MXPA06014945A - Metodos y composiciones para la cicatrización de heridas - Google Patents

Abstract

La invención se refiere a los métodos, dispositivos y composiciones para tratar lesiones en animales, que comprenden peróxido de hidrógeno en concentraciones que son menores que las utilizadas convencionalmente. Los métodos, dispositivos y composiciones proporcionan una velocidad aumentada de curación de heridas.

Description

MÉTODOS Y COMPOSICIONES PARA LA CICATRIZACIÓN DE HERIDAS DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta solicitud reclama el beneficio de prioridad de la Solicitud de Utilidad de los Estados Unidos No. 10/871.158, presentada el 18 de junio de 2004, cuya descripción se incorpora en su totalidad a la presente mediante referencia . La presente invención concierne de modo general a métodos y composiciones para tratar heridas .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Durante años se ha considerado que las especies reactivas de oxígeno (ROS) son primordialmente dañinas para las células vivas. De hecho, ROS tales como el peróxido de hidrógeno y el ozono se han usado como desinfectantes por su potente efecto oxidante. Estos efectos oxidantes son inespecífieos; además de la destrucción de microorganismos no deseados, se produce un considerable daño colateral. De este modo, en las dosis tradicionalmente usadas para desinfección, el peróxido de hidrógeno es destructivo para el tejido vivo. Sin embargo, se ha descubierto que en dosis más bajas, el peróxido de hidrógeno tiene sorprendentes efectos en el proceso de cicatrización. La presente invención concierne al uso de dosis bajas de peróxido de hidrógeno por sus efectos sobre la cicatrización de heridas.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona métodos para aumentar la velocidad de cicatrización de lesiones en mamíferos, que comprenden aplicar a la lesión entre aproximadamente 500 nanomoles y aproximadamente 50 micromoles de peróxido de hidrógeno por centímetro cuadrado de lesión. En ciertas realizaciones, los métodos comprenden aplicar entre aproximadamente 1 y 50, o entre aproximadamente 1 y 10, o entre aproximadamente 1 y 2 micromoles de peróxido de hidrógeno por centímetro cuadrado de lesión. El peróxido de hidrógeno se puede aplicar a la lesión en una fuente elegida, por ejemplo, entre fuentes enzimáticas y fuentes químicas. En algunas realizaciones, la fuente de peróxido de hidrógeno es química y la fuente es peróxido de hidrógeno.

La invención también proporciona métodos para aumentar la velocidad de cicatrización de la lesión en un mamífero, que comprenden aplicar a la lesión peróxido de hidrógeno en una concentración entre aproximadamente 500 nanomoles y aproximadamente 50 micromoles de peróxido de hidrógeno por centímetro cuadrado de lesión durante un período que dura entre aproximadamente 12 horas y aproximadamente 24 horas . En algunas realizaciones, el peróxido de hidrógeno se aplica en una concentración entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10 micromoles. El peróxido de hidrógeno se puede aplicar en una composición adecuada para uso farmacéutico, que puede estar en una forma seleccionada, por ejemplo, entre geles, lociones, ungüentos, cremas, pastas y líquidos. El peróxido de hidrógeno se puede aplicar en un dispositivo adecuado para uso farmacéutico, incluyendo, sin limitación, vendajes, apositos quirúrgicos, gasas, tiras adhesivas, grapas quirúrgicas, clips, hemostáticos, dispositivos intrauterinos, suturas, trocares, catéteres, tubos e implantes. Los implantes incluyen, sin limitación, pildoras, pélets, cilindros, obleas, discos y comprimidos. El dispositivo puede comprender un material polimérico, que puede comprender un material absorbible. En algunas realizaciones el material absorbible comprende un material sintético. Los materiales sintéticos se pueden seleccionar entre polímeros celulósicos, polímeros de ácido glicólico, polímeros de metacrilato, polímeros de etilen vinil acetato, copolímeros de etilen vinil alcohol, policaprolactam, poliacetato, copolímeros de lacturo y glicoluro, polidioxanona, poliglactina, poliglecaprona, poligliconato, poligluconato y combinaciones de estos polímeros. En algunas realizaciones, el material absorbible comprende un material no sintético. El material no sintético se puede seleccionar entre catgut, membrana de cargile, fascia lata, gelatina, colágeno y combinaciones de estos materiales. El dispositivo puede comprender un material polimérico, que puede comprender un material no absorbible. En algunas realizaciones, el material no absorbible comprende un material sintético. Los materiales sintéticos se pueden seleccionar entre nailon, rayones, poliésteres, poliolefinas y combinaciones de estos materiales. En algunas realizaciones, el material no absorbible comprende un material no sintético. Los materiales no sintéticos se pueden elegir entre seda, seda dérmica, algodón, lino y combinaciones de estos materiales. El método se puede usar para tratar lesiones elegidas entre heridas, úlceras y quemaduras. Las heridas se pueden seleccionar entre heridas agudas y heridas crónicas. Las heridas se pueden seleccionar entre heridas de espesor total y heridas de espesor parcial . Las heridas agudas se pueden seleccionar, por ejemplo, entre heridas quirúrgicas, heridas penetrantes, lesiones por desgarro, lesiones por aplastamiento, lesiones por cortes, lesiones por quemaduras, laceraciones y heridas por mordeduras. Las heridas crónicas se pueden seleccionar, por ejemplo, entre úlceras arteriales, úlceras venosas, úlceras por compresión y úlceras diabéticas. La presente invención también proporciona un dispositivo para administrar peróxido de hidrógeno en una lesión, que comprende peróxido de hidrógeno y un material de vehículo, donde el dispositivo libera dicho peróxido de hidrógeno durante un período de por lo menos aproximadamente 12 horas, donde el peróxido de hidrógeno liberado por el dispositivo está en una concentración insuficiente para producir necrosis de la lesión. En algunas realizaciones, el dispositivo libera entre aproximadamente 0,5 y 50 µp??? de peróxido de hidrógeno/cm2 de herida/12 horas y aproximadamente de 0,5 a 50 µp??? de peróxido de hidrógeno/cm2 de herida/24 horas. El material de vehículo puede comprender un material polimérico. En algunas realizaciones, el material polimérico comprende un material absorbible. En algunas realizaciones, el material polimérico comprende un material sintético.

La invención también proporciona una composición para tratar lesiones en mamíferos que comprende: peróxido de hidrógeno y un vehículo adecuado para uso farmacéutico, donde la dosis unitaria de la composición comprende entre aproximadamente 0,5 y 50 µp??? de peróxido de hidrógeno/cm2 de herida. En algunas realizaciones, el vehículo comprende un material en forma de gel y en algunas realizaciones el vehículo comprende un material líquido. Otros objetos y ventajas de la invención se expondrán en parte en la descripción siguiente y en parte resultarán evidentes a partir de la descripción o podrán conocerse con la práctica de la invención. Los objetos y ventajas de la invención serán realizados y obtenidos por medio de los elementos y combinaciones indicados particularmente en las reivindicaciones adjuntas. Debe entenderse que tanto la descripción general precedente como la siguiente descripción detallada son únicamente de tipo ejemplificativo y explicativo, y no restringen la invención de acuerdo con las reivindicaciones .

DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figura 1. Presencia de ROS en el sitio de la herida. A. Concentración de H202 en el fluido de la herida. Se implantaron cilindros de malla de alambre de Hunt/Schilling en el tejido subcutáneo del dorso de ratones C57BL/6 de 5 semanas de edad por medio de una incisión. Al cabo de 5 días, se recolectó el fluido de la herida y se medió la concentración de H202 en estado estacionario en el líquido usando una técnica electroquímica en tiempo real, como se describe más adelante en la presente. La muestra de línea de base se recolectó en PBS . Se agregó fluido de la herida (0,15 mi) a DPBS (1 mi) en el momento indicado con una flecha. Usando una curva de estándar, la concentración de H202 determinada en el fluido de la herida fue de 1,1 µ?. B. Espectros EPR del aducto DMPO medido en el líquido de enjuague de la herida. Los espectros se obtuvieron de los efluentes del DPMO (100 mM, 0,1 mi) recolectado de la cavidad de la herida a las 0 h (control simulado, panel superior) y 12 h después de la herida (panel inferior) . Los espectros en el panel inferior se identificaron como los del DMPO-OH con las siguientes constantes de acoplamiento: aN = 14,90 G; aH = 14,90. Los parámetros de adquisición de datos fueron: frecuencia de microondas 9,8682 GHz ; ancho de barrido 100 G; potencia de microondas 20 mW; amplitud de modulación 0,5 G; frecuencia de modulación 100 kHz; constante de tiempo 80 mseg. C. Producción de superóxido en piel normal y en tejido del borde de la herida. Las muestras del borde de la herida se cosecharon a las 12 h de practicada la herida y se las congeló inmediatamente en OCT. Se incubaron cortes frescos de 30 micrones con DH (0,01 mM, 20 min. , 200x) para detectar 02 y se los observó con microscopio confocal . Figura 2. La sobreexpresion de catalasa reduce la cicatrización. La piel donde se iba a practicar la herida se inyectó una vez con catalasa y adenovirus LacZ (control) (1011 pfu) 5 días antes de practicar la herida para permitir la máxima sobreexpresion de catalasa en el sitio de la herida. Se colocaron dos heridas de espesor completo de 8 x 16 mm con cicatrización por segunda intención en la piel del dorso de ratones C57BL/6 de 8 semanas de edad (Figura 2) . A. Western blot de la piel infectada mostrando la sobreexpresion de catalasa en el lado tratado con virus AdCatalasa (AdCat) en comparación con el lado tratado con virus Ad LacZ de Control . Las transferencias se investigaron nuevamente con ß actina para demostrar la carga igual de las muestras. B. Los cierres de la herida se muestran como porcentaje del área inicial de la herida, determinada el día indicado después de practicar la herida. La línea punteada representa la curva de cicatrización estándar de los ratones C57BL/6 tratados con solución fisiológica (círculos vacíos o) sin infección viral. Tratamiento AdCat (triángulos llenos T) ; tratamiento AdLacZ (círculos llenos ·) ; *p < 0,05 en comparación con el lado tratado con LacZ. C. Se tiñeron con tinción tricrómica de Masson cortes de piel regenerada en el sitio de la herida fijadas con formalina y obtenidas el día de cierre de ambas heridas. El lado AdCat muestra una región HE más amplia, indicativa de regeneración incompleta (vs . control) de la piel, consistente con un cierre más lento. Es: escara; G: tejido de granulación; HE. Figura 3. H202 tópico en el cierre de la herida: la dosis es un aspecto clave. Se colocaron dos heridas de espesor completo de 8 x 16 mm obtenidas por disección (recuadro) en la piel dorsal de ratones macho C57BL/6 (8 semanas de edad) . Cada una de las dos heridas fue tratada con H202 o solución fisiológica. A. Dosis baja de H202 (1,25 micromoles/herida; o 0,025 mi de solución al 0 , 15%/herida; el tratamiento una vez diaria, días 0 - 4, círculos vacíos o) facilitó moderadamente el cierre en comparación con el lado tratado con placebo (círculos llenos ·) ; *p < 0,05. B. El tratamiento con dosis bajas de H202 no es tóxico para la microflora de la herida. Para determinar la microflora superficial, se pasó un hisopo a las heridas (tratadas con 1,25 micromoles de H202 /herida, barra vacía, o solución fisiológica, barra llena) con un aplicador con punta de alginato. Se hizo la evaluación cuantitativa de la carga bacteriana de la superficie. Para la microflora del tejido profundo de la herida, 48 h después de practicar la herida se removió el tejido de escara, se obtuvieron muestras del tejido del lecho de la herida por debajo de la escara y se realizó la evaluación de la carga bacteriana. Los valores mostrados representan las medias + SD de CFU de cuatro observaciones. C. El tratamiento una vez diaria en los días 0 - 4 con dosis alta de H202 (alta, 25 micromoles/herida; círculos llenos ·; 0,025 mi de solución al 3%) versus baja (1,25 micromoles/herida o 0,025 mi de solución al 0,15%, círculos vacíos o) afectó adversamente el cierre; *p < 0,05; comparado con el tratamiento con dosis baja de H202. Un tratamiento con concentración mayor de H202 (recuadro) (62,5 micromoles/herida, lado izquierdo tratado; 0,025 mi de solución al 7,5%/herida una vez el día 0) causa daño tisular necrótico y lesión severa que lleva a la muerte de los ratones. Figura 4. Cambios inducidos por la herida y por H202 en los genes relacionados con la angiogénesis, la vascularización y el riego sanguíneo en el borde de la herida. Se trataron heridas apareadas disecadas (Figura 2) con solución fisiológica placebo o H202 (1,25 micromoles/herida; días 0 - 4 , una vez diaria) . Se recolectó tej ido del borde de la herida en los tiempos indicados después de practicar la herida. A. Ensayo de protección a la ribonucleasa (RPA) que muestra la cinética de la expresión de mRNA relacionado con angiogénesis en una herida tratada con placebo. B. El tratamiento de la herida con dosis baja de H202 (1,25 micromoles/herida, una vez diaria, dias 0 - 4) aumentó más las expresiones de m NA de Fitl y VEGF inducidas por la herida, según determinación hecha con RPA. C. Las imágenes del riego sanguíneo de las heridas se obtuvieron en forma no invasiva usando un flujómetro de láser Doppler. Se muestran imágenes que reflejan el riego sanguíneo (panel derecho) y una foto digital (región de interés; panel izquierdo) del tejido posterior a la cicatrización. Se presentan los datos, medias ± SD, de riego sanguíneo (gráfico de barras) . La media representa la media aritmética de todos los valores válidos de flujo sanguíneo para pixeles dentro de la región de interés . Los resultados muestran que el tratamiento resultó en un aumento del flujo sanguíneo, indicador funcional de angiogénesis aumentada. D. El día 8 después de practicar la herida, se hicieron cortes con criosección del borde de la herida y se estimó la vascularización mediante tinción para CD31 (rojo, rodamina) y DAPI (azul, núcleos) ; la mayor abundancia de tinción roja CD31 en el corte obtenido del lado tratado con H202 (abajo) refleja mejor vascularización vs. el control (arriba) . Figura 5. Fosforilación inducida por H202 de la quinasa de adhesión focal (FAK) en células del endotelio microvascular y el tejido del borde de la herida. Se trataron células de endotelio microvascular humano (H EC-1) con H202 en las dosis y duración indicadas. La fosforilación de la FAK se detectó con Western blot y anticuerpos anti-FAK específicos del sitio de fosforilación. Se hizo la transferencia de FAK natural o ß actina para mostrar igual carga. A. Efecto de diversas dosis de tratamiento con H202 sobre el estado de fosforilación (Ty 925) de FAK. B. Cinética de la activación específica del sitio de la fosforilación de FAK en células HMEC después del tratamiento con H202 (0,1 mM) . C. Se trataron heridas apareadas disecadas (Figura 2) con solución fisiológica placebo o H202 (1,25 micromoles/herida) . Se recolectó tejido del borde de la herida 30 minutos después de practicar la herida. Se determinó la fosforilación de FAK en el tejido del borde de la herida con Western Blot. Se muestran los datos de tres animales (N° 1 - N° 3) . Figura 6. El déficit de MCP-1 y p47phox disminuye la cicatrización dérmica. Se colocaron heridas disecadas (Figura 2) en la piel dorsal de ratones de 8 semanas C57BL/6, atontados para MCP-1 o p47phox. Cada una de las dos heridas se trató con solución fisiológica o con H202 (1,25 micromoles/herida; días 0 - 4) . A. RPA que muestra la cinética de la expresión de mRNA relacionado con la proteína de quimiotaxis de monocitos/macrófagos en heridas tratadas con placebo de ratones silvestres (C57 BL/6) . B. Los cierres de la herida en heridas tratadas con solución fisiológica (círculos llenos ·) de C57BL/6 y ratones atontados para MCP-1 tratados con H202 (triángulos llenos ?) o solución fisiológica (círculos vacíos o) se muestran como porcentaje del área de la herida inicial. *p < 0,05; comparado con tratamiento con solución fisiológica en ratones C57BL/6. N° , p < 0,05; comparado con tratamiento con solución fisiológica en ratones atontados. C. Los cierres de la herida en heridas tratadas con solución fisiológica (círculos llenos ·) de C57BL/6 y ratones atontados para p47 Phox tratados con H202 (triángulos llenos ?) o solución fisiológica (círculos vacíos o) se muestran como porcentaje del área de la herida inicial. *p < 0,05; comparado con tratamiento con solución fisiológica en ratones C57BL/6. N° , p < 0,05; comparado con tratamiento con solución fisiológica en ratones atontados. D. Expresión de queratina 14 (fluorescencia verde) en la piel de ratones atontados para p47 phox cosechada de sitios de herida después del cierre el día 18 después de practicar la herida. Obsérvese la mayor expresión de queratina 14 en el lado control en comparación con el lado tratado con H202 indicando que la cicatrización está en proceso en el lado control, mientras que el lado tratado con H202 muestra una expresión de queratina 14 similar a la de la piel normal . DESCRIPCIÓN DE LAS REALIZACIONES La presente invención se describirá ahora con referencia a realizaciones más detalladas. No obstante, esta invención se puede realizar en diferentes formas y no debe interpretarse como limitada a las realizaciones que figuran en la presente. Por el contrario, estas realizaciones se proporcionan para explicar mejor y completar la memoria descriptiva y transmitir el alcance de la invención para el experto en la técnica. A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente tienen el mismo significado que se les asigna comúnmente en la técnica a la que pertenece esta invención. La terminología usada en la descripción de la presente invención está destinada a describir solamente realizaciones particulares y no limita la invención. Tal como se usa en la memoria descriptiva de la invención y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "uno", "un" y "el" incluyen también los plurales, a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Todas las publicaciones, solicitudes de patente, patentes y demás referencias mencionadas en la presente quedan incorporadas en su totalidad mediante referencia. A menos que se indique lo contrario, todos los números que expresan cantidades de ingredientes, condiciones de reacciones, etcétera, usados en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones deben entenderse modificados por el término "aproximadamente" . Del mismo modo, a menos que se indique lo contrario, los parámetros numéricos expresados en la siguiente memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas son aproximaciones que pueden variar de acuerdo con las propiedades que se deseen obtener con la presente invención. Como mínimo, y sin intentar limitar la aplicación de la doctrina de los equivalentes al alcance de las reivindicaciones, cada parámetro numérico debe interpretarse a la luz del número de dígitos significativos con los redondeos ordinarios. A pesar de que los límites y parámetros numéricos que expresan el amplio alcance de la invención son aproximaciones, los valores numéricos consignados en ejemplos específicos se reportan con la mayor precisión posible. No obstante, todo valor numérico contiene cierto error inherente que resulta de la desviación estándar encontrada en las respectivas mediciones de las pruebas. Todo rango numérico consignado en la presente memoria descriptiva incluirá todos los rangos más estrechos que se encuentran dentro de dicho rango numérico más amplio del mismo modo que si dichos rangos numéricos más estrechos figuraran en su totalidad escritos en la presente. La presente invención concierne de modo general al uso del peróxido de hidrógeno de sus fuentes en la cicatrización de lesiones. En algunas realizaciones, aumenta la velocidad de la cicatrización y en algunas realizaciones se reduce la formación de tejido cicatrizal. La invención se puede usar de modo general para tratar cualquier daño en un organismo vivo en el que haya procesos naturales de reparación del organismo. La invención se puede usar para tratar lesiones en animales, tales como mamíferos, e incluye específicamente humanos. El término "lesión" se usa en la presente en su sentido genérico, lo que significa que abarca todo tipo de heridas y lesiones. "Herida" también se puede usar en su sentido genérico, lo que significa que abarca heridas, quemaduras, úlceras, etc. En la presente, "herida" y "lesión" se pueden usar indistintamente y, a menos que el contexto específicamente indique lo contrario, no corresponde distinción alguna. Las lesiones pueden ser heridas, quemaduras, úlceras, etc. Las lesiones/heridas pueden ser agudas o crónicas . Las heridas pueden ser de espesor completo, es decir, que penetran todas las capas de la piel, o de espesor parcial, es decir, que no penetran todas las capas de la piel. Ejemplos de heridas agudas incluyen, sin limitación, heridas quirúrgicas, heridas penetrantes, lesiones por desgarro, lesiones por aplastamiento, lesiones por cortes, lesiones por quemaduras, laceraciones y heridas por mordeduras. Ejemplos de heridas crónicas incluyen, sin limitación, úlceras, tales como úlceras arteriales, úlceras venosas, úlceras por compresión y úlceras diabéticas. Desde ya, las heridas agudas se pueden convertir en heridas crónicas . La composición que se aplica a la lesión a ser tratada contiene peróxido de hidrógeno o una fuente de peróxido de hidrógeno. La concentración de peróxido de hidrógeno aplicada a la lesión es menor que la cantidad que se usa convencionalmente y, en algunas realizaciones, es menor que la cantidad que produce un efecto de oxidación sobre microbios u otras células vivas y, en algunas realizaciones, es menor que la cantidad que produce un efecto necrótico en el tejido contactado. En algunas realizaciones, la cantidad de peróxido de hidrógeno aplicada a una lesión está entre aproximadamente 500 nanomoles (nmol) y aproximadamente 50 micromoles (µp???) por centímetro cuadrado (cm2) de lesión. En algunas realizaciones, la cantidad de peróxido de hidrógeno aplicada a una lesión está entre aproximadamente 5 µp??? y aproximadamente 500 µp??? por centímetro cúbico (cm3) de lesión. La cantidad de peróxido de hidrógeno que se aplica a una lesión puede estar entre aproximadamente 500, 600, 700, 800 o 900 nmol, o l, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o aproximadamente 10 µp??? o más y aproximadamente 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40 o aproximadamente 50 µp??? por centímetro cuadrado (cm2) de lesión. La cantidad puede estar, por ejemplo, entre 1-50, 1-25, 1-10, o 1-2 µp??? por centímetro cuadrado (cm2) de lesión. La cantidad de peróxido de hidrógeno aplicada a una lesión puede estar entre aproximadamente 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, o aproximadamente 100 µp??? o más, y aproximadamente 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 400, o aproximadamente 500 µp??? por centímetro cúbico (cm3) de lesión. La cantidad puede estar, por ejemplo, entre 10-500, 10-250, 10-100 o 10-20 µp?1 por centímetro cúbico (cm3) de lesión. La concentración de peróxido de hidrógeno aplicada a una lesión puede estar entre aproximadamente 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, o aproximadamente 75 mM y aproximadamente 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 o 100 mM o más. Por lo tanto, la concentración de peróxido de hidrógeno puede estar entre aproximadamente 10 y aproximadamente 100 mM, o entre aproximadamente 25 y aproximadamente 75 mM, o entre aproximadamente 40 y aproximadamente 60 mM. El peróxido de hidrógeno se puede aplicar en cualquier forma o vehículo incluyendo, sin limitación, líquidos, geles, lociones, cremas, pastas y ungüentos. El medio de aplicación dependerá de la forma que adopte el peróxido de hidrógeno: los líquidos, se pueden rociar o verter, por ejemplo; los geles, lociones, cremas, pastas y ungüentos se pueden frotar o masajear, por ejemplo. Estas y otras formas y/o vehículos para la administración de peróxido de hidrógeno se describen en publicaciones tales Remington's Pharmaceutical Science, y en otras publicaciones similares. Las formas de administración pueden ser homogéneas, p. ej . , formas en las que el peróxido de hidrógeno está en solución, o heterogéneas, p. ej . , formas en las que el peróxido de hidrógeno está contenido dentro de liposomas o microesferas . Las formas pueden producir un efecto inmediato y pueden, en forma alternativa o adicional, producir un efecto extendido. Por ejemplo, se pueden usar liposomas o microesferas, u otros medios similares para proporcionar liberación extendida del peróxido de hidrógeno, para extender el período durante el cual el peróxido de hidrógeno está expuesto a la lesión; también se puede proporcionar peróxido de hidrógeno no encapsulado para obtener un efecto inmediato. Las formas de administración también pueden adoptar la forma de dispositivos que pueden suministrar peróxido de hidrógeno a una lesión durante un período deseado de tiempo. Los dispositivos incluyen, sin limitación, vendajes, apositos quirúrgicos, gasas, tiras adhesivas, grapas quirúrgicas, clips, hemostáticos, dispositivos intrauterinos, suturas, trocares, catéteres, tubos e implantes. Los implantes incluyen, sin limitación, pildoras, pélets, cilindros, obleas, discos y comprimidos. Dispositivos de acuerdo con la invención se pueden preparar de acuerdo con métodos conocidos y pueden incluir material polimérico, o estar fabricados con este material. En algunos casos, el material polimérico será un material absorbible y en otros casos será un material no absorbible . Desde ya, los dipositivos pueden incluir tanto materiales absorbibles como no absorbibles. Los materiales absorbibles pueden ser materiales sintéticos y materiales no sintéticos. Los materiales sintéticos absorbibles incluyen, sin limitación, polímeros celulósicos, polímeros de ácido glicólico, polímeros de metacrilato, polímeros de etilen vinil acetato, copolímeros de etilen vinil alcohol, policaprolactam, poliacetato, copolímeros de lacturo y glicoluro, polidioxanona, poliglactina, poliglecaprona, poligliconato, poligluconato y combinaciones de estos materiales . Los materiales no sintéticos absorbibles incluyen, sin limitación, catgut, membrana de cargile, fascia lata, gelatina, colágeno y combinaciones de estos materiales . Los materiales sintéticos no absorbibles incluyen, sin limitación, nailon, rayones, poliésteres, poliolefinas y combinaciones de estos materiales . Los materiales no sintéticos no absorbibles incluyen, sin limitación, seda, seda dérmica, algodón, lino y combinaciones de estos materiales . También están previstas combinaciones de los dispositivos y vehículos/portadores precedentes. Por ejemplo, un gel o ungüento de peróxido de hidrógeno puede estar impregnado en un vendaje o aposito de heridas para administrar el peróxido de hidrógeno al lugar deseado. En otro ejemplo, un dispositivo absorbible implantable puede cargarse con una solución de peróxido de hidrógeno y liberar la solución del dispositivo durante un período que se desee. La forma física usada para administrar el peróxido de hidrógeno no es crítica y la elección o el diseño de dichos dispositivos están dentro de las habilidades del experto en la técnica. El peróxido de hidrógeno se puede hacer llegar al sitio deseado como peróxido de hidrógeno en sí o se puede hacer llegar como precursor. Por ejemplo, el superóxido se transforma en peróxido de hidrógeno por acción de la superóxido dismutasa, que está presente en forma natural en los animales. De este modo, el peróxido de hidrógeno se puede hacer llegar a un sitio deseado administrando superóxido, que se transforma en peróxido de hidrógeno. Se pueden administrar peróxidos del tipo peróxido de hidrógeno administrando, por ejemplo, terbutil hidroperóxido . Todos estos tipos de fuentes se pueden considerar fuentes químicas de peróxido de hidrógeno. El peróxido de hidrógeno también se forma naturalmente en el organismo por una reacción entre la hemoglobina y el oxígeno que produce superóxido, que luego se convierte en peróxido de hidrógeno por acción de la superóxido dismutasa. El peróxido de hidrógeno se degrada naturalmente en el organismo por acción de una enzima llamada catalasa. Se puede hacer que se acumule peróxido de hidrógeno en el sitio de una lesión administrando un inhibidor de la catalasa en el sitio deseado. También se puede hacer que se acumule peróxido de hidrógeno administrando superóxido dismutasa adicional . La administración de peróxido de hidrógeno al sitio de una lesión de esta forma se considera realizada a partir de una fuente enzimática. También se la puede considerar una fuente natural de peróxido de hidrógeno, por oposición a una fuente externa. El peróxido de hidrógeno también se puede generar como subproducto de una serie de reacciones, incluyendo, por ejemplo: 1) glucosa + glucosa oxidasa; 2) xantina + xantina oxidasa; 3) hipoxantina + xantina oxidasa; y 4) ascorbato + ascorbato oxidasa. La concentración de peróxido de hidrógeno también se puede aumentar en un organismo mediante la sobreexpresión de racl y rac2 , NADPH oxidasa y superóxido dismutasa. Se considera que todas son fuentes enzimáticas y están dentro del alcance de la invención. El peróxido de hidrógeno se administra al sitio deseado por lo menos una vez. En algunas realizaciones, el peróxido de hidrógeno se administra al sitio deseado dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez o más veces. La administración se puede hacer con una frecuencia de una vez cada dos, cuatro, seis, ocho, diez, doce, catorce, dieciséis, dieciocho, veinte, veintidós o veinticuatro horas, o más. Cuando se desean dosis repetidas, se pueden "programar" dispositivos u otros vehículos para que liberen dosis de peróxido de hidrógeno en los tiempos deseados. Por ejemplo, una formulación en microesferas puede incluir peróxido de hidrógeno no encapsulado para obtener un efecto inmediato a la administración; un componente encapsulado que suministra una segunda dosis a las veinticuatro horas; y un componente encapsulado que suministra una tercera dosis a las cuarenta y ocho horas. La estrategia del tratamiento queda a cargo del profesional; el diseño de los dispositivos o vehículos está dentro del nivel del experto en el arte. Puede resultar deseable proporcionar otras condiciones en la práctica de la presente invención. Por ejemplo, puede resultar deseable asegurar que la región seleccionada de la lesión está suficientemente oxigenada; por lo general, es suficiente que esté presente el oxígeno atmosférico. También puede resultar deseable mantener un nivel deseado de humedad y una temperatura en particular; en algunas realizaciones resulta deseable un medio caliente y húmedo. Aunque no es un requisito, también puede resultar deseable crear o mantener un medio estéril . Adicionalmente, puede resultar deseable incluir en la formulación otros agentes terapéuticamente beneficiosos. Por ejemplo, los vehículos o portadores pueden incluir también humectantes o humidificantes para mantener un nivel deseado de humedad en el área tratada. Otras posibilidades incluyen drogas tales como anestésicos o antibióticos, que proporcionan otros efectos deseados. Nuevamente, las posibilidades no están limitadas y quedan a criterio del profesional . Los siguientes Ejemplos se incluyen para describir y explicar la invención con mayor claridad.

EJEMPLOS Ejemplo 1: Presencia de ROS en el sitio de la herida. Concentración de H202 en el fluido de la herida. Se implantaron cilindros de malla de alambre de Hunt/Schilling en el tejido subcutáneo del dorso de ratones C57BL/6 de 5 semanas de edad por medio de una incisión. Al cabo de 5 días, se recolectó el fluido de la herida y se medió la concentración de H202 en estado estacionario en el líquido usando una técnica electroquímica en tiempo real, como la que se describe en Lui y Zweier (Free Radie Biol Med. 2001 Oct 1;31 (7): 894-901). La muestra de línea de base se recolectó en PBS . Los resultados se muestran en la Figura 1A. Se agregó fluido de la herida (0,15 mi) a DPBS (1 mi) en el momento indicado con una flecha. Usando una curva de estándar, la concentración de H202 determinada en el fluido de la herida fue de 1,1 µ?. Estos resultados contrastan con las mediciones en plasma sanguíneo, que no muestran peróxido de hidrógeno medible. Detección de H202 en el borde de la herida. Se hizo el ensayo para peróxido de hidrógeno en el borde de la herida mediante detección de huellas de radical de peróxido de hidrógeno en la cavidad de la herida usando una solución de spin trap para enjuagar la herida expuesta. Doce horas después de practicar la herida, el sitio se trató con el spin trap, D PO (5, 5-dimetil-pirrolin-l-oxil) . Para obtener datos de control, se sometió una herida recién practicada al mismo tratamiento con spin trap. Al cabo de 15 minutos se extrajo la solución de spin trap de la cavidad de la herida y se la sometió al ensayo con resonancia paramagnética electrónica (EPR) .

Las mediciones con EPR se realizaron con un espectrómetro EPR Bruker ER 300 operando en banda X con una cavidad TM 110. La Figura IB muestra los espectros EPR del aducto DMPO medido en el líquido de enjuague de la herida. Los espectros se obtuvieron de los efluentes del DPMO (100 mM, 0,1 mi) recolectado de la cavidad de la herida a las 0 h (control simulado, panel superior) y 12 h después de practicar la herida (panel inferior) . Los espectros en el panel inferior se identificaron como los del DMPO-OH con las siguientes constantes de acoplamiento: aN = 14,90 G; aH = 14,90. Los parámetros de adquisición de datos fueron: frecuencia de microondas 9,8682 GHz ; ancho de barrido 100 G; potencia de microondas 20 mW; amplitud de modulación 0,5 G; frecuencia de modulación 100 kHz; constante de tiempo 80 mseg . Mientras que el espectro de la simulación de solución tratada con spin trap no mostró ningún aducto prominente del spin, el espectro obtenido del líquido de enjuague de la herida a las 12 horas mostró un claro patrón de cuarteto 1:2:2:1. Los componentes individuales se identificaron como DMPO-OH (aducto con radical hidroxilo) por simulación. Producción de superóxido en piel normal y en tejido del borde de la herida. Como resultado funcional de la actividad de la NADPH oxidasa, la generación de 02 se mide a menudo en cortes por criosección usando dihidroetidio (DHE) como tinción fluorescente sensible a ROS. En resumen, las muestras del borde de la herida se cosecharon a las 12 horas de practicada la herida y se las congeló inmediatamente en OCT. Se incubaron cortes frescos de 30 micrones con DHE (0,01 mM, 20 min. , 200x) para detectar 02 y se los observó con microscopio confocal . Los resultados se muestran en la Figura 1C. Empleando este método, se observó claramente que el borde del tejido de la herida se tiñó en forma mucho más prominente que la piel normal recién cortada. Este hallazgo constituye una nueva demostración de que el sitio de la herida está enriquecido en ROS. En conjunto, estos experimentos demuestran claramente que los ROS, incluyendo el peróxido de hidrógeno, están presentes en el tejido de cicatrización de la herida. Ejemplo 2: Efecto del exceso de catalasa sobre la cicatrización de heridas. Como se demostró la presencia de peróxido de hidrógeno en el tejido de cicatrización de heridas, se realizaron experimentos para determinar si la disminución de su concentración perturba la cicatrización. La catalasa es la enzima natural que hidroliza el peróxido de hidrógeno, por lo que se la introdujo en las heridas a ensayar. En resumen, se introdujo la catalasa en las heridas a través de su sobreexpresión, usando un vector adenoviral .

Este vector permitió obtener una alta eficiencia de sobreexpresión en la piel murina. La piel donde se iba a practicar la herida se inyectó una vez con catalasa o adenovirus LacZ (control) (1011 pfu) cinco días antes de practicar la herida para permitir la máxima sobreexpresión de catalasa en el sitio de la herida. Se colocaron dos heridas de espesor completo de 8 x 16 mm con cicatrización por segunda intención en la piel del dorso de ratones C57BL/6 de 8 semanas de edad. La Figura 2A muestra un Western blot de la piel infectada mostrando la sobreexpresión de catalasa en el lado tratado con virus Ad-catalasa (AdCat) en comparación con el lado tratado con virus Ad-LacZ de Control . Las transferencias se investigaron nuevamente con ß actina para demostrar la carga igual de las muestras . La Figura 2B muestra cierres de la herida como porcentaje del área inicial de la herida, determinada el día indicado después de practicar la herida. La línea punteada representa la curva de cicatrización estándar de los ratones C57BL/6 tratados con solución fisiológica (círculos vacíos o) sin infección viral. Tratamiento AdCat (triángulos llenos T) ; tratamiento AdLacZ (círculos llenos ·) ; *p < 0,05 en comparación con el lado tratado con LacZ. La Figura 2C muestra la tinción tricrómica de Masson realizada en cortes de piel regenerada en el sitio de la herida fijadas con formalina y obtenidas el día de cierre de ambas heridas . El lado AdCat muestra una región HE más amplia, indicativa de regeneración incompleta (vs . control) de la piel, consistente con un cierre más lento. Es: escara; G: tejido de granulación; HE: epitelio hiperproliferativo . Ejemplo 3: Efecto del peróxido de hidrógeno sobre el cierre de heridas . Como se demostró claramente que el peróxido de hidrógeno está presente en las heridas que cicatrizan (Ejemplo 1) , y que su ausencia de las heridas que cicatrizan atenúa el proceso de cicatrización (Ejemplo 2) , se realizaron experimentos para examinar el efecto del agregado de peróxido de hidrógeno. En resumen, Se colocaron dos heridas de espesor completo de 8 x 16 mm obtenidas por disección (Figura 3, recuadros) en la piel dorsal de ratones macho C57BL/6 (8 semanas de edad) . Cada una de las dos heridas fue tratada con H202 o solución fisiológica. La Figura 3A muestra que el tratamiento con dosis baja de H202 (1,25 micromoles/herida; o 0,025 mi de solución al 0, 15%/herida, una vez diaria, días 0 - 4, círculos vacíos o) facilitó moderadamente el cierre en comparación con el lado tratado con placebo (círculos llenos ·) ; *p < 0,05.

La Figura 3B muestra que el tratamiento con dosis bajas de H202 no influye sobre la microflora de la herida. Para determinar la microflora superficial, se pasó un hisopo (24 - 48 horas después de practicar las heridas) a las heridas (tratadas con 1,25 micromoles de H202 /herida, barra vacía, o solución fisiológica, barra llena) con un aplicador con punta de alginato durante 20 segundos. Se hizo la evaluación cuantitativa de la carga bacteriana de la superficie. Para la microflora del tejido profundo de la herida, 48 h después de practicar la herida se removió el tejido de escara, se obtuvieron muestras del tejido del lecho de la herida por debajo de la escara y se realizó la evaluación de la carga bacteriana. Los valores mostrados representan las medias ± SD de CFU de cuatro observaciones. La Figura 3C muestra que la dosis alta de H202 (alta, 25 micromoles/herida; círculos llenos ·; 0,025 mi de solución al 3% versus baja 1,25 micromoles/herida o 0,025 mi de solución al 0,15%, círculos vacíos o una vez diaria en los días 0 - 4) afectó adversamente el cierre. (*p < 0,05; comparado con el tratamiento con dosis baja de H202) . Un tratamiento con concentración mayor de H202 (recuadro) (62,5 micromoles/herida, lado izquierdo tratado; 0,025 mi de solución al 7,5%/herida una vez el día 0) causó daño tisular necrótico y lesión severa, llevando a la muerte de los ratones .

Ejemplo 4: Cambios inducidos por la herida y por H202 en los genes relacionados con la angiogénesis , la vascularización y el riego sanguíneo en el borde de la herida . Se realizaron experimentos adicionales para estudiar el mecanismo mediante el cual dosis bajas de peróxido de hidrógeno aumentaban la velocidad de cicatrización de la herida . Se trataron heridas apareadas disecadas con solución fisiológica placebo o H202 (1,25 micromoles/herida; días 0 - 4, una vez diaria) . Se recolectó tejido del borde de la herida en los tiempos indicados después de practicar la herida. La Figura 4A muestra un ensayo de protección a la ribonucleasa (RPA) que muestra la cinética de la expresión de mR A relacionado con angiogénesis en una herida tratada con placebo. La Figura 4B muestra cómo el tratamiento de la herida con dosis baja de H202 (1,25 micromoles/herida, una vez diaria, días 0 - 4) aumentó más las expresiones de mRNA de Fitl y VEGF inducidas por la herida, según determinación hecha con RPA. La Figura 4C muestra las imágenes del riego sanguíneo de las heridas que se obtuvieron en forma no invasiva usando un flujómetro de láser Doppler. Se muestran imágenes que reflejan el riego sanguíneo (panel derecho) y una foto digital (región de interés; panel izquierdo) del tejido posterior a la cicatrización. Los datos de riego sanguíneo se presentan como medias ± SD, (gráfico de barras) . La media representa la media aritmética de todos los valores válidos de flujo sanguíneo para píxeles dentro de la región de interés. Los resultados muestran que el tratamiento resultó en un aumento del flujo sanguíneo, indicador funcional de angiogénesis aumentada. La Figura 4D muestra los resultados del día 8 después de practicar la herida. Se hicieron cortes con criosección del borde de la herida y se estimó la vascularización mediante tinción para CD31 (rojo, rodamina) y DAPI (azul, núcleos) ; la mayor abundancia de tinción roja CD31 en el corte obtenido del lado tratado con H202 (abajo) refleja mejor vascularización vs. el control (arriba) . Ejemplo 5: Fosforilación inducida por H202 de la quinasa de adhesión focal (FAK) en células del endotelio microvascular y el tejido del borde de la herida. Se trataron células de endotelio microvascular humano (H EC-1) con H202 en las dosis y duración indicadas. La fosforilación de la FAK se detectó con Western blot y anticuerpos anti-FAK específicos del sitio de fosforilación. Se hizo la transferencia de FAK natural o ß actina para mostrar igual carga. La Figura 5A muestra el efecto de diversas dosis de tratamiento con H202 sobre el estado de fosforilación (Ty 925) de FAK. La Figura 5B muestra la cinética de la activación específica del sitio de la fosforilación de FAK en células H EC después del tratamiento con H202 (0,1 mM) . En la Figura 5C, se trataron heridas apareadas disecadas con solución fisiológica placebo o H202 (1,25 micromoles/herida) . Se recolectó tejido del borde de la herida 30 minutos después de practicar la herida. Se determinó la fosforilación de FAK en el tejido del borde de la herida con Western Blot. Se muestran los datos de tres animales (N° 1 - N° 3) . Ejemplo 6: El déficit de MCP-1 y p47phox disminuye la cicatrización dérmica. Al atraer macrófagos productores de peróxido de hidrógeno, la proteína 1 de quimiotaxis/quimioatracción de monocitos/macrófagos (MCP-1) juega un papel clave en el desarrollo y la resolución de la respuesta inflamatoria aguda a las heridas. La P47phox es una subunidad reguladora de la NADPH oxidasa, que participa en la producción de ROS. Debido a la importancia de estos factores en la producción de ROS y en la cicatrización de heridas, se realizaron pruebas para examinar cómo el peróxido de hidrógeno afecta las heridas en animales que carecen de estos factores . En resumen, se colocaron heridas disecadas en la piel dorsal de ratones de 8 semanas C57BL/6, atontados para MCP- 1 o p47phox. Cada una de las dos heridas se trató con solución fisiológica o con H202 (1,25 micromoles/herida ; días 0 - 4) . La Figura 6A muestra un ensayo de protección a la RNasa que muestra la cinética de la expresión de mRNA relacionado con la proteína de quimiotaxis de monocitos/macrófagos en heridas tratadas con placebo de ratones silvestres (C57 BL/6) . La Figura 6B muestra los cierres de la herida en heridas tratadas con solución fisiológica (círculos llenos ·) de C57BL/6 y de ratones atontados para MCP-1 tratados con H202 (triángulos llenos ?) o solución fisiológica (círculos vacíos o) como porcentaje del área de la herida inicial. (*p < 0,05; comparado con tratamiento con solución fisiológica en ratones C57BL/6. N° , p < 0,05; comparado con tratamiento con solución fisiológica en ratones atontados) . La Figura 6C muestra los cierres de la herida en heridas tratadas con solución fisiológica (círculos llenos ·) de C57BL/6 y en ratones atontados para p47phox tratados con H202 (triángulos llenos ?) o solución fisiológica (círculos vacíos o) se muestran como porcentaje del área de la herida inicial. *p < 0,05; comparado con tratamiento con solución fisiológica en ratones C57BL/6. N° , p < 0,05; comparado con tratamiento con solución fisiológica en ratones atontados. La queratina 14 apoya la diferenciación y regeneración epidérmica; su expresión es desencadenada por heridas dérmicas. La Figura 6D muestra la expresión de queratina 14 (fluorescencia verde) en la piel de ratones atontados para p47phox cosechada de sitios de herida después del cierre el día 18 después de practicar la herida. Obsérvese la mayor expresión de queratina 14 en el lado control en comparación con el lado tratado con H202 indicando que la cicatrización está en proceso en el lado control, mientras que el lado tratado con H202 muestra una expresión de queratina 14 similar a la de la piel normal, indicando cicatrización completa . Otras realizaciones de la invención resultarán evidentes para el experto en la técnica a partir de la consideración de la memoria descriptiva y de la práctica de la invención revelada en la presente. La memoria descriptiva y los ejemplos deben considerarse únicamente como ejemplificativos , quedando indicado el verdadero alcance y espíritu de la invención en las reivindicaciones adjuntas.

Claims (37)

1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN
2. Habiéndose descrito la presente se considera como novedad, y por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes :
3. REIVINDICACIONES
4. Se reivindica lo siguiente: 1. Un método para aumentar la velocidad de cicatrización de una lesión en mamíferos, que comprende aplicar a la lesión entre aproximadamente 500 nanomoles y aproximadamente 50 micromoles de peróxido de hidrógeno por centímetro cuadrado de lesión. 2. El método de acuerdo con la reivindicación 1 , que comprende aplicar entre aproximadamente 1 y aproximadamente 50 micromoles de peróxido de hidrógeno por centímetro cuadrado de lesión. 3. El método de acuerdo con la reivindicación 2 , que comprende aplicar entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10 micromoles de peróxido de hidrógeno por centímetro cuadrado de lesión. 4. El método de acuerdo con la reivindicación 3 , que comprende aplicar entre aproximadamente 1 y aproximadamente 2 micromoles de peróxido de hidrógeno por centímetro cuadrado de lesión.
5. 5. El método de acuerdo con la reivindicación 1, donde el peróxido de hidrógeno se aplica a la lesión en una fuente seleccionada entre fuentes enzimáticas y químicas.
6. 6. El método de acuerdo con la reivindicación 5 , donde la fuente de peróxido de hidrógeno es química y la fuente es peróxido de hidrógeno.
7. 7. Un método para aumentar la velocidad de cicatrización de una lesión en mamíferos, que comprende aplicar a la lesión una concentración entre aproximadamente 500 nanomoles y aproximadamente 50 micromoles de peróxido de hidrógeno por centímetro cuadrado de lesión durante un período entre aproximadamente 12 horas y aproximadamente 24 horas.
8. 8. El método de acuerdo con la reivindicación 7 , donde el peróxido de hidrógeno se aplica en una concentración entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10 micromoles.
9. 9. El método de acuerdo con la reivindicación 7, donde el peróxido de hidrógeno se aplica en una composición adecuada para uso farmacéutico.
10. 10. El método de acuerdo con la reivindicación 9, donde la composición adecuada para uso farmacéutico está en una forma seleccionada entre geles, lociones, ungüentos, cremas, pastas y líquidos.
11. 11. El método de acuerdo con la reivindicación 7, donde el peróxido de hidrógeno se aplica en un dispositivo adecuado para uso farmacéutico.
12. 12. El método de acuerdo con la reivindicación 11, donde el dispositivo adecuado para uso farmacéutico se selecciona entre vendajes, apositos quirúrgicos, gasas, tiras adhesivas, grapas quirúrgicas, clips, hemostáticos, dispositivos intrauterinos, suturas, trocares, catéteres, tubos e implantes .
13. 13. El método de acuerdo con la reivindicación 12, donde el implante se selecciona entre pildoras, pélets, cilindros, obleas, discos y comprimidos.
14. 14. El método de acuerdo con la reivindicación 11, donde el dispositivo comprende un material polimérico.
15. 15. El método de acuerdo con la reivindicación 14, donde el material polimérico comprende un material absorbible.
16. 16. El método de acuerdo con la reivindicación 15, donde el material absorbible comprende un material sintético.
17. 17. El método de acuerdo con la reivindicación 16, donde el material sintético se selecciona entre polímeros de celulosa, polímeros de ácido glicólico, polímeros de metacrilato, polímeros de etilen vinil acetato, copolímeros de etilen vinil alcohol, policaprolactam, poliacetato, copolímeros de lacturo y glicoluro, polidioxanona, poliglactina, poliglecaprona, poligliconato, poligluconato y combinaciones de estos polímeros.
18. 18. El método de acuerdo con la reivindicación 15, donde dicho material absorbible comprende un material no sintético .
19. 19. El método de acuerdo con la reivindicación 18, donde dicho material no sintético se selecciona entre catgut, membrana de cargile, fascia lata, gelatina, colágeno y combinaciones de estos materiales.
20. 20. El método de acuerdo con la reivindicación 14, donde el material polimérico comprende un material no absorbible.
21. 21. El método de acuerdo con la reivindicación 20, donde el material no absorbible comprende un material sintético.
22. 22. El método de acuerdo con la reivindicación 21, donde el material sintético se selecciona entre nailon, rayones, poliésteres, poliolefinas y combinaciones de estos materiales .
23. 23. El método de acuerdo con la reivindicación 20, donde el material no absorbible comprende un material no sintético.
24. 24. El método de acuerdo con la reivindicación 23, donde dicho material no sintético se selecciona entre seda, seda dérmica, algodón, lino y combinaciones de estos materiales.
25. 25. El método de acuerdo con la reivindicación 7, donde la lesión se selecciona entre heridas, úlceras y quemaduras.
26. 26. El método de acuerdo con la reivindicación 25, donde las heridas se seleccionan entre heridas agudas y heridas crónicas .
27. 27. El método de acuerdo con la reivindicación 25, donde las heridas se seleccionan entre heridas de espesor total y heridas de espesor parcial .
28. 28. El método de acuerdo con la reivindicación 26, donde las heridas agudas se seleccionan entre heridas quirúrgicas, heridas penetrantes, lesiones por desgarro, lesiones por aplastamiento, lesiones por cortes, lesiones por quemaduras, laceraciones y heridas por mordeduras.
29. 29. El método de acuerdo con la reivindicación 26, donde las heridas crónicas se seleccionan entre úlceras arteriales, úlceras venosas, úlceras por compresión y úlceras diabéticas.
30. 30. Un dispositivo de liberación de peróxido de hidrógeno para la administración en una lesión, que comprende peróxido de hidrógeno y un material de vehículo, donde dicho dispositivo libera dicho peróxido de hidrógeno durante un período de tiempo de por lo menos aproximadamente 12 horas, donde el peróxido de hidrógeno liberado del dispositivo está en concentración insuficiente para producir necrosis de la lesión.
31. 31. El dispositivo de liberación de peróxido de hidrógeno de acuerdo con la reivindicación 30, donde el dispositivo libera entre aproximadamente 0,5 y 50 µp??? de peróxido de hidrógeno/cm2 de herida/12 horas y aproximadamente 0,5 y 50 µp??? de peróxido de hidrógeno/cm2 de herida/24 horas.
32. 32. El dispositivo de liberación de peróxido de hidrógeno de acuerdo con la reivindicación 31, donde el material de vehículo comprende un material polimérico.
33. 33. El dispositivo de liberación de peróxido de hidrógeno de acuerdo con la reivindicación 32, donde el material polimérico comprende un material absorbible.
34. 34. El dispositivo de liberación de peróxido de hidrógeno de acuerdo con la reivindicación 32, donde el material polimérico comprende un material sintético.
35. 35. Una composición para tratar lesiones en mamíferos, que comprende: peróxido de hidrógeno, un vehículo adecuado para uso farmacéutico, donde una dosis unitaria de la composición comprende entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 50 jumol de peróxido de hidrógeno/cm2 de herida .
36. 36. La composición de acuerdo con la reivindicación 35, donde el vehículo comprende un material en forma de gel .
37. 37. La composición de acuerdo con la reivindicación 35, donde el vehículo comprende un material líquido.