KR20070042927A - 상처 치유 방법 및 조성물 - Google Patents

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KR20070042927A
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찬단 케이. 센
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더 오하이오 스테이트 유니버시티 리서치 파운데이션
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Abstract

본 발명은 종래 사용되는 농도 미만의 과산화수소를 포함하는, 동물에서 병변을 치료하기 위한 방법, 장치 및 조성물에 관한 것이다. 상기 방법, 장치 및 조성물은 증가된 상처 치유율을 제공한다.
병변, 상처, 과산화수소, 치유율

Description

상처 치유 방법 및 조성물 {METHODS AND COMPOSITIONS FOR WOUND HEALING}
본 출원은 전체 개시내용이 본원에 참고로 포함되는, 2004년 6월 18일 출원된 미국 출원 제10/871,158호를 우선권으로 주장한다.
본 발명은 일반적으로 상처 치료 방법 및 조성물에 관한 것이다.
종래에는, 반응성 산소 종 (ROS)이 주로 생존 세포에 손상을 주는 것으로 여겨져 왔다. 실제로, ROS, 예를 들면 과산화수소 및 오존은 이들의 강력한 산화 효과로 인해 살균제로서 사용되어 왔다. 이러한 산화 효과는 비-특이적이며; 원치않는 미생물을 파괴할 뿐만 아니라, 상당한 부수적 손상이 나타난다. 따라서, 전통적으로 살균에 사용된 투여량에서, 과산화수소는 생존 조직에 대해 파괴적이다.
그러나, 더 저-투여량에서, 과산화수소는 치유 과정에서 놀라운 효과를 갖는 것으로 밝혀졌다. 본 발명은 낮은 투여량의 과산화수소를 그의 상처 치유 효과를 위해 사용하는 것에 관한 것이다.
발명의 요약
본 발명은 병변 제곱 센티미터 당 과산화수소 약 500 나노몰 내지 약 50 마이크로몰을 병변에 적용하는 것을 포함하는, 포유동물에서 병변 치유율을 증가시키는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 방법은 병변 제곱 센티미터 당 과산화수소 약 1 내지 약 50, 또는 약 1 내지 약 10, 또는 약 1 내지 약 2 마이크로몰을 적용하는 것을 포함한다. 과산화수소는 예를 들어 효소적 공급원 및 화학적 공급원으로부터 선택된 공급원으로 병변에 적용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 과산화수소 공급원은 화학적 공급원이며, 공급원은 과산화수소이다.
또한, 본 발명은 약 12 시간 내지 약 24 시간의 기간에 걸쳐 병변 제곱센티미터 당 과산화수소 약 500 나노몰 내지 약 50 마이크로몰의 비율로 과산화수소를 병변에 적용하는 것을 포함하는, 포유동물에서 병변 치유율을 증가시키는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 과산화수소는 약 1 내지 약 10 마이크로몰의 비율로 적용된다. 과산화수소는, 예를 들면 겔제, 로션제, 연고제, 크림제, 페이스트제 및 액상제로부터 선택된 형태일 수 있는 제약상 허용되는 조성물로 적용될 수 있다. 과산화수소는 붕대, 외과적 드레싱, 거즈, 접착 스트립, 외과적 스테이플, 클립, 지혈기, 자궁내 장치, 봉합사, 투관침, 카테터, 튜브 및 임플란트를 포함하지만 이에 한정되지 않는 제약상 허용되는 장치로 적용될 수 있다. 임플란트로는 환제, 펠렛, 로드(rod), 웨이퍼, 디스크 및 정제를 들 수 있지만, 이에 한정되지는 않는다.
이러한 장치는 흡수성 물질을 포함할 수 있는 중합체 물질을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 흡수성 물질은 합성 물질을 포함한다. 합성 물질은 셀룰로스성 중합체, 글리콜산 중합체, 메타크릴산 중합체, 에틸렌 비닐 아세테이트 중합체, 에틸렌 비닐 알콜 공중합체, 폴리카프로락탐, 폴리아세테이트, 락티드와 글리콜리드의 공중합체, 폴리디옥사논, 폴리글락틴, 폴리글레카프론, 폴리글리코네이트, 폴리글루코네이트, 및 이들의 조합물로부터 선택될 수 있다. 몇몇 실시양태에 서, 흡수성 물질은 비-합성 물질을 포함한다. 비-합성 물질은 장선(catgut), 교원질(cargile membrane), 대퇴근막, 젤라틴, 콜라겐 및 이들의 조합물로부터 선택될 수 있다.
상기 장치는 비흡수성 물질을 포함할 수 있는 중합체 물질을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 비흡수성 물질은 합성 물질을 포함한다. 합성 물질은 나일론, 레이온, 폴리올레핀 및 이들의 조합물로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 비흡수성 물질은 비-합성 물질을 포함한다. 비-합성 물질은 실크, 피부 실크, 면화, 리넨 및 이들의 조합물로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 방법은 상처, 궤양 및 화상으로부터 선택된 병변을 치료하는데 사용될 수 있다. 상처는 급성 상처 및 만성 상처로부터 선택될 수 있다. 상처는 전체층 상처 및 일부층 상처로부터 선택될 수 있다. 급성 상처는 예를 들어 외과적 상처, 관통 상처, 적출 손상, 압궤 손상, 전단 손상, 화상 손상, 열상 및 교상으로부터 선택될 수 있다. 만성 상처는 예를 들어 동맥성 궤양, 정맥성 궤양, 압박 궤양 및 당뇨병성 궤양으로부터 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은 과산화수소 및 담체 물질을 포함하는, 병변에 투여하기 위한 과산화수소 전달 장치를 제공하는데, 이 장치는 상기 과산화수소를 약 12 시간 이상의 시간 동안 방출하며, 상기 장치로부터 방출된 과산화수소는 병변을 괴사시키기에는 불충분한 농도이다. 일부 실시양태에서, 장치는 12 시간 동안 상처 cm2 당 과산화수소 약 0.5 내지 50 μmol로부터 24 시간 동안 상처 cm2 당 과산화수소 약 0.5 내지 50 μmol을 방출한다. 담체 물질은 중합체 물질을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 중합체 물질은 흡수성 물질을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중합체 물질은 합성 물질을 포함한다.
또한, 본 발명은 과산화수소 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는, 포유동물의 병변 치료용 조성물을 제공하는데, 여기서 조성물의 단위 투여량은 상처 cm2 당 과산화수소 약 0.5 내지 약 50 μmol을 포함한다. 일부 실시양태에서, 담체는 겔 물질을 포함하며, 일부 실시양태에서 담체는 액상 물질을 포함한다.
본 발명의 추가의 목적 및 이점은 하기 상세한 설명에 일부 기재되어 있으며 일부는 이러한 설명으로부터 자명하거나, 또는 본 발명을 실시함으로써 알게 될 것이다. 본 발명의 목적 및 이점은 특히 첨부된 특허청구범위에 지시된 구성원 및 조합에 의해 실현 및 달성될 것이다.
상기 일반적인 설명 및 하기 상세한 설명은 둘 다 예시적이고 설명을 위한 것일 뿐이며, 청구된 본 발명의 범위를 한정하고자 하는 것이 아님은 물론이다.
도 1. 상처 부위에서 ROS의 존재. A. 상처 체액 중의 H 2 O 2 농도. 상처 절개부를 통해 5주령의 C57BL/6 마우스의 등부에 헌트/실링(Hunt/Schilling) 와이어 메쉬 실린더를 피하 이식하였다. 5일 후, 상처 체액을 수집하고, 본원의 이하에 기재된 바와 같은 실시간 전기화학 기술을 이용하여 체액 중 항정-상태의 H2O2 농도를 측정하였다. PBS에서 기준값을 정하였다. 화살표로 나타낸 시점에서 상처 체 액 (0.15 ml)을 DPBS (1 ml)에 가하였다. 표준 그래프를 이용하여, 상처 체액 중 H2O2의 측정 농도는 1.1 μM이었다. B. 상처 세정물로부터 측정된 DMPO 부가물의 EPR 스펙트럼. 상처발생 후 0 시간 (샴(sham) 대조군, 위쪽 패널) 및 12 시간 (아래쪽 패널)의 시점에서 상처 공동에서 수집된 DMPO (100 mM, 0.1 ml) 유출물로부터 스펙트럼을 구하였다. 아래쪽 패널의 스펙트럼은 다음과 같은 커플링 상수를 갖는 DMPO-OH의 스펙트럼으로 확인되었다: aN=14.90 G, aH=14.90. 데이터 획득 파라미터는 다음과 같았다: 마이크로파 주파수, 9.8682 GHz; 스윕(sweep) 폭, 100 G; 마이크로파 전력, 20 mW; 모듈레이션 진폭, 0.5 G; 모듈레이션 주파수, 100 kHz; 시간 상수 80 msec. C. 정상 피부 및 상처 연부(wound edge) 조직내의 과산화물 생성. 상처 연부 샘플을 상처발생 12시간 후에 수확하고, OCT에서 즉시 동결하였다. 새로운 30-마이크로미터 섹션(section)을 DHE (0.01 mM, 20분, 20Ox)와 인큐베이션하여 O2 -를 검출하고 공초점 현미경에 의해 시각화하였다.
도 2. 카탈라제 과발현은 상처치유를 감소시킨다. 상처를 발생시킬 피부에 카탈라제 및 LacZ (대조군) 아데노바이러스 (1011 pfu)를 1회 피하 주사한 다음, 5일 후 상처를 발생시켜 카탈라제가 상처 부위에서 최대로 과발현되도록 하였다. 8주령의 C57BL/6 마우스의 등쪽 피부에 의도적으로 2개의 8x16 mm 전체층 2차 상처를 입혔다 (도 2). A. 대조군 Ad LacZ 바이러스로 처리된 측에 비해 Ad카탈라제 (AdCat) 바이러스로 처리된 측에서 카탈라제가 과발현됨을 보여주는 감염된 피부의 웨스턴 블롯. 블롯을 β-액틴으로 다시 프로빙하여 샘플들의 동등한 로딩을 나타냈다. B. 상처 봉합은 상처발생 후 지정된 날짜에 측정된 초기 상처의 면적 비율로서 나타냈다. 점선은 바이러스 감염 없이 염수 처리된 C57BL/6 마우스 (개방형 원형, ○)의 표준 치유 그래프를 나타낸다. AdCat 처리 (폐쇄형 삼각형, ▼); AdlacZ 처리 (폐쇄형 원형, ●); *p < 0.05, LacZ 처리된 측과 비교. C. 메이슨(Masson) 3색 염색은, 상처가 봉합된 날짜에 샘플링된 상처 부위에서 재생된 피부의 포르말린 고정된 파라핀 섹션 상에서 수행하였다. AdCat 측은 더 느린 봉합과 일치하는 피부의 불완전한 재생 (대조군과 비교)을 나타내는 더 넓은 HE 영역을 나타낸다. Es, 가피(eschar); G, 과립화 조직; HE.
도 3. 상처 봉합에서 국소적 H 2 O 2 : 투여량은 핵심적인 문제임. C57BL/6 수컷 마우스 (8주령)의 등쪽 피부에 2개의 8 x 16 mm 전체층 절개 상처 (inset)를 입혔다. 2개의 상처 각각을 H2O2 또는 염수로 국소적으로 처리하였다. A. 저-투여량의 H2O2 (1.25 마이크로몰/상처; 또는 0.025 ml의 0.15％ 용액/상처; 1일 1회, 0일 내지 4일, 개방형 원형, ○) 처리는 위약 처리된 (폐쇄형 원형, ●) 측에 비해 봉합을 적절히 촉진시켰다. *, p< 0.05. B. 저-투여량의 H2O2 처리는 상처 세균총에 대해 독성을 띠지 않았다. 표면 세균총의 측정에서, 상처 (상처 당 1.25 마이크로몰의 H2O2로 처리함, 개방형 막대, 또는 염수, 폐쇄형 막대)를 20초 동안 알기네이트-팁핑된 장치로 20초 동안 스와빙(swabing)하였다(상처발생 후 24 내지 48 시간 ). 표면 박테리아 양의 정량적 평가를 수행하였다. 심부 조직 상처 세균총의 경우, 상처발생 후 48 시간의 시점에 가피 조직을 제거하고, 가피 하의 상처층 조직을 샘플링하고, 박테리아 양의 정량적 평가를 수행하였다. 제시된 수치는 4회 관찰된 CFU의 평균±SD를 나타낸다. C. 고 투여량(높은, 25 마이크로몰/상처; 폐쇄형 원형, ●, 0.025 ml의 3％ 용액, 대 저 투여량, 1.25 마이크로몰/상처 또는 0.025 ml의 0.15％; 개방형 원형, ○, 0일 내지 4일에 1일 1회)의 H2O2는 봉합에 불리한 영향을 줌. *, p<0.05; 낮은 투여량의 H2O2 처리와 비교함. 더 높은 농도 (inset)의 H2O2 (62.5 마이크로몰/상처, 좌측 처리; 0.025 ml의 7.5％ 용액/상처, 0일에 1회) 처리는 괴사성 조직 손상 및 심각한 손상을 유발하여, 그 결과 마우스가 사망하게 된다.
도 4. 혈관신생 관련 유전자, 혈관화 및 상처-가장자리 혈액 흐름에 있어서 상처 및 H 2 O 2 -유도된 변화. 쌍으로 된 절제 상처 (도 2)를 위약 염수 또는 H2O2 (1.25 마이크로몰/상처, 0 내지 4일, 1일 1회)로 처리하였다. 상처-연부 조직을 상처발생 후 지시된 회수로 수집하였다. A. 위약-처리된 상처에서 혈관신생-관련된 mRNA 발현의 동역학을 나타내는 리보뉴클레아제 보호 분석 (RPA) B. 상처에 대한 저 투여량 H2O2 처리 (1.25 마이크로몰/상처, 1일 1회, 0 내지 4일)는 RPA를 사용하여 측정된 바와 같이 상처-유도된 Flt-1 및 VEGF mRNA 발현을 추가로 증대시켰다. C. 상처의 혈류 이미지화를 레이저 도플러(Laser Doppler) 혈류 이미지화 장 치를 사용하여 비-침입적으로 수행하였다. 치유 후 조직으로부터의 혈류 (우측 패널) 및 디지털 사진 (관심 영역; 좌측 패널)을 반영하는 이미지가 나타나 있다. 데이타, 즉 혈류의 평균 ± SD가 제시된다 (막대 그래프). 평균은 관심 영역 내의 픽셀에 대한 모든 명백한 혈류 값의 수학적 평균을 나타낸다. 결과는 처리가 향상된 혈관신생의 기능적 결과인 증가된 혈류를 생성함을 나타낸다. D. 상처발생 후 8일에 상처 연부를 절단하고, 혈관화를 CD31 (적색, 로다민) 및 DAPI (청색, 핵)에 대해 염색함으로써 예측하였다; H2O2 처리된 쪽 (하단)으로부터 얻어진 섹션 내의 보다 풍부한 CD31 적색 염색은 대조군 (상단)에 대해 보다 우수한 혈관화를 반영한다.
도 5. 미세혈관 내피 세포 및 상처 연부 조직에서의 병소 부착 키나제 (FAK)의 H 2 O 2 -유도된 인산화. 인간 미세혈관 내피 세포 (HMEC-1)를 지시된 투여량 및 기간으로 H2O2로 처리하였다. FAK의 인산화를 웨스턴 블롯 및 FAK에 대한 인산화 부위-특이적 항체를 이용하여 검출하였다. 천연 FAK 또는 β-액틴을 동일한 부하를 나타내도록 블롯팅하였다. A. FAK의 인산화 (Ty 925) 상태에 대한 다양한 투여량의 H2O2 처리의 효과. B. H2O2 (0.1 mM) 처리 후 HMEC 세포에서의 FAK의 부위-특이적 활성화 인산화의 동역학. C. 쌍으로 된 절제 상처 (도 2)를 위약 염수 또는 H2O2 (1.25 마이크로몰/상처)로 처리하였다. 상처-연부 조직을 상처발생 후 30분 동안 수집하였다. 상처 연부 조직의 FAK 인산화를 웨스턴 블롯을 이용하여 측정하 였다. 3가지 동물 (# 1 내지 # 3)으로부터의 데이타를 나타낸다.
도 6. MCP -1 및 p47phox 결함은 진피 치유를 손상시킨다. 2가지 절제된 상처 (도 2)를 8주령의 C57BL/6, MCP-1 또는 p47phox KO 마우스의 등 피부에 놓았다. 각각의 2가지 상처를 염수 또는 H2O2 (1.25 마이크로몰/상처; 0 내지 4일)로 처리하였다. A. 야생형 (C57 BL/6) 마우스의 위약-처리된 상처에서의 단핵구/대식세포 화학주성 단백질 관련 mRNA 발현의 동역학을 나타내는 RPA. B. 염수에서 상처 폐쇄부 (폐쇄형 원, ●) C57BL/6 및 H2O2의 처리된 상처 (폐쇄형 삼각형, ▼) 또는 염수 (개방형 원, ○) 처리된 MCP-1 KO 마우스는 최초 상처 면적의 백분율로 나타나 있다. * p < 0.05; C57BL/6 염수 처리와 비교. #, p < 0.05; KO 염수 처리와 비교시. C. 염수에서의 상처 폐쇄부 (폐쇄형 원, ●) C57BL/6 및 H2O2의 처리된 상처 (폐쇄형 삼각형, ▼) 또는 염수 (개방형 원, ○) 또는 p47 Phox KO 마우스는 최초 상처의 면적 백분율로 나타냈다. #, p < 0.05; KO 염수 처리와 비교시. D. 상처발생 후 18일에 폐쇄부 뒤의 상처 부위로부터 수거된 p47phox KO 마우스의 피부에서의 케라틴 14 (녹색 형광) 발현. H2O2-처리된 측에 비해 대조군 측에서의 케라틴 14의 보다 높은 발현은 대조군 측에서 치유가 진행됨을 지시하는 반면, H2O2-처리된 측은 정상 피부에 필적하는 케라틴 14 발현을 나타냄을 주목한다.
본 발명은 이제 보다 상세한 실시양태를 참고하여 기재될 것이다. 그러나, 본 발명은 여러가지 형태로 구체화될 수 있으며, 본원에서 설명된 실시양태에 제한되는 것으로 간주되어서는 안 된다. 오히려, 상기 실시양태는 본 개시사항을 철저하고 완전하게 하기 위해 제공되며, 당업자에게 본 발명의 범위를 완전히 전달할 것이다.
달리 정의되지 않는다면, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에서 본 발명의 상세한 설명에 사용된 용어는 단지 특정 실시양태를 기재하기 위함이며, 본 발명을 제한하려는 의도는 아니다. 본 발명의 상세한 설명 및 첨부된 특허청구범위의에 사용된 단수형 관사 ("a," "an," 및 "the")는 해당 내용이 명백히 달리 지시하지 않는다면 복수 형태도 또한 포함하는 것으로 의도된다. 본원에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허 및 다른 참고문헌은 그 전문이 참고로 도입된다.
달리 지시되지 않는다면, 명세서 및 특허청구범위에 사용된 성분, 반응, 조건 등의 양을 표현하는 모든 수는 모든 예에서 "약"이라는 용어에 의해 변형된 것으로서 이해되어야 한다. 따라서, 반대로 지시되지 않는다면, 하기 명세서 및 첨부된 특허청구범위에 설명된 모든 수치 파라미터는 본 발명에 의해 얻어지는 것으로 추구되는 바람직한 특성에 따라 다양할 수 있는 근사치이다. 최소한으로, 그리고 특허청구범위의 범위와 등가물인 원리의 적용을 제한하려는 시도가 아닌 것으로서, 각각의 수치 파라미터는 유의한 숫자와 통상적인 정상적인 접근법의 관점에서 간주되어야 한다.
본 발명의 넓은 범위를 설명하는 수치 범위 및 파라미터가 근사치라고 하더라도, 특정 실시예에서 설명된 수치값은 가능한 정확하게 보고된다. 그러나, 임의의 수치값은 본래 그의 각각의 시험 측정에서 발견된 표준 편차로부터 반드시 초래되는 특정 오차를 갖는다. 본 명세서 전반에 걸쳐 주어진 모든 수치 범위는 이러한 보다 넓은 수치 범위 내에 해당하는 모든 보다 좁은 수치 범위를, 이러한 좁은 수치 범위가 본원에 모두 명백히 기재된 것처럼 포함할 것이다.
본 발명은 일반적으로 병변 치유에서의 과산화수소 또는 그의 공급원의 용도에 관한 것이다. 일부 실시양태에서 치유율은 증가되며, 일부 실시양태에서 흉터화의 감소가 있다. 본 발명은 일반적으로 신체의 자연 복구 과정이 일어나는 살아있는 신체에 대한 임의의 손상을 치료하는데 사용될 수 있다. 본 발명은 특히 인간을 비롯한 포유동물과 같은 동물에서의 병변을 치료하는데 사용될 수 있다.
"병변"이라는 용어는 그의 일반적 의미로 모든 종류의 상처 및 손상을 포함하는 것을 의미하도록 사용된다. "상처"는 또한 그의 일반적 의미로 상처, 화상, 궤양 등을 포함하는 것을 의미하도록 사용된다. "상처" 및 "병변"은 해당 내용이 달리 구체적으로 지시하지 않는다면 본원에서 상호교환적으로 사용될 수 있고, 구별이 의도되지 않는다. 병변은 상처, 화상, 궤양 등일 수 있다. 병변/상처는 급성 또는 만성일 수 있다. 상처는 전체층, 즉 피부의 모든 층을 통과할 수 있거나, 일부층, 즉 피부의 전층보다 작게 통과할 수 있다. 급성 상처의 예로는 외과적 상처, 관통 상처, 적출 손상, 압궤 손상, 전단 손상, 화상 손상, 열상 및 교상을 들 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 만성 상처의 예로는 동맥성 궤양, 정맥성 궤양, 압박 궤양 및 당뇨병성 궤양과 같은 궤양을 들 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 물론, 급성 상처는 만성 상처가 될 수 있다.
치료하고자 하는 병변에 적용되는 조성물은 과산화수소 또는 과산화수소의 공급원을 함유한다. 병변에 적용되는 과산화수소의 농도는 통상적으로 사용되는 양보다 적으며, 일부 실시양태에서는 미생물 또는 다른 살아있는 세포에 대한 산화 효과를 생성하는 양보다 적고, 일부 실시양태에서는 접촉되는 조직에 대한 괴사 효과를 생성하는 양보다 적다. 일부 실시양태에서, 병변에 적용되는 과산화수소의 양은 병변의 제곱 센티미터 (㎠) 당 약 500 나노몰 (nmol) 내지 약 50 마이크로몰 (μmol)이다. 일부 실시양태에서, 병변에 적용되는 과산화수소의 양은 병변의 제곱 센티미터 (㎠) 당 약 5 μmol 내지 약 500 μmol이다.
병변에 적용되는 과산화수소의 양은 병변의 제곱 센티미터 (㎠) 당 약 500, 600, 700, 800 또는 900 nmol, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 약 10 μmol 또는 그 이상 내지 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40 또는 약 50 μmol 범위일 수 있다. 상기 양은 예를 들어 병변의 제곱 센티미터 (㎠) 당 1 내지 50, 1 내지 25, 1 내지 10 또는 1 내지 2 μmol 범위일 수 있다. 병변에 적용되는 과산화수소의 양은 병변의 제곱 센티미터 (㎠) 당 약 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 또는 약 100 μmol 또는 그 이상 내지 약 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 400 또는 약 500 μmol 범위일 수 있다. 상기 양은 예를 들어 병변의 제곱 센티미터 (㎠) 당 10 내지 500, 10 내지 250, 10 내지 100 또는 10 내지 20 μmol 범위일 수 있다.
병변에 적용되는 과산화수소의 농도는 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 또는 약 75 mM 내지 약 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 100 mM, 또는 그 이상 범위일 수 있다. 즉, 과산화수소의 농도는 약 10 내지 약 100 mM, 또는 약 25 내지 약 75 mM, 또는 약 40 내지 약 60 mM 범위일 수 있다.
과산화수소는 액상제, 겔제, 로션제, 크림제, 페이스트제 및 연고제를 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 형태의 비히클 또는 담체로 적용될 수 있다. 적용 수단은 과산화수소가 취하는 형태에 따라 다를 것이다. 액상제는 예를 들어 분무되거나 부어질 수 있고, 겔제, 로션제, 크림제, 페이스트제 및 연고제는 예를 들어 문지르거나 마사지될 수 있다. 과산화수소 전달을 위한 상기 및 다른 형태 및/또는 담체/비히클은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Science]과 같은 간행물 및 다른 유사한 간행물에 기재되어 있다.
전달 형태는 균질성, 예를 들어 과산화수소가 용액 내에 있는 형태일 수 있거나, 이질성, 예를 들어 과산화수소가 리포좀 또는 미소구 내에 함유되는 형태일 수 있다. 상기 형태는 즉각적인 효과를 생성할 수 있으며, 별법으로 또는 부가적으로 연장된 효과를 생성할 수 있다. 예를 들어, 리포좀 또는 미소구 또는 과산화수소의 연장된 방출을 제공하는 다른 유사한 수단은 과산화수소가 병변에 노출되는 기간을 연장시키는데 사용될 수 있다. 비-캡슐화된 과산화수소는 또한 즉각적인 효과를 위해 제공될 수 있다.
전달 형태는 또한 목적하는 시간 동안 과산화수소를 병변에 전달할 수 있는 장치의 형태를 취할 수 있다. 장치의 예로는 밴드, 외과적 드레싱, 거즈, 접착 스트립, 외과적 스테이플, 클립, 지혈기, 자궁내 장치, 봉합사, 투관침, 카테터, 튜브 및 임플란트를 들 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 임플란트의 예로는 환제, 펠렛, 로드, 웨이퍼, 디스크 및 정제를 들 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명에 따른 장치는 공지된 방법에 따라 제조될 수 있으며, 중합체성 물질을 포함하거나 이로부터 제조될 수 있다. 일부 예에서, 중합체성 물질은 흡수성 물질일 것이며, 다른 예에서는 비-흡수성 물질일 것이다. 물론 장치는 흡수성 및 비-흡수성 물질 둘다를 포함할 수 있다.
흡수성 물질은 합성 물질 및 비-합성 물질일 수 있다. 흡수성 합성 물질에는 셀룰로스계 중합체, 글리콜산 중합체, 메트아크릴레이트 중합체, 에틸렌 비닐 아세테이트 중합체, 에틸렌 비닐 알콜 공중합체, 폴리카프로락탐, 폴리아세테이트, 락티드 및 글리콜리드의 공중합체, 폴리디옥사논, 폴리글락틴, 폴리글레카프론, 폴리글리코네이트, 폴리글루코네이트 및 이들의 조합물이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 흡수성 비-합성 물질에 장선, 교원질, 대퇴근막, 젤라틴, 콜라겐 및 이들의 조합물이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
비흡수성 합성 물질에는 나일론, 레이온, 폴리에스테르, 폴리올레핀 및 이들의 조합물이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 비-흡수성 비-합성 물질에는 실크, 피부 실크, 면화, 린넨 및 이들의 조합물이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
상기 장치 및 담체/비히클의 조합도 고려된다. 예를 들어, 과산화수소 겔제 또는 연고제는 목적하는 위치에 과산화수소의 전달을 위한 붕대 또는 상처 드레싱내로 스며들 수 있다. 또다른 예로서, 이식가능 흡수성 장치는 과산화수소 용액을 적재하고, 목적하는 기간에 걸쳐 장치로부터 용액이 방출될 수 있다. 과산화수소를 전달하기 위해 사용되는 물리적 형태는 중요하지 않지만, 이러한 장치의 선택 또는 디자인은 당업자의 수준 내에서 충분하다.
과산화수소는 목적하는 표적 부위에 과산화수소 자체로서 전달될 수 있거나, 또는 전구체로서 전달될 수 있다. 예를 들어, 과산화물은 동물에 천연적으로 존재하는 과산화물 디스뮤타제에 의해 과산화수소로 변환된다. 따라서, 과산화수소는 과산화수소로 변환되는 과산화물을 투여함으로써 표적 부위로 전달될 수 있다. 과산화수소-유사 과산화물은 예를 들어 tert-부틸 히드로퍼옥시드를 전달함으로써 전달될 수 있다. 이들 유형의 공급원 모두는 과산화수소의 화학적 공급원으로 고려될 수 있다.
과산화수소는 또한 헤모글로빈과 산소가 반응하여 과산화물을 생성하고, 이어서 과산화물 디스뮤타제에 의해 과산화수소로 변환됨으로써 체내에서 자연적으로 형성된다. 과산화수소는 카탈라제라는 효소에 의해 체내에서 자연적으로 분해된다. 과산화수소는 표적 부위에 카탈라제 억제제를 투여함으로써 병변 부위에서의 축적을 가능하게 할 수 있다. 과산화수소는 추가 과산화물 디스뮤타제를 투여함으로써 축적을 유발할 수도 있다. 이 방식으로의 병변 부위에 대한 과산화수소의 전달은 효소 공급원에 의해 수행되는 것이 고려된다. 이는 외부 공급원에 반대되는 것으로 과산화수소의 천연 공급원으로 고려될 수도 있다.
과산화수소는 예를 들어 1) 글루코스 + 글루코스 옥시다제; 2) 크산틴 + 크산틴 옥시다제; 3) 하이포크산틴 + 크산틴 옥시다제; 및 4) 아스코르베이트 + 아스코르베이트 옥시다제를 비롯한 다수 반응의 부산물로서 생성될 수도 있다. 과산화수소 농도는 rac1 및 rac2, NADPH 옥시다제, 및 과산화물 디스뮤타제의 과발현에 의해 체내에서 증가될 수도 있다. 이들 모두는 과산화수소의 효소적 공급원으로 고려되며, 본 발명의 범위 내에 속한다.
과산화수소는 목적하는 표적 부위에 1회 이상 전달된다. 일부 실시양태에서, 과산화수소는 표적 부위에 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10회 이상 전달된다. 매 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 또는 24시간 이상만큼 종종 전달될 수 있다. 반복되는 투여가 바람직한 경우에, 장치 또는 다른 담체는 목적하는 횟수로 과산화수소의 투여량을 방출하기 위해 "프로그래밍"될 수 있다. 예를 들어, 미세구 제제는 투여에 대한 즉각적 효과를 위한 비캡슐화된 과산화수소; 24시간에서의 제2 투여량을 전달하는 캡슐화된 성분; 및 48시간에서의 제3 투여량을 전달하는 캡슐화된 성분을 포함할 수 있다. 치료 전략은 실시자에게 위임하고; 장치, 담체 등의 디자인은 당업자 수준에 속한다.
본 발명의 실무에서 다른 조건을 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 병변의 표적 영역이 충분히 산화되는 것을 확실하게 하는 것이 바람직할 수 있는데; 일반적으로, 대기 산소가 존재하는 것으로 충분하다. 목적 수준의 습기 및 특정 온도를 유지하는 것이 바람직할 수도 있는데; 일부 실시양태에서, 가온 습한 환경이 바람직하다. 요구되지는 않지만, 멸균 환경을 수립 또는 유지하는 것이 바람직할 수도 있다.
또한, 제제에서 다른 치료적으로 유익한 제제를 포함하는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 비히클 또는 담체는 처리되는 영역에서 목적하는 습기 수준을 유지하기 위해 보습제(humectant 또는 moisturizer)를 포함할 수도 있다. 다른 가능성에는 다른 목적하는 효과를 제공하는 약물, 예컨대 마취제 또는 항생제를 포함하는 것이 있다. 또한, 상기 가능성은 비제한적이며, 실시자에게 위임된다.
하기 실시예는 본 발명을 더욱더 명확하게 기재하고, 설명하기 위해 제공된다
실시예 1 : 상처-부위에서의 ROS 의 존재.
상처 체액 중의 H 2 O 2 농도. 상처 절개부를 통해 5주령 C57BL/6 마우스의 등부에 헌터/쉴링 와이어 메쉬 실린더를 피하 이식하였다. 5일 후에, 상처 체액을 수집하고, 문헌 [Liu and Zweier, Free Radic Biol Med. 2001 Oct 1;31 (7):894-901]에 기재된 바와 같은 실시간 전기화학 기술로 체액 중의 항정-상태 H2O2 농도를 측정하였다. PBS에서 기준값을 정하였다. 결과를 도 1A에 나타낸다.
상처 체액 (0.15 ml)을 화살표로 나타낸 시간에서 DPBS (1 ml)에 첨가하였다. 표준 곡선을 사용하여 상처 체액에서 측정한 H2O2의 농도는 1.1 μM이었다. 이 결과는 측정가능한 과산화수소를 나타내지 않은 혈장의 측정과는 대조적이다.
상처-연부에서의 H 2 O 2 검출.
과산화수소는 스핀-트랩 용액으로 노출된 상처를 세정하여 창강 중의 과산화수소의 라디칼 풋프린트(footprint)의 검출에 의해 상처-연부에서 시험하였다. 상처발생 24시간 후에, 상기 부위를 스핀 트랩, DMPO (5,5-디메틸-피롤린-1-옥실)로 처리하였다. 대조군 데이타를 얻기 위해, 새롭게 가한 상처에 동일한 스핀-트랩 처리를 가하였다. 15분 후에, 스핀 트랩 용액을 창강으로부터 추출하고, 전자 상자성 공명 (EPR) 분석 처리하였다.
EPR 측정을 X-밴드에서 TM 110 캐비티(cavity)로 가동하는 브루커(Bruker) ER 300 EPR 분광계로 수행하였다. 도 1B는 상처 세정물로부터 측정된 DMPO 부가물의 EPR 스펙트럼을 나타낸다. 스펙트럼은 O시간 (허위 대조군, 상부 패널) 및 상처발생 12시간 후에 (하부 패널) 창강으로부터 수집한 DMPO (100 mM, 0.1 ml) 유출물로부터 얻었다. 하부 패널의 스펙트럼은 하기 커플링 상수를 갖는 DMPO-OH의 스펙트럼으로 확인되었다: aN=14.90 G, aH=14.90. 데이타 획득 파라미터는 다음과 같았다: 마이크로파 주파수, 9.8682 GHz; 스윕 폭, 100 G; 마이크로파 전력, 20 mW; 모듈레이션 진폭, 0.5 G; 모듈레이션 주파수, 100 kHz; 시간 상수 80 msec.
허위-처리 스핀 트랩 용액으로부터의 스펙트럼이 임의의 두드러진 스핀 부가물을 나타내지 않았지만, 상처 12시간 후 상처 세정물로부터 얻은 스펙트럼은 명확한 1:2:2:1 사중항 패턴을 나타냈다. 개개 성분은 시뮬레이션에 의한 DMPO-OH (히드록실 라디칼 부가물)로서 확인되었다.
정상 피부 및 상처-연부 조직에서의 과산화물 생성. NADPH 옥시다제 활성의 기능적 결과로서, O2 - 생성은 디히드로에티듐 (DHE)을 ROS-민감성 형광 염료로서 사용하여 조직 동결절편으로부터 종종 측정한다. 간략하게는, 상처-연부 샘플을 상처발생 12시간 후에 수확하고, OCT에서 즉시 동결하였다. 새로운 30 ㎛ 섹션을 DHE (0.01 mM, 20분, 20O x)와 인큐베이션하여 O2 -를 검출하고 공초점 현미경에 의해 시각화하였다. 결과를 도 1C에 나타낸다.
이 접근법을 이용하여, 상처-조직의 연부가 새롭게 슬라이싱된 정상 피부에 비해 매우 더 현저하게 염색되었음을 명확하게 관찰하였다. 이 발견은 상처 부위에 ROS가 풍부하다는 것을 추가로 뒷받침한다.
이들 실험은 함께 과산화수소를 포함하는 ROS가 상처-치유 조직에 존재한다는 것을 명확하게 입증한다.
실시예 2: 상처-치유 상의 과잉 카탈라제의 영향.
과산화수소가 상처-치유 조직에 존재하는 것으로 나타나기 때문에, 그의 농도가 감소가 상처 치유를 지연시키는지 측정하는 실험을 수행하였다. 카탈라제는 과산화수소를 가수분해하는 천연 효소이어서, 시험하고자 하는 상처내로 도입하였다.
간략하게는, 아데노바이러스 벡터를 사용하여 카탈라제를 상처 내로 도입하여 과발현시켰다. 이 벡터는 뮤린 피부에서 고효율의 과발현을 가능하게 하였다. 상처발생될 피부에 상처발생 5일 전에 카탈라제 또는 LacZ (대조군) 아데노바이러 스 (1011 pfu)로 1회 피하 주사하여 상처 부위에서 카탈라제의 최대 과발현을 가능하게 하였다. 2개의 8 x 16 mm 전체-두께 제2 의도적 상처를 8주령 C57BL/6 마우스의 등 피부 상에 유발시켰다.
도 2A는 대조군 Ad-LacZ 바이러스로 처리된 측에 비해 Ad-카탈라제 (AdCat) 바이러스로 처리한 측에서 카타라라제가 과발현됨을 보여주는 감염된 피부의 웨스턴 블롯을 나타낸다. 샘플의 동일한 적재를 나타내는 β-액틴으로 블롯을 다시 프로빙하였다.
도 2B는 상처발생 후 지정된 날짜에 측정된 초기 상처의 면적 비율로서 상처 봉합을 나타낸다. 점선은 바이러스 감염 없는 염수 처리된 C57BL/6 마우스 (개방형 원, ○)의 표준 치유 그래프를 나타낸다. AdCat 처리 (폐쇄형 삼각형, ▼); AdlacZ 처리 (폐쇄형 원, ●); *p < 0.05, LacZ 처리된 측과 비교함.
도 2C는 상처 둘다가 봉합될 때에 샘플링된 상처 부위에서 재생된 피부의 포르말린 고정된 파라핀 섹션 상에서 수행한 매이슨 3색 염색을 나타낸다. AdCat 부위는 더 느린 봉합과 일치하는 피부의 불완전한 재생 (대조군과 비교)을 나타내는 더 넓은 HE 영역을 나타낸다. Es, 가피; G, 과립화 조직; HE, 과다증식성 상피세포.
실시예 3: 상처 봉합에 대한 과산화수소의 효과
과산화수소가 상처 치유시에 존재하며 (실시예 1), 상처 치유시 과산화수소의 부재가 치유 과정을 감쇠시킨다는 것 (실시예 2)이 명백하게 입증되어 있기 때 문에, 첨가된 과산화수소의 효과를 조사하는 실험을 수행하였다.
요약하자면, C57BL/6 수컷 마우스 (8주령)의 등쪽 피부 상에 2개의 8 x 16 mm의 전체층 절개 상처 (도 3, 삽입도)를 입혔다. 2개의 상처 각각을 H2O2 또는 염수로 국소처리하였다.
도 3A는 저-투여량의 H2O2 (1.25 마이크로몰/상처; 또는 0.025 ml의 0.15% 용액/상처; 1일 1회, 0일 내지 4일, 개방형 원, ○) 처리는 위약 처리된 (폐쇄형 원, ●) 측에 비해 중간 정도로 봉합이 촉진되었음을 나타낸다. *, p< 0.05.
도 3B는 저 투여량 H2O2 처리가 상처 세균총에 영향을 미치지 않음을 나타낸다. 표면 세균총의 측정에서, 상처 (상처 당 1.25 마이크로몰ㅇ,; H2O2로 처리함, 개방형 막대, 또는 염수, 폐쇄형 막대)를 20초 동안 알기네이트-끝처리된 면봉으로 스와빙하였다 (상처발생 후 24 시간 내시 48 시간). 표면 박테리아 양의 정량 평가를 수행하였다. 심부 조직 상처 세균총에 대해, 상처발생 후 48 시간의 점에 가피 조직을 제거하고, 가피 하의 상처층 조직을 샘플링하고, 박테리아 양의 정량 평가를 수행하였다. 나타낸 값은 4개의 관찰을 CFU의 평균±SD로 나타냈다.
도 3C는 고 투여량 (고, 25 마이크로몰/상처; 폐쇄형 원, ●, 0.025 ml의 3% 용액, 대 저 투여량, 1.25 마이크로몰/상처 또는 0.025 ml의 0.15%; 개방형 원, ○, 0일 내지 4일에 1일 1회)의 H2O2가 봉합에 불리하게 작용함을 나타낸다. (*, p< 0.05; 저 투여량의 H2O2 처리와 비교함). 보다 고 농도 (삽입도)의 H2O2 (62.5 마이 크로몰/상처, 좌측 부위 처리; 0.025 ml의 7.5% 용액/상처, 0일에 1회) 처리는 괴사성 조직 손상 및 심각한 손상을 유발하여, 그 결과 마우스가 사망하게 된다.
실시예 4: 혈관신생 관련 유전자, 혈관화 및 상처-연부 혈액 흐름에 있어서 상처 및 H 2 O 2 -유도된 변화.
저 투여량의 과산화수소가 상처 치유 속도를 증가시키는 메카니즘을 연구하기 위해 추가 실험을 수행하였다.
쌍으로 된 절제 상처를 위약 염수 또는 H2O2 (1.25 마이크로몰/상처, 0일 내지 4일, 1일 1회)로 처리하였다. 상처-연부 조직을 상처발생 후 지시된 회수로 수집하였다. 도 4A는 위약-처리된 상처에서 혈관신생-관련 mRNA 발현 속도를 나타내는 리보뉴클레아제 보호 분석 (RPA)을 나타낸다. 도 4B는 RPA를 사용하여 입증된 바와 같이 상처 추가 증가된 상처-유도된 Flt-1 및 VEGF mRNA 발현에 대해 저-투여량의 H2O2 처리 (1.25 마이크로몰/상처, 1일 1회, 0일 내지 4일) 양을 나타낸다.
도 4C는 레이저 도플러 혈류 영상화 장치를 이용하여 비-침습적으로 수행한 상처의 혈류 영상화를 나타낸다. 후-치유 조직으로부터의 혈액 흐름을 반영하는 영상 (우측 패널) 및 디지털 사진 (관심 영역; 좌측 패널)을 나타낸다. 혈액 흐름 데이타는 평균 ± SD (막대 그래프)로 나타냈다. 상기 평균은 관심 영역 내의 픽셀에 대해 모든 유효한 혈액 흐름 값의 산술적 평균을 나타낸다. 결과는 상기 처리가 증대된 혈관신생의 기능적 결과인 증가된 혈액 흐름을 야기시키는 것으로 나타났다.
도 4D는 상처발생 후 8일의 결과를 나타낸다. 상처-연부를 동결절편화하여 CD31 (적색, 로다민) 및 DAPI (청색, 핵)를 염색함으로써 혈관화를 평가하였으며; H2O2 처리부로부터 얻은 단면 (하단)에서 CD31 적색 염색이 더 많다는 것은 대조군 (상단)에 비해 더 많이 혈관화되었음을 반영한다.
실시예 5: 미세혈관 내피 세포 및 상처-연부 조직에서의 포컬 어드히전 키나아제 (focal adhesion kinase; FAK)의 H 2 O 2 -유도된 인산화.
인간 미세혈관 내피 세포 (HMEC-1)를 나타낸 투여량 및 기간에 대해 H2O2로 처리하였다. 웨스턴 블롯 및 FAK에 대한 인산화 부위-특이적 항체를 이용하여 FAK의 인산화를 검출하였다. 동일한 로딩량을 나타내기 위해 천연 FAK 또는 β-액틴을 블롯팅하였다.
도 5A는 FAK의 인산화 (Ty 925) 상태에 대한 다양한 투여량의 H2O2 처리 효과를 나타낸다. 도 5B는 H2O2 (0.1 mM) 처리에 따른 HMEC 세포에서의 FAK의 부위-특이적 활성화 인산화의 속도를 나타낸다.
도 5C에서, 쌍으로 된 절제 상처를 위약 염수 또는 H2O2 (1.25 마이크로몰/상처)로 처리하였다. 상처-연부 조직을 상처발생 후 30분 동안 수집하였다. 웨스턴 블롯을 이용하여 상처 연부 조직의 FAK 인산화를 입증하였다. 3종의 동물로부터의 데이타 (#1 내지 #3)를 나타냈다.
실시예 6: MCP-1 및 p47phox 결핍은 진피 치유를 손상시킨다.
대식세포를 생성시키는 과산화수소를 유인함으로써, 단핵구/대식세포 화학유인물질/화학주성 단백질-1 (MCP-1)은 상처에 대한 급성 염증성 반응의 진행 및 소실에 중요한 역할을 한다. P47phox는, ROS 생성에 관여하는 NADPH 옥시다제의 조절 서브유닛이다. ROS 생성 및 상처 치유에서의 이들 인자의 중요성 때문에, 이들 인자를 결손시킨 동물에서 과산화수소가 상처에 어떻게 영향을 미치는지를 조사하는 시험을 수행하였다.
요약하자면, 8주령의 C57BL/6, MCP-1 또는 p47phox 녹아웃(knockout) 마우스의 등쪽 피부에 2개의 절제 상처를 냈다. 2개의 상처 각각을 염수 또는 H2O2 (1.25 마이크로몰/상처; 0일 내지 4일)로 처리하였다.
도 6A는 야생형 (C57 BL/6) 마우스의 위약-처리된 상처에서의 단핵구/대식세포 화학주성 단백질 관련 mRNA 발현 동역학을 나타내는 RNase 보호 분석을 나타낸다. 도 6B는 C57BL/6의 염수 (폐쇄형 원, ●) 처리된 상처, 및 H2O2 (폐쇄형 삼각형, ▼) 또는 염수 (개방형 원, ○) 처리된 MCP-1 녹아웃 마우스에서의 상처 봉합이 최초 상처의 면적 백분율로 나타냈음을 나타낸다. (* p< 0.05; C57BL/6 염수 처리와 비교하여. #, p< 0.05; 녹아웃 염수 처리와 비교). 도 6C는 C57BL/6의 염수 (폐쇄형 원, ●) 처리된 상처, 및 H2O2 (폐쇄형 삼각형, ▼) 또는 염수 (개방형 원, ○) 또는 p47phox 녹아웃 마우스에서의 상처 봉합이 최초 상처의 면적 백분율로 나타냈음을 나타낸다. *p< 0.05; C57BL/6 염수 처리에 비교하였음. #, p< 0.05; KO 염수 처리에 비교하였음.
케라틴 14는 표피 분화 및 재생을 지지하며, 그의 발현은 진피 상처에 의해 유발된다. 도 6D는 상처발생 후 제18일째의 봉합 후의 상처 부위로부터 수확된 p47phox 녹아웃 마우스의 피부에서의 케라틴 14 (녹색 형광) 발현을 나타낸다. H2O2-처리된 측에 비해 대조군 측에서의 케라틴 14의 보다 높은 발현은 대조군 측에서 치유가 진행되며 불완전함을 나타내는 반면, H2O2-처리된 측은 정상 피부에 픽적하는 케라틴 14 발현을 나타내면서 완전 치유를 나타낸다.
본 발명의 다른 실시양태는 본원에 개시된 본 발명의 명세서 및 실시를 고려하여 당업자에게 명백할 것이다. 명세서 및 실시예는 하기 청구의 범위에 나타나는 바와 같이 본 발명의 진정한 범위 및 취지와 함께 단지 예시하는 것으로 고려해야 한다.

Claims (37)

  1. 병변 제곱 센티미터 당 과산화수소 약 500 나노몰 내지 약 50 마이크로몰을 병변에 적용하는 것을 포함하는, 포유동물에서 병변 치유율을 증가시키는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 병변 제곱 센티미터 당 과산화수소 약 1 내지 약 50 마이크로몰을 적용하는 것을 포함하는 방법.
  3. 제2항에 있어서, 병변 제곱 센티미터 당 과산화수소 약 1 내지 약 10 마이크로몰을 적용하는 것을 포함하는 방법.
  4. 제3항에 있어서, 병변 제곱 센티미터 당 과산화수소 약 1 내지 약 2 마이크로몰을 적용하는 것을 포함하는 방법.
  5. 제1항에 있어서, 과산화수소가 효소적 공급원 및 화학적 공급원으로부터 선택되는 공급원으로 병변에 적용되는 것인 방법.
  6. 제5항에 있어서, 과산화수소 공급원이 화학적 공급원이며, 상기 공급원이 과산화수소인 방법.
  7. 약 12 시간 내지 약 24 시간의 기간에 걸쳐 병변 제곱센티미터 당 과산화수소 약 500 나노몰 내지 약 50 마이크로몰의 비율로 과산화수소를 병변에 적용하는 것을 포함하는, 포유동물에서 병변 치유율을 증가시키는 방법.
  8. 제7항에 있어서, 과산화수소가 약 1 내지 약 10 마이크로몰의 비율로 적용되는 것인 방법.
  9. 제7항에 있어서, 과산화수소가 제약상 허용되는 조성물로 적용되는 방법.
  10. 제9항에 있어서, 제약상 허용되는 조성물이 겔제, 로션제, 연고제, 크림제, 페이스트제 및 액상제로부터 선택되는 형태인 방법.
  11. 제7항에 있어서, 과산화수소가 제약상 허용되는 장치로 적용되는 방법.
  12. 제11항에 있어서, 제약상 허용되는 장치가 붕대, 외과적 드레싱, 거즈, 접착 스트립, 외과적 스테이플, 클립, 지혈기, 자궁내 장치, 봉합사, 투관침, 카테터, 튜브 및 임플란트로부터 선택되는 것인 방법.
  13. 제12항에 있어서, 임플란트가 환제, 펠렛, 로드(rod), 웨이퍼, 디스크 및 정제로부터 선택되는 것인 방법.
  14. 제11항에 있어서, 장치가 중합체성 물질을 포함하는 것인 방법.
  15. 제14항에 있어서, 중합체성 물질이 흡수성 물질을 포함하는 것인 방법.
  16. 제15항에 있어서, 흡수성 물질이 합성 물질을 포함하는 것인 방법.
  17. 제16항에 있어서, 합성 물질이 셀룰로스성 중합체, 글리콜산 중합체, 메타크릴레이트 중합체, 에틸렌 비닐 아세테이트 중합체, 에틸렌 비닐 알콜 공중합체, 폴리카프로락탐, 폴리아세테이트, 락티드와 글리콜리드의 공중합체, 폴리디옥사논, 폴리글락틴, 폴리글레카프론, 폴리글리코네이트, 폴리글루코네이트 및 이들의 조합물로부터 선택되는 것인 방법.
  18. 제15항에 있어서, 상기 흡수성 물질이 비-합성 물질을 포함하는 것인 방법.
  19. 제18항에 있어서, 상기 비-합성 물질이 장선(catgut), 교원질(cargile membrane), 대퇴근막, 젤라틴, 콜라겐 및 이들의 조합물로부터 선택되는 것인 방법.
  20. 제14항에 있어서, 중합체성 물질이 비흡수성 물질을 포함하는 것인 방법.
  21. 제20항에 있어서, 비흡수성 물질이 합성 물질을 포함하는 것인 방법.
  22. 제21항에 있어서, 합성 물질이 나일론, 레이온, 폴리에스테르, 폴리올레핀 및 이들의 조합물로부터 선택되는 것인 방법.
  23. 제20항에 있어서, 비흡수성 물질이 비-합성 물질을 포함하는 것인 방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 비-합성 물질이 실크, 피부 실크, 면화, 린넨 및 이들의 조합물로부터 선택되는 것인 방법.
  25. 제7항에 있어서, 병변이 상처, 궤양 및 화상으로부터 선택되는 것인 방법.
  26. 제25항에 있어서, 상처가 급성 상처 및 만성 상처로부터 선택되는 것인 방법.
  27. 제25항에 있어서, 상처가 전체층 상처 및 일부층 상처로부터 선택되는 것인 방법.
  28. 제26항에 있어서, 급성 상처가 외과적 상처, 관통 상처, 적출 손상, 압궤 손 상, 전단 손상, 화상 손상, 열상 및 교상으로부터 선택되는 것인 방법.
  29. 제26항에 있어서, 만성 상처가 동맥성 궤양, 정맥성 궤양, 압박 궤양 및 당뇨성 궤양으로부터 선택되는 것인 방법.
  30. 과산화수소 및 담체 물질을 포함하는 장치로서, 약 12 시간 이상의 기간 동안 상기 과산화수소를 방출하고, 장치로부터 방출된 상기 과산화수소가 병변을 괴사시키기에는 불충분한 농도인, 병변에 투여하기 위한 과산화수소 전달 장치.
  31. 제30항에 있어서, 12 시간 동안 상처 cm2 당 과산화수소 약 0.5 내지 50 μmol로부터 24 시간 동안 상처 cm2 당 과산화수소 약 0.5 내지 50 μmol을 방출하는 과산화수소 전달 장치.
  32. 제31항에 있어서, 담체 물질이 중합체성 물질을 포함하는 것인 과산화수소 전달 장치.
  33. 제32항에 있어서, 중합체성 물질이 흡수성 물질을 포함하는 것인 과산화수소 전달 장치.
  34. 제32항에 있어서, 중합체성 물질이 합성 물질을 포함하는 것인 과산화수소 전달 장치.
  35. 과산화수소 및 제약상 허용되는 담체를 포함하고, 단위 투여량이 상처 cm2 당 과산화수소 약 0.5 내지 약 50 μmol를 포함하는, 포유동물의 병변 치료용 조성물.
  36. 제35항에 있어서, 담체가 겔 물질을 포함하는 것인 조성물.
  37. 제35항에 있어서, 담체가 액상 물질을 포함하는 것인 조성물.
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