KR20070003777A - 파클리탁셀 요법에 의한 부작용을 예측하는 방법 및 키트 - Google Patents

파클리탁셀 요법에 의한 부작용을 예측하는 방법 및 키트 Download PDF

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Abstract

피험자에 있어서의 파클리탁셀 요법에 의한 과립구 감소증의 발증의 리스크를 예측하는 방법이 개시된다. 본 발명의 방법은 피험자로부터 단리된 유전자에 대하여, CYP2C8 유전자 중 5 개의 SNP (IMS-JST111898 (서열 번호 1), IMS-JST105874 (서열 번호 2), IMS-JST082397 (서열 번호 3), IMS-JST071852 (서열 번호 4), IMS-JST071853 (서열 번호 5)), 및 BUB1b 유전자 중 5 개의 SNP (IMS-JST074538 (서열 번호 6), IMS-JST079837 (서열 번호 7), IMS-JST044164 (서열 번호 8), IMS-JST063023 (서열 번호 9), IMS-JST042569 (서열 번호 10)) 에 대하여 유전자 다형을 동정하는 것을 포함한다. 또, 본 발명의 방법에 사용되는 시약을 포함하는 키트도 개시된다.

Description

파클리탁셀 요법에 의한 부작용을 예측하는 방법 및 키트{METHOD AND KIT FOR ESTIMATING SIDE EFFECT BY PACLITAXEL THERAPY}
본 발명은 유전자 다형을 동정함으로써, 파클리탁셀 요법의 부작용의 하나인 과립구 감소증의 발증의 리스크를 예측하는 방법, 및 이러한 방법을 실시하기 위한 진단용 키트에 관한 것이다.
파클리탁셀은 택솔 (등록 상표) 등의 명칭으로도 알려진 디테르펜 유도체의 알칼로이드이다. 미소관 단백 중합을 촉진함으로써 미소관의 안정화ㆍ과잉 형성을 일으키고, 방추체의 기능에 장애를 일으킴으로써 세포 분열을 저해하는 항종양제로서 (Manfredi, J.J. and Horwitz, S.B. Taxol : an antimitotic agent with a new mechanism of action. Pharmac. Ther., 25 : 83-125, 1984), 유방암, 난소암, 위암 및 비소세포 폐암 등의 여러 가지 암의 치료에 널리 사용되고 있다. 파클리탁셀 요법의 최적 투여량 및 투여 스케줄에 대해서는, 현재도 여러 가지 임상 시험이 진행 중이다. 파클리탁셀 요법에 의한 부작용의 주요한 것 중 하나는 과립구 감소증으로, 이 부작용의 발증 때문에 투여량이 제한되어 있다 (예를 들어, Seidman, A.D., et al. Dose-dense therapy with weekly 1-hour paclitaxel infusions in the treatment of metastatic breast cancer. J Clin Oncol, 16 : 3353-3361, 1998).
파클리탁셀 요법에 의한 부작용을 저하시키는 방법으로서, 환자의 유전자를 분석함으로써 부작용을 예측하여, 그 약제의 사용 또는 투여량을 결정하는 방법이 연구되고 있다. 이러한 연구로부터, 약제 대사에 관련되거나, 또는 약제 활성과 기능적으로 관련되어 있는 유전자가, 약제의 부작용의 발증의 원인일 가능성이 분명해졌다. 예를 들어, 시토크롬 P450 패밀리 등의 약제 대사 관련 유전자에 있어서의 몇몇의 cSNPs 가, 높은 빈도로 몇 개의 약제의 부작용과 상관되어 있다는 것이 나타나 있다 (Relling, M.V. and Dervieux, T. Pharmacogenetics and cancer therapy. Nat Rev Cancer, 1 : 99-108, 2001). 그러나, 이들의 고리스크 유전자 다형의 대립 유전자(allele) 빈도는 비교적 낮기 때문에, 대부분의 환자에 대해 부작용을 발생시킬 가능성을 설명하기에는 불충분하다. 따라서, 파클리탁셀 요법에 의한 부작용의 발증과 유전자 다형의 상관에 관한 추가적인 연구가 필요로 되고 있다.
일본 공개특허공보 2003-93068호는, 대사 효소 CYP2C8 의 다형을 조사함으로서, 환자의 파클리탁셀에 대한 감수성을 예측하는 방법을 개시한다. 그러나, 이 출원에 개시되는 아미노산 변이를 수반하는 유전자 변이는 모두 대립 유전자 빈도가 낮다. 예를 들어, 이 출원의 발명자들은, 이들의 대립 유전자 빈도가 ＜0.007 이라고 보고하고 있다 (Soyama, A., Y. Saito, et al. (2001). "Non-synonymous single nucleotide alterations found in the CYP2C8 gene result in reduced in vitro paclitaxel metabolism." Biol Pharm Bull 24 (12), 1427-1430).
본 발명의 목적은, 파클리탁셀 요법에 있어서의 과립구 감소증의 발증의 가능성을 예측하기 위한 방법 및 키트를 제공하는 것이다.
발명의 개시
본 발명은 피험자로부터 단리된 유전자에 대하여, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 1 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 2 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 3 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 5 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 7 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 8 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 9 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, 및 BUB1b 유전자 중의 서열 번호 10 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 그 이상의 유전자 다형을 동정하는 공정을 포함하는, 피험자에 있어서의 파클리탁셀 요법에 의한 과립구 감소증의 발증의 리스크를 예측하는 방법을 제공한다. 이들의 서열은 이하의 표 1 에 나타난다.
Figure 112006039298438-PCT00001
본 발명의 하나의 양태에 있어서는, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 1 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 G/G 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 높다고 예측되고, A/G 또는 A/A 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 낮다고 예측된다.
본 발명의 다른 양태에 있어서는, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 2 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 T/T 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 높다고 예측되고, C/T 또는 C/C 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 낮다고 예측된다.
본 발명의 다른 양태에 있어서는, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 3 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 G/G 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 높다고 예측되고, A/G 또는 A/A 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 낮다고 예측된다.
본 발명의 다른 양태에 있어서는, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 T/T 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 높다고 예측되고, A/T 또는 A/A 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 낮다고 예측된다.
본 발명의 다른 양태에 있어서는, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 5 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 G/G 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 높다고 예측되고, A/G 또는 A/A 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 낮다고 예측된다.
본 발명의 다른 양태에 있어서는, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 A/A 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 높다고 예측되고, A/G 또는 G/G 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 낮다고 예측된다.
본 발명의 다른 양태에 있어서는, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 7 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 T/T 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 높다고 예측되고, G/T 또는 G/G 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 낮다고 예측된다.
본 발명의 다른 양태에 있어서는, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 8 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 C/C 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 높다고 예측되고, C/T 또는 T/T 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 낮다고 예측된다.
본 발명의 다른 양태에 있어서는, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 9 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 C/C 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 높다고 예측되고, C/T 또는 T/T 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 낮다고 예측된다.
본 발명의 다른 양태에 있어서는, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 10 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 T/T 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 높다고 예측되고, C/T 또는 C/C 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 낮다고 예측된다.
또한, 본 발명에 있어서는, 본 발명에 의해 동정된 SNPs 의 1 또는 그 이상을 임의로 조합하여, 과립구 감소증의 발증의 리스크를 보다 높은 정밀도로 예측할 수 있다. 후술하는 실시예에 나타나는 바와 같이, 특정한 SNPs 의 조합과 과립구 감소증의 발증률의 상관이 특히 높은 것이 발견되었다. 즉, 본 발명은, 피험자로부터 단리된 유전자에 대하여, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기 및 BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형을 동정하는 것을 포함하는, 피험자에 있어서의 파클리탁셀 요법에 의한 과립구 감소증의 발증의 리스크를 예측하는 방법을 제공한다.
바람직하게는, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 T/T 이고, 또한 BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 A/A 또는 G/G 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 높다고 예측된다. 또, 바람직하게는, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 A/T 또는 A/A 이고, 또한 BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 A/G 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 낮다고 예측된다.
또 다른 관점에서는, 본 발명은 피험자에 있어서의 파클리탁셀 요법에 의한 과립구 감소증의 발증의 리스크를 예측하기 위한 진단용 키트를 제공한다. 이키트는, 피험자로부터 단리된 유전자에 대하여, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 1 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 2 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 3 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 5 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 7 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 8 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 9 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, 및 BUB1b 유전자 중의 서열 번호 10 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 그 이상의 유전자 다형을 동정하기 위한 시약을 함유하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 키트에 함유되는 시약은, 바람직하게는 이하의 핵산 분자에서 선택되는 1 또는 그 이상의 핵산 분자이다 :
CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 1 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ;
CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 2 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ;
CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 3 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ;
CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ;
CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 5 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ;
BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ;
BUB1b 유전자 중의 서열 번호 7 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ;
BUB1b 유전자 중의 서열 번호 8 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ;
BUB1b 유전자 중의 서열 번호 9 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ;
BUB1b 유전자 중의 서열 번호 10 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자.
여기에서, 핵산 분자가 염기를 「포함한다」라는 것은, 핵산 분자의 서열 중에 표적으로 하는 SNP 부위에 대응하는 염기가 포함되어 있는 것을 의미하고, 이 염기는 핵산 분자의 내부에 위치하고 있어도 되고, 5' 말단 또는 3' 말단에 위치하고 있어도 된다. 이러한 핵산 분자는, SNP 의 타이핑에 있어서, 하이브리다이제이션 프로브, TaqMan 프로브 등으로서 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 핵산 분자는 SNP 부위의 주위의 영역과는 관계 없는 서열을 추가로 함유하고 있어도 된다. 이러한 핵산 분자는, SNP 의 타이핑에 있어서, 인베이더법에 있어서의 프라이머리 프로브로서 사용할 수 있다. 또, 핵산 분자가 염기에 「인접하는」이란, 핵산 분자가, 표적으로 하는 SNP 부위에 대응하는 염기를 포함하지 않지만, SNP 부위에 인접하는 상류 또는 하류의 연속하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것을 의미한다. 서열 번호 1 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 「인접하는」서열의 예는, 서열 번호 1 로 규정되는 서열의 1-10 번째의 염기를 포함하는 서열이고, 다른 예는 12-21 번째의 염기를 포함하는 서열이다. 이러한 핵산 분자는 SNP 의 타이핑에 있어서, 인베이더법에 있어서의 인베이더 프로브 또는 MALDI-TOF/MS 법 및 프라이머 익스텐션법에 있어서의 프라이머로서 사용할 수 있다. 이들 프로브는, 본 발명의 교시에 따라, CYP2C8 유전자 또는 BUB1b 유전자의 서열을 참조함으로써 설계할 수 있다.
또 바람직하게는, 본 발명의 키트에 함유되는 시약은, 이하의 프라이머 핵산 분자에서 선택되는 1 또는 그 이상의 핵산 분자이다 :
CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 1 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ;
CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 2 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ;
CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 3 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ;
CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ;
CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 5 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ;
BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ;
BUB1b 유전자 중의 서열 번호 7 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ;
BUB1b 유전자 중의 서열 번호 8 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ;
BUB1b 유전자 중의 서열 번호 9 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ;
BUB1b 유전자 중의 서열 번호 10 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍.
이들의 프라이머쌍은 여러 가지의 타이핑법에 있어서 표적 유전자를 증폭시키기 위해 사용할 수 있다. 이들의 프라이머쌍은, 본 발명의 교시에 따라, CYP2C8 유전자 또는 BUB1b 유전자의 서열을 참조함으로써 설계할 수 있다. 증폭을 위한 바람직한 프라이머쌍의 설계 방법은 당해 기술분야에서 잘 알려져 있다.
발명의 상세한 설명
본 발명에 있어서는, 파클리탁셀 요법에 의한 부작용과 관련되는 유전자 다형을 검색하기 위해, 우선 약제 대사 관련 유전자 및 약리학적으로 파클리탁셀의 작용 기전에 관련되는 유전자 298 개를 선정하였다. 다음으로, 이들 298 개의 유전자 내에 존재하는 SNPs 를 JSNP 데이터베이스 상에서 검색을 실시하여, 2,727 개의 SNPs 를 추출하였다. 파클리탁셀을 투여한 54 명의 유방암 환자의 말초혈로부터 DNA 를 추출하여, SNPs 의 타이핑을 실시한 결과, 후술하는 실시예에 나타나는 바와 같이, CYP2C8 유전자 내에 맵핑된 5 개의 SNP (IMS-JST111898 (서열 번호 1), IMS-JST105874 (서열 번호 2), IMS-JST082397 (서열 번호 3), IMS-JST071852 (서열 번호 4), IMS-JST071853 (서열 번호 5)), 및 BUB1b 유전자 내에 맵핑된 5 개의 SNP (IMS-JST074538 (서열 번호 6), IMS-JST079837 (서열 번호 7), IMS-JST044164 (서열 번호 8), IMS-JST063023 (서열 번호 9), IMS-JST042569 (서열 번호 10)) 에 대하여, 과립구 감소증의 발증의 상관이 발견되었다.
또한, 상기의 IMS-JST 번호는, JSNP 데이터베이스 (http://snp.ims.u-tokyo.ac.jp/) 에 있어서의 엔트리 번호로서, NCBI 의 dbSNP 데이터베이스를 비롯한 각종 데이터베이스로부터 검색할 수 있다. 본 명세서에 있어서는, 본 발명에서 발견된 이들의 SNPs 의 위치를 보다 명확히 나타내기 위해, 게놈 서열 중의 당해 SNP 부위 및 그 전후 각 10 염기를 포함하는 서열을 각각 서열 번호 1-10 으로서 나타내고, 이들의 서열 번호를 참조하여 SNPs 를 나타내고 있다. 나중에 시퀀스 에러나 새로운 다형이 발견됨으로써, 이들의 서열 번호에 나타나는 염기 서열의 일부가 변동될지도 모른다는 것은, 당업자에게는 분명할 것이다.
CYP2C8 (시토크롬 P450, 패밀리 2, 서브패밀리 C, 폴리펩티드 8) 은, 여러 가지의 약품의 대사에 관여하는 시토크롬 P450 으로서, 염색체 위치 10q23.33 에 맵핑되어 있다. 파클리탁셀의 대사는 주로 간 세포에서 이루어지고, 대사물은 담즙 중에 배설된다. 파클리탁셀의 해독화에는 CYP2C8 에 의한 가수분해능이 중요한 기능을 하고 있으며, 이에 의해 파클리탁셀이 해독화된 6α-히드록시파클리탁셀로 분해된다 (Rahman, A., et al. Selective biotransformation of taxol to 6α-hydroxytaxol by human cytochrome P450 2C8. Cancer Res, 54 : 5543-5546, 1994). 이 때문에, CYP2C8 단백질이 파클리탁셀의 혈중 농도의 결정에 중요한 기능을 하고 있다고 생각된다. 이것은 CYP2C8 이 부작용과도 관련되어 있을 가능성을 시사하고 있다. CYP2C8 유전자에는 몇 개의 cSNP 가 있는 것이 알려져 있다. 예를 들어, 아미노산의 치환을 수반하는 5 개소의 cSNP 중 1 개 (416G＞A) 는, 파클리탁셀의 대사 속도가 와일드 타입에 비해 늦어지는 것으로 알려져 있다 (Bahadur, N., et al. CYP2C8 polymorphisms in Caucasians and their relationship with paclitaxel 6alpha-hydroxylase activity in human liver microsomes. Biochem. Pharmacol., 64 : 1579-1589, 2002 ; Dai, D.,. et al. Polymorphisms in human CYP2C8 decrease metabolism of the anticancer drug paclitaxel and arachidonic acid. Pharmacogenetics, 11 : 597-607, 2001). 그러나, 일본인을 대상으로 한 대립 유전자 빈도의 해석 연구에 있어서, 이들의 cSNPs 의 빈도는 매우 낮은 것이 알려져 있다. 실제로, 본 발명에서 실시한 타이핑에 있어서도 54 검체로부터 1196A＞G 의 변이 대립 유전자가 1 개 발견되었을 뿐이다. 이들 사실로부터 CYP2C8 유전자에 존재하는 이미 알려진 cSNPs 는 파클리탁셀의 과립구 감소증에는 거의 관여하고 있지 않은 것이 시사된다. 본 발명에 의해 발견된 SNPs 는, 미지의 메카니즘으로 과립구 감소증과 관련되어 있는 것으로 생각된다.
BUB1b 유전자는 출아 효모에서 유사(有絲) 분열의 체크 포인트에 관련되어 있는 BUB 유전자의 호모로그로서, 염색체 위치 15q15 에 맵핑되어 있다 (Cahill, D. P.,. et al Mutations of mitotic checkpoint genes in human cancers. Nature, 392 : 300-303, 1998 ; Hoyt, M. A., et al. S. cerevisiae genes required for cell cycle arrest in response to loss of microtubule function. Cell, 66 : 507-517, 1991. ; Li, R. and Murray, A. W. Feedback control of mitosis in budding yeast. Cell, 66 : 519-531, 1991). 파클리탁셀의 항종양 효과는 미소관의 중합을 촉진시킴으로써 발휘되고, 미소관이 파클리탁셀의 표적 분자이다. 이들의 사실은, BUB1b 유전자와 파클리탁셀의 약리 작용이 기능적인 면에서 관련이 있는 것을 시사하고 있다.
본 발명에 있어서, 파클리탁셀 요법에 의한 부작용과의 상관이 발견된 SNPs 의 위치 및 다형의 정보를 이하의 표에 나타낸다.
Figure 112006039298438-PCT00002
Figure 112006039298438-PCT00003
Figure 112006039298438-PCT00004
Figure 112006039298438-PCT00005
Figure 112006039298438-PCT00006
Figure 112006039298438-PCT00007
Figure 112006039298438-PCT00008
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Figure 112006039298438-PCT00010
Figure 112006039298438-PCT00011
본 발명의 방법에 있어서는, 파클리탁셀에 의한 치료가 계획되어 있거나, 또는 파클리탁셀을 투여받고 있는 피험자로부터 말초 혈액, 다른 체액, 세포, 조직 등을 채취하고, 이들의 시료로부터 정해진 방법에 따라 게놈 DNA 를 조제한다. 필요한 경우에는, 타이핑해야 할 부위의 서열을 증폭시킨다. 유전자 다형의 타이핑은, 당해 기술분야에서 알려지거나 또는 개발되고 있는 여러 가지 방법 중 어느 하나를 사용하여 용이하게 실시할 수 있다. 타이핑 방법의 예로는, 직접 시퀀스법, 인베이더법, TaqMan 법, MALDI-TOF/MS 법, 프라이머 익스텐션법 및 하이브리다이제이션법 등을 들 수 있는데, 이들에 한정되지 않는다.
직접 시퀀스법을 사용하는 경우에는, SNP 부위를 포함하는 영역의 DNA 를 PCR 에 의해 증폭시키고, 이 PCR 산물의 서열을 직접 시퀀스함으로써, SNP 를 동정할 수 있다.
인베이더법을 사용하는 경우에는, SNP 부위로부터 3' 측에 특이적인 서열을 포함하는 인베이더 프로브와, 템플레이트의 SNP 부위로부터 5' 측에 특이적인 서열 및 관계 없는 플랩 서열을 포함하는 프라이머리 프로브를 준비한다. 이들의 프로브와, 플랩과 상보적인 서열과 자기 상보적인 서열을 포함하여 형광 색소와 퀀처의 양방으로 표지되어 있는 FRET 프로브, 및 템플레이트의 존재 하에서 클리베이즈(Cleavase)를 작용시킨다. 프라이머리 프로브가 템플레이트와 하이브리다이즈하면, SNP 부위에 인베이더 프로브의 3' 말단이 침입하고, 이 구조가 클리베이즈에 의해 절단되어 플랩이 유리된다. 플랩은 FRET 프로브와 결합하여, 클리베이즈에 의해 형광 색소 부분이 절단되어 형광이 발생된다. 플랩-FRET 프로브를 2 세트 준비하고, 다른 형광 색소로 표지함으로써, 1 회의 분석(assay)으로 각 호모 접합체와 헤테로 접합체를 구별할 수 있다.
TaqMan 법을 사용하는 경우에는, 형광 색소와 퀀처에 의해 표지한 대립 유전자 특이적 프로브를 표적 부위에 하이브리다이즈시키고, 이 부위를 포함하는 영역을 증폭시키도록 설계한 프라이머로 PCR 반응을 실시한다. 프라이머로부터의 신장 반응이 진행됨과 동시에, TaqDNA 폴리머라아제의 5' 엑소 뉴클레아제 활성에 의해, 하이브리다이즈한 프로브가 절단된다. 형광 색소가 퀀처와 멀어지면 형광이 생기고, 이것을 검출함으로써 SNP 를 동정할 수 있다.
MALDI-TOF/MS 법을 사용하는 경우에는, SNP 부위에 인접하는 프라이머를 제작하고, PCR 증폭시킨 샘플 DNA 를 주형으로 하고, ddNTP 를 사용하여 1 염기분 만큼 프라이머를 신장시킨다. 신장된 반응 생성물을 MALDI-TOF/MS 로 질량 분석함으로써, 부가한 ddNTP 를 식별한다.
하이브리다이제이션법을 사용하는 경우에는, SNP 부위를 포함하는 영역의 DNA 를 PCR 에 의해 증폭시키고, SNP 부위에 특이적인 프로브를 사용하여 하이브리다이제이션에 의해 증폭 산물을 검출한다. 또한, 이들의 방법에 추가하여, RFLP 법, DNA 칩법, 분자 비콘법, 라이게이션법 등의 여러 가지 방법이 개발되어 있으며, 본 발명에서는 이들 모두 사용할 수 있다.
본 발명의 방법에 따르면, 본 발명에서 동정된 SNP 부위의 1 또는 그 이상에 대하여 타이핑을 실시하고, 후술하는 실시예에서 나타나는 통계 데이터를 참조하여, 파클리탁셀 요법에 의한 부작용의 발증의 리스크를 예측할 수 있다. 본 발명의 방법은, 바람직하게는 몽골로이드(Mongoloid)에, 특히 바람직하게는 일본인에 적용된다. 보다 바람직하게는, 본 발명에서 동정된 CYP2C8 유전자 중의 SNP 와, BUB1b 유전자 중의 SNP 에 대하여 타이핑을 실시하고, 이들의 결과를 조합함으로써, 파클리탁셀 요법에 의한 부작용의 발증의 리스크를 예측한다. 그러한 조합의 예로는,
IMS-JST111898 (서열 번호 1) 과 IMS-JST074538 (서열 번호 6),
IMS-JST111898 (서열 번호 1) 과 IMS-JST079837 (서열 번호 7),
IMS-JST111898 (서열 번호 1) 과 IMS-JST044164 (서열 번호 8),
IMS-JST111898 (서열 번호 1) 과 IMS-JST063023 (서열 번호 9),
IMS-JST111898 (서열 번호 1) 과 IMS-JST042569 (서열 번호 10),
IMS-JST105874 (서열 번호 2) 와 IMS-JST074538 (서열 번호 6),
IMS-JST105874 (서열 번호 2) 와 IMS-JST079837 (서열 번호 7),
IMS-JST105874 (서열 번호 2) 와 IMS-JST044164 (서열 번호 8),
IMS-JST105874 (서열 번호 2) 와 IMS-JST063023 (서열 번호 9),
IMS-JST105874 (서열 번호 2) 와 IMS-JST042569 (서열 번호 10),
IMS-JST082397 (서열 번호 3) 과 IMS-JST074538 (서열 번호 6),
IMS-JST082397 (서열 번호 3) 과 IMS-JST079837 (서열 번호 7),
IMS-JST082397 (서열 번호 3) 과 IMS-JST044164 (서열 번호 8),
IMS-JST082397 (서열 번호 3) 과 IMS-JST063023 (서열 번호 9),
IMS-JST082397 (서열 번호 3) 과 IMS-JST042569 (서열 번호 10),
IMS-JST071852 (서열 번호 4) 와 IMS-JST074538 (서열 번호 6),
IMS-JST071852 (서열 번호 4) 와 IMS-JST079837 (서열 번호 7),
IMS-JST071852 (서열 번호 4) 와 IMS-JST044164 (서열 번호 8),
IMS-JST071852 (서열 번호 4) 와 IMS-JST063023 (서열 번호 9),
IMS-JST071852 (서열 번호 4) 와 IMS-JST042569 (서열 번호 10),
IMS-JST071853 (서열 번호 5) 과 IMS-JST074538 (서열 번호 6),
IMS-JST071853 (서열 번호 5) 과 IMS-JST079837 (서열 번호 7),
IMS-JST071853 (서열 번호 5) 과 IMS-JST044164 (서열 번호 8),
IMS-JST071853 (서열 번호 5) 과 IMS-JST063023 (서열 번호 9),
IMS-JST071853 (서열 번호 5) 과 IMS-JST042569 (서열 번호 10)
를 들 수 있다.
본 발명은 또, 상기 기술한 타이핑법에서 사용하기 위한 시약을 포함하는, 파클리탁셀 요법에 의한 부작용의 발증의 리스크를 예측하기 위한 키트를 제공한다. 시약의 예는 프로브 및 프라이머이다. 본 발명에서 동정된 SNP 부위를 포함하는 유전자의 영역을 증폭시키기 위해 사용되는 프라이머는, 바람직하게는 15-30 염기의 길이로서, 표적 SNP 부위를 사이에 두고 또한 PCR 반응에 의해 원하는 길이의 증폭 산물이 생성되도록 설계된다. 인베이더법에서 사용되는 프라이머리 프로브는, 표적 SNP 부위로부터 5' 측의 표적 영역에 특이적인 서열을 포함하고, 추가로 관계 없는 플랩 서열을 포함한다. 또, 인베이더법에서 사용되는 인베이더 프로브 및 MALDI-TOF/MS 법 및 프라이머 익스텐션법에서 사용되는 프라이머는, 표적 SNP 부위에 대응하는 염기를 포함하지 않지만, SNP 부위에 인접하는 상류 또는 하류의 연속하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 이러한 프로브 및 프라이머의 설계 방법 및 합성 방법은 당해 기술분야에서 잘 알려져 있다.
본 명세서에서 명시적으로 인용되는 모든 특허 및 참고 문헌의 내용은 모두 본 명세서의 일부로서 여기에 인용한다. 또, 본 출원이 갖는 우선권 주장의 기초가 되는 출원인 일본국 특허출원 2003-375369호의 명세서 및 도면에 기재된 내용은 모두 본 명세서의 일부로서 여기에 인용한다.
이하에, 실시예에 의해 본 발명을 보다 상세하게 설명하는데, 이들의 실시예는 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.
임상 샘플
54 명의 유방암 환자가 파클리탁셀의 수술 전 화학 요법의 임상 시험에 등록되었다. 환자 선택의 조건에 대하여 요약하면, 이하와 같다. 1) 70 세 이하이고 병리 조직학적으로 확인된 스테이지 Ⅱ 그리고 Ⅲa 의 유방암 환자일 것, 2) 생리학적 기능이 적절할 것 (WBC＞4,000㎣, 혈소판 카운트＞10,000㎣, 헤모글로빈 레벨＞10g/dl, 혈청 크레아티닌 농도＜1.2㎎/dl, 혈청 총 빌리루빈 레벨＜1.5㎎/dl, GOT/GPT＜60/70). 본 치료 전에 화학 요법 또는 방사선 요법이 시행되어 있지 않을 것 등이다. 즉, 파클리탁셀의 수술 전 화학 요법의 임상 시험이 시행된 54 명은 임상상 그리고 조직학적으로도 거의 동일한 스테이지로서, 전증예(前症例) 모두 화학 요법의 시행 이력은 없었다. 환자는 1 주 동안에 1 회, 80㎎/㎡ 의 파클리탁셀을 1 시간에 걸쳐 점적 투여되었다. 이 투여를 12 주간 계속하였다. 이들 환자에게 가장 고빈도로 관찰된 부작용은 과립구 감소증으로서, 24 명의 환자에게서 관찰되었다.
부작용의 정의
부작용의 유무를 확인하기 위해 각 환자에 대하여 매주, 백혈구 수, 적혈구 수, 헤모글로빈량, 혈소판 수가 측정되었다. 치료 중에 관찰된 부작용은 미국 National Cancer Institute 의 Common Toxicity Criteria (NCI-CTC) 에 기초하여 평가되어 등급 분류가 실시되었다 (Trotti, A., et al. Common toxicity criteria : version 2.0. an improved reference for grading the acute effects of cancer treatment : impact on radiotherapy. Int J Radiat Oncol Biol Phys, 47 : 13-47, 2000 참조). 모든 임상 정보는 SCTS21 시스템 (미츠이 정보 개발) 을 사용하여 익명화되어, 이후의 해석에 사용되었다. 과립구 감소증의 그레이드가 NCI-CTC 의 분류로 그레이드 1∼4 까지를 나타낸 환자를 과립구 감소증 있음으로 하고, 그레이드 0 의 환자를 과립구 감소증 없음으로 하였다. 과립구 감소증 있는 군과 없는 군 사이에서 연령, 발증 연령 사이에 상관은 인정되지 않았다.
SNPs 의 타이핑
파클리탁셀의 부작용과 관련된 유전자 다형을 검색하기 위해, 우선 약제 대사 관련 유전자 및 약리학적으로 파클리탁셀의 작용 기전에 관련되는 유전자 298 개를 선정하였다. 다음으로, 이들 298 개의 유전자 내에 존재하는 SNPs 를 JSNP 데이터베이스 상에서 검색하여, 2,727 개의 SNPs 를 추출하였다.
본 연구에 사용한 54 증례에 대하여 인베이더법을 사용하여 298 유전자 내에 있는 2,727 개소의 SNP 의 타이핑을 실시하였다. 54 명의 환자로부터 말초혈 14㎖ 를 채취하였다. 말초혈로부터 DNA 를 추출하는 방법에 대해서는 표준 방 법을 사용하였다. 인베이더법에 의한 타이핑을 실시하기 전에, 표적으로 하는 SNP 부위의 주변 약 500bp 를 PCR 법으로 증폭시켰다. 이 때, 10ng 의 DNA 를 템플레이트로서 사용하고, 또 48 개의 프라이머 세트를 사용한 멀티플렉스 PCR 을 실시함으로써 48 개소의 DNA 단편을 동시에 증폭시켰다. 각 SNP 부위 주변을 증폭시키기 위해 사용한 프라이머는 JSNP 데이터베이스에 기재되어 있는 서열에 기초하여 제작한 것을 사용하였다. PCR 의 반응은 이하의 조성으로 실시하였다 (6.7mM MgCl2, 67mM TrisHCl, 16.6mM NH4SO4, 10mM 2-메르캅토에탄올, 6.7μM EDTA, 1,5mM dNTPs, 10% DMSO, 1pmol 의 각 프라이머, 및 0.05U 의 Ex-Taq). PCR 의 반응은 최초의 디네이쳐(denature) 반응은 94℃ 에서 2 분간 실시하고, 다음으로 94℃ 에서 15 초, 60℃ 에서 15초, 72℃ 에서 2 분의 3 단계를 35 회 반복하였다. Multimek96 반응 로봇을 사용하여 PCR 산물을 멸균 증류수로써 희석한 후, TANGO 분주기를 사용하여 인베이더 반응용 카드에 나눠 따랐다. 다음으로, Cartesian 분주기를 사용하여 인베이더 반응 시약을 인베이더용 반응 카드에 나눠 따랐다. 인베이더 반응 시약에는, 대립 유전자 특이적 올리고뉴클레오티드, Cleavase Ⅶ, 그리고 FAM 또는 Redmond Red 로 라벨된 FRET 카세트가 포함되어 있다. 이들의 시약은 Third Wave 사로부터 구입하였다. 형광 시그널은 TECAN Ultra 로 검출하고, 제노타입은 FAM 과 Redmond Red 의 신호 강도를 2 차원 차트에 전개한 것을 사용하여 결정하였다.
제노타이핑을 실시한 2,727 SNPs 중 2,123 SNPs 에 대해서는 80% 이상의 증 례에서 타이핑을 결정할 수 있었다. 제노타입의 정확성에 대하여 검토를 하기 위해, 랜덤하게 선택한 3 SNPs 의 타이핑 데이터를 RFLP 법으로 결정한 제노타입과 비교한 결과, 조사한 약 1,000 초과의 제노타입 모두에서 양 타이핑법에 의한 결과가 일치하였다. 이 사실로부터 타이핑의 정확성은 매우 높은 것이라는 것이 시사되었다. 또, 각 SNP 에 대하여 Hardy-Weinberg 평형 상태인지의 여부에 대하여 카이 스퀘어 검정을 사용하여 실시한 결과, 조사한 모든 SNPs 가 Hardy-Weinberg 의 평형 상태에 있는 것이 시사되었다.
부작용과 관련된 SNPs 의 검색 및 상관 해석
우선 최초로, 각 유전자마다 해플로 타입 블록 구조의 구축을 실시하였다. 동일 유전자 내에 맵핑된 SNP 에 대하여, 임의의 2 개의 SNP 사이의 연쇄 불평형 계수 |D'| 를 모든 조합에 대하여 추정하고, 이것을 SNP 의 위치 순서대로 나열한 매트릭스를 제작하였다. 만약 2 개의 SNP 사이의 |D'| 가 0.9 이상이면, 2 유전자 사이는 해플로 타입 블록을 형성하고 있는 것으로 추정하였다. 그 결과, 타이핑을 실시한 298 유전자는 419 개의 해플로 타입 블록으로 분할되는 것을 알 수 있었다.
다음으로, 부작용과 상관하는 SNP 를 동정하기 위해, 2 단계의 스크리닝을 실시하였다. 제 1 단계에서는, 부작용이 있는 군과 없는 군 사이에서의 제노타입의 분포에 대하여, 2×3 분할표를 사용한 독립성의 검정을 실시하였다. 제 1 단계의 스크리닝에 의해 과립구 감소증과 상관을 인정하는 2 개소의 해플로 타입 블록이 발견되었다. 이들 해플로 타입 블록에는 각각 CYP2C8 유전자 내에 맵핑 된 5 개의 SNP, 및 BUB1b 유전자 내에 맵핑된 5 개의 SNP 가 포함되어 있었다. p 값의 최저값은 CYP2C8 유전자를 포함하는 해플로 타입 블록로에서는 0.0065, BUB1b 유전자를 포함하는 해플로 타입 블록에서는 0.010 이었다.
제 1 단계에서 동일 해플로 타입 블록 내 또는 동일 유전자 내에 있는 모든 SNP p 값이 0.05 이하인 것을 제 2 단계의 해석에 사용하였다. 제 2 단계에서는, 우성 유전 모델 또는 열성 유전 모델을 상정한 2×2 분할표를 제작하고, 독립성의 검정을 Fisher's exact test 를 사용하여 실시하였다.
Figure 112006039298438-PCT00012
Figure 112006039298438-PCT00013
제 2 단계의 해석에서는 2 개의 유전자에 맵핑된 SNP 모두 열성 유전 형식을 상정한 경우보다 높은 상관을 인정하였다. 가장 높은 상관을 인정한 SNP 는 CYP2C8 유전자에 맵핑된 SNP 에서는 IMS-JST071852 (p=0.0020, 오즈(odds)비 10.7) 이고, BUB1b 유전자에 맵핑된 SNP 에서는 IMS-JST074538 (p=0.0062, 오즈비 5.11) 이었다. CYP2C8 유전자 내에 존재하는 3 개소의 이미 공지된 cSNP 가, 본 연구에서 사용한 SNPs 와 관련이 있는지의 여부를 조사하기 위해, 이들 3 개소의 cSNPs 의 제노타입을 RFLP 법을 사용하여 결정하였다. 그 결과, 1 증례에 1196A＞G 부위의 헤테로 접합체를 인정했을 뿐이고, 다른 증례에서는 3 개소의 cSNP 모두에 와일드 타입이었다. 이 사실로부터 CYP2C8 유전자 내에 존재하는 3 개소의 cSNPs 의 빈도는 매우 낮은 것으로 추정되었다. 또, BUB1b 유전자 내에 맵핑되는 1 개의 SNP (IMS-JST044164) 에 있어서의 다형은 아미노산 치환 (Arg-＞Gln) 을 수반하는 cSNP 이다. 본 연구에서는 와일드 타입인 Arg 를 갖는 대립 유전자를 호모에 갖는 비율이 과립구 감소증을 나타내는 환자에게서 많은 것이 나타났다.
제노타입의 조합에 따른 부작용 출현 확률의 추정
CYP2C8 유전자 상의 1 개의 SNP 와 BUB1b 유전자 상의 1 개의 SNP 의 제노타입의 조합 각각에 대하여 부작용 출현의 확률을 계산하였다. 계산에는 로지스틱 회귀 모델을 사용하였다. 이 때, 4 개의 변수를 사용하여, CYP2C8 유전자 상의 SNP 의 대립 유전자 타입 2 종류와, BUB1b 유전자 상의 SNP 의 대립 유전자 타입 2 종류를 각각 할당하였다. likelihood ratio test 를 사용하여 가장 적절한 SNP 의 조합을 검색하고, CYP2C8 유전자 상의 IMS-JST071852 와 BUB1b 유전자 상의 IMS-JST074538 의 조합을 선택하였다 (p＜0.000532). 이 2 개의 SNPs 의 제노타입별 부작용 출현 확률을 표 13 에 나타낸다. 대립 유전자의 빈도는 JSNP 데이터베이스로부터 얻어진 각각의 SNP 의 대립 유전자 빈도로부터 추정하였다.
Figure 112006039298438-PCT00014
* 괄호 안의 숫자는 일본인 집단에서의 대립 유전자 빈도 예측을 나타낸다.
본 발명에 의해, 2 개의 유전자의 2 개의 SNP 를 사용하면 과립구 감소증 발증의 가능성을 확실히 예측할 수 있다는 것이 나타났다. CYP2C8 유전자 상의 IMS-JST071852 와 BUB1b 유전자 상의 IMS-JST074538 의 제노타입의 조합이 T/T 와 A/A, 또는 T/T 과 G/G 의 조합이면, 과립구 감소증을 발증할 확률이 매우 높다고 생각된다. JSNP 데이터베이스에 있어서 공개되어 있는 대립 유전자 빈도를 기초로 하면, 이들 2 개의 제노타입의 조합의 일본인에 있어서의 빈도는 각각 0.12 와 0.04 이다. 한편, 과립구 감소증을 발증하는 확률이 낮다고 생각되는 제노타입의 조합은, A/T 과 A/G 또는 A/A 와 A/G 의 조합이고, 이들 조합의 일본인에 있어서의 빈도는 각각 0.23 과 0.14 이다. 이상의 결과를 조합하면, 일본인의 약 절반의 수에 대해서는 파클리탁셀 치료에 있어서의 과립구 감소증의 발증의 유무를 예측할 수 있다는 것을 알 수 있다.
<110> Cancer Institute <120> Method and Kit for Prediction of Adverse Effect of Paclitaxel <130> PGK-9001WO <150> JP 2003-375369 <151> 2003-11-05 <160> 20 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 21 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 1 cagagcaagg rcaactgttt c 21 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 2 tacttttacc ytaaatatga g 21 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 3 gagatcagta raaacagtat g 21 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 4 gaaatttcca wagtgctggt t 21 <210> 5 <211> 21 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 5 attgctattt rtccatgatc a 21 <210> 6 <211> 21 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 6 ggagtcgtgt rcgtgccttg g 21 <210> 7 <211> 21 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 7 gactgacaca kaattattat t 21 <210> 8 <211> 21 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 8 aactggctgt ygtgcagtct c 21 <210> 9 <211> 21 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 9 aggaaggcaa yctgtttttt t 21 <210> 10 <211> 21 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 10 gggtacatct yagctatgcc a 21 <210> 11 <211> 121 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 11 aaaaagaaag gtcaaggcag gagcctcagc tcaggagaag aaacaaggag cagagcaagg 60 rcaactgttt ctcaaggaat aaaattattg ctctaaagag agaaagtgaa cttattttat 120 c 121 <210> 12 <211> 121 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 12 caaattcccc atgtgtccaa aaaaaatcag catggatgaa ataaacacat tacttttacc 60 ytaaatatga gttgagcatt acaggctagc taaacaatgt catttcgcat gtggttattc 120 a 121 <210> 13 <211> 121 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 13 ttgatgacac aatttaaaat gacatctttg tacaatggag gaggatgaca gagatcagta 60 raaacagtat ggcagtagca aaataagtaa agcactgatg aagtgtctgg atttcagcaa 120 a 121 <210> 14 <211> 121 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 14 ctcatcccca aggtaagctt gtttctctta cactatattt ctgtacttct gaaatttcca 60 wagtgctggt ttggttccaa ccctctaaca acacaagatg agagaagtgc aaaactcata 120 c 121 <210> 15 <211> 121 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 15 tttttggaat tagttggaat ttacatggca cctcctctgg ggctggtaga attgctattt 60 rtccatgatc aagagcacca ctcttaacac ccatgtgctc caccctcaca atacaccatc 120 a 121 <210> 16 <211> 121 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 16 tttgaaactt ggcggctagg ggtgtgggct tgaggtggcc ggtttgttag ggagtcgtgt 60 rcgtgccttg gtcgcttctg tagctccgag ggcaggttgc ggaagaaagc ccaggcggtc 120 t 121 <210> 17 <211> 121 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 17 taaatgtctt ccgaaaggtg attattcatg gtcttgggtt gaatatagtg gactgacaca 60 kaattattat tattattata tgcctaagct tctttgttag ctgtttttca agtttatggc 120 t 121 <210> 18 <211> 121 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 18 cccaccctta ataattccca cttcaaaata tccaaaaacc acactcacat aactggctgt 60 ygtgcagtct cttccacata tggagtgaaa ctgggaagca cagcgggtac agctatcagt 120 g 121 <210> 19 <211> 121 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 19 tcttcaagac aaccagataa attaatcaat attttgtgtt gtttgaaagc aggaaggcaa 60 yctgtttttt taataacaaa aagcttcaaa catataaaag gtcattaaac aatttaccaa 120 t 121 <210> 20 <211> 121 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 20 aggccatgaa agaagctgca tagctggtct ttaaaaaaaa aaggtacctt gggtacatct 60 yagctatgcc aacaactccc tccagtggtt aattttgaaa atgcacctgt aagacagagc 120 a 121

Claims (16)

  1. 피험자에 있어서의 파클리탁셀 요법에 의한 과립구 감소증의 발증의 리스크를 예측하는 방법으로서, 상기 피험자로부터 단리된 유전자에 대하여, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 1 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 2 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 3 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 5 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 7 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 8 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 9 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, 및 BUB1b 유전자 중의 서열 번호 10 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 그 이상의 유전자 다형을 동정하는 공정을 포함하는 방법.
  2. 제 1 항에 있어서,
    피험자로부터 단리된 유전자가, 이하의 (a)∼(e) :
    (a) CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 1 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 G/G 이다 ;
    (b) CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 2 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 T/T 이다 ;
    (c) CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 3 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 G/G 이다 ;
    (d) CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 T/T 이다 ;
    (e) CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 5 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 G/G 인 ;
    것 중 1 이상인 경우에, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 높다고 예측하는 방법.
  3. 제 1 항에 있어서,
    피험자로부터 단리된 유전자가, 이하의 (f)∼(j) :
    (f) CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 1 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 A/G 또는 A/A 이다 ;
    (g) CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 2 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 C/T 또는 C/C 이다 ;
    (h) CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 3 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 A/G 또는 A/A 이다 ;
    (i) CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 A/T 또는 A/A 이다 ;
    (j) CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 5 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 A/G 또는 A/A 인 ;
    것 중 1 이상인 경우에, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 낮다고 예측하는 방법.
  4. 제 1 항에 있어서,
    피험자로부터 단리된 유전자가, 이하의 (A)∼(E) :
    (A) BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 A/A 이다 ;
    (B) BUB1b 유전자 중의 서열 번호 7 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 T/T 이다 ;
    (C) BUB1b 유전자 중의 서열 번호 8 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 C/C 이다 ;
    (D) BUB1b 유전자 중의 서열 번호 9 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 C/C 이다 ;
    (E) BUB1b 유전자 중의 서열 번호 10 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 T/T 인 ;
    것 중 1 이상인 경우에, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 높다고 예측하는 방법.
  5. 제 1 항에 있어서,
    피험자로부터 단리된 유전자가, 이하의 (F)∼(J) :
    (F) BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 A/G 또는 G/G 이다 ;
    (G) BUB1b 유전자 중의 서열 번호 7 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 G/T 또는 G/G 이다 ;
    (H) BUB1b 유전자 중의 서열 번호 8 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 C/T 또는 T/T 이다 ;
    (I) BUB1b 유전자 중의 서열 번호 9 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 C/T 또는 T/T 이다 ;
    (J) BUB1b 유전자 중의 서열 번호 10 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 C/T 또는 C/C 인 ;
    것 중 1 이상인 경우에, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 낮다고 예측하는 방법.
  6. 피험자에 있어서의 파클리탁셀 요법에 의한 과립구 감소증의 발증의 리스크를 예측하는 방법으로서, 상기 피험자로부터 단리된 유전자에 대하여, (1) CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 1 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 2 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 3 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서 열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 5 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 그 이상의 유전자 다형을 동정하는 공정, 및 (2) BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 7 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 8 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 9 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, 및 BUB1b 유전자 중의 서열 번호 10 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 그 이상의 유전자 다형을 동정하는 공정을 포함하는 방법.
  7. 제 6 항에 있어서,
    피험자에 있어서의 파클리탁셀 요법에 의한 과립구 감소증의 발증의 리스크를 예측하는 방법으로서, 상기 피험자로부터 단리된 유전자에 대하여, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기 및 BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형을 동정하는 것을 포함하는 방법.
  8. 제 7 항에 있어서,
    CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어 서의 제노타입이 T/T 이고, 또한 BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 A/A 또는 G/G 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 높다고 예측하는 방법.
  9. 제 7 항에 있어서,
    CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 A/T 또는 A/A 이고, 또한 BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 제노타입이 A/G 일 때, 과립구 감소증의 발증의 리스크가 낮다고 예측하는 방법.
  10. 피험자에 있어서의 파클리탁셀 요법에 의한 과립구 감소증의 발증의 리스크를 예측하기 위한 진단용 키트로서, 상기 피험자로부터 단리된 유전자에 대하여, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 1 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 2 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 3 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 5 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 7 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유 전자 다형, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 8 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, BUB1b 유전자 중의 서열 번호 9 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형, 및 BUB1b 유전자 중의 서열 번호 10 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기에 있어서의 유전자 다형으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 그 이상의 유전자 다형을 동정하기 위한 시약을 함유하는 것을 특징으로 하는 키트.
  11. 제 10 항에 있어서,
    상기 시약이,
    CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 1 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ;
    CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 2 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ;
    CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 3 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ;
    CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ;
    CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 5 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ;
    BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ;
    BUB1b 유전자 중의 서열 번호 7 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ;
    BUB1b 유전자 중의 서열 번호 8 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ;
    BUB1b 유전자 중의 서열 번호 9 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ; 및
    BUB1b 유전자 중의 서열 번호 10 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ;
    로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 그 이상의 핵산 분자인 진단용 키트.
  12. 제 10 항에 있어서,
    상기 시약이,
    (1) CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 1 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ; CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 2 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ; CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 3 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ; CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ; 및 CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 5 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 그 이상의 핵산 분자 ; 및
    (2) BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ; BUB1b 유전자 중의 서 열 번호 7 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ; BUB1b 유전자 중의 서열 번호 8 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ; BUB1b 유전자 중의 서열 번호 9 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ; 및 BUB1b 유전자 중의 서열 번호 10 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 그 이상의 핵산 분자 ;
    를 포함하는 진단용 키트.
  13. 제 10 항에 있어서,
    상기 시약이,
    CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ; 및
    BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하거나 또는 이것에 인접하는 적어도 10 개의 연속하는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 ;
    를 포함하는 진단용 키트.
  14. 제 10 항에 있어서,
    상기 시약이,
    CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 1 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ;
    CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 2 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ;
    CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 3 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ;
    CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하다 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ;
    CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 5 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ;
    BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ;
    BUB1b 유전자 중의 서열 번호 7 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ;
    BUB1b 유전자 중의 서열 번호 8 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함 하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ;
    BUB1b 유전자 중의 서열 번호 9 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ;
    BUB1b 유전자 중의 서열 번호 10 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍
    으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 그 이상의 프라이머쌍인 진단용 키트.
  15. 제 10 항에 있어서,
    상기 시약이,
    (1) CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 1 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ; CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 2 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ; CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 3 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ; CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ; 및, CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 5 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ; 으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 그 이상의 프라이머쌍, 및
    (2) BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ; BUB1b 유전자 중의 서열 번호 7 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ; BUB1b 유전자 중의 서열 번호 8 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ; BUB1b 유전자 중의 서열 번호 9 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ; BUB1b 유전자 중의 서열 번호 10 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ; 으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 그 이상의 프라이머쌍 ;
    을 포함하는 진단용 키트.
  16. 제 10 항에 있어서,
    상기 시약이,
    CYP2C8 유전자 중의 서열 번호 4 로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍 ; 및 BUB1b 유전자 중의 서열 번호 6 으로 규정되는 서열의 11 번째의 염기를 포함하는 영역에 대응하는 DNA 를 증폭시키도록 설계된 PCR 프라이머쌍을 포함하는 진단용 키트.
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