KR20070040814A - 재조합 생 계두 바이러스 벡터 및 간염 ｃ 바이러스에 대한약학적 조성물로서의 이들의 용도 - Google Patents

재조합 생 계두 바이러스 벡터 및 간염 ｃ 바이러스에 대한약학적 조성물로서의 이들의 용도 Download PDF

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리즈 알바레즈-라존체레 폰세 데 레온
산티아고 두에나스 카르레라
이비스 구에라 알츠푸루아
넬손 아코스타 리베로
알렉시스 무사치오 라사
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센트로 데 인제니에리아 제네티카 와이 바이오테크놀로지아
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Abstract

본 발명은 감소된 수의 복용 양의 투여 후에, 간염 C 바이러스에 대해 세포 면역 반응을 유도할 수 있는 간염 C 바이러스 단백질을 발현하는 재조합 계두 바이러스 및 약학적 조성물로서의 이들의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 약학적 조성물은 간염 C 바이러스와 관련된 감염의 예방 및 치료에 유용하다.
계두 바이러스, HCV, Core-E1, 키메릭 단백질

Description

재조합 생 계두 바이러스 벡터 및 간염 Ｃ 바이러스에 대한 약학적 조성물로서의 이들의 용도{Recombinant live FOWLPOX VIRUS vectors and their use in pharmaceuticals compositions against Hepatitis C virus}
본 발명은 면역학 및 바이러스의 백신 계에 관한 것으로, 특히 간염 C 바이러스 (HCV)의 재조합 계두(鷄痘) 바이러스 발현 단백질 및 HCV에 대해 세포 면역 반응을 유발할 수 있는 약학적 조성물에 관한 것이다.
HCV는 비-A, 비-B 수혈 후의 간염의 주요 원인물질로, 분자 생물학 기술을 사용하여 1989에 처음으로 동정되었다 (Choo Q-L., Kuo G., et al. (1989) Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis genome. Science. 244:359-62; EP0318216 Chiron Corp). 오늘날, 전세계적으로 1억7천만 이상의 인구가 이 바이러스에 감염되었다. HCV 감염은 85%의 경우에 있어서 잠복기가 길고, 때로는 간경변 및 간세포의 악성종양을 야기한다 (Caselmann W.H., Alt M. (1996) Hepatitis C virus infection as a major risk factor for hepatocellular carcinoma. J. Hepatol. 24:61-66). 실제로, 감염 25년 후 HCV 만성 담지자의 25%가 간경변으로 발전되고, 매년 이들의 1 내지 4%는 간세포의 악성종양으로 발전한다 (Prince A.M., Shata M.T. (2001) Immunoprophylaxis of hepatitis C virus infection. Clin . Liver . Dis. 5:1091-103).
HCV 감염에 대한 치료의 선택은 철저한 섭생으로 투여된 페그인터페론의 조합에 기초된다. 그러나, 이 치료법은 공격적이고, 비용이 비싸며 각 경우에서 50% 이하에서 효과가 있다 (Prince A.M., Shata M.T. (2001) Immunoprophylaxis of hepatitis C virus infection. Clin . Liver . Dis. 5:1091-103).
HCV 항원에 기초된 단백질 서브유닛, 입자와 같은 바이러스, 합성 펩티드, 재조합 생 벡터 및 DNA 면역화를 위한 DNA 컨스트럭트의 다양한 변형체가 백신화에 대해 접근법으로 평가되어지고 있다 (US6635257, US6387662, US6235888, US6685944, US2003021805, Lechmann M., Liang T.J. (2000) Vaccine development for hepatitis C. Semin . Liver . Dis. 20:211-26). 이들 변형체의 몇몇은, 비록 그 반응이 여전히 불충분한 것으로 여겨지지만, HCV 항원요소에 대한 특이적 면역 반응을 이끌어 내는 그의 능력이 입증되었다. 현재로는, HCV 감염에 대한 보호와 상호 관련된 면역학적 변수가 완전하게 정의되지는 않았다. 그럼에도 불구하고, CD4+ Th1와 함께 초기의 강력하고 다중특이적인 세포독성의 T 세포 반응이 바이러스에 대한 면역화 및 질병의 치료에 좋은 것으로 제시되었다. 반대로, 늦은 T 세포 반응은 만성적인 간의 면역병리학의 확립과 관련된다 (Cerny A., Chisari F.V. (1999) Pathogenesis of chronic hepatitis C: immunological features of hepatic injury and viral persistente. Hepatology. 30:595-601; Cooper S., et al. (1999) Analysis of a successful immune response against hepatitis C virus. Immunity 10:439-49; Lechner F., et al. (2000) Why do cytotoxic T lymphocytes fail to eliminate hepatitis C virus? Lessons from studies using major histocompatibility complex class I peptide tetramers. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol . Sci . 355:1085-92; Takaki A., et al. (2000). Cellular immune responses persist and humoral responses decrease two decades after recovery from a single-source outbreak of hepatitis C. Nat . Med . 6:578-82).
재조합 생 벡터는 HCV에 대한 세포 면역 반응을 일으키는 아주 매력적인 후보이다. E1 및 HCV 코어에 대한 아데노바이러스 재조합으로 마우스의 면역화는 이들 항원에 대해 특이적 세포독성 T 세포 반응을 일으키게 했다 (Bruna-Romero O., et al. (1997) Induction of cytotoxic T-cell response against hepatitis C virus structural antigens using a defective recombinant adenovirus. Hepatology 25:470-7). 비록 이들 결과가 전도 유망하기는 하지만, 유전자 치료를 위한 재조합 아데노바이러스의 사용과 관련된 최근의 문제는 인간에 있어서의 이들의 사용에 대해 회의를 일으켰다. 다른 HCV 유전자를 포함하는 재조합 우두 및 카나리아 농포성 피부염 바이러스의 사용은, 평가된 항원에 따라서 이들이 DNA 컨스트럭트에 기한 백신 후보군과 조합되어질 때 마우스에서 세포독성 T 세포 반응을 유발했다 (Pancholi P., et al. (2000) DNA prime-canarypox boost with polycistronic hepatitis C virus (HCV) genes generates potent immune responses to HCV structural and nonstructural proteins. J. Infect . Dis. 182:18-27; Pancholi P., et al. (2003) DNA immunization with hepatitis C virus (HCV) polycistronic genes or immunization by HCV DNA priming-recombinant canarypox virus boosting induces immune responses and protection from recombinant HCV-vaccinia virus infection in HLA-A2.1-transgenic mice. J. Virol. 77:382-90). 사실, HCV 구조 항원에 대해 카나리아의 농포성 피부병 바이러스 재조합의 개별적 투여 후, 예를 들어 재조합 우두 바이러스로 병원균 투여 모델에 있어서 유효할 수 있는 세포의 면역성의 유도에 대한 생체 내에서의 어떤 증거도 없다. 이들 군의 바이러스는 또한 계두 바이러스에 속하며, 현재까지도 HCV 항원에 대한 면역 반응의 유도를 위해 사용되어지지 않았다. 계두 바이러스는 포유동물 세포에서는 복제하지 않지만 감염되어질 수 있고 이의 게놈에 의해 코드된 단백질을 숙주 세포의 세포질에서 효과적으로 발현할 수 있다. 이들의 특성에 기하여, 인체에서 재조합 계두의 사용과 연관된 조절적 리스크가 다른 생 바이러스 벡터에 관해 감소된다.
오늘날, HCV 감염에 대한 이용 가능한 백신이 시판되고 있는 것은 없다. 실제로, 대부분의 연구가 여전히 임상 전 상태에 있다. 따라서, HCV 감염에 대해 효과적인 예방적 및/또는 치료적 제재의 개발은 해결되지 않은 문제이고 절박하게 요구되고 있다.
종래의 기술 상태 및 한계를 뛰어 넘어, 본 발명은 계두 바이러스에 의해 발현된 HCV 항원에 상응하는 aa 영역에 따라, 계두 게놈의 비필수적 영역에서 HCV에 대한 특이적 세포 면역 반응을 유도할 수 있는 HCV로부터 유래된 DNA 분획을 포함하는 재조합 계두 바이러스에 수반한 상기에 언급된 문제를 해결한다.
본 발명에 따르면, 바이러스 FPCoE1은 코어 단백질 및 E1 부분을 포함하는 aa 79-338 (SEQ ID No: 1)을 포함하는 단백질을 발현하고, 반면 바이러스 FPBS는 다른 HCV 항원에 상응하는 CD4+ 및 CD8+ T 림프구에 특이적인 항원요소를 포함하는 키메릭 단백질 (SEQ ID No: 2)을 포함한다. 이들 바이러스에서, HCV 항원을 코드하는 시퀀스는 HCV 큐바의 격리 집단의 cDNA로부터 유래된다 (Morales J, et al. WO 98/25960).
본 발명의 또 다른 측면은 유효한 양의 재조합 계두 바이러스 및 약학적으로 허용될 수 있는 부형제를 포함하여 HCV에 대한 특이적 세포 면역 반응을 유도하는 약학적 조성물에 대해 언급한다.
본 발명에 포함된 재조합 계두 바이러스는 인간 세포를 침투하여 세포질에 HCV 항원을 발현하는 능력을 가진다. 인간 세포에서의 발현은 계두 바이러스의 초기/후기 합성 프로모터에 기한 전사 단위에 의해 조절되어진다. 이들 바이러스는 또한 우두 바이러스로부터 7.5K 프로머터의 제어 하에 크산틴 구아노신 포스포리보실 트랜스퍼라제 유전자를 포함한다. 이들 바이러스는 인체에서는 복제할 수 없다.
이 조성물은 근육 내로, 복막 내로 또는 피하 경로로 투여되어질 수 있다. 투여 방법은 주사기, 유전자 건, 스프레이 또는 다른 면역화 장비를 사용함에 의해 투여되어질 수 있다. 각 개체는 소정의 부피에 2.5 x 107 내지 1 x 108 PFU/ dose 의 범위로 되는 복용량을 수용한다. 본 발명에서는, DNA 컨스트럭트와 같이 초회자극(prime/boost) 방법으로 재조합 계두 바이러스의 투여에 대한 과정도 또한 기술되어진다. 이 재조합 계두 바이러스는 또한 HCV 항원에 대한 단백질 또는 기타 바이러스 재조합과 같이 초회자극 방법으로 투여될 수 있거나 시토킨 및 기타 면역자극 분자와 동시에 투여되어질 수 있다. 이들 조합은 새로운 항원요소의 특이성의 발생 또는 면역 반응의 특이 부문의 고양을 가능하게 한다.
HCV 항원에 대한 계두 바이러스 재조합에 기초한 약학적 조성물은 다음의 이점을 가질 수 있다.
- 이것은 강력한 특이적인 세포 면역성을 유도할 수 있음.
- 소망하는 효과를 얻기 위해 감소된 수의 면역화 반응을 요한다.
- 조합된 백신을 위한 핵심으로서 이들 조성물의 사용이 가능하다.
- 보조약을 필요로 하지 않는다.
- 이것은 항바이러스 제재와 조합되어 사용될 수 있다.
이러한 부대상황에 따라, 이 약학적 조성물은 다른 치료 또는 백신 전에, 동시에 또는 후에 HCV에 대해 면역성을 유도하기 위해 투여되어질 수 있다. 이들 약학적 조성물은 HCV 감염에 대한 예방적 면역성을 유도하기 위해 그리고 만성 간염 C, 간경변 및 간암을 지닌 환자에게 면역성을 유도하기 위해 또한 투여되어질 수 있다.
도 1은 재조합 계두 바이러스에서 HCV 항원에 상당하는 영역의 개략적인 도식도이다.
도 2는 다른 재조합 계두 바이러스로의 면역화 반응 스케쥴이다. 항체 반응 (A). 인터페론 감마 분비 반응 (B). HCV 구조 항원에 대해 우두 바이러스 재조합으로 병원균 투여에 대한 반응 (C).
도 3은 다른 경로로의 접종에 의한 FPCoE1 및 FPBS으로의 면역화 반응 스케쥴이다. HCV 구조 항원에 대해 우두 바이러스 재조합으로 병원균 투여에 대한 반응.
도 4는 다른 양의 FPCoE1 및 FPBS으로의 면역화 반응 스케쥴이다. HCV 구조 항원에 대해 우두 바이러스 재조합으로 병원균 투여에 대한 반응.
도 5는 FPCoE1과 DNA 백신의 제제의 조합에 기초한 면역화 반응 스케쥴이다. 코어, E1 및 E2에 대한 항체 반응 (A). HCV 구조 항원에 대해 우두 바이러스 재조합으로 병원균 투여에 대한 반응 (B).
본 발명에서 이해되어지는 바와 같이, 용어 간염 C 바이러스 또는 HCV는 속의 방식으로 바이러스를 기술하며, 따라서 이 용어는 특정한 바이러스 시퀀스 또는 HCV 분리물에 한정되는 것은 아니다.
동일하게, 시퀀스 코딩은 정확한 조절 시퀀스의 제어 하에 위치될 때 일반적으로 mRNA를 통해 폴리펩티드로 전사되어지는 핵산 분자로 이해되어 진다. 이 경우에, 시퀀스를 코드하는 것이 포함되어질 수 있지만, 그러나 이것은 cDNA 및 재조합 뉴크레오티드 시퀀스에 한정되지 않는다.
본 발명은 다음의 실시예에 의해 보다 자세하게 기술되어지지만, 이 실시예는 상세한 설명을 위한 것이지 본 발명의 목적이 여기에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: FPCoE1c , FPCoE1 및 FPBS 의 평가
특이적 세포 면역 반응을 유도하기 위한 HCV 항원에 대한 계두 바이러스 재조합의 능력을 평가하기 위해, 바이러스 FPCoE1c, FPCoE1 및 FPBS가 생성되었다. 도 1은 HCV 항원에 상응하는 시퀀스의 개략적 도식도를 나타낸다. 바이러스는 다음과 같이 하여 수득되었다. 치킨 엠브리오 피브로블라스트가 계두로 감염되고 리포펙타민(Invitrogen, USA)을 사용하여 플라스미드 pFPCoE1c, pFPCoE1 또는 pFPBS로 형질도입되었다. 이들 플라스미드는 플라스미드 pFP67xgpt (Vazquez-Blomquist D., Gonzalez S., Duarte C.A. (2002) Effect of promoters on cellular immune response induced by recombinant fowlpox virus expressing multi-epitope polypeptides from HIV-1. Biotechnol . Appl . Biochem. 36:171-9)로부터 유래되고 aa 1-338, aa 79-338를 포함하는 영역을 코드하는 시퀀스 (SEQ ID No: 1), 또는 T 림프구에 특이적인 항원요소에 기초된 키메릭 단백질을 코드하는 시퀀스 (SEQ ID No: 2)를 함유한다 (각각, 플라스미드 pFPCoE1c, pFPCoE1 및 pFPBS). 추후로, 크산 틴, 하이포크산틴 및 마이코페놀 산을 갖는 선택 배지에서 몇 주기의 바이러스의 정제 후, 감염 플레이트로부터 바이러스의 산물이 증폭되고 HCV 시퀀스에 상당하는 삽입물의 존재가 폴리머라제 연속 반응(PCR)에 의해 확인되었다.
바이러스의 FPCoE1c, FPCoE1 및 FPBS의 면역원성이 8주령의 BALB/c 암컷 마우스에서, 2.5x107 PFU로 복막 내로 투여 (3주 간격) 후 연구되었다. 각 면역화 군에는 10마리의 동물이 포함되었다. 도 2A는 단지 FPCoE1로의 면역화가 코어 및 E1에 대해 검지할 수 있는 수준의 항체를 유도할 수 있다는 것을 보여준다. 그러나, 도 2B는 FPCoE1 및 FPBS로 면역화된 동물에 상응하는 림프구로부터 IFN-감마 분비 양성 반응이 양성 바이러스인 FP9로 면역된 동물에서 검지된 반응에 대해 통계적으로 유의성이 있다는 것을 보여준다(스튜던트 T 테스트, p<0.05). FPCoE1c로 면역화 반응은 IFN-감마 분비 림프구의 양성 반응을 유도할 수 없다. 부가적으로, 도 2C에 도시된 바와 같이, 바이러스 FPCoE1 및 FPBS로 면역화된 군으로부터의 동물은 HCV 항원에 대한 재조합이 아닌 우두 바이러스 대조군 (WR)으로 병원균 투여 후 관찰된 것에 비해 HCV 구조 항원 (HCV 다단백질의 aa 1-650)에 대한 우두 바이러스 (vvRE) 재조합의 106 PFU로 병원균 투여 후 난소에 바이러스의 적하를 유의적으로 감소할 수 있다(스튜던트 T 테스트, p<0.05). 더욱이, FPCoE1 및 FPBS로 면역화된 동물에서 vvRE 바이러스의 적하는 음성 계두 바이러스 FP9로 면역화된 동물에서 검지된 것에 대해 통계적으로 낮았다 (스튜던트 T 테스트, p<0.05). FPCoE1c로 면역화는 난소에서 바이러스의 적하를 유의적으로 감소치 않았다. 우두 바이러스로 병원균 투여는 계두 바이러스로 최후 면역 2주 후, 복막 내로 접종에 의해 수행되었다. 난소의 추출은 우두 바이러스의 접종 5일 후 수행되었다. 재조합 우두 바이러스로 병원균 투여가 생체 내에서 강력한 세포 면역 반응을 이끌어 내는 백신 후보군의 능력을 입증하기 위해 광범위하게 사용되었다. 특히, 난소 내에서 바이러스 역가의 감소는 주로 강력한 CD8+ T 림포사이트 반응의 감소와 연관되어진다.
실시예 2: 계두 바이러스의 투여 경로 (복막 내로, 피하로 그리고 근육 내로)
재조합 계두 바이러스에 의해 발생된 면역 반응에 대한 접종 경로의 영향을 평가하기 위해, 8주령의 암컷 BALB/c 마우스가 면역되었다. 각 면역화 군에는 열 마리의 동물들이 포함된다. 바이러스 (2.5x107 PFU)가 3주 간격으로 두 번 면역화로 복막 내로, 근육 내로 그리고 피하의 경로에 의해 투여되었다. 도 3은 우두 바이러스 vvRE로 병원균 투여 후 난소에서 바이러스 적하를 감소하는 재조합 계두 바이러스 FPCoE1 및 FPBS의 능력에 관해서 면역화 경로 중에는 유의성 차이가 없음을 보여 준다. 이들 2 재조합 바이러스는 계두 음성 대조군인 FP9에 대해 바이러스 적하의 감소에 기초된 양성적 반응을 유도했다 (스튜던트 T 테스트, p<0.05). 우두 바이러스로 병원균 투여는 계두 바이러스로 마지막 면역화 2주 후 우두 바이러스 vvRE 106 PFU의 복막 내로의 접종에 의해 수행되었다. 난소의 적출은 우두 바이러스의 접종 5일 후 수행되었다.
실시예 3: 복용량 비교 (0.9x10 7 , 2.5x10 7 , 5x10 7 및 1x10 8 PFU )
암컷 BALB/c 마우스가 다른 양의 재조합 계두 바이러스로 0 및 3주에 근육 내의 경로에 의해 면역화되었다. 각 면역화 군에는 10 마리의 동물이 포함되었다. 도 4는 0.9x107 PFU로 면역화된 마우스는 계두 바이러스로 마지막 면역화 2주 후 106 PFU의 vvRE로 병원균 투여 후 난소에서 검출된 바이러스 적하에 대해 유의성 있는 차이를 가지지 않는다는 것을 보여준다. 이에 반해, 2.5x107, 5x107 및 1x108 PFU의 FPCoE1 및 FPBS의 투여는 유사 량의 계두 음성 대조군 FP9로 접종된 동물에서 검출된 것에 비해 난소에서 vvRE 바이러스 적하를 유의적으로 감소했다 (스튜던트 T 테스트, p<0.05). 모든 경우에, 난소의 적출은 vvRE의 접종 후 5일에 수행되었다.
실시예 4: DNA 및 계두 바이러스로 1차/2차( prime / boost ) 면역화
HCV 항원에 대한 계두 바이러스 재조합으로 DNA 백신 후보군을 결합하는 1차/2차(prime/boost) 면역화에서 유도된 면역 반응을 평가할 목적으로, 8주령의 암컷 BALB/c 마우스가 면역화되었다. 각 면역화 군에는 10마리의 동물들이 포함되어진다. 하나의 군 (Co-pIDKE2)은 HCV 다단백질인 pIDKE2의 제일 650 aa를 발현하는 100 ㎍의 플라스미드 (Duenas-Carrera S., et al. (2004). Immunization with a DNA vaccine encoding the hepatitis-C-virus structural antigens elicits a specific immune response against the capsid and envelope proteins in rabbits and Macaca irus (crab-eating macaque monkeys). Biotechnol Appl Biochem. 39:249-55)와 10 ㎍의 재조합 HCV 코어 단백질인 Co.120 (Alvarez-Obregon J.C., et al. (2001). A truncated HCV core protein elicits a potent immune response with a strong participation of cellular immunity components in mice. Vaccine 19:3940-46)와의 혼합물로 0, 3, 7 및 12주에 근육 내의 경로에 의해 면역화되었다. 일 군의 동물 (pAEC-K6)은 음성 대조군 플라스미드 pAEC-K6 (Herrera A.M., et al. (2000). A family of compact plasmid vectors for DNA immunization in humans. Biochem . Biophys. Res . Commun . 279:548-51)와 유사한 조건으로 면역화된다. 다른 군은 0 및 3주에 근육 내의 경로에 의해 2.5x107 PFU의 FPCoE1로 면역화된다. 부가적으로, 동물 군은 동일한 조건으로 음성 계두 바이러스인 FP9으로 면역화된다. 더욱이, 일 군 (Co-pIDKE2/FPCoE1)은 혼합물 Co-pIDKE2로 0 및 3주에, 그리고 FPCoE1으로 9 및 12주에 근육 내의 경로에 의해 면역화된다. 다른 군 (Co-pIDKE2/FP9) 은 유사한 방법으로 면역화되어지지만, 6 및 9주에서의 투여는 FP9으로 투여된다. 도 5는 가장 높은 준위의 항체가 Co-pIDKE2 군에서 유도되었다는 것을 나타낸다(스튜던트 T 테스트, p<0.05). 더욱이, Co-pIDKE2와 FPCoE1을 조합한 1차/2차(prime/boost) 투여는 FPCoE1 단독으로 면역화된 군에서 검출된 것에 대해 보다 높은 준위의 항체를 유도하였다(스튜던트 T 테스트, p<0.05). 도 5B에서, FPCoE1 또는 Co-pIDKE2로 면역화된 두 개의 군 뿐 아니라, 처음 두 복용에서는 Co- pIDKE2로 그리고 다른 2번은 FPCoE1으로 면역화된 군은 음성 대조군으로 면역화된 다른 동물들에 대해 병원균 투여 후 vvRE 바이러스의 적하가 유의적으로 감소(스튜던트 T 테스트, p<0.05)하였다는 것을 관찰할 수가 있다. 가장 낮은 바이러스 적하는 처음 두 복용에서는 Co-pIDKE2로 그리고 다른 2번은 FPCoE1으로 면역화된 동물들에서 검지되었다. 우두 바이러스로 병원균 투여는 마지막 면역화 2주 후에 106 PFU의 우두 바이러스 vvRE의 복막 내로 접종에 의해 수행되었다. 난소의 적출은 우두 바이러스 vvRE의 접종 5일 후에 수행되었다.
SEQUENCE LISTING <110> CENTRO DE INGENIERIA GENETICA Y BIOTECNOLOGIA <120> “RECOMBINANT LIVE FOWLPOX VIRUS VECTORS AND THEIR USE IN PHARMACEUTICALS COMPOSITIONS AGAINST HEPATITIS C VIRUS <130> HCV-VVA <140> PCT/CU2005/000004 <141> 2005-08-10 <150> 2004-0174 <151> 2004-08-11 <160> 2 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 831 <212> ADN <213> Hepatitis C virus <220> <223> cDNA fragment from 237 to 1014 nucleotide of HCV <400> 1 atgaggcctc ccgggtaccc ttggcccctc tatggtaacg agggcatggg atgggcagga 60 tggctcctgt caccccgtgg ctctcggcct agttggggcc ccactgaccc ccggcgtagg 120 tcgcgtaatt tgggtaaggt catcgatacc ctcacatgcg gcttcgccga cctcatgggg 180 tacattccgc tcgtcggcgc ccccctaggg ggcgctgcca gggccctggc gcatggcgtc 240 cgggttctgg aggacggcgt gaattatgca acagggaatc tgcccggttg ctctttctct 300 ctcttccttt tggctttgct gtcctgtttg accatcccag tttccgccta tgaagtgcgc 360 aacgcgtccg gggtgtacca tgtcacgaac gactgctcca actcaagcat tgtgtatgag 420 gcagacgaca tgatcatgca cacccccgga tgcgtgccct gcgttcggga ggacaacacc 480 tcccgctgct gggtagcgct cacccccaca ctcgcggcca ggaatgccag cgtccccacc 540 acgacaatac gacgccacgt cgatttgctc gttggggcgg ctgctctctg ctccgctatg 600 tacgtggggg atctctgcgg atctgttttc ctcgtttccc agctgttcac cttctcgcct 660 cgccggcatg agacagcaca ggactgcaac tgctcaatct atcccggcca cgtatcaggt 720 caccgcatgg cctgggatat gatgatgaac tggtcacctt caacagccct agtggtatcg 780 cagttactcc ggatccgtcg acctgcagca tgccatggca taagtgacta g 831 <210> 2 <211> 602 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> <223> Artificial Sequence Description: Artificial Sequence containing HCV epitopes <220> <400> 2 atgggatcca cccacgtgac cggcggcagc caggcccgca ccacccacag cttcacctcc 60 ctgctgcgcc agggcgccaa gcagaacgtg cagctgatcg gcaaggtgat cgacaccctg 120 accagcggct tcgccgacct gatgggctac atcccactgg tgggcgcccc actgggcggc 180 gccgcccgcg ccaagaaggg ccacgtgagc ggccaccgca tggcctggga catgatgatg 240 aactgggcca gcaagaaggc cgccagccgc gccgccggct tgcaggacag caccatgctg 300 gtgagcgaag gccgcagctg ggcccagcct ggctacccat ggccactgta tggcaacgag 360 ggcatgggca agaagggctc cagcttcagc ctgttcctgt tggccctcct gagcagcttg 420 accatcaaga agatgagcta ctcctggacc ggcgccctgg tgaccccaag cgccgccgag 480 aagaagctgt tgttcaacat cctgggcggc tgggtgaaga agagcatggt gggcaactgg 540 gccaaggtga agaagtacac cggcgacttc gacagcgtga tcgactccag gccttaactg 600 ca 602

Claims (10)

  1. 계두 바이러스 게놈의 비필수적 영역에서, HCV 항원에 대해 특이적 세포 면역 반응을 유도할 수 있는 HCV로부터 유래된 DNA 분획을 포함하는 재조합 계두 바이러스.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 HCV로부터 유래된 DNA 분획은 aa 79-338를 포함하는 다단백질 Core-E1을 코드하는 시퀀스 (SEQ ID No: 1)임을 특징으로 하는 계두 바이러스.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 HCV로부터 유래된 DNA 분획은 T 림프구에 특이적인 항원요소에 기초된 키메릭 단백질을 코드하는 시퀀스 (SEQ ID No: 2)임을 특징으로 하는 계두 바이러스.
  4. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, FPCoE1임을 특징으로 하는 계두 바이러스.
  5. 제 1항 또는 제 3항에 있어서, FPBS임을 특징으로 하는 계두 바이러스.
  6. 유효한 면역화 양의 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 재조합 계두 바이러스 및 약학적으로 허용될 수 있는 부형제를 포함하는 HCV에 대한 특이적 세 포 면역성을 유도하는 약학적 조성물.
  7. 제 6항에 있어서, 상기 유효한 면역화 양은 2.5 x107 내지 1x 108 PFU/dose의 범위로 됨을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  8. 제 6항 또는 제7항에 있어서, HCV 감염에 대해 예방적 면역성을 유도하는 약학적 조성물.
  9. 제 6항 또는 제7항에 있어서, 만성 간염 C, 간경변 및 간암을 갖는 환자에 있어 HCV에 대해 면역성을 유도하는 약학적 조성물.
  10. 제 6항 또는 제7항에 있어서, 다른 치료 또는 백신화 전, 동시에 또는 후에 HCV에 대해 면역성을 유도하는 약학적 조성물.
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