본 발명의 광범위한 면에서, 히드록시, 예를 들어 2-히드록시-프로필렌, 또는 히드록시메틸과 같은 히드록시-저급 알킬, 예를 들어, 1-히드록시메틸-에틸렌으로부터 선택된다.

비치환된 또는 치환된 시클로알킬렌은 W에 대해 기술한 바와 같이 두개의 상이한 탄소 원자를 통해, 바람직하게는 비시날 또는 "1,3"-위치에서 결합되는 바람직하게는 C₃-C₁₂-, 더욱 바람직하게는 C₃-C₈-시클로알킬렌, 예컨대 시클로헥실렌 또는 시클로펜틸렌이다. 비치환된 또는 치환된 비시클로알킬렌은 E에 대해 기술한 바와 같이 두개의 상이한 탄소 원자를 통해, 바람직하게는 비시날 또는 "1,3"-위치에서 결합되는 C₅-C₁₂-비시클로알킬렌이 바람직하다. 예로는 피나닐렌 (2,3-(2,6,6-트리메틸-비시클로[3.1.1]헵탄)이 있다. 비치환된 또는 치환된 트리시클로알킬렌은 E에 대해 기술한 바와 같이 두개의 상이한 탄소 원자를 통해, 바람직하게는 비시날 또는 "1,3"-위치에서 결합되는 C₈-C₁₂-트리시클로알킬렌이 바람직하다.

비치환된 또는 치환된 시클로알킬렌, 비치환된 또는 치환된 비시클로알킬렌 또는 비치환된 또는 치환된 트리시클로알킬렌은 비치환되거나 또는 메틸 또는 에틸과 같은 저급 알킬, 히드록시, 히드록시-저급 알킬, 예컨대 메톡시, 또는 산소 원자를 통해 결합되는 모노- 또는 올리고사카라이드 (바람직하게는 5 이하의 사카리딜 잔기를 포함하는 "올리고사카리딜")로부터 독립적으로 선택되는 1 이상, 특히 3 이하의 치환기로 치환될 수 있다.

화학식 III의 화합물 중의 이탈기 L은 바람직하게는 할로, 특히 요오도, 브로모 (바람직함) 또는 클로로, 또는 퍼플루오로알킬술포닐록시 (예를 들어 -O-SO₂-(C_2f+1), 여기서 f = 1, 2 또는 4)이다.

원칙적으로, 화학식 I의 화합물의 제조는 별법으로, 상기 주어진 화학식 IIA의 기 대신에 이탈기 L을 갖는 화학식 II의 화합물 및, 반응 파트너로서, 이탈기 L 대신에 상기 주어진 화학식 IIA의 기를 보유하는 화학식 III의 화합물을 사용하는 것 또한 가능하다. 이 때, 반응 조건은 상기 주어진 화학식 II 및 III의 화합물의 반응에서 기술한 것과 유사하다.

임의적 반응 및 전환

화학식 I의 화합물을 화학식 I의 상이한 화합물로 전환할 수 있다. 예를 들어, 저급 알콕시카르보닐 치환기를 비누화를 통해 카르복실로 전환할 수 있으며, 니트로 치환기를 아미노로 수소화시킬 수 있다.

일 이상의 염-형성 기를 가지는 화학식 I의 화합물의 염을 원래 공지된 방법으로 제조할 수 있다. 예를 들어, 화합물을 금속 화합물 (예컨대 적합한 유기 카르복실 산의 알칼리 금속 염, 예를 들어, 2-에틸헥산산의 나트륨 염)로, 유기 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 화합물 (예컨대 상응하는 수산화염, 탄산염 또는 탄산수소염, 예컨대 수산화나트륨 또는 수산화칼륨, 탄산나트륨 또는 탄산칼륨, 또는 탄산수소나트륨 또는 탄산수소칼륨)로, 상응하는 칼슘 화합물로 또는 암모니아 또는 적합한 유기 아민으로 처리함으로써 산 기를 가지는 화학식 I의 화합물의 염을 형성할 수 있으며, 바람직하게는 화학양론적 양 또는 단지 조금 과량의 염-형성제를 사용한다. 화학식 I의 화합물의 산 부가 염을 통상적인 방법으로, 예를 들어 화합물을 산 또는 적합한 음이온 교환 시약으로 처리함으로써 얻는다. 산 또는 염기성 염-형성 기, 예를 들어 유리 카르복시 기 및 유리 아미노 기를 함유하는 화학식 I의 화합물의 내부 염을, 예를 들어 산 부가 염과 같은 염을, 예를 들어, 약염기로 등전점까지 중화시키거나 또는 이온 교환제로 처리함으로써 형성할 수 있다.

화학식 I의 화합물의 염을 통상적인 방법으로 유리 화합물로 전환시킬 수 있다: 금속 및 암모늄 염은 예를 들어, 적합한 산, 산 부가 염으로 처리함으로써, 예를 들어, 적합한 염기성 제제로 처리함으로써 전환될 수 있다. 양쪽 경우 모두 에서, 적합한 이온 교환제가 사용될 수 있다.

표준 방법에 따라, 예를 들어, 크로마토그래피법, 분배법, (재)결정 등을 사용하여, 중간체 및 최종 산물을 워크업하고(하거나) 정제할 수 있다.

출발 물질

출발 물질은 예를 들어, 바람직하게는 다음과 같이 제조될 수 있다:

화학식 II의 보론산 유도체를 바람직하게는 화학식 IV의 화합물과 화학식 VA 또는 VB의 디보론 화합물을, 통상적인 반응 조건하에, 즉 적절한 (바람직하게는 무수 (water free = absolute)) 용매, 예를 들어 에테르 (예컨대 에틸렌 글리콜 디메틸 에테르), 테트라히드로푸란 또는 디옥산, 탄화수소 (예를 들어 헥산), 또는 알콜 (예컨대 에탄올), 또는 이들 중 임의의 둘 이상의 혼합물의 존재하에, 불활성 금속 착물 촉매, 예컨대 이리듐, 로듐 또는 바람직하게는 팔라듐 촉매, (예를 들어 바람직하게는 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센-디클로로 팔라듐 (Pd(dppf)Cl₂)), 착물 촉매의 존재하에, 및 바람직하게는 염기, 예를 들어, 금속의 산 부가 염, 예컨대 무기 산의 알칼리 금속 염 (예를 들어 (예를 들어 소듐 또는 포타슘) 카르보네이트), 또는 카르본산의 알칼리 금속 염 (예를 들어 (예를 들어 소듐 또는 포타슘) 저급 알카노에이트, 예컨대 아세테이트)의 존재하에, 바람직한 온도에서, 예를 들어 20℃ 내지 환류 온도에서, 예를 들어, 75 내지 반응 혼합물의 환류 온도에서 반응시킴으로써 제조한다. 반응은 바람직하게는 비활성 가스, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 일어난다. 별법으로, 화학식 IV의 화합물을 우선, 예를 들어 n-부틸 리튬으로 리튬화시킨 후, 생성된 리튬화 산물을 통상적 반응 조건 하에 화학식 VB의 화합물과 반응시킬 수 있다.

(상기식에서 R₁, R₂, R₃, A, Q 및 Z는 화학식 I의 화합물에 대해 상기 정의한 바와 같고 G는 이탈기이고, 특히 화학식 III의 화합물 중 이탈기 L에 대해 상기 정의한 바와 같음)

(상기식에서 D₁ 및 D₂는 화학식 II의 화합물에 대해 상기 정의한 바와 같고 D₃은 화학식 II하에 상기 정의한 바와 같은 치환된 히드록시임)

R₁, R₂, R₃, Q 및 Z가 화학식 I의 화합물에 대해 상기 또는 하기 정의한 바와 같고 G는 이탈기이고 A는 -C(=O)-NH- (화학식 I 중 Q 및 Z를 포함하는 고리에 결합된 -NH-가 있음)인 화학식 IV의 출발 물질을, 바람직하게는 화학식 VI의 카르본산의 반응성 유도체를 화학식 VII의 아미노 염기와, 적절한 용매 (예를 들어, 니트릴, 예컨대 아세토니트릴) 중에서, 바람직하게는 0 내지 50℃, 예를 들어 20 내지 40℃의 온도에서, 바람직하게는 염기 (예를 들어 3급 질소 염기, 예컨대 3급-저급 알킬아민, 예를 들어, 트리에틸아민)의 존재하에 제조한다. 활성 유도체는 계내에서 반응성 유도체로 전환되는데, 예를 들어 화학식 IV 및 V를 적합한 용매, 예를 들어 N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸-2-피롤리돈, 메틸렌 클로라이드, 또는 둘 이상의 이러한 용매의 혼합물 중에 용해시키고, 적합한 염기 (예를 들어 예를 들어 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 (DIEA) 또는 N-메틸모르폴린) 및 계내에서 화학식 III의 카르본산의 바람직한 반응성 유도체를 형성하는 적합한 커플링제 (예를 들어, 디시클로헥실카르보디이미드/1-히드록시벤조트리아졸 (DCC/ HOBT); 0-(1,2-디히드로-2-옥소-1-피리딜)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TPTU); O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TBTU); 또는 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDC))를 첨가함으로써 전환된다. 다른 가능한 커플링제에 관한 검토에 대해서는, 예를 들어, 문헌 [Klauser; Bodansky, Synthesis 1972, 453-463]을 참고하라. 반응 혼합물을 바람직하게는 대략 -20 내지 50℃, 특히 0℃ 내지 실온의 온도에서 교반시켜, 화학식 IV의 화합물을 수득한다. 별법으로, 화학식 VI의 카르본산을 반응성 유도체의 형태로, 예를 들어, 카르본산 할라이드 (예컨대 클로라이드)로서, 카르본산을 갖는 무수물 (예를 들어 C₁-C₇-알칸산)로서, 활성 에스테르로서 사용하며, 또는 알칼리 금속 염의 형태로, 예를 들어, 나트륨, 리튬 또는 칼륨 염의 형태로 사용한다. 양쪽 경우 모두에, 반응은 바람직하게는, 비활성 가스, 예를 들어 질소 또는 아르곤 하에 수행될 수 있다.

(상기식에서 R₁ 및 R₂는 화학식 I의 화합물에 대해 정의한 바와 같음)

(상기식에서 Q, Z 및 R₃은 화학식 I의 화합물에 대해 정의한 바와 같고, G는 화학식 IV 하에 정의한 바와 같은 이탈기임)

R₁, R₂, R₃, Q 및 Z가 화학식 I의 화합물에 대해 상기 또는 하기 정의한 바 와 같고 G가 이탈기이고 A는 -C(=O)-NH- (화학식 I 중 Q 및 Z를 포함하는 고리에 결합된 -C(=O)-가 있음)인 화학식 IV의 출발 물질을, 화학식 VI 및 VII의 화합물의 반응에 대해 본원에서 기술한 것과 유사한 반응 조건을 사용하여 화학식 VIII의 카르본산의 반응성 유도체 (계내에서 또는 직접 현장에서 형성됨, 상기 화학식 VI의 카르본산의 반응성 유도체를 사용하는 유사 반응 조건을 참고)를, 화학식 IX의 아미노 화합물과 반응시킴으로써 합성할 수 있다.

(상기식에서 R₃, Q 및 Z는 화학식 I의 화합물에 대해 정의한 바와 같고 G는 화학식 IV 하에 정의한 바와 같은 이탈기임)

(상기식에서 R₁ 및 R₂는 화학식 I의 화합물에 대해 정의한 바와 같음)

L이 퍼플루오로알칸술포닐록시 이탈기인 화학식 III의 화합물을, 예를 들어, L 대신 히드록시 기가 상응하는 퍼플루오로알칸술폰산 무수물과 함께 존재하는 상응하는 화합물을, 예를 들어, 적절한 용매 (예컨대 할로겐화 탄화수소, 예를 들어 디클로로메틸렌)의 존재하에, (바람직하게는 3급 질소) 염기 (예컨대 3급-저급 알킬아민, 예를 들어 트리에틸아민)의 존재하에, -10℃ 내지 50℃의 바람직한 온도, 예를 들어 0℃ 내지 25℃에서 반응시킴으로써 제조할 수 있다. L이 할로인 화학식 III의 화합물을, 농축된 황산/트리플루오로 아세트산 중 0 내지 40℃의 바람직한 온도, 예를 들어 실온에서 예를 들어, L 대신 수소가 존재하는 상응하는 전구체 화합물을 할로겐화제 (예를 들어 N-브로모숙신이미드)와 반응시킴으로써 제조할 수 있다.

다른 출발 물질, 예를 들어 화학식 V, Vl, VII, VIII 및 IX의 출발 물질은 공지되어 있고(있거나), 당업계에 공지된 방법과 유사한 방법으로 수득할 수 있고(있거나) 상업적으로 입수가능하며, 특히 실시예에서 주어지는 방법에 의해 또는 유사한 방법으로 입수가능하다.

일반적 과정 조건

다음은 일반적으로 상기 및 하기 언급되는 모든 과정에 적용하나, 상기 또는 하기에서 구체적으로 언급되는 반응 조건이 바람직하다:

상기 및 하기 언급되는 임의의 반응에서, 설사 구체적으로 언급하지 않더라도, 적절하거나 또는 필요하다면, 보호기를 사용하여 주어진 반응에 참여하지 않도록 의도되는 관능기를 보호할 수 있으며, 이들을 적절하거나 또는 필요한 단계에서 도입될 수 있고(있거나) 제거될 수 있다. 따라서 보호 및(또는) 탈보호의 특별한 언급이 없는 반응이 본 명세서에 기술되더라도 보호기의 사용을 포함하는 반응을 가능한 한 포함한다.

본 문맥의 범위 내에서는, 달리 나타내지 않는한, 화학식 I의 특정한 원하는 최종 산물의 요소가 아닌 쉽게 제거가능한 기만을 "보호기"로 지칭한다. 이러한 보호기에 의한 관능기의 보호, 보호기 자체, 및 이들의 제거에 적절한 반응은 예를 들어 표준 기준서, 예컨대 문헌 [J. F. W. McOmie, "Protective Group in Organic Chemistry", Plenum Press, London and New York 1973], [T. W. Greene and P. G. M. Wuts, "Protective Group in Organic Synthesis", Third edition, Wiley, New York 1999], ["The Peptides"; Volume 3 (editors: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981], ["Methoden der organischen Chemie" (Methods of Organic Chemistry), Houben Weyl, 4th edition, Volume 15/1, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974], [H. -D. Jakubke and H. Jeschkeit, "Aminosauren, Peptide, Proteine" (Amino acids, Peptides, Proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, and Basel 1982], 및 [Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate" (Chemistry of Carbohydrates: Monosaccharides and Derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974]에 기술되어 있다. 보호기의 특징은 이들이 예를 들어, 가용매분해, 환원, 광분해를 통해, 또는 별법으로 생리적 조건하에 (예를 들어 효소적 절단을 통해) 쉽게 (즉, 원치않는 2차 반응을 일으키지 않고) 제거될 수 있다는 것이다.

상기-언급한 모든 반응 단계를, 원래 공지된 반응 조건 하에, 바람직하게는 구체적으로 언급한 조건하에, 용매 또는 희석제의 부재 또는 통상적으로는 존재하 에, 바람직하게는 사용되는 시약에 대해 비활성이며 이들을 용해시키는 용매 또는 희석제의 존재하에, 촉매, 축합제 또는 중화제 (예를 들어 양이온 교환제와 같은 이온 교환제, 예를 들어, H⁺ 형)의 존재하에, 반응 및(또는) 반응물의 성질에 따라 감온(reduced temperature), 일반 온도 또는 승온에서 (예를 들어 -100℃ 내지 약 19O℃, 바람직하게는 대략 -8O℃ 내지 대략 150℃ 범위의 온도에서, 예를 들어 -80 내지 -6O℃, 실온, -20 내지 4O℃ 또는 환류 온도에서), 대기압 하에 또는 적절한 압력하의 밀폐된 용기에서 및(또는) 비활성 대기에서 (예를 들어 아르곤 또는 질소 대기하에) 수행할 수 있다.

임의의 특정 반응에 적합한, 선택될 수 있는 용매들은 구체적으로 언급한 것들을 포함하거나 또는 과정의 기술에서 달리 나타내지 않는다면, 예를 들어, 물, 에스테르 (예컨대 저급 알킬-저급 알카노에이트, 예를 들어 에틸 아세테이트), 에테르 (예컨대 지방족 에테르, 예를 들어 디에틸 에테르, 또는 시클릭 에테르, 예를 들어 테트라히드로푸란 또는 디옥산), 액체 방향족 탄화수소 (예컨대 벤젠 또는 톨루엔), 알콜 (예컨대 메탄올, 에탄올 또는 1- 또는 2-프로판올), 니트릴 (예컨대 아세토니트릴), 할로겐화 탄화수소 (예를 들어 메틸렌 클로라이드 또는 클로로포름), 산 아미드 (예컨대 디메틸포름아미드 또는 디메틸 아세트아미드), 염기 (예컨대 헤테로시클릭 질소 염기, 예를 들어 피리딘 또는 N-메틸피롤리딘-2-온), 카르복실산 무수물 (예컨대 저급 알칸산 무수물, 예를 들어 아세트산 무수물), 시클릭, 선형 또는 분지된 탄화수소 (예컨대 시클로헥산, 헥산 또는 이소펜탄), 또는 이의 혼합물 (예를 들어, 수용액)을 포함한다. 이러한 용매 혼합물은 또한 예를 들어, 크로마토그래피 또는 분배를 통해 워크업에 사용될 수 있다.

각각의 경우에, 유리 화합물 및(또는) 염-형성 기가 존재하는 이들의 염을 포함하는 화합물은 또한 수화물의 형태로 수득될 수 있으며, 또는 이들의 촉매는 예를 들어 결정을 위해 사용되는 용매를 포함하여 용매화물을 형성할 수 있다. 다른 결정형이 존재할 수 있다.

본 발명은 또한 과정의 임의의 단계에서 중간체로서 수득가능한 화합물을 출발 물질로서 사용하여 나머지 과정 단계들을 수행하거나, 또는 출발 물질을 반응 조건하에 형성하거나 또는 유도체의 형태로, 예를 들어 보호된 형태로 또는 염의 형태로 사용하거나, 또는 본 발명의 과정에서 수득가능한 화합물을 과정 조건하에 생산하고 계내에서 추가 처리하는 과정의 형태들에 관한 것이다. 본 발명의 과정중에서, 이러한 출발 물질은 바람직하게는 바람직하게 언급되는 화학식 I의 화합물을 생산하는데 사용된다. 실시예에서 언급하는 것들과 동일하거나 또는 유사한 반응 조건이 특히 바람직하다.

본 발명의 바람직한 실시태양

다음의 바람직한 실시태양에서, 임의의 일 이상의 일반적인 표현들은 상기 및 하기 제공되는 상응하는 더욱 구체적인 정의들로 대체될 수 있으며, 이에 따라, 본 발명의 더욱 바람직한 실시태양을 얻을 수 있다.

본 발명의 바람직한 실시태양은 Q가 -CH=CH-이고 R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, A 및 Z 는 화학식 I의 화합물에 대해 정의한 바와 같은 화학식 I의 화합물, 또는 이의 (바람직하게는 제약상 허용되는) 염; 또는 이의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 또다른 바람직한 실시태양은 A가 -C(=O)-NH- (화학식 I 중 Q 및 Z를 포함하는 고리에 결합된 -NH-가 있음)이고 R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, Q 및 Z는 화학식 I의 화합물에 대해 정의한 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 (바람직하게는 제약상 허용되는) 염; 또는 이의 용도에 관한 것이다.

또다른 바람직한 실시태양은 R₁ 및 R₂ 중 하나는 수소이고 다른 하나는 수소 또는

(상기식에서 "Alk"는 알킬, 바람직하게는 저급 알킬, 더욱 바람직하게는 메틸 또는 에틸임)

으로 이루어지는 군으로부터 선택된 잔기이고 R₃, R₄, R₅, A, Q 및 Z는 화학식 I의 화합물에 대해 상기 또는 하기 정의한 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 (바람직하게는 제약상 허용되는) 염에 관한 것이다.

본 발명은 더욱 바람직하게는

R₁ 및 R₂ 각각은 수소이고;

R₃은 C₁-C₇-알킬, 특히 메틸이고;

R₄는

(여기서

X는 CH, N 또는 C-NH₂이고;

Y는 CH 또는 N이고;

조건부로 X 및 Y 양자가 동시에 N이 아니고;

및 R₅는 수소, C₁-C₇-알킬 또는 페닐임)

로 이루어지는 군으로부터 선택되는 비시클릭 헤테로시클릴이고

-(R₄는 바람직하게는

임)

A는 -C(=O)-NH- (화학식 I 중 Q 및 Z를 포함하는 고리에 결합된 -NH-가 있음) 또는 -NH-C(=O)- (화학식 I 중 Q 및 Z를 포함하는 고리에 결합된 -C(=O)-가 있음)이고;

Z는 CH이고; 및

Q는 CH=CH-인

일 이상 염-형성 기가 존재하는 화학식 I의 화합물 또는 이의 (바람직하게는 제약상 허용되는) 염에 관한 것이다.

본 발명의 또다른 바람직한 실시태양은 R₄가

인 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

(상기식에서

X는 CH, N 또는 C-NH₂이고;

Y는 CH 또는 N임)

본 발명의 또다른 바람직한 실시태양은 R₄가

인 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

본 발명의 바람직한 실시태양은 Q가 S이고 R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, A 및 Z는 화학식 I의 화합물에 대해 상기 또는 하기 정의한 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용되는 염의 (상기 정의한 바와 같은) 용도에 관한 것이다.

A가 NH-C(=O) (화학식 I 중 Q 및 Z를 포함하는 고리에 결합된 -C(=O)-가 있음)이고 R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, Q 및 Z는 화학식 I의 화합물에 대해 상기 또는 하기 정의한 바와 같은 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염의 (상기 정의한 바와 같은) 용도 또한 바람직하다.

화학식 I의 화합물로의 치료가 필요한 동물, 특히 인간에게 투여하는 것을 포함하는 키나제 의존성 및(또는) 증식성 질환의 치료 방법이 매우 바람직한데, 상기 치료되는 질환은 증식성 질환, 바람직하게는 양성 또는 특히 악성 종양, 더욱 바람직하게는 뇌, 신장, 간, 부신, 방광, 가슴, 위 (특히 위 종양), 난소, 결장, 직장, 전립선, 췌장, 폐, 질, 갑상선의 암종, 육종, 교모세포종, 다발골수종 또는 위장관 암, 특히 결장 암종 또는 결장직장 샘종, 또는 목 및 머리의 종양, 표피 과증식, 특히 건선, 전립선 과다증식증, (특히 표피성 특징의) 신생물, 바람직하게는 유선 암종, 또는 백혈병이다. 또한 죽상동맥경화증, 혈전증, 건선, 피부경화증 및 섬유화의 치료에도, 화학식 I의 화합물이 중요하다. 화학식 I의 화합물을 치료에 사용할 수 있는 다른 질환 또는 장애는 죽상경화성 플라크 파열, 골관절염, 만성 호흡기 질환 (예를 들어 COPD, 천식), 사구체신염, 신경변성 질환 (예를 들어 알쯔하이머, 파킨슨) 및 당뇨병성 합병증이다.

하기 "실시예" 상에 예시되는 화학식 I의 화합물 또는 이의 (바람직하게는 제약상 허용되는) 염, 또는 상기 정의된 이의 용도가 가장 바람직하다.

제약 조성물

본 발명은 화학식 I의 화합물을 포함하는 제약 조성물, 치료성 (본 발명의 광범위한 면에서는 예방성) 치료에서의 이들의 용도 또는 키나제 의존성 질환, 특히 상기 언급한 바람직한 질환의 치료 방법, 상기 용도를 위한 화합물, 특히 언급한 용도를 위한 제약 제제 및 이들의 제조에 관한 것이다.

본 발명은 또한 생체내에서 화학식 I의 화합물로 스스로 전환하는 화학식 I의 화합물의 전구약물에 관한 것이다. 따라서 화학식 I의 화합물에 관한 내용은 적절하고 적당하게, 화학식 I의 화합물의 상응하는 전구약물에 관한 내용으로 이해된다.

본 발명의 약리상 허용되는 화합물은 예를 들어, 활성 성분으로서 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용되는 염을, 일 이상 무기 또는 유기, 고체 또는 액체, 제약상 허용되는 담체 (담체 물질)와 함께 또는 이와 혼합물로 포함하는 제약 조성물에 존재하거나 또는 이의 제조를 위해 사용될 수 있다.

본 발명은 또한 온혈 동물, 특히 인간 (또는 온혈 동물, 특히 인간으로부터 유도되는 세포 또는 세포주, 예를 들어 림프구)에 투여하기에 적합한, 바람직하게 는 상기 억제에 유효한 일정량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용되는 염을, 일 이상의 제약상 허용되는 담체와 함께 포함하는, 키나제 활성의 억제에 반응한 질환 치료 (본 발명의 광범위한 면에서는 예방(prevention/prophylAxls)도 또한 포함함)를 위한 제약 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 제약 조성물은 유효 용량의 약리상 활성 성분을 단독으로 또는 상당량의 제약상 허용되는 담체와 함께 포함하는, 장내로 (예컨대 비로, 직장으로 또는 경구로), 또는 비경구로 (예컨대 근육내로 또는 정맥내로) 온혈 동물 (특히 인간)에게 투여하기 위한 것이다. 활성 성분의 용량은 온혈 동물의 종, 체중, 나이 및 개별적 증상, 개별 약력학적 데이터, 치료되는 질환 및 투여 모드에 따른다.

본 발명은 또한 (언급한 질병에 대해) 본 발명의 예방적 또는 특히 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염을, 특히 상기 언급한 질환 중 하나로 인해 이러한 치료가 요구되는 온혈 동물, 예를 들어 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 키나제의 억제에 반응하는 질환 및(또는) 증식성 질환의 치료 방법에 관한 것이다.

온혈 동물, 예를 들어, 대략 70 kg 체중의 인간에게 투여하는 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용되는 염의 용량은 대략 3 mg 내지 대략 10 g, 더욱 바람직하게는 대략 10 mg 내지 대략 1.5 g, 가장 바람직하게는 약 100 mg 내지 약 1000 mg/사람/일이며, 바람직하게는, 예를 들어, 동일한 크기일 수 있는 1-3 단일 용량으로 분할된다. 보통, 어린이들은 성인 용량의 절반을 수여받는다.

제약 조성물은 대략 1 % 내지 대략 95%, 바람직하게는 대략 20% 내지 대략 90%의 활성 성분을 포함한다. 본 발명의 제약 조성물은, 예를 들어, 단위 용량 형태, 예를 들어, 앰플, 바이알, 좌제, 당제, 정제 또는 캡슐제의 형태로 있을 수 있다.

본 발명의 제약 조성물은 원래 공지된 방법으로, 예를 들어, 종래의 용해, 동결건조, 혼합, 과립화 또는 제과 과정을 통해 제조된다.

활성 성분의 용액, 및 나아가 현탁액, 및 특히 등장성 수용액 또는 현탁액을 사용하는 것이 바람직하며, 예를 들어, 활성 성분을 단독으로 또는 담체, 예를 들어 만니톨과 함께 포함하는 동결건조된 조성물의 경우, 용액 또는 현탁액을 사용 전에 생산하는 것이 가능하다. 제약 조성물은 멸균될 수 있고(있거나) 부형제, 예를 들어 보존제, 안정화제, 습윤제 및(또는) 에멀젼화제, 가용화제, 삼투압 조절을 위한 염 및(또는) 완충액을 포함할 수 있으며, 원래 공지된 방법, 예를 들어 종래의 용해 또는 동결건조 과정을 사용하여 제조된다. 상기 용액 또는 현탁액은 점도-상승 물질, 예컨대 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 카르복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐피롤리돈 또는 겔라틴을 포함할 수 있다.

오일 중 현탁액은 주사 목적을 위해 오일 성분으로서 통상적으로 식물성, 합성 또는 반합성 오일을 포함한다. 산 성분으로서 탄소수 8-22, 특히 12-22를 가지는 장쇄 지방산, 예를 들어, 라우르산, 트리데실산, 미리스트산, 펜타데실산, 팔미트산, 마르가르산, 스테아르산, 아라키드산, 베헨산 또는 상응하는 불포화 산, 예를 들어 올레산, 엘라이드산, 에루크산, 브라시드산 또는 리놀레산을 함유하며, 필 요하다면 항산화제, 예를 들어 비타민 E, β-카로틴 또는 3,5-디-tert-부틸-4-히드록시톨루엔이 첨가된 액체 지방산 에스테르를 특히 언급할 수 있다. 이러한 지방산 에스테르의 알콜 성분은 최대 탄소수 6을 가지는데 이것에는 모노- 또는 폴리-히드록시, 예를 들어 모노-, 디- 또는 트리-히드록시, 알콜, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 또는 펜탄올 또는 이들의 이성질체, 특히 글리콜 및 글리세롤이 있다. 이에 따른 지방산 에스테르는 다음의 예로 언급된다: 에틸 올레에이트, 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, "라브라필(Labrafil) M 2375" (폴리옥시에틸렌 글리세롤 트리올레에이트, 파리에 위치한 가테포세사(Gattefosse)의 제품), "미글리올(Miglyol) 812" (C8 내지 C12의 쇄 길이를 갖는 포화 지방산의 트리글리세라이드, 독일에 위치한 훌스 아게(Huls AG)사의 제품), 특히 식물성 오일, 예컨대 면실유, 아몬드유, 올리브유, 캐스터유, 참기름, 대두유 및 땅콩유.

주사 또는 주입 조성물을 무균 상태 하에서 통상적인 방법으로 제조한다; 조성물을 앰플 또는 바이알에 도입시키고 용기를 밀봉하는 것 또한 마찬가지이다.

원하거나 또는 필요하다면, 적절한 부형제를 정제, 당제 코어 또는 캡슐제에 첨가한 후에, 활성 성분을 고체 담체와 결합시킴으로써, 필요하다면 생성된 혼합물을 과립화시키고, 혼합물을 가공시킴으로써 경구 투여를 위한 제약 조성물을 얻을 수 있다. 활성 성분을 확산시키거나 또는 측정량으로 방출시키게 하는 플라스틱 담체 내에 이들을 혼입시키는 것 또한 가능하다.

적합한 담체는 특히 충전제, 예컨대 당 (예를 들어 락토스, 사카로스, 만니 톨 또는 소르비톨), 셀룰로스 제제 및(또는) 칼슘 포스페이트 (예를 들어 트리칼슘 포스페이트 또는 칼슘 히드로겐 포스페이트), 및 결합제, 예를 들어 옥수수, 밀, 쌀 또는 감자 전분, 겔라틴, 트라가칸트, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸셀룰로스, 소듐 카르복시메틸셀룰로스 및(또는) 폴리비닐피롤리돈을 사용하는 전분 페이스트, 및(또는) 필요하다면, 붕해제, 예컨대 상기 언급한 전분, 및(또는) 카르복시메틸 전분, 가교된 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 이의 염, 예컨대 소듐 알기네이트이다. 부형제는 특히 유동 컨디셔너 및 윤활제, 예를 들어 규산, 탈크, 스테아르산 또는 이의 염, 예컨대 마그네슘 또는 칼슘 스테아레이트 및(또는) 폴리에틸렌 글리콜이다. 당제 코어는 적합한 (임의적으로 장용성) 코팅제로 제공되며, 특히, 아라비아 고무, 탈크, 폴리비닐피롤리돈, 폴리에틸렌 글리콜 및(또는) 이산화티타늄을 포함할 수 있는 농축된 당 용액, 또는 적합한 유기 용매 중의 코팅 용액, 또는 장용성 코팅제의 제조에 있어서는, 적합한 셀룰로스 제제, 예컨대 에틸셀룰로스 프탈레이트 또는 히드록시프로필메틸셀룰로스 프탈레이트의 용액을 사용한다. 캡슐제에는 겔라틴으로 만들어진 건조-충전된 캡슐제 및 겔라틴 및 가소제, 예컨대 글리세롤 또는 소르비톨로 만들어진 연질 밀봉된 캘슐제가 있다. 건조-충전된 캡슐제는 과립의 형태로, 예를 들어 충전제 (예컨대 락토스), 결합제 (예컨대 전분) 및(또는) 활택제 (예컨대 탈크 또는 마그네슘 스테아레이트), 및 필요하다면 안정화제와 함께 활성 성분을 포함할 수 있다. 연질 캡슐제에서, 활성 성분은 바람직하게는 적합한 유성 부형제, 예컨대 지방유, 파라핀유 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜 중에 용해되거나 또는 현탁되며, 안정화제 및(또는) 항박테리아제를 첨가하 는 것 또한 가능하다. 활성 성분의 확인 목적으로 또는 활성 성분의 상이한 용량들을 나타내기 위해, 정제 또는 당제 코팅제 또는 캡슐제 케이싱에 염료 또는 안료를 첨가할 수 있다.

조합물

화학식 I의 화합물은 또한 다른 항증식제와 함께 사용하는 것이 이로울 수 있다. 이러한 항증식제는 아로마타제 억제제; 항에스트로겐; 토포이소머라제 I 억제제; 토포이소머라제 II 억제제; 마이크로튜뷸 활성제; 알킬화제; 히스톤 탈아세틸화효소 억제제; 세포 분화 과정을 유도하는 화합물; 시클로옥시게나제 억제제; MMP 억제제; mTOR 억제제; 항신생물성 항대사물; 플라틴 화합물; 단백질 또는 지질 키나제 활성을 표적화/감소시키는 화합물 및 또다른 항-혈관형성 화합물; 단백질 또는 지질 포스파타제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물; 고나도렐린 아고니스트; 항안드로겐; 메티오닌 아미노펩티다제 억제제; 비스포스포네이트; 생물학적 반응 조절제; 항증식성 항체; 헤파라나제 억제제; Ras 종양원성 이소형의 억제제; 텔로머라제 억제제; 프로테아솜 억제제; 혈액암의 치료에 사용되는 제제; Flt-3의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물; Hsp90 억제제; 및 테모졸로미드 (테모달®, TEMODAL®)을 비제한적으로 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 "아로마타제 억제제"는 에스트로겐 생산을 억제하는 화합물에 관한 것인데, 즉, 안드로스테네디온 및 테스토스테론을 각각 에스트론 및 에스트라디올로 전환시키는 것에 관한 것이다. 용어는 스테로이드, 특히 아타메스탄, 엑세메스탄 및 포르메스탄 및, 특히, 비스테로이드, 특히 아미노글루테티미드, 로글레티미드, 피리도글루테티미드, 트릴로스탄, 테스토락톤, 케토코나졸, 보로졸, 파드로졸, 아나스트로졸 및 레트로졸을 비제한적으로 포함한다. 엑세메스탄은 예를 들어, 상표명 아로마신(AROMASIN) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 포르메스탄은 예를 들어, 상표명 렌타론(LENTARON) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 파드로졸은 예를 들어, 상표명 에페마(AFEMA)하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 아나스트로졸은 예를 들어, 상표명 아리미덱스(ARIMIDEX) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 레트로졸은 예를 들어, 상표명 페마라(FEMARA) 또는 페마르(FEMAR) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 아미노글루테티미드는 예를 들어, 상표명 오리메텐(ORIMETEN) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 아로마타제인 화학요법제를 포함하는 본 발명의 조합물은 특히 호르몬 수용체 양성 종양, 예를 들어 가슴 종양의 치료에 유용하다.

본원에 사용된 용어 "항에스트로겐"은 에스트로겐 수용체 수준에서 에스트로겐의 작용을 길항하는 화합물에 관한 것이다. 용어는 타목시펜, 풀베스트란트, 랄록시펜 및 랄록시펜 히드로클로라이드를 비제한적으로 포함한다. 타목시펜은 예를 들어, 상표명 놀바덱스(NOLVADEX) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 랄록시펜 히드로클로라이드는 예를 들어, 상표명 에비스타(EVISTA) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 풀베스트란트는 US 4,659,516에 개시된 바와 같이 제제화될 수 있거나 또는 예를 들어, 상표명 파슬로덱스(FASLODEX) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 항에스트로겐인 화학요법제를 포함하는 본 발명의 조합물은 특히 에스트로겐 수용체 양성 종양, 예를 들어 가슴 종양의 치료에 특히 유용하다.

본원에 사용된 용어 "항안드로겐"은 안드로겐성 호르몬의 생물학적 작용을 억제할 수 있는 임의의 물질에 관한 것이며, 예를 들어, US 4,636,505에 개시된 바와 같이 제제화될 수 있는 비칼루타미드(카소덱스, CASODEX)를 비제한적으로 포함한다.

본원에 사용된 용어 "고나도렐린 아고니스트"는 아바렐릭스, 고세렐린 및 고세렐린 아세테이트를 비제한적으로 포함한다. 고세렐린은 US 4,100,274에 개시되어 있고, 예를 들어, 상표명 졸라덱스(ZOLADEX) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 아바렐릭스는 예를 들어, US 5,843,901에 개시된 바와 같이 제제화될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "토포이소머라제 I 억제제"는 토포테칸, 기마테칸, 이리노테칸, 캄프토테신 및 이의 유사체, 9-니트로캄프토테신 및 거대분자성 캄프토테신 접합체 PNU-166148 (WO 99/17804의 화합물 A1)을 비제한적으로 포함한다. 이리노테칸은 예를 들어, 상표명 캄프토사르(CAMPTOSAR) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 토포테칸은 예를 들어, 상표명 히캄틴(HYCAMTIN) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "토포이소머라제 II 억제제"는 안트라시클린 (예컨대 독소루비신 (리포좀성 제제, 예를 들어 카엘릭스(CAELYX) 포함), 다우노루비신, 에피루비신, 이다루비신 및 네모루비신), 안트라퀴논 미톡산트로 및 로속산트론, 및 포도필로톡신 에토포시드 및 테니포시드를 비제한적으로 포함한다. 에토포시드는 예를 들어, 상표명 에토포포스(ETOPOPHOS) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 테니포시드는 예를 들어, 상표명 VM 26-브리스톨(BRISTOL) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 독소루비신은 예를 들어, 상표명 아드리블라스틴(ADRIBLASTIN) 또는 아드리아마이신(ADRIAMYCIN) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 에피루비신은 예를 들어, 상표명 파르모루비신(FARMORUBICIN) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 이다루비신은 예를 들어, 상표명 자베도스(ZAVEDOS) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 미톡산트론은 예를 들어, 상표명 노반트론(NOVANTRON) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다.

용어 "마이크로튜뷸 활성제"는 마이크로튜뷸 안정화제, 마이크로튜뷸 탈안정화제 및 마이크로튜블린 중합 억제제에 관한 것이며, 탁산 (예를 들어 파클리탁셀 및 도세탁셀), 빈카 알칼로이드 (예를 들어, 빈블라스틴, 특히 빈블라스틴 술페이트, 빈크리스틴, 특히 빈크리스틴 술페이트, 및 비노렐빈), 디스코데르몰라이드, 코치신 및 에포틸론 및 이의 유도체 (예를 들어 에포틸론 B 또는 이들의 유도체)를 비제한적으로 포함한다. 파클리탁셀은 예를 들어, 상표명 탁솔(TAXOL) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 도세탁셀은 예를 들어, 상표명 탁소테레(TAXOTERE) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 빈블라스틴 술페이트는 예를 들어, 상표명 빈블라스틴 R.P. 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 빈크리스튼 술페이트는 예를 들어, 상표명 파르미스틴(FARMISTIN) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 디스코데르몰라이드는 예를 들어, US 5,010,099에 개시된 바와 같이 얻을 수 있다. 또한 WO 98/10121, US 6,194,181, WO 98/25929, WO 98/08849, WO 99/43653, WO 98/22461 및 WO 00/31247에 개시되어 있는 에포틸론 유도체를 포함한다. 에포틸론 A 및(또는) B가 특히 바람직하다.

본원에 사용된 용어 "알킬화제"는 시클로포스파미드, 이포스파미드, 멜팔란 또는 니트로소우레아 (BCNU 또는 글리아델(Gliadel))를 비제한적으로 포함한다. 시클로포스파미드는 예를 들어, 상표명 시클로스틴(CYCLOSTIN) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 이포스파미드는 예를 들어, 상표명 홀록산(HOLOXAN) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다.

용어 "히스톤 탈아세틸화효소 억제제" 또는 "HDAC 억제제"는 히스톤 탈아세틸화효소를 억제하고 항증식성 활성을 가지는 화합물에 관한 것이다. 이것은 WO 02/22577에 개시되어 있는 화합물, 특히 N-히드록시-3-[4-[[(2-히드록시에틸)[2-(1H-인돌-3-일)에틸]-아미노]메틸]페닐]-2E-2-프로펜아미드, N-히드록시-3-[4-[[[2-(2-메틸-1H-인돌-3-일)-에틸]-아미노]메틸]페닐]-2E-2-프로펜아미드 및 이의 제약상 허용되는 염을 포함한다. 추가로 수베로일아닐리드 히드록삼산 (SAHA)를 특히 포함한다.

용어 "항신생물성 항대사물"은 5-플루오로우라실 (5-FU); 사페시타빈; 겔시타빈; DNA 탈메틸화제, 예컨대 5-아자시티딘 및 데시타빈; 메톡트렉세이트; 에다트렉세이트; 및 폴산 길항제, 예컨대 페메트렉세드를 비제한적으로 포함한다. 카페시타빈은 예를 들어, 상표명 젤로다(XELODA) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 겜시타빈은 예를 들어, 상표명 겜자르(GEMZAR) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 또한 예를 들어, 상표명 헤르셉틴(HERCEPTIN) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있는 모노클로날 항체 트라스투주맙을 포함한다.

본원에 사용된 용어 "플라틴 화합물"은 카르보플라틴, 시스-플라틴, 시스플라티늄 및 옥살리플라틴을 비제한적으로 포함한다. 카르보플라틴은 예를 들어, 상표명 카르보플라트(CARBOPLAT) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. 옥살리플라틴은 예를 들어, 상표명 엘록사틴(ELOXATIN) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "단백질 또는 지질 키나제 활성을 표적화/감소시키는 화합물 및 또다른 항-혈관형성 화합물"은 다음을 비제한적으로 포함한다: 단백질 티로신 키나제 및(또는) 세린 및(또는) 트레오닌 키나제 억제제 또는 지질 키나제 억제제, 예를 들어:

a) 혈소판-유도 성장 인자-수용체 (PDGFR)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 예컨대 PDGFR의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 특히 PDGF 수용체를 억제하는 화합물, 예를 들어, N-페닐-2-피리미딘-아민 유도체, 예를 들어 이마티닙, SU101, SU6668, 및 GFB-111;

b) 섬유모세포 성장 인자-수용체 (FGFR)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물;

c) 인슐린-유사 성장 인자 I 수용체 (IGF-IR)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 특히 IGF-IR을 억제하는 화합물, 예컨대 WO 02/092599에 개시된 화합물;

d) Trk 수용체 티로신 키나제 족의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물;

e) Axl 수용체 티로신 키나제 족의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물;

f) c-Met 수용체의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물;

g) c-Kit 수용체 티로신 키나제 - (PDGFR 족의 일부)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 예컨대 c-Kit 수용체 티로신 키나제 족의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 특히 c-Kit 수용체를 억제하는 화합물, 예를 들어 이마티닙;

h) c-Abl 족 구성원 및 이들의 유전자-융합 산물 (예를 들어 BCR-Abl 키나제)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 예컨대 c-Abl 족 구성원 및 이들의 유전자 융합 산물의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 예를 들어 N-페닐-2-피리미딘-아민 유도체, 예를 들어 이마티닙; 파르케다비스사(ParkeDavis)의 PD180970; AG957; NSC 680410; 또는 PD173955;

i) 단백질 키나제 C (PKC) 및 세린/트레오닌 키나제의 Raf 족의 구성원, MEK, SRC, JAK, FAK, PDK 및 Ras/MAPK 족의 구성원, 또는 Pl(3) 키나제 족, 또는 Pl(3)-키나제-관련 키나제 족의 구성원, 및(또는) 시클린-의존성 키나제 족 (CDK)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물 및 특히 US 5,093,330에 개시된 스타우로스포린 유도체, 예를 들어 미도스타우린; 또다른 화합물의 예는 예를 들어 UCN-01, 사핀골, BAY 43-9006, 브리오스타틴 1, 페리포신; 일모포신; RO 318220 및 RO 320432; GO 6976; 이시스 3521; LY333531/LY379196; 이소키놀린 화합물, 예컨대 WO 00/09495에 개시된 것들; FTI; PD184352 또는 QAN697 (P13K 억제제)를 포함한 다;

j) 단백질-티로신 키나제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 예컨대 이마티닙 메실레이트(글리벡, GLIVEC/GLEEVEC) 또는 티르포스틴. 티르포스틴은 바람직하게는 저분자량 (Mr < 1500) 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이며, 특히 벤질리덴말로니트릴계 또는 S-아릴벤젠말로니트릴 또는 이중기질 퀴놀론계 화합물로부터 선택되는 화합물, 더욱 특히, 티르포스틴(Tyrphostin) A23/RG-50810; AG 99; 티르포스틴 AG 213; 티르포스틴 AG 1748; 티르포스틴 AG 490; 티르포스틴 B44; 티르포스틴 B44(+) 거울상이성질체; 티르포스틴 AG 555; AG 494; 티르포스틴 AG 556, AG957 및 아답포스틴 (4-{[(2,5-디히드록시페닐)메틸]아미노}-벤조산 아다만틸 에스테르; NSC 680410, 아답포스)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 임의의 화합물이다; 및

k) 수용체 티로신 키나제(호모- 또는 헤테로이량체로서 EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4)의 표피 성장 인자 족의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 예컨대 표피 성장 인자 수용체 족의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은 특히, EGF 수용체 티로신 키나제 족, 예를 들어 EGF 수용체, ErbB2, ErbB3 및 ErbB4의 구성원을 억제하거나 또는 EGF 또는 EGF 관련 리간드와 결합하는 화합물, 단백질 또는 항체이며, 특히 WO 97/02266에 일반적이고 구체적으로 개시된 화합물, 단백질 또는 모노클로날 항체, 예를 들어 실시예 39의 화합물, 또는 EP 0 564 409, WO 99/03854, EP 0520722, EP 0 566 226, EP 0 787 722, EP 0 837 063, US 5,747,498, WO 98/10767, WO 97/30034, WO 97/49688, WO 97/38983 및 특히, WO 96/30347 (예를 들어 화합물 CP 358774로서 공지됨), WO 96/33980 (예를 들어 화합물 ZD 1839) 및 WO 95/03283 (예를 들어 화합물 ZM105180)에 일반적이고 구체적으로 개시된 화합물; 예를 들어 트라스투주맙 (헤르페틴R, HerpetinR)), 세툭시맙, 이레사, 에를로티닙(타르세바™, Tarceva™), CI-1033, EKB-569, GW-2016, E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11, E6.3 또는 E7.6.3, 및 WO 03/013541에 개시된 7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 유도체이다.

또한 항-혈관형성 화합물은 이들의 활성에 대한 또다른 메카니즘을 가지는 화합물, 예를 들어 단백질 또는 지질 키나제 억제과 관련이 없는 화합물, 예를 들어 탈리도마이드(탈로미드, THALOMID)) 및 TNP-470을 포함한다.

단백질 또는 지질 포스파타제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은 예를 들어, 포스파타제 1, 포스파타제 2A, PTEN 또는 CDC25, 예를 들어 오카다산 또는 이이 유도체이다.

세포 분화 과정을 유도하는 화합물은 예를 들어 레틴산, α- γ- 또는 δ- 토코페롤 또는 α- γ- 또는 δ-토코트리에놀이다.

본원에 사용된 용어 "시클로옥시게나제 억제제"는 예를 들어 Cox-2 억제제, 5-알킬 치환된 2-아릴아미노페닐아세트산 및 유도체, 예컨대 셀레콕십 (셀레브렉스, CELEBREX), 로페콕십 (비옥스, VIOXX), 에토리콕십, 발데콕십 또는 5-알킬-2-아릴아미노페닐아세트산, 예를 들어 5-메틸-2-(2'-클로로-6'-플루오로아닐리노)페닐 아세트산, 루미라콕십을 비제한적으로 포함한다.

용어 "mTOR 억제제"는 라파마이신 (mTOR)의 포유류 표적화를 억제하는 화합 물 및 항증식성 활성을 가지는 화합물, 예컨대 시롤리무스 (라파뮨®, Rapamune®), 에베롤리무스 (세르티칸™, Certican™), CCI-779 및 ABT578에 관한 것이다.

본원에 사용된 용어 "비스포스포네이트"는 에트리돈산, 클로드론산, 틸루드론산, 파미드론산, 알렌드론산, 이반드론산, 리세드론산 및 졸레드론산을 비제한적으로 포함한다. "에트리돈산"은 예를 들어, 상표명 디드로넬(DIDRONEL) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. "클로드론산"은 예를 들어, 상표명 보네포스(BONEFOS) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. "틸루드론산"은 예를 들어, 상표명 스켈리드(SKELID) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. "파미드론산"은 예를 들어, 상표명 아레디아™(AREDIA™) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. "알렌드론산"은 예를 들어, 상표명 포사맥스(FOSAMAX) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. "이반드론산"은 예를 들어, 상표명 본드라나트(BONDRANAT) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. "리세드론산"은 예를 들어, 상표명 에크토넬(ACTONEL) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다. "졸레드론산"은 예를 들어, 상표명 조메타(ZOMETA) 하에 판매되는 형태로 투여될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "헤파라나제 억제제"는 헤파린 술페이트 분해를 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 지칭한다. 용어는 PI-88을 비제한적으로 포함한다.

본원에 사용된 용어 "생물학적 반응 조절제"는 림포카인 또는 인터페론, 예를 들어 인터페론 γ를 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "Ras 종양원성 이소형 억제제", 예를 들어 H-Ras, K-Ras, 또는 N-Ras의 억제제는 Ras의 종양원성 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 예를 들어 "파르네실 트랜스퍼라제 억제제", 예를 들어 L-744832, DK8G557 또는 R115777 (자르네스트라, Zarnestra)를 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "텔로머라제 억제제"는 텔로머라제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 지칭한다. 텔로머라제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은 특히 텔로머라제 수용체를 억제하는 화합물, 예를 들어 텔로메스타틴이다.

본원에 사용된 용어 "메티오닌 아미노펩티다제 억제제"는 메티오닌 아미노펩티다제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 지칭한다. 메티오닌 아미노펩티다제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은 예를 들어, 벤가미드(bengamide) 또는 이의 유도체이다.

본원에 사용된 용어 "프로테아솜 억제제"는 프로테아솜의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 지칭한다. 프로테아솜의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은 예를 들어 PS-341 및 MLN 341을 포함한다.

본원에 사용된 용어 "매트릭스 메탈로프로테이나제 억제제" 또는 ("MMP 억제제")는 콜라겐 펩티드유사물 및 비펩티드유사물 억제제, 테트라시클린 유도체, 예를 들어 히르록사메이트 펩티드유사물 억제제 바티마스타트 및 이의 경구적으로 생체이용가능한 유사체 마리마스타트 (BB-2516), 프리노마스타트 (AG3340), 메타스타트 (NSC 683551) BMS-279251, BAY 12-9566, TAA211, MMI270B 또는 AAJ996을 비제한적으로 포함한다.

본원에 사용된 용어 "혈액암의 치료에 사용되는 제제"는 FMS-유사 티로신 키 나제 억제제 예를 들어 Flt-3의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물; 인터페론, 1-b-D-아라비노푸란실시토신 (ara-c) 및 비술판; 및 ALK 억제제 예를 들어 미분화 림프종 키나제를 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 비제한적으로 포함한다.

용어 "Flt-3의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물"은 특히 Flt-3을 억제하는 화합물, 단백질 또는 항체인데, 예를 들어 PKC412, 미도스타우린, 스타우로스포린 유도체, SU11248 및 MLN518이 있다.

본원에서 사용된 용어 "HSP90 억제제"는 HSP90의 내인성 ATPase 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물; 유비퀴틴 프로테아솜 경로를 통해 HSP90 클라이언트 단백질 (HSP90 client protein)을 분해, 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 비제한적으로 포함한다. HSP90의 내인성 ATPase 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은 특히 HSP90의 ATPase 활성을 억제하는 화합물, 단백질 또는 항체, 예를 들어, 17-알릴아미노, 17-데메톡시겔다나마이신 (17AAG), 겔다나마이신 유도체; 다른 겔다나마이신 관련 화합물; 라디시콜 및 HDAC 억제제이다.

본원에 사용된 용어 "항증식성 항체"는 트라스투주맙(헤르셉틴™, Herceptin™), 트라스투주맙-DM1, 베바시주맙 (아바스틴™, Avastin™), 리툭시맙 (리툭산®, Rituxan®), PRO64553 (항-CD40) 및 2C4 항체를 비제한적으로 포함한다. 항체는 무손상 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 2개 이상의 무손상 항체로부터 형성된 다중특이성 항체 및 원하는 생물학적 활성을 보이는 항체 단편을 의미한다.

급성 골수성 백혈병 (AML)의 치료에 있어서, 화학식I의 화합물은 표준 백혈 병 치료제와 함께, 특히 AML의 치료에 사용되는 치료제와 함께 사용될 수 있다. 특히, 화학식 I의 화합물은 파르네실 트랜스퍼라제 억제제 및(또는) AML의 치료에 유용한 다른 약물, 예컨대 다우노루비신, 아드리아마이신, Ara-C, VP-16, 테니포시드, 미톡산트론, 이다루비신, 카르보플라티늄 및 PKC412와 함께 투여될 수 있다.

코드 번호, 일반명 또는 상품명으로 확인되는 활성제의 구조는 표준서 "머크 인덱스 (The Merck Index)"의 최신판 또는 (예를 들어 국제 특허의) 데이타베이스 (예를 들어 IMS 국제 공보, IMS World Publications)으로부터 알 수 있다.

화학식 I의 화합물과 함께 사용될 수 있는 상기 언급한 화합물은 당업계에 기술된 바와 같이, 예컨대 상기 인용된 문헌에 기술된 바와 같이 제조되어 투여될 수 있다.

화학식 I의 화합물은 공지된 치료 과정, 예를 들어 호르몬의 투여 또는 특히 방사선과 함께 사용되는 것이 이로울 수 있다.

화학식 I의 화합물은 특히 방사선치료에 약한 감수성을 보이는 종양의 치료에 있어 방사선증감제로서 사용될 수 있다.

"조합물"이란 하나의 단위 투여 형태 중의 고정된 조합물이거나 또는 화학식 I의 화합물과 조합 파트너가 독립적으로 동시에 투여될 수 있거나 또는 조합 파트너가 협력작용, 예를 들어 상승 작용을 보이게 되는 시간 간격 내에서 별도로 투여될 수 있거나, 또는 이들의 임의의 조합으로 투여될 수 있는 병용 투여를 위한 부분들의 키트를 의미한다.

다음의 실시예는 본 발명의 예시를 위한 것이며 이의 범위를 제한하지 않는다:

예를 들어, 용리액 또는 용매 혼합물 중 용매의 비율을 부피에 의한 부피 (v/v) 또는 부피 퍼센트로 나타냈다. 온도는 섭씨로 측정하였다. 달리 나타내지 않으면, 반응은 RT에서 일어났다. 용리액의 전방이 움직인 거리에 대한 각각의 물질이 움직인 거리의 비율을 나타내는 R_f 값을 실리카 겔 박막 플레이트 (독일의 다름스타트에 위치한 머크(Merck)사의 제품) 상에서 각각 명명된 용매계를 사용하는 박막 크로마토그래피로 측정하였다.

HPLC를 언급할 때의 HPLC 분석 조건은 다음과 같다:

컬럼: (70 x 4.0 mm) HPLC 컬럼 CC 70/4 뉴클레오실(Nucleosil) 100-3 C18 (3 μm 평균 입자 크기, 옥타데실실란으로 공유결합적으로 유도체화된 실리카겔을 가짐, 독일 듀렌에 위치한 마케레이 & 나겔사(Macherey & Nagel)의 제품). 215 nm에서 UV 흡수를 검출. 머무름 시간 (t_R)을 분으로 나타냈다. 유속: 1 ml/분.

기울기: 5 분 동안 b) 중 a) 20% -> 100% + 1 분 동안 a) 100%, a): 아세토니트릴 + 0.1% TFA; b): 물 + 0.1% TFA.

다른 HPLC 조건:

HPLC(GRAD3):

컬럼: (250 x 4.6 mm) 역상 물질 C18-뉴클레오실로 충전됨 (5 μm 평균 입자 크기 옥타데실실란으로 공유결합적으로 유도체화된 실리카겔을 가짐, 독일 듀렌에 위치한 마케레이 & 나겔사의 제품). 215 nm에서 UV 흡수를 검출. 머무름 시간 (t_R)을 분으로 나타냈다. 유속: 1 ml/분.

기울기: 7.5 분 동안 b) 중 a) 5% -> 40% + 7 분 동안 a) 40%, a): 아세토니트릴 + 0.1% TFA; b): 물 + 0.1% TFA.

사용되는 요약된 형태 및 약어는 다음을 정의를 갖는다:

conc.: 농축

DMF: N,N-디메틸포름아미드

MS-ES: 질량 분석법 (전자 분무)

h: 시간(들)

Me: 메틸

min: 분(들)

mL: 밀리리터(들)

m.p.: 녹는점

RT: 실온

TFA: 트리플루오로아세트산

THF: 테트라히드로푸란 (Na/벤조페논 상에서 증류됨)

TLC: 박층 크로마토그래피

t_R: 머무름 시간

실시예 1 : N-(3-이소퀴놀린-7-일-4-메틸-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아 미드

28 mL의 건조 디옥산 중 N-[4-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-페닐]-3-트리-플루오로메틸-벤즈아미드 (1.74 g, 4.3 mmol) 및 트리플루오로-메탄술폰산 이소퀴놀린-7-일 에스테르 (1.081 g, 3.9 mmol)의 용액에 1.23 g (5.79 mmol) 포타슘 포스페이트를 첨가하고, 15 min 동안 현탁액을 통해 질소의 느린 스트림을 버블링시킴으로써 용액을 탈기하였다. 0.232 g (0.33 mmol) 테트라키스-(트리페닐포스핀)팔라듐의 첨가 후, 혼합물을 10 h 동안 90℃로 가열시켰다. 동일한 양의 촉매 및 포타슘 포스페이트를 다시 첨가한 후, 혼합물을 17 h 동안 90℃에서 교반시켰다. 반응 혼합물을 냉각시키고 히플로 슈퍼 셀^® (Hyflo Super Cel^®) (스위스 부취에 위치한 플루카사(Fluka)의 제품)로 여과하고, 잔류물을 디옥산으로 세척하였다. 디옥산 용액을 합하여 증발시키고 갈색 잔류물을 콤비-플래시 컴패니언™ (Combi-Flash Companion™) (이스코 사, Isco Inc.) 장치 상의 120 g 실리카겔 컬럼을 사용하는 크로마토그래피로 정제하였다. tert-부틸-메틸에테르/헥산 1:1 내지 4:1의 기울기를 사용하였다. 순수한 분획을 모으고 증발시켜 핑크색 포움의 표제 화합물을 수득하였다; R_f (tert-부틸-메틸에테르) = 0.32; HPLC t_R = 3.24 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 407.

단계 1.1: N-[4-메틸-3-(4,4.5,5-테트라메틸-[1,3.2]디옥사보롤란-2-일)-페닐]-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

50 mL의 THF 중 5.0 g (14 mmol) N-(3-브로모-4-메틸-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드 및 3.42 g (34.5 mmol) 포타슘 아세테이트의 혼합물을 통해 약 20 분 동안 질소를 버블링시켰다. 4.06 mg (16 mmol) 비스-(피나콜라토)-디보론의 첨가 후, 6 mol-%의 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐 디클로라이드 (700 mg, 0.8 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 18 h 동안 환류하에 사열시켰다. 그 후 반응 혼합물을 RT로 냉각시키고 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 혼합물을 농축된 염화나트륨 용액으로 세척한 후, 에틸 아세테이트 상을 황산 나트륨으로 건조시키고 증발시켰다. 조 생성물을 용매로서 디클로로메탄을 사용하는 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 표제 화합물을 무색 고체로서 수득하였다; m.p. 148-152℃; R_f (디클로로메탄) = 0.36; HPLC t_R = 4.82 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 406.

단계 1.2: N-(3-브로모-4-메틸-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

80 mL 아세토니트릴 중 5.8 mL (39 mmol) 3-트리플루오로메틸-벤조일 클로라 이드의 용액을 RT에서 12.2 mL (78 mmol) 트리에틸아민으로 한방울씩 처리한 후, 7.8 g (42.9 mmol) 3-브로모-4-메틸-아닐린으로 처리하였다. 3-트리플루오로메틸-아닐린을 천천히 첨가하는 동안 온도를 약 30℃로 상승시켰다. 혼합물을 10 h 동안 실온에서 교반시킨 후, 0℃로 냉각시켰다. 물 (100 mL)을 첨가하고 생성된 침전물을 여과하고, 물로 세척한 후 건조하였다. 고체를 헥산 중에 현탁시켜 수 분 동안 교반시키고, 여과하고 다시 건조시켜 무색 고체로서 표제 화합물을 수득하였다; m.p. 153-155℃; HPLC t_R = 4.54 min.

단계 1.3: 트리플루오로-메탄술폰산 이소퀴놀린-7-일 에스테르

100 mL의 디클로로메탄 중 5.8 g (0.04 mol) 7-히드록시퀴놀린 및 6.68 mL (0.048 mol) 트리에틸아민의 용액을 빙조 중에서 냉각시키고 7.26 mL (0.044 mol) 30 분에 걸쳐 트리플루오로-술폰산 무수물로 한방울씩 처리하였다. 완전히 첨가된 후, 냉각조를 제거하고 어두운색 혼합물을 1.5 h 동안 RT에서 교반시켰다. 반응 혼합물을 100 mL의 빙수 내로 붓고 2상 혼합물을 히플로 슈퍼 셀® (규조토에 기초한 여과 보조제; 스위스 부취에 위치한 플루카사로부터 수득가능함)로 여과시켰다. 유기층을 분리시키고 50 mL 10% 시트르산, 50 mL의 염수로 세척하고 황산 나트륨으로 건조시키고 증발시켜 갈색 수지를 남겼다. 이것을 디클로로메탄/에틸 아세테이트 100:2.5 내지 100:5를 사용하는 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획을 모으고 증발시켜 오렌지색 오일을 수득하였다. HPLC t_R = 2.35 min; R_f (tert-부틸-메틸에테르) = 0.38; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 278.

실시예 2: N-(4-메틸-3-퀴나졸린-6-일-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

3 mL의 톨루엔 및 0.375 mL의 에탄올 중 N-[4-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-페닐]-3-트리-플루오로메틸-벤즈아미드 (0.456 g, 1.125 mmol) 및 6-브로모-퀴나졸린 (0.157 g, 0.75 mmol)의 혼합물을 0.75 mL의 탄산 나트륨 2 몰 용액으로 처리하고 질소를 5 분 동안 혼합물에 버블링시켜 생성된 혼합물을 탈기하였다. 팔라듐 아세테이트 (0.0075 g, 0.034 mmol) 및 트리페닐포스핀 (0.0293 g, 0.117 mmol)의 첨가 후, 혼합물을 90℃에서 2 h 동안 교반시켰다. 동일한 양의 팔라듐 아세테이트 및 트리페닐포스핀을 다시 첨가하고 혼합물을 90℃에서 6 h 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 냉각시키고 10 mL 에틸 아세테이트 및 4 mL의 물에 첨가하였다. 2상 혼합물을 히플로 슈퍼 셀® (스위스 부취에 위치한 플루카사의 제품)로 여과시키고, 유기층을 분리하고, 황산 나트륨으로 건조시키고 증발시켜 갈색 수지를 남겼다. 조 생성물을 콤비-플래시 컴패니언™ (이스코 사) 장치 상의 40 g 실리카겔 컬럼을 사용하는 크로마토그래피로 정제하였다. 디클로로메탄/메탄올 100:1 내지 100:15의 기울기를 사용하였다. 농축되어 있는 (Enriched) 분획물을 40 g 실리카겔 컬럼 및 용매로서 tert-부틸-메틸에테르를 사 용하는 동일한 계 상에서 다시 크로마토그래피하였다. 순수한 분획물을 모으고 증발시켜 황갈색 포움의 표제 화합물을 얻었다; R_f (디클로로메탄/에탄올 9:1) = 0.56; HPLC t_R = 3.23 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 408.

단계 2.1: 6-브로모-퀴나졸린

트리플루오로아세트산 (10 mL)을 온도계 및 기계적 교반기가 장착된 반응 교반기에 두었다. 20℃에서 퀴나졸린 (2.6 g, 0.020 mol)을 첨가한 후, 3.4 mL의 96% 술푸르산을 첨가하였다. 그 후 N-브로모숙신이미드 (4.8 g, 0.027 mol)를 5 번 첨가하였는데, 첨가와 첨가 사이에 30 분을 두었다. 완전히 첨가된 후, 황색 혼합물을 17 h 동안 RT에서 교반시켰다. 트리플루오로아세트산을 회전 증발기 (로타밥, rotavap) 상에서 제거하고 잔류물을 20 g의 얼음 조각 상에 부었다. 30% 소듐 히드록시드 용액을 첨가하여 혼합물의 pH를 8-9로 조정하였다. 생성된 현탁액을 40 mL의 에틸 아세테이트로 희석시키고 여과시켰다. 유기층을 분리시키고 수상을 20 mL의 에틸 아세테이트로 추출하였다. 에틸 아세테이트 추출물을 합하여 황산 나트륨으로 건조시키고 증발시켰다. 에틸 아세테이트/헥산 1:3 내지 1:2를 사용하여 잔류물을 플래시-크로마토그래피시켜 무색 결정으로서 표제 화합물을 얻었다, m.p. 155-156℃; HPLC t_R = 1.29 min; R_f (에틸 아세테이트/헥산 3:2) = 0.36; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 210.9.

실시예 3: 3-이소퀴놀린-7-일-4-메틸-N-(3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드

상이한 출발 물질로서 4-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-N-(3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드를 사용하고, 촉매의 두번째 첨가가 필요하지 않다는 것만 제외하고는, 실시예 1에서 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하였다. 무색 고체로서 표제 화합물을 얻었다; m.p. 189-191℃; HPLC t_R = 3.30 min; Rt(에틸 아세테이트/디클로로메탄 1 :4) = 0.21 ; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 407.

단계 3.1 : 4-메틸-3-(4,4.5.5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-N-(3-트리플루오로메틸-페닐]-벤즈아미드

3-브로모-4-메틸-N-(3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드로 출발하여, 실시 예 1, 단계 1.1에 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하였다. 반응 시간은 8 h 이였다. 황갈색 고체로서 표제 화합물을 얻었다; m.p. 157-159℃; R_f (디클로로메탄) = 0.36; HPLC t_R = 4.93 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 406.

단계 3.2: 3-브로모-4-메틸-N-(3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드

120 mL 아세토니트릴 중 14 g (60 mmol) 3-브로모-4-메틸-벤조일 클로라이드의 용액을 RT에서 12.6 g (120 mmol) 트리에틸아민으로 한방울씩 처리한 후, 8.3 mL (66 mmol) 3-트리플루오로메틸-아닐린으로 처리하였다. 3-트리플루오로메틸-아닐린을 천천히 첨가시키는 동안, 온도를 약 35℃로 상승시켰다. 혼합물을 실온에서 5 h 동안 교반시킨 후, 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 생성된 혼합물을 포화 중탄산 나트륨 용액, 1 N 염산 및 염수로 차례로 세척한 후, 황산 나트륨으로 건조시켰다. 용매를 증발시켜 갈색 오일을 남기고 이를 에테르/페트롤-에테르로부터 결정화하여 무색 고체로서 표제 화합물을 수득하였다; m.p. 157-158℃; HPLC t_R = 4.63 min; R_f (디클로로메탄) 0.75.

실시예 4: 4-메틸-3-퀴나졸린-6-일-N-(3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드

상이한 출발 물질로서 실시예 3.1의 표제 화합물을 사용하고, 촉매의 두번째 첨가가 필요하지 않다는 것을 제외하고는, 실시예 2에 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하였다. 무색 포움으로서 표제 화합물을 얻었다; HPLC t_R = 3.31 min; R_f (tert-부틸-메틸에테르) = 0.21 ; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 408.

실시예 5: N-(3-벤조티아졸-6-일-4-메틸-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

상이한 출발 물질로서 6-브로모-벤조티아졸을 사용하고, 촉매의 두번째 첨가가 필요하지 않다는 것을 제외하고는, 실시예 2에 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하였다. 반응 시간을 2 h 이였고, 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 무색 고체로서 표제 화합물을 얻었다; m.p. 94-96℃; HPLC t_R = 4.58 min; R_f (디클로로메탄/에탄올 98:2) = 0.3; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 413.

실시예 6: 3-벤조티아졸-6-일-4-메틸-N-(3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드

출발 물질로서 6-브로모-벤조티아졸 및 실시예 3.1의 표제 화합물을 사용하고, 촉매의 두번째 첨가가 필요하지 않다는 것을 제외하고는, 실시예 2에 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하였다. 반응 시간은 3 h이였다. 무색 고체로서 표제 화합물을 얻었다; m.p. 102-104℃; HPLC t_R = 4.66 min; R_f (디클로로메탄/에탄올 98:2) = 0.3; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 413.

실시예 7: N-(4-메틸-3-프탈라진-6-일-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

촉매의 두번째 첨가가 필요하지 않다는 것을 제외하고는, 실시예 2에 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하였다. 반응 시간은 3 h이였다. 무색 고체로서 표제 화합물을 얻었다; m.p. 205-206℃; HPLC t_R = 3.34 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 408.

출발 물질을 다음과 같이 제조한다:

단계 7.1 : 6-브로모-프탈라진

4 mL의 에탄올 및 4 mL의 디클로로메탄 중 1.0 g (4.7 mmol) 4-브로모-벤젠-1,2-디카르브알데히드의 용액을 40 분에 걸쳐 0℃에서 질소하에 4.7 mL의 에탄올 중 히드라진 수화물 (0.684 mL, 14.1 mmol)의 용액에 적가하였다. 생성된 현탁액을 0℃에서 1 h 교반시킨 후, 용매를 증발시켰다. 결정질 물질을 20 mL의 톨루엔과 함께 교반시킨 후, 용매를 다시 증발시켰다. 디클로로메탄과 함께 이 과정을 반복하였다. 최종적으로 생성물을 60℃ 진공하에 8 h 동안 건조시켜 무색 결정으로서 표제 화합물을 얻었다: m.p. 140-143℃, HPLC t_Rt_R = 1.49 min; ME-ES+: (M+H)+ = 210.9.

단계 7.2: 4-브로모-벤젠-1,2-디카르브알데히드

(4-브로모-2-히드록시메틸-페닐)-메탄올을 스웸(Swem) 산화한 후, 문헌 [O. Farooq, Synthesis .10, 1035-1037 (1994)]에 의한 과정을 거쳐 표제 화합물을 합성하여 연한 황색 결정으로서 표제 화합물을 얻었다: m.p. 97-100℃, MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 210.9 + 212.9.

단계 7.3: 3-(4-브로모-2-히드록시메틸-페닐)메탄올

24 mL의 1,2-디메톡시에탄 중 3 g (12.2 mmol) 4-브로모-프탈산의 용액에, 0℃에서 1.394 g (36.8 mmol)의 소듐 보로히드라이드를 10번 첨가하였다. 15 분 동안 교반시킨 후, 8 mL의 1,2-디메톡시에탄 중 4.61 mL (36.5 mmol) 붕소 트리플루오라이드 에테레이트의 용액을 10 분 내에 첨가하였다. 0℃에서 10 분 동안 교반시킨 후, 혼합물을 RT로 가온되게하고, 2 h 동아 계속 교반시켰다. 그 후 반응 혼합물을 40 g의 얼음 조각 상에 천천히 첨가하고 수성 혼합물을 에틸 아세테이트로 증발시켰다. 에틸 아세테이트 추출물을 모아서 물 및 염수로 세척하고, 황산 나트륨으로 건조한 후, 증발시켰다. 잔류 황색 오일 (조 물질)을 콤비-플래시 컴패니언™ (이스코 사) 크로마토그래피 장치 상의 120 g 실리카겔 컬럼을 사용하는 크로마토그래피로 정제하였다. 디클로로메탄/에틸 아세테이트 0 -> 50 % 에틸 아세테이트의 기울기를 사용하였다. 정치시 결정화하는 오일로서 표제 화합물을 얻었다: m.p. 79-81℃, HPLC t_R = 1.94 min, MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 214 + 216.

실시예 8: 4-메틸-3-프탈라진-6-일-N-(3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드

실시예 7에 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하였다. 표제 화합물: m.p. 270-272℃; HPLC t_R = 3.43 min; R_f (디클로로메탄/에탄올) = 0.32; MS-ES⁺ (M+H)⁺ = 408.

실시예 9: N-(3-벤조티아졸-5-일-4-메틸-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

5-브로모-벤조티아졸로 출발하여 실시예 2에 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하였다. 반응 시간은 총 4 h 이였다. 무색 고체로서 표제 화합물을 얻었다. M.p. 90-93℃, HPLC t_R = 4.54 min; R_f 디클로로메탄(에탄올) = 0.30; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 413.

출발 물질을 다음과 같이 제조하였다:

단계 9.1 : 5-브로모-벤조티아졸

18 mL의 35 % 히드로브롬산 용액 중 4-아미노-벤즈토티아졸 (3.0 g, 0.02 mol)을 0℃에서 11 mL의 물 중 1.19 g (0,0195 mmol) 소듐 니트라이트의 용액을 천 천히 첨가하여, 디아조화시켰다. 1 h 동안 0℃에서 교반한 후, 0℃에서 갈색 용액을 45 mL의 35 % 히드로브롬산 용액 중 3.3 g (0.023 mol) CuBr의 어두운색 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 0.5 h 교반시키고, RT에서 2 h 교반시킨 후, 90℃에서 2 h 교반시켰다. 혼합물을 RT로 냉각시키고 20 g의 얼음 조각 내로 부었다. 농축된 암모니아를 혼합물에 첨가하여 알칼리성으로 만든 후, 이를 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 합하여, 염수로 세척하고, 황산 나트륨으로 건조시키고 증발시켰다. 잔류물을 용리액으로서 디클로로메탄/페트롤 에테르를 사용하는 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 고체로서 표제 화합물을 얻었다: m.p. 104-106℃, HPLC t_R = 3.44 min; R_f (도클로로메탄/페트롤 에테르) = 0.30.

단계 9.2: 5-아미노-벤조티아졸

160 mL의 메탄올 및 160 mL의 THF 중에 용해된 정제된 5-니트로-벤조티아졸 (7.2 g, 0.04 mol, WO 98/23612, 실시예 7A 참고)을 1.6 g Pd/C (10 %; 엥겔하트(Engelhard) 4505)의 존재하에 수소화하였다. 촉매를 여과시키고, 여액을 농축하고, 잔류 오일을 용리액으로 디클로로메탄올/메탄올 97:3을 사용하는 실리카 겔 상의 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 무색 고체로서 표제 화합물을 얻었다: m.p. 76-78℃, HPLC t_R = 0.76 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 151 ; R_f (디클로로메탄/메탄 올 97:3) = 0.76.

실시예 10: 3-벤조티아졸-5-일-4-메틸-N-(3-트리플루오로메틸페닐)벤즈아미드

실시예 9에 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하였다. 표제 화합물: m.p. 200-202℃, HPLC t_R = 4.62 min; R_f (디클로로메탄/에탄올 98:2) = 0.30; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 413.

실시예 11: N-(3-이소퀴놀린-7-일-4-메틸-페닐)-4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

4.2 mL 디옥산 중 0.162 g (0.584 mmol) 트리플루오로-메탄술폰산 이소퀴놀 린-7-일 에스테르 (단계 1.3) 및 0.362 g (0.4897 mmol) 4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-N-[4-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-페닐]-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드의 용액을 0.184 g (0.867 mmol) 포타슘 포스페이트로 처리하였다. 질소의 느린 스트림을 생성된 현탁액에 15 분 동안 통과시키고, 혼합물을 0.035g (0.03 mmol) 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐으로 처리하고 4 h 동안 90℃에서 교반시켰다. 촉매의 추가 0.035 g (0.03 mmol)을 첨가하고 90℃에서 15 h 동안 계속 교반시켰다. 혼합물을 냉각시키고, 여과시키고 여액을 증발시켰다. 잔류물을 콤비-플래시 컴패니언™ (이스코 사) 장치 상에 40 g 실리카겔 컬럼을 사용하는 크로마토그래피로 정제하였다. 디클로로메탄/메탄올 (0 -> 15% 메탄올)의 기울기를 사용하였다. 순수한 분획물을 모으고 증발시켜 황갈색 포움으로서 표제 화합물을 얻었다; R_f (디클로로메탄/메탄올 9:1) = 0.23; HPLC t_R = 2.47 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 519.

단계 11.1: 4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-N-[4-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-페닐]-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

출발 물질로서 N-(3-브로모-4-메틸-페닐)-4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3- 트리플루오로메틸-벤즈아미드를 사용하고 단계 1.1에 기술된 과정과 동일한 과정을 통해 표제 화합물을 합성하였다. 황갈색 포움으로서의 표제 화합물; R_f (디클로로메탄/메탄올/농축된 암모니아 350:50:1) = 0.88; HPLC t_R = 3.70 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 518.

단계 11.2: N-(3-브로모-4-메틸-페닐)-4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

50 mL의 아세톤 중 4.51 g (0.01 mol) 4-브로모메틸-N-(3-브로모-4-메틸-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드의 용액을 10℃로 냉각시키고 2.76 g (0.02 mol) 포타슘 카르보네이트 및 1.33 mL (0.012 mol) 1-메틸피페라진으로 처리하였다. 혼합물을 rt에서 4 h 동안 교반시키고, 여과시키고 여액을 증발시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 (50 mL)에 용해시키고, 물, 포화 중탄산 나트륨 용액 및 물로 세척하고, 황산 나트륨으로 건조시켰다. 용매를 증발시켜 황갈색 포움으로서 순수한 표제 화합물을 얻었다: R_f (에틸 아세테이트/메탄올 8:2) = 0.16; HPLC t_R = 3.39 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 470, 472.

단계 11.3: 4-브로모메틸-N-(3-브로모-4-메틸-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

120 mL의 THF 중 13.95 g (0.0493 mol) 4-브로모메틸-3-트리플루오로메틸-벤조산, 9.17 g (0.0493 mol) 3-브로모-4-메틸아닐린 및 7.56 g (0.0493 mol) 1-히드록시-벤조트리아졸을 함유하는 용액을 0℃로 냉각시키고 0℃에서 20 분에 걸쳐 40 mL의 THF 중 11.18 g (0.052 mol) N.N-디시클로헥실카르보디이미드의 용액으로 한방울씩 처리하였다. 45 분 후, 냉각 조를 제거하고 혼합물을 rt에서 추가 시간 동안 교반시켰다. 생성된 현탁액을 여과시키고 디시클로헥실-유레아를 소량의 THF로 세척하였다. 건조될 때까지 여액을 증발시켰다. 잔류물을 제1 용리액으로서 에틸 아세테이트/헥산 2.5:100을, 그 후 용리액으로서 15:100을 사용하는 실리카겔 상의 플래시-크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획을 모으고 증발시켜 결정질 표제 화합물을 얻었다: m.p. 153-154 ℃; R_f (에틸 아세테이트/헥산 1:1) = 0.63; HPLC t_R = 4.72 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 450, 452.

단계 11.4: 4-브로모메틸-3-트리플루오로메틸-벤조산

500 mL 테트라클로로메탄 중 16.33 g (0.08 mol) 4-메틸-3-(트리플루오로메틸)-벤조산, 17.08 g (0.096 mol) N-브로모숙신이미드 및 0.96 g (0.003 mol) 디벤조일-페록시드를 함유하는 현탁액을 환류하에 가열시키고 1.5 h 동안 125 W 램프로 조사하였다. 혼합물을 10℃로 냉각시키고 여과시키고 여액을 약 50 mL로 농축시켰다. 고체를 여과시키고, 소량의 차가운 테트라클로로메탄으로 세척하고, 건조하였다. 표제 화합물을 추가 정제 없이 사용하였다: mp. 136-140℃; HPLC t_R = 3.40 min.

실시예 12: 3-이소퀴놀린-7-일-4-메틸-N-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3- 트리플루오로메틸-페닐]-벤즈아미드

출발 물질로서 4-메틸-N-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-3-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-벤즈아미드를 사용하고 실시예 11에서 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하여 표제 화합물을 합성하였다. 황갈색 포움으로서 표제 화합물을 얻었다; R_f (디클로로메탄/메탄올 9:1) = 0.10; HPLC t_R = 2.34 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 519.

단계 12.1 : 4-메틸-N-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-3-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-벤즈아미드

출발 물질로서 3-브로모-4-메틸-N-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-벤즈아미드를 사용하고 단계 11.1에서 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하여 표제 화합물을 합성하였다. 황갈색 포움으로서 표제 화합물을 얻었다; R_f (디클로로메탄/에탄올 9:1) = 0.1 ; HPLC t_R = 3.57 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 518.

단계 12.2: 3-브로모-4-메틸-N-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-벤즈아미드

50 mL의 아세토니트릴 중 6.1 g (0.025 mol) 3-브로모-4-메틸벤조산 클로라이드의 용액에 10℃에서 7 mL (0.05 mol) 트리에틸아민을 첨가한 후, 50 mL의 아세토니트릴 중 4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐아민의 용액을 적가하였다 (발열 반응). 갈색 현탁액을 rt에서 5 h 동안 교반시킨 후, 밤새 정치하게 두었다. 에틸 아세테이트를 첨가하고 용액을 포화 중탄산 나트륨 용액 및 염수로 세척하고 황산 나트륨으로 건조시키고 증발시켰다. 1% 농축된 암모니아를 함유하는 디클로로메탄/에탄올 93:7을 사용하는 실리카겔 상의 플래시-크로마토그래피를 통해 순수한 표제 생성물을 얻었다: R_f (1% 농축된 암모니아를 갖는 디클로로메탄/에탄올 93:7) = 0.4; HPLC t_R = 3.14 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 470, 472.

실시예 13: 4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-N-(4-메틸-3-퀴나졸린-6-일-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

0.3 g (0.406 mmol) 4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-N-[4-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-페닐]-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드, 0.084 g (0.402 mmol) 6-브로모-퀴나졸린, 1.6 mL의 톨루엔, 0.2 mL의 에탄올 및 0.4 mL의 2M 탄산 나트륨 용액을 함유하는 혼합물에 질소를 10 분 동안 통과시켰다. 그 후 혼합물을 질소하에서 4 mg (0.0178 mmol) 팔라듐 아세테이트 및 15.6 mg (0.0595 mmol) 트리페닐포스핀으로 처리하고 4 h 동안 90℃로 가열시켰다. 어두운색 혼합물을 5 mL의 에틸 아세테이트로 처리하고 유기상을 분리하였다. 1.6 g의 실리카겔을 유기 용액에 첨가한 후 용매를 제거하였다. 실리카겔에 코팅된 조 생성물을 콤비-플래시 컴패니언™ (이스코 사) 장치 상에 40 g 실리카겔 컬럼을 사용하는 크로마토그래피로 정제하였다. 디클로로메탄/에탄올 (0 -> 25% 에탄올)의 기울기를 사용하였다. 순수한 분획물을 모으고 증발시켜 황갈색 포움으로서 표제 화합물을 얻었다; R_f (디클로로메탄/에탄올 9:1) = 0.07; HPLC t_R = 2.48 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 520.

실시예 14: 4-메틸-N-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-3-퀴나졸린-6-일-벤즈아미드

출발 물질로서 4-메틸-N-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-3-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-벤즈아미드 및 6-브로모-퀴나졸린을 사용하고 실시예 13에서 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하여 표제 화합물을 합성하였다. 황갈색 포움으로서 표제 화합물을 얻었다; R_f (디클로로메탄/메탄올 9:1) = 0.18; HPLC t_R = 2.36 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 520.

실시예 15: N-(4-메틸-3-프탈라진-6-일-페닐)-4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

출발 물질로서 4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-N-[4-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-페닐]-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드 6-브로모프탈라진을 사용하고 실시예 13에서 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하여 표제 화합물을 합성하였다. 무색 결정으로서 표제 화합물을 얻었다; m.p. 204-208℃; HPLC t_R = 2.53 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 520.

실시예 16: 4-메틸-N-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-3-프탈라진-6-일-벤즈아미드

출발 물질로서 4-메틸-N-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-3-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-벤즈아미드 및 6-브로모-프탈라진을 사용하고 실시예 13에서 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하여 표제 화합물을 합성하였다. 황갈색 포움으로서 표제 화합물을 얻었다; R_f (디클로로메탄/메탄올 9:1) = 0.18; HPLC t_R = 2.38 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 520.

실시예 17: N-(4-메틸-3-프탈라진-6-일-페닐)-4-피페리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

3.12 mL DMF 중 0.295 g (0.648 mmol) N-(3-브로모-4-메틸-페닐)-4-피페리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드, 0.191 g (1.94 mmol) 포타슘 아세테이트 및 0.198 g (0.778 mmol) 비스-(피나콜라토)-디보론의 혼합물을 통해 질소를 10 분 동안 버블링시켰다. 0.032 g (0.0391 mmol) 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센- 팔라듐 디클로라이드를 첨가한 후, 혼합물을 6 h 동안 80℃로 가열시켰다. 형성된 N-[4-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-페닐]-4-피페리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드 중간체는 단리하지 않았다. 냉각된 어두운색 현탁액에 질소하에서 6-브로모프탈라진 (0.1355 g, 0.648 mmol), 세슘 카르보네이트 (0.316 g, 0.97 mmol) 및 0.0225 mg (0.0195 mmol) 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐을 첨가하였다. 어두운색 혼합물을 15 h 동안 80℃로 가열시키고 rt로 냉각시키고 여과시켰다. 고체를 DMF로 세척하고 여액을 모아서 감압하에서 증발시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 및 포화 중탄산 나트륨 용액 사이에 분배시키고 유기상을 염수로 세척하고, 황산 나트륨으로 건조시키고 증발시켰다. 조 생성물을 콤비-플래시 컴패니언™ (이스코 사) 장치 상에 40 g 실리카겔 컬럼을 사용하는 크로마토그래피로 정제하였다. 에틸 아세테이트/메탄올 (0 -> 10% 메탄올)의 기울기를 사용하였다. 순수한 분획물을 모으고 증발시켜 황갈색 결정으로서 표제 화합물을 얻었다; m.p. 175-177℃; R_f (에틸 아세테이트/메탄올 9:1) = 0.39; HPLC t_R = 2.50 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 505.

단계 17.1 : N-(3-브로모-4-메틸-페닐)-4-피페리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

시약으로서 피페리딘을 사용하고 단계 11.2에서 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하여 표제 화합물을 합성하였다. 황갈색 포움: R_f (에틸 아세테이트) = 0.71 ; HPLC t_R = 3.51 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 455, 457.

단계 18: 4-디메틸아미노메틸-N-(3-이소퀴놀린-7-일-4-메틸-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

출발 물질로서 N-(3-브로모-4-메틸-페닐)-4-디메틸아미노메틸-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드을 사용하고 실시예 17에서 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하여 표제 화합물을 합성하였다. 무색 수지: R_f (에틸 아세테이트/메탄올 9:1) = 0.40; HPLC t_R = 2.30 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 464.

단계 18.1 : N-(3-브로모-4-메틸-페닐)-4-디메틸아미노메틸-3-트리플루오로 메틸-벤즈아미드

시약으로서 디메틸아민 히드로클로라이드를 사용하고 단계 11.2에서 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하여 표제 화합물을 합성하였다. 황색 결정: m.p. 169-172℃; R_f (에틸 아세테이트/메탄올 9:1) = 0.48; HPLC t_R = 4.83 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 372, 374.

실시예 19: 4-디메틸아미노메틸-N-(4-메틸-3-프탈라진-6-일-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

출발 물질로서 N-(3-브로모-4-메틸-페닐)-4-디메틸아미노메틸-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드 및 6-브로모프탈라진을 사용하고 실시예 17에서 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하여 표제 화합물을 합성하였다. 황갈색 결정: m.p. 240-241℃; R_f (에틸 아세테이트/메탄올 9:1) = 0.20; HPLC t_R = 2.24 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 465.

실시예 20: N-(4-메틸-3-프탈라진-6-일-페닐)-4-모르폴린-4-일메틸-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

출발 물질로 N-(3-브로모-4-메틸-페닐)-4-모르폴린-4-일메틸-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드 및 6-브로모프탈라진을 사용하고 실시예 17에서 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하여 표제 화합물을 합성하였다. 황갈색 결정: m.p. 236-238℃; Rt (에틸 아세테이트/메탄올 92.5:7.5) = 0.26; HPLC t_R = 2.30 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 507.

단계 20.1 : (3-브로모-4-메틸-페닐)-4-모르폴린-4-일메틸-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

시약으로서 모르폴린을 사용하고 단계 11.2에서 기술된 과정과 동일한 과정 을 사용하여 표제 화합물을 합성하였다. 무색 결정: m.p. 160-162℃; R_f (에틸 아세테이트/헥산 1 :1) = 0.40; HPLC t_R = 3.27 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 457, 459.

실시예 21: N-(3-이소퀴놀린-7-일-4-메틸-페닐)-4-모르폴린-4-일메틸-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

출발 물질로서 N-(3-브로모-4-메틸-페닐)-4-모르폴린-4-일메틸-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드 및 트리플루오로-메탄술폰산 이소퀴놀린-7-일 에스테르를 사용하고 실시예 17에서 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하여 표제 화합물을 합성하였다. 무색 수지: R_f (에틸 아세테이트) = 0.20; HPLC t_R = 2.29 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 506.

실시예 22: 4-메틸-3-프탈라진-6-일-N-(4-피페리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드

출발 물질로서 3-브로모-4-메틸-N-(4-피페리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드 및 6-브로모프탈라진을 사용하고 실시예 17에서 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하여 표제 화합물을 합성하였다. 황갈색 결정: m.p. 247-249℃; HPLC t_R = 2.52 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 505.

단계 22.1: 3-브로모-4-메틸-N-(4-피페리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드

5 mL 에틸 아세테이트 중 0.5 g (1.295 mmol) 3-브로모-N-(4-포르밀-3-트리플루오로메틸-페닐)-4-메틸-벤즈아미드의 용액을 질소하에서 0.64 ml (6.48 mmol) 피페리딘 및 0.0325 mg (0.13 mmol) 피리디늄 토실레이트로 처리하였다. 혼합물을 60℃로 가열시키고 소듐 트리아세톡시보로히드라이드를 조금씩 45 분에 걸쳐 첨가하였다. 농후한 현탁액을 밤새 rt에서 정치시킨 후 60℃에서 10 분 동안 계속 교 반시켰다. 10℃ 혼합물을 2 mL의 물을 적가하여 가수분해시켰다. 두개의 상을 분리하고 에틸 아세테이트 상을 물 및 염수로 세척하고, 황산 나트륨으로 건조시키고 증발시켰다. 조 생성물을 콤비-플래시 컴패니언™ (이스코 사) 장치 상에 40 g 실리카겔 컬럼을 사용하는 크로마토그래피로 정제하였다. 에틸 아세테이트/헥산 (5 -> 30% 에틸 아세테이트)의 기울기를 사용하였다. 순수한 분획물을 모으고 증발시켜 밝은 황색 결정으로서 표제 화합물을 얻었다; m.p. 151-153℃; R_f (에틸 아세테이트) = 0.52; HPLC t_R = 3.56 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 455, 457.

단계 22.2: 3-브로모-N-(4-포르밀-3-트리플루오로메틸-페닐)-4-메틸-벤즈아미드

조 4-아미노-2-트리플루오로메틸-벤즈알데히드 (갈색 오일, ~3 g, -0.016 mol)을 15 mL의 디클로로메탄 중에 용해시키고 rt에서 트리에틸아민 (2.465 mL, 0.0177 mol)으로 처리하였다. 그 후 어두운색 용액에 15 mL 디클로로메탄 중 3.8 g (0.016 mol) 3-브로모-4-메틸벤조산 클로라이드의 용액을 천천히 첨가하였다. 완전히 첨가된 후, 혼합물을 rt에서 밤새 정치되게 하였다. 디클로로메탄을 증발시키고 잔류물을 콤비-플래시 컴패니언™ (이스코 사) 장치 상에 120 g 실리카겔 컬럼을 사용하는 크로마토그래피로 정제하였다. 에틸 아세테이트/헥산 (0 -> 25% 에틸 아세테이트)의 기울기를 사용하였다. 순수한 분획물을 모으고 증발시켜 밝은 황색 결정으로서 표제 화합물을 얻었다; m.p. 193.5-195℃; R, (에틸 아세테이트/헥산 1 :3) = 0.34; HPLC t_R = 4.75 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 386, 384.

단계 22.3: 4-아미노-2-트리플루오로메틸-벤즈알데히드

9 mL의 건조 THF 중 3 g (0.0161 mol) 4-아미노-2-트리플루오로메틸-벤조니트릴의 용액을 rt에서 질소하에 톨루엔 중 26.85 mL (0.0403 mol)의 1.5 M 디이소부틸-알루미늄-히드라이드 용액으로 한방울씩 처리하였다. 첨가하는 동안 적절하게 냉각시키면서 온도를 최대 28℃로 유지하였다. 완전히 첨가된 후, 갈색 용액을 rt에서 밤새 정치되게 하였다. 그 후 4.4 mL의 메탄올 및 39 mL의 포화 (~3M) 포타슘 소듐 타르타레이트 용액의 혼합물을 적가하였다. 가수분해 동안, 온도를 40℃ 미만으로 유지시켰다. 15 분 교반시킨 후, 에틸 아세테이트를 첨가하고 두층을 분리하였다. 에틸 아세테이트 상을 물 및 염수로 세척하고, 황산 나트륨으로 건조시키고 증발시켰다. 얻어진 갈색 포움은 알데히드의 올리고머 형으로 이루어졌고 (이민 형성) 이에 따라 10 mL의 에틸 아세테이트에 재용해시키고 10 mL의 1 N HCl과 함께 10 분 동안 충분히 교반시켰다. 소듐 히드록시드 (1 N, 8.5 mL)를 첨가하고 5 분 이상 동안 계속해서 교반시켰다 (최종 용액이 pH~9가 됨). 에틸 아세테이 트를 분리하고, 염수로 세척하고, 황산 나트륨으로 건조시키고 증발시켜 다음 단계에 즉시 사용되는 갈색 오일의 조 4-아미노-2-트리플루오로메틸-벤즈알데히드를 얻었다.

실시예 23: 4-메틸-N-(4-모르폴린-4-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-3-프탈라진-6-일-벤즈아미드

출발 물질로서 3-브로모-4-메틸-N-(4-모르폴린-4-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드 및 6-브로모프탈라진을 사용하고 실시예 17에서 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하여 표제 화합물을 합성하였다. 황갈색 결정: m.p. 284-287℃; R_f (에틸 아세테이트/에탄올 95:5) = 0.16; HPLC t_R = 2.25 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 507.

단계 23.1 : 3-브로모-4-메틸-N-(4-모르폴린-4-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드

출발 물질로서 3-브로모-N-(4-포르밀-3-트리플루오로메틸-페닐)-4-메틸-벤즈아미드 및 모르폴린을 사용하고 단계 22.1에서 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하여 표제 화합물을 합성하였다. 밝은 황색 결정: m.p. 147-151℃; HPLC t_R = 3.31 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 457, 459.

실시예 24: N-(4-디메틸아미노메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-4-메틸-3-프탈라진-6-일-벤즈아미드

출발 물질로서 3-브로모-N-(4-디메틸아미노메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-4-메틸-벤즈아미드 및 6-브로모프탈라진을 사용하고 실시예 17에서 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하여 표제 화합물을 합성하였다. 무색 결정: m.p. 251-254℃; R_f (디클로로메탄/메탄올/농축된 암모니아 90:10:1) = 0.45; HPLC t_R = 2.22 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 465.

단계 24.1 : 3-브로모-N-(4-디메틸아미노메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-4-메틸-벤즈아미드

출발 물질로서 3-브로모-N-(4-포르밀-3-트리플루오로메틸-페닐)-4-메틸-벤즈아미드 및 디메틸아민 히드로클로라이드 및 트리에틸아민을 사용하고 단계 22.1에서 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하여 표제 화합물을 합성하였다. 무색 결정: m.p. 156-157℃; HPLC t_R = 3.24 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 415, 417.

실시예 25: 4-메틸-3-프탈라진-6-일-N-(4-피롤리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드

출발 물질로서 3-브로모-4-메틸-N-(4-피롤리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드 및 6-브로모프탈라진을 사용하고 실시예 17에서 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하여 표제 화합물을 합성하였다. 무색 결정: m.p. 246-250℃; R_f (디클로로메탄/메탄올/농축된 암모니아 90:10:1 ) = 0.39; HPLC t_R = 2.42 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 491.

단계 25.1 : 3-브로모-4-메틸-N-(4-피롤리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드

출발 물질로서 3-브로모-N-(4-포르밀-3-트리플루오로메틸-페닐)-4-메틸-벤즈아미드 및 피롤리딘을 사용하고 단계 22.1에서 기술된 과정과 동일한 과정을 사용하여 표제 화합물을 합성하였다. 무색 결정: m.p. 168-170℃; HPLC t_R = 3.43 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 441, 443.

실시예 26: N-(3-(2-아미노퀴나졸린-6-일)-4-메틸-페닐)-4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

50 mL 밀봉된 튜브에서, 0.400 g (1.70 mmol) 2-아미노-6-브로모-퀴나졸린, 0.420 g (0.804 mmol) 4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-N-[4-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-페닐]-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드 (단계 11.1), 및 0.160 g (0.226 mmol) 비스(트리페닐포스핀) 팔라듐 (II) 클로라이드를 2 mL의 1 M 수성 소듐 수소 카르보네이트, 5 mL 톨루엔 및 1 mL EtOH의 용액에 첨가하였다. 5 분 동안 질소로 버블링한 후, 반응 혼합물을 밀봉하고 3 h 동안 90℃에서 가열시켰다. 냉각 후, 혼합물을 진공에서 농축시키고 생성된 잔류물을 워터스 엑스테라 컬럼 (Waters xTerra column) (50 x 100 mm)이 장착된 배리언 프로스타 시스템 (Varian Prostar system) 및 물 중 0.1 % NH3/아세토니트릴 (0 -> 100%) 중 0.1 % NH3의 용매 기울기를 사용하는 역상 HPLC로 정제하였다. 순수한 분획물을 모으고 증발시켜 밝은 황색 고체로서 0.10 g (0.185 mmol)의 표제 화합물을 얻었다; HPLC t_R (물/아세토니트릴) = 8.4 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 535.

단계 26.1 : 2-아미노-6-브로모-퀴나졸린

250 mL 반응 튜브에서, 9.30 g (45.4 mmol) 5-브로모-2-플루오로벤즈알데히드 및 12.40 g (68.1 mmol) 구아니딘 카르보네이트를 130 mL N,N-디메틸아세트아미드 중에 용해시켰다. 용액을 질소로 1 h 동안 버블링한 후, 튜브를 밀봉하고 3 h 동안 140℃에서 가열시켰다. 냉각시킨 후, 반응을 50 mL의 포화 NaHCO3 용액 및 300 mL 물로 희석시키고 0.5 h 동안 교반시켰다. 생성된 침전물을 모으고, 50 mL 물로 우선 세척한 후, 50 mL 에테르로 세척하고, 공기 건조하여 4.0 g (17.7 mmol)의 표제 화합물을 얻었다: HPLC t_R = 5.6 min; MS-ES⁺: (M+H)⁺ = 225.

실시예 27: 연질 캡슐제

상기 실시예 중 임의의 하나에서 언급한 화학식 I의 화합물 중 하나의 0.05 g을 활성 성분으로 각각 포함하는 5000 연질 겔라틴 캡슐제를 다음과 같이 제조하였다:

조성:

활성 성분 250 g

라우로글리콜 2 리터

제조 방법: 분쇄된 활성 성분을 라우로글리콜® (프로필렌 글리콜 라우레이트, 프랑스 세이트 프리스트에 위치한 가테호세 S.A.(Gattefosse S.A.)의 제품)에 현탁시키고 습윤 분쇄기 중에서 갈아서 입자 크기 약 1 내지 3 μm를 생산하였다. 그 후 0.419 g의 혼합물을 캡슐-충전 기계를 사용하여 연질 겔라틴 캡슐로 도입시켰다.

실시예 28: 화학식 I의 화합물을 포함하는 정제

실시예 1 내지 10 중 임의의 화학식 I의 화합물 중 하나의 100 mg을 활성 성분으로서 포함하는 정제를 다음의 조성으로, 다음 표준 과정을 사용하여 제조하였다.

조성:

활성 성분 100 mg

결정질 락토스 240 mg

아비셀(Avicel) 80 mg

PVPPXL 20 mg

애로실(Aerosil) 2 mg

마그네슘 스테아레이트 5 mg

447 mg

제조: 활성 성분을 담체 물질과 혼합시키고 정제 기계 (코르쉬 에코(Korsch EKO), 스템펠두르크메쎄르(Stempeldurchmesser) 10 mm)를 사용하여 압축시켰다.

아비셀®은 미세결정질 셀룰로스 (미국 필라델피아에 위치한 FMC사의 제품)이다. PVPPXL은 가교된 폴리비닐-폴리피롤리돈 (독일에 위치한 바스프사(BASF)의 제품)이다. 애로실®은 실슘 디옥사이드 (독일에 위치한 데구사(Degussa)의 제품)이다.

Claims (14)

1. 일 이상의 염-형성기가 존재하는 화학식 I의 화합물, 또는 이의 염.

   <화학식 I>

   

   (상기식에서,

   R₁은 수소 또는 -N(R₆R₇)이고, 여기서 R₆ 및 R₇ 각각은 알킬이거나 또는 R₆ 및 R₇은 이들에 결합하는 질소와 함께, 5- 내지 7-원 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 또다른 고리 원자는 탄소, 및 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 0, 1 또는 2 헤테로원자로부터 선택되고, 고리는 비치환되거나 또는 또다른 질소 고리 원자가 존재하는 경우, 그 질소에 알킬로 치환되거나 또는 비치환되고;

   R₂는 수소 또는 -CH₂-N(R₆R₇)이고, 여기서 R₆ 및 R₇ 각각은 알킬이거나 또는 R₆ 및 R₇은 이들에 결합하는 질소와 함께, 5- 내지 7-원 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 또다른 고리 원자는 탄소, 및 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 0, 1 또는 2 헤테로원자로부터 선택되고, 고리는 비치환되거나 또는 또다른 질소 고리 원자가 존재하는 경우, 그 질소에 알킬로 치환되거나 또는 비치환되고;

   조건부로, R₁ 및 R₂ 중 일 이상은 수소이고;

   R₃은 할로 또는 C₁-C₇-알킬이고;

   R₄는

   

   (여기서

   X는 CH, N 또는 C-NH₂이고;

   Y는 CH 또는 N이고;

   조건부로 X 및 Y 양자가 동시에 N는 아니고;

   및 R₅는 수소, C₁-C₇-알킬 또는 비치환된 또는 치환된 페닐임)

   로 이루어지는 군으로부터 선택되는 비시클릭 헤테로시클릴이고;

   A는 -C(=O)-NH- (화학식 I 중 Q 및 Z를 포함하는 고리에 결합된 -NH-를 가짐) 또는 -NH-C(=O)- (화학식 I 중 Q 및 Z를 포함하는 고리에 결합된 -C(=O)-를 가짐);

   Z는 CH 또는 N이고; 및

   Q는 -S- 또는 -CH=CH-이다)
2. 제1항에 있어서, Q는 -CH=CH-이고, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, A 및 Z는 제1항에서 정의한 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 -바람직하게는 제약상 허용되는- 염.
3. 제1항에 있어서, A는 화학식 I 중 Q 및 Z를 포함하는 고리에 결합된 -NH-가 있는 -C(=O)-NH-이고, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, Q 및 Z는 제1항에서 정의한 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 -바람직하게는 제약상 허용되는- 염.
4. 제1항에 있어서, R₁ 및 R₂ 중 하나는 수소이고 다른 하나는 수소 또는

   

   (상기식에서 "Alk"는 알킬, 바람직하게는 저급 알킬, 더욱 바람직하게는 메틸 또는 에틸임)

   으로 이루어지는 군으로부터 선택된 잔기이고 R₃, R₄, R₅, A, Q 및 Z는 제1항에서 정의한 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 -바람직하게는 제약상 허용되 는- 염.
5. 제1항에 있어서,

   R₁ 및 R₂ 각각은 수소이고;

   R₃은 C₁-C₇-알킬, 특히 메틸이고;

   R₄는

   

   (여기서

   X는 CH, N 또는 C-NH₂이고;

   Y는 CH 또는 N이고;

   조건부로 X 및 Y 양자가 동시에 N이 아니고;

   및 R₅는 수소, C₁-C₇-알킬 또는 페닐임)

   로 이루어지는 군으로부터 선택되는 비시클릭 헤테로시클릴이고

   -(R₄는 바람직하게는

   

   임)

   A는 -C(=O)-NH- (화학식 I 중 Q 및 Z를 포함하는 고리에 결합된 -NH-가 있음) 또는 -NH-C(=O)- (화학식 I 중 Q 및 Z를 포함하는 고리에 결합된 -C(=O)-가 있음);

   Z는 CH이고; 및

   Q는 -CH=CH-인

   일 이상의 염-형성기가 존재하는 화학식 I의 화합물, 또는 이의 -바람직하게는 제약상 허용되는- 염.
6. 제1항에 있어서, R₄는

   

   인 화합물.
7. 제1항에 있어서,

   N-(3-이소퀴놀린-7-일-4-메틸-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드,

   N-(4-메틸-3-퀴나졸린-6-일-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드,

   3-이소퀴놀린-7-일-4-메틸-N-(3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드,

   4-메틸-3-퀴나졸린-6-일-N-(3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드,

   N-(3-벤조티아졸-6-일-4-메틸-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드,

   3-벤조티아졸-6-일-4-메틸-N-(3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드,

   N-(4-메틸-3-프탈라진-6-일-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드,

   4-메틸-3-프탈라진-6-일-N-(3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드,

   N-(3-벤조티아졸-5-일-4-메틸-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드,

   3-벤조티아졸-5-일-4-메틸-N-(3-트리플루오로메틸페닐)벤즈아미드,

   N-(3-이소퀴놀린-7-일-4-메틸-페닐)-4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드,

   3-이소퀴놀린-7-일-4-메틸-N-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-벤즈아미드,

   4-메틸-N-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-3-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-벤즈아미드,

   4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-N-(4-메틸-3-퀴나졸린-6-일-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드,

   4-메틸-N-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-3-퀴나졸린-6-일-벤즈아미드,

   N-(4-메틸-3-프탈라진-6-일-페닐)-4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루 오로메틸-벤즈아미드,

   4-메틸-N-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-페닐]-3-프탈라진-6-일-벤즈아미드,

   N-(4-메틸-3-프탈라진-6-일-페닐)-4-피페리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드,

   4-디메틸아미노메틸-N-(3-이소퀴놀린-7-일-4-메틸-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드,

   4-디메틸아미노메틸-N-(4-메틸-3-프탈라진-6-일-페닐)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드,

   N-(4-메틸-3-프탈라진-6-일-페닐)-4-모르폴린-4-일메틸-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드,

   N-(3-이소퀴놀린-7-일-4-메틸-페닐)-4-모르폴린-4-일메틸-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드,

   4-메틸-3-프탈라진-6-일-N-(4-피페리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-벤즈아미드,

   4-메틸-N-(4-모르폴린-4-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-3-프탈라진-6-일-벤즈아미드,

   N-(4-디메틸아미노메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)-4-메틸-3-프탈라진-6-일-벤즈아미드,

   4-메틸-3-프탈라진-6-일-N-(4-피롤리딘-1-일메틸-3-트리플루오로메틸-페닐)- 벤즈아미드, 및

   N-(3-(2-아미노퀴나졸린-6-일)-4-메틸-페닐)-4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-3-트리플루오로메틸-벤즈아미드

   로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 염-형성기가 존재하는 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용되는 염.
8. 화학식 II의 보론산 유도체를 화학식 III의 커플링 파트너와 반응시키고, 필요하다면, 화학식 I의 화합물을 화학식 I의 상이한 화합물로 변형시키고(거나), 화학식 I의 수득가능한 화합물의 염을 유리 화합물 또는 상이한 염으로 변형시키고(거나), 화학식 I의 수득가능한 유리 화합물을 이의 염으로 변형시키는 것을 포함하는, 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 화학식 I의 화합물 또는 이의 염의 제조 방법.

   <화학식 II>

   

   (상기식에서 D₁ 및 D₂는 히드록시 또는 치환된 히드록시이거나, 또는 결합한 붕소 원자 및 두개의 결합한 산소 원자와 함께 화학식 IIA의 고리를 형성함)

   <화학식 IIA>

   

   (상기식에서 E는 알킬렌, 치환된 알킬렌, 비치환된 또는 치환된 시클로알킬렌, 비치환된 또는 치환된 비시클로알킬렌 또는 비치환된 또는 치환된 트리시클로알킬렌임)

   <화학식 III>

   

   (상기식에서 R₄는 제1항에서 정의한 바와 같고 L은 이탈기임)
9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
10. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 동물, 특히 포유류, 또는 인간 신체의 진단성 및(또는) 치료성 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염.
11. 일 이상 단백질 키나제, 특히 일 이상의 단백질 티로신 키나제, 특히 c-abl, KDR, c-Src, c-raf, b-raf, Tie/Tek 및 KDR 키나제; 또는 이들의 돌연변이된 변이 체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 일 이상 단백질 티로신 키나제에 의존하는 일 이상 질환 또는 장애 치료를 위한, 또는 일 이상 질환 또는 장애 치료용 제약 제제의 제조를 위한 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염의 용도.
12. 증식성 질환의 치료를 위한, 또는 증식성 질환 치료용 제약 조성물의 제조를 위한 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염의 용도.
13. 예방적 또는 특히 치료적 유효량의 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염을, 특히 키나제의 억제에 반응하는 질환 및(또는) 증식성 질환 중 일 질환으로 인해 치료가 요구되는 온혈 동물, 예를 들어 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 키나제의 억제에 반응하는 질환 및(또는) 증식성 질환의 치료 방법.
14. 치료적 유효량의 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염, 및 제2 약물 물질 또는 이의 제약상 허용되는 염을 포함하는 조합물.