KR20060134225A

KR20060134225A - 항균성 백신 조성물

Info

Publication number: KR20060134225A
Application number: KR1020067025082A
Authority: KR
Inventors: 데이비드 이. 로우어리; 트로이 이. 풀러; 마이클 제이. 케네디
Original assignee: 파마시아 앤드 업존 캄파니 엘엘씨
Priority date: 1999-04-09
Filing date: 2000-04-06
Publication date: 2006-12-27
Also published as: EP2281834A2; BR0009663A; US20090202594A1; KR20010112937A; KR20070011622A; MXPA01010207A; EP2281833A3; EP2281835B1; WO2000061724A2; US20070237793A1; EP2281833A2; JP2016019528A; CA2366520A1; JP5377433B2; US7763262B2; EP2281834B1; US8974798B2; CN1351653A; AU780887B2; AR029622A1

Abstract

그람 음성 세균의 독성 유전자를 찾아냄으로써, 이들 독성 유전자 및 그 산물을 표적으로 하는 신규 항균제를 확인하고 백신으로 유용한 신규 그람 음성 세균 돌연변이체를 제공할 수 있다.

그람 음성 세균, 독성 유전자, 항균제, 백신, 돌연변이

Description

항균성 백신 조성물{Anti-Bacterial Vaccine Compositions}

본 발명은 일반적으로 파스테우렐라 멀토시다(Pasteurella multocida) 및 악티노바실러스 플레우로뉴모니아(Actinobacillus pleuropneumoniae) 세균의 독성을 담당하는 유전자의 확인에 관한 것으로, 이를 통해 백신으로 유용한 신규 독성약화 돌연변이 균주를 제조하고 독성 유전자 및 그의 산물을 표적으로 하는 신규 항균제를 확인할 수 있다.

파스테우렐라(Pasteurella)과에는 광범위한 동물을 감염시키는 여러가지 중요한 병원균이 포함된다. 피. 멀토시다(P. multocida) 이외에, 이 과의 주요 구성원으로는 파스테우렐라 헤몰리티카(Pasteurella haemolytica), 악티노바실러스 플레우로뉴모니아(Actinobacillus pleuropneumoniae) 및 헤모필러스 솜너스(Haemophilus somnus)가 포함된다. 피. 멀토시다(P. multocida)는 다수의 야생 동물 및 가축의 정상 플로라(flora)에서 발견되는 그람 음성의 부동성 코코바실러스(coccobacillus) 균으로서, 세계적으로 다수의 동물 종에서 질병을 유발하는 것으로 알려져 있다[Biberstein, In M. Kilian, W. Frederickson, and E. L. Biberstein (ed.), Haemophilus, Pasteurella, and Actinobacillus. Academic Press, London, p. 61-73 (1981)]. 감염에 따른 질병 징후로는 패혈증, 기관지 폐렴, 비염 및 상처 감염이 포함된다(이 거명을 통해 본 명세서에 포함되는 문헌 [Shewen et al., In C. L. Gyles and C. O. Thoen (ed.), Pathogenesis of Bacterial Infections in Animals. Iowa State University Press, Ames, p. 216-225 (1993)] 참조).

피. 멀토시다(P. multocida)에 의한 감염은 일반적으로 스트레스 기간의 침입으로부터 기인하지만, 연무질 또는 접촉 노출에 의해 전염되거나 벼룩 또는 진드기를 매개로 전염될 수도 있다. 가금(家禽)의 경우, 피. 멀토시다(P. multocida)의 감염은 급성 내지 과급성 패혈증을 유발하며, 특히 가축수 과잉, 알 낳기, 털갈이 또는 심한 기후 변화와 관련된 스트레스 조건하에서 가축용 칠면조 및 야생 물새에서 일반적으로 나타난다. 소의 경우, 감염에 의해 유사한 출혈성 패혈증이 유발되고, 고열 및 우울증을 비롯한 증상이 나타나며, 일반적으로 그 후에 급사하게 된다. 이는 연무질 접촉을 통해 가장 잘 전염되지만, 심한 기후 변화 기간 동안 감염될 수도 있다. 토끼의 경우, 감염되면 반복적 화농성 비염을 유발하게 되고, 일반적으로 그 후에 결막염, 중이염, 부비강염, 피하 농양 및 만성 기관지 폐렴을 수반한다. 심하게 감염되는 경우, 토끼는 급성 섬유성 기관지 폐렴, 패혈증 또는 내독소 혈증으로 인하여 죽게된다. 질병은 일반적으로 스트레스 기간에 발병한다. 돼지의 경우, 일반적인 피. 멀토시다(P. multocida) 관련 질병으로는 위축성 비염 및 세균성 폐렴이 포함된다. 또한, 유사한 폐렴 증상이 개, 고양이, 염소 및 양에서 발견된다. 피. 멀토시다(P. multocida)는 통상 많은 동물의 구강 플로라에서 발견되며, 따라서 물리거나 긁힌 상처에 통상적으로 오염되는 세균이다.

피. 멀토시다(P. multocida) 균주는 일반적으로 협막 혈청군 및 체세포 혈청형에 의해 명명한다. 특징적인 열-안정성 항원의 발현에 의해 5가지 협막 혈청군(A, B, D, E 및 F)과 16가지 체세포 혈청형으로 구별한다. 대부분의 균주는 숙주 특이적이고, 하나 또는 둘 이상의 동물이 감염되는 경우는 거의 없다. 전통적인 전세포 사균은 통상 특정 혈청형에 대해서만 특이적으로 보호할 수 있기 때문에, 상이한 혈청형들이 존재하는 경우 백신 접종에 문제점이 유발된다. 그러나, 한 가지 혈청형으로 자연 감염되면 여러가지 혈청형에 대해 면역학적으로 보호될 수 있고[Shewen et al., In C. L. Gyles and C. O. Thoen (Ed.), Pathogenesis of Bacterial Infections in Animals. Iowa State University Press, Ames, p. 216-225 (1993)], 생체내에서 생장한 불활성화 세균을 이용하여 교차 보호(cross protection)가 촉진될 수 있음이 입증되었다[Rimler et al., Am J Vet Res. 42:2117-2121 (1981)]. 자발성 돌연변이 생균주인 피. 멀토시다(P. multocida) 균주 하나를 백신으로 사용했을 때 강력한 면역 반응이 나타났다[Davis, Poultry Digest. 20:430-434 (1987), Schlink et al., Avian Dis. 31(1):13-21 (1987)]. 그러나, 이 독성약화 균주는 백신 접종자가 스트레스를 받으면 독성 상태로 되돌아가거나 이 균주에 의해 사망을 초래할 수 있음이 밝혀졌다[Davis, Poultry Digest. 20:430-434 (1987), Schlink et al., Avian Dis. 31(1):13-21 (1987)].

파스테우렐라(Pasteurella)과의 다른 구성원인 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)는 돼지에 대한 엄격한 숙주 특이성을 나타내며, 고도의 전염성 을 나타내는 돼지 흉막폐렴의 원인균이다. 감염은 일반적으로 집중적인 번식 조건에서 발생하며, 직접 전염 방식으로 발생한다고 믿어진다. 종종 이 질병은 치명적이며, 그 결과 양돈 산업에서 심각한 경제적 손실을 초래하게 된다. 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)의 감염은 만성 또는 급성일 수 있으며, 이 감염은 섬유성 흉막염을 수반하는 출혈성 괴사성 기관지 폐렴이 특징이다. 현재까지, 세균의 독성은 혈청형-특이적 협막 폴리사카라이드, 리포폴리사카라이드 및 표면 단백질을 비롯한 구조 단백질, 및 세포외 세포용해성 독소에서 기인하였다. 이러한 독성 인자들이 정제되고 일부 경우에는 클로닝되었음에도 불구하고, 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)의 감염에서 이러한 독성 인자들의 정확한 역할은 잘 모르는 실정이다.

협막 폴리사카라이드의 항원적 차이 및 세포외 독소의 생산에 기초하여, 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)의 12가지 혈청형이 확인되었다. 혈청형 1, 5 및 7은 미국에서 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)의 감염에 가장 연관성이 있으며, 유럽에서는 혈청형 1, 2, 5, 7 및 9가 우세하다. 혈액용해소(haemolysin) 족의 구성원이며 RTX 독소라 불리우는 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)의 중요한 세포외 독소가 3가지 이상 존재한다. RTX 독소는 대장균(E. coli), 프로테우스 불가리사(Proteus vulgarisa) 및 파스테우렐라 헤몰리티카(Pasteurella haemolytica)를 비롯한 다수의 그람 음성 세균에 의해 생산되며, 이들 단백질은 일반적으로 구조적 특성 및 기능적 특성을 공유한다. 그러나, 다양한 혈청형으로부터 생성된 독소는 숙주 특이성, 표적 세포 및 생물학적 활성이 다 르다.

에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)의 주요 RTX 독소로는 ApxⅠ, ApxⅡ 및 ApxⅢ이 포함된다. ApxⅠ 및 ApxⅡ는 용혈 활성을 가지며, ApxⅠ의 활성이 더 강력하다. ApxⅢ은 용혈 활성을 갖지는 않지만, 폐포 대식세포 및 호중구에 대한 세포독성이 있다. 대부분의 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) 혈청형은 상기 3가지 독소 중 2가지를 생산한다. 예를 들어, 혈청형 1, 5, 9 및 11은 ApxⅠ 및 ApxⅡ를 발현하고, 혈청형 2, 3, 4, 6 및 8은 ApxⅡ 및 ApxⅢ을 발현한다. 그러나, 혈청형 10은 단지 ApxⅠ만을 생산하고, 혈청형 7 및 12는 단지 ApxⅡ만을 발현한다. ApxⅠ과 ApxⅡ를 모두 생산하는 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) 혈청형이 이 세균 중 가장 독성이 강한 균주이다.

무작위적으로 돌연변이된 야생형 세균을 이용한 쥐과(murine) 모델 및 돼지 감염에서 Apx 독소가 독성 인자임이 입증되었다[Tascon et al., Mol. Microbiol. 14:207-216 (1994)]. 또한, AopA 외막 독성 단백질을 코딩하는 유전자를 불활성화시키는 표적 돌연변이 유발로 다른 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) 돌연변이체를 생성하였다[Mulks and Buysee, Gene 165:61-66 (1995)].

백신 조성물을 제조하려는 시도에서, 전통적인 전세포 사균은 특정 혈청형에만 특이적인 보호를 제공했지만[MacInnes 및 Smart의 상기 문헌], 독성이 높은 한 혈청형으로 자연 감염되면 여러가지 혈청형에 대해 강력한 보호적 면역성을 촉진할 수 있음이 입증되었다[Nielsen, Nord Vet Med. 31:407-13 (1979), Nielsen, Nord Vet Med. 36:221-234 (1984), Nielsen, Can J Vet Res. 29:580-582 (1988), Nielsen, ACTA Vet Scand. 15:80-89 (1994)]. ApxⅡ 독소의 불활성화 형태를 생산하는 특성화된 독성약화 생백신 균주가 돼지에서 교차 보호에 대한 장래성을 나타내는[Prideaux et al., Infection ＆ Immunity 67:1962-1966 (1999)] 한편, 다른 특성화되지 않은 독성약화 생돌연변이체들도 또한 교차 보호에 대한 장래성을 나타냈다[Inzana et al., Infect Immun. 61:1682-6, (1993), Paltineanu et al., In International Pig Veterinary Society, 1992, p. 214, Utrera et al., In International Pig Veterinary Society, 1992, p. 213].

특성화되지 않고 자발 돌연변이된 세균 균주를 포함하는 백신 조성물과 관련된 문제점 때문에, 당업계에는 상동성 및 이종성의 피. 멀토시다(P. multocida) 및 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) 혈청형에 대한 보호적 면역성을 안전하게 자극할 수 있는 독성약화 생세균 균주의 합리적인 제작이 요구되고 있다. 또한, 독성약화 세균 균주 및 세균의 독성 유전자를 찾아내어 항균제를 확인하는 방법의 개발을 촉진해야 한다는 요구도 존재한다.

<발명의 개요>

일반적으로, 본 발명은 독성약화 그람 음성 세균을 포함하는 백신 조성물을 제조하고 이용하기 위한 재료 및 방법을 제공한다. 한 측면에서, 본 발명의 백신 조성물은 당업계에 공지되어 있으며 이 거명을 통해 그 전문이 본 명세서에 포함되는 문헌 [Dewhirst et al., J. Bacteriol. 174:2002-2013 (1992)]에 부분적으로 기재되어 있는 파스테우렐라세아(Pasteurellaceae)과 세균 중에서 독성약화된 종을 포함한다. 상기 과의 종에는 에이. 악티노마이세템코미탄스(A. actinomycetemcomitans), 에이. 캡슐라투스(A. capsulatus), 에이. 에쿨리(A. equuli), 에이. 리그니에레시이(A. lignieresii), 에이. 플레우로뉴모니아[A. pleuropneumoniae; 에이치. 플레우로뉴모니아(H. pleuropneumoniae)], 에이. 세미니스(A. seminis), 에이. 수이스[A. suis; 에이치. 수이스(H. suis)], 에이. 우레아[A. ureae; 피. 우레아(p. ureae)], 에이. 캡슐라투스(A. capsulatus), 비스가르드 탁손(Bisgaard taxon) 11, 에이치. 애깁티우스(H. aegyptius), 에이치. 아프로필러스(H. aphrophilus), 에이치. 아프로필러스[H. aphrophilus; 에이치. 파라인플루엔자(H. parainfluenzae)], 에이치. 두크레이(H. ducreyi), 에이치. 헤모글로비노필러스(H. haemoglobinophilus), 에이치. 헤몰리티쿠스(H. haemolyticus), 에이치. 인플루엔자(H. influenzae), 에이치. 파라쿠니쿨러스(H. paracuniculus), 에이치. 파라갈리나룸(H. paragallinarum), 에이치. 파라헤몰리티쿠스(H. parahaemolyticus), 에이치. 파라인플루엔자[H. parainfluenzae; 에이치. 파라프로필러스(H. paraphrophilus)], 에이치. 파라프로헤몰리티쿠스(H. paraphrohaemolyticus), 에이치. 파라프로필러스(H. paraphrophilus), 에이치. 파라수이스(H. parasuis), 에이치. 파라수이스(H. parasuis) 5형, 에이치. 세그니스(H. segnis), 에이치. 솜너스(H. somnus), 헤모필러스(Haemophilus) 소그룹, 헤모필러스(Haemophilus) 탁손 C, 피. 에어로젠스(P. aerogenes), 피. 아나티스(P. anatis), 피. 아비움[P. avium; 에이치. 아비움(H. avium)], 피. 카니스(P. canis), 피. 다그마티스(P. dagmatis), 피. 갈리나룸(P. gallinarum), 피. 헤몰리 티카(P. haemolytica), 피. 트레할로시[P. trehalosi; 피.헤몰리티카(P. haemolytica) 생체형 T], 피. 랑아(P. langaa), 피. 멀토시다(P. multocida), 피. 뉴모트로피카(P. pneumotropica), 피. 스토마티스(P. stomatis), 피. 볼란티움[P. volantium; 에이치. 파라인플루엔자(H. parainfluenzae)], 피. 볼란티움(P. volantium), 파스테우렐라(Pasteurella) 종 A, 파스테우렐라(Pasteurella) 종 B 및 헤모필러스 파라프로헤몰리티쿠스(Haemophilus paraphrohaemolyticus)가 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 백신 조성물이 독성약화된 파스테우렐라 헤몰리티카(Pasteurella haemolytica), 악티노바실러스 플레우로뉴모니아(Actinobacillus pleuropneumoniae), 헤모필러스 솜너스(Haemophilus somnus) 또는 파스테우렐라 멀토시다(Pasteurella multocida) 세균을 포함한다. 가장 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 백신 조성물은 독성약화된 파스테우렐라 멀토시다(Pasteurella multocida) 및 에이. 플레우로뉴모니아(A. plueropneumoniae) 세균 균주를 포함한다.

본 발명의 한 측면은 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164 중 어느 하나, 또는 그의 종 동족체로 표시되는 유전자 서열에 기능적 돌연변이를 함유하는 그람 음성 세균 생물체를 제공하며, 여 기서 돌연변이는 코딩되는 유전자 산물(즉, 유전자에 의해 코딩되는 폴리펩티드)의 발현 및(또는) 생물학적 활성을 억제 또는 제거하고, 상기 기능적 돌연변이는 세균 균주의 독성을 약화시킨다. 당업계에서 이해되는 바와 같이, 종 동족체에는 실질적인 폴리뉴클레오티드 서열 상동성을 갖고 동일하거나 유사한 생물학적 기능 및(또는) 특징을 갖는, 2종 이상의 상이한 종에서 발견되는 유전자가 포함된다. 바람직하게는, 종 동족체인 폴리뉴클레오티드 서열들이 실시예에 기재되는 중간 정도의 엄격 조건하에서 혼성화되고, 동일하거나 유사한 생물학적 활성 및(또는) 특징을 가질 것이다. 또다른 측면에서, 종 동족체인 폴리뉴클레오티드들은 약 60％가 넘는 서열 상동성, 약 70％가 넘는 서열 상동성, 약 80％가 넘는 서열 상동성, 약 90％가 넘는 서열 상동성 또는 약 95％가 넘는 서열 상동성을 공유할 것이다. 유전자 산물의 발현 및(또는) 생물학적 활성을 변화(즉, 증가 또는 감소)시키는 기능적 돌연변이로는 유전자 그 자체의 단백질 코딩 영역에서 삽입 또는 결실되는 것, 또는 유전자 발현의 조절을 담당하거나 이와 관련된 서열에서 삽입 또는 결실되는 것이 포함된다. 결실 돌연변이체에는 특정 유전자 서열의 전부 또는 일부가 결실된 것이 포함된다. 한 측면에서, 돌연변이의 결과 상기 유전자의 약 10％ 이상, 약 20％ 이상, 약 30％ 이상, 약 40％ 이상, 약 50％ 이상, 약 60％ 이상, 약 70％ 이상, 약 80％ 이상, 약 90％ 이상, 약 95％ 이상, 약 98％ 이상 또는 약 99％ 이상이 결실된다. 또다른 측면에서, 돌연변이의 결과 유전자에서 삽입이 발생하며, 여기서 삽입으로 인해 돌연변이 유전자에 의해 코딩되는 유전자 산물의 발현이 감소되고(거나) 돌연변이 유전자에 의해 코딩되는 불활성화 유전자 산물이 발현된다. 또한, 본 발명의 조성물, 바람직하게는 백신 조성물은 돌연변이화된 독성약화 그람 음성 세균 생물체를 포함하며, 임의로 적합한 면역보강제 및(또는) 제약상 허용되는 희석제 또는 담체를 포함할 수 있다. 변화된 균주가 백신 조성물에 효과적이도록 하기 위해서는, 병원체로부터의 심각한 임상적 증상의 발병을 예방하기에 충분하도록 독성약화 효과가 커야 하지만, 또한 숙주에서 세균의 복제 및 생장을 억제하기에 충분하도록 독성약화 효과가 작아야 한다.

또한, 본 발명은 그람 음성 세균의 독성에 필요한 유전자 산물을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드에는 상보성 DNA, 상보성 또는 안티센스 DNA를 비롯한 게놈 DNA, 및 전체적 또는 부분적으로 합성된 DNA와 같은 DNA; 센스 및 안티센스 가닥을 비롯한 RNA; 및 문헌 [Corey, TIBTECH 15:224-229 (1997)]에 기재된 바와 같은 펩티드 핵산이 포함된다. 본 발명의 독성 유전자 폴리뉴클레오티드에는 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164에 기재된 서열, 또는 그의 종 동족체; 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164의 폴리 뉴클레오티드, 또는 그의 종 동족체에 의해 코딩되는 독성 유전자 산물을 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 및 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164에 기재된 폴리뉴클레오티드 중 어느 하나, 또는 그의 종 동족체의 비코딩 가닥(또는 상보 가닥)에 중간 정도의 엄격 조건 내지 고도의 엄격 조건하에서 혼성화되는 폴리뉴클레오티드가 포함된다. 따라서, 본 발명은 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164에 기재된 파스테우렐라세아(Pasteurellaceae)로부터의 유전자 서열, 및 그의 자연 발생적(즉, 종 동족체) 변이체 및 인공적으로 유도된 변이체를 비롯한 다른 그람 음성 세균 생물체로부터의 관련 유전자 서열을 포함한다. 또한, 본 발명은 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160 및 164에 기재된 폴리뉴클레오티드 중 어느 하나, 및 그의 종 동족체로부터 추정된 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열에 대한 지식을 습득하면, 상기 폴리뉴클레오티드의 모든 단편을 쉽게 이용할 수 있다. 따라서, 본 발명은 본 발명에 따른 폴리뉴클레오티드의 단편을 제공한다.

또한, 본 발명은 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 작제물을 포함한다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드로 형질전환, 형질감염 또는 전기천공된 숙주 세포도 본 발명에 포함된다. 본 발명은 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 유전자 산물의 발현을 허용, 바람직하게는 촉진하는 조건하에서 본 발명의 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 숙주 세포 또는 그의 배지로부터 유전자 산물을 단리하는 단계를 포함하는, 상기 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 폴리펩티드의 생산 방법을 제공한다.

본 발명의 폴리뉴클레오티드를 찾아내면 코딩되는 폴리펩티드를 이용할 수 있게 된다. 본 발명의 폴리펩티드에는 전장 및 단편 단백질, 또는 말단이 잘린 단백질; 그의 변이체; 융합 또는 키메라 단백질; 및 야생형 폴리펩티드에 보존적 아미노산 치환이 도입된 것을 비롯한 유사체가 포함된다. 또한, 본 발명의 폴리펩티드를 특이적으로 인식하는 항체(모노클로날 및 폴리클로날 항체, 단일쇄 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 및 상보성 결정 영역(CDR)-이식 항체가 포함됨) 뿐만 아니라, 본 발명의 폴리펩티드를 특이적으로 인식하는 CDR 서열을 포함하는 화합물이 제공된다. 또한, 본 발명은 본 발명의 항체에 면역특이적인 항-유전자형 항체를 제공한다.

본 발명의 다른 측면에 따라, 그람 음성 세균의 독성 유전자 또는 유전자 산 물을 변화시키는 신규 항균제를 찾아내는 방법이 제공된다. 본 발명의 방법은 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164 중 어느 하나에 기재된 서열, 또는 그의 종 동족체에 의해 코딩되는 독성 유전자 산물의 발현을 방해할 수 있는 잠재적 약제를 스크리닝하거나, 또는 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164 중 어느 하나에 기재된 DNA 서열, 그의 종 동족체, 또는 그의 상보 가닥에 의해 전체적 또는 부분적으로 코딩되는 세균 유전자 산물의 생물학적 기능을 방해할 수 있는 잠재적 약제를 스크리닝한 후, 그러한 스크리닝 분석에서 양성 결과를 나타내는 약제를 확인하는 것을 포함한다. 특히, 독성 유전자 산물의 발현을 방해하는 약제로는 독성 유전자 서열에 상보적인 안티센스 폴리뉴클레오티드 및 리보자임(ribozyme)이 포함된다. 또한, 본 발명은 올리고뉴클레오티드에 의해 유도되는 삼중 나선 형성을 이용하여 본 발명의 유전자 산물의 전사를 변화시키는 방법을 포함한다.

독성 유전자 산물의 기능을 방해하는 약제로는 독성 유전자 산물의 변이체, 독성 유전자 산물의 결합 파트너 및 그러한 결합 파트너의 변이체, 및 효소 억제 제(산물이 효소인 경우)가 포함된다.

본원에 기재된 방법에 의해 확인된 신규 항균제가 제공되며, 또한 그람 음성 세균에 감염된 환자에게 세균의 존재를 감소시키기에 효과적인 양의 상기 신규 항균제를 투여하는 것을 포함하는 상기 환자의 치료 방법이 제공된다.

본 발명의 무수한 부가적 측면 및 이점은, 현재 준비된 그의 실시양태를 설명하는 하기 발명의 상세한 설명을 고려하면 당업자에게 분명해질 것이다.

[발명의 상세한 설명]

본원에 사용되는 "독성 유전자"는 그의 기능 또는 산물이 숙주 세포에서 세균의 성공적인 감염 및(또는) 유지에 필요한 유전자이다. 따라서, 독성 유전자 및(또는) 그에 의해 코딩되는 단백질은 숙주 생물체의 발병과 관련되어 있지만, 생장에 필수적인 것은 아니다.

본원에 사용되는 "시그너처 태그가 부착된 돌연변이 유발법(signature-tagged mutagenesis, STM)은 이 거명을 통해 본 명세서에 포함되는 국제 특허 공개 WO 96/17951호에 일반적으로 기재된 방법이며, 예를 들면 균혈증의 쥐과 모델에서 독성에 필요한 세균 유전자를 찾아내는 방법이 여기에 포함된다. 이 방법에서, 게놈에 무작위 돌연변이를 갖는 각 세균 균주는 트랜스포손(transposon) 통합을 이용하여 생성되고; 각각의 삽입 돌연변이는 돌연변이체가 서로 구별되게 하는 상이한 DNA 시그너처 태그를 지니고 있다. 이 태그는 중심 영역이 중합효소 연쇄 반응(PCR)에 의해 함께 증폭되게 하는 20 bp의 불변체 "암(arm)"에 인접한 40 bp의 가변성 중심 영역을 포함한다. 태그가 부착된 돌연변이 균주를 미세적정(microtiter) 접시에 모은 후, 혼합하여 감염 연구를 위한 "접종물 풀(inoculum pool)"을 생성한다. 접종 후 적합한 시간에, 세균을 동물로부터 단리한 후, 이를 모아서 "회수 풀(recovered pool)"을 생성한다. 회수 풀에서의 태그 및 접종물 풀에서의 태그를 별도로 증폭하고 표지한 후, 접종물에서 돌연변이를 나타내는 모든 상이한 태그로 배열된 필터를 조사하는데 사용하였다. 독성이 약화된 돌연변이 균주는 감염된 동물로부터 회수할 수 없는 균주, 즉 태그로 조사했을 때 접종물 풀로부터는 혼성화 신호를 나타내지만 태그로 조사했을 때 회수 풀로부터는 혼성화 신호를 나타내지 않는 태그를 갖는 균주이다. 이 방법에 대한 변형으로, 화학발광법과 같은 비-방사선 검출법이 이용될 수 있다.

시그너처 태그가 부착된 돌연변이 유발법을 통해 한 동물에서 독성의 손실에 대해 다수의 삽입 돌연변이 균주를 동시에 스크리닝할 수 있다. 돌연변이 피. 멀토시다(P. multocida) 균주의 풀 19개를 스크리닝하여 독성이 감소된 60가지 이상의 균주를 찾아내었고, 이들 중 대부분은 이후에 개개 돌연변이체의 대략적인 LD₅₀을 측정함으로써 독성의 약화가 확인되었다. 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) 돌연변이체의 스크리닝 결과, 35 종의 상이한 유전자에 돌연변이를 갖는 100가지 이상의 균주를 찾아내었다. 이들 중, 22 종의 유전자에 돌연변이가 유발된 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)에서 상당한 독성약화 효과가 나타났다. 트랜스포손 삽입에 의해 붕괴된 오픈 리딩 프레임(open reading frame)의 뉴클레오티드 서열은 양쪽 가닥 모두의 서열분석에 의해 결정하였고, 코딩된 아미노산 서열을 추정하였다. 폴리뉴클레오티드와 아미노산 서열의 신규성은 이 서열들을 DNA 및 단백질 데이타베이스 서열과 비교함으로써 결정하였다.

세균의 독성 유전자, 구체적으로는 피. 멀토시다(P. multocida) 및 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)의 독성 유전자는 독성이 감소된 생물체(즉, 독성약화 균주)를 제공하며, 이는 백신으로서 유용하다. 이러한 생물체에는 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164 중 어느 하나로 표시되는 유전자를 불활성화시키는 1가지 이상의 기능적 돌연변이를 함유하는 파스테우렐라세아(Pasteurellaceae) 돌연변이체가 포함된다. 당업자는 "기능적 돌연변이"가 본 발명 유전자의 단백질 코딩 영역에서 발생할 뿐만 아니라 독성 유전자 RNA의 전사를 변화시키는 조절 영역에서 발생할 수 있음을 알 것이다.

또한, 당업자는 본 발명의 독성약화 피. 멀토시다(P. multocida) 및 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) 균주에 1가지 이상의 기능적 돌연변이를 가진 균주가 포함됨을 알 것이다. 1종 이상의 돌연변이는 상가적 또는 상승적 독성약화 효과를 초래할 수 있다. 다중 돌연변이는 디자인하여 만들어지거나, 또는 본래 단일 돌연변이를 도입하고자 의도된 돌연변이 유발시 결실 사건에 의해 우연 히 발생할 수 있다. 다중 결실이 있는 독성약화 균주의 예에는 cya 및 crp 유전자가 기능적으로 결실된 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium) 균주가 있다. 이 돌연변이체 에스. 티피무리움(S. typhimurium) 균주는 생백신으로서의 장래성을 나타냈다.

피. 멀토시다(P. multocida) 및 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)에서 독성 유전자를 확인하면, 다른 병원성 종에서 유사한 유전자(즉, 종 동족체)에 관한 정보를 얻을 수 있다. 예를 들면, aroA 유전자의 확인 결과, 피. 헤몰리티카(P. haemolytica), 에어로모나스 히드로필라(Aeromonas hydrophila), 에어로모나스 살모니시다(Aeromonas salmonicida), 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium), 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella enteritidis), 살모넬라 두블린(Salmonella dublin), 살모넬라 갈라네룸(Salmonella gallanerum), 보르델라 페르투시스(Bordella pertussis), 예르시니아 엔테리콜리티카(Yersinia entericolitica), 네이세리아 고노로에아(Neisseria gonorrhoeae) 및 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis)를 비롯한 다수의 병원체에서 보존적 유전자를 확인할 수 있었다. 이들 중 다수의 종에서, aroA 유전자에 돌연변이를 포함하는 독성약화 세균 균주가 백신 제형에 효과적임이 증명되었다. 피. 멀토시다(P. multocida)에서 확인된 독성 유전자 서열을 이용하여, 유사하거나 상동성인 유전자가 다른 생물체, 구체적으로는 파스테우렐라(Pasteurella)과 뿐만 아니라 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) 및 헤모필러스 솜너스(Haemophilus somnus)에서 확인되었다. 이와 유사하게, 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) 의 독성 유전자를 확인함으로써 다른 생물체에서 관련된 유전자를 확인할 수 있다. 피. 멀토시다(P. multocida) 및 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)의 유전자를 프로브로 사용하는 써던(Southern) 혼성화함으로써, 다른 생물체에서 유래한 염색체 라이브러리에서 관련 유전자들을 확인할 수 있다. 다른 방법으로, PCR도 동등하게 종의 경계를 벗어나 유전자의 확인시 효과적이다. 또다른 방법으로, 예를 들어 피. 멀토시다(P. multocida) 돌연변이체와 다른 종으로부터 유래한 염색체 라이브러리와의 상보성 실험을 동일하거나 관련된 독성을 갖는 유전자의 확인에 이용할 수 있다. 따라서, 관련 독성 유전자를 확인하면 또다른 백신 제형으로서 유용한 다른 생물체의 독성약화 균주를 제조할 수 있다. 다른 종[예를 들어, 피. 헤몰리티카(P. haemolytica), 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) 및 에이치. 솜너스(H. somnus)]에 존재하는 것으로 입증된 피. 멀토시다(P. multocida) 유전자의 예로는 exbB, atpG 및 pnp 유전자가 포함된다.

STM을 이용하여 확인된 독성약화 피. 멀토시다(P. multocida) 균주는 오픈 리딩 프레임 또는 조절 DNA 서열에 트랜스포손 서열이 삽입되어 독성 유전자의 기능이 상실된 삽입 돌연변이체이다. 따라서, 한 측면에서, 본 발명의 독성약화 피. 멀토시다(P. multocida) 균주 및 기타 그람 음성 돌연변이체 세균 균주는 유전자에 삽입을 초래하는 하나 이상의 돌연변이를 포함할 수 있으며, 여기서 삽입은 돌연변이 유전자에 의해 코딩되는 유전자 산물의 발현을 감소시키고(거나) 돌연변이 유전자에 의해 코딩되는 불활성화 유전자 산물을 발현시키게 된다. 이러한 삽입 돌연변이는 여전히 세균의 독성에 필요한 유전 정보를 모두 함유하고 있으며, 삽입된 트랜스포손의 결실에 의해 병원성 상태로 되돌아갈 수도 있다. 따라서, 백신 제형의 제조에 있어서, 독성약화 균주로부터 수집된 정보를 이용하여 독성 유전자 서열이 일부, 대부분 또는 모두 제거됨으로써 세균이 독성 상태로 되돌아갈 가능성이 없는 결실 돌연변이체 균주를 생성하는 것이 바람직하다. 따라서, 본 발명의 독성약화 피. 멀토시다(P. multocida) 균주 및 기타 그람 음성 돌연변이체 세균 균주에는 독성 유전자의 약 10％ 이상, 약 20％ 이상, 약 30％ 이상, 약 40％ 이상, 약 50％ 이상, 약 60％ 이상, 약 70％ 이상, 약 80％ 이상, 약 90％ 이상, 약 95％ 이상, 약 98％ 이상 또는 약 99％ 이상이 결실된 돌연변이를 하나 이상 포함하는 균주들이 포함된다.

STM을 이용하여 확인된 독성약화 삽입 돌연변이체의 백신 특징은 동일한 유전자에 결실을 포함하는 세균의 특징과 동일하거나 유사할 것으로 기대된다. 그러나, 삽입 돌연변이가 인접하는 유전자 서열에 "극성" 효과를 발휘할 수 있으며, 그 결과 삽입 돌연변이체는 동일한 유전자 서열에 결실 돌연변이를 갖는 돌연변이체 균주와 구별되는 특징을 가질 수 있다. 결실 돌연변이체는 당업계에 잘 공지되고 통상적으로 수행되는 여러 기술을 이용하여 제작될 수 있다.

예를 들면, 많은 세균에서 유전자를 결실시키기 위해 통상적으로 사용되어 온, 부(副)선별가능한(counterselectable) 마커를 사용하는 전략이 이용될 수 있다. 예를 들어, 이 거명을 통해 본 명세서에 포함되는 문헌 [Reyrat et al., Infection and Immunity 66:4011-4017 (1998)]을 참조할 수 있다. 이 기술에서는 원하는 결실 부위의 양쪽에서 유래한 DNA 서열이 인접하도록 선별가능한 마커와 부 선별가능한 마커를 코딩하는 플라스미드가 제작되는, 이중 선별 전략이 종종 사용된다. 선별가능한 마커는 플라스미드가 게놈의 적합한 위치에 적합한 방식으로 통합되었는지 선별하기 위해 사용된다. 부선별가능한 마커는 통합된 플라스미드가 자발적으로 제거된 매우 적은 비율의 세균을 선별하기 위해 사용된다. 따라서, 이들 세균의 분획은 다른 외래 DNA가 존재하지 않고 원하는 결실만을 함유하게 된다. 이 기술에서 중요한 점은 적합한 부선별가능 마커의 이용도이다.

또다른 기술에서, cre -lox 시스템이 DNA의 부위 특이적 재조합을 위해 사용된다. 이 시스템은 세균의 cre 리컴비나제 유전자에 의해 인식되는 34 염기쌍의 lox 서열로 이루어져 있다. lox 부위가 DNA에 적합한 방향으로 존재하면, lox 부위에 인접한 DNA는 cre 리컴비나제에 의해 절단될 것이고, 그 결과 남아있는 lox 서열 1 복제본을 제외하고 모든 서열이 결실되게 된다. 표준 재조합 기술을 이용하여, 피. 멀토시다(P. multocida) 또는 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)의 게놈에서 관심있는 표적 유전자를 결실시키고, 이를 lox 부위에 인접한 선별가능 마커(예를 들어, 카나마이신 내성을 코딩하는 유전자)로 대체할 수 있다. cre 리컴비나제의 일시적 발현(피. 멀토시다(P. multocida) 또는 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)에서 작동하는 프로모터의 조절하에 cre 유전자를 함유하는 자살 플라스미드의 전기천공에 의한 발현)에 의해 lox에 인접한 마커가 효율적으로 제거되어야 한다. 이 과정은 원하는 결실 돌연변이 및 1 복제본의 lox 서열을 함유하는 돌연변이를 만들어낼 것이다.

또다른 접근법에서, 피. 멀토시다(P. multocida) 또는 에이. 플레우로뉴모니 아(A. pleuropneumoniae)의 게놈에서 원하는 결실 서열을 녹색 형광 단백질(GFP), β-갈락토시다제 또는 루시퍼라제와 같은 마커 유전자로 직접 대체하는 것이 가능하다. 이 기술에서, 원하는 결실 부위에 인접한 DNA 단편은 PCR에 의해 제조하여 피. 멀토시다(P. multocida) 또는 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)에 적합한 자살(비복제) 벡터에 클로닝한다. 피. 멀토시다(P. multocida) 또는 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)에서 활성을 나타내는 프로모터와 적합한 마커 유전자를 함유하는 발현 카세트는 인접 서열들 사이에 클로닝한다. 이 플라스미드를 야생형 피. 멀토시다(P. multocida) 또는 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)에 도입한다. 마커 유전자를 혼입하여 발현하는 세균(빈도수가 매우 낮을 것임)을 단리하여 적합하게 재조합(즉, 야생형 유전자의 마커 유전자로의 대체)되었는지 여부를 조사한다.

이들 생물체의 감소된 독성 및 이들의 면역원성은 동물 환자에 투여함으로써 확인할 수 있다. 본 발명의 무독성 미생물을 단독으로 투여하는 것도 가능하지만, 1종 이상의 그러한 돌연변이체 미생물을 적합한 면역보강제 및 제약상 허용되는 희석제나 담체를 함유하는 백신 조성물로 투여하는 것이 바람직하다. 상기 담체는 본 발명의 무독성 미생물과 상용할 수 있어야 하고 면역화될 환자에 유해해서는 안된다는 점에서 "허용되는" 것이어야 한다. 통상적으로, 담체는 멸균되고 발열원이 제거된 물 또는 식염수이다. 면역화될 환자는 피. 멀토시다(P. multocida), 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) 또는 기타 병원성 미생물로부터의 독성에 의해 유발되는 질병으로부터 보호를 요하는 환자이다.

본 발명의 백신이 인간 의학 및 수의학 분야에 유용하리라는 것은 분명할 것이다. 따라서, 면역화될 환자는 인간 또는 다른 동물, 예를 들어 소, 양, 돼지, 말, 염소 및 가금(예를 들어, 닭, 칠면조, 오리 및 거위)을 비롯한 농장 동물; 개 및 고양이와 같은 애완 동물; 외국산 동물 및(또는) 동물원 동물; 및 생쥐, 쥐, 토끼, 모르모트 및 햄스터를 비롯한 실험실 동물일 수 있다.

또한, 본 발명은 피. 멀토시다(P. multocida) 또는 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)의 독성에 필요한 폴리펩티드 및 상응하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본 발명은 자연 발생적 또는 인공 폴리뉴클레오티드 및 그의 폴리펩티드 산물을 포함한다. 자연 발생적 독성 산물로는 독특한 유전자 및 폴리펩티드 종 뿐만 아니라, 피. 멀토시다(P. multocida) 또는 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) 이외의 균주에서 발현되는 종 동족체가 포함된다. 인공 독성 산물로는, 유사체 및 공유결합 변형을 포함하는 독성 산물과 같은 자연 발생적 산물의 변이체가 포함된다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164에 기재된 서열 및 그의 종 동족체를 포함하는 독성 폴리뉴클레오티드, 및 상기 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 제공한다.

본 발명은 세균의 독성 유전자 산물을 코딩하는, 피. 멀토시다(P. multocida) 또는 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)의 정제 및 단리된 신규 폴리뉴클레오티드(예를 들어, 센스 및 상보성 안티센스 가닥의 DNA 서열 및 RNA 전사물)를 제공한다. 본 발명의 DNA 서열에는 게놈 서열 및 cDNA 서열 뿐만 아니라 전체적으로 또는 부분적으로 화학 합성된 DNA 서열이 포함된다. 본 발명의 게놈 DNA는 본 발명의 폴리펩티드에 대한 단백질 코딩 영역을 포함하며, 동일한 종의 다른 세균 균주에서 발견될 수 있는 변이체를 포함한다. 본원에 사용되고 당업계에서 이해되는 바와 같이, "합성된"이란 폴리뉴클레오티드를 제조는 방법에 있어서, 효소에 의한 방법에 상반되는 순전히 화학적인 방법을 의미한다. 따라서, "전체적으로" 합성된 DNA 서열은 전적으로 화학적 수단에 의해 생성되며, "부분적으로" 합성된 DNA는 생성된 DNA의 일부분만이 화학적 수단에 의해 생성된 것을 포함한다. 피. 멀토시다(P. multocida)의 독성 유전자 산물을 코딩하는 바람직한 DNA 서열은 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164에 기재된 것, 및 그의 종 동족체이다. 독성 유전자 산물을 코딩하는 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)의 바람직한 DNA 서열은 서열 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164에 기재된 것, 및 그의 종 동족체이다. 당업자라면 본 발명의 바람직한 DNA가, 예를 들어 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164에 기재된 서열, 및 그의 종 동족체를 갖는 분자가 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164의 서열로부터 추론가능한 서열을 갖는 상보성 분자("비코딩 가닥" 또는 "상보 가닥")와 함께 DNA의 왓슨-크릭(Watson-Crick) 염기쌍 규칙에 따라 짝을 이루는 이중 가닥 분자를 포함한다는 것을 알 것이다. 또한, 바람직한 것은 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164에 기재된 폴리뉴클레오티드 중 어느 하나, 및 그의 종 동족체에 의해 코딩되는 유전자 산물을 코딩하는 폴리뉴클레오티드이다. 본 발명은 피. 멀토시다(P. multocida) 또는 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) DNA의 종 동족체, 바람직하게는 세균성 동족체를 추가로 포함한다.

본 발명에 의해 제공되는 폴리뉴클레오티드 서열 정보를 이용하면, 써던 및(또는) 노던(Northern) 혼성화 및 중합효소 연쇄 반응(PCR)을 비롯한 공지의 기술에 의해 관련 세균 독성 분자를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 확인 및 단리할 수 있다. 관련 폴리뉴클레오티드의 예로는 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164에 기재된 어느 한 폴리뉴클레오티드, 및 그의 종 동족체에 의해 코딩되는 독성 유전자 산물에 상동성인 폴리펩티드, 및 본 발명의 독성 유전자 산물이 갖는 생물학적 및(또는) 물리적 특징을 하나 이상 공유하는 구조적으로 연관된 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 포함된다.

또한, 본 발명은 중간 정도의 엄격 조건 내지 고도의 엄격 조건하에서 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164에 기재된 어느 한 폴리뉴클레오티드, 및 그의 종 동족체의 비코딩 가닥 또는 상보 가닥에 혼성화되는, 세균 유전자 산물을 코딩하는 DNA 서열을 포함한다. 유전자 코드의 축퇴(degeneracy)가 없다면 상기 서열에 혼성화할, 독성 폴리펩티드를 코딩하 는 DNA 서열도 본 발명에 포함된다. 고도의 엄격 조건의 예로는 65℃ 내지 75℃에서 0.2X SSC/0.1％ SDS를 포함하는 완충액으로 최종 세척하는 것이 포함되며, 중간 정도의 엄격 조건의 예로는 35℃ 내지 45℃에서 2X SSC/0.1％ SDS를 포함하는 완충액으로 최종 세척하는 것이 포함된다. 당업자라면, 문헌 [Ausubel et al. (Eds.), Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1994), pp. 6.0.3 내지 6.4.10]에 기재된 바와 같이 온도와 완충액 또는 염 농도를 변화시킴으로써 동등한 엄격도가 성취될 수 있음을 이해할 것이다. 혼성화 조건의 변화는 경험적으로 결정하거나, 또는 프로브의 길이 및 구아노신/시토신(GC) 염기쌍 비율에 기초하여 정확하게 계산할 수 있다. 혼성화 조건은 문헌 [Sambrook et al., (Eds.), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press: Cold Spring Harbor, New York (1989), pp. 9.47 내지 9.51]에 기재된 바와 같이 계산할 수 있다.

또한, 독성 유전자 서열이 혼입된 플라스미드 및 바이러스 DNA 벡터와 같은 자가 복제성 재조합 발현 작제물이 본 발명에서 제공된다. 독성 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 내생성 또는 외생성 발현 조절 DNA 서열 및 전사 종결자에 작동 가능하게 연결된 발현 작제물이 또한 제공된다. 독성 유전자는 피. 멀토시다(P. multocida)의 게놈 DNA를 주형으로 사용하는 PCR에 의해 클로닝할 수 있다. 상기 유전자를 발현 벡터에 용이하게 삽입하기 위해, PCR에 의해 증폭된 유전자가 개시 코돈인 ATG의 앞쪽 5'에 제한효소 부위를 갖고 정지 코돈인 TAG, TGA 또는 TAA의 뒤쪽 3'에 제한효소 부위를 갖도록 PCR 프라이머를 선택한다. 바람직한 경우에는 문헌 [Grosjean and Fiers, Gene, 18:199-209 (1982) 및 Konigsberg and Godson, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 80:687-691 (1983)]에 기재된 대장균(E. coli) 코돈 선호도에 따라 아미노산의 변화없이 유전자의 코돈을 변화시킨다. 코돈 이용도를 최적화하면 대장균(E. coli)에서의 생산시 유전자 산물의 발현량이 증가될 수 있다. 유전자 산물이 대장균(E. coli) 또는 다른 세균의 원형질 주변이나 세포 배양용 배지에서 세포외 생산되도록 하려면, 유전자를 개시 코돈없이 클로닝하여 벡터 중의 신호 서열 뒤쪽에 놓이게 한다.

본 발명의 또다른 측면에 따라, 본 발명의 독성 폴리펩티드가 발현되도록 하는 방식으로 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열을 안정하게 또는 일시적으로 형질전환, 형질감염 또는 전기천공시킨 원핵 및 진핵 세포를 비롯한 숙주 세포가 제공된다. 본 발명의 발현 시스템에는 세균 시스템, 효모 시스템, 진균 시스템, 바이러스 시스템, 무척추동물 시스템 및 포유동물 시스템이 포함된다. 본 발명의 숙주 세포는 독성 유전자 산물에 특이적인 면역활성을 나타내는 항체의 개발을 위한 가치있는 면역원의 공급원이다. 본 발명의 숙주 세포는 독성 폴리펩티드의 거대 규모 생산에 매우 유용하며, 여기서 상기 숙주 세포를 적합한 배지에서 배양한 후, 면역친화성 정제 또는 당업계에 잘 공지되고 통상적으로 수행되는 여러가지 정제 기술에 의해 세포로부터 또는 세포를 배양한 배지로부터 원하는 폴리펩티드 산물을 단리한다. 대장균(E. coli), 기타 세균(피. 멀토시다(P. multocida), 바실러스(Bacillus) 및 에스. 아우레우스(S. aureus) 등), 효모(피치아 파스토리스(Pichia pastoris) 및 사카로마이세스 세레비지아(Saccharomyces cerevisiae) 등), 곤충 세포 또는 포유동물 세포(CHO 세포 등)와 같은 임의의 적합한 숙주 세포가 당업계에 공지된 적합한 벡터를 이용하는 유전자 산물의 발현에 사용될 수 있다. 단백질은 직접 생산되거나 펩티드 또는 폴리펩티드에 융합된 상태로 생산될 수 있으며, 세포내에서 생산되거나 세균 세포의 원형질 주변 공간으로의 분비 또는 세포 배양용 배지로의 분비에 의해 세포외에서 생산될 수 있다. 단백질의 분비는 신호 펩티드(또한 프리-서열로도 공지됨)를 필요로 하는데, 원핵생물 및 진핵생물로부터의 무수한 신호 서열이 재조합 단백질의 분비에 작용함이 알려져 있다. 단백질 분비 과정에서, 신호 펩티다제에 의해 신호 펩티드를 제거하여 성숙 단백질을 얻는다.

단백질 정제 과정을 간편하게 하기 위해, 유전자 코딩 서열의 5' 또는 3'에 정제 태그를 부착할 수 있다. 통상적으로 사용되는 정제 태그에는 히스티딘 잔기 6개의 스트레치(미국 특허 제5,284,933호 및 동 제5,310,663호), 문헌 [Schmidt and Skerra, Protein Engineering, 6:109-122 (1993)]에 기재된 스트렙타비딘 친화성 태그, FLAG 태그[Hopp et al., Biotechnology, 6:1205-1210 (1988)], 글루타티온 S-트랜스퍼라제[Smith and Johnson, Gene, 67:31-40 (1988)] 및 티오레독신[LaVallie et al., Bio/Technology, 11:187-193 (1993)]이 포함된다. 이들 펩티드 또는 폴리펩티드를 제거하기 위해, 단백질 분해성 절단 인식 부위를 융합 연결부에 삽입할 수 있다. 통상적으로 사용되는 프로테아제에는 인자 Xa, 트롬빈 및 엔테로키나아제가 있다.

또한, 본 발명은 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 피. 멀토시 다(P. multocida) 및 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)의 정제 및 단리된 독성 폴리펩티드를 제공한다. 현재 바람직한 폴리펩티드는 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164에 기재된 어느 한 폴리뉴클레오티드, 및 그의 종 동족체에 의해 코딩되는 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명은 a) 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164 중 어느 하나에 기재된 DNA 서열, 및 그의 종 동족체, b) 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164 중 어느 하나에 의해 코딩되는 피. 멀토시다(P. multocida) 및 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)의 폴리펩티드를 코딩하는 DNA 분자, 및 그의 종 동족체, 및 c) 중간 정도의 엄격 조건하에서 (a) 또는 (b)의 DNA에 혼성화되는, 독성 유전자 산물을 코딩하는 DNA 분자로 이루어진 군으로부터 선택되는 DNA에 의해 코딩되는 독성 폴리펩티드를 포함한다.

또한, 본 발명은 본 발명의 바람직한 폴리펩티드에 약 99％ 이상, 약 95％ 이상, 약 90％ 이상, 약 85％ 이상, 약 80％ 이상, 약 75％ 이상, 약 70％ 이상, 약 65％ 이상, 약 60％ 이상, 약 55％ 이상 및 약 50％ 이상의 동일성 및(또는) 상동성을 갖는 폴리펩티드, 즉 종 동족체 및 오르토로그(ortholog)를 포함한다. 본 발명의 바람직한 폴리펩티드에 대한 아미노산 서열 "동일성" 퍼센트는, 독성 유전자 산물의 서열과 후보 서열을 정렬하고, 필요한 경우에는 최대의 서열 동일성 퍼센트를 얻기 위해 갭을 도입한 후, 보존적 치환체는 동일한 서열의 일부로 고려하지 않은 상태에서, 독성 유전자 산물의 잔기와 동일한 후보 서열의 아미노산 잔기의 비율로서 본 명세서에 정의된다. 본 발명의 바람직한 폴리펩티드에 대한 아미노산 서열 "상동성" 퍼센트는, 독성 유전자 산물의 서열과 후보 서열을 정렬하고, 필요한 경우에는 최대의 서열 동일성 퍼센트를 얻기 위해 갭을 도입한 후, 어떤 보존적 치환체도 동일한 서열의 일부로 고려한 상태에서, 독성 유전자 산물의 잔기와 동일한 후보 서열의 아미노산 잔기의 비율로서 본 명세서에 정의된다. 보존적 치환은 표 A 및 B에 기재된 바와 같이 정의할 수 있다.

[표 A]

보존적 치환 Ⅰ
측쇄 특성		아미노산
지방족	비극성	G A P
		I L V
	극성-무전하	C S T M
		N Q
	극성-전하	D E
		K R
방향족		H F W Y
기타		N Q D E

본 발명의 폴리펩티드는 천연 세균 세포 공급원으로부터 단리하거나 화학적으로 합성할 수 있지만, 본 발명의 숙주 세포를 포함하는 재조합 절차에 의해 생산하는 것이 바람직하다. 본 발명의 독성 유전자는 전장 폴리펩티드, 생물학적 활성 단편, 또는 특이적인 생물학적 또는 면역학적 활성을 보유하는 그의 변이체일 수 있다. 변이체는 독성 폴리펩티드 유사체를 포함할 수 있으며, 여기서 하나 이상의 특이적(즉, 자연적으로 코딩됨) 아미노산이 결실 또는 대체되거나, 또는 하나 이상의 비특이적 아미노산이 (1) 독성 유전자 산물에 특이적인 1가지 이상의 생물학적 활성 또는 면역학적 특성의 손실없이, 또는 (2) 독성 유전자 산물의 특정 생물학적 활성을 특이적으로 무력화시키면서 첨가될 수 있다. 또한, 본 발명의 결실 변이체에는 생물학적 활성에 필수적이지 않은 폴리펩티드의 일부가 결손된 단편이 포함되며, 삽입 변이체에는 야생형 폴리펩티드나 그의 단편이 다른 폴리펩티드에 융합된 융합 폴리펩티드가 포함된다.

독성 폴리펩티드의 변이체에는 본 발명의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 변화에 의해 보존적 치환이 도입된 변이체들이 포함된다. 보존적 치환은 당업계에서 관련된 물리적 특징에 따라 아미노산을 분류하는 것으로 인식되며, 표 A에 기재된 바와 같이 정의될 수 있다(1997년 3월 13일에 공개된 WO 97/09433호의 10 페이지, 및 1996년 6월 9일 출원된 PCT/GB96/02197호 참조). 별법으로, 보존적 아미노산은 표 B에 기재된 바와 같이 문헌 [Lehninger, Biochemistry, Second Edition; Worth Publishers, Inc. NY:NY (1975), pp.71-77]에 정의된 대로 분류할 수 있다.

[표 B]

보존적 치환 Ⅱ
측쇄 특성	아미노산
비극성 (소수성) A. 지방족 B. 방향족 C. 황-함유 D. 양면성	A L I V P F W M G
무전하-극성 A. 히드록실 B. 아미드 C. 설프히드릴 D. 양면성	S T Y N Q C G
양전하성 (염기성)	K R H
음전하성 (산성)	D E

본 발명의 변이체 독성 산물은 성숙 독성 유전자 산물, 즉 리더 서열 또는 신호 서열이 제거된 것으로서 아미노 말단에 추가적인 잔기를 갖는 것을 포함한다. -1번 위치에 추가적인 메티오닌 잔기가 있는 독성 유전자 산물은 본 발명에 포함되며, -2번 및 -1번에 추가적인 메티오닌과 리신 잔기가 있는 독성 산물도 본 발명에 포함된다. 이러한 형태의 변이체들은 세균성 세포형 내에서의 재조합 단백질 생산에 특히 유용하다. 또한, 본 발명의 변이체는 자연 발생적 단백질에서 발견되지 않는 아미노 말단 서열을 포함하는 변이체 뿐만 아니라 다른 단백질로부터 유래한 아미노 말단 서열이 도입된 유전자 산물을 포함한다.

또한, 본 발명은 특정 발현 시스템을 사용하여 추가적인 아미노산 잔기를 갖는 변이체 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, 해당 폴리펩티드를 글루타티온-S-트랜스퍼라제(GST)와의 융합 단백질로 발현시키는 시판되는 벡터를 사용하면, 해당 폴리펩티드로부터 GST 부분의 절단 이후에 -1번 위치에 추가적인 글리신 잔기가 있는 해당 폴리펩티드를 얻을 수 있다. 또한, 다른 벡터 시스템을 사용하는 발현으로부터 생성된 변이체도 포함된다.

또한, 본 발명에는 항체(예를 들어, 모노클로날 및 폴리클로날 항체, 단일쇄 항체, 키메라 항체, 인간화, 인간 및 CDR-이식 항체로서 본 발명의 폴리펩티드를 특이적으로 인식하는 CDR 서열을 비롯한 화합물을 포함) 및 독성 유전자 산물 또는 그 단편에 특이적인 기타 결합 단백질이 포함된다. "~에 특이적인"이라는 용어는 본 발명 항체의 가변 영역이 배타적으로 독성 폴리펩티드를 인식하고 결합하는 (즉, 폴리펩티드 군들 간의 서열 동일성, 상동성 또는 유사성에도 불구하고 하나의 독성 폴리펩티드를 관련 독성 폴리펩티드들로부터 구별할 수 있는) 것 뿐만 아니라, 항체의 가변 영역 바깥쪽의 서열, 특히 항체 분자의 불변 영역과의 상호작용을 통해 다른 단백질(예를 들어, ELISA 기술에서의 에스 아우레우스(S. aureus) 단백질 A 또는 다른 항체)과 상호작용할 수 있는 것을 의미한다. 본 발명 항체의 결합 특이성을 측정하기 위한 스크리닝 분석법은 널리 공지되어 있으며 당업계에서 통상적으로 수행되는 것이다. 그러한 분석법에 대해서는 문헌 [Harlow et al., (Eds.) Antibodies A Laboratory Manual; Cold Spring Harbor Laboratory; Cold Spring Harbor, NY (1988), Chapter 6]을 참조한다. 또한, 상기 정의한 바와 같이, 단편이 유도된 본 발명의 독성 폴리펩티드에 가장 특이적인 항체라면, 상기 독성 폴리펩티드에서 유래된 단편을 인식하고 결합하는 항체도 본 발명에 포함된다.

또한, 본 발명에서 제공되는 DNA 및 아미노산 서열 정보도 독성 유전자와 그 코딩된 유전자 산물의 구조 및 기능에 대한 체계적 분석을 가능하도록 한다. 또한, 본 발명의 독성 유전자 산물을 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 대한 지식을 습득하면, 본 발명의 독성 폴리펩티드 코딩 폴리뉴클레오티드를 인식하고 이에 혼성화되는 안티센스 폴리뉴클레오티드를 이용할 수 있다. 전장 및 단편 안티센스 폴리뉴클레오티드가 본 발명에서 제공된다. 당업자는 본 발명의 단편 안티센스 분자가 (i) 특정 RNA(본 발명의 독성 유전자를 코딩하는 DNA와 기타 공지된 분자를 코딩하는 DNA를 서열 비교함으로써 결정됨)를 특이적으로 인식하고 이에 혼성화되는 분자, 및 (ii) 독성 단백질 족의 변이체를 코딩하는 RNA를 인식하고 이에 혼성화되는 분자를 포함한다는 것을 이해할 것이다. 또한, 독성 단백질족의 다른 구성원을 코딩하는 RNA에 혼성화되는 안티센스 폴리뉴클레오티드는 상기 독성 단백질족의 특징적 서열이나 시그너처 서열을 확인하는 서열 비교를 통하여 확인할 수 있다.

또한, 본 발명은 리보자임을 사용하여 유전자 발현을 조절하는 방법을 포함한다. 이는 문헌 [Gibson and Shillitoe, Mol. Biotech. 7:125-137 (1997)]을 참조한다. 리보자임 기술은 (i) 표적 mRNA에 상보 RNA를 혼성화시키고 (ii) 혼성화된 mRNA를 상보 사슬에 고유한 뉴클레아제 활성을 통해 절단하는 것에 의한 서열 특이적 방식으로 mRNA의 번역을 억제하는데 사용될 수 있다. 리보자임은 경험적인 방법으로 확인될 수 있지만, 표적 mRNA에서의 결합 부위를 기초로 하여 특이적으로 고안하는 것이 보다 바람직하다[Branlage et al., Trends in Biotech 16:434-438 (1998)]. 리보자임을 표적 세포로 전달하는 것은 당업계에서 널리 공지되고 통상적으로 수행되는 외생성 또는 내생성 전달 중 어느 하나를 사용하여 수행할 수 있 다. 외생성 전달법은 표적 리포좀의 사용 또는 직접적인 국부 주입을 포함할 수 있다. 내생성 전달법은 바이러스 벡터 및 비-바이러스 플라스미드의 사용을 포함한다.

독성 유전자 산물을 코딩하는 뉴클레오티드의 독특한 영역에 대한 상보적이도록 고안할 경우, 리보자임은 독성 유전자의 발현을 특이적으로 조절할 수 있다. 따라서, "특이적으로 조절한다"는 것은 본 발명의 리보자임이 단지 하나의 폴리뉴클레오티드만을 인식한다는 것을 의미한다. 마찬가지로, 리보자임이 단백질족의 전부 또는 일부의 발현을 조절하도록 고안할 수 있다. 이러한 형태의 리보자임은 상기 단백질족을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 전부 또는 일부에 보존된 폴리뉴클레오티드 서열을 인식하도록 고안한다.

또한, 본 발명은 올리고뉴클레오티드에 의해 유도되는 삼중 나선 형성을 이용하여 본 발명의 독성 유전자의 전사를 조절하는 방법을 포함한다. 이는 문헌 [Lavrovsky et al., Biochem.Mol.Med. 62:11-22 (1997)]을 참조한다. 삼중 나선 형성은 왓슨-크릭 모델에서 정의된 이중 나선 DNA의 주구(major groove)에 혼성화되는 서열 특이적 올리고뉴클레오티드를 이용하여 수행한다. 서열 특이적 올리고뉴클레오티드를 혼성화시키면 그 후에, 예를 들어 전사 인자 및 중합효소를 포함하는 DNA 결합 단백질의 활성을 조절할 수 있다. 혼성화에 바람직한 표적 서열은 독성 유전자 산물의 발현을 조절하는 전사 조절 영역을 포함한다. 또한, 삼중 나선 형성이 가능한 올리고뉴클레오티드는 표적 DNA 서열의 부위 특이적 공유 결합 변형에 유용하다. 공유 결합 변형에 유용한 올리고뉴클레오티드는 라브로브스키 (Lavrovsky) 등의 상기 문헌에 기재된 다양한 DNA 손상 인자와 커플링될 수 있다.

피. 멀토시다(P. multocida) 및 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)의 독성 유전자를 확인하면, 상기 유전자 및 유전자 산물을 항균제 확인 방법에 유용하게 사용할 수 있다. 그러한 방법은 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118 및 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164 중 어느 하나에 기재된 DNA 서열, 및 그의 종 동족체(즉, 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118 및 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164의 DNA 서열로 표시되는 유전자들이 독성 유전자 산물을 코딩하거나, 또는 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118 및 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164의 DNA 서열이 독성 유전자 산물을 코딩하는 유전자에 인접하거나, 독성 유전자 산물의 발현을 조절하는데 관여함)로 표시되는 독성 유전자 산물의 발현을 방해 수 있는 잠재적인 약제를 분석하는 것을 포함하거나, 또는 서열 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 51, 53, 55, 57, 58, 60, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118 및 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 163 및 164 중 어느 하나에 기재된 DNA 서열, 그의 종 동족체, 또는 그의 상보 가닥에 의해 전체적 또는 부분적으로 코딩되는 세균 유전자 산물의 기능을 방해할 수 있는 능력을 갖는 잠재적 약제를 분석한 후, 그러한 분석에서 양성 결과를 나타내는 약제를 확인하는 것을 포함한다. 이러한 분석에 유용한 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드에는 본 명세서에 개시된 유전자와 그 코딩된 폴리펩티드 뿐만 아니라 야생형 유전자 및 폴리펩티드와 실질적으로 동일한 활성이 있는 그의 변이체가 포함된다.

상기 기재된 방법에 의해 생산된 독성 유전자 산물은 억제제를 스크리닝하기 위한 고처리 분석에 사용된다. 스크리닝될 잠재적 약제의 공급원으로는 화합물 라이브러리, 스트렙토마이세테스(Streptomycetes), 기타 세균 및 진균의 발효 배지, 및 식물과 기타 초목의 세포 추출물이 있다. 효소 활성이 알려져 있는 단백질에 대한 분석은 그 활성을 기초로 이루어지고, 다수의 잠재적 약제는 그 활성을 억제하는 능력에 대해 스크리닝한다. 다른 단백질이나 핵산에 결합하는 단백질에 있어서, 결합 분석은 그러한 결합 상호작용을 직접 측정하도록 이루어지고, 잠재적 약제는 그 결합 상호작용을 억제하는 능력에 대해 스크리닝한다.

당업계에 공지된 다양한 분석의 용도는 본 발명의 한 측면으로 포함된다. 공지된 유전자 산물과의 서열 유사성에 의해 독성 유전자 산물의 기능이 알려지거나 예상될 경우, 상기 유전자 산물의 기능 및(또는) 특징에 중점을 둔 효소적 또는 기타 유형의 생물학적 및(또는) 생화학적 분석으로 잠재적 억제제를 스크리닝할 수 있다. 다른 단백질이나 핵산과 상호작용하는 것으로 알려진 공지 유전자 산물과의 서열 유사성에 의해 상기 독성 유전자 산물이 알려지거나 예상될 경우, 상호작용의 억제제는 결합 분석에서 직접 스크리닝할 수 있다. 본 발명은 상기 독성 유전자 산물의 결합 억제제에 대한 스크리닝 및 확인을 위한 다수의 분석법을 포함한다. 한 실시예에서, 상기 독성 유전자 산물을 고정시키고, 추정 억제제 화합물의 존재 및 부재시 결합 파트너와의 상호작용을 평가한다. 다른 실시예에서, 상기 독성 유전자 산물과 그 결합 파트너 간의 상호작용은 추정 억제제 화합물의 존재 및 부재시의 용액 분석으로 평가한다. 이 두 분석에서, 상기 독성 유전자 산물과 그 결합 파트너 간의 결합을 감소시키는 화합물로서 억제제를 확인한다. 또한, 상기 유전자 산물의 결합 파트너가 단백질인 경우에 대한 다른 분석법도 본 발명에 포함된다. 예를 들어, 1995년 8월 3일 공개된 PCT 출원 WO 95/20652호에 기재된 바와 같이, 형질전환 또는 형질감염된 숙주 세포 내에서 양성 신호의 검출에 의해 단백질/단백질 상호작용의 억제제를 확인하는 디-하이브리드(di-hybrid) 분석법의 변형이 본 발명에 포함된다.

본 발명에 포함되는 후보 억제제에는 잠재적 억제제의 라이브러리로부터 선택된 화합물들이 포함된다. 소분자 조절인자를 확인하기 위한 다양한 라이브러리가 있으며, 여기에는 (1) 화합물 라이브러리, (2) 천연물 라이브러리, 및 (3) 무작 위 펩티드, 올리고뉴클레오티드 또는 유기 분자의 조합 라이브러리가 포함된다. 화합물 라이브러리는 공지된 화합물 또는 천연물 스크리닝을 통해 "적중물질(hit)" 또는 "선도물질(lead)"로 확인된 화합물의 구조적 유사체로 이루어져 있다. 천연물 라이브러리는 (1) 토양, 식물 또는 해양 미생물로부터의 배양액 및 배양 추출물, 또는 (2) 식물 또는 해양 생물의 추출물로 스크리닝하기 위한 혼합물을 생성하는데 사용하는 미생물, 동물, 식물 또는 해양 생물의 수집물이다. 천연물 라이브러리는 폴리케티드, 비리보솜계 펩티드 및 그의 (인공) 변이체를 포함한다. 이는 문헌 [Science 282:63-68 (1998)]을 참조한다. 조합 라이브러리는 다수의 펩티드, 올리고뉴클레오티드 또는 유기 화합물의 혼합물로서 이루어져 있다. 조합 라이브러리는 통상적인 자동화 합성법, PCR, 클로닝 또는 특허받은 합성법에 의해서 비교적 용이하게 제조할 수 있다. 특히 관심있는 것은 펩티드와 올리고뉴클레오티드의 조합 라이브러리이다. 또한, 관심있는 다른 라이브러리에는 펩티드, 단백질, 펩티드 모방체, 다중평행(multiparallel) 합성 수집물, 재조합체 및 폴리펩티드 라이브러리가 포함된다. 조합 화학 및 그로부터 생성된 라이브러리에 대해서는 문헌 [Myers, Curr. Opin. Biotechnol. 8:701-707 (1997)]을 참조한다. 본 명세서에 기재된 수종의 라이브러리를 사용하여 조절제를 확인함으로써 후보 "적중물질" (또는 "선도물질")을 변형하여 활성을 조절하도록 상기 "적중물질"의 능력을 최적화할 수 있다.

본 발명에 포함되는 다른 후보 억제제를 고안할 수 있으며, 여기에는 결합 파트너의 가용성 형태 뿐만 아니라 키메라 또는 융합 단백질로서의 결합 파트너가 포함된다. 본원에 사용되는 결합 파트너는 항체, 항체 단편, 및 상기 확인된 독성 유전자의 발현 산물에 면역특이적인 항체 도메인을 포함하는 변형된 화합물을 광범위하게 포함한다.

독성 유전자 산물에 대한 결합 파트너(즉, 리간드)가 알려져 있지 않은 경우에는 다른 분석법을 사용할 수 있으며, 여기에는 표적 단백질에 대한 시험 결합 파트너의 직접적인 결합을 측정함으로써 표적 단백질의 결합 파트너를 확인하는 분석법, 및 이온 분무 질량분석계/HPLC 방법 또는 기타 물리적 및 분석적 방법으로 친화성 한외여과를 통해 표적 단백질의 결합 파트너를 확인하는 분석법이 포함된다. 별법으로, 문헌 [Fields and Song, Nature, 340:245-246 (1989)] 및 [Fields and Sternglanz, Trends in Genetics, 10:286-292 (1994)]에 기재된 효모 투-하이브리드 시스템(two-hybrid system)을 사용하여 간접적으로 그러한 결합 상호작용을 측정하며, 상기 두 문헌 모두 이 거명을 통해 본 명세서에 포함된다. 투-하이브리드 시스템은 두 단백질 또는 폴리펩티드 간의 상호작용을 검출하기 위한 유전적 분석법이다. 투-하이브리드 시스템은 해당 공지 단백질에 결합하는 단백질을 확인하거나 결합에 중요한 도메인 또는 잔기를 알아내기 위해 사용할 수 있다. 이 방법을 다양하게 변형하여 DNA 결합 단백질을 코딩하는 유전자를 클로닝하고, 단백질에 결합하는 펩티드를 확인하며, 약물을 스크리닝하는 방법이 개발되었다. 투-하이브리드 시스템은 한 쌍의 결합 단백질이 전사 활성화 도메인을 리포터 유전자의 상류 활성화 서열(UAS)에 결합하는 DNA 결합 도메인 근처로 가져오도록 할 수 있으며, 일반적으로 효모에서 수행된다. 상기 분석법은 (1) 제1 단백질에 융합된 DNA 결합 도메인 및 (2) 제2 단백질에 융합된 활성화 도메인을 코딩하는 두개의 하이브리드 유전자 구조물을 필요로 한다. DNA 결합 도메인은 제1 하이브리드 단백질을 리포터 유전자의 UAS에 대한 표적이 되도록 하도록 하지만, 대부분의 단백질은 활성화 도메인이 결여되어 있기 때문에, 이 DNA 결합 하이브리드 단백질은 리포터 유전자의 전사를 활성화시키지 않는다. 활성화 도메인을 포함하는 제2 하이브리드 단백질은 UAS에 결합할 수 없기 때문에 그 자신만으로 리포터 유전자의 발현을 활성화시킬 수 없다. 그러나, 두 하이브리드 단백질이 존재하는 경우, 제1 단백질과 제2 단백질간의 비공유성 결합이 활성화 도메인을 UAS에 결합시켜 리포터 유전자의 전사를 활성화시킨다. 독성 유전자 산물(예를 들어, 제1 단백질)이 이미 다른 단백질 또는 핵산과 결합한다고 알려진 경우, 이 분석법은 결합을 방해하는 약제를 찾는데 사용할 수 있다. 리포터 유전자의 발현은 상기 시스템에 각기 다른 시험 물질을 첨가하여 모니터링하며, 억제제가 존재하면 리포터 신호가 결여되는 결과를 나타낸다.

독성 유전자 산물의 기능이 알려져 있지 않고 이에 결합하는 리간드도 알려져 있지 않은 경우, 효모 투-하이브리드 분석법은 상기 유전자 산물에 결합하는 단백질을 찾아내는데에도 사용될 수 있다. 제1 단백질(표적 단백질)에 결합하는 단백질을 찾아내는 분석에서, 서로 다른 제2 단백질을 코딩하는 다수의 하이브리드 유전자가 생성되어 상기 분석을 통해 스크리닝된다. 통상, 제2 단백질은 전체 cDNA 또는 게놈 DNA가 활성화 도메인에 연결된 플라스미드 집합체에 의해 코딩된다. 이 시스템은 다양한 종류의 단백질에 적용할 수 있으며, 제2 결합 단백질의 정체 및 기능을 알 필요는 없다. 이 시스템은 매우 감도가 좋아서 다른 방법에 의해 밝혀지지 않는 상호작용도 검출할 수 있으며, 심지어 일시적인 상호작용도 전사를 촉진함으로써 반복적으로 번역되어 리포터 단백질을 생성하는 안정한 mRNA를 생성할 수 있다.

표적 단백질에 결합하는 약제를 찾기 위해 다른 방법을 사용할 수도 있다. 이 거명을 통해 본 명세서에 포함되는 미국 특허 제5,585,277호에는 표적 단백질에 대한 시험 리간드의 직접 결합을 확인하는 그러한 스크리닝 방법 하나가 기재되어 있다. 이 방법은 일반적으로 단백질이 폴딩 상태와 비폴딩 상태의 혼합물이며 이 두 상태를 지속적으로 왕복한다는 원리에 근거한 것이다. 시험 리간드가 표적 단백질의 폴딩형에 결합한 경우(즉, 시험 리간드가 표적 단백질의 리간드인 경우), 리간드와 결합된 표적 단백질 분자는 폴딩 상태를 유지한다. 따라서, 표적 단백질에 결합하는 리간드의 존재시 리간드가 존재하지 않는 경우보다 폴딩 상태의 표적 단백질이 더 많이 존재하게 된다. 리간드와 표적 단백질의 결합 여부는 표적 단백질의 폴딩 상태와 비폴딩 상태를 구별하는 어떠한 방법에 의해서든 결정할 수 있다. 이 분석을 수행하기 위해 표적 단백질의 기능을 알 필요는 없다. 이 방법에 의해서 어떠한 약제라도 시험 리간드로서 평가할 수 있으며, 여기에는 금속, 폴리펩티드, 단백질, 지질, 다당류, 폴리뉴클레오티드 및 유기 소분자가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다.

이 거명을 통해 본 명세서에 포함되는 문헌 [Wieboldt et al., Anal.Chem., 69:1683-1691 (1997)]에 표적 단백질에 대한 리간드를 확인하는 또다른 방법이 기 재되어 있다. 이 기술을 이용하여, 약제 20 내지 30개의 조합 라이브러리의 표적 단백질에 대한 결합 여부를 용액 상태에서 한번에 스크리닝할 수 있다. 표적 단백질에 결합하는 약제는 원심분리성 한외여과에 의해서 다른 라이브러리 성분으로부터 분리한다. 필터 상에 잔존하는 특이적으로 선별된 분자는 이후에 표적 단백질로부터 유리되어 HPLC 및 공기식 전자분무(이온 분무) 이온화 질량 분석계로 분석된다. 이 방법으로 표적 단백질에 가장 높은 친화성을 갖는 라이브러리 성분을 선별할 수 있으며, 특히 소분자 라이브러리에 대해 유용하다.

피. 멀토시다(P. multocida) 감염의 생체내 생쥐 모델에서 최초 스크리닝에에 의해 확인된 억제제/결합제의 독성에 대한 효과를 평가할 수 있다. 균혈증, 심내막염, 패혈성 관절염, 연부조직 농양 또는 폐렴의 모델을 이용할 수도 있다. 또한, 다른 동물의 사용을 포함하는 모델도 본 발명에 포함된다. 예를 들어, 추정 억제제/결합제 화합물을 다양한 양으로 투여하기 전 또는 투여한 후, 토끼를 야생형 피. 멀토시다(P. multocida) 균주로 감염시킬 수 있다. 추정 억제제/결합제 화합물 대신 식염수만을 투여한 대조군 동물은 상기 시험 동물의 유해성을 측정할 수 있는 표준이 된다. 다른 동물 모델로는 문헌 [Animal and Plant Health Inspection Sevice, USDA, 1994년 1월 1일판 §§113.69-113.70], [Panciera and Corstvet, Am. J. Vet. Res. 45:2532-2537], [Ames et al., Can. J. Comp. Med. 49:395-400 (1984)] 및 [Mukkur, Infection and Immunity 18:583-585 (1977)]에 기재된 것들이 포함된다. 세균 독성을 방해하는 억제제/결합제는 감염을 예방하거나, 또는 일단 감염되면 그 결과를 역전시킬 수 있다.

당업계에 공지된 임의의 면역보강제를 백신 조성물에 사용할 수 있으며, 여기에는 프로인트(Freund)의 완전 면역보강제 및 프로인트의 불완전 면역보강제와 같은 오일 기재의 면역보강제, 미콜레이트 기재의 면역보강제(예를 들어, 트레할로스 디미콜레이트), 세균성 리포폴리사카라이드(LPS), 펩티도글리칸류(예를 들어, 뮤레인, 뮤코펩티드 또는 N-오파카(N-Opaca), 뮤라밀 디펩티드[MDP] 또는 MDP 유사체 등의 당단백질), 프로테오글리칸류(예를 들어, 클레브시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumonia)의 추출물), 스트렙토코커스 조제(예를 들어, OK432), 바이오스팀(상표명, Biostim; 예를 들어, 01K2), EP 제109 942호, EP 제180 564호 및 EP 제231 039호의 "이스콤스(Iscoms)", 수산화알루미늄, 사포닌, DEAE-덱스트란, 중성 오일(예를 들어, 미글리올), 식물성 오일(예를 들어, 아라키스 오일), 리포좀, 플루로닉(등록상표, Pluronic) 폴리올, 리비(Ribi) 면역보강제 시스템(예를 들어, GB-A-2 189 141호 참조), 또는 인터루킨, 특히 세포 매개성 면역 반응을 자극하는 것들이 포함된다. 미국 특허 제4,877,612호에는 악티노마이세탈레스(Actinomycetales)목 내의 세균 속인 아미콜라타(Amicolata)의 추출물로 이루어진 다른 면역보강제가 기재되어 있다. 추가적으로, 특허받은 면역보강제 혼합물이 시판되고 있다. 사용되는 면역보강제는 부분적으로 수용 생물체에 따라 달라질 것이다. 투여하는 면역보강제의 양은 동물의 종류 및 크기에 따라 달라질 것이다. 최적 투여량은 통상적인 방법에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

임의로 백신 조성은 제약학적 비히클, 부형제 또는 매개체로서 작용하는, 백신 상용성이며 제약상 허용되는(즉, 살균 및 무독성) 액체, 반고체 또는 고체 희석 제를 포함할 수 있다. 당업계에 공지된 어떠한 희석제라도 사용할 수 있다. 희석제의 예로는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트, 스레아르산 마그네슘, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 활석, 알긴산염, 전분, 락토스, 수크로스, 덱스트로스, 소르비톨, 만니톨, 아카시아 검, 인산 칼슘, 광유, 코코아 버터 및 테오브로마(theobroma) 오일이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다.

백신 조성물은 전달이 용이한 형태로 포장할 수 있다. 이 조성물은 캡슐, 캐플릿(caplet), 새셰이(sachet), 캐셰이(cachet), 젤라틴, 종이, 또는 기타 용기에 넣을 수 있다. 이들 전달 형태는 수용 생물체로의 면역원성 조성물의 유입과 상용성인 경우 및, 특히 상기 면역원성 조성물이 단위 투여 형태로 전달되는 경우에 바람직하다. 이 투여 단위는, 예를 들어 정제, 캡슐제, 좌약 또는 캐셰이로 포장될 수 있다.

백신 조성물은, 예를 들어 정맥내주사, 피부내주사, 근육내주사, 유방내주사, 복강내주사 또는 피하주사에 의해; 경구투여, 설하투여, 비강투여, 항문투여, 질투여를 비롯한 임의의 통상적인 방법에 의해 면역화될 환자에 도입시킬 수 있다. 치료는 단일 투여로 이루어지거나 일정 기간에 걸친 다수 투여로 이루어질 수 있다.

또한, 본 발명은 세균 감염 및(또는) 그 관련 증상을 예방하거나 경감시키는 백신 의약 제조에 있어서 본 발명의 독성약화 세균 균주의 용도를 포함한다. 또한, 본 발명은 세균 감염 및(또는) 그 관련 증상을 예방하거나 경감시키는 의약 제조에 있어서 본 발명의 억제제의 용도를 제공한다.

본 발명은 하기 실시예에 의해 예시된다. 실시예 1은 피. 멀토시다(P. multocida) 돌연변이체의 제작에 대해 기술하고 있다. 실시예 2는 피. 멀토시다(P. multocida) 돌연변이체의 스크리닝에 관한 것이다. 실시예 3은 피. 멀토시다(P. multocida) 돌연변이체의 독성을 측정하는 방법을 다루고 있다. 실시예 4는 피. 멀토시다(P. multocida) 독성 유전자의 클로닝에 대해 기술하고 있다. 실시예 5는 피. 멀토시다(P. multocida) 독성 유전자에 관련된 다른 종의 유전자들에 대한 확인을 다루고 있다. 실시예 6은 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) 돌연변이체의 제작에 대해 기술하고 있다. 실시예 7은 독성약화 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) 돌연변이체의 스크리닝을 다루고 있다. 실시예 8은 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) 독성 유전자의 확인에 관한 것이다. 실시예 9는 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) 돌연변이체 및 야생형 세균의 경쟁 감염을 기술하고 있다. 실시예 10은 확인된 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) 유전자를 특성화하고 있다. 실시예 11은 야생형 세균 감염을 예방하기 위한 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) 변종의 효능을 다루고 있다.

[실시예]

<실시예 1>: 태그-트랜스포손 피. 멀토시다(P. multocida) 돌연변이체 라이브러리의 제작

피. 멀토시다(P. multocida)에서 작용하며 랜덤한 것으로 이미 입증된[Lee et al., Vet Microbiol. 50:143-8 (1996)] 모 벡터 pLOF/Km [Herrero et al., J. Bacteriol. 172:6557-67 (1990)]에서 태그-트랜스포손 돌연변이체의 라이브러리를 제작하였다. 플라스미드 pLOF/Km은 자살 벡터인 pGP704를 변형하여 Tac 프로모터 조절하의 트랜스포자제(transposase) 유전자 및 카나마이신 내성을 코딩하는 미니-Tn10 전위성 인자(transposable element)를 포함하도록 제작하였다. 하기와 같이 세미-랜덤 [NK]₃₅ 서열을 포함하는 서열 태그를 수용하도록 pLOK/Km을 변형하여 플라스미드 pTEF-1을 제작하였다.

먼저 플라스미드 pLOF/Km을 변형하여 다중 클로닝 영역내의 유일한 KpnI 제한 부위를 제거한 다음, 미니-Tn10 영역내에 새로운 KpnI 부위를 도입하였다. 플라스미드를 KpnI로 절단하고, 생성된 돌출 말단을 제조자가 제안하는 프로토콜에 따라 클레나우(Klenow) 중합효소로 채워넣었다. 본원에 설명된 제한효소 절단 및 라이게이션은 제조자가 제안하는 프로토콜(Gibco BRL, Gaithersburg, MD 및 Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN)에 따라 수행하였다. 평활 말단 생성물을 셀프-라이게이션하여 pLOF/Km-KpnI로 명명되는 플라스미드를 생성시키고, 증폭을 위해 대장균(E. coli) DH5α:λpir내에 형질전환시켰다. 대장균 DH5α:λpirΦ80dlacZㅿM15, recA1, endA1, gyrA96, thi-1, hsdR17(r_k ^-, m_k, supE44, relA1, deoR, ㅿ(lacZYA-argF)U169를 37℃에서 루리아-베르타니(Luria-Bertani, LB) 배지에서 증식시켰다. 퀴아젠, 인크(QIAGEN, Inc, Santa Clarita, CA)사로부터 구입한 퀴아젠 스핀프렙(QIAGEN SpinPreps)을 사용하여 플라스미드를 제조하고, 미니-Tn10 전위성 인자내의 소정의 유니크 부위를 자르는 SfiI로 절단하였다. 올리고뉴클레 오티드 TEF1(서열 86)과 TEF3(서열 87)을 어닐링하여 SfiI-KpnI-SfiI 어댑터를 제조하고, 생성된 이중 가닥 어댑터를 SfiI 부위에 라이게이션하여 플라스미드 pTEF-1을 생성시켰다. 올리고뉴클레오티드 TEF1 및 TEF3(및 본원에 기재된 모든 다른 올리고뉴클레오티드)은 제노시스 바이오테크놀러지(Genosys Biotechnologies, The Woodlands, TX)사에서 합성하였다.

TEF1 5'-AGGCCGGTACCGGCCGCCT (서열 86)

TEF3 5'-CGGCCGGTACCGGCCTAGG (서열 87)

pTEF-1의 KpnI 부위내로의 삽입을 위한 유니크 서열 태그는 다음과 같이 제조하였다. 250 μM의 각 dNTP, 1.5 mM Mg(OAc)₂, 프라이머 TEF14(서열 88) 및 TEF15(서열 89) 각 100 pmol, 주형 DNA로서의 TEF26(서열 90) 1 ng, 및 재조합 Tth DNA 중합효소 XL 2.5 유닛을 포함하는 조건하에서, 진앰프(GeneAmp) XL PCR 키트(PE Applied Biosystems, Foster City, CA)를 사용하여 이중 가닥 DNA 태그를 생성시키도록 PCR을 수행하였다.

TEF14 5'-CATGGTACCCATTCTAAC (서열 88)

TEF15 5'-CTAGGTACCTACAACCTC (서열 89)

TEF26 5'-CTAGGTACCTACAACCTCAAGCTT-[NK]₃₅-AAGCTTGGTTAGAATGGGTACCATG (서열 90)

반응 조건에는 95℃에서 1분 동안 최초 인큐베이션한 다음, 95℃에서 30초, 45℃에서 45초 및 72℃에서 15초의 사이클을 30회 반복한 후에, 72℃에서 2분 동안 최종 인큐베이션하는 것이 포함된다. KpnI을 사용하여 PCR 산물을 절단하고, 제조자가 제안하는 프로토콜에 따라 퀴아젠 뉴클레오티드 분리 키트(QIAGEN Nucleotide Removal Kit; QIAGEN, Inc., Chatsworth, GA)를 사용하여 정제하였다. 미리 KpnI으로 절단하여 선형으로 만들어진 유니크 태그 서열을, 표준 방법을 이용하여 송아지 장의 알칼리 포스파타제(Boehringer-Mannheim)로 탈인산화시킨 후에 pTEF-1의 미니-Tn10 인자에 라이게이션하였다. 생성된 플라스미드 라이브러리를 대장균 DH5α:λpir내에 형질전환시켰다. 콜로니 블롯 분석은 DIG 사용자 지침서(DIG User's Guide, Boehringer-Mannheim)에 따라 하기와 같이 수행된 혼성화 및 검출과 함께 수행하였다.

혼성화는 본질적으로 제니어스 비-방사성 사용자 지침서(Genius Non-Radioactive User's Guide, Boehringer Mannheim Biochemicals), DIG-PCR 표지 키트의 제품 쉬이트(Boehringer Mannheim Biochemicals) 및 CSPD의 제품 쉬이트(Boehringer Mannheim Biochemicals)에 따라 수행하였다. 프로브의 제조를 위해, 앰플리택(Amplitaq) PCR 완충액(PE Applied Biosystems), 200 μM dNTP, 프라이머 TEF5(서열 91) 및 TEF6(서열 92) 각 140 pmol, 2 mM MgCl₂, 앰플리택(PE Applied Biosystems) 2.5 유닛 및 플라스미드 DNA 1 ng을 사용하여 100 ㎕의 1차 PCR 반응을 시작하였다.

TEF5 5'-TACCTACAACCTCAAGCT (서열 91)

TEF6 5'-TACCCATTCTAACCAAGC (서열 92)

사이클 조건은 95℃에서 2분 동안 최초 인큐베이션한 다음, 95℃에서 30초, 50℃에서 45초 및 72℃에서 15초의 사이클을 35회 반복한 후에, 72℃에서 3분 동안 최종 인큐베이션하는 것을 포함한다. 증폭된 생성물을 2％의 누시브(NuSieve) GTG(FMC BioProducts, Rockland, ME, USA):아가로스(3:1) 겔 상의 전기영동에 의해 분리하고, 109 bp 크기의 생성물을 절단하여 정제하였다. 겔 추출은 퀴아젠 겔 추출(QIAGEN Gel Extraction) 키트(QIAGEN)를 사용하여 수행하였다. DIG PCR Kit, 프라이머 TEF24 및 TEF25 각 50 pmol, 및 DIG 프로브 합성 혼합물(Probe Synthesis Mix)과 2 mM dNTP 원액의 1:1 혼합물을 사용하는 50 ㎕ PCR 반응에서 1차 생성물 약 15 ng을 표지하였다.

TEF24 5'-TACCTACAACCTCAAGCTT (서열 93)

TEF25 5'-TACCCATTCTAACCAAGCTT (서열 94)

PCR 조건은 95℃에서 4분 동안 최초 인큐베이션한 다음, 95℃에서 30초, 50 ℃에서 45초 및 72℃에서 15초의 사이클을 25회 반복한 후에, 72℃에서 3분 동안 최종 인큐베이션하는 것을 포함한다. 표지된 PCR 생성물을 총 반응 부피 90 ㎕ 중에서 HindⅢ를 사용하여 절단하고, 이를 2％의 누시브 GTG(FMC BioProducts):아가로스(3:1) 겔을 사용하여 불변 프라이머 암(arm)으로부터 정제하였다. 표지된 가변 태그를 포함하는 영역을 절단하고, 전체 겔 슬라이스를 95℃에서 10분 동안 DIG 이지하이브(EasyHyb) 10 ml 중에 용해시켜 변성시켰다.

하이본드(등록상표, Hybond)-N⁺ 막(Amersham-Pharmacia Biotech)을 사용하여 도트 블롯을 제조하였다. PCR 생성물 약 30 ng을 사용하여 각각의 태그별로 표적 DNA를 96 웰 플레이트에서 제조하였다. 동 부피의 0.1 N NaOH를 가하여 샘플을 변성시키고, 각 샘플을 슐라이허 앤드 슈엘(Schleicher and Schuell)사(Keene, NH, USA)로부터 구입한 미니폴드 Ⅰ(상표명, Minifold Ⅰ) 도트-블롯 장치를 이용하여 최소 진공으로 막에 도포하였다. 중화 용액(Neutralization Solution)(0.5 M Tris / 3 M NaCl, pH 7.5) 150 ㎕ 및 2X SSC 150 ㎕으로 각 웰을 세척하였다. 스트라타링커(Stratalinker; Stratagene, La Jolla, CA, USA)에서 막을 UV에 의해 가교결합시키고, 42℃에서 DIG 이지하이브 완충액 20 ml 중에서 1시간 동안 예비혼성화시켰다. 변성된 프로브를 가하고, 42℃에서 밤새 혼성화를 수행하였다. 0.1％ SDS를 함유하는 2X SSC 중에서 막을 5분씩 2회 세척하였다. 표준 제니어스(Genius) 검출 프로토콜(Genius Manual)을 진행하기에 앞서, 68℃에서 15분 동안 0.1％ SDS를 함유하는 예비-가온된 0.1X SSC 완충액 50 ml 중에서 고 엄격 세척을 2회 수행하였 다.

안전하고, 비용이 저렴하며, 사용하기 쉽고, 위험한 물질이 적은 비-방사성 검출 시스템을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 기술한 것과 유사한 방법을 이용한 초기 실험[Mei et al., Mol Microbiol. 26:399-407 (1997)]에서는, 음성 대조군에서 허용되지 않는 수준의 배경값이 얻어졌다. 배경값을 줄이기 위해, 태그 길이를 30 bp 증가시켜 총 70 bp가 되게 하고, 가변성 영역의 인접한 모든 서열을 포함하도록 증폭 프라이머를 연장시키고, 더 낮은 농도의 dig-dUTP를 사용하였으며, 서열 태그 영역에 인접한 보존적 서열을 겔 여과에 의해 제거하였다. 가장 중요한 것으로, 트랜스포손 자체로부터 배경 혼성화를 검출한 후에, PCR을 이용하여 도트 블롯의 표적 DNA로서 태그 트랜스포손을 포함하는 전체 플라스미드가 아닌 [NK]₃₅ 서열 태그를 생성시켰다. 이러한 변형법을 이용하여 배경값을 제거함으로써, 화학발광성/비-방사성 스크리닝을 보다 효과적인 것으로 만들었다.

pTEF-1과 PCR에 의해 생성된 서열 태그의 라이게이션으로부터 생성된 약 400개의 다른 형질전환체를 콜로니 블롯에 의해 스크리닝하고, 추가로 사용하기 위해 혼성화도가 가장 큰 콜로니 96개를 미세적정 플레이트에 모았다. 태그가 복제될 가능성이 매우 적긴하지만, 마스터 태그 플레이트의 절반을 다른 것에 대해 조사한 결과, 어떠한 태그도 복제되지 않았음을 확인하였다. 이러한 태그를 포함하는 플라스미드를 정제하여, 대장균 S17-1:λpir(pir, recA, thi, pro, hsd, (r-m+), RP4-2, (Tc::Mu), (Km::Tn7), [TmpR], [SmR])내에 형질전환시키고, 형질전환된 세 균을 37℃에서 루리아-베르타니(LB) 배지에서 증식시켰다. 태그 플라스미드 pTEF-1을 포함하는 96개의 대장균 S17-1:λpir 형질전환체 각각을 접합 교배(conjugative mating)에서 사용하여 피. 멀토시다(P. multocida)의 트랜스포손 돌연변이체를 생성시켰다. 피. 멀토시다(P. multocida) 균주 TF5는 소의 임상 단리체인 UC6731로부터 유도되는 자발적 날리딕신산 내성 돌연변이체이다. 평판 배양하는 경우, 피. 멀토시다(P. multocida) 균주를 37℃, 5％ CO₂에서 뇌 심장 주입액 (BHI) 배지(Difco Laboratories, Detroit, MI, USA)에서 배양시켰다. 대장균 S17-1:λpir/pTEF1:[NK]₃₅ 클론 및 TF5 균주 각각을 후기 로그기까지 배양하여 교배를 시작하였다. 각 태그-pTEF-1 클론의 배양물 50 ㎕를 TF5 배양물 200 ㎕와 혼합하고, 각각의 교배 혼합물 50 ㎕를 100 mM IPTG 및 10 mM MgSO₄를 함유하는 BHI 플레이트 상에 놓인 0.22 TM 필터에 스폿팅하였다. 37℃, 5％ CO₂에서 밤새 인큐베이션한 다음, 각 필터 상의 교배 혼합물을 PBS 3 ml로 세척해내어, 각 25 ㎕를 BHIN⁵⁰K⁵⁰ 플레이트 상에 플레이팅하였다. 선별을 위해 밤새 배양한 다음, 콜로니를 이쑤시개로 200 ㎕ BHIN⁵⁰K⁵⁰에 옮겨서 미세적정 플레이트에 모으고, 미세적정 플레이트내의 각 웰이 동일한 서열 태그를 갖는 트랜스포손 돌연변이체를 항상 포함하도록 하였다. 밤새 배양한 다음, 75％ 글리세롤 50 ㎕를 각 웰에 가하고, 플레이트를 -80℃에서 동결보관하였다.

19개의 풀을 모아서 트랜스포손 돌연변이체를 미세적정 플레이트에 옮김으로 써 각 웰이 각 웰마다 적합한 태그를 갖는 트랜스포손 돌연변이체를 포함하도록 하였다. 즉, 돌연변이체내의 트랜스포손의 위치가 다를지라도, 각 미세적정 플레이트내의 특정 웰은 동일한 서열 태그를 갖는 트랜스포손 돌연변이체를 항상 포함하였다.

<실시예 2>: 독성약화 피. 멀토시다(P. multocida) 돌연변이체에 대한 쥐과 스크리닝

패혈증 쥐과 모델을 사용하여 파스테우렐라 멀토시다(Pasteurella multocida) 트랜스포손 돌연변이체로 구성되는 19개의 풀을 스크리닝하였다. 모아진 피. 멀토시다(P. multocida) 트랜스포손 돌연변이체의 동결된 플레이트를 -80℃의 보관소에서 꺼내어, 각 웰로부터 10 ㎕를 날리딕신산(Sigma) 50 ㎍/ml 및 카나마이신(Sigma) 50 ㎍/ml를 함유하는 뇌 심장 주입액(DIFCO, BHIN⁵⁰K⁵⁰) 200 ㎕가 들어있는 새로운 96 웰 둥근 바닥 플레이트(Corning Costar, Cambridge, MA, USA)에 옮겨서 2차배양하였다. 플레이트를 진탕하지 않으면서 37℃, 5％ CO₂에서 밤새 배양하였다. 각 웰로부터 10 ㎕를 웰 당 BHI 100 ㎕를 함유하는 새로운 평면 바닥 96-웰 플레이트(Corning Costar)에 옮기고, 대략 150 rpm으로 진탕하면서 37℃에서 배양함으로써 밤새 배양한 플레이트를 2차배양하였다. 미세적정 플레이트 판독기를 사용하여 OD₅₄₀값을 모니터링하였다. 약 0.2 내지 0.25의 OD₅₄₀에서, 미세적정 플레이트의 웰로부터 각각 100 ㎕를 합하여 각 플레이트를 모음으로써 "유입 풀(input pool)"을 형성하였다. 배양물을 BHI 중에 약 10⁴, 10⁵, 10⁶ CFU/ml의 투여량으로 대략적으로 희석시키고, 각 희석액 0.2 ml를 사용하여 복강내 투여에 의해 체중이 14 g 내지 16 g인 암컷 BALB/c 생쥐를 감염시켰다. 감염 후 2일째, 생존한 생쥐 1 마리 또는 2마리를 안락사시키고, 비장을 적출하였다. 비장 전체를 0.9％의 멸균된 식염수 1.0 ml 중에 균질화하였다. 10^-2내지 10^-5의 균질 희석액을 제조하여 BHIN⁵⁰K⁵⁰ 플레이트 상에 플레이팅하였다. 밤새 배양한 다음, 대략 20,000개의 콜로니를 BHI 브로쓰 10 ml 중에 모아서 "회수 풀"을 형성시키고, 회수 풀 0.5 ml을 3,500 X g에서 원심분리하여, 형성된 펠릿을 사용하여 선행 기술 문헌[Wilson, In F.M. Ausubel et al., (ed.), Current Protocols in Molecular Biology, vol.1. John Wiley and Sons, New York, p. 2.4.1 - 2.4.5. (1997)]에 기재된 프로토콜에 따라 게놈 DNA를 제조하였다.

독성 야생형 피. 멀토시다(P. multocida)를 사용한 초기의 실험 결과는 이 생물체를 비장, 폐, 신장, 및 간(패혈증 감염 모델을 실제적으로 나타냄)으로부터 회수할 수 있음을 암시한다. "유입" 및 "회수" 풀 둘 다에 대한 도트 블롯을 실시예 1에 설명된 바와 같이 수행하고, 시각적 검사와 반-정량적 분석에 의해 평가하였다. 유입 및 회수 풀로부터의 게놈 DNA 5 ㎍을 주형으로 사용한 점을 제외하고, 실시예 1에 설명된 바와 같이 혼성화를 수행하였다. 반-정량적 분석은 단일 클론이 상당히 감소되었는지 여부를 나타낸다. 돌연변이체가 숙주내에서 생존할 수 없다면, 회수 신호는 유입 신호에 비해 매우 낮아서, 유입/회수 비율은 높아지게 된 다. 대부분의 돌연변이체는 시험관내에서 만큼 생체내에서도 잘 증식할 것이기 때문에, 이러한 신호들의 비율은 대략 1이 된다. 정량 분석에 의해 회수 풀에서 상당히 감소된 것으로 나타난 선별 클론을 후속 연구를 위해 선별하였다. 또한, 도트 블롯으로부터 얻은 필름을 시각적으로 평가한 다음, 의심되는 유입/회수 비를 갖는 다른 클론도 선별하였다.

<실시예 3>: 피. 멀토시다(P. multocida) 후보 돌연변이체에 대한 독성 측정

비장 조직으로부터 감소된 회수율을 나타내는 각각의 잠재적인 돌연변이체를 원래의 풀 플레이트로부터 단리하여, 트랜스포손 돌연변이에 의해 유발되는 독성약화를 조사하고 대략적으로 평가하기 위한 면역성 실험에 개별적으로 사용하였다. 생체내 스크리닝으로부터의 각 후보 돌연변이체를 37℃, 5％ CO₂에서 양 혈액 아가(Sheep Blood Agar) 플레이트 상에서 밤새 배양하였다. 각 돌연변이체로 구성되는 대략 6개의 콜로니를 BHI 배지에 접종하고, 6시간 동안 배양하였다. 희석액을 제조하고, 생쥐 5마리를 상기 설명한 바와 같이 10², 10³, 10⁴ 및 10⁵ CFU로 각각 감염시켰다. 6일 후에, 사망률을 야생형의 것과 비교하여 독성약화를 측정하였다. 생존한 생쥐는 보호된 것으로 추정하였으며, 이어서 야생형 피. 멀토시다(P. multocida)를 야생형 균주에 대한 LD₅₀보다 대략 200배를 초과하는 농도의 투여량으로 시험하였다. 이이서, 시험된 각 생쥐 군에 대한 생존률을 측정하였다.

실험 결과, 잠재적인 트랜스포손 돌연변이체 120개 중 62개의 독성이 약화되 었고, LD₅₀은 야생형 균주보다 대략 10배 이상 더 높은 것으로 나타났다. 클론 및 이들의 대략적인 LD₅₀값은 하기 표 1에 기재되어 있다. 야생형 균주와의 대조 실험은 각 시험 세트와 동시에 수행하였고, 모든 경우에서 아생형-시험 군의 사망률은 100％이었다.

LD₅₀ 값 이외에도, 표 1은 면역화 및 면역성 실험으로부터의 테이타를 제공한다. 요컨대, 표 1에 나타낸 각각의 피. 멀토시다(P. multocida) 균주를 독성 야생형 균주의 LD₅₀ 보다 대략 200배를 초과하는 투여량으로 복강내 주입하여 일군의 생쥐(개체수는 5 내지 10마리임)를 면역화하였다.

[표 1-계속]

<실시예 4>: 피. 멀토시다(P. multocida) 독성에 요구되는 유전자의 클로닝 및 확인

독성이 약화된 것으로 확인된 각 트랜스포손 돌연변이체를 추가로 분석하여 손상된 오픈 리딩 프레임의 동일성 여부를 결정하였다. 각 돌연변이체로부터의 DNA를 증폭 및 정제하고, 트랜스포손을 자르지는 않는 것으로 알려져 있으며 트랜스포손과 혼성화하는 4 내지 8 kb 크기의 단편을 일반적으로 생성하는 제한 효소로 절단하였다. 트랜스포손에 의해 코딩되는 카나마이신 내성에 대한 선별법을 이용하여, 각 트랜스포손 돌연변이체에 대해 하나 이상의 단편을 클로닝하였다.

pLOF/Km으로부터의 표지된 1.8 kb MluI 단편을 클로닝에 적합한 크기의 단편을 찾아내는 프로브로 사용하여, 독성이 약화된 각 돌연변이체에 대해 여러 제한 효소를 사용하는 써던 혼성화를 수행하였다. 각 돌연변이체로부터의 미니-Tn10 인자 및 인접 DNA를 pUC19에 클로닝하고, 내부 프라이머 TEF32 및 TEF40, 프라이머 워킹 및, 경우에 따라, 범용 pUC-19 프라이머를 사용하여 인접 서열을 결정하였다.

TEF-32 GGCAGAGCATTACGCTGAC (서열 95)

TEF-40 GTACCGGCCAGGCGGCCACGCGTATTC (서열 96)

PE 어플라이드 바이오시스템스(PE Applied Biosystems; Foster City, CA)사로부터 구입한 빅다이(상표명, BigDye) 다이 터미네이터 케미스트리(Dye Terminator Chemistry) 키트를 사용하여 ABI 프리즘(Prism) 377 DNA 서열분석기로 서열분석 반응을 수행하였다. 추정의 손상된 오픈 리딩 프레임에 대한 이중 가닥 서열을 각 클론에 대하여 수득하였다. 시퀀서(Sequencer) 3.0 소프트웨어 (Genecodes, Corp., Ann Arbor, MI)를 사용하여 서열 데이타를 수집 및 분석하였다. GCG 프로그램[Devereux et al., 1997, Wisconsin Package Version 9.9, 9.0 ed. Genetics Computer Group, Inc., Madison]을 사용하여 현재 이용가능한 데이타베이스에서 상동성 서열을 검색하였다.

독성이 약화된 것으로 확인된 클론의 37％에서, 미니-Tn10 전위성 인자가 여러번 삽입되어 있었다. 그의 인접 서열과 함께 각 삽입체를 각각 pGP704에 클로닝하고, 야생형 균주와 교배하여 피. 멀토시다(P. multocida)의 신규 돌연변이체를 생성시켰으며, 이들은 각각 원래의 여러 삽입체 중 하나만을 보유하였다. 각 돌연변이체를 각각 재시험하여 독성약화 형질의 원인이 되는 삽입체를 결정하였다. 손상된 예상 오픈 리딩 프레임의 뉴클레오티드 서열은 양쪽 가닥을 서열분석하여 결정하였고, 예상 아미노산 서열을 사용하여 현재 이용가능한 데이타베이스에서 유사한 서열을 검색하였다. 이 서열은 공지 유전자, 비공지 유전자, 및 이미 서열이 분석된 이론상의 오픈 리딩 프레임과 매치되거나 기존에 확인된 어떠한 서열과도 매치되지 않았다. 기존에 확인된 서열과 상동성을 갖는 유전자의 경우, 잠재적 기능은 표 1에 기재되어 있는 바와 같이 지정하였다.

<실시예 5>: 다른 종에서 관련 유전자의 확인

별도의 실험에서, 악티노바실러스 플레우로뉴모니아(Actinobacillus pleuropneumoniae(APP))를 사용하여 STM을 수행하였다. App 균주 중 하나가 서열분석된 유전자(서열 97)내에 삽입체를 포함하였으며, 이는 피. 멀토시다(P. multocida) aptG 유전자의 종 동족체인 것으로 밝혀졌다. 이 결과는 또한 백신 조성물에 사용하기 위해 독성약화된 다른 세균 종의 균주를 생성하도록 돌연변이시킬 수도 있는, 종래에는 알려져 있지 않은 피. 멀토시다(P. multocida)에 대한 동족체가 다른 세균에 존재할 수 있음을 시사하였다. 다른 피. 멀토시다(P. multocida) 유전자의 동족체가 다른 세균 종내에 존재하는지를 결정하기 위해, 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) atpG 유전자를 프로브로 사용하여 다른 종으로부터의 게놈 DNA 상에서 써던 혼성화를 수행하였다.

CTAB 방법을 이용하여 악티노바실러스 플레우로뉴모니아(Actinobacillus pleuropneumoniae), 파스테우렐라 헤몰리티카(Pasteurella haemolytica(Ph)), 피. 멀토시다(P. multocida), 및 헤모필러스 솜너스(Haemophilus somnus(Hs)) 게놈 DNA를 단리하고, 37℃에서 2시간 동안 EcoRI 및 HindⅢ로 절단하였다. 절단된 DNA는 TAE 완충액 중 0.7％ 아가로스 겔 상에서 40 V의 전압으로 밤새 분리하였다. 겔을 0.1 M HCl에서 30분 동안, 0.5 M NaOH/1.5 M NaCl에서 15분씩 2회, 2.5 M NaCl/1 M Tris(pH 7.5)에서 2회 순차적으로 액침시켰다. 20X SSC 완충액(3 M NaCl/0.3 M 시트르산나트륨)을 사용하여 DNA를 니트로셀룰로스 막(Amersham Hybond N⁺)에 밤새 전달하였다. UV 스트라타링커를 자동가교 세팅(20 밀리주울)으로 사용하여 DNA를 막에 가교결합시켰다. 막을 5X SSC/1％ 차폐 용액/0.1％ 나트륨 라우로일 사르코신/0.02％ SDS 중에서 50℃로 대략 7시간 동안 예비혼성화시키고, PCR에 의해 생성된 atgG 프로브를 포함하는 동일한 용액 중에서 50℃로 밤새 혼성화시켰다.

진앰프 PCR 시스템 2400의 진앰프 XL PCR 키트에서 프라이머 DEL-1389(서열 98) 및 TEF-46(서열 99)을 사용하여 프로브를 제조하였다. 주형은 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) DNA이었다.

DEL-1389 TCTCCATTCCCTTGCTGCGGCAGGG (서열 98)

TEF-46 GGAATTACAGCCGGATCCGGG (서열 99)

94℃에서 5분 동안의 최초 가열 단계 이후에, 94℃에서 30초 동안의 변성, 50℃에서 30초 동안 어닐링, 72℃에서 3분 동안 합성의 사이클을 30회 반복한 다음, 및 72℃에서 5분 동안의 최종 합성 단계로 PCR을 수행하였다. 증폭 생성물을 아가로스 겔 상에서 분리하고, 퀴아퀵(QIAquick) 겔 정제 키트(QIAGEN)를 사용하여 정제하고, DIG-하이 프라이머(DIG-High Primer) 키트(Boehringer Mannheim)를 사용하여 표지하였다. 혼성화 용액에서 블롯을 꺼내어 2X SSC로 세정하고, 동일한 완충액 중에서 5분씩 2회 세척하였다. 이어서, 블롯을 0.5X SSC 중에서 60℃로 15분씩 2회 세척하였다. DIG 핵산 검출 키트(Boehringer Mannheim)를 사용하여 상동성 밴드를 가시화하였다.

EcoRI에 의해 절단된 DNA를 사용하여 파스테우렐라 헤몰리티카(Pasteurella haemolytica) 및 헤모필러스 솜너스(Haemophilus somnus) 및 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)에서 하나의 밴드를 검출하였다. EcoRI에 의해 절단된 DNA를 사용하여 파스테우렐라 멀토시다로부터 2개의 밴드를 검출하였다.

<실시예 6>: 태그-트랜스포손 피. 멀토시다(P. multocida) 돌연변이체의 라이브러리 제작

pLOF/Km을 사용한 트랜스포손 돌연변이 유발이 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)에서 작용성이며, 랜덤하다라는 사실은 이미 보고된 바 있다[Tascon et al., J. Bacteriol. 175:5717-22(1993)]. 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae)의 태그 트랜스포손 돌연변이체를 제작하기 위해, 예비-선별된 태그 플라스미드(pTEF-1:[NK]₃₅)를 포함하는 96개의 대장균 S17-1:λpir 형질전환체 각각을 접합 교배에서 사용하여 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) 균주 AP225의 트랜스포손 돌연변이체인, 생체내 계대배양된 ATCC 27088 균주로부터 유도된 혈청형 1의 자연발생 날리딕신산 내성 돌연변이체를 생성시켰다. 평판배양하는 경우, 에이. 플루로뉴모니아 균주를 37℃, 5％ CO₂에서 B-니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드(V¹⁰)(Sigma, St.Louis, Missouri) 10 ㎍/ml이 들어있는 뇌 심장 주입액(BHI)(Difco Laboratories, Detroit, MI) 배지에서 배양하였다. 대장균 S17-1:λpir(λpir, recA, thi, pro, hsdR(r_k-, m_k+), RP4-2, (Tc^R::Mu), (Km^R::Tn7), [Tmp^R], [Sm^R])를 37℃에서 루리아-베르타니(LB) 배지에서 증식시켰다. 필요하다면 암피실린(Sigma) 100 ㎍/ml, 날리딕신산(N⁵⁰)(Sigma) 50 ㎍/ml 및 카나마이신(Sigma) 50 (K⁵⁰) 또는 100 (K¹⁰⁰) ㎍/ml의 농도로 항생제를 사용하였다.

대장균 S17-1:λpir/pTEF1:[NK]₃₅ 클론 및 AP225 균주를 각각 후기 로그기까지 배양하여 교배를 시작하였다. 태그-pTEF1 클론 각각에 대해 배양물 분취액 50 ㎕를 APP225 배양액 150 ㎕와 혼합한 다음, 각 교배 혼합물 50 ㎕를, 100 μM IPTG 및 10 mM MgSO₄를 함유하는 BHIV¹⁰ 플레이트 상에 놓인 0.22 μM 필터에 스폿팅하였다. 37℃, 5％ CO₂에서 밤새 배양한 다음, 각 필터 상의 교배 혼합물을 PBS 2 ml로 세척해내고, 200 ㎕를 BHIV¹⁰N⁵⁰K¹⁰⁰ 플레이트 상에 플레이팅하였다. 선별을 위해 밤새 배양한 다음, 콜로니를 이쑤시개로 200 ㎕ BHIV¹⁰N⁵⁰K¹⁰⁰에 옮겨서 미세적정 플레이트에 모으고, 미세적정 플레이트내의 각 웰이 동일한 서열 태그를 갖는 트랜스포손 돌연변이체를 항상 포함하도록 하였다. 밤새 배양한 다음, 75％ 글리세롤 50 ㎕를 각 웰에 가하고, 플레이트를 -80℃에서 동결보관하였다.

피. 멀토시다(P. multocida)와는 달리, APP는 미니-Tn10 인자의 다중 삽입체에 대해 많은 편향성을 갖지 않는 것으로 보인다. 돌연변이체의 대략 3％ 만이 다중 삽입체를 포함하고 있으며, 이는 기존에 보고된 4％와 일치하는 것이다[Tascon et al., J Bacteriol. 175:5717-22 (1993)]. APP에서의 문제는 23S RNA 영역내에 삽입체를 포함하는 많은 돌연변이체(13개의 유니크 부위내에 삽입체를 갖는 총 28개의 돌연변이체)를 확인하는 것이다. 이는, 23S RNA가 주된 삽입 부위를 포함하며, APP의 배양은 이러한 삽입체에 의한 영향으로 숙주내에서 차별적으로 생존할 수 있게 됨을 암시한다. APP 23S RNA 프로브를 사용한 서던 블롯 분석 결과는 APP가, 에이치. 인플루엔자(H. influenzae)에서 5개의 완전한 오페론[Fleischmann et al., Science 269:496-512 (1995)] 및 대장균에서 7개의 완전한 오페론[Blattner et al., Science 277:1453-1474 (1997)]에 비해 단지 3개의 리보좀계 오페론을 포함할 수 있음을 시사한다. 상당수의 클론이 이러한 rRNA내에 삽입체를 포함하고, 다른 유니크 독성약화 돌연변이를 얻기 위해 대용량 스크리닝이 필수적이기 때문에, 이 부위 선호도 및 성장률에 대한 그의 효과는 "포화 돌연변이유발"에 대한 상당한 장애가 될 수 있다.

<실시예 7>: 독성약화 에이. 플레우로뉴모니아(A. pleuropneumoniae) 돌연변이체에 대한 돼지 스크리닝

돼지 기관내 감염 모델을 이용하여, 대략 총 800개의 돌연변이체를 함유하는 에이. 플레우로뉴모니아의 풀 20개를 스크리닝하였다. 각 풀을 별개의 동물 2종에서 스크리닝하였다.

모은 악티노바실러스 플레우로뉴모니아 트랜스포손 돌연변이체의 동결된 플레이트를 -80℃ 저장기에서 꺼내고 20 ㎕를 각 웰로부터 BHIV¹⁰N⁵⁰K⁵⁰ 180 ㎕가 들어있는 새로운 96웰 둥근 바닥 플레이트 (Corning Costar, Cambridge, MA, USA)로 옮겨서 2차배양하였다. 플레이트를 진탕하지 않고 37℃, 5％ CO₂에서 밤새 배양하였다. 그 다음으로, 10 ㎕를 각 웰로부터 웰당 100 ㎕의 BHIV¹⁰이 함유된 새로운 평면 바닥 96웰 플레이트(Corning Costar)에 옮기고, 150 rpm으로 진탕하면서 37℃에서 배양함으로써 밤새 배양한 플레이트를 2차배양하였다. 미세적정 플레이트 판독기를 이용하여 OD₅₆₂를 모니터링하였다. 약 0.2 내지 0.25의 OD₅₆₂에서 미세적정 플레이트의 웰 각각으로부터 100 ㎕를 합하여 각 플레이트를 모음으로써 "유입 풀"을 형성하였다. 배양물을 대략 2 X 10⁶ CFU/ml까지 BHI에서 적절하게 희석하였다. 기관 튜브를 사용하는 기관내 투여에 의해 10-20 kg의 SPF 돼지(Whiteshire-Hamroc,Albion, IN)를 감염시키기 위해 희석된 각 풀을 4.0 ml씩 사용하였다. 감염 후 대략 20시간에 모든 생존 동물을 안락사시키고 폐를 적출하였다. 150 ml의 멸균 PBS를 폐에 관주한 후 마사지하여 PBS를 분산시킴으로써 세척을 수행하여 생존 세균을 회수하였다. 세척액을 회수하고, 이 과정을 한번 더 반복하였다. 세척액을 450 x g에서 10분 동안 원심분리하여 큰 찌꺼기(debris)를 분리하였다. 그 다음으로, 상청액을 2,800 x g에서 원심분리하여 세균 펠릿을 얻었다. 펠렛을 5 ml의 BHI에 재현탁하고 10^-2 내지 10^-5로 희석하여 BHIV¹⁰N⁵⁰K⁵⁰ 플레이트 상에 플레이팅하였다. 밤새 배양한 후, 100,000개 이상의 콜로니를 10 ml의 BHI 배지에 모아 "회수 풀"을 형성하였다. 각 회수 풀에서 0.7 ml의 분취액을 사용하여 CTAB 방법 [Wilson, In Ausubel et al., (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, vol. 1. John Wiley and Sons, New York, p. 2.4.1-2.4.5 (1997)]에 의해 게놈 DNA를 제조하였다.

동물로부터의 회수물은 통상 폐 세척액으로부터 10⁸ CFU 범위내이었다.

도트 블롯을 수행하고, 상기와 같이 시각적 검사 및 반-정량적 분석에 의해 평가하였다. 모든 혼성화 및 검출은 상기와 같이 수행하였다. 요컨대, 1차 PCR 증폭 후 원하는 생성물을 아가로스 겔 정제하고 dig-dUTP를 혼입하는 2차 PCR 증폭에 의해 프로브를 제조하였다. TEF5, TEF6, TEF24, TEF25, TEF48 및 TEF62를 비롯한 올리고뉴클레오티드를 제노시스 바이오테크놀로지(Genosys Biotechnoloy; The Woodlands, TX)에서 합성하였다. 또한, 프라이머 TEF69, TEF65 및 TEF66을 역 PCR 반응 및 서열분석에 사용하였다.

TEF69 GACGTTTCCCGTTGAATATGGCTC (서열 166)

TEF65 GCCGGATCCGGGATCATATGACAAGA (서열 167)

TEF66 GACAAGATGTGTATCCACCTTAAC (서열 168)

그 다음으로, 표지된 PCR 산물을 HindⅢ로 절단하여 유니크 태그 영역으로부터 불변 프라이머 암(arm)을 분리하였다. 표지된 가변 태그를 포함하는 영역을 절단한 후 전체 겔 슬라이스를 DIG 이지하이브 중에 용해시켜 변성시켰다. 도트 블롯을 수행하고 표준 CSPD 검출 프로토콜을 이용하여 검출하였다. 시각 평가를 위해 필름을 노출시키고, 각 도트 블롯 샘플에 대해 초당 발광 계수 (LCPS)를 측정하였다. 각 돌연변이체에 대한 LCPS_유입/LCPS_회수 비율을 이용하여 독성이 약화된 것일 수 있는 돌연변이체를 결정하였다.

유입 풀에는 존재하지만 회수 풀에서 매우 감소된 것으로 나타난 선별 클론을 후속 연구를 위해 선별하였다. 도트 블롯으로부터 얻은 필름을 시각적으로 평가한 후 의심스러운 유입/회수 비를 갖는 다른 클론도 선별하였다. 총 110개의 클론을 선별하였다.

<실시예 8>: 에이. 플레우로뉴모니아 독성 유전자의 확인

역 PCR 및 생성물의 직접 서열분석에 의해 110개의 돌연변이체 각각에 대해 일부 인접 서열을 결정하였다. 상기와 같이 직접 서열분석을 위한 인접 DNA 생성물을 얻기 위해 역 PCR을 이용하였다. 서열분석 반응은 PE 어플라이드 바이오시스템사 [PE Applied Biosystems (Foster City, CA)]의 빅다이 (BigDye; 상표명) 터미네이터 케미스트리 키트를 사용하여 ABI 프리즘 377 DNA 서열분석기로 수행하였다. 시퀀처(Sequencher) 3.0 소프트웨어 (Genecodes, Corp., Ann Arbor, MI)를 이용하여 서열 데이타를 수집 및 분석하였다. GCG 프로그램 [Devereux and Haeberli, Wisconsin Package Version 9.0,9.0 ed. Genetics Computer Group, Inc., Madison (1997)]을 사용하여 현재 이용가능한 데이타베이스에서 상동성 서열을 검색하였다.

표 2는 오픈 리딩 프레임을 결정할 수 있는 정도까지 확인된 에이. 플레우로뉴모니아 유전자를 나타낸다. 서열 번호는 뉴클레오티드 서열 뿐만 아니라 이 서열로부터 유추된 아미노산 서열에도 부여되어 있다.

에이. 플레우로뉴모니아 오픈 리딩 프레임
완전한 오픈 리딩 프레임		개시코돈 부재 - 정지코돈 존재
atpH aptG exbB OmpP5 OmpP5-2 tig fkpA hupA rpmF	서열 134 서열 132 서열 140 서열 152 서열 150 서열 160 서열 142 서열 146 서열 158	dks A dnaK HI0379	서열 136 서열 138 서열 144
		개시코돈 부재 - 정지코돈 부재
개시코돈 존재 - 정지코돈 부재		pnp apvA-or 1 apvA-or 2 apvB apvD	서열 154 서열 122 서열 124 서열 126 서열 130
lpdA potD yaeE apvC	서열 148 서열 156 서열 164 서열 128	RNA 또는 비코딩 서열
		tRNA-leu tRNA-glu	서열 162 서열 163

표 3 에 기재된 잠정적인 확인물 (하기 실시예 9)은 세균 데이타베이스와의 비교에 의해 선정하였다. 110개의 돌연변이체는 유니크 트랜스포손 삽입체 35개 군을 대표하였다. 유전자좌위 당 상이한 돌연변이의 수는 한 ORF내의 단일 부위에 있는 삽입체를 항상 함유하는 일부 클론부터 동일한 ORF의 다른 부위내에 있는 삽입체를 함유하는 클론까지 다양하였다. 다중 PCR 밴드의 생성 및 다중 서열 전기영동도의 발생에 의해 결정된 바, 3개의 다중 삽입체가 스크리닝된 110개의 돌연변이체에서 검출되었다.

<실시예 9>: 야생형 APP225와 에이. 플레우로뉴모니아 돌연변이체의 경쟁 감염 (Competition Challenge)

회수된 집단에 부재하거나 매우 감소된 것으로 상기에서 확인된 유니크 독성약화 돌연변이체군 각각으로부터 대표적인 클론을 원래의 풀 플레이트로부터 단리하고 야생형 균주(AP225)와의 경쟁 감염 실험에 사용하여 트랜스포손 돌연변이에 의해 야기되는 상대적인 독성약화를 입증하였다. 돌연변이체 및 야생형 균주를 BHIV¹⁰에서 0.6-0.9의 OD₅₉₀까지 증식시켰다. 대략 5.0 x 10⁶ CFU의 야생형 및 돌연변이 균주 각각을 4 ml의 BHI에 가하였다. 기관 튜브로의 기관내 투여에 의해 총 4 ml의 투여량으로 10-20 kg의 SPF 돼지를 감염시켰다. 감염 후 대략 20시간에 모든 생존 동물을 안락사시키고 폐를 적출하였다. 상기와 같이 폐 세척을 수행하였다. BHIV¹⁰N⁵⁰ 및 BHIV¹⁰N⁵⁰K¹⁰⁰ 상에서 플레이트를 계수하여 유입 배양물 및 폐 세척 샘플 둘다에서의 돌연변이체에 대한 야생형 균주의 상대적 수를 결정하였다. 경쟁 지수(CI)를 [돌연변이체 CFU /야생형 CFU]_유입/ [돌연변이체 CFU/야생형 CFU]_회수로서 계산하였다.

35개의 잠재적 트랜스포손 돌연변이체 중 경쟁 지수(CI)가 0.2 미만인 22개는 독성이 상당히 약화되어 있었다. STM 스크리닝 결과를 기준으로 할 때 독성이 약화된 것 같지 않은 트랜스포손 돌연변이체를 양성 대조군으로서 풀 중 하나로부터 선택하였다. 이 돌연변이체의 생체내 CI는 약 0.6이었다. CI가 0.8인 이 돌연변이체에 대해 시험관내 경쟁도 수행하였다. 그 후, 2개의 페닐알라닌 tRNA 사이의 삽입을 함유하는 돌연변이체를 확인하였다.

유니크 독성약화 단일-삽입 돌연변이체에 대한 경쟁 지수가 표 3에 기재되어 있다. atpG, pnp, exbB 및 App 돌연변이체에 대한 경쟁 지수는 이들 돌연변이체가 야생형 균주와 효과적으로 경쟁할 수 없으므로 독성이 약화되어 있음을 의미한다.

돌연변이체	유사성	추정 기능 또는 공지된 기능	C.I.
AP20A6	atpH	ATP 합성효소	.009
AP7F10	atpG	ATP 합성효소	.013
AP17C6	IpdA	디히드로리포아미드 데히드로게나제	.039

AP11E7	exbB	철 화합물의 수송	.003, .003, .006
AP3H7	potD	스퍼미딘/퓨트레신 수송	.308
AP8H6	OmpP5	어드헤신/OmpA 동족체	.184
AP18H8	OmpP5-2	어드헤신/OmpA 동족체	.552
AP13E9	tig	펩티딜-프롤릴 이소머라제	.050
AP13C2	fkpA	펩티딜-프롤릴 이소머라제	<.001

AP15C11	pnp	폴리뉴클레오티드 포스포릴라제	.032
AP18F12	hupA	히스톤-유사 단백질	.001
AP20F8	dksA	dnaK 돌연변이의 투여량 의존성 억제제	.075
AP5G4	dnaK	열 충격 단백질-분자 샤페론 (chaperone)	.376

AP17C9	tRNA-leu	단백질 합성 (유전자 조절?)	.059
AP5D6	tRNA-glu	단백질 합성	.055
AP18B2	rpmF	단백질 합성	.112

AP10E7	yaeA	공지되어 있지 않음	.001
AP19A5	HI0379	공지되어 있지 않음	.061
AP10C10	apvA	공지되어 있지 않음	.157
AP18F5	apvB	공지되어 있지 않음	.103
AP2A6	apvC	공지되어 있지 않음	.091
AP2C11	apvD	공지되어 있지 않음	.014

exbB 돌연변이체가 3종의 다른 동물내에서 경쟁시킬 때 0.003, 0.003 및 0.006의 CI를 나타내는 것으로 보아 CI의 정확도는 매우 높았다. 큰 동물 연구에서 어떤 경쟁을 기초로 한 독성약화를 선정하는 경쟁 지수의 용도는, 하기 실시예 11에 기재된 7종의 돌연변이체(n=8)로 돼지에서 실험한 예비 백신 접종의 결과를 기초로 더 확인하였다.

<실시예 10>: 에이. 플레우로뉴모니아 독성 유전자의 특성 규명

확인된 에이. 플레우로뉴모니아 유전자는 4가지의 광범위한 기능성 부류, 즉 생합성 효소, 세포성 수송 성분, 세포내 조절 성분 및 비공지된 것으로 분류할 수 있다.

F₀F₁ H+-ATPase 복합체의 FI-γ서브유닛을 코딩하는 atpG 유전자는 ATP의 생산 또는 ATP의 가수분해에 의한 양성자 전달에 작용할 수 있다. 관련된 atpG 독성약화 돌연변이체도 피. 멀토시다(P. multocida)에서 확인하였다. F₁δ 서브유닛을 코딩하는 또다른 atp 유전자인 atpH도 확인하였다. atp 돌연변이체의 표현형으로는 비적응성 산-민감성 표현형 [Foster, J Bacteriol. 173: 6896-6902 (1991)], 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium) [Garcia del Portillo et al., Infect Immun. 61: 4489-4492 (1993)] 및 피. 멀토시다(P. multocida)(상기)에서 독성이 상실되는 표현형, 및 헤모필러스 인플루엔자 Rd(Haemophilus influenzae Rd) [Gwinn et al., J Bacteriol. 179: 7315-20 (1997)]에서의 형질전환 빈도 및 수용능력 조절 유전자의 유도 둘다가 감소되는 표현형이 포함된다.

LpdA는 피루베이트 데히드로게나제 및 2-옥소글루타레이트 데히드로게나제로 이루어진 효소 복합체의 성분인 디히드로리포아미드 데히드로게나제이다. 독성과의 관련성은 비공지되어 있지만, LpdA의 생성은 인간으로부터의 살균 단백질에 노출될 때 살모넬라 티피무리움에서 유도되는데, 이는 이 유도가 외막을 복구하기 위한 시도와 관련될 수 있음을 암시한다 [Qi et al., Mol Microbiol. 17: 523-31 (1995)].

생장 및 생존에 필요한 희귀 화합물의 수송은 생체내에서 매우 중요하다. ExbB는 두 가지 이상의 다른 방법 [Karlsson et al., Mol Microbiol. 8: 389-96 (1993), Karlsson et al., Mol Microbiol. 8: 379-88 (1993)]으로 TonB와 상호작용하는, TonB 수송 복합체 [Hantke and Zimmerman, Microbiology Letters. 49: 31-35 (1981)]의 일부이다. 철 획득은 병원체에 필수적이다. 본 발명에서는 APP 및 피. 멀토시다(P. multocida) 둘다에서의 독성약화 exbB 돌연변이체를 확인하였다. 여러 가지 TonB-의존성 철 수용체가 다른 세균에서 확인된 바 있다 [Biswas et al., Mol. Microbiol. 24: 169-179 (1997), Braun, FEMS Microbiol Rev. 16: 295-307 (1995), Elkins et al., Infect Immun. 66: 151-160 (1998), Occhino et al., Mol Microbiol. 29: 1493-507 (1998), Stojiljkovic and Srinivasan, J Bacteriol. 179: 805-12 (1997)]. 에이. 플레우로뉴모니아는 철 획득을 위해 ExbB/ExbD/TonB 시스템에 의존할 가능성이 있는 2개의 트랜스페린-결합 단백질을 생산한다. PotD는 스퍼미딘(폴리아민)의 수송에 필요한 원형질막 주위공간의(periplasmic) 결합 단백질이다 [Kashiwagi et al., J Biol Chem. 268: 19358-63 (1993)]. 파스테우렐라세아(Pasteurellaceae)과의 또다른 구성원인 파스테우렐라 헤몰리티카(Pasteurella haemolytica)는 회복기 또는 외막 단백질 백신 접종된 소의 주요 면역원인 potD(Lpp38)의 동족체를 함유한다 [Pandher and Murphy, Vet Microbiol. 51: 331-41 (1996)]. 피. 헤몰리티카에서, PotD는 내막 및 외막 둘다와 결합하고 있는 듯하다. 선행 연구가 독성이 약화되어 있는 스트렙토코커스 뉴모니아(Streptococcus pneumoniae)의 potD 돌연변이체를 보였다고 하더라도 [Polissi et al., Infect. Immun. 66: 5620-9 (1998)], 독성 또는 보호 항체와의 관련성에 있어서 PotD의 역할은 공지되어 있지 않다.

헤모필러스 인플루엔자의 OMP P5와의 동족체를 제외하고 어드헤신 또는 독소와 같은 상대적으로 적은 "고전적 독성 인자"를 확인하였다. 에이치. 인플루엔자의 OMP P5는 OmpA 포린 단백질족과 관련된 주요 외막 단백질이다 [Munson et al., M Infect Immun. 61: 4017-20 (1993)]. 분류되지 않은 헤모필러스 인플루엔자의 OMP P5는 독성, 및 뮤신과 상피세포의 결합에 기여하는, 선상 구조로 발현되는 섬모 서브유닛 단백질 [Sirakova et al., Infect Immun. 62: 2002-20 (1994)]을 코딩하는 것으로 밝혀진 바 있다 [Miyamoto and Bakaletz, Microb Pathog. 21: 343-56 (1996), Reddy et al., Infect Immun. 64: 1477-9 (1996), Sirakova et al., Infect Immun. 62: 2002-20 (1994)]. OMP P5 동족체를 코딩하는 것으로 보이는 두 가지 다른 ORF를 확인한 것도 대단한 발견이었다. 헤모필러스 듀크레이 (Haemophilus ducreyi)의 매우 유사한 두 단백질인 MOMP 및 OmpA2의 경우에도 두 가지 다른 ORF가 확인되었다. 두 ORF가 섬모의 생성에 기능적으로 관련되어 있는지, 그리고 두 ORF의 존재가 중복되거나 보충하는 기능을 나타내는 별개의 중복을 나타내는지를 밝히는 것이 남아 있다. 흥미롭게도, 두 OMP P5 돌연변이체는 다른 CI값을 갖는 것으로 보이는데, 이는 단지 한 복제본에 대한 본성 및 기능성에서의 차이점을 암시한다. OMP P5는 만성 감염 동안 분자 변이를 받는 것으로 보이지만 [Duim et al., Infect Immun. 65: 1351-1356 (1997)], 이는 많은 유전자의 구별 발현으로 인한 "유형 변경(type switching)"이 아니라 아미노산 변화를 초래하는 점 돌연변이를 받는 한개의 유전자에 한정되는 것으로 보인다.

단백질 폴딩 효소는 원형질막 주위공간 및 세포외 단백질의 효율적인 폴딩에 중요한 보조물이고, 펩티딜-프롤릴 이소머라제 활성을 보이는 생성물을 발현하는 두 유전자, 즉 fkpA 및 tig(촉진 인자)를 확인하였다. FkpA는 FK506-결합 단백질족의 구성원인 원형질막 주위공간 단백질이다 [Horne and Young, Arch Microbiol. 163: 357-65 (1995); Missiakas et al., Mol Microbiol. 21: 871-84 (1996)]. FkpA는 살모넬라 티피무리움의 세포내 생존에 기여하는 것으로 밝혀진 바 있고 [Horne et al., Infect Immun. 65: 806-10 (1997)], 레지오넬라 뉴모필라(Legionella pneumophila) 동족체인 mip [Engleberg et al., Infect Immun. 57: 1263-1270 (1989)]는 대식세포의 독성 및 감염의 원인이다 [Cianciotto et al., J. Infect. Dis. 162: 121-6 (1990); Cianciotto et al., Infect. Immun. 57 : 1255-1262 (1989)]. Tig, 즉 촉진 인자 [Crooke and Wickner, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 84:5216-20 (1987), Guthrie, and Wickner, J Bacteriol. 172: 5555-62 (1990), Hesterkamp, and Bukau., FEBS Lett. 389: 32-4 (1996)]는 전형적인 FKBP 영역 [Callebaut and Mornon, FEBSLett. 374:211-215 (1995)]을 포함하는 펩티딜 프롤릴 이소머라제이지만, FK506에 의해 영향받지 않는다 [Stoller et al., EMBO J. 14:4939-48 (1995)]. Tig는 리보솜 및 발생초기의 폴리펩티드쇄와 관련되어 있는 것으로 밝혀진 바 있다 [Hesterkamp et al., Proc Natl Acad Sci USA 93: 4437-41 (1996), Stoller et al., EMBO J. 14: 4939-48 (1995)]. 가능한 역할로는 대장균에서의 세포 분열에 대한 비공지된 영향 [Guthrie, and Wickner, J Bacteriol. 172: 5555-62 (1990)], 스트렙토코커스 파이오젠스(Streptococcus pyogenes) 시스테인 프로테이나제의 분비 및 활성화에서의 역할 [Lyon et al., EMBO J. 17: 6263-75 (1998)], 및 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)에서 기아 조건하의 생존 [Gothel et al., Biochemistry 37:13392-9 (1998)]이 있다.

세균성 병원체는 숙주내의 매우 다양한 환경 조건하에서 생존하기 위해 유전자 발현을 통합적으로 조절하는 많은 기작을 사용한다. mRNA 안정성에서의 차이는 원핵생물에서 유전자 발현을 조절할 수 있다 [Belasco and Higgins, Gene 72: 15-23 (1988)]. 예를 들어, rnr (vacB)는 쉬겔라 플렉스네리(Shigella flexneri)에서 플라스미드에 포함된 독성 유전자를 발현시키는데 필요하고 [Tobe et al., J Bacteriol. 174: 6359-67 (1992)], RnaseR 리보뉴클리아제를 코딩한다 [Cheng et al., J. Biol. Chem. 273: 14077-14080 (1998)]. PNP는 mRNA의 분해에 관여하는 폴리뉴클레오티드 포스포릴라제이다. 무효(null) pnp/rnr 돌연변이체는 치사성이므로 상기 pnp와 rnr 유전자의 기능이 중복되어 있을 가능성이 있음을 알 수 있다. 따라서, rnr 및 pnp 둘다 독성 유전자 발현의 조절에 관여할 가능성이 있다. 피. 멀토시다(P. multocida)의 pnp 돌연변이체는 패혈성 생쥐 모델 (실시예 2)에서 독성을 나타내지 않는다. 기타 pnp-관련 표현형으로는 바실러스 서브틸리스에서의 수용능력 결핍(competence deficiency) 및 한랭 민감성이 있다 [Wang and Bechhofer, J Bacteriol. 178: 2375-82 (1996)].

HupA는 대장균에서 HupB와 결합하여 HU 단백질을 구성하는 세균 히스톤-유사 단백질이다. hupA 및 hupB 단독 돌연변이체는 어떠한 관찰 가능한 표현형도 나타내지 않는다는 보고가 있지만 [Huisman et al., J Bacteriol. 171: 3704-12 (1989), Wada et al., J Mol Biol. 204: 581-91 (1988)], hupA-hupB 이중 돌연변이체는 한랭 민감성을 보이고 열 충격에 민감하고 많은 형태의 부위-특이적 DNA 재조합에서 차단되는 것으로 밝혀진 바 있다 [Wada et al., J Mol Biol. 204: 581-91 (1988), Wada et al., Gene. 76: 345-52 (1989)]. hupA가 독성에 직접적으로 관여한다는 것을 보이는 제한된 데이타가 있다 [Turner et al., Infect Immun. 66: 2099-106 (1998)]. hupA 독성약화의 기작은 모르는 채로 남아있다.

DnaK는 다양한 스트레스성 환경 변화에 대한 조절 반응에 관여하는, 잘 공지되어 있고 매우 보존적인 열 충격 단백질이다 [Lindquist and Craig, Annu Rev Genet. 22: 631-77 (1988)]. DnaK는 예르시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica)에서 대식세포에 의한 대식작용 후에 가장 많이 유도되는 스트레스 단백질 중 하나이기도 하고 [Yamamoto et al.. Microbiol Immunol. 38: 295-300 (1994)], 브루셀라 수이스(Brucella suis) dnaK 돌연변이체는 인간 대식세포-유사 세포내에서 복제하지 못하였다 [Kohler et al., Mol Microbiol. 20: 701-12 (1996)]. 반대로, 또다른 세포내 병원체인 리스테리아 모노사이토젠스(Listeria monocytogenes)는 대식작용 후 dnaK의 유도를 보이지 않았다 [Hanawa et al., Infect Immun. 63: 4595-9 (1995)]. 비브리오 콜레라(Vibrio cholera)의 dnaK 돌연변이체는 ToxR의 생산 및 시험관내에서의 그의 조절된 독성 인자에 영향을 주지만, 생체내에서 생장된 세포로부터 유사한 결과가가 얻어지지는 않았다 [Chakrabarti et al., Infect Immun. 67: 1025-1033 (1999)]. 에이. 플레우로뉴모니아 dnaK 돌연변이체의 CI는 여전히 양성 대조군 균주의 대략 절반이지만 대다수의 독성약화 돌연변이체보다 더 높았다.

DksA는 대장균의 dnaK 돌연변이체에 있어서 필라멘트성 및 온도-민감성 생장의 투여량-의존성 억제제이다 [Kang and Craig, J Bacteriol. 172: 2055-64 (1990)]. DksA에 대해 정의된 분자 기능은 현재 없지만, 상기 DksA 유전자는 닭 및 새로 부화된 병아리에서 살모넬라 티피무리움의 독성에 매우 중요한 것으로서 밝혀진 바 있다 [Turner et al., Infect Immun. 66: 2099-106 (1998)]. DksA 돌연변이체는 글루코스 또는 히스티딘이 단독 탄소원인 경우 잘 생장하지 못하지만, 글루타민 또는 글루타메이트가 단독 탄소원인 경우 잘 생장한다는 것도 관찰되었다. 이 관찰은 dksA 돌연변이체가 글루타메이트의 생합성에 있어서 다소 손상되어 있음을 의미할 수 있다 [Turner et al., Infect Immun. 66: 2099-106 (1998)].

단백질 합성에 작용하는 tRNA-leu, tRNA-glu 및 rpmF 유전자를 확인하였다. 단백질 합성을 제외하고, tRNA는 펩티도글리칸 합성 [Stewart et al., Nature 230: 36-38 (1971)], 포르피린 고리(porphyrin ring) 합성 [Jahn et al., Trends Biochem Sci. 17: 215-8 (1992)], 분해를 위한 단백질 표적화 [Tobias et al., Science 254: 1374-7 (1991)], 번역후 (post-translation) 아미노산을 단백질에 부가하는 것 [Leibowitz and Soffer, B. B. R. C. 36: 47-53 (1969)], 및 세균-진핵생물 상호작용의 매개 [Gray et al., J Bacteriol. 174: 1086-98 (1992), Hromockyj et al., Mol Microbiol. 6: 2113-24 (1992)]에 있어서 매우 다양한 기능을 한다. 보다 구체적으로, tRNA-leu는 전사 약화 [Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 8127-8131 (1986)], 슈도모나스 시린개 (Pseudomonas syringae)에 의한 병변 형성 [Rich and Willis, J Bacteriol. 179: 2247-58 (1997)], 및 병원성 대장균의 독성 [Dobrindt et al., FEMS Microbiol Lett. 162: 135-141 (1998), Ritter et al., Mol Microbiol. 17: 109-21 (1995)]과 관련되어 있다. 본 발명자들이 찾은 tRNA가 에이. 플레우로뉴모니아에 있는 tRNA-leu의 소수 종을 나타내는지는 공지되어 있지 않다. 이와 관계없이, tRNA-leu가 다양한 기능 중 임의의 한 기능을 가질 수 있을 가능성이 있다. RpmF는 대장균에서 지방산 생합성 효소를 함유하는 오페론의 일부이기도 한 유전자의 산물인 리보좀 단백질이다. fab 유전자 및 rpmF의 동일한 클러스터링(clustering)이 헤모필러스 인플루엔자에서 일어난다고 하더라도 악티노바실러스 플레우로뉴모니아에서도 이러한 균주군생성이 일어나는지를 밝히기 위한 추가 연구가 필요할 것이다 [Fleischmann et al., Science 269: 496-512 (1995)]. fab 유전자의 발현은 rpmF의 상류로부터 발생된 전사체에 반드시 의존하지는 않는데, 이는 rpmF내에서 확인된 2차 프로모터가 있기 때문이다 [Zhang and Cronan, Jr., J Bacteriol. 180: 3295-303 (1998)].

독성약화 돌연변이체의 최종 클래스로는 공지된 기능이 없는 유전자 또는 이전에 밝혀진 바 없는 유전자 내에서의 돌연변이가 있다. yaeA 및 HI0379의 동족체는 이미 대장균 [Blattner et al., Science 277: 1453-1474 (1997)] 및 헤모필러스 인플루엔자 [Fleischmann et al., Science 269: 496-512 (1995)] 각각에서 밝혀진 바 있다. 남아 있는 비공지된 유전자는 악티노바실러스 플레우로뉴모니아 독성 유전자(apv)로 지칭하였다. apvC 유전자는 HI0893과의 상당한 유사성을 보이지만, 지방산 반응 조절자 Bm3RI [Palmer, J Biol Chem. 273: 18109-16 (1998)]과 유사한 전사 억제제로서 제시된 HI0893의 유사성은 의심스럽다. apvD 유전자는 기능이 공지되어 있지 않은, 대장균의 막 단백질로 추정되는 단백질(b0878) [Blattner et al., Science 277: 1453-1474 (1997)]과도 매우 유사하다. 두 가지 다른 비공지된 유전자인 apvA 및 apvB는 공개 데이타베이스와 별로 일치되지 않았다.

<실시예 11>: 에이. 플레우로뉴모니아 돌연변이체의 안정성 및 효능

SPF 돼지 (4-5 주된 것, 3-10 kg)의 9 군 (n=8)을 사용하여 독성약화 생백신 균주로서 7종의 에이. 플레우로뉴모니아 돌연변이체의 안정성 및 효능을 측정하였다. 1일째, 7 군을 각 돌연변이체의 10¹⁰ CFU로 비강내 감염시켰다. 1일 및 15일째, 시판되는 백신인 플레우로뮨(Pleuromune; Bayer)으로 1 군을 백신 접종하고, 또다른 1 군을 백신 접종하지 않았다. 29일째 날, 모든 군을 돼지 당 1-5 x 10⁵ CFU의 야생형 APP225로 비강내 감염시켰다. 연구 42일째, 모든 생존 동물을 안락사시키고 부검하였다. 결과를 표 4에 나타내었다.

	비강내 감염 후 사망률％
백신	백신접종	감염
플레우로뮨	0	37.5
exbB	0	0
tig	12.5	0
fkpA	12.5	0
HI0385	50	0
pnp	0	0
yaeE	0	0
atpG	0	0
없음	N/A	50.0

exbB, atpG, pnp 및 yaeA 돌연변이체는 10¹⁰ CFU의 투여량으로 비강내 투여할 때 전혀 사망을 초래하지 않았다. fkpA 및 tig 돌연변이체 군은 각각 1마리가 사망했고, HI0379 군 (실시예 9에 나타낸 바와 같이 시험된 7가지 돌연변이체의 CI는 2000년 4월 6일 가장 높았음)은 4마리가 사망했다. 이 모델을 사용한 야생형 LD₅₀은 대체적으로 1 X 10⁷ CFU인데, 이는 이들 돌연변이체 각각이 100 배 이상 독성이 약화되어 있고 CI와 독성약화 사이에 합리적인 연관성이 있음을 의미한다.

상기 실시예에 기재된 바와 같은 본 발명에 있어서 수많은 개량 및 변형이 당업자에게 자명할 것으로 생각된다. 따라서, 본 발명은 첨부된 청구항으로 한정된다.

<110> Lowery E., David Fuller E., Troy Kennedy J., Michael <120> Anti-Bacterial Vaccine Compositions <130> 28341/6227.NCP <140> 09/545,199 <141> 2000-04-06 <150> 60/153,453 <151> 1999-09-10 <150> 60/128,689 <151> 1999-04-09 <160> 169 <170> PatentIn Ver. 2.0 <210> 1 <211> 1112 <212> DNA <213> Pasteurella multocida <220> <221> CDS <222> (210)..(1001) <220> <223> atpB <220> <221> misc_feature <222> 1099 <223> n = A or T or G or C <220> <221> misc_feature <222> 1104 <223> n = A or T or G or C <400> 1 gtcaacaaca ttttatggtg gagaggccgt taaatttata tccacaattt ttttgattgt 60 acttgctttt aaactgttca attcaatgca ttttattgca ttttttgttg gatattttat 120 aacaatagtt ttaaacaata ttcttccatt ttttataagt aagtacttaa atataaagca 180 ttttcataaa tatcaataaa ggattagtt atg gca gca gag ctt aca aca gcg 233 Met Ala Ala Glu Leu Thr Thr Ala 1 5 gga tat att ggg cac cat tta gca ttc ttg aaa aca ggg gat tct ttc 281 Gly Tyr Ile Gly His His Leu Ala Phe Leu Lys Thr Gly Asp Ser Phe 10 15 20 tgg cat gtt cat tta gat acc ctt cta ttt tca 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atg ggt tat aac aaa gca gaa cac 1001 Met Leu Thr Val Val Tyr Leu Ser Met Gly Tyr Asn Lys Ala Glu His 250 255 260 taatttttta taaacaaaac cagaccttgg gtctaaattt caatcttatg gagaacatta 1061 tggaacactg taattactac aacaatcatc gcatctgnaa ttnttcttgc t 1112 <210> 2 <211> 264 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 2 Met Ala Ala Glu Leu Thr Thr Ala Gly Tyr Ile Gly His His Leu Ala 1 5 10 15 Phe Leu Lys Thr Gly Asp Ser Phe Trp His Val His Leu Asp Thr Leu 20 25 30 Leu Phe Ser Ile Ile Ser Gly Ala Ile Phe Leu Phe Val Phe Ser Lys 35 40 45 Val Ala Lys Lys Ala Thr Pro Gly Val Pro Ser Lys Met Gln Cys Phe 50 55 60 Val Glu Ile Met Val Asp Trp Ile Asp Gly Ile Val Lys Glu Asn Phe 65 70 75 80 His Gly Pro Arg His Ala Val Gly Pro Leu Ala Leu Thr Ile Phe Cys 85 90 95 Trp Val Phe Ile Met Asn Ala Ile Asp Leu Ile Pro Val Asp Phe Leu 100 105 110 Pro Gln Leu Ala His Leu Phe Gly Ile Glu Tyr Leu Arg Ala Val Pro 115 120 125 Thr Ala Asp Ile Ser Gly Thr Leu Gly Leu Ser Ile Gly Val Phe Phe 130 135 140 Leu Ile Ile Phe Tyr Thr Ile Lys Ser Lys Gly Met Ser Gly Phe Val 145 150 155 160 Lys Glu Tyr Thr Leu His Pro Phe Asn His Pro Leu Leu Ile Pro Val 165 170 175 Asn Leu Ala Leu Glu Ser Val Thr Leu Leu Ala Lys Pro Val Ser Leu 180 185 190 Ala Phe Arg Leu Phe Gly Asn Met Tyr Ala Gly Glu Leu Ile Phe Ile 195 200 205 Leu Ile Ala Val Met Tyr Met Ala Asn Asn Phe Ala Leu Asn Ser Met 210 215 220 Gly Ile Phe Met His Leu Ala Trp Ala Ile Phe His Ile Leu Val Ile 225 230 235 240 Thr Leu Gln Ala Phe Ile Phe Met Met Leu Thr Val Val Tyr Leu Ser 245 250 255 Met Gly Tyr Asn Lys Ala Glu His 260 <210> 3 <211> 1972 <212> DNA <213> Pasteurella multocida <220> <221> CDS <222> (364)..(1230) <220> <223> atpG <400> 3 agcgggccat ttggctcagt tcggcttcgg attcttatga tgcacacgta agcaattatc 60 acatggtcaa aaagtaactg aattattgaa acaaaaccaa tactctccgt tatctgtagc 120 acaacaagca ttagtgttat ttgcagtaga gtttggttac ttagaagaag tggacttaga 180 tcgtattggt tcatttgaat cagcactttt agagtatgct aaccataact atgctgattt 240 tatgcgtgag ttaacccaat ctggcaatta caatgatgaa 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gat aat tta ttg gtt 1032 Tyr Ile Tyr Glu Pro Asp Ala Lys Val Leu Leu Asp Asn Leu Leu Val 210 215 220 cgt tat tta gaa tct cag gtt tat caa gca gca gtt gaa aac ctt gct 1080 Arg Tyr Leu Glu Ser Gln Val Tyr Gln Ala Ala Val Glu Asn Leu Ala 225 230 235 tct gag caa gcc gct cga atg gtc gcc atg aaa gca gca aca gat aac 1128 Ser Glu Gln Ala Ala Arg Met Val Ala Met Lys Ala Ala Thr Asp Asn 240 245 250 255 gca ggt aac tta att aat gag tta cag tta gtc tat aac aaa gct cgt 1176 Ala Gly Asn Leu Ile Asn Glu Leu Gln Leu Val Tyr Asn Lys Ala Arg 260 265 270 caa gca agt att aca aat gaa tta aat gaa att gtt gcc ggt gca gca 1224 Gln Ala Ser Ile Thr Asn Glu Leu Asn Glu Ile Val Ala Gly Ala Ala 275 280 285 gca att taacaaatag aggatcggta atggcaactg gaaaaattgt acaaatcatc 1280 Ala Ile ggtgcggtta ttgacgttga attcccacaa gatgcagtac caaaagtata tgatgcctta 1340 aatgttgaaa caggtttagt acttgaagtt caacaacaat taggtggtgg tgtagttcgc 1400 tgtatcgcaa tgggatcatc tgatggatta aaacgcggtt taagcgtaac aaatacgaat 1460 aacccaattt ctgttccagt gggaacgaaa acattgggtc gtatcatgaa cgtattgggt 1520 gaaccaatcg atgagcaagg tgaaatcggt gcagaagaga attggtctat tcaccgtgcg 1580 ccaccaagtt atgaagaaca atctaacagt actgaacttt tagaaacggg aattaaagtt 1640 atcgacttag tttgtccgtt tgcgaaaggg ggtaaagtag gtttattcgg tggtgcgggt 1700 gtcggtaaaa ccgtcaatat gatggaatta atccgtaaca tcgcaattga gcactcaggt 1760 tactctgtct ttgcgggggt aggtgagcgt acgcgtgaag gtaacgactt ctatcatgag 1820 atgaaagact ctaacgtatt agataaagtg tctcttgttt atggtcaaat gaacgagcca 1880 ccaggtaacc gtttacgtgt ggcattaaca ggcttaacta tggcggaaaa attccgtgat 1940 gaaggtcgtg atgtcttatt cttcgttgat aa 1972 <210> 4 <211> 289 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 4 Met Ala Gly Ala Lys Glu Ile Arg Thr Lys Ile Ala Ser Val Lys Ser 1 5 10 15 Thr Gln Lys Ile Thr Lys Ala Met Glu Met Val Ala Ala Ser Lys Met 20 25 30 Arg Lys Thr Gln Glu Arg Met Ser Ser Ser Arg Pro Tyr Ser Glu Thr 35 40 45 Ile Arg Asn Val Ile Ser His Val Ser Lys Ala Thr Ile Gly Tyr Lys 50 55 60 His Pro Phe Leu Val Asp Arg Glu Val Lys Lys Val Gly Met 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atc cca tta ttt gtc gat caa ata cgt caa ggc 336 Ser Arg Gly Ser Val Ile Pro Leu Phe Val Asp Gln Ile Arg Gln Gly 100 105 110 aag cct ttt act att act gat cct gag atg aca cgc ttt atg atg aca 384 Lys Pro Phe Thr Ile Thr Asp Pro Glu Met Thr Arg Phe Met Met Thr 115 120 125 ttg gaa gat gct gtg gat tta gtc cta tat gca ttt aaa aat ggt caa 432 Leu Glu Asp Ala Val Asp Leu Val Leu Tyr Ala Phe Lys Asn Gly Gln 130 135 140 aat ggt gat gtt ttt gta caa aaa gcc ccc gca gca acc att ggt acc 480 Asn Gly Asp Val Phe Val Gln Lys Ala Pro Ala Ala Thr Ile Gly Thr 145 150 155 160 ctt gcc aaa gca att acc gaa tta tta tct gtc cca aat cac cct att 528 Leu Ala Lys Ala Ile Thr Glu Leu Leu Ser Val Pro Asn His Pro Ile 165 170 175 tcc att ata ggt acg cgt cat gga gag aaa gca ttc gaa gct tta tta 576 Ser Ile Ile Gly Thr Arg His Gly Glu Lys Ala Phe Glu Ala Leu Leu 180 185 190 agc cgt gaa gaa atg gtt cat gca att aat gaa ggt aat tat tat cgc 624 Ser Arg Glu Glu Met Val His Ala Ile Asn Glu Gly Asn Tyr Tyr Arg 195 200 205 atc cca 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cattggcagc gacggtgaaa 1140 gaggaagaac tatttggttt aacagcagaa gaattattgt accgtttata tcatgaagag 1200 cgtgttgaaa ttttcccttc acagccgatc tcatttttct gtggctgctc acaagaacgt 1260 tctggtgccg cattgttgtt gatttctgat gaagaattgg atgaagtctt ggcagagcat 1320 aacggtacca ttgatatgca gtgtgaatgt tgtgggacgc attatttctt caataaagca 1380 gcgattatgc aattgaaagt agaaaaataa gtcttggtat tatggatttt gttgcaggct 1440 atcaagatat ttgatagcct gtttttcctt tgcagcaaac gattttatga gaaaaacgcc 1500 gtcttctcac acagtagttt aggtattgca tagcatgaag cgggaaacta tgtttggcgc 1560 ttgtctgttt aaaaaggtta tctatgttag cactttcacc atcattactt gaaaaaacac 1620 ttgaaatcgc ggatcaagca ggagattttt taacgcgatt ttataccgac tcagggcaaa 1680 atgcgttagc aattcaaacc aaacaagata acacgccagt gactgccgtg gatttatttt 1740 tgagtcaatt tttaattgaa aaattgaccg cactgacacc tgaggtcccg attctttccg 1800 aagagagttg taaaatcccc ttacaagatc gtgcacattg ggcagaatat tggttaattg 1860 acccactcga tggaacccaa caatttatta atcgcaccga tcaattttcc attttgatta 1920 cacttgtcca acacaatcaa cccgtcttaa gcattaccca tgcccctatt ttacaaacga 1980 cctattatgc tatgcagggc tttggtgctt acagaaggca gggcaatcaa caagaaaagc 2040 taaacaacca agcgcgacct gagcagcgaa aaatcaaaat tgctgtggga gtcgggggcg 2100 ttgaacggaa aattcagccc ttgttaaatc cagcttatca atatgaattt ttggtttatg 2160 gttcaagtgg cttaaaaggc ggcttagtgg ccgatggcac ttgtgattgc tatattcgag 2220 taggaaaaac gggtgaatgg gatacggggg cggctgaaat cctcttacgt gaaatgggag 2280 gtgctgtgtt tgactttgct tttcaaccgc ttagctataa tcagagagaa agttttatta 2340 atcccaattt tgtgatggta gcgaatacag aatttgattg gcagaaaatt tttcaatttc 2400 attcgcacta ggcattattt attataagat gcgatatctt atgacctcta tttttaacaa 2460 acggatttca ggaaaaaaat gaaaattgaa gcagacaaca attgtattgt aatttttggt 2520 gcatcaggtg atttaactta tcgtaaattg attcctgcac tgtataactt atataaaatc 2580 ggtcgtttga ctgagcattt ctccgtgtta ggtgtggcaa gaacggaatt aagtgatgag 2640 ggtttccgtg aaaaaatgcg ccaagcgttg atcaaaagtg aaaaagcgaa tggcgaaaca 2700 ctcgatcaat tttgtagcca cctttattat caggcattaa ataccgcgga tgctgccgat 2760 tatggcaagt taattcctcg tcttgatgac ttacatgata aatatcaaac ttgtggtaac 2820 acactttact atttatctac gccgccaagc ctttatggcg tgattccaga atgccttgcg 2880 gcacatgggt taaatactga agagtttggc tggaagcggt taattgtgga aaaaccgttt 2940 ggttatgata tacgcacggc aaaagaactc gatattcaaa ttcaccgttt ctttgatgaa 3000 caccaaattt atcgtattga ccactatctt ggtaaagaaa cggttcaaaa tctgcttgtg 3060 ttgcgttttt ctaatggatg gtttgaacca ctctggaacc gtaatttcat tgattatatt 3120 gaaatcacgg gcgcagaatc tatcggtgta gaagagcgtg gtggttatta cgatgattct 3180 ggcgcaatgc gtgatatgtt ccaaaaccat ttgttgcaag tgttagccat ggttgcgatg 3240 gagccaccag caattattaa tgccgactca atgcgtgatg aagtggcaaa agtcttgtat 3300 tgtttacatc cattaagtga ggatgactta gaaaatcatt tagtcttagg gcaatatacg 3360 gcaggcacag ttgaaggtga agcggttaag ggctacttac aggaaaaagg tgtgccggca 3420 gagtctaata cggaaactta catggcatta cgttgtgaaa ttgacaactg gcgttgggcg 3480 ggtgtgccat tttatgtgcg tactgggaaa cggttaccaa gtcgagtgac cgaaattgtg 3540 attcatttca aaaccacacc acatccggta tttagccaaa aagcaccaga aaacaaatta 3600 attatccgta ttcaacccga tgaagcgatt tcgatgcgtt 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Asp Asp Pro His Phe Ala Val Ile Ala Lys 145 150 155 160 His Pro Glu Thr Gly Gln Ile Arg Ile Ser Lys Thr Ala Lys Leu Ile 165 170 175 Glu Gln Ala Lys Arg Val Thr Tyr Leu Val Thr Gly Ser Ser Lys Ala 180 185 190 Glu Ile Leu Lys Glu Ile Gln Thr Thr Pro Ala Glu Gln Leu Pro Tyr 195 200 205 Pro Ala Ala Lys Ile Lys Ala Lys His Gly Val Thr Glu Trp Tyr Leu 210 215 220 Asp Lys Asp Ala Ala Lys Leu Leu 225 230 <210> 9 <211> 2438 <212> DNA <213> Pasteurella multocida <220> <221> CDS <222> (1635)..(2396) <220> <223> dnaA <400> 9 gacccaatgc ttgccaccgg cggctctatg attgcgacaa tcgatcttct aaaagcgaaa 60 ggctgtaaac acattaaagt gctcgtgtta gtcgccgcgc ctgaaggcat taaagcatta 120 gaagctgcgc accctgatat cgaattatat accgcatcag ttgatagtca cttaaatgaa 180 caaggctata ttattccagg tcttggtgat gccggtgata aaatttttgg cactaaataa 240 tcccaacaca agcggcatct tatgccgctt ttttccgttc aatttatagc gcttacaatc 300 ttaacagctt gaacactata aaatgaaaag ttaattcaga cagagagttg aaacttaaca 360 tgacaaatca aaatccccct gttcttctag aacaaaatca cgcaaaacaa 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Ala Ile Ser 50 55 60 Thr Ile Gly Ser Asn Ala Pro Tyr Val Gly Leu Leu Gly Thr Val Ile 65 70 75 80 Gly Ile Leu Leu Thr Phe Tyr Glu Leu Gly His Ser Gly Gly Asp Ile 85 90 95 Asp Ala Ala Ala Ile Met Val His Leu Ser Leu Ala Leu Lys Ala Thr 100 105 110 Ala Val Gly Ile Leu Val Ala Ile Pro Ala Met Val Cys Tyr Asn Gly 115 120 125 Leu Gly Arg Lys Val Glu Val Asn Arg Leu Lys Trp Phe Ala Leu Asn 130 135 140 Glu Lys Lys Ala Lys Gln Gln Ala 145 150 <210> 15 <211> 6876 <212> DNA <213> Pasteurella multocida <220> <221> CDS <222> (534)..(6863) <220> <223> fhaB1 <400> 15 agatgcgtga tctgatcctt caactcagca aaagttcgat ttattcaaca aagccgccgt 60 cccgtcaagt cagcgtaatg tctgccagtg ttacaccaat taaccaattc tgattagaaa 120 aactcatcga gcatcaaatg aaactgcaat ttattcatat caggattatc aataccatat 180 ttttgaaaaa gccgtttctg taatgaagga gaaaactcac cgaggcagtt ccataggatg 240 gcaagatcct ggtatcggtc tgcgattccg actcgtccaa catcaataca acctattaat 300 ttcccctcgt caaaaataag gttatcaagt gagaaatcac catgagtgac gactgaatcc 360 ggtgagaatg gcaaaagctt atgcatttct ttccagactt gttcaacagg ccagccatta 420 cgctcgtcat caaaatcact cgcatcaacc aaaccgttat tcattcgtga ttgcgcctga 480 gcgagacgaa atacgcgatc gctgttaaaa ggacaattac aaacaggaat cga atg 536 Met 1 caa ccg gcg cag gaa cac tgc cag cgc atc aac aat att gtt aac caa 584 Gln Pro Ala Gln Glu His Cys Gln Arg Ile Asn Asn Ile Val Asn Gln 5 10 15 gaa aac ggt tta ttc cat aca ctc ggt aat atg atg tta gaa gca gag 632 Glu Asn Gly Leu Phe His Thr Leu Gly Asn Met Met Leu Glu Ala Glu 20 25 30 cgt tct gtt tat aat att ggc gat att tat gcg agt aaa aaa tta aca 680 Arg Ser Val Tyr Asn Ile Gly Asp Ile Tyr Ala Ser Lys Lys Leu Thr 35 40 45 gtt cat act cat aat ttg att aat gat gtg cgt tta tct ggc aat gtg 728 Val His Thr His Asn Leu Ile Asn Asp Val Arg Leu Ser Gly Asn Val 50 55 60 65 agt tat aag cct atc ggt tca agt cgt gat tat gat atc agt cgt gtt 776 Ser Tyr Lys Pro Ile Gly Ser Ser Arg Asp Tyr Asp Ile Ser Arg Val 70 75 80 gcg gta cat ggt tgg cac aat aat gtt tat aag ctc aac tta aat ctg 824 Ala Val His Gly Trp His Asn Asn Val Tyr Lys Leu Asn Leu Asn Leu 85 90 95 caa gaa caa gat aaa acc gat att aaa gtt gtg aaa atg ggg gct atc 872 Gln Glu Gln Asp Lys Thr Asp Ile Lys Val Val Lys Met Gly Ala Ile 100 105 110 cgt tct gat ggt gat ttt gac ttt aag gga ata aag gcg aca tca tca 920 Arg Ser Asp Gly Asp Phe Asp Phe Lys Gly Ile Lys Ala Thr Ser Ser 115 120 125 gaa tca aaa ccg cag tta att aat cat gga tta att aat gtc aaa gga 968 Glu Ser Lys Pro Gln Leu Ile Asn His Gly Leu Ile Asn Val Lys Gly 130 135 140 145 aca ttt aat gcg gaa gct gat caa gtg gtg aac caa atg aaa gcg ttt 1016 Thr Phe Asn Ala Glu Ala Asp Gln Val Val Asn Gln Met Lys Ala Phe 150 155 160 aac caa aat gca tta gca agc gtg ttt aag aat cca gcg aaa atc acg 1064 Asn Gln Asn Ala Leu Ala Ser Val Phe Lys Asn Pro Ala Lys Ile Thr 165 170 175 atg tac tat caa cca ctt act cgt tat att tgg aca cca tta tcg ggt 1112 Met Tyr Tyr Gln Pro Leu Thr Arg Tyr Ile Trp Thr Pro Leu Ser Gly 180 185 190 aat gca tcg cgt gaa ttt aac aat tta gag tct ttc ctc gat gcc ttg 1160 Asn Ala Ser Arg Glu Phe Asn Asn Leu Glu Ser Phe Leu Asp Ala Leu 195 200 205 ttt ggc tca aca aca atc tta aaa tca agt ttc tat agt acg gaa aat 1208 Phe Gly Ser Thr Thr Ile Leu Lys Ser Ser Phe Tyr Ser Thr Glu Asn 210 215 220 225 ttt agt gct tat cag ctt cta tct cat att cag cat tca cca atg tac 1256 Phe Ser Ala Tyr Gln Leu Leu Ser His Ile Gln His Ser Pro Met Tyr 230 235 240 caa aaa gcg atg gca caa gtg ttt ggt gca gag tgg cat agt aaa tcc 1304 Gln Lys Ala Met Ala Gln Val Phe Gly Ala Glu Trp His Ser Lys Ser 245 250 255 tat gat gag atg cga aac aaa tgg aaa agc ttt aaa gaa aat cca aca 1352 Tyr Asp Glu Met Arg Asn Lys Trp Lys Ser Phe Lys Glu Asn Pro Thr 260 265 270 gat ttc att tat tac cca tca gaa aaa gca aaa atc cta gcg gga aaa 1400 Asp Phe Ile Tyr Tyr Pro Ser Glu Lys Ala Lys Ile Leu Ala Gly Lys 275 280 285 cta gaa ggt aag ctt aca acg cta caa aat ggt gaa tat gcc gaa cgt 1448 Leu Glu Gly Lys Leu Thr Thr Leu Gln Asn Gly Glu Tyr Ala Glu Arg 290 295 300 305 ggt aag ttt gat gag agt atc caa att ggt aaa cac caa tta tcg cta 1496 Gly Lys Phe Asp Glu Ser Ile Gln Ile Gly Lys His Gln Leu Ser Leu 310 315 320 cca tca gta gag ctt aaa gcg gag ttt agt gat aaa gaa cgt ttg gaa 1544 Pro Ser Val Glu Leu Lys Ala Glu Phe Ser Asp Lys Glu Arg Leu Glu 325 330 335 gag gac ggg gta gat tta tcc tcg atc gcc gaa ctc tta gaa atg cca 1592 Glu Asp Gly Val Asp Leu Ser Ser Ile Ala Glu Leu Leu Glu Met Pro 340 345 350 aac tta ttt att gat aat agt atc caa tta gaa aag aaa aag ttg tct 1640 Asn Leu Phe Ile Asp Asn Ser Ile Gln Leu Glu Lys Lys Lys Leu Ser 355 360 365 cct att gag gat cta gat gaa gaa cca cgt aaa aat ctg gat ata gaa 1688 Pro Ile Glu Asp Leu Asp Glu Glu Pro Arg Lys Asn Leu Asp Ile Glu 370 375 380 385 gaa agc cat tct aat tca tcg gat gac gtg ctt agc atg aat gat gat 1736 Glu Ser His Ser Asn Ser Ser Asp Asp Val Leu Ser Met Asn Asp Asp 390 395 400 gag tct gat aca gac gat agc aag tgg agt atg ggc aat gat gag aaa 1784 Glu Ser Asp Thr Asp Asp Ser Lys Trp Ser Met Gly Asn Asp Glu Lys 405 410 415 gag atg ccc gat gat aag ctg ggt ata agt cgt gat gat cgt gga aat 1832 Glu Met Pro Asp Asp Lys Leu Gly Ile Ser Arg Asp Asp Arg Gly Asn 420 425 430 aaa cca cct cgt act gat cct aca gtt gat tat ctt aac cct gat gaa 1880 Lys Pro Pro Arg Thr Asp Pro Thr Val Asp Tyr Leu Asn Pro Asp Glu 435 440 445 ttc ttt gaa aat ggt tat ctc ttg aat gag cta cta cag gag ctt gga 1928 Phe Phe Glu Asn Gly Tyr Leu Leu Asn Glu Leu Leu Gln Glu Leu Gly 450 455 460 465 gaa gag ccg tta cta aaa gaa ggg gaa gat cat ttt aaa cgt tct acc 1976 Glu Glu Pro Leu Leu Lys Glu Gly Glu Asp His Phe Lys Arg Ser Thr 470 475 480 aat cta gtc cgt cta ggc gag aga gat agg caa aat aga gaa aag aga 2024 Asn Leu Val Arg Leu Gly Glu Arg Asp Arg Gln Asn Arg Glu Lys Arg 485 490 495 gaa aaa gag ggg tat ttt gat ctg cct ggt aca tta gat atg aaa ctg 2072 Glu Lys Glu Gly Tyr Phe Asp Leu Pro Gly Thr Leu Asp Met Lys Leu 500 505 510 cag gag tta ttc gaa aaa aga aaa caa aaa cac gaa gca gaa cag aaa 2120 Gln Glu Leu Phe Glu Lys Arg Lys Gln Lys His Glu Ala Glu Gln Lys 515 520 525 gca aga ata gaa aaa gca ctt cta caa aaa tca gaa caa caa gaa aaa 2168 Ala Arg Ile Glu Lys Ala Leu Leu Gln Lys Ser Glu Gln Gln Glu Lys 530 535 540 545 cgt gtt gaa gaa cgt aag caa gag gaa aaa cgt caa gcg caa gat aaa 2216 Arg Val Glu Glu Arg Lys Gln Glu Glu Lys Arg Gln Ala Gln Asp Lys 550 555 560 att gct aag caa gta gaa att gca aaa gaa atg caa cgg gta gaa gaa 2264 Ile Ala Lys Gln Val Glu Ile Ala Lys Glu Met Gln Arg Val Glu Glu 565 570 575 att cgc cag aga gaa aaa caa ctt gcg atc caa ctg caa gaa gaa gag 2312 Ile Arg Gln Arg Glu Lys Gln Leu Ala Ile Gln Leu Gln Glu Glu Glu 580 585 590 aag aaa caa caa gaa gaa aaa cat tta tcc gag gag aaa aaa caa gct 2360 Lys Lys Gln Gln Glu Glu Lys His Leu Ser Glu Glu Lys Lys Gln Ala 595 600 605 gaa cag aaa caa aaa gct gag gag aaa gtt gca caa gaa aga tta gac 2408 Glu Gln Lys Gln Lys Ala Glu Glu Lys Val Ala Gln Glu Arg Leu Asp 610 615 620 625 att gaa caa cag aaa gcg tat gaa gaa atg gcg aag cga gag gca gag 2456 Ile Glu Gln Gln Lys Ala Tyr Glu Glu Met Ala Lys Arg Glu Ala Glu 630 635 640 gca tca aaa aat gtt tta ttg aaa gcg att gat gaa gaa cgt cca aaa 2504 Ala Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Ala Ile Asp Glu Glu Arg Pro Lys 645 650 655 gtg gaa act gat cca ctt ttc cgt aca aaa ttg aaa tat atc aat caa 2552 Val Glu Thr Asp Pro Leu Phe Arg Thr Lys Leu Lys Tyr Ile Asn Gln 660 665 670 gat gac tat gct ggt gca aat tat ttc ttc aat aaa gtt ggt tta aat 2600 Asp Asp Tyr Ala Gly Ala Asn Tyr Phe Phe Asn Lys Val Gly Leu Asn 675 680 685 aca aaa ggt cat caa aaa gta aat gtg tta ggg gat aac tat ttt gat 2648 Thr Lys Gly His Gln Lys Val Asn Val Leu Gly Asp Asn Tyr Phe Asp 690 695 700 705 cat caa gtg att act cgc tcg att gag aaa aaa gta gat aac cac ctt 2696 His Gln Val Ile Thr Arg Ser Ile Glu Lys Lys Val Asp Asn His Leu 710 715 720 aac caa aaa tac aat ctc agc gat gtg gaa tta gtt aaa cag ctg atg 2744 Asn Gln Lys Tyr Asn Leu Ser Asp Val Glu Leu Val Lys Gln Leu Met 725 730 735 gac aat tcc aca aca caa gcg cag gag ttg gat ttg aaa cta ggt gcg 2792 Asp Asn Ser Thr Thr Gln Ala Gln Glu Leu Asp Leu Lys Leu Gly Ala 740 745 750 gca tta act aaa gaa caa caa gct aac ttg acc caa gat atc gtt tgg 2840 Ala Leu Thr Lys Glu Gln Gln Ala Asn Leu Thr Gln Asp Ile Val Trp 755 760 765 tat gtc aaa acg aag gta aag ggc aaa gat gtg ttt gtt cca aag gtt 2888 Tyr Val Lys Thr Lys Val Lys Gly Lys Asp Val Phe Val Pro Lys Val 770 775 780 785 tat ttc gct tct gaa acg ctc gta gaa gcc caa aaa tta caa ggt tta 2936 Tyr Phe Ala Ser Glu Thr Leu Val Glu Ala Gln Lys Leu Gln Gly Leu 790 795 800 ggc act ggg act atc aga gtt ggt gaa gct aag att aaa gcc aaa gat 2984 Gly Thr Gly Thr Ile Arg Val Gly Glu Ala Lys Ile Lys Ala Lys Asp 805 810 815 gtg gtg aat acc ggg aca tta gct ggg aga aaa ctc aat gtt gaa gcg 3032 Val Val Asn Thr Gly Thr Leu Ala Gly Arg Lys Leu Asn Val Glu Ala 820 825 830 agt aat aaa atc aaa aat caa ggg agt atc tta agt act caa gaa aca 3080 Ser Asn Lys Ile Lys Asn Gln Gly Ser Ile Leu Ser Thr Gln Glu Thr 835 840 845 cgt tta gtc ggg cgt aaa ggt att gaa aac gta tct cgt tca ttt gca 3128 Arg Leu Val Gly Arg Lys Gly Ile Glu Asn Val Ser Arg Ser Phe Ala 850 855 860 865 aat gat gaa tta gga gtc act gca caa cgc tca gaa atc aaa acg gaa 3176 Asn Asp Glu Leu Gly Val Thr Ala Gln Arg Ser Glu Ile Lys Thr Glu 870 875 880 ggt cat tta cat ctt gaa aca gat aag gat tca act att gat gta caa 3224 Gly His Leu His Leu Glu Thr Asp Lys Asp Ser Thr Ile Asp Val Gln 885 890 895 gca tcg gat att aaa gca aaa aca agc ttt gtg aag act ggt gat gtg 3272 Ala Ser Asp Ile Lys Ala Lys Thr Ser Phe Val Lys Thr Gly Asp Val 900 905 910 aat ctc aaa aat aca tac aat act aaa cat gcc tac cgt gag aaa ttc 3320 Asn Leu Lys Asn Thr Tyr Asn Thr Lys His Ala Tyr Arg Glu Lys Phe 915 920 925 tcg ccg agt gca cta caa gtt gca gaa ctt gat gtg gca ggg ctt aaa 3368 Ser Pro Ser Ala Leu Gln Val Ala Glu Leu Asp Val Ala Gly Leu Lys 930 935 940 945 gtc cca ctt tta ggc gtg tcg tct cca tcc agt tat tca gag cat act 3416 Val Pro Leu Leu Gly Val Ser Ser Pro Ser Ser Tyr Ser Glu His Thr 950 955 960 agt gag gca act tca gag gga tca atc ttc gaa gta ggg cac tta cat 3464 Ser Glu Ala 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Ile Val Thr Lys Ile Gly Gly 1285 1290 1295 aat gtc aca ctg tca gca cgc agt ggt agt gtg aac ctt aaa aat gta 4472 Asn Val Thr Leu Ser Ala Arg Ser Gly Ser Val Asn Leu Lys Asn Val 1300 1305 1310 caa agt gat gaa caa gct aat ttg acc tta aga gca aaa gaa gat gtg 4520 Gln Ser Asp Glu Gln Ala Asn Leu Thr Leu Arg Ala Lys Glu Asp Val 1315 1320 1325 aat gtg ctg tct ggt gaa aaa aca cga gaa acc aca gaa aca gta tca 4568 Asn Val Leu Ser Gly Glu Lys Thr Arg Glu Thr Thr Glu Thr Val Ser 1330 1335 1340 1345 aga cag aaa ctt tct cat ggt gtg aac gca ggt tgc agt atg atg agt 4616 Arg Gln Lys Leu Ser His Gly Val Asn Ala Gly Cys Ser Met Met Ser 1350 1355 1360 ggc gcc tgt act gcc ggt gtt agc aca tca ctt gaa gga aat gaa agc 4664 Gly Ala Cys Thr Ala Gly Val Ser Thr Ser Leu Glu Gly Asn Glu Ser 1365 1370 1375 tat acg tca gaa cgt gaa acg gct caa aat aac agt ttc tta aaa gca 4712 Tyr Thr Ser Glu Arg Glu Thr Ala Gln Asn Asn Ser Phe Leu Lys Ala 1380 1385 1390 cgc aac atg aaa gtt gaa gca ggt cgc gat ttt aat gtt gtc agt tcg 4760 Arg Asn Met Lys Val Glu Ala Gly Arg Asp Phe Asn Val Val Ser Ser 1395 1400 1405 aat att gat gca gat aag ctc gat ctc cac gtt aaa gga aaa acg aat 4808 Asn Ile Asp Ala Asp Lys Leu Asp Leu His Val Lys Gly Lys Thr Asn 1410 1415 1420 1425 gtg gta tcc aaa caa gat acg tta caa aaa gtg acg cat gga gtt gac 4856 Val Val Ser Lys Gln Asp Thr Leu Gln Lys Val Thr His Gly Val Asp 1430 1435 1440 tat aat ctt tcc gct ggc gtt gca ctt tct agt gca aca att gct acc 4904 Tyr Asn Leu Ser Ala Gly Val Ala Leu Ser Ser Ala Thr Ile Ala Thr 1445 1450 1455 cca acc ggt aat gtt ggt ttc ggt tat acc aat gag acc gaa agc aag 4952 Pro Thr Gly Asn Val Gly Phe Gly Tyr Thr Asn Glu Thr Glu Ser Lys 1460 1465 1470 cgg acg gtt aat caa caa gca ggg att aaa gcg aat aaa att aca ggg 5000 Arg Thr Val Asn Gln Gln Ala Gly Ile Lys Ala Asn Lys Ile Thr Gly 1475 1480 1485 caa acg cat gac tta aat ctt gag ggg gga tat ctt gtc agc aac gat 5048 Gln Thr His Asp Leu Asn Leu Glu Gly Gly Tyr Leu Val Ser Asn Asp 1490 1495 1500 1505 aag gat aat cag ctg aaa gtt acc ggc gat gtc aca act aaa gcc ctt 5096 Lys Asp Asn Gln Leu Lys Val Thr Gly Asp Val Thr Thr Lys Ala Leu 1510 1515 1520 cac gat caa cat gat aaa gat ggt gga aca ttt ggt tta tct gtg ggt 5144 His Asp Gln His Asp Lys Asp Gly Gly Thr Phe Gly Leu Ser Val Gly 1525 1530 1535 atc agt gaa cgt ggt act acc gcc ttt aat gta cga ggt ggg cga gct 5192 Ile Ser Glu Arg Gly Thr Thr Ala Phe Asn Val Arg Gly Gly Arg Ala 1540 1545 1550 gaa cag aaa cac tat aat gca acg cag aaa tcc act ctt tct ggc gtg 5240 Glu Gln Lys His Tyr Asn Ala Thr Gln Lys Ser Thr Leu Ser Gly Val 1555 1560 1565 gat acc tct caa gcg aat gta tca ggt caa gtg aat aca gat tta acc 5288 Asp Thr Ser Gln Ala Asn Val Ser Gly Gln Val Asn Thr Asp Leu Thr 1570 1575 1580 1585 aag gca aaa gct gtc aca cgt gat gat act tac gca agt acg caa ttt 5336 Lys Ala Lys Ala Val Thr Arg Asp Asp Thr Tyr Ala Ser Thr Gln Phe 1590 1595 1600 agt ttt gaa gtg gca gat att gtg gaa tta gga cag aga gcg aaa aac 5384 Ser Phe Glu Val Ala Asp Ile Val Glu Leu Gly Gln Arg 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ggc agc att tat cac agc cca 6056 Val Asn Leu Ile Gly Gln Asn Gly Leu Gly Ser Ile Tyr His Ser Pro 1830 1835 1840 gac agt gct tat aaa aca tgg caa ttg ctt gat caa ttt gcc aac aaa 6104 Asp Ser Ala Tyr Lys Thr Trp Gln Leu Leu Asp Gln Phe Ala Asn Lys 1845 1850 1855 ggc gga gat gcg gtc ttc tta cgc cct gca aca gaa atg aaa tgt gca 6152 Gly Gly Asp Ala Val Phe Leu Arg Pro Ala Thr Glu Met Lys Cys Ala 1860 1865 1870 ggt gca cct tta aaa tat acc ttt atc gtg cgt gat tat ttg ctc aga 6200 Gly Ala Pro Leu Lys Tyr Thr Phe Ile Val Arg Asp Tyr Leu Leu Arg 1875 1880 1885 cgc cat acc tta gat aaa tca aga tta ttt tat aac gca cat aat aaa 6248 Arg His Thr Leu Asp Lys Ser Arg Leu Phe Tyr Asn Ala His Asn Lys 1890 1895 1900 1905 acc tta ttt agc gtg cct atc gtt gat gca aaa gtc aaa atg ctg ttt 6296 Thr Leu Phe Ser Val Pro Ile Val Asp Ala Lys Val Lys Met Leu Phe 1910 1915 1920 gct gaa aaa aat atc caa gtc aat tac gat cgt agc ctt aca gcc att 6344 Ala Glu Lys Asn Ile Gln Val Asn Tyr Asp Arg Ser Leu Thr Ala Ile 1925 1930 1935 gat ctg agt aaa cgt att gcg acc ttt aat agc cca gaa gga gtt gta 6392 Asp Leu Ser Lys Arg Ile Ala Thr Phe Asn Ser Pro Glu Gly Val Val 1940 1945 1950 gaa gtc cct tat gat ttt att aat gtg gta cct cca atg cga gca cct 6440 Glu Val Pro Tyr Asp Phe Ile Asn Val Val Pro Pro Met Arg Ala Pro 1955 1960 1965 gat gcc gtt cgt caa tca gca ctc gcg tgg caa gaa gga aaa tgg gct 6488 Asp Ala Val Arg Gln Ser Ala Leu Ala Trp Gln Glu Gly Lys Trp Ala 1970 1975 1980 1985 aac gat ggt tgg gtt gaa gta gaa aaa cat acc ttg cgt cac cgt cgt 6536 Asn Asp Gly Trp Val Glu Val Glu Lys His Thr Leu Arg His Arg Arg 1990 1995 2000 tat gcc aat gtg ttt gct gtg ggt gat gtg gca ggg gtc cca aaa ggc 6584 Tyr Ala Asn Val Phe Ala Val Gly Asp Val Ala Gly Val Pro Lys Gly 2005 2010 2015 aaa acg gct gcc agt gtc aaa tgg caa gtt cct gtt gca gtg gca cat 6632 Lys Thr Ala Ala Ser Val Lys Trp Gln Val Pro Val Ala Val Ala His 2020 2025 2030 tta ctc gca gaa tta gag ggc aaa cct tgt gat gaa att tac aac ggt 6680 Leu Leu Ala Glu Leu Glu Gly Lys 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caaagcttag ctgtcaagct gatgcatgtg ttattgcgta ataaggagag tattttatct 780 acatataccg agttcgagtt taaaaaacgg attagttatt tttctgatat tttgattggg 840 aaatatcaca ataataaagt gagcgtaggg ttatcttaca tgactaattt tgcttacggg 900 aagctttaca gcgacattgc ttacgcgaat gggttgagat ggtttggggc gaattattca 960 gcatatgatg caaatcgtga aaaaacctta aaattattgt caggaagtat taattggcag 1020 cgtccaatat ccctgtttga acgtgcgatg aattatcaat tacgtattgg tgcccaatat 1080 ggttttgata gtttgtattc tgaaaatcaa ttttcaattg gtgatgaata tacagtaaga 1140 ggatttaaag gtggtgcggt ttctggtgat agtggtgcgt atttatcaca aacactgacg 1200 gttccttttt atccacaaaa agcatattta tctcaggtat ccccttttat tggatttgat 1260 atgggtaaag tacatattaa atcaaagcat aaaacaacca ctttagtcgg ttttgcccta 1320 ggcttgaaaa cgcaaataaa gttattttca ttatcattaa cctatgcaca accaatgaat 1380 ggtgtgagtg gtgttacgca acatcgtcaa aaaccgattt attatttctc aggatcactt 1440 tctttttaat ctcttttaag tttaaggatt aacttaat atg aac aaa aat cgt tac 1496 Met Asn Lys Asn Arg Tyr 1 5 aaa ctc att ttt agt caa gtc aaa ggt tgt ctc gtt cct gtg gca gaa 1544 Lys Leu Ile Phe Ser Gln Val Lys Gly Cys Leu Val Pro Val Ala Glu 10 15 20 tgt att aac tca gct att agc aat ggt tca tct gat tca aca tcc aca 1592 Cys Ile Asn Ser Ala Ile Ser Asn Gly Ser Ser Asp Ser Thr Ser Thr 25 30 35 tca gaa caa gtt gaa gag gaa cct ttc ctt cta gaa caa tat tca ctt 1640 Ser Glu Gln Val Glu Glu Glu Pro Phe Leu Leu Glu Gln Tyr Ser Leu 40 45 50 tcc tcc gtg tct tta tta gta aaa agc acg ttc aat cct gtt tcg tat 1688 Ser Ser Val Ser Leu Leu Val Lys Ser Thr Phe Asn Pro Val Ser Tyr 55 60 65 70 gca atg caa ttg act tgg aaa cag ctt tct att tta ttt tta act gtg 1736 Ala Met Gln Leu Thr Trp Lys Gln Leu Ser Ile Leu Phe Leu Thr Val 75 80 85 att tct gtt cct gtt ttg gct gag gga aaa ggg gat gaa aga aat caa 1784 Ile Ser Val Pro Val Leu Ala Glu Gly Lys Gly Asp Glu Arg Asn Gln 90 95 100 tta aca gtg att gat aat agc gat cat att aaa tta gat gca tct aat 1832 Leu Thr Val Ile Asp Asn Ser Asp His Ile Lys Leu Asp Ala Ser Asn 105 110 115 ctt gct ggt aat gat aaa aca aaa atc tat caa gca gaa aat aaa gtt 1880 Leu Ala Gly Asn Asp Lys Thr Lys Ile Tyr Gln Ala Glu Asn Lys Val 120 125 130 ctg gtt att gat att gct aaa cca aat ggg aaa ggg att tca gat aac 1928 Leu Val Ile Asp Ile Ala Lys Pro Asn Gly Lys Gly Ile Ser Asp Asn 135 140 145 150 cgt ttt gaa aaa ttt aat att cca aat agc gcg gtg ttt aat aat aat 1976 Arg Phe Glu Lys Phe Asn Ile Pro Asn Ser Ala Val Phe Asn Asn Asn 155 160 165 ggg act gaa gcg cag gca aga tca aca tta att ggt tac att ccg caa 2024 Gly Thr Glu Ala Gln Ala Arg Ser Thr Leu Ile Gly Tyr Ile Pro Gln 170 175 180 aat caa aat tta agg gga ggg aaa gaa gct gat gtt ata tta aat caa 2072 Asn Gln Asn Leu Arg Gly Gly Lys Glu Ala Asp Val Ile Leu Asn Gln 185 190 195 gtg aca ggt cct caa gaa agt aaa att gtt ggc gcg ctt gaa gta tta 2120 Val Thr Gly Pro Gln Glu Ser Lys Ile Val Gly Ala Leu Glu Val Leu 200 205 210 ggt aaa aaa gct gat atc gtc att gca aac caa aat ggt att acc tta 2168 Gly Lys Lys Ala Asp Ile Val Ile Ala Asn Gln Asn Gly Ile Thr Leu 215 220 225 230 aat ggt gta aga aca ata aat tca gat cgt ttt gtt gcc act acg agt 2216 Asn Gly Val Arg Thr Ile Asn Ser Asp Arg Phe Val Ala Thr Thr Ser 235 240 245 gag ctt ata gat ccg aat cag atg atg tta aag gtt aca aaa gga aat 2264 Glu Leu Ile Asp Pro Asn Gln Met Met Leu Lys Val Thr Lys Gly Asn 250 255 260 gtg atc att gat att gat ggt ttt tcg aca gat gga tta aag tat tta 2312 Val Ile Ile Asp Ile Asp Gly Phe Ser Thr Asp Gly Leu Lys Tyr Leu 265 270 275 gat att att gct aaa aaa att gaa caa aag caa tca att aca tca ggg 2360 Asp Ile Ile Ala Lys Lys Ile Glu Gln Lys Gln Ser Ile Thr Ser Gly 280 285 290 gat aat tca gaa gca aaa aca gat gtc act ctt att gcg ggt tcc agt 2408 Asp Asn Ser Glu Ala Lys Thr Asp Val Thr Leu Ile Ala Gly Ser Ser 295 300 305 310 gaa tat gat tta agc aaa cat gag ctg aaa aaa acg agc ggt gaa aat 2456 Glu Tyr Asp Leu Ser Lys His Glu Leu Lys Lys Thr Ser Gly Glu Asn 315 320 325 gta tct aat gat gtt att gct atc acg gga tct agt aca ggc gca atg 2504 Val Ser Asn Asp Val Ile Ala Ile Thr Gly Ser Ser Thr Gly Ala Met 330 335 340 cat ggt aaa aat att aag ttg att gtg aca gat aaa ggt gca ggc gta 2552 His Gly Lys Asn Ile Lys Leu Ile Val Thr Asp Lys Gly Ala Gly Val 345 350 355 aaa cat gat gga att att ttg tct gaa aat gat att cag att gaa atg 2600 Lys His Asp Gly Ile Ile Leu Ser Glu Asn Asp Ile Gln Ile Glu Met 360 365 370 aat gaa ggt gac tta gaa ctt ggc aat acg att cag caa aca gtg gta 2648 Asn Glu Gly Asp Leu Glu Leu Gly Asn Thr Ile Gln Gln Thr Val Val 375 380 385 390 aaa aaa gac cga aat att cga gcc aag aaa aaa att gaa gtg aaa aac 2696 Lys Lys Asp Arg Asn Ile Arg Ala Lys Lys Lys Ile Glu Val Lys Asn 395 400 405 gct aat cgt gtt ttt gtt ggt agt caa acg aaa tca gat gaa att tcg 2744 Ala Asn Arg Val Phe Val Gly Ser Gln Thr Lys Ser Asp Glu Ile Ser 410 415 420 tta gag gcg aaa caa gtt aaa atc aga aaa aac gca gag att agg agt 2792 Leu Glu Ala Lys Gln Val Lys Ile Arg Lys Asn Ala Glu Ile Arg Ser 425 430 435 acg aca caa gcc aaa atc gta gca aag ggt gcc ctg tct att gag caa 2840 Thr Thr Gln Ala Lys Ile Val Ala Lys Gly Ala Leu Ser Ile Glu Gln 440 445 450 aat gcg aag ctc gtc gct aaa aag ata gat gtg gca aca gaa act cta 2888 Asn Ala Lys Leu Val Ala Lys Lys Ile Asp Val Ala Thr Glu Thr Leu 455 460 465 470 act aat gct ggg cgt att tat ggt cga gag gtt aag ctt gac act aat 2936 Thr Asn Ala Gly Arg Ile Tyr Gly Arg Glu Val Lys Leu Asp Thr Asn 475 480 485 aat ttg att aat gat aaa gaa att tat gct gaa cgg aaa ttg agt att 2984 Asn Leu Ile Asn Asp Lys Glu Ile Tyr Ala Glu Arg Lys Leu Ser Ile 490 495 500 ttg acg aaa gga aaa gat ctt gaa att att caa gat aga tat ttg tct 3032 Leu Thr Lys Gly Lys Asp Leu Glu Ile Ile Gln Asp Arg Tyr Leu Ser 505 510 515 cca ctg atg cgc gta aaa agt agt gtc cgc ttt tta ggc tct ccg ttt 3080 Pro Leu Met Arg Val Lys Ser Ser Val Arg Phe Leu Gly Ser Pro Phe 520 525 530 ttc tca ata tct ccg tcg atg ctc gca agc ctt agt gca cag ttt aag 3128 Phe Ser Ile Ser Pro Ser Met Leu Ala Ser Leu Ser Ala Gln Phe Lys 535 540 545 550 cct ggt ttt gtg aat aag gga ctc att gaa agt gcg ggg agt gca gaa 3176 Pro Gly Phe Val Asn Lys Gly Leu Ile Glu Ser Ala Gly Ser Ala Glu 555 560 565 tta act ttt aaa gaa aaa acc agt ttt tta aca gag ggc aat aat ttt 3224 Leu Thr Phe Lys Glu Lys Thr Ser Phe Leu Thr Glu Gly Asn Asn Phe 570 575 580 att aga gct aaa gat gcg tta ac 3247 Ile Arg Ala Lys Asp Ala Leu 585 <210> 18 <211> 589 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 18 Met Asn Lys Asn Arg Tyr Lys Leu Ile Phe Ser Gln Val Lys Gly Cys 1 5 10 15 Leu Val Pro Val Ala Glu Cys Ile Asn Ser Ala Ile Ser Asn Gly Ser 20 25 30 Ser Asp Ser Thr Ser Thr Ser Glu Gln Val Glu Glu Glu Pro Phe Leu 35 40 45 Leu Glu Gln Tyr Ser Leu Ser Ser Val Ser Leu Leu Val Lys Ser Thr 50 55 60 Phe Asn Pro Val Ser Tyr Ala Met Gln Leu Thr Trp Lys Gln Leu Ser 65 70 75 80 Ile Leu Phe Leu Thr Val Ile Ser Val Pro Val Leu Ala Glu Gly Lys 85 90 95 Gly Asp Glu Arg Asn Gln Leu Thr Val Ile Asp Asn Ser Asp His Ile 100 105 110 Lys Leu Asp Ala Ser Asn Leu Ala Gly Asn Asp Lys Thr Lys Ile Tyr 115 120 125 Gln Ala Glu Asn Lys Val Leu Val Ile Asp Ile Ala Lys Pro Asn Gly 130 135 140 Lys Gly Ile Ser 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Gly Val Lys His Asp Gly Ile Ile Leu Ser Glu Asn 355 360 365 Asp Ile Gln Ile Glu Met Asn Glu Gly Asp Leu Glu Leu Gly Asn Thr 370 375 380 Ile Gln Gln Thr Val Val Lys Lys Asp Arg Asn Ile Arg Ala Lys Lys 385 390 395 400 Lys Ile Glu Val Lys Asn Ala Asn Arg Val Phe Val Gly Ser Gln Thr 405 410 415 Lys Ser Asp Glu Ile Ser Leu Glu Ala Lys Gln Val Lys Ile Arg Lys 420 425 430 Asn Ala Glu Ile Arg Ser Thr Thr Gln Ala Lys Ile Val Ala Lys Gly 435 440 445 Ala Leu Ser Ile Glu Gln Asn Ala Lys Leu Val Ala Lys Lys Ile Asp 450 455 460 Val Ala Thr Glu Thr Leu Thr Asn Ala Gly Arg Ile Tyr Gly Arg Glu 465 470 475 480 Val Lys Leu Asp Thr Asn Asn Leu Ile Asn Asp Lys Glu Ile Tyr Ala 485 490 495 Glu Arg Lys Leu Ser Ile Leu Thr Lys Gly Lys Asp Leu Glu Ile Ile 500 505 510 Gln Asp Arg Tyr Leu Ser Pro Leu Met Arg Val Lys Ser Ser Val Arg 515 520 525 Phe Leu Gly Ser Pro Phe Phe Ser Ile Ser Pro Ser Met Leu Ala Ser 530 535 540 Leu Ser Ala Gln Phe Lys Pro Gly Phe Val Asn Lys Gly Leu Ile Glu 545 550 555 560 Ser Ala Gly Ser Ala Glu Leu Thr Phe Lys Glu Lys Thr Ser Phe Leu 565 570 575 Thr Glu Gly Asn Asn Phe Ile Arg Ala Lys Asp Ala Leu 580 585 <210> 19 <211> 3247 <212> DNA <213> Pasteurella multocida <220> <221> CDS <222> (1)..(1446) <220> <223> fhaC <400> 19 gtc gac ctt gcg ggt gaa aag gta tct cta aat ttt ggc gat atc att 48 Val Asp Leu Ala Gly Glu Lys Val Ser Leu Asn Phe Gly Asp Ile Ile 1 5 10 15 cat gct tac caa aac cag ccc cta tca aca aaa gtt gtt ttt caa tta 96 His Ala Tyr Gln Asn Gln Pro Leu Ser Thr Lys Val Val Phe Gln Leu 20 25 30 gtg aaa gat ttg acg gaa gtt tta tac cgt tct ggc tac gtg aca agt 144 Val Lys Asp Leu Thr Glu Val Leu Tyr Arg Ser Gly Tyr Val Thr Ser 35 40 45 gca att ggt tta aaa aat tca aaa atc agc aat ggc gat ctt gaa ttt 192 Ala Ile Gly Leu Lys Asn Ser Lys Ile Ser Asn Gly Asp Leu Glu Phe 50 55 60 att gta ctg tgg gga aga act cgc gat ctg ttt gtg aat ggg gag aaa 240 Ile Val Leu Trp Gly Arg Thr Arg Asp Leu Phe Val Asn Gly Glu Lys 65 70 75 80 cca acc cgt ttt aga gat aaa aca atg tta tca gtc cta ccc 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tct tac agt cag 624 Asn His His Ala Asn Gln Gln Arg Asn Tyr Thr Leu Ser Tyr Ser Gln 195 200 205 cct ata ggc ttt tct aca gta gaa att aaa gca tcg gaa tct acg tat 672 Pro Ile Gly Phe Ser Thr Val Glu Ile Lys Ala Ser Glu Ser Thr Tyr 210 215 220 gaa aaa gaa ctt cgc ggt ata aat act cat tct tct cat ggg aaa acc 720 Glu Lys Glu Leu Arg Gly Ile Asn Thr His Ser Ser His Gly Lys Thr 225 230 235 240 caa agc tta gct gtc aag ctg atg cat gtg tta ttg cgt aat aag gag 768 Gln Ser Leu Ala Val Lys Leu Met His Val Leu Leu Arg Asn Lys Glu 245 250 255 agt att tta tct aca tat acc gag ttc gag ttt aaa aaa cgg att agt 816 Ser Ile Leu Ser Thr Tyr Thr Glu Phe Glu Phe Lys Lys Arg Ile Ser 260 265 270 tat ttt tct gat att ttg att ggg aaa tat cac aat aat aaa gtg agc 864 Tyr Phe Ser Asp Ile Leu Ile Gly Lys Tyr His Asn Asn Lys Val Ser 275 280 285 gta ggg tta tct tac atg act aat ttt gct tac ggg aag ctt tac agc 912 Val Gly Leu Ser Tyr Met Thr Asn Phe Ala Tyr Gly Lys Leu Tyr Ser 290 295 300 gac att gct tac gcg aat ggg ttg aga tgg ttt ggg gcg aat tat tca 960 Asp Ile Ala Tyr Ala Asn Gly Leu Arg Trp Phe Gly Ala Asn Tyr Ser 305 310 315 320 gca tat gat gca aat cgt gaa aaa acc tta aaa tta ttg tca gga agt 1008 Ala Tyr Asp Ala Asn Arg Glu Lys Thr Leu Lys Leu Leu Ser Gly Ser 325 330 335 att aat tgg cag cgt cca ata tcc ctg ttt gaa cgt gcg atg aat tat 1056 Ile Asn Trp Gln Arg Pro Ile Ser Leu Phe Glu Arg Ala Met Asn Tyr 340 345 350 caa tta cgt att ggt gcc caa tat ggt ttt gat agt ttg tat tct gaa 1104 Gln Leu Arg Ile Gly Ala Gln Tyr Gly Phe Asp Ser Leu Tyr Ser Glu 355 360 365 aat caa ttt tca att ggt gat gaa tat aca gta aga gga ttt aaa ggt 1152 Asn Gln Phe Ser Ile Gly Asp Glu Tyr Thr Val Arg Gly Phe Lys Gly 370 375 380 ggt gcg gtt tct ggt gat agt ggt gcg tat tta tca caa aca ctg acg 1200 Gly Ala Val Ser Gly Asp Ser Gly Ala Tyr Leu Ser Gln Thr Leu Thr 385 390 395 400 gtt cct ttt tat cca caa aaa gca tat tta tct cag gta tcc cct ttt 1248 Val Pro Phe Tyr Pro Gln Lys Ala Tyr Leu Ser Gln Val Ser Pro Phe 405 410 415 att gga ttt gat atg ggt aaa gta cat att aaa tca aag cat aaa aca 1296 Ile Gly Phe Asp Met Gly Lys Val His Ile Lys Ser Lys His Lys Thr 420 425 430 acc act tta gtc ggt ttt gcc cta ggc ttg aaa acg caa ata aag tta 1344 Thr Thr Leu Val Gly Phe Ala Leu Gly Leu Lys Thr Gln Ile Lys Leu 435 440 445 ttt tca tta tca tta acc tat gca caa cca atg aat ggt gtg agt ggt 1392 Phe Ser Leu Ser Leu Thr Tyr Ala Gln Pro Met Asn Gly Val Ser Gly 450 455 460 gtt acg caa cat cgt caa aaa ccg att tat tat ttc tca gga tca ctt 1440 Val Thr Gln His Arg Gln Lys Pro Ile Tyr Tyr Phe Ser Gly Ser Leu 465 470 475 480 tct ttt taatctcttt taagtttaag gattaactta atatgaacaa aaatcgttac 1496 Ser Phe aaactcattt ttagtcaagt caaaggttgt ctcgttcctg tggcagaatg tattaactca 1556 gctattagca atggttcatc tgattcaaca tccacatcag aacaagttga agaggaacct 1616 ttccttctag aacaatattc actttcctcc gtgtctttat tagtaaaaag cacgttcaat 1676 cctgtttcgt atgcaatgca attgacttgg aaacagcttt ctattttatt tttaactgtg 1736 atttctgttc ctgttttggc tgagggaaaa ggggatgaaa gaaatcaatt aacagtgatt 1796 gataatagcg atcatattaa attagatgca tctaatcttg ctggtaatga taaaacaaaa 1856 atctatcaag cagaaaataa agttctggtt attgatattg ctaaaccaaa tgggaaaggg 1916 atttcagata accgttttga aaaatttaat attccaaata gcgcggtgtt taataataat 1976 gggactgaag cgcaggcaag atcaacatta attggttaca ttccgcaaaa tcaaaattta 2036 aggggaggga aagaagctga tgttatatta aatcaagtga caggtcctca agaaagtaaa 2096 attgttggcg cgcttgaagt attaggtaaa aaagctgata tcgtcattgc aaaccaaaat 2156 ggtattacct taaatggtgt aagaacaata aattcagatc gttttgttgc cactacgagt 2216 gagcttatag atccgaatca gatgatgtta aaggttacaa aaggaaatgt gatcattgat 2276 attgatggtt tttcgacaga tggattaaag tatttagata ttattgctaa aaaaattgaa 2336 caaaagcaat caattacatc aggggataat tcagaagcaa aaacagatgt cactcttatt 2396 gcgggttcca gtgaatatga tttaagcaaa catgagctga aaaaaacgag cggtgaaaat 2456 gtatctaatg atgttattgc tatcacggga tctagtacag gcgcaatgca tggtaaaaat 2516 attaagttga ttgtgacaga taaaggtgca ggcgtaaaac atgatggaat tattttgtct 2576 gaaaatgata ttcagattga aatgaatgaa ggtgacttag aacttggcaa tacgattcag 2636 caaacagtgg taaaaaaaga ccgaaatatt cgagccaaga aaaaaattga agtgaaaaac 2696 gctaatcgtg tttttgttgg tagtcaaacg aaatcagatg aaatttcgtt agaggcgaaa 2756 caagttaaaa tcagaaaaaa cgcagagatt aggagtacga cacaagccaa aatcgtagca 2816 aagggtgccc tgtctattga gcaaaatgcg aagctcgtcg ctaaaaagat agatgtggca 2876 acagaaactc taactaatgc tgggcgtatt tatggtcgag aggttaagct tgacactaat 2936 aatttgatta atgataaaga aatttatgct gaacggaaat tgagtatttt gacgaaagga 2996 aaagatcttg aaattattca agatagatat ttgtctccac tgatgcgcgt aaaaagtagt 3056 gtccgctttt taggctctcc gtttttctca atatctccgt cgatgctcgc aagccttagt 3116 gcacagttta agcctggttt tgtgaataag ggactcattg aaagtgcggg gagtgcagaa 3176 ttaactttta aagaaaaaac cagtttttta acagagggca ataattttat tagagctaaa 3236 gatgcgttaa c 3247 <210> 20 <211> 482 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 20 Val Asp Leu Ala Gly Glu Lys Val Ser Leu Asn Phe Gly Asp Ile Ile 1 5 10 15 His Ala Tyr Gln Asn Gln Pro Leu Ser Thr Lys Val Val Phe Gln Leu 20 25 30 Val Lys Asp Leu Thr Glu Val Leu Tyr Arg Ser Gly Tyr Val Thr 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1 5 act ata cgt ggt gcg gaa caa tta aga caa gaa ctc gat ttt ttg aaa 704 Thr Ile Arg Gly Ala Glu Gln Leu Arg Gln Glu Leu Asp Phe Leu Lys 10 15 20 aac act cgt cgc cca gaa att att aat gct atc gca gaa gct cgt gaa 752 Asn Thr Arg Arg Pro Glu Ile Ile Asn Ala Ile Ala Glu Ala Arg Glu 25 30 35 cat ggc gat cta aaa gaa aat gca gaa tac cat gct gcg cgt gaa cag 800 His Gly Asp Leu Lys Glu Asn Ala Glu Tyr His Ala Ala Arg Glu Gln 40 45 50 caa gga ttt tgt gaa gga cga atc caa gaa att gaa ggg aaa tta gcg 848 Gln Gly Phe Cys Glu Gly Arg Ile Gln Glu Ile Glu Gly Lys Leu Ala 55 60 65 70 aat agt caa att att gat gtc aca aag atc cca aat aat ggc aaa gtg 896 Asn Ser Gln Ile Ile Asp Val Thr Lys Ile Pro Asn Asn Gly Lys Val 75 80 85 att ttt ggt gcc aca att ttg tta ctg aat att gac acg gaa gaa gaa 944 Ile Phe Gly Ala Thr Ile Leu Leu Leu Asn Ile Asp Thr Glu Glu Glu 90 95 100 gtc tcg tac caa att gta ggc gat gat gaa gcc aat att aaa gca ggg 992 Val Ser Tyr Gln Ile Val Gly Asp Asp Glu Ala Asn Ile Lys Ala Gly 105 110 115 cta att tca gtt aac gcc acg cga ttg aat tagagaaagc taaatggatt 1042 Leu Ile Ser Val Asn Ala Thr Arg Leu Asn 120 125 gcccaagatc ttggcgtcaa acaaacgtta attgacactt ccgtcattaa agcgattacg 1102 caaaatgcct taatggacga acaggcaaga attgagcaac atggcagtac accgaatact 1162 ttcgttga 1170 <210> 22 <211> 128 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 22 Met Lys Gln Ile Pro Met Thr Ile Arg Gly Ala Glu Gln Leu Arg Gln 1 5 10 15 Glu Leu Asp Phe Leu Lys Asn Thr Arg Arg Pro Glu Ile Ile Asn Ala 20 25 30 Ile Ala Glu Ala Arg Glu His Gly Asp Leu Lys Glu Asn Ala Glu Tyr 35 40 45 His Ala Ala Arg Glu Gln Gln Gly Phe Cys Glu Gly Arg Ile Gln Glu 50 55 60 Ile Glu Gly Lys Leu Ala Asn Ser Gln Ile Ile Asp Val Thr Lys Ile 65 70 75 80 Pro Asn Asn Gly Lys Val Ile Phe Gly Ala Thr Ile Leu Leu Leu Asn 85 90 95 Ile Asp Thr Glu Glu Glu Val Ser Tyr Gln Ile Val Gly Asp Asp Glu 100 105 110 Ala Asn Ile Lys Ala Gly Leu Ile Ser Val Asn Ala Thr Arg Leu Asn 115 120 125 <210> 23 <211> 4666 <212> DNA <213> Pasteurella multocida <220> <221> CDS <222> (980)..(2440) <220> <223> guaB <400> 23 aacacatgaa cctcttcccc aaaatacgca tccatatctc gccaatcttg gcgaaatgct 60 tcatcaattc ctgcttgttc aaaatgttgt aaacgtgcaa tcaacttttt acctaattct 120 gcgatcaatt tattccgatc aatcgttggt aatacttcaa tcagctctgc ccaaggttga 180 tcaatttgct gtgtttgttt tgggaaagac aaattaatgc caaagccaat cacgagatta 240 tgttgattat tctgacgatt ggcgatttcg accaaaatcc ctgctaattt gcgcccatgt 300 aatagcacat catttggcca ttttaatcca atgttcaaag cacctgcttg ctttagcgtt 360 tctgcgattg ccatacccac tactaaactc aagccttcta aattgacctt ttggtcacat 420 gcccaataca aactcataat cacttgtcca gcaaaaggag aaagccattg acgaccacgt 480 cgtccacgtc ccgcagtttg atattctgct aagcaaatag cgcctttttc caaatgtgca 540 atattgtcaa gcaagaattg attggtcgag ttaataatcg gcttaatata aagtgggtaa 600 ggtgctaacg cttgcgtcaa ataagattca tttaagcgac ttaattgagg tatgagacga 660 aaatgttgga cttgctgttc tatttgtatc ccttgttgtt tcaatttttc gatattgtgt 720 aagatatctt gttctgaata acctaaaagt gcagtcaatt ctgctaaaga aagttgttga 780 tagctagcga gtaatgcaag tacgttttgc ataaaaatcc ttatttatat aaccaaagag 840 aggcaactta ttatagacaa tgattttctc gaaaatcgat aaaaaaatcc attttcaaac 900 agcaacgaaa tctgtataat gcgaccgcaa tattttttac ccttttattt ttcatatcaa 960 cctaagagag aatattgca atg tta cga gta ata aaa gaa gca tta acc ttc 1012 Met Leu Arg Val Ile Lys Glu Ala Leu Thr Phe 1 5 10 gat gat gtt ttg ctt gtc cca gca cat tct act gtg ctc cca aat acc 1060 Asp Asp Val Leu Leu Val Pro Ala His Ser Thr Val Leu Pro Asn Thr 15 20 25 gca gac ctt tcc act caa ctc acc aaa act atc cgc ctc aat atc cca 1108 Ala Asp Leu Ser Thr Gln Leu Thr Lys Thr Ile Arg Leu Asn Ile Pro 30 35 40 atg tta tcc gcc gcc atg gat acc gtg aca gaa act aaa ctg gca atc 1156 Met Leu Ser Ala Ala Met Asp Thr Val Thr Glu Thr Lys Leu Ala Ile 45 50 55 tct ctt gca caa gaa ggt ggc atc ggg ttt att cat aaa aat atg tct 1204 Ser Leu Ala Gln Glu Gly Gly Ile Gly Phe Ile His Lys Asn Met Ser 60 65 70 75 att gag cgt caa gcg gaa cgt gtc cgc aaa gtg aaa aaa ttt gag agc 1252 Ile Glu Arg Gln Ala Glu Arg Val Arg Lys Val Lys Lys Phe Glu Ser 80 85 90 ggt att gta tcc gat cct gtc acc gtt tca cca acc tta tct tta gca 1300 Gly Ile Val Ser Asp Pro Val Thr Val Ser Pro Thr Leu Ser Leu Ala 95 100 105 gaa tta agt gaa tta gtg aag aaa aat ggt ttt gcg agt ttc cct gtt 1348 Glu Leu Ser Glu Leu Val Lys Lys Asn Gly Phe Ala Ser Phe Pro Val 110 115 120 gtt gat gat gaa aaa aat ctt gtc ggt atc att act ggt cgt gat aca 1396 Val Asp Asp Glu Lys Asn Leu Val Gly Ile Ile Thr Gly Arg Asp Thr 125 130 135 cgc ttt gtc acg gat tta aat aaa aca gtg gcg gac ttt atg acc cct 1444 Arg Phe Val Thr Asp Leu Asn Lys Thr Val Ala Asp Phe Met Thr Pro 140 145 150 155 aaa gct cgt ctt gtc acg gtg aaa cgc aat gca agt cgc gat gaa att 1492 Lys Ala Arg Leu Val Thr Val Lys Arg Asn Ala Ser Arg Asp Glu Ile 160 165 170 ttt ggt cta atg cat aca cac cgt gta gaa aaa gtc ctt gtt gtc agc 1540 Phe Gly Leu Met His Thr His Arg Val Glu Lys Val Leu Val Val Ser 175 180 185 gac gat ttc aaa tta aaa ggc atg atc acc tta aaa gac tac caa aaa 1588 Asp Asp Phe Lys Leu Lys Gly Met Ile Thr Leu Lys Asp Tyr Gln Lys 190 195 200 tcc gag caa aaa cca caa gcc tgt aaa gat gaa ttt ggt cgt tta cgt 1636 Ser Glu Gln Lys Pro Gln Ala Cys Lys Asp Glu Phe Gly Arg Leu Arg 205 210 215 gtc ggt gct gca gta gga gca gga cct ggt aat gaa gaa cgt att gat 1684 Val Gly Ala Ala Val Gly Ala Gly Pro Gly Asn Glu Glu Arg Ile Asp 220 225 230 235 gca tta gtg aaa gca ggg gtc gat gtg tta ttg att gac tca tca cac 1732 Ala Leu Val Lys Ala Gly Val Asp Val Leu Leu Ile Asp Ser Ser His 240 245 250 ggt cat tca gaa ggt gtg tta caa cgt gtg cgt gaa act cgt gcg aaa 1780 Gly His Ser Glu Gly Val Leu Gln Arg Val Arg Glu Thr Arg Ala Lys 255 260 265 tac cca gat ttg cca att gtt gca ggt aat gtg gca acc gct gaa ggc 1828 Tyr Pro Asp Leu Pro Ile Val Ala Gly Asn Val Ala Thr Ala Glu Gly 270 275 280 gca att gcg ttg gct gat gca ggg gca agt gca gtg aaa gtg ggg att 1876 Ala Ile Ala Leu Ala Asp Ala Gly Ala Ser Ala Val Lys Val Gly Ile 285 290 295 ggt cct ggt tca att tgt aca aca cgt att gtc aca ggc gtg ggc gtt 1924 Gly Pro Gly Ser Ile Cys Thr Thr Arg Ile Val Thr Gly Val Gly Val 300 305 310 315 cca caa att aca gcg att gcc gat gcg gca gaa gca cta aaa gat cgg 1972 Pro Gln Ile Thr Ala Ile Ala Asp Ala Ala Glu Ala Leu Lys Asp Arg 320 325 330 ggt att cct gtg att gca gat ggc ggt atc cgt ttc tct ggt gat att 2020 Gly Ile Pro Val Ile Ala Asp Gly Gly Ile Arg Phe Ser Gly Asp Ile 335 340 345 tcg aaa gcc att gcg gcg ggc gcc tct tgt gtt atg gtg ggt tcc atg 2068 Ser Lys Ala Ile Ala Ala Gly Ala Ser Cys Val Met Val Gly Ser Met 350 355 360 ttt gca ggt aca gaa gaa gca cca ggt gaa atc gaa ctt tat caa ggt 2116 Phe Ala Gly Thr Glu Glu Ala Pro Gly Glu Ile Glu Leu Tyr Gln Gly 365 370 375 cgt gcc ttt aaa tct tat cga ggt atg gga tcg tta ggt gcg atg agc 2164 Arg Ala Phe Lys Ser Tyr Arg Gly Met Gly Ser Leu Gly Ala Met Ser 380 385 390 395 aaa ggc tca agc gac cgc tat ttc cag tcc gat aat gca gct gac aaa 2212 Lys Gly Ser Ser Asp Arg Tyr Phe Gln Ser Asp Asn Ala Ala Asp Lys 400 405 410 tta gta cca gaa ggt att gaa gga cgt att cca tat aaa gga ttc tta 2260 Leu Val Pro Glu Gly Ile Glu Gly Arg Ile Pro Tyr Lys Gly Phe Leu 415 420 425 aaa gaa att atc cat caa caa atg ggt gga ttg cgt tct tgt atg ggc 2308 Lys Glu Ile Ile His Gln Gln Met Gly Gly Leu Arg Ser Cys Met Gly 430 435 440 tta acg ggt tgt gca acc att gat gaa ctc cgt acc aaa gcg cag ttt 2356 Leu Thr Gly Cys Ala Thr Ile Asp Glu Leu Arg Thr Lys Ala Gln Phe 445 450 455 gtg cgc att agt ggt gca ggg atc caa gaa agc cat gtg cat gat gtg 2404 Val Arg Ile Ser Gly Ala Gly Ile Gln Glu Ser His Val His Asp Val 460 465 470 475 act atc aca aaa gaa gcc cct aat tat cgt atg ggt taaacattgc 2450 Thr Ile Thr Lys Glu Ala Pro Asn Tyr Arg Met Gly 480 485 ttaggtgggg attatcccca cctaagttta ttttaaataa caacgttaat agagaagctt 2510 atttttatgt atggcattaa aattaaaaat gttattaaac tttttctatt aaagttttta 2570 agaaataaat atcgatataa aatcaatatt caacatcatc tcattagtat tgaaggaaaa 2630 tgcggtgagt ttgatttaag ccagctaaac tatgtttatt tggtgaaaga tcctgagata 2690 agaaataatc gactgacact gtacttgaat gattttttca aaattggggt aaattatcat 2750 ggatttactc 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gcg aag aaa aag aaa aaa tta caa caa gcg aaa aaa 229 Met Ala Lys Lys Lys Lys Lys Leu Gln Gln Ala Lys Lys 1 5 10 gta caa gtt ggc tta gat aca caa aca aat gag gcg cgt gtc acg gag 277 Val Gln Val Gly Leu Asp Thr Gln Thr Asn Glu Ala Arg Val Thr Glu 15 20 25 aca gga aga att att tct gat cac cca agc aat aaa att acc ccc gca 325 Thr Gly Arg Ile Ile Ser Asp His Pro Ser Asn Lys Ile Thr Pro Ala 30 35 40 45 aag tta aaa ggg att tta gaa gat gct gaa ggt ggt gat att acc gcg 373 Lys Leu Lys Gly Ile Leu Glu Asp Ala Glu Gly Gly Asp Ile Thr Ala 50 55 60 caa cat gag ctt ttc atg gat att gaa gaa cgc gac agt tgc atc ggg 421 Gln His Glu Leu Phe Met Asp Ile Glu Glu Arg Asp Ser Cys Ile Gly 65 70 75 gca aat att caa acc cgt aag cgt gcg att tta acc ctt gac tgg cgc 469 Ala Asn Ile Gln Thr Arg Lys Arg Ala Ile Leu Thr Leu Asp Trp Arg 80 85 90 att gca gag cca cgt aat gcc aca ccg caa gaa gaa aaa ctg caa gtc 517 Ile Ala Glu Pro Arg Asn Ala Thr Pro Gln Glu Glu Lys Leu Gln Val 95 100 105 gaa att gac gag ctt ttc tat caa ttc cca atg cta gaa gat tta atg 565 Glu Ile Asp Glu Leu Phe Tyr Gln Phe Pro Met Leu Glu Asp Leu Met 110 115 120 125 gtg gat atg atg gat gcg gta gga cat ggt ttt tcg gcg tta gaa att 613 Val Asp Met Met Asp Ala Val Gly His Gly Phe Ser Ala Leu Glu Ile 130 135 140 gaa tgg aag caa gct gaa agt aaa tgg att cca gtt aat ttt atc gca 661 Glu Trp Lys Gln Ala Glu Ser Lys Trp Ile Pro Val Asn Phe Ile Ala 145 150 155 cgt ccg cag tcg tgg ttt aaa cta gac aag gat gat aat tta ctg ctt 709 Arg Pro Gln Ser Trp Phe Lys Leu Asp Lys Asp Asp Asn Leu Leu Leu 160 165 170 aaa acg cca gat aat caa gac ggt gag ccg ttg aga caa tat ggc tgg 757 Lys Thr Pro Asp Asn Gln Asp Gly Glu Pro Leu Arg Gln Tyr Gly Trp 175 180 185 gta gtg cat acc cac aaa tca aga aca gta cag ctt gct cgt atg ggt 805 Val Val His Thr His Lys Ser Arg Thr Val Gln Leu Ala Arg Met Gly 190 195 200 205 tta ttt aga acg ctc gca tgg ctt tat atg ttt aaa cac tac tcg gtg 853 Leu Phe Arg Thr Leu Ala Trp Leu Tyr Met Phe Lys His Tyr Ser Val 210 215 220 cat gat ttt gcc gaa 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Asn Asp Gln Thr Pro Tyr Leu 35 40 45 cgt tat ggt att gaa tat cga tat aac ggc ttg tct tgg ttg gaa acg 193 Arg Tyr Gly Ile Glu Tyr Arg Tyr Asn Gly Leu Ser Trp Leu Glu Thr 50 55 60 gta aag ctt ttt ttg gca aag cag aaa atc gaa caa cgt tct gct ctc 241 Val Lys Leu Phe Leu Ala Lys Gln Lys Ile Glu Gln Arg Ser Ala Leu 65 70 75 80 caa gag ttt gat att aat aat agg aat aaa ttg gat tcg act atg tcg 289 Gln Glu Phe Asp Ile Asn Asn Arg Asn Lys Leu Asp Ser Thr Met Ser 85 90 95 ttt gta tat tta caa aga cag aat ata gct cgg gga gaa ttt tca acg 337 Phe Val Tyr Leu Gln Arg Gln Asn Ile Ala Arg Gly Glu Phe Ser Thr 100 105 110 agt cct tta tat tgg ggg ccg agt cgc cat cgt tta tnt gcg aaa ttc 385 Ser Pro Leu Tyr Trp Gly Pro Ser Arg His Arg Leu Xaa Ala Lys Phe 115 120 125 gaa ttt cgt gat ang ttt tta gaa aat atg aat aag cnt ttt acg ttt 433 Glu Phe Arg Asp Xaa Phe Leu Glu Asn Met Asn Lys Xaa Phe Thr Phe 130 135 140 cgg ccg tgg caa atc aat ana ttc aga caa caa ggt cga aat aac tat 481 Arg Pro Trp Gln Ile Asn Xaa Phe Arg Gln Gln Gly Arg Asn Asn Tyr 145 150 155 160 aca gaa gtg ttt ccc gtt aaa tcc cga gag ttt tct ttt tct ctt atg 529 Thr Glu Val Phe Pro Val Lys Ser Arg Glu Phe Ser Phe Ser Leu Met 165 170 175 gac gac att aag att ggc gaa ttg cta cat ctc gga ttg ggc ggt cgg 577 Asp Asp Ile Lys Ile Gly Glu Leu Leu His Leu Gly Leu Gly Gly Arg 180 185 190 tgg gat cac tat aac tat aag cca tta tta aat tct cag cat aat atc 625 Trp Asp His Tyr Asn Tyr Lys Pro Leu Leu Asn Ser Gln His Asn Ile 195 200 205 aac agg aca cag aga tta cct tat cca aaa aca tca tcc aaa ttt tcg 673 Asn Arg Thr Gln Arg Leu Pro Tyr Pro Lys Thr Ser Ser Lys Phe Ser 210 215 220 tat caa ttg agt tta gag tat caa tta cat cca tca cat caa att gca 721 Tyr Gln Leu Ser Leu Glu Tyr Gln Leu His Pro Ser His Gln Ile Ala 225 230 235 240 tac cgt tta agt acc ggt ttt agg gtt ccc cgt gtt gaa gat ctt tat 769 Tyr Arg Leu Ser Thr Gly Phe Arg Val Pro Arg Val Glu Asp Leu Tyr 245 250 255 ttt gaa gac cga gga aaa agt tct tca caa ttt ctt cct aac ccc gat 817 Phe Glu Asp Arg Gly Lys Ser Ser Ser Gln Phe Leu Pro Asn Pro Asp 260 265 270 cta caa ccg gaa act gca ctg aat cat gaa ata agt tac cgt ttc caa 865 Leu Gln Pro Glu Thr Ala Leu Asn His Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln 275 280 285 aat caa tat gcc cat ttc agc gtc ggg ctt ttc cgt aca cgt tat cat 913 Asn Gln Tyr Ala His Phe Ser Val Gly Leu Phe Arg Thr Arg Tyr His 290 295 300 aac ttt att caa gaa cgt gag atg acc tgt gat aaa att cca tat gag 961 Asn Phe Ile Gln Glu Arg Glu Met Thr Cys Asp Lys Ile Pro Tyr Glu 305 310 315 320 tat aat agg act tat gga tat tgc acg cat aat act tat gta atg ttt 1009 Tyr Asn Arg Thr Tyr Gly Tyr Cys Thr His Asn Thr Tyr Val Met Phe 325 330 335 gtt aat gaa cct gaa gcc gtg att aaa ggg gtt gaa gta agc ggt gct 1057 Val Asn Glu Pro Glu Ala Val Ile Lys Gly Val Glu Val Ser Gly Ala 340 345 350 tta aat ggg tcg gca ttc gga ctt tcc gac ggt tta act ttc cgt ctc 1105 Leu Asn Gly Ser Ala Phe Gly Leu Ser Asp Gly Leu Thr Phe Arg Leu 355 360 365 aaa ggg agc tac agc aaa ggt caa aat cat gac ggc gat ccg tta aaa 1153 Lys Gly Ser Tyr Ser Lys Gly Gln Asn His Asp Gly Asp Pro Leu Lys 370 375 380 tct att caa cca tgg aca gtg gta acc ggt att gat tac gaa act gaa 1201 Ser Ile Gln Pro Trp Thr Val Val Thr Gly Ile Asp Tyr Glu Thr Glu 385 390 395 400 ggg tgg agc gtg agt ttg agc ggg cgt tat agt gcg gct aaa aaa gcc 1249 Gly Trp Ser Val Ser Leu Ser Gly Arg Tyr Ser Ala Ala Lys Lys Ala 405 410 415 aaa gat gcg ata gaa acg gaa tac aca cat gat aaa aag gtt gtc aaa 1297 Lys Asp Ala Ile Glu Thr Glu Tyr Thr His Asp Lys Lys Val Val Lys 420 425 430 caa tgg ccg cat tta agt cca tcc tac ttt gtt gtt gat ttt acg ggg 1345 Gln Trp Pro His Leu Ser Pro Ser Tyr Phe Val Val Asp Phe Thr Gly 435 440 445 caa gtt ga 1353 Gln Val 450 <210> 28 <211> 450 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <220> <221> misc_feature <222> 125 <223> Xaa = any or unknown amino acid <220> <221> misc_feature <222> 133 <223> Xaa = any or unknown amino acid <220> <221> misc_feature <222> 141 <223> Xaa = any or unknown amino acid <220> <221> misc_feature <222> 151 <223> 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Lys Asn Lys Arg Asn Thr Leu Met 370 375 380 tat cat aaa ggg gga gtc aag aag gca gac tat aat tat ggc tat ttt 2277 Tyr His Lys Gly Gly Val Lys Lys Ala Asp Tyr Asn Tyr Gly Tyr Phe 385 390 395 400 cag cct tat tat atg cct tct gga cgc cag tat aca caa gca ttt tat 2325 Gln Pro Tyr Tyr Met Pro Ser Gly Arg Gln Tyr Thr Gln Ala Phe Tyr 405 410 415 tta caa gat caa ata aaa tgg cag aat ttc ctc ttt aca gga ggg ata 2373 Leu Gln Asp Gln Ile Lys Trp Gln Asn Phe Leu Phe Thr Gly Gly Ile 420 425 430 aga tat gac cat atc aat aat ata ggg cag aaa aat tta gcg cca cga 2421 Arg Tyr Asp His Ile Asn Asn Ile Gly Gln Lys Asn Leu Ala Pro Arg 435 440 445 tat aat gat atc tct gca gga cat gat tat agc cag aaa aat tat aat 2469 Tyr Asn Asp Ile Ser Ala Gly His Asp Tyr Ser Gln Lys Asn Tyr Asn 450 455 460 ggt tgg tct tat tat tta ggt ctt aag tat gat gta aat cat tat tta 2517 Gly Trp Ser Tyr Tyr Leu Gly Leu Lys Tyr Asp Val Asn His Tyr Leu 465 470 475 480 agt tta ttt acg aat ttt agt aaa act tgg cga gcc cct gtt att gat 2565 Ser Leu Phe Thr Asn Phe Ser Lys Thr Trp Arg Ala Pro Val Ile Asp 485 490 495 gaa cag tat gag aca caa tat agt caa gct tct gta tct gcg act tct 2613 Glu Gln Tyr Glu Thr Gln Tyr Ser Gln Ala Ser Val Ser Ala Thr Ser 500 505 510 tta aat tta gaa aaa gaa atg att aat caa acc aga gtg ggt gga att 2661 Leu Asn Leu Glu Lys Glu Met Ile Asn Gln Thr Arg Val Gly Gly Ile 515 520 525 att act ctc aat cat cta ttt cag gaa aat gat gct ttt caa ttt aga 2709 Ile Thr Leu Asn His Leu Phe Gln Glu Asn Asp Ala Phe Gln Phe Arg 530 535 540 act act tat ttt tac aat cgc ggc aag aat gaa atc ttc aaa acg aga 2757 Thr Thr Tyr Phe Tyr Asn Arg Gly Lys Asn Glu Ile Phe Lys Thr Arg 545 550 555 560 ggg gtt aac cgt tagagttggt tgaaatgact gaaaaattag acctatacgt 2809 Gly Val Asn Arg tactgttaaa ggtggcggta tttctggtca agcgggtgca atccgtcacg gtatcactcg 2869 tgcattaatc gaatatgatg agagtttacg ctctgtatta cgcgcagctg gtttcgttac 2929 tcgcgatgca cgtcaagttg aacgtaaaaa agtgggttta cgcaaagcgc gtcgtcgtcc 2989 acaattctca aaacgttaat ttttctttta cgttttatat tcagattgca 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ttacttgtta 3889 agagcgtatt atgattggtt agtggataat gatttcaccc cttatttagt ggtggacgcg 3949 acttatgttg gtgtgaaagt ccctgtggaa tatgtcaaag atgggcaaat tgtcctcaat 4009 ttatctgcga atgcgacagg taatctggta ctaagcaatg aaagtattca gtttagcgcg 4069 cgttttcgtg gtatttcaca agatattttt attcctatgg gggctgcgtt agccatttat 4129 gctcgtgaaa atggtgatgg tgtactgttt gaacctgaag cgatttatga tgagctcgca 4189 acacaaaata ttggtattga gcagccactg agctttgttg aggctgtcga taaaccaaaa 4249 accagtgaga atactcaaaa aagcacaaac aaagacaaaa cgacggaaaa aaaagcgact 4309 tctcatttaa gaattattaa ataaaagagg ttttctttct tcataaaaaa acacgctttt 4369 acgcgtgttt ttttgttgcg gacagtttat tgtgccattt tttttgcggc ttttaagaag 4429 ccttgcgcac tcgtgtagat gtcactttta ttctgtgccg ctaaaatcat atccgacatt 4489 tcacgaaagg ccccttgtcc acctttcagg cttagtacgt gatcagcgtg cattttgata 4549 taagcggcgc atcttgtact gcaaaggcaa caccacagcg gcaaaagcag gcagatcaac 4609 gctgtcatca ccaatataag ccgtttcttg cgcacagaca ttggcttgtt gtatcaattc 4669 aagacaggcg ctttcttttt ccaatttgcc gaggaaaaag tgttggatgc 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Gly Phe Ala Gly Thr Val Lys Phe Glu Thr Lys Asp Ala Thr Asp Phe 145 150 155 160 Leu Lys Glu Asn Gln Lys Ile Gly Gly Leu Phe Lys Tyr Gly Asn Asn 165 170 175 Ser Asn Asn Asn Gln Lys Thr Tyr Ser Thr Ala Leu Val Leu Gln Asn 180 185 190 Glu Gln Lys Asn Ile Asp Leu Leu Leu Phe Gly Ser Val Arg Asn Ala 195 200 205 Ser Asn Tyr Thr Arg Pro Asp Lys Ser Lys Ile Leu Phe Ser Lys Asn 210 215 220 Asn Gln Lys Ser Gly Leu Ile Lys Val Asn Trp Gln Ile Thr Pro Glu 225 230 235 240 His Leu Leu Thr Leu Ser Ser Val Tyr Gly Ile His Lys Gly Trp Glu 245 250 255 Pro Trp Ala Ala Lys Arg Asp Val Met Ser Arg Pro Thr Glu Thr Glu 260 265 270 Ile Lys His Tyr Gly Ile Asp Val Ala Trp Lys Arg Lys Leu Val Tyr 275 280 285 Arg Asp Gln Lys Asp Glu Ser Tyr Ser Leu Lys Tyr Arg Tyr Leu Pro 290 295 300 Glu Asn Asn Lys Trp Ile Asn Leu Ser Val Gln Leu Ser Tyr Ser Lys 305 310 315 320 Thr Glu Gln Asn Asp Thr Arg His Glu Lys Val Thr Ser Ser Phe Leu 325 330 335 Gly Thr Leu Gly Asn Lys Ser Trp Ile Thr Tyr Ser Asp Leu Thr Phe 340 345 350 Asp Ile Ser Asn Thr Ser Thr Leu Asn Ile Gly Arg Ala Glu His Glu 355 360 365 Leu Leu Phe Gly Leu Gln Trp Leu Lys Asn Lys Arg Asn Thr Leu Met 370 375 380 Tyr His Lys Gly Gly Val Lys Lys Ala Asp Tyr Asn Tyr Gly Tyr Phe 385 390 395 400 Gln Pro Tyr Tyr Met Pro Ser Gly Arg Gln Tyr Thr Gln Ala Phe Tyr 405 410 415 Leu Gln Asp Gln Ile Lys Trp Gln Asn Phe Leu Phe Thr Gly Gly Ile 420 425 430 Arg Tyr Asp His Ile Asn Asn Ile Gly Gln Lys Asn Leu Ala Pro Arg 435 440 445 Tyr Asn Asp Ile Ser Ala Gly His Asp Tyr Ser Gln Lys Asn Tyr Asn 450 455 460 Gly Trp Ser Tyr Tyr Leu Gly Leu Lys Tyr Asp Val Asn His Tyr Leu 465 470 475 480 Ser Leu Phe Thr Asn Phe Ser Lys Thr Trp Arg Ala Pro Val Ile Asp 485 490 495 Glu Gln Tyr Glu Thr Gln Tyr Ser Gln Ala Ser Val Ser Ala Thr Ser 500 505 510 Leu Asn Leu Glu Lys Glu Met Ile Asn Gln Thr Arg Val Gly Gly Ile 515 520 525 Ile Thr Leu Asn His Leu Phe Gln Glu Asn Asp Ala Phe Gln Phe Arg 530 535 540 Thr Thr Tyr Phe Tyr Asn Arg Gly Lys Asn Glu Ile Phe Lys Thr Arg 545 550 555 560 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20 25 cat caa gag gcg act gaa ctt gat acg att acc gtt tct tct caa caa 4887 His Gln Glu Ala Thr Glu Leu Asp Thr Ile Thr Val Ser Ser Gln Gln 30 35 40 gat gag atg aat att aaa gag aaa aaa atc ggt gaa act gtg aaa acg 4935 Asp Glu Met Asn Ile Lys Glu Lys Lys Ile Gly Glu Thr Val Lys Thr 45 50 55 gcg agt caa ttg aaa cgc cag caa gta cag gat agt cgt gat ctt gtg 4983 Ala Ser Gln Leu Lys Arg Gln Gln Val Gln Asp Ser Arg Asp Leu Val 60 65 70 cgc tat gaa acc ggt gtg act gtg gta gaa gct gga cgt ttt ggt tcg 5031 Arg Tyr Glu Thr Gly Val Thr Val Val Glu Ala Gly Arg Phe Gly Ser 75 80 85 90 agc ggt tat gcc att cgt ggt gtg gat gag aac cga gta gca att aca 5079 Ser Gly Tyr Ala Ile Arg Gly Val Asp Glu Asn Arg Val Ala Ile Thr 95 100 105 gta gat ggc tta cat caa gca gaa acc ctt tct tct caa ggc ttt aaa 5127 Val Asp Gly Leu His Gln Ala Glu Thr Leu Ser Ser Gln Gly Phe Lys 110 115 120 gaa tta ttc gaa ggt tac ggc aat ttt aac aat acc cga aat agt gtg 5175 Glu Leu Phe Glu Gly Tyr Gly Asn Phe Asn Asn Thr Arg Asn Ser Val 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Leu Cys Asp Ser Tyr Lys Asn Pro Leu Gly Leu 350 355 360 caa ttt aaa gat ggt cag att ctt gat cct gca ggg aat aaa att aaa 5895 Gln Phe Lys Asp Gly Gln Ile Leu Asp Pro Ala Gly Asn Lys Ile Lys 365 370 375 cta cag ggg tct gga ttg agc act cag att gta gat gaa aat gga aaa 5943 Leu Gln Gly Ser Gly Leu Ser Thr Gln Ile Val Asp Glu Asn Gly Lys 380 385 390 cca ttt cct aca aca aca ggt act aat aat gct gct ttt agt aat aat 5991 Pro Phe Pro Thr Thr Thr Gly Thr Asn Asn Ala Ala Phe Ser Asn Asn 395 400 405 410 tta cga ctc agg cct aca ggt ttt tgg tta gat tgc tcg gtt ttt gac 6039 Leu Arg Leu Arg Pro Thr Gly Phe Trp Leu Asp Cys Ser Val Phe Asp 415 420 425 tgt aat aaa cca ttc act gtt tat aat att agt aat gga aca tat caa 6087 Cys Asn Lys Pro Phe Thr Val Tyr Asn Ile Ser Asn Gly Thr Tyr Gln 430 435 440 gca aga gag gtt cta ctg tct gaa gag ata act gtg gat ggt aaa tta 6135 Ala Arg Glu Val Leu Leu Ser Glu Glu Ile Thr Val Asp Gly Lys Leu 445 450 455 tac aaa aca gct aag gaa gaa gga ggg ctt cca aat tat ttg att tta 6183 Tyr Lys Thr Ala Lys Glu Glu Gly Gly Leu Pro Asn Tyr Leu Ile Leu 460 465 470 cct aat tct aaa ggt tat ctt cct tat gat tat aaa gaa agg gat ctt 6231 Pro Asn Ser Lys Gly Tyr Leu Pro Tyr Asp Tyr Lys Glu Arg Asp Leu 475 480 485 490 aat acg aat aca aaa caa att aat tta gat tta act aaa aca ttt tta 6279 Asn Thr Asn Thr Lys Gln Ile Asn Leu Asp Leu Thr Lys Thr Phe Leu 495 500 505 act ttc aac atc gaa aat aat ctg tca tat ggt gga gtt tat tct cgg 6327 Thr Phe Asn Ile Glu Asn Asn Leu Ser Tyr Gly Gly Val Tyr Ser Arg 510 515 520 ata gag aaa gaa atg att aat aaa gct ggt tat gag ggg aga aat cct 6375 Ile Glu Lys Glu Met Ile Asn Lys Ala Gly Tyr Glu Gly Arg Asn Pro 525 530 535 act tgg tgg gct gat aga att tta ggg caa agt agt tac tgt ggt tat 6423 Thr Trp Trp Ala Asp Arg Ile Leu Gly Gln Ser Ser Tyr Cys Gly Tyr 540 545 550 aat gca ttg aag tgt ccg aaa cat gag cca tta acg tca ttt tta att 6471 Asn Ala Leu Lys Cys Pro Lys His Glu Pro Leu Thr Ser Phe Leu Ile 555 560 565 570 cca gtt gaa gca acg aca cag tca tta tat ttt gca aat att ctt aag 6519 Pro Val Glu Ala Thr Thr Gln Ser Leu Tyr Phe Ala Asn Ile Leu Lys 575 580 585 gta cat aat atg att agc ata gat tta gga tat cgt tat gat cat att 6567 Val His Asn Met Ile Ser Ile Asp Leu Gly Tyr Arg Tyr Asp His Ile 590 595 600 aaa tat aac cct gaa tac act cca gga gta act cca aaa att cca gat 6615 Lys Tyr Asn Pro Glu Tyr Thr Pro Gly Val Thr Pro Lys Ile Pro Asp 605 610 615 gat atg gta aaa ggt ttg ttt att cct atg cca aaa gag cca cag cta 6663 Asp Met Val Lys Gly Leu Phe Ile Pro Met Pro Lys Glu Pro Gln Leu 620 625 630 aag gat ttt gat tat aac tat gct aaa ttt ggt gag gcc tat aaa aaa 6711 Lys Asp Phe Asp Tyr Asn Tyr Ala Lys Phe Gly Glu Ala Tyr Lys Lys 635 640 645 650 tgg aaa gaa tat ctg cca aaa aat gcg gaa gaa aat att gct tac att 6759 Trp Lys Glu Tyr Leu Pro Lys Asn Ala Glu Glu Asn Ile Ala Tyr Ile 655 660 665 gct caa gat aag aca ttt aaa aaa cat tct tat tct ctt ggt gca act 6807 Ala Gln Asp Lys Thr Phe Lys Lys His Ser Tyr Ser Leu Gly Ala Thr 670 675 680 ttc gat cct ctg aat ttt 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Asp Ala Arg Asp Phe 165 170 175 Leu Thr Glu Lys Asp Trp His Ile Gly Tyr Lys Ala Gly Tyr Ser Thr 180 185 190 Ala Asp Asn Gln Gly Leu Asn Ala Val Thr Leu Ala Gly Arg Tyr Gln 195 200 205 Met Phe Asp Ala Leu Ile Met His Ser Lys Arg His Gly His Glu Leu 210 215 220 Glu Asn Tyr Asp Tyr Lys Asn Gly Arg Asp Ile Gln Gly Lys Glu Arg 225 230 235 240 Glu Lys Ala Asp Pro Tyr Thr Ile Thr Lys Glu Ser Thr Leu Val Lys 245 250 255 Phe Ser Phe Ser Pro Thr Glu Asn His Arg Phe Thr Val Ala Ser Asp 260 265 270 Thr Tyr Leu Gln His Ser Arg Gly His Asp Leu Ser Tyr Asn Leu Val 275 280 285 Ala Thr Thr His Ile Gln Leu Asp Glu Lys Glu Ser Arg His Ala Asn 290 295 300 Asp Leu Thr Lys Arg Lys Asn Val Ser Phe Thr Tyr Glu Asn Tyr Thr 305 310 315 320 Val Thr Pro Phe Trp Asp Thr Leu Lys Leu Ser Tyr Ser Gln Gln Arg 325 330 335 Ile Thr Thr Arg Ala Arg Thr Glu Asp Tyr Cys Asp Gly Asn Glu Leu 340 345 350 Cys Asp Ser Tyr Lys Asn Pro Leu Gly Leu Gln Phe Lys Asp Gly Gln 355 360 365 Ile Leu Asp Pro Ala Gly Asn Lys Ile Lys Leu Gln 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tcaaaatgca agccggcagt 60 tggtgccgca accgcgccag ggactttgtt ataaacggtt tgataacgtt ctttatccgc 120 ttcttcgtca gggcgatcaa tataaggggg caatggcata tgcccaattt gctgtaacac 180 gtctaaaagt gcggtctgtt tttgcgcgat ttctaattca aataaggtat catggcgcgc 240 aaccatgatc attttgacac catgatgttc acctaactta tcttcgccta accacagttc 300 tgccccttct ttcggtgctt ttgaggagcg cacatgggct aaaaagcgtg tgtcggataa 360 aatccgctcg accaacactt ccaccttacc gccactggct ttacgtccaa acatccttgc 420 aggaatcacg cgcgtgttat taaaaattaa taagtcgcct tcatgaattt gatcaaggat 480 atcagcaaaa gtgcggtggg taatctcacc attttcgccg ttaagttgta ataagcgact 540 agcggtgcga tccggttttg ggtaacgagc aatcagctca tcgggtaaat caaaataaaa 600 gtcagaaaca cgcataaata gggttataaa aagttatcta aaaaatcgtg ggcgtaagtc 660 tagtgtgaat tccgctcttg cacaaggaaa aatccagatt ttgttgttta gtatcgaatt 720 gagatgattt tggacaaaaa aaaagccctt tcaagaaaga cgaaagggcg aaaatatatt 780 tggagtcata ctttttaggg tatgtgtcgg attatacaca caaaaataac aaatgcaaca 840 tttttttaac aatcatatgt aagcgtattg tgtgagaacg agcgtaaaaa tgaacgcatt 900 ctaaaggatg atttatttag cctattaaaa aaacacatga gatgagagtt tgcgagagcg 960 gtaataaaag tgcggtgggt tttagaaaag ttttgaatag gatcacaaat taaacaaagt 1020 ttgtgaaata ccaagtagta gtttttaagt atatgatgaa tcatatgcta aagtttaaac 1080 ccgttaaata accaagaggt ggaag atg aca gaa gaa aat aaa gga aag aga 1132 Met Thr Glu Glu Asn Lys Gly Lys Arg 1 5 tat ttt tta tgg ttc ata ttg ttt atc ctt tca atc tat tta ttt att 1180 Tyr Phe Leu Trp Phe Ile Leu Phe Ile Leu Ser Ile Tyr Leu Phe Ile 10 15 20 25 acc ata caa gaa aga cga ggt tat tgt ttt gac aaa cgt gca tat att 1228 Thr Ile Gln Glu Arg Arg Gly Tyr Cys Phe Asp Lys Arg Ala Tyr Ile 30 35 40 cat gag ctt tat act gag caa gag tta att gat cgg ggg att gaa tat 1276 His Glu Leu Tyr Thr Glu Gln Glu Leu Ile Asp Arg Gly Ile Glu Tyr 45 50 55 gtg gta tcc acc atg ccg tca ggt gtt att aaa cca gat ggc aca ata 1324 Val Val Ser Thr Met Pro Ser Gly Val Ile Lys Pro Asp Gly Thr Ile 60 65 70 aaa gaa gta aag cgt tac acg agt gtc gag gag ttt aaa cag atg aac 1372 Lys Glu Val Lys Arg Tyr Thr Ser Val 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240 atatttcaat agaaaacaga aaataaagat tatcaaaaga attatccgtc cttataaata 300 tgagtctgta ttgtgagatg atat atg aat att tta ttt gtt tct gat gat 351 Met Asn Ile Leu Phe Val Ser Asp Asp 1 5 gtt tat gct aaa cat ctg gtg gtt gcg att aaa agc att ata aat cat 399 Val Tyr Ala Lys His Leu Val Val Ala Ile Lys Ser Ile Ile Asn His 10 15 20 25 aat gaa aaa ggt att tca ttt tat att ttt gat ttg ggt ata aag gat 447 Asn Glu Lys Gly Ile Ser Phe Tyr Ile Phe Asp Leu Gly Ile Lys Asp 30 35 40 gaa aat aag aga aat att aat gat att gtt tct tct tat gga agt gaa 495 Glu Asn Lys Arg Asn Ile Asn Asp Ile Val Ser Ser Tyr Gly Ser Glu 45 50 55 gtc aac ttt att gct gtg aat gag aaa gaa ttt gag agt ttt cct gtt 543 Val Asn Phe Ile Ala Val Asn Glu Lys Glu Phe Glu Ser Phe Pro Val 60 65 70 caa att agt tat att tct tta gca aca tat gca agg cta aaa gcg gca 591 Gln Ile Ser Tyr Ile Ser Leu Ala Thr Tyr Ala Arg Leu Lys Ala Ala 75 80 85 gag tat ttg ccg gat aat tta aat aaa att att tat tta gat gtt gat 639 Glu Tyr Leu Pro Asp Asn Leu Asn Lys Ile Ile Tyr Leu Asp Val Asp 90 95 100 105 gtt ttg gtt ttt aac tca tta gaa atg tta tgg aat gtt gat gtt aat 687 Val Leu Val Phe Asn Ser Leu Glu Met Leu Trp Asn Val Asp Val Asn 110 115 120 aat ttt ctt acc gca gcc tgt tat gat tct ttc atc gaa aat gaa aag 735 Asn Phe Leu Thr Ala Ala Cys Tyr Asp Ser Phe Ile Glu Asn Glu Lys 125 130 135 tct gag cat aaa aaa tcg att tca atg tca gat aag gaa tat tat ttt 783 Ser Glu His Lys Lys Ser Ile Ser Met Ser Asp Lys Glu Tyr Tyr Phe 140 145 150 aat gca gga gta atg cta ttt aat tta gat gaa tgg cgg aag atg gat 831 Asn Ala Gly Val Met Leu Phe Asn Leu Asp Glu Trp Arg Lys Met Asp 155 160 165 gta ttc tca aga gct tta gac ctg tta gct atg tat cct aat caa atg 879 Val Phe Ser Arg Ala Leu Asp Leu Leu Ala Met Tyr Pro Asn Gln Met 170 175 180 185 att tat cag gat caa gat ata ttg aat atc ctt ttt agg aat aaa gtc 927 Ile Tyr Gln Asp Gln Asp Ile Leu Asn Ile Leu Phe Arg Asn Lys Val 190 195 200 tgt tat tta gat tgc aga ttt aat ttc atg cca aat caa ctt gaa aga 975 Cys Tyr Leu Asp Cys Arg Phe Asn Phe Met Pro Asn Gln Leu Glu Arg 205 210 215 ata aan caa tac cat aaa gga aaa ntg agc aac tta cat tct tta gaa 1023 Ile Xaa Gln Tyr His Lys Gly Lys Xaa Ser Asn Leu His Ser Leu Glu 220 225 230 aaa aca acg atg cct gtc gtt att tca cat tat tgt ggt cca gaa aaa 1071 Lys Thr Thr Met Pro Val Val Ile Ser His Tyr Cys Gly Pro Glu Lys 235 240 245 gcg tgg cat gcg gat tgt aaa cat ttt aat gta tat ttc tat cag aaa 1119 Ala Trp His Ala Asp Cys Lys His Phe Asn Val Tyr Phe Tyr Gln Lys 250 255 260 265 ata tta gca naa atn tcg aga ggc ncg gat aaa gaa cgc gta tta tct 1167 Ile Leu Ala Xaa Xaa Ser Arg Gly Xaa Asp Lys Glu Arg Val Leu Ser 270 275 280 ata aaa act tat ctc aag gcc ttg att aga agg att aga tat aaa ttc 1215 Ile Lys Thr Tyr Leu Lys Ala Leu Ile Arg Arg Ile Arg Tyr Lys Phe 285 290 295 aaa tat caa gtc tat taactattga atttttgcaa atgagataag agtatagtgc 1270 Lys Tyr Gln Val Tyr 300 tgatttcttc aaagcgaaaa ggaggaaata gcttgttcta atttattaca ataatggttg 1330 tattcatctt gattttgaag gaaagagagt gttttttgta taaaagcatt ttcgtcacct 1390 aaatttacta atcctccaaa ttctcctcct cgnagaattt ctttcggacc ggtagggcag 1450 tccatggata ttacaggtgt accgcaagcc atgctttcta ggataactgt cggtaacccc 1510 tctttcaaag aggtgtgtaa aaatagctta gcatttttta ttaatggata cggattatct 1570 ttatttccta aaagaaaaca atcttcttgt agattgagtg attctatttg tttctctaat 1630 ttttctcgac actcaccatc ccaaacaata tatancnttt cttggatacc tcc 1683 <210> 36 <211> 302 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <220> <221> misc_feature <222> 219 <223> Xaa = any or unknown amino acid <220> <221> misc_feature <222> 226 <223> Xaa = any or unknown amino acid <220> <221> misc_feature <222> 269 <223> Xaa = any or unknown amino acid <220> <221> misc_feature <222> 270 <223> Xaa = any or unknown amino acid <220> <221> misc_feature <222> 274 <223> Xaa = any or unknown amino acid <400> 36 Met Asn Ile Leu Phe Val Ser Asp Asp Val Tyr Ala Lys His Leu Val 1 5 10 15 Val Ala Ile Lys Ser Ile Ile Asn His Asn Glu Lys Gly Ile Ser Phe 20 25 30 Tyr Ile Phe Asp Leu Gly Ile Lys Asp Glu Asn Lys Arg Asn 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Asn Asp Gly Val Asn Gln Gly Lys 115 120 125 gcc gtt gtt caa tta agt aat aat ctt gca aaa gga aaa cct gcc act 433 Ala Val Val Gln Leu Ser Asn Asn Leu Ala Lys Gly Lys Pro Ala Thr 130 135 140 gaa ggc aca aaa tgg cag tta aaa cga tcg tgt cct acg tat ccc tta 481 Glu Gly Thr Lys Trp Gln Leu Lys Arg Ser Cys Pro Thr Tyr Pro Leu 145 150 155 160 tgt tgg tgt gga tgc gga taacttaaac gagttcctaa aataataaac 529 Cys Trp Cys Gly Cys Gly 165 tataacaaaa caagamgttg taattctcgg ggaggtatac cctccccctt tttatgtgag 589 gttggatatg acaactcaaa ttccaaatca agacagtgaa atactgctca caatgaccaa 649 cgtctgtaaa tcctttcccg gtgttaaagc gttagacaat gcaaacctaa ctgtgcgctc 709 gcattctgtc catgccttaa tgggcgaaaa tggggcgggc aaatcgacct tattaaaatg 769 cttatttggt atttacagta aagatgaagg tgacatcctt ttcttaggca agccagtcaa 829 ctttaaaacg tcgaaagaag ccttagagaa cgggattttc atggtgcacc aagaacttaa 889 cttggttaaa caatgtactg taatggataa tcctttggnt aggacgttat ccattaaaag 949 caggctttgt cgatcacggc aaaatgtatc gtgataccaa agcagatttt tgaagaanta 1009 gatatcgata tcgatccaaa agaaaaagtg gccaaattgt cagtgtcaca aatgcaaatg 1069 atcgagatcg caaaggcctt ttcatacaat gccaaaatcg taatcatgga cgaaccgact 1129 tcttcgcttt cagaaaaaga agttgaacac ctatttaaaa ttatcgcgaa gctaaaacaa 1189 cgtggctgtg gcattattta tatttcgcac aaaatggacg aaatcttcaa aatttgtgac 1249 gaaattacga ttttacgcga tggtaaatgg atcaatacgg tcgctgttaa aggcaccaca 1309 atggatcaga ttgtatccat gatggttggg cgtgaactca cgcaacgttt cccaccaaaa 1369 accaataccc caaaagaaac catcttaacg gtggaaaatc tgaccgcact taatcagcca 1429 tctattcaag atgttagttt tgaattacgc aaaggcgaag tgctcggcat tgcgggactg 1489 gttggggcaa aacggtaccg atattgtgga aacgatcttc ggggtgcgtg aacgtaaatc 1549 tggtgtgatt aaactacacg ataaggaaat gaaaaaccgg aatgcgttcg aagccattaa 1609 caatggtttt gccttggtca cggaagaacg tcgctctaca gggatttatg cgaatctcag 1669 tattgagttt aactcattaa tttctaacat gaagaaatcc tatatcagca agttaggttt 1729 attgagtaac ncaaaaatga aaagcgacac gcaatggggt cattgattcc atgaatgtga 1789 aaacgccatc acaaaaccna tattggntca ntatctgggg tggtaaccaa caaaaagtgg 1849 tcattggtcg ttggttatta acccaccctg aaatcttgat gttagacgaa ccaacacgtg 1909 gtatcgacat tggtgcgaaa tatgaaattt atcagctgat tatggagtta gccaaaaaag 1969 ataaaggtat catcatgatt tcatctaaag gccagagtta ttaggggtac tgaccgaatt 2029 <210> 38 <211> 166 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <220> <221> misc_feature <222> 33 <223> Xaa = any or unknown amino acid <220> <221> misc_feature <222> 99 <223> Xaa = any or unknown amino acid <220> <221> misc_feature <222> 101 <223> Xaa = any or unknown amino acid <400> 38 Leu Asn Lys Ala Gly Lys Ile Gln Tyr Val Leu Leu Lys Gly Asn Gln 1 5 10 15 Gly His Pro Asp Ala Glu Ala Arg Thr Lys Phe Val Ile Lys Glu Leu 20 25 30 Xaa Asn Lys Gly Ile Gln Asp Glu Gln Leu Phe Ile Asp Thr Gly Met 35 40 45 Trp Asp Ala Ala Leu Ala Lys Asp Lys Met Asp Ala Trp Leu Ser Ser 50 55 60 Ser Lys Ala Asn Gln Ile Glu Val Ile Ile Ala Asn Asn Asp Gly Met 65 70 75 80 Ala Met Gly Ala Leu Glu Ala Thr Lys Ala His Gly Lys Lys Leu Pro 85 90 95 Ile Phe Xaa Val Xaa Ala Leu Pro Glu Val Leu Gln Leu Ile Lys Lys 100 105 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Glu Tyr Val Ala Glu His Ile Ala Glu 10 15 20 25 ata tta gaa caa caa gat tat cct gta cgt tta gaa cat gga cca aat 448 Ile Leu Glu Gln Gln Asp Tyr Pro Val Arg Leu Glu His Gly Pro Asn 30 35 40 ttt gaa gaa gtg atc gat gaa aaa tgt tgg ctt gtt gtc acc tct acc 496 Phe Glu Glu Val Ile Asp Glu Lys Cys Trp Leu Val Val Thr Ser Thr 45 50 55 cat ggt gca ggt gaa tta ccg gat aat att aaa cct ctg ttt gaa aaa 544 His Gly Ala Gly Glu Leu Pro Asp Asn Ile Lys Pro Leu Phe Glu Lys 60 65 70 tta gca ttt cac cca aaa cag tta gct gac tta cgc ttt gcg gtg atc 592 Leu Ala Phe His Pro Lys Gln Leu Ala Asp Leu Arg Phe Ala Val Ile 75 80 85 ggg tta ggt aat tcg gat tat gat acc ttc tgt cac gca gtg gat cat 640 Gly Leu Gly Asn Ser Asp Tyr Asp Thr Phe Cys His Ala Val Asp His 90 95 100 105 gtg gaa caa tta ctg cta agc aaa gat gct tta caa ctg tgt gaa tcg 688 Val Glu Gln Leu Leu Leu Ser Lys Asp Ala Leu Gln Leu Cys Glu Ser 110 115 120 cta aga atg gat atg cta acc att act gat cct gaa cac acg gcc gaa 736 Leu Arg Met Asp Met Leu Thr Ile Thr Asp Pro Glu His Thr Ala Glu 125 130 135 caa tgg ctc cca caa ttt ctc agt caa tta taatatttat tccctataca 786 Gln Trp Leu Pro Gln Phe Leu Ser Gln Leu 140 145 atggcatatg taaatcaaat atgccatttt tcatctcgat caagcataat atttaaccaa 846 tcaaatcaat attttctctg tggataacta agatcaaaac tgtataaaag ctgtttttat 906 tccctgaata agattgaatg ttttttattc tgtggataac taaagaagtt attcacagtt 966 ttttctggtg ccaaattgag atcttaacaa cttaaaaaat gatctaagtt attcatttaa 1026 aaaaagaaaa ggatcttaat cacagcacta taggatccta ataatcataa taataagatc 1086 tctttatata aaaagatcct atctttatta actcacgatc tttttcacga tcatcgtaca 1146 gtcttgatca aaaatgtttc tttcatggat ccataaattt cagtagaata gccaaccagc 1206 aaaaaggatc aaaagatcca taaaatccga gataaattaa caaggttact atgttttata 1266 ctgaaaatta tgatgttatt gtgatcggtg gtggacacgc aggtactgaa gctgcacttg 1326 caccggcacg catgggactc aagaccctat tattaaccca taatgttgat acactagggc 1386 aaatgtcttg taatcctgcg attggtggga ttggtaaagg ccatttagtc cgagaaattg 1446 atgcgatggg cggtttaatg gcaactgctg cggaccaagc aggaatccaa 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115 120 125 Ile Thr Asp Pro Glu His Thr Ala Glu Gln Trp Leu Pro Gln Phe Leu 130 135 140 Ser Gln Leu 145 <210> 41 <211> 5191 <212> DNA <213> Pasteurella multocida <220> <221> CDS <222> (3203)..(4255) <220> <223> mreB <400> 41 ctgcagtacc aaccacccaa atgttgtgct tctgctgtaa ttcacgcaaa gtgcgcgcga 60 ggttggttac acggattaat ggcacgactt cagcggcacc acaagctact ttacgtgcga 120 tagcggttaa ttgggcagat ttatcttttg gtactatcac agcacacacg cccgctgcat 180 ccgcagtacg caaacaagca cctaagttat gtggatcagt cacaccatct aacactaata 240 gcaacggatt ggactgattt tgtaaaagcg tatctaaatc tgcttcattc aattctttcg 300 ctggctgaac acgtgccatg atgccttggt gtacttcgcc ctctgctttt ttatcaaggg 360 tttggcgatt aacaaattgg atagtaatac ccaaccgatg aagttcattg agcaaaggtt 420 gtaaacgttt atcgtcgcgc cctttgagtg cataaacttc aattaaacgc tctggcgcgt 480 tgtttaaaaa ggcacttact gcatgaatgc cataaatatt ttcactcatc tactttctct 540 ttttagctga tttcttactg gcttttttcg tggttgttga tggtttaaca acgcttgttt 600 ttcttaccgc acttttactg gtgcttggtt tacgtttatg gcgttgtttt tcgagacttt 660 cagcgtagcg tgcatttttc ttgagcttgt ctttggctgt tttgccttct cgtaatggtt 720 tacgctcact cgacactaaa gaaaaatcca cttggcgttg ttcaaggcta actgcttcca 780 cacggatttt taccttatcg ccaatgcggt agatcatacc actattttca ccgattaaac 840 gttgtcgagc gagatcaaat tggtagtagt cgttatctaa ggtagaaatg tggactaagc 900 catcaataaa gaggtcatct aagcggacaa ataagccaaa acctgtcaca gatgaaatca 960 cacctgtaaa ttcttcgcct acatgatctt gcatatattc gcattttagc cagtctgcaa 1020 catcacgagt ggcatcatcg gcccgtcgtt ctgtcatgga gcagtggtcg cctaatacat 1080 ccatgtcatc aagtgtatag tgataccctc ccgtatcagt ggttctccgt ttcgagcctt 1140 ttagtttggc taacaagtat ttaatcccac gatgcaaagt caaatcagga taacggcgaa 1200 ttggcgaagt aaaatgcgca tattcttcga gtgcaagccc aaagtgccca atattgtcag 1260 gatgataaac ggcttgactt aacgaacgta atacatggtt tgcaataact catgatctgg 1320 acgttcgcga atttgctcca ataatttagc gtagtctgcg gtacttggtt tactgccacc 1380 ttcaaggctt aaaccacatt cactgaggaa ttggcggaag cccgtcactt tttcttcgct 1440 tggacccgca tgaatacgga aaagggctgg ctcttgatgt ttttccataa agtttgccgc 1500 cgcaatattg gcgaggatca tacattcttc aatgatttta tgcgcatcat tacgaataac 1560 aggctcaatc cgttcgattc gccccatttc attaaacaca aacttacttt caatggtttc 1620 aaagtcaatg gcgccacgtt gatgacgggc ttccactaag gcttggtaca ttacatggag 1680 ttcttttaaa tggggaacca gtgcttgata acgagtacaa agttcttcat cgtcctctaa 1740 aatacgagca actttggtat aggttaagcg agcatgagag ttcatgaccg cttcataaaa 1800 ttcatagcct gtgattttac cttttgctga aacattcagc tcacagacca tacataagcg 1860 atcgacttgt gggtttaatg aacaaagtcc attggagagg atttccggta gcataggaac 1920 aacgcgattt gggaaatata ccgagtttcc acgcgcatgt gcttcggtat caagggcagt 1980 acgtaaacga acatagtagc tgacatcggc aatggcaacc cacagtttcc aaccgcctcc 2040 acgttttttc tggcaaaaaa ccgcatcgtc aaaatcgcga gcatcttcac catcaatggt 2100 gactaacgga agatggcgta aatcaatacg tcctgatttg gcttcttccg gtacttcttc 2160 actcagttta gaaacttgtt tgaggaccgc gtctggaaaa acatggggaa tatcatgatt 2220 acggatagca atttccacct ccatcccttt tgccatattt tcaccgagaa tttcgctaat 2280 cattccaaca ggttggctaa atgttgcggt acgtggtttt aattcaacta caaccacttg 2340 tcccatacga gcgccttggc ggtgttcatt cggaattaaa atgtcgcgat taattcgact 2400 atcgtcaggt actacataac caataccatc ttctaagaaa aaacgaccaa caatctgttt 2460 tttacgctgt tgtaagacgc ggacaatccg cacttcttgg cgaccacgac ggtcaaaacc 2520 gctaggttgg gcgaggacat agtcaccgtg cattactcgc tgcatttggc tgttgggtat 2580 aaaccaatcg ctgtctttac cttcgacttg taaaaaacca taaccatcac gatgacctaa 2640 tacggtccct tttaataaat ccagtttttc cggtaaagcg tagcgtttac gtttagtgaa 2700 aaccaattgt ccgtcatttt ccatcgctct taagcgacgg cgcatggctt cttgttgttc 2760 ttcattttga atagcaaatg tggtcagtaa ttcttctttt gagataggtg cattatgttg 2820 acgaattgta tcaagaataa attcgcgact tgggatcggg ttctcatatt ttgcgagttc 2880 ttcttgatag tttggatctt gcaaatgtgg attgtttttg atttttgcca taatgactcc 2940 ctttgagaat ggaaatacgc attcgtttaa tgacctcaag tttgacactc tgatttgttg 3000 aaagcaagta aaaaacctgt tcgtgactga aacaatctgt actcgcggga tttgtcgtgc 3060 atgaaagcgt aaagacaaag caaatttcga caatttacag aaaattctct gttataaagg 3120 tacatttttt gatacattta gcacaatttt tcaatactca aatcagagtg tccattattt 3180 aatttagttc agcggaattc tt atg tta ttt aaa aaa att cga ggc tta ttt 3232 Met Leu Phe Lys Lys Ile Arg Gly Leu Phe 1 5 10 tca aat gat ctg tcc atc gat ctt ggc aca gcg aat acc tta att tat 3280 Ser Asn Asp Leu Ser Ile Asp Leu Gly Thr Ala Asn Thr Leu Ile Tyr 15 20 25 gtc aaa gga caa ggg att gtt tta gat gaa cct tct gtt gtg gcg att 3328 Val Lys Gly Gln Gly Ile Val Leu Asp Glu Pro Ser Val Val Ala Ile 30 35 40 cgc caa gaa cgt tca ggt gca tta aaa agc att gct gcg gtt ggt cgt 3376 Arg Gln Glu Arg Ser Gly Ala Leu Lys Ser Ile Ala Ala Val Gly Arg 45 50 55 gat gcc aaa tta atg tta ggc cgt aca ccg aaa agc att gca gcg att 3424 Asp Ala Lys Leu Met Leu Gly Arg Thr Pro Lys Ser Ile Ala Ala Ile 60 65 70 cgt cct atg aaa gat ggg gtg atc gca gat ttc ttt gtg aca gaa aaa 3472 Arg Pro Met Lys Asp Gly Val Ile Ala Asp Phe Phe Val Thr Glu Lys 75 80 85 90 atg ttg caa tat ttt att aaa caa gtg cac agc agc aat ttt atg cgt 3520 Met Leu Gln Tyr Phe Ile Lys Gln Val His Ser Ser Asn Phe Met Arg 95 100 105 cca agt cca cgt gtc tta gtt tgt gta cct gcg gga gct acg caa gtc 3568 Pro Ser Pro Arg Val Leu Val Cys Val Pro Ala Gly Ala Thr Gln Val 110 115 120 gaa cga cgt gca atc aaa gaa tct gcc att ggt gct ggg gca cgc gag 3616 Glu Arg Arg Ala Ile Lys Glu Ser Ala Ile Gly Ala Gly Ala Arg Glu 125 130 135 gtg tac ttg att gag gaa ccg atg gcg gca gcg att ggt gct aaa tta 3664 Val Tyr Leu Ile Glu Glu Pro Met Ala Ala Ala Ile Gly Ala Lys Leu 140 145 150 cct gtt tcg act gcc aca ggt tcg atg gtg atc gat atc ggt ggt ggt 3712 Pro Val Ser Thr Ala Thr Gly Ser Met Val Ile Asp Ile Gly Gly Gly 155 160 165 170 acg acg gaa gtt gcg gtg att tct tta aat ggc att gtg tat tcc tct 3760 Thr Thr Glu Val Ala Val Ile Ser Leu Asn Gly Ile Val Tyr Ser Ser 175 180 185 tca gtc cgc att ggt ggt gat cgt ttt gat gag gcg att att tct tat 3808 Ser Val Arg Ile Gly Gly Asp Arg Phe Asp Glu Ala Ile Ile Ser Tyr 190 195 200 gta cgc aag acg ttc ggt tca att att ggg gaa ccg aca gca gag cgt 3856 Val Arg Lys Thr Phe Gly Ser Ile Ile Gly Glu Pro Thr Ala Glu Arg 205 210 215 atc aaa caa gag att ggt agt gcg ttt att caa gaa ggc gat gaa gtc 3904 Ile Lys Gln Glu Ile Gly Ser Ala Phe Ile Gln Glu Gly Asp Glu Val 220 225 230 cgt gaa att gaa gtg cat ggt cat aac tta gca gaa ggt gcg ccg cgt 3952 Arg Glu Ile Glu Val His Gly His Asn Leu Ala Glu Gly Ala Pro Arg 235 240 245 250 tct ttc aaa ctc acc tca cgt gat gtg tta gaa gct att caa gcc ccg 4000 Ser Phe Lys Leu Thr Ser Arg Asp Val Leu Glu Ala Ile Gln Ala Pro 255 260 265 tta aat ggc att gtt gcg gca gtg cgc acg gcc ttg gaa gag tgt caa 4048 Leu Asn Gly Ile Val Ala Ala Val Arg Thr Ala Leu Glu Glu Cys Gln 270 275 280 cca gaa cat gct gcg gat att ttt gaa cgt ggc atg gtc tta act ggt 4096 Pro Glu His Ala Ala Asp Ile Phe Glu Arg Gly Met Val Leu Thr Gly 285 290 295 ggc ggt gcc ctt att cgt aat att gat gtt tta ctg tca aaa gaa acc 4144 Gly Gly Ala Leu Ile Arg Asn Ile Asp Val Leu Leu Ser Lys Glu Thr 300 305 310 ggt gtg ccg gtt atc atc gcc gat gat cct tta acc tgt gtt gcc cgt 4192 Gly Val Pro Val Ile Ile Ala Asp Asp Pro Leu Thr Cys Val Ala Arg 315 320 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tgatgaactg agtttagatc 4955 atgtgccgcg ttcggtcgat attgtcaaag gggatttatt agtcacttct ggattaggtg 5015 ggcgtttttt agaaggttat cctgttgcca ttgtggaatc cgtatcacgt gatgggcaaa 5075 attattttgc tactgtaaca gcaaagccat tagcttcgat tgaacgttta cgctatgttt 5135 tgcttttatg gccgacgaat gaagagatgc gcaaagtcca gtctatttca cctgca 5191 <210> 42 <211> 351 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 42 Met Leu Phe Lys Lys Ile Arg Gly Leu Phe Ser Asn Asp Leu Ser Ile 1 5 10 15 Asp Leu Gly Thr Ala Asn Thr Leu Ile Tyr Val Lys Gly Gln Gly Ile 20 25 30 Val Leu Asp Glu Pro Ser Val Val Ala Ile Arg Gln Glu Arg Ser Gly 35 40 45 Ala Leu Lys Ser Ile Ala Ala Val Gly Arg Asp Ala Lys Leu Met Leu 50 55 60 Gly Arg Thr Pro Lys Ser Ile Ala Ala Ile Arg Pro Met Lys Asp Gly 65 70 75 80 Val Ile Ala Asp Phe Phe Val Thr Glu Lys Met Leu Gln Tyr Phe Ile 85 90 95 Lys Gln Val His Ser Ser Asn Phe Met Arg Pro Ser Pro Arg Val Leu 100 105 110 Val Cys Val Pro Ala Gly Ala Thr Gln Val Glu Arg Arg Ala Ile Lys 115 120 125 Glu Ser Ala Ile Gly Ala Gly Ala Arg Glu Val Tyr Leu Ile Glu Glu 130 135 140 Pro Met Ala Ala Ala Ile Gly Ala Lys Leu Pro Val Ser Thr Ala Thr 145 150 155 160 Gly Ser Met Val Ile Asp Ile Gly Gly Gly Thr Thr Glu Val Ala Val 165 170 175 Ile Ser Leu Asn Gly Ile Val Tyr Ser Ser Ser Val Arg Ile Gly Gly 180 185 190 Asp Arg Phe Asp Glu Ala Ile Ile Ser Tyr Val Arg Lys Thr Phe Gly 195 200 205 Ser Ile Ile Gly Glu Pro Thr Ala Glu Arg Ile Lys Gln Glu Ile Gly 210 215 220 Ser Ala Phe Ile Gln Glu Gly Asp Glu Val Arg Glu Ile Glu Val His 225 230 235 240 Gly His Asn Leu Ala Glu Gly Ala Pro Arg Ser Phe Lys Leu Thr Ser 245 250 255 Arg Asp Val Leu Glu Ala Ile Gln Ala Pro Leu Asn Gly Ile Val Ala 260 265 270 Ala Val Arg Thr Ala Leu Glu Glu Cys Gln Pro Glu His Ala Ala Asp 275 280 285 Ile Phe Glu Arg Gly Met Val Leu Thr Gly Gly Gly Ala Leu Ile Arg 290 295 300 Asn Ile Asp Val Leu Leu Ser Lys Glu Thr Gly Val Pro Val Ile Ile 305 310 315 320 Ala Asp Asp Pro Leu Thr Cys Val Ala Arg Gly Gly Gly Glu Ala Leu 325 330 335 Glu Met Ile Asp Met His Gly Gly 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Ala Ile Pro Ala Pro 305 310 315 320 cgt gcg gat att tct gat ttt gca ccg cgt att tac act atg aaa att 1008 Arg Ala Asp Ile Ser Asp Phe Ala Pro Arg Ile Tyr Thr Met Lys Ile 325 330 335 gat ccg aag aaa atc aaa gat gtg atc ggt aaa ggt ggt gca acc att 1056 Asp Pro Lys Lys Ile Lys Asp Val Ile Gly Lys Gly Gly Ala Thr Ile 340 345 350 cgt gcc tta aca gaa gaa aca ggt acc tca att gat atc gat gat gat 1104 Arg Ala Leu Thr Glu Glu Thr Gly Thr Ser Ile Asp Ile Asp Asp Asp 355 360 365 ggt acg gtg aag att gct gcg gtt gat ggc aat tca gca aaa gag gtg 1152 Gly Thr Val Lys Ile Ala Ala Val Asp Gly Asn Ser Ala Lys Glu Val 370 375 380 atg gcg cgt att gaa gat att act gca gaa gtt gaa gcg ggt gca gtg 1200 Met Ala Arg Ile Glu Asp Ile Thr Ala Glu Val Glu Ala Gly Ala Val 385 390 395 400 tat aaa ggt aaa gtt act cgt tta gct gat ttt ggt gcc ttc gtt tct 1248 Tyr Lys Gly Lys Val Thr Arg Leu Ala Asp Phe Gly Ala Phe Val Ser 405 410 415 atc gta ggt aac aaa gaa ggc tta gtg cat att tct caa atc gcg gaa 1296 Ile Val Gly Asn Lys 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tgaccaaaca ttagcgttgt 1854 atccaaagtt ggcagcagcg tttaattatt taggtttata tttattgtta gaggaagatt 1914 acagcgcatc tctagatatc tttaatgtgt tgtttgaact tgatcctcaa tatgagtatg 1974 cattcctaaa tagagggcta aatttttatt acgtcggacg ttatgaatta gctcagcggg 2034 attttcttca attttatcaa gccgataaat cagatccata ccgcacttta tggctttatt 2094 taaatgaatt aaagcataat cctcaggatg cttctaaaaa tcttgctcaa cgagcaatgg 2154 ggctttctga tgaatatt 2172 <210> 44 <211> 488 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 44 Thr Arg Val Gly Ile Gly Trp His Leu Asn Pro Asn Thr Ala Leu Ile 1 5 10 15 Glu Lys Val Lys Ala Ile Ala Glu Ala Arg Leu Gly Glu Ala Tyr Arg 20 25 30 Ile Thr Glu Asn Lys His Val Met Asn Lys Ile Asp Ala Ile Lys Ala 35 40 45 Asp Val Ile Ala Gln Ile Thr Ala Glu Val Ala Glu Gly Glu Asp Ile 50 55 60 Ser Glu Gly Lys Ile Val Asp Ile Phe Thr Ala Leu Glu Ser Gln Ile 65 70 75 80 Val Arg Ser Arg Ile Ile Ala Gly Glu Pro Arg Ile Asp Gly Arg Thr 85 90 95 Val Asp Thr Val Arg Ala Leu Asp Ile Cys Thr Gly Val Leu Pro Arg 100 105 110 Thr His Gly Ser Ala Ile Phe Thr Arg Gly Glu Thr Gln Ala Leu Ala 115 120 125 Val Ala Thr Leu Gly Thr Glu Arg Asp Ala Gln Ile Ile Asp Glu Leu 130 135 140 Thr Gly Glu Arg Ser Asp His Phe Leu Phe His Tyr Asn Phe Pro Pro 145 150 155 160 Tyr Ser Val Gly Glu Thr Gly Met Ile Gly Ser Pro Lys Arg Arg Glu 165 170 175 Ile Gly His Gly Arg Leu Ala Lys Arg Gly Val Ala Ala Val Met Pro 180 185 190 Thr Leu Ala Glu Phe Pro Tyr Val Val Arg Val Val Ser Glu Ile Thr 195 200 205 Glu Ser Asn Gly Ser Ser Ser Met Ala Ser Val Cys Gly Ala Ser Leu 210 215 220 Ala Leu Met Asp Ala Gly Val Pro Ile Lys Ala Ala Val Ala Gly Ile 225 230 235 240 Ala Met Gly Leu Val Lys Glu Asp Glu Lys Phe Val Val Leu Ser Asp 245 250 255 Ile Leu Gly Asp Glu Asp His Leu Gly Asp Met Asp Phe Lys Val Ala 260 265 270 Gly Thr Arg Thr Gly Val Thr Ala Leu Gln Met Asp Ile Lys Ile Glu 275 280 285 Gly Ile Thr Ala Glu Ile Met Gln Ile Ala Leu Asn Gln Ala Lys Ser 290 295 300 Ala Arg Leu His Ile Leu Gly Val Met Glu Gln Ala Ile Pro Ala Pro 305 310 315 320 Arg Ala 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Ala Gly Ala Lys Lys Ile Tyr Phe Ala 115 120 125 tct gct gca cca gaa att cgt tat cca aat gtg tat ggt att gat atg 433 Ser Ala Ala Pro Glu Ile Arg Tyr Pro Asn Val Tyr Gly Ile Asp Met 130 135 140 cca acc aaa aat gaa ttg atc gct tat ggt cgt gat gta gat gaa att 481 Pro Thr Lys Asn Glu Leu Ile Ala Tyr Gly Arg Asp Val Asp Glu Ile 145 150 155 160 gct aac tta att ggt gtg gat aaa ttg att ttc caa gat ttg gat gcg 529 Ala Asn Leu Ile Gly Val Asp Lys Leu Ile Phe Gln Asp Leu Asp Ala 165 170 175 tta act ggt tct gtg caa caa gaa aat cca agt att caa gac ttt gat 577 Leu Thr Gly Ser Val Gln Gln Glu Asn Pro Ser Ile Gln Asp Phe Asp 180 185 190 tgt tcg gtg ttt aca ggg gtt tat gtg acg ggc gat att aca cct gaa 625 Cys Ser Val Phe Thr Gly Val Tyr Val Thr Gly Asp Ile Thr Pro Glu 195 200 205 tat ctg ga 633 Tyr Leu 210 <210> 46 <211> 210 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 46 Asp Gly Val Ser Val Tyr Ala Ala Arg Val His Met Gly Gln Arg Leu 1 5 10 15 Gly Glu Lys Ile Ala Arg Glu Trp Ala Asp Val Asp Asp Ile Asp 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Gly Gly Lys Ala Trp Leu Asn Lys Glu Leu 340 345 350 aac agt gca acg aat tta aaa gat gcg aag ttg ttg atc tct tat gat 1105 Asn Ser Ala Thr Asn Leu Lys Asp Ala Lys Leu Leu Ile Ser Tyr Asp 355 360 365 tat cac cca gta cca ccg ctc gaa cag cta ggc ttt aat cag tac att 1153 Tyr His Pro Val Pro Pro Leu Glu Gln Leu Gly Phe Asn Gln Tyr Ile 370 375 380 tct gat gaa tac ctt gtt gat ttt tca aat cgt tta gca tcg 1195 Ser Asp Glu Tyr Leu Val Asp Phe Ser Asn Arg Leu Ala Ser 385 390 395 taaggggtag aaaatggctt taccacgcaa acttaaattg atgaatttaa tcatcgacgg 1255 taacaaatat ctcggcgaag tcacggaagt gactcaacca aaattagcaa tgaaaatcga 1315 agaatttcgc gcgggcggta tgattggttc ggtggatgtc aatctcgggc ttgaaaagct 1375 cgaagcggaa tttaaagccg gtggctacat ggtcgaatta attaaaaaat tcggcgggtc 1435 aatcaacggc attccattgc gttttcttgg ctcatatcag cgtgatgaca cagaagaagt 1495 cacatctgtt gagcttgtga tgcaaggtcg atttactgaa attgacagcg gaaacagcaa 1555 agtgggcgat gacactgaac aaacattcaa agtgccttta acgtattaca aaatcattgt 1615 tga 1618 <210> 50 <211> 398 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Glu Ile Asp 195 200 205 Tyr Ala Val Thr Arg Ala Ala Ala Met Arg Ala Tyr Leu Asp Lys Glu 210 215 220 Gln Gly Trp His Thr Ser Ile Ser Asn Lys Gly Ile Asn Gly Val Ser 225 230 235 240 Gly Val Thr Gln Pro Leu Tyr Phe Asp Ile Asn Asp Ser Ser Thr Asp 245 250 255 Val Asn Tyr Leu Asn Glu Gln Gly Ile Thr Cys Cys Val Asn His Asn 260 265 270 Gly Phe Arg Phe Trp Gly Leu Arg Thr Thr Ala Glu Asp Pro Leu Phe 275 280 285 Lys Phe Glu Val Tyr Thr Arg Thr Ala Gln Ile Leu Lys Asp Thr Ile 290 295 300 Ala Gly Ala Phe Asp Trp Ala Val Asp Lys Asp Ile Ser Val Thr Leu 305 310 315 320 Val Lys Asp Ile Ile Glu Ala Ile Asn Ala Lys Trp Arg Asp Tyr Thr 325 330 335 Thr Lys Gly Tyr Leu Ile Gly Gly Lys Ala Trp Leu Asn Lys Glu Leu 340 345 350 Asn Ser Ala Thr Asn Leu Lys Asp Ala Lys Leu Leu Ile Ser Tyr Asp 355 360 365 Tyr His Pro Val Pro Pro Leu Glu Gln Leu Gly Phe Asn Gln Tyr Ile 370 375 380 Ser Asp Glu Tyr Leu Val Asp Phe Ser Asn Arg Leu Ala Ser 385 390 395 <210> 51 <211> 353 <212> DNA <213> Pasteurella multocida <220> <221> CDS <222> (1)..(351) <220> <223> unknown C1 <400> 51 atg aca tta ttt gat gaa tgt aaa tta gct ctt aga gac gat ttt aat 48 Met Thr Leu Phe Asp Glu Cys Lys Leu Ala Leu Arg Asp Asp Phe Asn 1 5 10 15 cta att tgt gat gaa gag aag gat tgt gta atg gat aag ttt tat ttc 96 Leu Ile Cys Asp Glu Glu Lys Asp Cys Val Met Asp Lys Phe Tyr Phe 20 25 30 tat ttc ttg gaa aag aaa gag gaa ttt aat ttt caa gat tat tca ttt 144 Tyr Phe Leu Glu Lys Lys Glu Glu Phe Asn Phe Gln Asp Tyr Ser Phe 35 40 45 gaa gaa atg tat ata ttt tca aaa atg gaa cct gtg tat gtt tta tgt 192 Glu Glu Met Tyr Ile Phe Ser Lys Met Glu Pro Val Tyr Val Leu Cys 50 55 60 gat agc tct aat ata cct ttg ttt agg agt aat tgg gaa ttg att atc 240 Asp Ser Ser Asn Ile Pro Leu Phe Arg Ser Asn Trp Glu Leu Ile Ile 65 70 75 80 aat aat ata tat gat gtt gtc tgt tta tct aca aaa gta ttt ttt cta 288 Asn Asn Ile Tyr Asp Val Val Cys Leu Ser Thr Lys Val Phe Phe Leu 85 90 95 gat gat gaa aag tta atg atg gaa tta ttt cct gaa gat aaa gta aga 336 Asp Asp Glu Lys Leu Met Met Glu Leu Phe Pro Glu Asp Lys Val Arg 100 105 110 gtc atc tat aaa aga ta 353 Val Ile Tyr Lys Arg 115 <210> 52 <211> 117 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 52 Met Thr Leu Phe Asp Glu Cys Lys Leu Ala Leu Arg Asp Asp Phe Asn 1 5 10 15 Leu Ile Cys Asp Glu Glu Lys Asp Cys Val Met Asp Lys Phe Tyr Phe 20 25 30 Tyr Phe Leu Glu Lys Lys Glu Glu Phe Asn Phe Gln Asp Tyr Ser Phe 35 40 45 Glu Glu Met Tyr Ile Phe Ser Lys Met Glu Pro Val Tyr Val Leu Cys 50 55 60 Asp Ser Ser Asn Ile Pro Leu Phe Arg Ser Asn Trp Glu Leu Ile Ile 65 70 75 80 Asn Asn Ile Tyr Asp Val Val Cys Leu Ser Thr Lys Val Phe Phe Leu 85 90 95 Asp Asp Glu Lys Leu Met Met Glu Leu Phe Pro Glu Asp Lys Val Arg 100 105 110 Val Ile Tyr Lys Arg 115 <210> 53 <211> 509 <212> DNA <213> Pasteurella multocida <220> <221> CDS <222> (1)..(507) <220> <223> unknown C2 <400> 53 atg aaa aat ttt agg aat ata aat att tat agt gat tat gga aag gtt 48 Met Lys Asn Phe Arg Asn Ile Asn Ile Tyr Ser Asp Tyr Gly Lys Val 1 5 10 15 gat aag gaa att ata tta gaa ttc gaa aat gaa ttt aat ata aag ctt 96 Asp Lys Glu Ile Ile Leu Glu Phe Glu Asn Glu Phe Asn Ile Lys Leu 20 25 30 cct tct tta tac ata gat tta att acg gcg cat aat gct ccg aag agt 144 Pro Ser Leu Tyr Ile Asp Leu Ile Thr Ala His Asn Ala Pro Lys Ser 35 40 45 gaa gag aat tgc ttt gaa tat tac aat gag cgt aat gag ccc acg ttt 192 Glu Glu Asn Cys Phe Glu Tyr Tyr Asn Glu Arg Asn Glu Pro Thr Phe 50 55 60 tct tcc ttt gga ttt gaa ggg ttt gag aca gag cgg tct agc gcc tct 240 Ser Ser Phe Gly Phe Glu Gly Phe Glu Thr Glu Arg Ser Ser Ala Ser 65 70 75 80 ctt gaa aat ata tat gct cag tat att tat gat gat cca atc tat ggt 288 Leu Glu Asn Ile Tyr Ala Gln Tyr Ile Tyr Asp Asp Pro Ile Tyr Gly 85 90 95 tat gaa cat gtg tat tct ttt ggt agt act ggc gag gga cat ttt atc 336 Tyr Glu His Val Tyr Ser Phe Gly Ser Thr Gly Glu Gly His Phe Ile 100 105 110 tgt ttt gat tat cgt gat gat cca aaa ggt gat gaa ccc aaa atc tgt 384 Cys Phe Asp Tyr Arg Asp Asp Pro Lys Gly Asp Glu Pro Lys Ile Cys 115 120 125 atc gtg att cac gat gaa tat 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Ile Asp Glu Glu Tyr Val Leu Tyr Ser Val Phe Phe Phe Leu Val Glu 65 70 75 80 Val Asp Asn Tyr Phe Ser Cys Pro Phe Ile His Glu Leu Ile Cys Asp 85 90 95 Leu Lys His Gly Phe Ser Ile Glu Asp Ile Ile Arg Phe Leu Gly Glu 100 105 110 Pro Asn Phe Lys Gly Ser Gly Trp Val Arg Tyr Ser Tyr Asn Gly Arg 115 120 125 Asn Ile His Phe Glu Phe Asn Glu Ser Asn Glu Leu Ser Gln Ile Ser 130 135 140 Ile Phe Ile 145 <210> 57 <211> 8498 <212> DNA <213> Pasteurella multocida <220> <223> unknown C <400> 57 gaattcgaat taagcgagaa aattgctgaa acactagaac aaagtcaatt aaatattagt 60 caattatcaa ttgttgaaat ttatcctttc aatgaagaac aagggatacg ttttcataat 120 aaaagtgtgg tacaacttaa accagaagag gtggaatggt catcaatcca ttatcttttc 180 tttgctggcg atattcagca agtcgctcat ctcgcgaaag ccgcagaaat gggttgcgtg 240 gtgattgata tgaaagggat ttgtgccagc ttgcaagacg tccctgtggt gataccggga 300 gtaaatcagg aaaaattggt agatttacgt cagcgtaata ttgtgtcctt agccgatcca 360 caagtgacac aacttgcatt agtcatcgcc tcgttgatgt caaatcacga aatcaaagac 420 attgccgtaa cctcgttatt 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cgtgaaagta gaatgggttc tggatagaaa 8040 tggtaaagtg ttgactctat tttgttaatt ttctgtgtct ttttgtaaaa aataagttgt 8100 tgaaataaca tttttctcta taatcaaatc ttaatgataa ttaatatcat taaataagaa 8160 tggatactta gatgaggatt atatgaaaga tttatcaaaa atgacctgcc ttgaagactt 8220 acgccgtgtt gcgcaacgta aagtgccaaa aatgttttat gactatgtag tttcaggatc 8280 ttggagcgaa agcacattgc atgccaaccg taatgatttt caagcaatta agctacgtcg 8340 acctgtggcg attttgccca tttctgcatt cagctctgca attcgtcgct tgtgctgttc 8400 tgttgcgcgc gcaagctctc ttgtcgactt gccttttcta attgggcttg ttgctcccaa 8460 taacgtgagg tcgccacatc cactttacgt agtgttga 8498 <210> 58 <211> 5798 <212> DNA <213> Pasteurella multocida <220> <221> CDS <222> (2686)..(4446) <220> <223> unknown D1 <400> 58 gtcgacaaga ataaaacgaa acagcaaata gaattagaat tactacttat taacaataat 60 ccttttttaa agattctagc tgttttagat aaaaatatac gtgtgaagct tttggtcaca 120 ttattattat caggcctata ttatttatat gcagtaaaaa acgattcaaa ttttgtcata 180 ggtttatcta ttattttagt ttttattatt gtcattccag ggattttgac aaatgctatt 240 ttgaaagcta 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tggtgccgtt agtatttatt cctgagtctt ggtctcaagt 1980 agtgctgaac cgtgaatttg ttgttgtaca ggaatttgag cgttctcaat ttatgttagg 2040 agcaaaacca agttctcttg ggacgaatcc atagaaaatt tactcattat ttcgagctat 2100 atatgaaaga gtcaggttta gttaaattca agcatttttg gaaaaataaa aagggcgcag 2160 tgacgataga gttccttttt atgtcaatgt ttctgattgt gctatttgca tttctcttcg 2220 atttagtaat gttacgttct acattaggca agttagataa tgcctcatat acattagtta 2280 gtattctccg tgaacgtaca cagttgtacg atagagttgc acaaattaat attgatgatc 2340 ataagcaatt tgaaaagctt gctaagaaac tgatttatgg tgatcagaat agtaataaaa 2400 ggatcgatgt tgttttagaa tattgggcac aagacggttc tggacggagg attccaaata 2460 tcattggcga ttgtacgcct tacaaaaaac tttctgattt atcctattta tctcctcgct 2520 cagaactcaa taatgaaaga aaaataccgc tttatcaaat tactctttgt gttgaaactc 2580 agggcttgtt tgaaacaata ttactggata agtctgagcg ttcaacgggg ctgattagat 2640 catcgtcaat gtcagtatca cgataaatta tcgttaggga acttt atg aaa aaa ctt 2697 Met Lys Lys Leu 1 tat tta att cgt tct tgc tat gat tca gtc aga aaa ttt tat gag aat 2745 Tyr Leu Ile Arg Ser Cys Tyr Asp Ser Val Arg Lys Phe Tyr Glu Asn 5 10 15 20 gag cta ggt gtt tat aca gta atg act gca tta cta gca ttt cca tta 2793 Glu Leu Gly Val Tyr Thr Val Met Thr Ala Leu Leu Ala Phe Pro Leu 25 30 35 tta gtt ttg att gga ttt acg gtt gat gga act ggg gtt gtg ctt gat 2841 Leu Val Leu Ile Gly Phe Thr Val Asp Gly Thr Gly Val Val Leu Asp 40 45 50 aaa gca cgt tta gct caa gga atg gat caa gct gct tta gct ttg gtt 2889 Lys Ala Arg Leu Ala Gln Gly Met Asp Gln Ala Ala Leu Ala Leu Val 55 60 65 gct gaa aac aat gac tac cga gaa aat aaa aaa cat ggt gat gtt aat 2937 Ala Glu Asn Asn Asp Tyr Arg Glu Asn Lys Lys His Gly Asp Val Asn 70 75 80 cgg caa gta gta tcg cct caa gac aaa gca aaa ttt ggt ggt aat gaa 2985 Arg Gln Val Val Ser Pro Gln Asp Lys Ala Lys Phe Gly Gly Asn Glu 85 90 95 100 ttt atg gcg aaa caa gaa aag cgt aat caa gag ctt atc cag ggt att 3033 Phe Met Ala Lys Gln Glu Lys Arg Asn Gln Glu Leu Ile Gln Gly Ile 105 110 115 gcc aaa ctt tat tta cgt tca gaa aat gcg aat gct tca tct gat gca 3081 Ala Lys Leu Tyr Leu Arg Ser Glu Asn Ala Asn Ala Ser Ser Asp Ala 120 125 130 cca atc act att gat aaa cct ttt cat tat tca tgt gag gag tta gat 3129 Pro Ile Thr Ile Asp Lys Pro Phe His Tyr Ser Cys Glu Glu Leu Asp 135 140 145 tta cct aca gct aat gag tat gca cgt cgt aaa cct att gtt tgt gaa 3177 Leu Pro Thr Ala Asn Glu Tyr Ala Arg Arg Lys Pro Ile Val Cys Glu 150 155 160 gtg caa ggt ggc gtc aat cgt aaa ttt tgg ctt cct gtc agt gaa tcg 3225 Val Gln Gly Gly Val Asn Arg Lys Phe Trp Leu Pro Val Ser Glu Ser 165 170 175 180 tta gtt agt gaa gat aaa ctg aaa aaa gat cga gtt aga ctg gaa tcc 3273 Leu Val Ser Glu Asp Lys Leu Lys Lys Asp Arg Val Arg Leu Glu Ser 185 190 195 gat acc agt tat gcg att aaa gaa aaa ggc atc gtg att cct gtg gag 3321 Asp Thr Ser Tyr Ala Ile Lys Glu Lys Gly Ile Val Ile Pro Val Glu 200 205 210 cta atg ctt gtt tcg gat tat tct ggt tcg atg aat agt cat tta cag 3369 Leu Met Leu Val Ser Asp Tyr Ser Gly Ser Met Asn Ser His Leu Gln 215 220 225 gat aaa aac ggt aga tct cta gga aaa gct aaa att act att 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ggg agc tct aga act tgt caa att 3753 His Ser Ser Thr Cys Arg Gly Ser Gly Ser Ser Arg Thr Cys Gln Ile 345 350 355 gat gca aat cct aag aaa att atg gat tat gca cta aaa att aat gac 3801 Asp Ala Asn Pro Lys Lys Ile Met Asp Tyr Ala Leu Lys Ile Asn Asp 360 365 370 tgg acg aca att aga gaa tta ttt aat act tat ata gat gta agt ggg 3849 Trp Thr Thr Ile Arg Glu Leu Phe Asn Thr Tyr Ile Asp Val Ser Gly 375 380 385 acg att gac caa att tcc cag ttt gat ggt tca aac aga cgt tat gat 3897 Thr Ile Asp Gln Ile Ser Gln Phe Asp Gly Ser Asn Arg Arg Tyr Asp 390 395 400 atg gtg ttt act gat gaa gaa cgg tgt ctt ggc gga aat att ggt aga 3945 Met Val Phe Thr Asp Glu Glu Arg Cys Leu Gly Gly Asn Ile Gly Arg 405 410 415 420 aga aca act cga gct tgg ttt gat caa aaa aat aaa gat att aca aga 3993 Arg Thr Thr Arg Ala Trp Phe Asp Gln Lys Asn Lys Asp Ile Thr Arg 425 430 435 gag ttg aat att gtt cgt cct tct ggt tgg act tct gca tct tcg ggg 4041 Glu Leu Asn Ile Val Arg Pro Ser Gly Trp Thr Ser Ala Ser Ser Gly 440 445 450 ctt ctt gtt gga gct aat atc atg atg gac gag aat aag aat cct gat 4089 Leu Leu Val Gly Ala Asn Ile Met Met Asp Glu Asn Lys Asn Pro Asp 455 460 465 gcg caa cct tcg aaa ctc ggg aca aat att caa cgt gtt atc tta gta 4137 Ala Gln Pro Ser Lys Leu Gly Thr Asn Ile Gln Arg Val Ile Leu Val 470 475 480 tta tct gat ggt gaa gat aac tgg cca act tat agt aca tta acg act 4185 Leu Ser Asp Gly Glu Asp Asn Trp Pro Thr Tyr Ser Thr Leu Thr Thr 485 490 495 500 ctt tta aac aat ggt atg tgt gac aaa att cga gaa caa ttg ggc aag 4233 Leu Leu Asn Asn Gly Met Cys Asp Lys Ile Arg Glu Gln Leu Gly Lys 505 510 515 tta caa gat cca aat tta cga gag tta cca gga aga att gcg ttt gtt 4281 Leu Gln Asp Pro Asn Leu Arg Glu Leu Pro Gly Arg Ile Ala Phe Val 520 525 530 gcg ttt ggc tat agt cca cca gca aac caa gtt gcc gct tgg aaa aaa 4329 Ala Phe Gly Tyr Ser Pro Pro Ala Asn Gln Val Ala Ala Trp Lys Lys 535 540 545 tgt gta ggt gat caa tat tat acg gct tat tcg aaa gaa gag ttg tta 4377 Cys Val Gly Asp Gln Tyr Tyr Thr Ala Tyr Ser Lys Glu Glu Leu Leu 550 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cgtcaatcgt aaattttggc ttcctgtcag tgaatcgtta 3228 gttagtgaag ataaactgaa aaaagatcga gttagactgg aatccgatac cagttatgcg 3288 attaaagaaa aaggcatcgt gattcctgtg gagctaatgc ttgtttcgga ttattctggt 3348 tcgatgaata gtcatttaca ggataaaaac ggtagatctc taggaaaagc taaaattact 3408 attttaagag aagtggttag tgaaatttcg aaaattttat tgccagaaga tgttagcgaa 3468 ggtgtgagcc ctttcaaccg tattggcttt acgacttttt ctggcggtgt tagacaacgg 3528 gatgtcactg aaggctgtgt gcttccatat gaaggaaaaa tatcacaaac ttctcgaaaa 3588 ttaactattc gttattggat tacgggtaat aatacacctt ggaaatttaa tgctgggaga 3648 tgggagagaa gtacagtgtc tttccaggag cattataaag gctattatga caaattccat 3708 tcttcaactt gtagaggctc agggagctct agaacttgtc aaattgatgc aaatcctaag 3768 aaaattatgg attatgcact aaaaattaat gactggacga caattagaga attatttaat 3828 acttatatag atgtaagtgg gacgattgac caaatttccc agtttgatgg ttcaaacaga 3888 cgttatgata tggtgtttac tgatgaagaa cggtgtcttg gcggaaatat tggtagaaga 3948 acaactcgag cttggtttga tcaaaaaaat aaagatatta caagagagtt gaatattgtt 4008 cgtccttctg gttggacttc tgcatcttcg gggcttcttg ttggagctaa tatcatgatg 4068 gacgagaata agaatcctga tgcgcaacct tcgaaactcg ggacaaatat tcaacgtgtt 4128 atcttagtat tatctgatgg tgaagataac tggccaactt atagtacatt aacgactctt 4188 ttaaacaatg gtatgtgtga caaaattcga gaacaattgg gcaagttaca agatccaaat 4248 ttacgagagt taccaggaag aattgcgttt gttgcgtttg gctatagtcc accagcaaac 4308 caagttgccg cttggaaaaa atgtgtaggt gatcaatatt atacggctta ttcgaaagaa 4368 gagttgttag atagtttcaa acaaattatt ggatttgaag aagaggtggg gcgttcttca 4428 tctcataaac cgaaatttta agattgtcca aggataacgc taaaaaatct cttagcacag 4488 gctaagagat ttttttatgt gtttttcaaa ttttatctac tggtgatttt aattcattac 4548 ataacataac tttttcgtga ataatacaga atagacaaca ataagaatta aaacgctcaa 4608 ggcatagagg cttagtcgaa caaactaagc tattttgcgc gattgattgg gatatagatg 4668 ttatttcaaa taagcaataa ccatggtact gagaaagaag atgagtgccg taataaagta 4728 gaagcgattt ttcttttggc tgaaaggtgg tgttagcctt tttcggctaa agaaaatagt 4788 agcaacggca atataaaggg cgataaagag cattttgtaa atgaaccatg ttgttacatt 4848 ttgctgaaaa agaagaaata gcccaattcc cgaacagaac aacagcgtat cacttaagtg 4908 cggtaagatt tttaatactt ttctgtctcg ccaatttttg cctgttaatt gcatcatgcc 4968 acggataata aatagactga ggctgagaaa ggcacaggca atgtgtagat aaataagata 5028 atatgccatc gatttttttc ctaagataaa gaaagcagta gcgaggctac tgctttaaaa 5088 taatatcgta tttagtgaat gaatttaact ttctgcgctt tcgaccgcac tttcgctcgc 5148 atcactctca atgtcttctt catcgacatc acaaacgagt tgtaatccaa ccagtgtttc 5208 actttcactt gttcggatga gacgtactcc ttgtgtattt cgaccgataa tattgatttc 5268 gtttacgcga gtacgtacta gcgtaccggc atcagtaatg agcataattt gatcgctttc 5328 ctcaacttgt gttgctgcaa cgactttacc gttacgctca ctcactttaa tcgagatcac 5388 gcctttggtg ttacgtgatt tagttgggta ttccgctaat tcagtacgtt taccataacc 5448 gttttgtgtg gcggttaaaa tggcgccttc attttttgga ataacaagtg acacgacttt 5508 atcaatattg agatccaagg catcattagt attctcatca gagatctctt ccatatcgac 5568 cgcactttca tcatccgaca aatcattcgt taacgccagt ttaataccgc gtacacctgt 5628 tgctgcacgc cccatggcac gcacagcatt ttcactaaag cgaactacac gtccttgtgc 5688 ggagaagagc atgatttcat 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Asn Leu Ala Met Leu Asn Ile Ile Asn Gly Asp Phe Asn Asn Ala Val 180 185 190 Ser Leu Leu Leu Pro Gln Tyr Leu Asn Gly Val Lys Asn Ser Arg Leu 195 200 205 Ile His Asn Leu Val Phe Ala Leu Val Lys Asn Gly Asp Leu Asp Tyr 210 215 220 Ala Lys Asp Ile Ile Val Lys Glu Arg Leu Asn Thr Ser Pro Asp Asp 225 230 235 240 Leu Ile Asn Ala Leu Lys Lys Thr Thr His Val Ser Lys Gly Val Thr 245 250 255 Arg <210> 62 <211> 1788 <212> DNA <213> Pasteurella multocida <220> <221> CDS <222> (1)..(600) <220> <223> unknown K <400> 62 gtc aac act ggg cta att cac agt aac ggt aat gcc aag ctc act ttt 48 Val Asn Thr Gly Leu Ile His Ser Asn Gly Asn Ala Lys Leu Thr Phe 1 5 10 15 aaa gat gac acc agt ttt gtg act gaa gga aat aac ttt atc aca gca 96 Lys Asp Asp Thr Ser Phe Val Thr Glu Gly Asn Asn Phe Ile Thr Ala 20 25 30 aaa gac aac tta gaa atc acg gca aaa aat gtt caa att gat caa gcg 144 Lys Asp Asn Leu Glu Ile Thr Ala Lys Asn Val Gln Ile Asp Gln Ala 35 40 45 aaa aat att caa tta aac gcg aat atc acg atc aat acc aag tct ggt 192 Lys Asn Ile Gln Leu Asn Ala Asn Ile Thr Ile Asn Thr Lys Ser Gly 50 55 60 ttt gtg aat tac ggt acc tta gca agt gct caa aat tta acg att aat 240 Phe Val Asn Tyr Gly Thr Leu Ala Ser Ala Gln Asn Leu Thr Ile Asn 65 70 75 80 acc gaa caa ggc agc att tat aac ata ggc ggt atc ttg ggg gcg ggt 288 Thr Glu Gln Gly Ser Ile Tyr Asn Ile Gly Gly Ile Leu Gly Ala Gly 85 90 95 aaa agt ttg aat ctg agc gcg aaa aga gga gaa aac caa gga gga tat 336 Lys Ser Leu Asn Leu Ser Ala Lys Arg Gly Glu Asn Gln Gly Gly Tyr 100 105 110 ctt att aat caa ggt aag agt cta ctc cat tct gaa ggc gcc atg aac 384 Leu Ile Asn Gln Gly Lys Ser Leu Leu His Ser Glu Gly Ala Met Asn 115 120 125 ctc aca gcg gat cgc acg gtg tac aat tta ggg aat att ttt gct aaa 432 Leu Thr Ala Asp Arg Thr Val Tyr Asn Leu Gly Asn Ile Phe Ala Lys 130 135 140 ggt gac gcg acg atc aat gca aac gcg tta att aat gat gtt act ctc 480 Gly Asp Ala Thr Ile Asn Ala Asn Ala Leu Ile Asn Asp Val Thr Leu 145 150 155 160 aca ggt cgt ctt gag tat caa gat ctg aaa aaa gat tat acg cgt 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gcataagaat gcttacgcgt agggattaaa ccttccacca 1230 cgacaatttc attgtttttg gcgagttgtt gatgattttc aacaattttt tctagtacca 1290 catcagattg attttgaccg atgagtgatt cagctacact taacataaat ggttcactgg 1350 tttcaatggt ggtactggtg cgaataattg atgttgtgcg atcaatcata tcttcacctg 1410 agttcggctg agaaattggt ttcataaagc cgactttcgc ccctttttgc tccagtgcat 1470 gtgttaaacc taagctgaca ctggttaagc ctacaccagc actaatcggg ataaggataa 1530 ttgtacgtga cataataaac cctaatttgt tgataattta tacaaaaaga aactgccgat 1590 gaatcggcag ttaattgatc tttacgcgat gcaaaggcgc gcggtatctt gtgcaataac 1650 aagttcttca ttcgttggga tcaccatggc aacaggcgta ttgtctgctg taatcacccc 1710 ttcatgacca aagcgagccg ctttgttttt atctgaatcc acttgataac cgaacagttt 1770 taaatggttt aaggttga 1788 <210> 63 <211> 200 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 63 Val Asn Thr Gly Leu Ile His Ser Asn Gly Asn Ala Lys Leu Thr Phe 1 5 10 15 Lys Asp Asp Thr Ser Phe Val Thr Glu Gly Asn Asn Phe Ile Thr Ala 20 25 30 Lys Asp Asn Leu Glu Ile Thr Ala Lys Asn Val Gln Ile Asp Gln Ala 35 40 45 Lys Asn Ile Gln Leu Asn Ala Asn Ile Thr Ile Asn Thr Lys Ser Gly 50 55 60 Phe Val Asn Tyr Gly Thr Leu Ala Ser Ala Gln Asn Leu Thr Ile Asn 65 70 75 80 Thr Glu Gln Gly Ser Ile Tyr Asn Ile Gly Gly Ile Leu Gly Ala Gly 85 90 95 Lys Ser Leu Asn Leu Ser Ala Lys Arg Gly Glu Asn Gln Gly Gly Tyr 100 105 110 Leu Ile Asn Gln Gly Lys Ser Leu Leu His Ser Glu Gly Ala Met Asn 115 120 125 Leu Thr Ala Asp Arg Thr Val Tyr Asn Leu Gly Asn Ile Phe Ala Lys 130 135 140 Gly Asp Ala Thr Ile Asn Ala Asn Ala Leu Ile Asn Asp Val Thr Leu 145 150 155 160 Thr Gly Arg Leu Glu Tyr Gln Asp Leu Lys Lys Asp Tyr Thr Arg Tyr 165 170 175 Tyr Arg Ile Asn Glu Thr Ala Lys His Gly Trp His Asn Asn Phe Tyr 180 185 190 Glu Leu Asn Val Asp Arg Val Ser 195 200 <210> 64 <211> 278 <212> DNA <213> Pasteurella multocida <220> <221> CDS <222> (108)..(278) <220> <223> unknown O <400> 64 gaattccaac caaatctcac accagagcaa gaacgctaca tagtggaatg gttggcagaa 60 cattacccaa atggaaataa accttaacca tagcaagaga gaagaaa atg aaa att 116 Met Lys Ile 1 act 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Ile Ser Val Thr Leu Val Lys Asp Ile Ile Glu Ala 115 120 125 atc aat gcg aag tgg cgt gat tac acc aca aaa ggc tac tta att ggc 432 Ile Asn Ala Lys Trp Arg Asp Tyr Thr Thr Lys Gly Tyr Leu Ile Gly 130 135 140 ggt aaa gcg tgg ctt aat aaa gag ctt aac agt gca acg aat tta aaa 480 Gly Lys Ala Trp Leu Asn Lys Glu Leu Asn Ser Ala Thr Asn Leu Lys 145 150 155 160 gat gcg aag ttg ttg atc tct tat gat tat cac cca gta cca ccg ctc 528 Asp Ala Lys Leu Leu Ile Ser Tyr Asp Tyr His Pro Val Pro Pro Leu 165 170 175 gaa cag cta ggc ttt aat cag tac att tct gat gaa tac ctt gtt gat 576 Glu Gln Leu Gly Phe Asn Gln Tyr Ile Ser Asp Glu Tyr Leu Val Asp 180 185 190 ttt tca aat cgt tta gca tcg taaggggtag aaaatggctt taccacgcaa 627 Phe Ser Asn Arg Leu Ala Ser 195 acttaaattg atgaatttaa tcatcgacgg taacaaatat ctcggcgaag tcacggaagt 687 gactcaacca aaattagcaa tgaaaatcga agaatttcgc gcgggcggta tgattggttc 747 ggtggatgtc aatctcgggc ttgaaaagct cgaagcggaa tttaaagccg gtggctacat 807 ggtcgaatta attaaaaaat tcggcgggtc aatcaacggc 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Leu Ala Val Cys Tyr Trp His Thr Phe Cys Trp Thr Gly Asn Asp 45 50 55 atg ttc ggt gtc ggt tct ttc gat cgt tgt tgg cag aag gcg agt gat 1263 Met Phe Gly Val Gly Ser Phe Asp Arg Cys Trp Gln Lys Ala Ser Asp 60 65 70 tca tta gca ggt gca aaa caa aaa gca gat atc gct ttt gaa ttt ttc 1311 Ser Leu Ala Gly Ala Lys Gln Lys Ala Asp Ile Ala Phe Glu Phe Phe 75 80 85 90 agt aaa tta ggc ata cct tat tat tgt ttt cat gat gtt gat gtt gcg 1359 Ser Lys Leu Gly Ile Pro Tyr Tyr Cys Phe His Asp Val Asp Val Ala 95 100 105 cca gaa ggt cat tca ttt aaa gaa tat ttg tcg aac ttt aat aca atg 1407 Pro Glu Gly His Ser Phe Lys Glu Tyr Leu Ser Asn Phe Asn Thr Met 110 115 120 atc gat gtt tta gcg cag aaa caa gaa gaa aca ggc gtc aaa ttg ttg 1455 Ile Asp Val Leu Ala Gln Lys Gln Glu Glu Thr Gly Val Lys Leu Leu 125 130 135 tgg ggg act gca aat tgt ttt aca cac cct cgt tat atg tct ggt gct 1503 Trp Gly Thr Ala Asn Cys Phe Thr His Pro Arg Tyr Met Ser Gly Ala 140 145 150 gca aca aat ccg aat cca gaa att ttt gct tgg gct gct gca caa gta 1551 Ala Thr Asn Pro Asn Pro Glu Ile Phe Ala Trp Ala Ala Ala Gln Val 155 160 165 170 ttt act gcc atg ggg gca act cag cgt tta ggt ggt gaa aat tat gtt 1599 Phe Thr Ala Met Gly Ala Thr Gln Arg Leu Gly Gly Glu Asn Tyr Val 175 180 185 ttg tgg gga gga cgt gaa gga tat gaa acg tta tta aat acc aat tta 1647 Leu Trp Gly Gly Arg Glu Gly Tyr Glu Thr Leu Leu Asn Thr Asn Leu 190 195 200 aaa cag gag cga gag caa att gga cgt ttc atg caa atg gtg gtt gag 1695 Lys Gln Glu Arg Glu Gln Ile Gly Arg Phe Met Gln Met Val Val Glu 205 210 215 cat aaa tat aaa atc ggt ttt aac ggg act ttg ctg att gaa cca aag 1743 His Lys Tyr Lys Ile Gly Phe Asn Gly Thr Leu Leu Ile Glu Pro Lys 220 225 230 cca caa gag cca acg aaa cat caa tat gac tat gat gtg gcg acc gtt 1791 Pro Gln Glu Pro Thr Lys His Gln Tyr Asp Tyr Asp Val Ala Thr Val 235 240 245 250 tat ggc ttt tta aag cag ttt ggt tta gaa aaa gaa att aaa gtg aat 1839 Tyr Gly Phe Leu Lys Gln Phe Gly Leu Glu Lys Glu Ile Lys Val Asn 255 260 265 att gaa gct aat cac gca aca tta gct gga cac act ttc cag cat gaa 1887 Ile Glu Ala Asn His Ala Thr Leu Ala Gly His Thr Phe Gln His Glu 270 275 280 gtc gcc atg gct aca gcg tta gat att ttt ggt tct att gat gca aat 1935 Val Ala Met Ala Thr Ala Leu Asp Ile Phe Gly Ser Ile Asp Ala Asn 285 290 295 cgt ggt gat cca caa tta ggt tgg gat acc gat caa ttc cct aat agc 1983 Arg Gly Asp Pro Gln Leu Gly Trp Asp Thr Asp Gln Phe Pro Asn Ser 300 305 310 gta gaa gaa aat act ttg gtc ata tat gaa att ctc aaa gca ggg ggc 2031 Val Glu Glu Asn Thr Leu Val Ile Tyr Glu Ile Leu Lys Ala Gly Gly 315 320 325 330 ttt aca acc ggt ggt ttt aat ttt gat gct aaa atc cgt cgg cag agt 2079 Phe Thr Thr Gly Gly Phe Asn Phe Asp Ala Lys Ile Arg Arg Gln Ser 335 340 345 acg gat cct tac gat tta ttt cat gga cat att ggc gcg att gat gta 2127 Thr Asp Pro Tyr Asp Leu Phe His Gly His Ile Gly Ala Ile Asp Val 350 355 360 ctt gcc tta tca cta aaa tgt gcg gcg aaa atg ctt gaa gag caa gct 2175 Leu Ala Leu Ser Leu Lys Cys Ala Ala Lys Met Leu Glu Glu Gln Ala 365 370 375 tta caa aaa gtc gtc aat caa cgt tat gct ggt tgg aca tca tca ctt 2223 Leu Gln Lys Val Val Asn Gln Arg Tyr Ala Gly Trp Thr Ser Ser Leu 380 385 390 ggt caa ctt gtt caa atc cgg tcc tac cac gcg tgt ctg caa tac aga 2271 Gly Gln Leu Val Gln Ile Arg Ser Tyr His Ala Cys Leu Gln Tyr Arg 395 400 405 410 cta aca aaa gtg ctt taaaacgttc cggcttacgc cagacatcta gacgattgaa 2326 Leu Thr Lys Val Leu 415 taatttcaat attgtctccg cacgtaattc aaaggctttg tgtatgtgcg aatgatattc 2386 acaacaaagt tctgcaaaat cttgaattgc gtgaggtaat ttaaagcgct gacataagcg 2446 tcttgtcggc atgacaccag ctttttcatg tccataatga tgtggcaata tttcttttgg 2506 tgttaaggct tttcctaaat catgacaaat tgcagcaaaa cgtaccgcac ttttgtcact 2566 gtccgtgttt tctgtcga 2584 <210> 69 <211> 415 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 69 Met Ser Thr Tyr Phe Asp Lys Ile Glu Lys Val Asn Tyr Glu Gly Val 1 5 10 15 Thr Ser Ser Asn Pro Phe Ala Tyr Lys His Tyr Asp Ala Asn Gln Val 20 25 30 Ile Leu Gly Lys Thr Met Ala Glu His Leu Arg Leu Ala Val Cys Tyr 35 40 45 Trp His Thr Phe Cys Trp Thr Gly Asn 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Gly Lys Lys Leu Ile Leu Lys 85 90 95 tta ttt tca ctg act ttt gtg tta cct gcc tta gtg gcg att ttt ggt 633 Leu Phe Ser Leu Thr Phe Val Leu Pro Ala Leu Val Ala Ile Phe Gly 100 105 110 tta tta ggc gtg tat ggc gct tct ggc tgg tta gcg atg tta agc cag 681 Leu Leu Gly Val Tyr Gly Ala Ser Gly Trp Leu Ala Met Leu Ser Gln 115 120 125 ttt ttc gct tgg gat tgg act cct aat att tac ggc tta aca ggt att 729 Phe Phe Ala Trp Asp Trp Thr Pro Asn Ile Tyr Gly Leu Thr Gly Ile 130 135 140 tta ctg gcg cat ctt ttt ttt aat gtc cca tta gct tgt cgc ctg ttt 777 Leu Leu Ala His Leu Phe Phe Asn Val Pro Leu Ala Cys Arg Leu Phe 145 150 155 160 tta caa ggt ttg caa gca att ccg gtg caa caa cgt cag ctc gcg gca 825 Leu Gln Gly Leu Gln Ala Ile Pro Val Gln Gln Arg Gln Leu Ala Ala 165 170 175 caa ctc aat tta cgt ggt tgg cat ttt ata cgt ctg att gag tgg ccc 873 Gln Leu Asn Leu Arg Gly Trp His Phe Ile Arg Leu Ile Glu Trp Pro 180 185 190 tat tta cgc cag caa ttg tta cct gca ttt act ttg att ttc atg ctg 921 Tyr Leu Arg Gln Gln Leu Leu 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Leu Leu Asn Thr Leu Val Ser Ala Leu Leu Ser Ser Gln Phe 305 310 315 320 ttt acc ttg tgg tta caa cct caa tta tgg aaa gca tta ggt tac tcg 1305 Phe Thr Leu Trp Leu Gln Pro Gln Leu Trp Lys Ala Leu Gly Tyr Ser 325 330 335 ctc acc atc gcc ccc act tct gca ttg ctc gct tta gta ctg tct ttt 1353 Leu Thr Ile Ala Pro Thr Ser Ala Leu Leu Ala Leu Val Leu Ser Phe 340 345 350 gcc tta tta ttg ctt gcc aga gaa tta cat tgg cga cat tat cgc agc 1401 Ala Leu Leu Leu Leu Ala Arg Glu Leu His Trp Arg His Tyr Arg Ser 355 360 365 tta tcc cat gtg att tta aat atc ggt gcg acc att tta gcc att cca 1449 Leu Ser His Val Ile Leu Asn Ile Gly Ala Thr Ile Leu Ala Ile Pro 370 375 380 acg tta gtg tta gct att ggt tta ttc att tta tta cgt gag atc gat 1497 Thr Leu Val Leu Ala Ile Gly Leu Phe Ile Leu Leu Arg Glu Ile Asp 385 390 395 400 ttt tct cca tac cat ctt ttt ggg gtt gtg gta tgc tgt aac gcg tta 1545 Phe Ser Pro Tyr His Leu Phe Gly Val Val Val Cys Cys Asn Ala Leu 405 410 415 gct gct atg cct ttt gtg ttg cgt att ttg gct tta ccg 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taatttaaac ggtgttcagt tttcctataa 1935 Arg His Gln Glu Pro Arg Asp Asp 530 535 tacctttact tttgagctgg atttgcagat tcctgctcaa caaaaagttg ctattattgg 1995 cgccagtggc gcagggaaga gtaccttatt aaatttgatt gcgggttttg cattgccaca 2055 gcaaggggaa atttggttga atggtgaaaa tcatagccaa actcaacctt atgaacgtcc 2115 ggtatctatt ttgtttcaag aaaacaactt gtttacgcat ttgactgtgg cagagaatat 2175 ggcattaggg ctgaaaccaa gcctaaaact gaccgcactt gaacaacaac gcgtacaaca 2235 agtggcaagt gcagtgggtt tgcagggttt tcttaatcaa ttacccaccc agttatcggg 2295 tgggcaaaaa cagcgtgtgg cgttggcgcg ttgtttatta cgcgataagc caattttgtt 2355 attggatgaa cctttttctg ccttagatcc cgatttacgg gcagaaatgt tgcatttatt 2415 gttacagttg tgtgatgaaa aaaaattaac actcctgatc gtgacacatc aagtgaacga 2475 attacagcag aaaatggatc gtatgattcg ttttgaacat ggtaggatga gtgagtccac 2535 cattttgaag gataatttta acgaaaaaca gaccgcactt taggcggctt attaattaga 2595 taaggaaaga gaaaaatatg acaacggcaa cggcatttga gattcgtaca cttactcctc 2655 acccgacctt agaatattgg tctgtgtgta aaattgaagc cctgtttgag accccttttt 2715 tagatttggt ttatcgggct gcgcaagtgc accgagaaaa ctttaatcct aaagccattc 2775 aattatccac tttaatgtcg attaaaacgg ggggatgtcc agaggattgt ggctactgtc 2835 cgcagtcagc acgttatcat actggagtag aaaagcagca attactcgat gtggaagaaa 2895 ttgttgaaaa agccaaaatt gccaaagcac gtggtgcagg gcgcttttgt atgggggctg 2955 catggcgtgg accgaaaccg aaagacattg aaaaagttac cgcaatcatt aaagcggtga 3015 aagaactggg cttagaaacc tgtggtacct ttggtttatt gcaagatggg atggcagaag 3075 atttaaaaga agcgggtttg gattattata accataatct cgatacagcc ccagaacact 3135 acggtaatgt gattggtacc cgtcaatttg atgatcgtat taatacgtta ggtaaagtgc 3195 gtaaagctgg cttaaaagtg tgctgtggcg ggattattgg catgaatgaa acccgtaaag 3255 aaagagcagg attaattgct agcttagcta atttagaccc gcaacccgaa tcggtgccga 3315 ttaatcaatt agtgaaagtg gaaggtaccc ctttagccga tgcggcagaa ttagactgga 3375 cagaatttgt gcgcactatt gcggtggcgc gtattaccat gccgaaaagc tatgtacgtt 3435 tatcagcagg gcgtcaaggc atgtcggaag aaatgcaagc catgtgcttt atggctggcg 3495 cgaatt 3501 <210> 71 <211> 536 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 71 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taaggagtaa 1080 aacatgctta tttctaaata tttattatgg ctctgtaata agctagatca aatattcatt 1140 aaagtaggtt attacgtttc ttatattttt ctattagttg ttatcattgg ttttacgagg 1200 ttgttgctcg gtatttattc tctagcccaa cactttgggt tcatgaagta acaacatttt 1260 taataagtct atcattactt tatggtggag tagcttgtta cgccagtaat aaacatattg 1320 ccatgacatt tattagacaa aaattaccta ataagatcaa atggttacta gaactcttag 1380 ttgaaatact tatttttatc ttctttattt tgcttagtta cggagcatac ttatcagcta 1440 gagaagcatt atttactcca tcaggaaaat tcaaaatgca aacttctgga agtgtattag 1500 acatgccatt tccagcaatt gaaaaaagtt tcttctttat ttc atg cct cat cat 1555 Met Pro His His 1 tgt tgt tct ttc agt act aca tat att ccg tca cat cta tac aaa ata 1603 Cys Cys Ser Phe Ser Thr Thr Tyr Ile Pro Ser His Leu Tyr Lys Ile 5 10 15 20 tca gga gga att atc atg ata agt gca ttt ggg ata ggt att gga act 1651 Ser Gly Gly Ile Ile Met Ile Ser Ala Phe Gly Ile Gly Ile Gly Thr 25 30 35 ctt att atc ttt tta atg atg att tcc ctt tta ttt att gga atg cca 1699 Leu Ile Ile Phe Leu Met Met Ile Ser Leu Leu Phe Ile Gly Met Pro 40 45 50 tta ggt ttt ctc act ggg tta atc gct tta gtt att tca tat ctt tgg 1747 Leu Gly Phe Leu Thr Gly Leu Ile Ala Leu Val Ile Ser Tyr Leu Trp 55 60 65 ttt gat act acc gca ata atg caa atg ata gct tca cgt gtc act gat 1795 Phe Asp Thr Thr Ala Ile Met Gln Met Ile Ala Ser Arg Val Thr Asp 70 75 80 ttc aca tca tct tac act ttt gta gct gtg cct atg ttt gtt ctt atg 1843 Phe Thr Ser Ser Tyr Thr Phe Val Ala Val Pro Met Phe Val Leu Met 85 90 95 100 gca aca tta ctt gat aag act gga att gct aga gat ctc tac aac gca 1891 Ala Thr Leu Leu Asp Lys Thr Gly Ile Ala Arg Asp Leu Tyr Asn Ala 105 110 115 atg cga gtc att ggc ggt cga tta cga ggt gga att gca att caa tcg 1939 Met Arg Val Ile Gly Gly Arg Leu Arg Gly Gly Ile Ala Ile Gln Ser 120 125 130 atg ttt gtt gca gtt cta ctt gct acg atg tca ggt att atc ggt gga 1987 Met Phe Val Ala Val Leu Leu Ala Thr Met Ser Gly Ile Ile Gly Gly 135 140 145 gaa act gtt tta tta ggc atg ttg gca tta cca caa atg tta cgc tta 2035 Glu Thr Val Leu Leu Gly Met Leu Ala Leu Pro Gln Met Leu Arg Leu 150 155 160 ggc tat aat aaa aac tta gct ata gga act gtt gta gca gga gga gca 2083 Gly Tyr Asn Lys Asn Leu Ala Ile Gly Thr Val Val Ala Gly Gly Ala 165 170 175 180 ttg ggt aca atg gtt cct cca agt atc gtg ttg att att tac gga atg 2131 Leu Gly Thr Met Val Pro Pro Ser Ile Val Leu Ile Ile Tyr Gly Met 185 190 195 acc gca aat gtt tct att gga gaa cta ttt ctt gca gca att cca gcc 2179 Thr Ala Asn Val Ser Ile Gly Glu Leu Phe Leu Ala Ala Ile Pro Ala 200 205 210 tcc tta cta ctt tct aca ttc tat att tta tat att cta gta ctt tgc 2227 Ser Leu Leu Leu Ser Thr Phe Tyr Ile Leu Tyr Ile Leu Val Leu Cys 215 220 225 tac ttc aaa cct agc tat ggc cct gca atg cct agc tca gaa aat cat 2275 Tyr Phe Lys Pro Ser Tyr Gly Pro Ala Met Pro Ser Ser Glu Asn His 230 235 240 aca tta acg aaa gaa gat att aaa aaa att att cat gat att gca att 2323 Thr Leu Thr Lys Glu Asp Ile Lys Lys Ile Ile His Asp Ile Ala Ile 245 250 255 260 cca gta gct atc gcc aca tgg att tta gga agt att tat ggc ggg ata 2371 Pro Val Ala Ile Ala Thr Trp Ile Leu Gly Ser Ile Tyr Gly Gly Ile 265 270 275 gca tca atc act gaa tct gcc tgt gtt ggt gta gtt ggg gta ata tta 2419 Ala Ser Ile Thr Glu Ser Ala Cys Val Gly Val Val Gly Val Ile Leu 280 285 290 gca gca ttc tat cga aaa gaa tta aat ttc aaa ata gta caa gaa tca 2467 Ala Ala Phe Tyr Arg Lys Glu Leu Asn Phe Lys Ile Val Gln Glu Ser 295 300 305 cta aaa cat aca atc aat act gtt ggt atg ata atc tgg gtc ggc att 2515 Leu Lys His Thr Ile Asn Thr Val Gly Met Ile Ile Trp Val Gly Ile 310 315 320 ggc gca aca atg att ata ggt att tat aat cta atg ggt ggg gac cga 2563 Gly Ala Thr Met Ile Ile Gly Ile Tyr Asn Leu Met Gly Gly Asp Arg 325 330 335 340 ttt ata gct aac tta ttc gct agc tta gat gcc tct cca att tat act 2611 Phe Ile Ala Asn Leu Phe Ala Ser Leu Asp Ala Ser Pro Ile Tyr Thr 345 350 355 atc att att atg atg gtt att tta tta ata ctt ggt atg ttc tta gat 2659 Ile Ile Ile Met Met Val Ile Leu Leu Ile Leu Gly Met Phe Leu Asp 360 365 370 tgg att ggt gtt gcc atg ttg act ttc ctc aag aca agt aaa gcg aca 2707 Trp Ile Gly Val Ala Met Leu Thr Phe Leu Lys Thr Ser Lys Ala Thr 375 380 385 atc aat ttg tgt ttt gac ata gtc agg tac agt att tgg cgt ggt ccc 2755 Ile Asn Leu Cys Phe Asp Ile Val Arg Tyr Ser Ile Trp Arg Gly Pro 390 395 400 tcc ttc cac agt acc aat gtt cat cgt ggt acc ttt gtc ggg cgc ggt 2803 Ser Phe His Ser Thr Asn Val His Arg Gly Thr Phe Val Gly Arg Gly 405 410 415 420 act ttt tagtaaatct tgcgcgatac gaataaacgc attgatggca tttgctccgt 2859 Thr Phe tttgtggatc gactgccgca tgagcagatt tgccaaaaaa ttcaattaca tacttcccaa 2919 tcccttttct ttcgttaacg tttccactta gattgcccag aagccgatct gtctgaatgg 2979 gaacaagtgt tataccaaga agcgaatcca acaggtgaag tggtgatcgg tatggtgggt 3039 aaatacactg aattaccgga tgcctacaaa tcggttaatg aagccttgaa acacgcaggc 3099 ttaaaaaacc gtcttagcgt gcaaatcaaa tatattgatt cacaagatgt ggaaaccaaa 3159 ggcacagaag tgttagaagg cgt 3182 <210> 73 <211> 422 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 73 Met Pro His His Cys Cys Ser Phe Ser Thr Thr Tyr Ile Pro Ser His 1 5 10 15 Leu Tyr Lys Ile Ser 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Gly Pro Ala Met Pro Ser 225 230 235 240 Ser Glu Asn His Thr Leu Thr Lys Glu Asp Ile Lys Lys Ile Ile His 245 250 255 Asp Ile Ala Ile Pro Val Ala Ile Ala Thr Trp Ile Leu Gly Ser Ile 260 265 270 Tyr Gly Gly Ile Ala Ser Ile Thr Glu Ser Ala Cys Val Gly Val Val 275 280 285 Gly Val Ile Leu Ala Ala Phe Tyr Arg Lys Glu Leu Asn Phe Lys Ile 290 295 300 Val Gln Glu Ser Leu Lys His Thr Ile Asn Thr Val Gly Met Ile Ile 305 310 315 320 Trp Val Gly Ile Gly Ala Thr Met Ile Ile Gly Ile Tyr Asn Leu Met 325 330 335 Gly Gly Asp Arg Phe Ile Ala Asn Leu Phe Ala Ser Leu Asp Ala Ser 340 345 350 Pro Ile Tyr Thr Ile Ile Ile Met Met Val Ile Leu Leu Ile Leu Gly 355 360 365 Met Phe Leu Asp Trp Ile Gly Val Ala Met Leu Thr Phe Leu Lys Thr 370 375 380 Ser Lys Ala Thr Ile Asn Leu Cys Phe Asp Ile Val Arg Tyr Ser Ile 385 390 395 400 Trp Arg Gly Pro Ser Phe His Ser Thr Asn Val His Arg Gly Thr Phe 405 410 415 Val Gly Arg Gly Thr Phe 420 <210> 74 <211> 2787 <212> DNA <213> Pasteurella multocida <220> <221> CDS <222> (463)..(936) <220> <223> yhcJ <400> 74 gttaacacac catgattaat gatgccggtt gaagccactg caacgtaatc gaattgtccg 60 gcatacaaag caagaatgtt ggccagtgtg tcatgcatcg cattggcagc atcagcttgt 120 ggcgttgcaa tctgttggcg ttgttctatt ttgccgtctg ttacaatagc cgaggcaatt 180 tttgttccac caatatctaa tgctaaacag cgcataggct ctccttctgt gatgacttat 240 tttgccgatt tgacggcatc ggcaaaccag cttacgatat gttcgaggcg agtcagcgca 300 gatcctacgg tgacagagta agcaccaatc tcaattgcgg ttttcgccaa ttctggggtg 360 ttatagcgcc cttctgccat cactcggcag ccagcagcat tcaaatcttt gactaactga 420 taatccggtt cagctggaat ttcaccgcca gtataaccag ac atg gtg cta cca 474 Met Val Leu Pro 1 ata att tct acc cct aag ttg tgg caa tac atc cct tct tca aaa tta 522 Ile Ile Ser Thr Pro Lys Leu Trp Gln Tyr Ile Pro Ser Ser Lys Leu 5 10 15 20 gaa caa tcc gcc atg gct aaa caa cct aat tct ttg att cgt tta ata 570 Glu Gln Ser Ala Met Ala Lys Gln Pro Asn Ser Leu Ile Arg Leu Ile 25 30 35 atg gct tca cgt gta gtt gga cgg acg cga tcg gta cca tca aaa gca 618 Met Ala Ser Arg Val Val Gly Arg Thr Arg Ser Val Pro Ser Lys Ala 40 45 50 ata ata tcg gcg cct gct gcg gct aac tct tca atg tct tgt aaa aat 666 Ile Ile Ser Ala Pro Ala Ala Ala Asn Ser Ser Met Ser Cys Lys Asn 55 60 65 ggg cta ata cga acg gga ctg tca ggt aaa tcg cgt tta acg ata cca 714 Gly Leu Ile Arg Thr Gly Leu Ser Gly Lys Ser Arg Leu Thr Ile Pro 70 75 80 ata atc ggt aca ttg acg acg tta cgc gtg gct ttt aaa ttt tcg atc 762 Ile Ile Gly Thr Leu Thr Thr Leu Arg Val Ala Phe Lys Phe Ser Ile 85 90 95 100 cct tca ata cgt aac ccg gca gca cca ccg ata acg gat gct tgc gcc 810 Pro Ser Ile Arg Asn Pro Ala Ala Pro Pro Ile Thr Asp Ala Cys Ala 105 110 115 atg gcg gca aca att tct ggc gag tcc att ggc cca tta tct acg ggc 858 Met Ala Ala Thr Ile Ser Gly Glu Ser Ile Gly Pro Leu Ser Thr Gly 120 125 130 tgg caa gat gcg att aag cca tat tta att tgt tct aaa act tgc gga 906 Trp Gln Asp Ala Ile Lys Pro Tyr Leu Ile Cys Ser Lys Thr Cys Gly 135 140 145 tgt gat agt ttt gac ata tta act cca gtc taaatttatc aaaagaagat 956 Cys Asp Ser Phe Asp Ile Leu Thr Pro 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1796 attcaatttt gtgacgaacc tatcatttat gaaataaaac ttcattttct atataaaaaa 1856 tagttttttc actttagaat gccaaacgtg tgaaatttat ttcatcatca ttttaacgta 1916 atcccaacgt aaccaataga ggagaactca taatgaaatt taaaaaacta ctacttgcat 1976 ctttatgttt aggtgtttca gcttctgtat ttgcagcaga ttacgatctt aaattcggta 2036 tggttgcggg tccaagctca aacgaatata aagcagtaga attctttgcg aaagaagtga 2096 aagaaaaatc caatggcaaa attgatgtgg ctattttccc tagctcacag ttaggtgatg 2156 accgtgtgat gattaaacaa ttaaaagacg gtgcattaga ctttacgtta ggtgaatcag 2216 cacgtttcca aatttacttc ccagaagcag aagtatttgc gttgccttat atgattccta 2276 attttgaaac ctctaaaaaa gcgttgctcg acacaaaatt tggtcaaggt ttattgaaaa 2336 aaattgataa agagttaaac gtacaagtgt tatctgtggc gtataacggt acacgtcaaa 2396 caacttctaa ccgtgcaatc aacagcattg aagacatgaa agggttaaaa ttacgtgtac 2456 ctaacgcggc aaccaacctt gcttatgcaa aatacgtggg tgcagcgcca acaccaatgg 2516 cattctctga agtttacctt gcgcttcaaa caaactctgt ggatggtcaa gaaaacccat 2576 taccgacaat ccaagcacaa aaattctatg aagtacaaaa atacttagcg ttaactaacc 2636 acatcttaaa tgaccaactt tacttaatca gtaacgatac gttggcagat ttaccagaag 2696 atttacaaaa agtggttaaa gatgcagcag cgaaagccgc tgaatatcac actaaactct 2756 tcgttgacgg tgagaacagc ttagttgaat t 2787 <210> 75 <211> 158 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 75 Met Val Leu Pro Ile Ile Ser Thr Pro Lys Leu Trp Gln Tyr Ile Pro 1 5 10 15 Ser Ser Lys Leu Glu Gln Ser Ala Met Ala Lys Gln Pro Asn Ser Leu 20 25 30 Ile Arg Leu Ile Met Ala Ser Arg Val Val Gly Arg Thr Arg Ser Val 35 40 45 Pro Ser Lys Ala Ile Ile Ser Ala Pro Ala Ala Ala Asn Ser Ser Met 50 55 60 Ser Cys Lys Asn Gly Leu Ile Arg Thr Gly Leu Ser Gly Lys Ser Arg 65 70 75 80 Leu Thr Ile Pro Ile Ile Gly Thr Leu Thr Thr Leu Arg Val Ala Phe 85 90 95 Lys Phe Ser Ile Pro Ser Ile Arg Asn Pro Ala Ala Pro Pro Ile Thr 100 105 110 Asp Ala Cys Ala Met Ala Ala Thr Ile Ser Gly Glu Ser Ile Gly Pro 115 120 125 Leu Ser Thr Gly Trp Gln Asp Ala Ile Lys Pro Tyr Leu Ile Cys Ser 130 135 140 Lys Thr Cys Gly Cys Asp Ser Phe Asp Ile Leu Thr Pro Val 145 150 155 <210> 76 <211> 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1620 gaccaattaa gctgatattg gcaggtttgg aaaattccgc cattttgctc tgatagcgtt 1680 gataaatatc ctgatcactt agcatgtgtg gacctctatt ttgaaataaa acgctaagta 1740 ttatataaaa cctgatatgc cggtaaacag taaacttatc ttccgtaggg gtaaatattc 1800 aattttgtga cgaacctatc atttatgaaa taaaacttca ttttctatat aaaaaatagt 1860 tttttcactt tagaatgcca aacgtgtgaa atttatttca tcatcatttt aacgtaatcc 1920 caacgtaacc aatagaggag aactcata atg aaa ttt aaa aaa cta cta ctt 1972 Met Lys Phe Lys Lys Leu Leu Leu 1 5 gca tct tta tgt tta ggt gtt tca gct tct gta ttt gca gca gat tac 2020 Ala Ser Leu Cys Leu Gly Val Ser Ala Ser Val Phe Ala Ala Asp Tyr 10 15 20 gat ctt aaa ttc ggt atg gtt gcg ggt cca agc tca aac gaa tat aaa 2068 Asp Leu Lys Phe Gly Met Val Ala Gly Pro Ser Ser Asn Glu Tyr Lys 25 30 35 40 gca gta gaa ttc ttt gcg aaa gaa gtg aaa gaa aaa tcc aat ggc aaa 2116 Ala Val Glu Phe Phe Ala Lys Glu Val Lys Glu Lys Ser Asn Gly Lys 45 50 55 att gat gtg gct att ttc cct agc tca cag tta ggt gat gac cgt gtg 2164 Ile Asp Val Ala Ile Phe Pro Ser Ser Gln Leu Gly Asp Asp Arg Val 60 65 70 atg att aaa caa tta aaa gac ggt gca tta gac ttt acg tta ggt gaa 2212 Met Ile Lys Gln Leu Lys Asp Gly Ala Leu Asp Phe Thr Leu Gly Glu 75 80 85 tca gca cgt ttc caa att tac ttc cca gaa gca gaa gta ttt gcg ttg 2260 Ser Ala Arg Phe Gln Ile Tyr Phe Pro Glu Ala Glu Val Phe Ala Leu 90 95 100 cct tat atg att cct aat ttt gaa acc tct aaa aaa gcg ttg ctc gac 2308 Pro Tyr Met Ile Pro Asn Phe Glu Thr Ser Lys Lys Ala Leu Leu Asp 105 110 115 120 aca aaa ttt ggt caa ggt tta ttg aaa aaa att gat aaa gag tta aac 2356 Thr Lys Phe Gly Gln Gly Leu Leu Lys Lys Ile Asp Lys Glu Leu Asn 125 130 135 gta caa gtg tta tct gtg gcg tat aac ggt aca cgt caa aca act tct 2404 Val Gln Val Leu Ser Val Ala Tyr Asn Gly Thr Arg Gln Thr Thr Ser 140 145 150 aac cgt gca atc aac agc att gaa gac atg aaa ggg tta aaa tta cgt 2452 Asn Arg Ala Ile Asn Ser Ile Glu Asp Met Lys Gly Leu Lys Leu Arg 155 160 165 gta cct aac gcg gca acc aac ctt gct tat gca aaa tac gtg ggt gca 2500 Val Pro Asn Ala Ala Thr Asn Leu Ala Tyr Ala Lys Tyr Val Gly Ala 170 175 180 gcg cca aca cca atg gca ttc tct gaa gtt tac ctt gcg ctt caa aca 2548 Ala Pro Thr Pro Met Ala Phe Ser Glu Val Tyr Leu Ala Leu Gln Thr 185 190 195 200 aac tct gtg gat ggt caa gaa aac cca tta ccg aca atc caa gca caa 2596 Asn Ser Val Asp Gly Gln Glu Asn Pro Leu Pro Thr Ile Gln Ala Gln 205 210 215 aaa ttc tat gaa gta caa aaa tac tta gcg tta act aac cac atc tta 2644 Lys Phe Tyr Glu Val Gln Lys Tyr Leu Ala Leu Thr Asn His Ile Leu 220 225 230 aat gac caa ctt tac tta atc agt aac gat acg ttg gca gat tta cca 2692 Asn Asp Gln Leu Tyr Leu Ile Ser Asn Asp Thr Leu Ala Asp Leu Pro 235 240 245 gaa gat tta caa aaa gtg gtt aaa gat gca gca gcg aaa gcc gct gaa 2740 Glu Asp Leu Gln Lys Val Val Lys Asp Ala Ala Ala Lys Ala Ala Glu 250 255 260 tat cac act aaa ctc ttc gtt gac ggt gag aac agc tta gtt gaa tt 2787 Tyr His Thr Lys Leu Phe Val Asp Gly Glu Asn Ser Leu Val Glu 265 270 275 <210> 77 <211> 279 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 77 Met Lys Phe Lys Lys Leu Leu Leu Ala Ser Leu Cys Leu Gly Val Ser 1 5 10 15 Ala Ser Val Phe Ala Ala Asp Tyr Asp Leu Lys Phe Gly Met Val Ala 20 25 30 Gly Pro Ser Ser Asn Glu Tyr Lys Ala Val Glu Phe Phe Ala Lys Glu 35 40 45 Val Lys Glu Lys Ser Asn Gly Lys Ile Asp Val Ala Ile Phe Pro Ser 50 55 60 Ser Gln Leu Gly Asp Asp Arg Val Met Ile Lys Gln Leu Lys Asp Gly 65 70 75 80 Ala Leu Asp Phe Thr Leu Gly Glu Ser Ala Arg Phe Gln Ile Tyr Phe 85 90 95 Pro Glu Ala Glu Val Phe Ala Leu Pro Tyr Met Ile Pro Asn Phe Glu 100 105 110 Thr Ser Lys Lys Ala Leu Leu Asp Thr Lys Phe Gly Gln Gly Leu Leu 115 120 125 Lys Lys Ile Asp Lys Glu Leu Asn Val Gln Val Leu Ser Val Ala Tyr 130 135 140 Asn Gly Thr Arg Gln Thr Thr Ser Asn Arg Ala Ile Asn Ser Ile Glu 145 150 155 160 Asp Met Lys Gly Leu Lys Leu Arg Val Pro Asn Ala Ala Thr Asn Leu 165 170 175 Ala Tyr Ala Lys Tyr Val Gly Ala Ala Pro Thr Pro Met Ala Phe Ser 180 185 190 Glu Val Tyr Leu Ala Leu Gln Thr Asn Ser Val Asp Gly Gln Glu Asn 195 200 205 Pro Leu Pro Thr Ile Gln Ala Gln Lys Phe Tyr Glu Val Gln Lys Tyr 210 215 220 Leu Ala Leu Thr Asn His Ile Leu Asn Asp Gln Leu Tyr Leu Ile Ser 225 230 235 240 Asn Asp Thr Leu Ala Asp Leu Pro Glu Asp Leu Gln Lys Val Val Lys 245 250 255 Asp Ala Ala Ala Lys Ala Ala Glu Tyr His Thr Lys Leu Phe Val Asp 260 265 270 Gly Glu Asn Ser Leu Val Glu 275 <210> 78 <211> 2590 <212> DNA <213> Pasteurella multocida <220> <221> CDS <222> (908)..(1294) <220> <223> yigF <400> 78 ctgcaggctc gattagtggg gcaccgaaag aaaaaaccgt gcaaattatt cacgccgcag 60 aacagcagcc acgcggttat tacacgggga tttttggtct gttcgatggt gagtcgttac 120 aaagtgcggt ggcaattcgt tttattgagc aagtggacga gaaattgatt ttccgcagcg 180 gtggcgggat tacgatctta agcgagctag aagacgagta ccaagaattg atccaaaaag 240 tgtatgtacc agtaggataa gcgatgacat ttcctttatt tgagacgatc gctattgtga 300 acggtgaaat tcagcacctt gccctgcatc aacaacgtta tgcggcaagt ttggcgacct 360 tttacggcga gaaaggagcg aaagtacagg atcttgcgaa aattattcag attccgaccg 420 cacttgaaca cactcaacat gcgccgataa tccgttgtcg gattgattac aatcagcaag 480 actgtgacgt gcattatttt ccctatcaac gcaaaattta ccgcactttt cagcctgtca 540 tttgcgatga aattaactat gatctgaaat atgctgatcg ggcattatta aatcagttat 600 ttgctcagcg tagggattgt gatgagatta tgattatcaa acacggcaag gtgacggatt 660 gcagtattgg taatctggtg tttcgccaag gtgagcaatg gttcacgcca gatagcccgt 720 tattttacgg cacacaacga gcctggttat tacaacaagg caaaattcaa gcccgttcca 780 tcttattgca agagatcgca caatttgaag aaattcggtt aattaatgca ctaaatccgc 840 tgtaaatttt ccttgaacag cgtaaaataa aacaactttt tcagtcagat aaaaggagat 900 aaacgac atg acg aaa gta att cat act gac aat gca cca gcc gcc att 949 Met Thr Lys Val Ile His Thr Asp Asn Ala Pro Ala Ala Ile 1 5 10 ggt cct tat gta caa gcg gta gat tta ggt aat atg ctg tta acc tct 997 Gly Pro Tyr Val Gln Ala Val Asp Leu Gly Asn Met Leu Leu Thr Ser 15 20 25 30 ggg caa att cca gtg aat cca aaa acc ggt gaa gtg cca gcg gat atc 1045 Gly Gln Ile Pro Val Asn Pro Lys Thr Gly Glu Val Pro Ala Asp Ile 35 40 45 gta gca caa gca cgt caa tcg tta gaa aac gtg aaa gcg att gtg gaa 1093 Val Ala Gln Ala Arg Gln Ser Leu Glu Asn Val Lys Ala Ile Val Glu 50 55 60 caa gcg gga tta caa gtc gca aat atc gtg aaa acc acg gtg ttt gtg 1141 Gln Ala Gly Leu Gln Val Ala Asn Ile Val Lys Thr Thr Val Phe Val 65 70 75 aaa gat tta aat gac ttt gca gcg gtc aat gcg gag tat gaa cgt ttc 1189 Lys Asp Leu Asn Asp Phe Ala Ala Val Asn Ala Glu Tyr Glu Arg Phe 80 85 90 ttt aaa gag aac aat cac cct agc ttc cct gct cgt tca tgt gtg gaa 1237 Phe Lys Glu Asn Asn His Pro Ser Phe Pro Ala Arg Ser Cys Val Glu 95 100 105 110 gtg gca cgt ttg ccg aaa gat gtg ggg att gaa atc gag gca atc gct 1285 Val Ala Arg Leu Pro Lys Asp Val Gly Ile Glu Ile Glu Ala Ile Ala 115 120 125 gta aaa gcc taatgaatag cttgcattta tcttagtcgt agcaaaacaa 1334 Val Lys Ala tctcttttca cttgctctct tcaaagcaag ttgataagtg atttttattg ggcgtttttc 1394 tattgatagc caaaaacgcc ctttactgat agagaataaa ctatgcaaaa tcaagtcatc 1454 gagattctac aataccgttt aaaaccacaa tcaggacaaa cgtttcacca aattatgcgt 1514 gagatcagtg ttccactcca taaacaacat gggattgatg tcattgcgta tggaaattca 1574 ttacatgata ttgacagcta 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cctagcgcaa gcaaacaagc cacagaaatc gctaaagtga 2474 cattacccaa gactgccact gtttgcgagc gaaacacatc gatcagcagt tgagctaatt 2534 gcagattaac ggatttgcct tgtccattat ccaccgtttc tgcaaaacgt gctgca 2590 <210> 79 <211> 129 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 79 Met Thr Lys Val Ile His Thr Asp Asn Ala Pro Ala Ala Ile Gly Pro 1 5 10 15 Tyr Val Gln Ala Val Asp Leu Gly Asn Met Leu Leu Thr Ser Gly Gln 20 25 30 Ile Pro Val Asn Pro Lys Thr Gly Glu Val Pro Ala Asp Ile Val Ala 35 40 45 Gln Ala Arg Gln Ser Leu Glu Asn Val Lys Ala Ile Val Glu Gln Ala 50 55 60 Gly Leu Gln Val Ala Asn Ile Val Lys Thr Thr Val Phe Val Lys Asp 65 70 75 80 Leu Asn Asp Phe Ala Ala Val Asn Ala Glu Tyr Glu Arg Phe Phe Lys 85 90 95 Glu Asn Asn His Pro Ser Phe Pro Ala Arg Ser Cys Val Glu Val Ala 100 105 110 Arg Leu Pro Lys Asp Val Gly Ile Glu Ile Glu Ala Ile Ala Val Lys 115 120 125 Ala <210> 80 <211> 6642 <212> DNA <213> Pasteurella multocida <220> <221> CDS <222> (463)..(1884) <220> <223> yleA <400> 80 aacccagctc agataagttt aattctggct atggaaagtg gaccaaatcc ttcgatctcc 60 caggtttcta aggcgcgata cgggcaaata cgagtatttt cgatatactg ccaagcacct 120 agttgtttta agagattaac ggaagcaaca ctgatcgcag aaatgcgaag atcgtaaggc 180 gaattaggtt gaaactgtgg gagtggggcg tgttcgataa gctggacttg atgtccttgt 240 ttacgtaagc caagcgcaca ggctgcacca accatgccac cgccaaccac gatcatgtct 300 ttttgtatga cgtccatagg attttccttt tctttttgtt acgtattcta ccgtcaatga 360 gggaatttca aaagaaatct cttttttagc tagccagcat aggttcaaga ctgtaaaata 420 gtcagtcaca tttttatagg ttaactgaat tttttaaacg at atg acg caa aaa 474 Met Thr Gln Lys 1 tta cat att aaa acg tgg ggt tgt cag atg aat gaa tat gat tca tct 522 Leu His Ile Lys Thr Trp Gly Cys Gln Met Asn Glu Tyr Asp Ser Ser 5 10 15 20 aaa atg gca gat ctc tta aac agt act cac ggc tta gag tta aca gaa 570 Lys Met Ala Asp Leu Leu Asn Ser Thr His Gly Leu Glu Leu Thr Glu 25 30 35 att ccg gaa gaa gcg gat gtg tta ttg tta aac act tgc tca att cgt 618 Ile Pro Glu Glu Ala Asp Val Leu Leu Leu Asn Thr Cys Ser Ile Arg 40 45 50 gaa aaa gca caa gaa aaa gtt ttc cat caa tta gga cgt tgg aaa gaa 666 Glu Lys Ala Gln Glu Lys Val Phe His Gln Leu Gly Arg Trp Lys Glu 55 60 65 tta aag aaa cat aag ccg gga ctc gtt atc ggt gtt ggg ggc tgt gtt 714 Leu Lys Lys His Lys Pro Gly Leu Val Ile Gly Val Gly Gly Cys Val 70 75 80 gcc tca caa gaa gga gaa cac att cgt act cgt gct cct tat gtc gat 762 Ala Ser Gln Glu Gly Glu His Ile Arg Thr Arg Ala Pro Tyr Val Asp 85 90 95 100 att att ttt gga cca caa acc tta cat cgt tta cct gaa atg atc aat 810 Ile Ile Phe Gly Pro Gln Thr Leu His Arg Leu Pro Glu Met Ile Asn 105 110 115 cag atc aga ggt ggt aaa agc tca gta gtc gat gtc agt ttt cca gaa 858 Gln Ile Arg Gly Gly Lys Ser Ser Val Val Asp Val Ser Phe Pro Glu 120 125 130 att gaa aaa ttc gac cgt tta cca gaa ccg cgt gca gaa ggt cca act 906 Ile Glu Lys Phe Asp Arg Leu Pro Glu Pro Arg Ala Glu Gly Pro Thr 135 140 145 gct ttc gta tcc att atg gaa ggc tgt aat aaa tat tgc tca ttc tgt 954 Ala Phe Val Ser Ile Met Glu Gly Cys Asn Lys Tyr Cys Ser Phe Cys 150 155 160 gtc gtg cct tat acg cgt ggt gaa gaa gtc agt cgt cca gtg gat gat 1002 Val Val Pro Tyr Thr Arg Gly Glu Glu Val Ser Arg Pro Val Asp Asp 165 170 175 180 gta tta ttt gaa att gca cag ttg gca gag caa ggc gtg cgt gaa gtg 1050 Val Leu Phe Glu Ile Ala Gln Leu Ala Glu Gln Gly Val Arg Glu Val 185 190 195 aat tta tta gga caa aac gtg aac gct tat cgt ggt gca act cat gat 1098 Asn Leu Leu Gly Gln Asn Val Asn Ala Tyr Arg Gly Ala Thr His Asp 200 205 210 gac ggt att tgt act ttt gcg gaa ttg tta cgt tta gta gcc gct att 1146 Asp Gly Ile Cys Thr Phe Ala Glu Leu Leu Arg Leu Val Ala Ala Ile 215 220 225 gat ggt att gac cgt tta cgt ttt acc acc agt cac cca att gag ttc 1194 Asp Gly Ile Asp Arg Leu Arg Phe Thr Thr Ser His Pro Ile Glu Phe 230 235 240 act gat gac att att gat gtg tac cgt gat acg cca gag ttg gtg agt 1242 Thr Asp Asp Ile Ile Asp Val Tyr Arg Asp Thr Pro Glu Leu Val Ser 245 250 255 260 ttc tta cac tta cct gta caa agt ggt tct gat cgt gtg tta tct atg 1290 Phe Leu His Leu Pro Val Gln Ser Gly Ser Asp Arg Val Leu Ser Met 265 270 275 atg aaa cgc aat cat acg gca tta gaa tat aaa tcg att att cgg aag 1338 Met Lys Arg Asn His Thr Ala Leu Glu Tyr Lys Ser Ile Ile Arg Lys 280 285 290 tta aga gcg gtg cgt cca gag att caa att agc tca gat ttt att gtc 1386 Leu Arg Ala Val Arg Pro Glu Ile Gln Ile Ser Ser Asp Phe Ile Val 295 300 305 ggt ttc ccg ggc gaa aca gca gaa gat ttc gag caa acc atg aat tta 1434 Gly Phe Pro Gly Glu Thr Ala Glu Asp Phe Glu Gln Thr Met Asn Leu 310 315 320 att gca caa gta aat ttt gat atg agt ttc agc ttc att tat tca gca 1482 Ile Ala Gln Val Asn Phe Asp Met Ser Phe Ser Phe Ile Tyr Ser Ala 325 330 335 340 cgt cca ggc acg cca gca gca gat atg cct gat gat gtg aca gaa gaa 1530 Arg Pro Gly Thr Pro Ala Ala Asp Met Pro Asp Asp Val Thr Glu Glu 345 350 355 gag aag aaa caa cgt tta tat gtg ttg caa caa cgc att aac aat caa 1578 Glu Lys Lys Gln Arg Leu Tyr Val Leu Gln Gln Arg Ile Asn Asn Gln 360 365 370 gcc gcg caa ttt agt cga gca atg tta ggc aca gaa cag cgc gtg tta 1626 Ala Ala Gln Phe Ser Arg Ala Met Leu Gly Thr Glu Gln Arg Val Leu 375 380 385 gtg gaa gga ccc tcg aaa aaa gat tta atg gaa ctc aca ggg cgt aca 1674 Val Glu Gly Pro Ser Lys Lys Asp Leu Met Glu Leu Thr Gly Arg Thr 390 395 400 gaa act aat cgt atc gtc aat ttt gtg ggc acg cct gat atg att ggg 1722 Glu Thr Asn Arg Ile Val Asn Phe Val Gly Thr Pro Asp Met Ile Gly 405 410 415 420 aag ttt gtt gat atc aag atc acg gat gtg ttt act aac tca ctg cgt 1770 Lys Phe Val Asp Ile Lys Ile Thr Asp Val Phe Thr Asn Ser Leu Arg 425 430 435 ggt gaa gtc gtt aga act gaa gaa caa atg gga ctt cgc gtt gtt caa 1818 Gly Glu Val Val Arg Thr Glu Glu Gln Met Gly Leu Arg Val Val Gln 440 445 450 tcg cca caa atg gtg att aat cgt act cgt aaa gaa gat gaa ctc ggc 1866 Ser Pro Gln Met Val Ile Asn Arg Thr Arg Lys Glu Asp Glu Leu Gly 455 460 465 gtg gga cgt tat cac gcg tagtcgtgct atcccttcaa atatttaacc 1914 Val Gly Arg Tyr His Ala 470 gctctcgagt ttctcaagag cggttatttt ttatgaaaaa tttttgataa attgaccgct 1974 ctttttattg cttcatttta tgatagacag cgtgttttct gttattcatc gtatttcttt 2034 ttatttcact tcattaataa attattaaat ttcaattgct tatcaaaatt gttgtttttt 2094 gctttttttc tatttatagc atggttattt tttatacaca catggcgtat ttctccatat 2154 ttttacaaaa aactgtgact tcactctaac tattgttctc tcgtgcttta ctccatttta 2214 taaggcggtt agtttagatc atgttgtttt tacaacatat tttgaggttg tttgaaggtt 2274 gagcttattt tatagttgag gtgatgatga aaaaatttaa tcctagtata ttggcgttgt 2334 ccatatcaag tctgctactc acatccacat tgacctttgg tcaaatccag caacaagata 2394 aagcactctt tggtgtgaaa gaacatcaag aaagcctact ctttcatcag agcttagtag 2454 aacaaggtag tgataatgtg ccaatttggc gcattccgtc tttattaaga acaaaagacg 2514 gtgtattaat tgccgccgca gataagcgtt ggcaacaccg tggtgactgg ggcgatattg 2574 ataccgcaat ccgaattagt catgatgatg ggaaaacatg gggaaatatt acaacgattt 2634 tggatttgcc atcaaagaat ggggaaaaat ccccatcagc accagatcct gtaacattca 2694 acgcgtgggg agatagacaa aattgtacaa cttactgtaa ttctgctttt ttgatcgatg 2754 ctcagatggt acaagataaa cgtaatggta gaattttttt agcagttgat atgtttgccg 2814 atggagcagg tttttttggt gtaaaagaca gtggtaatgg gcgcattaat attgatggta 2874 aacagtatcc tattttaaat gaaaagcaat cgggtcgaca ttgaaccctg tgttcttaac 2934 tctttcactt gctcaacgtt caccggaatc acgcggtcaa taaaagtcgg tttccagttt 2994 aaacccggtt gaacaatagc gtgtaattca ccaaaacgca tcaccacgcc acgttctgct 3054 tctttgacag tataaaaacc gctaacgccc cagacaattg caccaatcac cgctgcaatt 3114 ggcaataatt taccaagatt taacgatcca ccagaatgcg agttattgcg tttaccgcca 3174 ttccctgaac cgcctaattt tttcagcaga ttattaaaaa tctcttcaat atcaggtggt 3234 gattgctctt gattgttttg cttacgacct gactggttat cattccaatt cggctgaccg 3294 ccttcattat caggacgctg actctcaggt tttttctgtc cgggtttgcc ccaaggatct 3354 tgatctgaac cgttcaatga cattacgttc tccatttgtc aaaaaattgt tacttgttta 3414 aacaaattcc cacagtctaa acaaaatgtt ggattaagtc taacgaaact cgttactaaa 3474 tggggatatt ttttatgatt taaagtgccg ccaataaaaa cgcacaatgg tctcattttt 3534 acggcttact acctgacttt tgtcctatcg ctttgtcggt catgtttttt cattcacctt 3594 ataataaatg gcgtcgtgta aggtggtttc cgctaatatt cccctctgcc aagtaaaata 3654 gtgcacatct aagcactgtg tttggttaat aaaaaaagcc aagtaaaacg gcaagcggtg 3714 actaaagagg 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cattataaaa caaaaggcgg tagtgaaccg cctttatgtt gtatgccact 4614 tacttcaccg caatcattga gccaaaatta aagcattgaa accataattc cacttgttga 4674 aaaccgactt cagctaaacg cattttatgg gcttgaatgc tgtctgtacg catcacattt 4734 tcaagtgcgg tgcgtttttg gctgacttca agttcactgt atccattcgc gcgtttaaat 4794 tgatgatgta aatcaatcaa caaggcattc atgttttgat cttcaaaatg aaatttctcg 4854 gatagtacca agatcccatt cggttgtaag ccttggtaaa tcttacttaa taaggctcga 4914 cgatcttcag gtggcagaaa ttgcaaagtg aaatttaaaa ttaccatgaa ggcattttcg 4974 atttcgatat ggcgtatatc atcacaaata atgtccacag gtattgtact ttgataggca 5034 ctaacatgct ggcgacaacg atcgaccatg ggttgtgagt tatcaacacc aatgatcttg 5094 acgccgggtt gattaatatg acgacgtgca gataatgttg ccgcaccgcg cgagcacccc 5154 agatcataga cgttgctatt cgccgtaaca aagcgtgatg ccaacatccc aatagcggta 5214 atgatgttgg catagccggg aatagagcgt tggatcatgt cgggaaagac ttcagctacg 5274 ctttcatcaa aagtaaaatc ccccaattta gcaatgggga gtcgaaaata gagtatcttt 5334 tgtcataatg tattaaagac cgagaaaaag tgcggtcatt ttagaagaag tttcgaccta 5394 tcacaaataa 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cgctccttcc caaataactt ggtttggatg cacccattag atgcgaaaaa 120 acgtggttta cgtcatggcg ataaagtgaa gatcagctca cgtcgtggcg aaatgatttc 180 tcacttagat acccgtggac gtaataaagt cccacaaggc ttagtttaca ccactttctt 240 tgatgcaggt cagttagcaa actatctcac tttagatgcg acagacccaa tttcaaaaga 300 aacggacttc aaaaaatgtg cggtcaaagt ggaaaaagcg taacacgtta aatttaatga 360 ggaacgaccg cactttgctt tcagtaaagt gcggttggaa agtcga atg aaa aaa 415 Met Lys Lys 1 aca gtt gtg aat cct gaa cgt cgt cga ttt ttt aaa gag gct acg cgc 463 Thr Val Val Asn Pro Glu Arg Arg Arg Phe Phe Lys Glu Ala Thr Arg 5 10 15 act gca ggc ggg ttg gca ggg gtg act ttg ctc ctt ggt ttg caa caa 511 Thr Ala Gly Gly Leu Ala Gly Val Thr Leu Leu Leu Gly Leu Gln Gln 20 25 30 35 aag cag agt ctt gcg cgc gaa ggc gtg gcg tta cgc cca cct ttt gcc 559 Lys Gln Ser Leu Ala Arg Glu Gly Val Ala Leu Arg Pro Pro Phe Ala 40 45 50 ctt gag aat gag aaa gcg ttt tct gct gcg tgc att cgt tgt ggt cag 607 Leu Glu Asn Glu Lys Ala Phe Ser Ala Ala Cys Ile Arg Cys Gly Gln 55 60 65 tgt gta caa gcc tgt cca cat gag atg ttg cat ctt gcc tca ctg att 655 Cys Val Gln Ala Cys Pro His Glu Met Leu His Leu Ala Ser Leu Ile 70 75 80 tca ccg atg gaa gca ggt aca ccg tat ttc att gcg cgc gat aag ccc 703 Ser Pro Met Glu Ala Gly Thr Pro Tyr Phe Ile Ala Arg Asp Lys Pro 85 90 95 tgt gaa atg tgt gtg gat att cct tgt gca aaa gcc tgc cca acc ggt 751 Cys Glu Met Cys Val Asp Ile Pro Cys Ala Lys Ala Cys Pro Thr Gly 100 105 110 115 gca ttg gat aat caa gca aca gaa atc gat gat gcg cgt atg ggg tta 799 Ala Leu Asp Asn Gln Ala Thr Glu Ile Asp Asp Ala Arg Met Gly Leu 120 125 130 gct gtc ctg cta gat cat gaa act tgt ctg aac tgg caa ggt tta cgc 847 Ala Val Leu Leu Asp His Glu Thr Cys Leu Asn Trp Gln Gly Leu Arg 135 140 145 tgt gat gtg tgt tat cgc gtc tgt ccg ctg att aat aaa gcg att acg 895 Cys Asp Val Cys Tyr Arg Val Cys Pro Leu Ile Asn Lys Ala Ile Thr 150 155 160 tta gtg atg cat cgt aat gag cgt acg ggt aag cac gcc gtc ttt atc 943 Leu Val Met His Arg Asn Glu Arg Thr Gly Lys His Ala Val Phe Ile 165 170 175 cca aca gtg cat tcc gaa gcc tgt aca gga tgt ggc aaa tgt gaa gaa 991 Pro Thr Val His Ser Glu Ala Cys Thr Gly Cys Gly Lys Cys Glu Glu 180 185 190 195 gct tgc gtt cta gaa gaa gcg gca atc aaa gtg tta ccg atg gca tta 1039 Ala Cys Val Leu Glu Glu Ala Ala Ile Lys Val Leu Pro Met Ala Leu 200 205 210 gcg aaa ggc atg tta ggt aaa cat tac cgt tta ggt tgg gaa gag aaa 1087 Ala Lys Gly Met Leu Gly Lys His Tyr Arg Leu Gly Trp Glu Glu Lys 215 220 225 gaa aaa gcc ggg cat tcc ctt gcg cca gaa ggc att att tct ctc ccg 1135 Glu Lys Ala Gly His Ser Leu Ala Pro Glu Gly Ile Ile Ser Leu Pro 230 235 240 act cgg tta ccg gag agc ttg taatggcaaa ttcaccaaaa tatgcgggta 1186 Thr Arg Leu Pro Glu Ser Leu 245 250 aagaagcacg agaaaagtta ggctggtggt acgccaatcg ctttttgttc tggcgacgtt 1246 taacccagct gagtattctt gccatgtttt taagcggacc ttattttggg gtgtggatct 1306 tgaaaggcaa ttacagtagt agtcttttgc ttgatttgat cccgatgact gatcctttga 1366 ttatggcaga aagtctcgcg accggtttta tgcctaccat gaccgcgttg ttgggtgccc 1426 tgattgtggt ggtgctttat gccattttag ggagtcgcgt tttctgtgct tgggtttgtc 1486 cgttaaacat cgtgacagat gcgtccgctt ggctcagacg taaattagaa attcgtcaat 1546 cggcaaaact cccacgaagt ttacgctatg cgatcttagt gatgattttg ttaggcagtg 1606 cgctaagcgg gttattactt tgggaatggc tcaatccggt tgcagcacta ggtcgtgcgt 1666 taatttacgg tttcggtgcg acagtttggc ttgttcttgc ggtgttttta tttgatttat 1726 ttattgtcga gcatggttgg tgtgggcatt tatgcccaat aggtgcagcc tatggtgtga 1786 ttggtgcgaa aggacttttt cgtatcaaag ttgagcatcg ccaacaatgt gataattgca 1846 tggattgcta taacgtctgt ccagaaccac aagtgttacg cgatccatta catgcaaaaa 1906 agagtgaaag cccacttgtg ctttcaaaag attgtatcag ctgtggacgt tgtatcgacg 1966 tttgccctga aaaagtattt atttttacaa cacgatttaa tcattcagtt aatcattcgg 2026 gggagtgatc aaaatgaaaa aaacaatgct aattttgacc gcactttttg ccttcacggt 2086 caatgccaat gaagtcaaag tgggcaaaag tttacaagat tcacctgaaa atatcgcgcc 2146 agccttccac aatacaccaa aagaaagtgg cttggcgccg ttaaactatg tgaaccaacc 2206 accgatggtg ccacacgcga cgaaaaacta tcaggtgacg aaaaatatca accaatgttt 2266 aacttgtcat agcccagaag cctcacgtgt tactggtgca acacgcatca gtccaaccca 2326 ctttatggat cgtgatggta acattgtcgg aggcacctca cctcgccgtt acttctgttt 2386 acaatgccat gtctctcaat ctgatgttga gccgattatt caaaatgaat ttaaaccgat 2446 ggctggtttt ggtaaataag ttaaggacgg aactatgttg aacttaatta aacgcttttg 2506 gaaatggttt cgctcgccca gtcgtattgc cgttggtacc ttgattaccc ttgcttttat 2566 tgcaggtatt gtctcttggg ttgggtttaa ttatggctta gagcaaacca atacagagga 2626 attctgtgtt agttgtcaca gtaatgatgt gtatccagaa tatttacata cggcgcatta 2686 tttaaatcgc agtggagtaa aagccacttg tcctgattgc catgtaccgc acgaatttat 2746 tccaaaaatg atccgtaaag tccaagccag tcgagaagtg tatgcgcatc ttatgggtta 2806 tacggatacc attgataaat ttaactcccg tcgtttgcat atggcagaac gtgaatgggc 2866 acgattaaaa gccaataact cgcaggaatg ccgtaactgc cataactttg agaatatgga 2926 ttttagtcag caaaaaacgg tggcggaaaa aatgcatgca cttgctataa aagaagaaaa 2986 aacctgtatt gactgtcaca aagggattgc gcaccaatta ccggatatga gcggtgttga 3046 gtcgggtttt agtacggaac aaaaataaca cttttcttgt tctcccacag gaaatctgca 3106 tcgtattcag gtgcagattt ttttattttt acgatcatcc tcacaacctt ttcgctgata 3166 aataggatac aacgctagct acacgctatc ttgctgcttt ttgtgttgtt gtgagggatt 3226 atgtcatctt atctgcctct tttattacgt ttgttacaaa ttccgcgttt gggttcgctg 3286 gcgatccagc gtttattgga gcacatcagt ccagcggaat taatggaata tgatacaaaa 3346 gcctttcaac agataggctg gacggcacag cagattcagc gttggtttac gcctgagaac 3406 cgttatattg atcccgcgtt agcctgggta aacgaacaac aacatattgt ggattggttt 3466 gatcctcatt atcctccctt gttaaagcaa acagaagagg caccacttgt cttgtttgtg 3526 aaaggggaag tggctacgct atctgcacag caagtggcga tcgtgggcag tcgtcattgt 3586 tcacgttatg gggaatactg ggcaaattat ttcgccactc aactggctta tgccgatatt 3646 gtggtgacca gtggtttagc gttaggtatt gatggtttct cacatcaagc ggtagtggat 3706 atccacggga agacgattgc agtattaggc agtggtttag aggtcattta tccgaaaaaa 3766 caccgaggtt tagccgaaaa aattattgaa catcaaggtg cgttagtgtc tgaattttta 3826 cctttccaac cccctgtggc agaaaatttt ccacgtcgta atcgcattat tagtggttta 3886 tctttgggga cattagtcat tgaagcctca gaaaacagtg gttctttaat tactgcccgc 3946 tatgctttag agcaaaatcg agatgttttt 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Ser Ser Leu Gly Phe Leu Ile Leu Lys Thr Val Pro Ser Phe Ser 80 85 90 tac gtt aca atc tca aca ctt aat cgc gtt tgaccttccg atttttgata 2739 Tyr Val Thr Ile Ser Thr Leu Asn Arg Val 95 100 gtcaaagact actgagtaac gcttgtagtc gcgtgaatcg actgttacat aagccgatat 2799 gtcagaataa gtactgccgg tatatcgtct taatctaaga ttaagcttgc cacttttgtt 2859 cgataaagcg tcaaacgaaa gcacgacttt accgtccttg acttccacct gatcttcaat 2919 gagcacttga cttagtgcga ccaatcgacc gttggcagtc agtgtcgcaa tgccgtgatc 2979 cgtatcaagc gttacaccgc tattttttcc ccagttttta ttgagctttt cactatgttt 3039 cagtaagttt ctgccaccaa tctgcaactg attaaactta gcttcaagcg tttcactctt 3099 gactgcaagc gacttgtttt cattgctaac cgtctgctca agtgctgtga ttttggatgt 3159 taaatctaac ttagttgcat tgacttcatc agtccattct gactttaact cttttctcgc 3219 aagtgacgcc acttcatctt tgctagcttt cgtttctttt aagtcagaaa tgccactagt 3279 attttgcgcc actttagaat cgagcgtttc tagttttgta gagaaagatt tgtctttttc 3339 gctagccgtt ttttgaatta gctgtatttc actttcgctc aatccaactc tagcagttag 3399 actgtctagc ttgtcagcag tagatttatt cacagtcgct tgtgattgct tgtgttgaat 3459 aatatccgcg cttacttccg agatagccac gtcga 3494 <210> 85 <211> 103 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 85 Met Thr Lys Leu Ser Ile Gln Arg Asp Asn Leu Ile Cys Leu Ser Tyr 1 5 10 15 Val Ala Leu Met Gly Phe Gly Phe Pro Ile Met Arg Tyr Met Ser Ile 20 25 30 His Phe Asp Thr Leu Asn Asn Asn Ala Val Arg Phe Leu Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Val Phe Ile Leu Ala Cys Phe Phe Tyr Tyr Arg Ala Glu Leu Thr 50 55 60 Ser Ser Gly Ala Gly Val Gln Ser Val Ala Met Leu Pro Ser Ser Ser 65 70 75 80 Leu Gly Phe Leu Ile Leu Lys Thr Val Pro Ser Phe Ser Tyr Val Thr 85 90 95 Ile Ser Thr Leu Asn Arg Val 100 <210> 86 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: PRIMER <400> 86 aggccggtac cggccgcct 19 <210> 87 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: PRIMER <400> 87 cggccggtac cggcctagg 19 <210> 88 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: primer <400> 88 catggtaccc attctaac 18 <210> 89 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: primer <400> 89 ctaggtacct acaacctc 18 <210> 90 <211> 119 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: transposon insert <220> <221> misc_feature <222> 25 <223> n = A or T or G or C <220> <221> misc_feature <222> 25 <223> n = A or T or G or C <220> <221> misc_feature <222> 27 <223> n = A or T or G or C <220> <221> misc_feature <222> 29 <223> n = A or T or G or C <220> <221> misc_feature <222> 31 <223> n = A or T or G or C <220> <221> misc_feature <222> 33 <223> n = A or T or G or C <220> <221> misc_feature <222> 35 <223> n = A or T or G or C <220> <221> misc_feature <222> 37 <223> n = A or T or G or C <220> <221> misc_feature <222> 39 <223> n = A or T or G or C <220> <221> misc_feature <222> 41 <223> n = A or T or G or C <220> <221> misc_feature <222> 43 <223> n = A or T or G or C <220> <221> 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tacctacaac ctcaagctt 19 <210> 94 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: primer <400> 94 tacccattct aaccaagctt 20 <210> 95 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: primer <400> 95 ggcagagcat tacgctgac 19 <210> 96 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: primer <400> 96 gtaccggcca ggcggccacg cgtattc 27 <210> 97 <211> 531 <212> DNA <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <220> <223> atpG <400> 97 tgttgagctt ggtttagtag ggtcgaaagg cgtaagcttt taccaaaatc taggcttaaa 60 cgtgagatct caagtaacgg gattaggcga taatccggaa atggaacgta tcgtgggcgc 120 agttaatgaa atgattaatg cgttccgaaa cggagaagtg gatgcggttt acgtcgctta 180 caaccgtttt gaaaatacga tgtcacaaaa acctgttatc gcacagttac ttccgttacc 240 taaactagat gacgatgaat tagatacgaa aggttcatgg gattatattt atgaaccgaa 300 tccacaagtt ttattggata gtttacttgt tcgttattta gaaactcagg tataccaagc 360 agttgtagat aacctagctt 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Lys 35 40 45 tat aat gat gca aaa tta aaa ttt tat att ggc gat gtt cgt gac tac 192 Tyr Asn Asp Ala Lys Leu Lys Phe Tyr Ile Gly Asp Val Arg Asp Tyr 50 55 60 gat agt att tta aat gcc tcg cga ggt gtt gac tat att tat cat gct 240 Asp Ser Ile Leu Asn Ala Ser Arg Gly Val Asp Tyr Ile Tyr His Ala 65 70 75 80 gcc gca tta aag caa gtg cct tca tgc gag ttt tat ccg tta gag gca 288 Ala Ala Leu Lys Gln Val Pro Ser Cys Glu Phe Tyr Pro Leu Glu Ala 85 90 95 gtg aaa acc aat att tta ggt acg gca aat gtc tta gaa gcc gcc atc 336 Val Lys Thr Asn Ile Leu Gly Thr Ala Asn Val Leu Glu Ala Ala Ile 100 105 110 caa aac cag ata aaa cgc gtc gtc tgt ctt agc aca gat aaa gcg gtg 384 Gln Asn Gln Ile Lys Arg Val Val Cys Leu Ser Thr Asp Lys Ala Val 115 120 125 tac cca att aat gcg atg ggc att tct aaa gca atg atg gaa aaa gtc 432 Tyr Pro Ile Asn Ala Met Gly Ile Ser Lys Ala Met Met Glu Lys Val 130 135 140 atc atc gca aaa tcg cgt aac cta gaa ggc aca cca acg aca atc tgt 480 Ile Ile Ala Lys Ser Arg Asn Leu Glu Gly Thr Pro Thr Thr Ile Cys 145 150 155 160 tgt act cgc tat ggc aat gtc atg gca tcg cgt ggt tcg gtt atc cca 528 Cys Thr Arg Tyr Gly Asn Val Met Ala Ser Arg Gly Ser Val Ile Pro 165 170 175 tta ttt gtc gat caa ata cgt caa ggc aag cct ttt act att act gat 576 Leu Phe Val Asp Gln Ile Arg Gln Gly Lys Pro Phe Thr Ile Thr Asp 180 185 190 cct gag atg aca cgc ttt atg atg aca ttg gaa gat gct gtg gat tta 624 Pro Glu Met Thr Arg Phe Met Met Thr Leu Glu Asp Ala Val Asp Leu 195 200 205 gtc cta tat gca ttt aaa aat ggt caa aat ggt gat gtt ttt gta caa 672 Val Leu Tyr Ala Phe Lys Asn Gly Gln Asn Gly Asp Val Phe Val Gln 210 215 220 aaa gcc ccc gca gca acc att ggt acc ctt gcc aaa gca att acc gaa 720 Lys Ala Pro Ala Ala Thr Ile Gly Thr Leu Ala Lys Ala Ile Thr Glu 225 230 235 240 tta tta tct gtc cca aat cac cct att tcc att ata ggt acg cgt cat 768 Leu Leu Ser Val Pro Asn His Pro Ile Ser Ile Ile Gly Thr Arg His 245 250 255 gga gag aaa gca ttc gaa gct tta tta agc cgt gaa gaa atg gtt cat 816 Gly Glu Lys Ala Phe Glu Ala Leu Leu Ser Arg 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Leu Ser Arg Glu Glu Met Val His 260 265 270 Ala Ile Asn Glu Gly Asn Tyr Tyr Arg Ile Pro Ala Asp Gln Arg Ser 275 280 285 Leu Asn Tyr Ser Lys Tyr Val Glu Lys Gly Glu Pro Lys Ile Thr Glu 290 295 300 Val Thr Asp Tyr Asn Ser His Asn Thr Glu Arg Leu Thr Val Lys Glu 305 310 315 320 Met Lys Gln Leu Leu Leu Lys Leu Glu Phe Ile Gln Lys Met Ile Glu 325 330 335 Gly Glu Tyr Ile Ser Pro Glu Val 340 <210> 102 <211> 4931 <212> DNA <213> Pasteurella multocida <220> <223> fhaB2 <220> <221> CDS <222> (1)..(4929) <220> <221> misc_feature <222> 4894 <223> n = A or T or G or C <400> 102 atg aac aaa aat cgt tac aaa ctc att ttt agt caa gtc aaa ggt tgt 48 Met Asn Lys Asn Arg Tyr Lys Leu Ile Phe Ser Gln Val Lys Gly Cys 1 5 10 15 ctc gtt cct gtg gca gaa tgt att aac tca gct att agc aat ggt tca 96 Leu Val Pro Val Ala Glu Cys Ile Asn Ser Ala Ile Ser Asn Gly Ser 20 25 30 tct gat tca aca tcc aca tca gaa caa gtt gaa gag gaa cct ttc ctt 144 Ser Asp Ser Thr Ser Thr Ser Glu Gln Val Glu Glu Glu Pro Phe Leu 35 40 45 cta gaa caa tat tca ctt tcc tcc gtg tct tta tta gta aaa agc acg 192 Leu Glu Gln Tyr Ser Leu Ser Ser Val Ser Leu Leu Val Lys Ser Thr 50 55 60 ttc aat cct gtt tcg tat gca atg caa ttg act tgg aaa cag ctt tct 240 Phe Asn Pro Val Ser Tyr Ala Met Gln Leu Thr Trp Lys Gln Leu Ser 65 70 75 80 att tta ttt tta act gtg att tct gtt cct gtt ttg gct gag gga aaa 288 Ile Leu Phe Leu Thr Val Ile Ser Val Pro Val Leu Ala Glu Gly Lys 85 90 95 ggg gat gaa aga aat caa tta aca gtg att gat aat agc gat cat att 336 Gly Asp Glu Arg Asn Gln Leu Thr Val Ile Asp Asn Ser Asp His Ile 100 105 110 aaa tta gat gca tct aat ctt gct ggt aat gat aaa aca aaa atc tat 384 Lys Leu Asp Ala Ser Asn Leu Ala Gly Asn Asp Lys Thr Lys Ile Tyr 115 120 125 caa gca gaa aat aaa gtt ctg gtt att gat att gct aaa cca aat ggg 432 Gln Ala Glu Asn Lys Val Leu Val Ile Asp Ile Ala Lys Pro Asn Gly 130 135 140 aaa ggg att tca gat aac cgt ttt gaa aaa ttt aat att cca aat agc 480 Lys Gly Ile Ser Asp Asn Arg Phe Glu Lys Phe Asn Ile Pro Asn Ser 145 150 155 160 gcg gtg ttt aat aat aat ggg act gaa gcg cag gca aga tca aca tta 528 Ala Val Phe Asn Asn Asn Gly Thr Glu Ala Gln Ala Arg Ser Thr Leu 165 170 175 att ggt tac att ccg caa aat caa aat tta agg gga ggg aaa gaa gct 576 Ile Gly Tyr Ile Pro Gln Asn Gln Asn Leu Arg Gly Gly Lys Glu Ala 180 185 190 gat gtt ata tta aat caa gtg aca ggt cct caa gaa agt aaa att gtt 624 Asp Val Ile Leu Asn Gln Val Thr Gly Pro Gln Glu Ser Lys Ile Val 195 200 205 ggc gcg ctt gaa gta tta ggt aaa aaa gct gat atc gtc att gca aac 672 Gly Ala Leu Glu Val Leu Gly Lys Lys Ala Asp Ile Val Ile Ala Asn 210 215 220 caa aat ggt att acc tta aat ggt gta aga aca ata aat tca gat cgt 720 Gln Asn Gly Ile Thr Leu Asn Gly Val Arg Thr Ile Asn Ser Asp Arg 225 230 235 240 ttt gtt gcc act acg agt gag ctt ata gat ccg aat cag atg atg tta 768 Phe Val Ala Thr Thr Ser Glu Leu Ile Asp Pro Asn Gln Met Met Leu 245 250 255 aag gtt aca aaa gga aat gtg atc att gat att gat ggt ttt tcg aca 816 Lys Val Thr Lys Gly Asn Val Ile Ile Asp Ile Asp Gly Phe Ser 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Asn Asn Leu Ile Asn Asp Lys Glu Ile Tyr Ala 485 490 495 gaa cgg aaa ttg agt att ttg acg aaa gga aaa gat ctt gaa att att 1536 Glu Arg Lys Leu Ser Ile Leu Thr Lys Gly Lys Asp Leu Glu Ile Ile 500 505 510 caa gat aga tat ttg tct cca ctg atg cgc gta aaa agt agt gtc cgc 1584 Gln Asp Arg Tyr Leu Ser Pro Leu Met Arg Val Lys Ser Ser Val Arg 515 520 525 ttt tta ggc tct ccg ttt ttc tca ata tct ccg tcg atg ctc gca agc 1632 Phe Leu Gly Ser Pro Phe Phe Ser Ile Ser Pro Ser Met Leu Ala Ser 530 535 540 ctt agt gca cag ttt aag cct ggt ttt gtg aat aag gga ctc att gaa 1680 Leu Ser Ala Gln Phe Lys Pro Gly Phe Val Asn Lys Gly Leu Ile Glu 545 550 555 560 agt gcg ggg agt gca gaa tta act ttt aaa gaa aaa acc agt ttt tta 1728 Ser Ala Gly Ser Ala Glu Leu Thr Phe Lys Glu Lys Thr Ser Phe Leu 565 570 575 aca gag ggc aat aat ttt att aga gct aaa gat gcg tta act att aac 1776 Thr Glu Gly Asn Asn Phe Ile Arg Ala Lys Asp Ala Leu Thr Ile Asn 580 585 590 gcc caa aat att gaa att gat aaa aat caa gat att caa ttg ggt gct 1824 Ala Gln Asn Ile Glu Ile Asp Lys Asn Gln Asp Ile Gln Leu Gly Ala 595 600 605 aat ata acg ttg aat gtg gaa gaa aac ttt gtt aat cgt gca gga aca 1872 Asn Ile Thr Leu Asn Val Glu Glu Asn Phe Val Asn Arg Ala Gly Thr 610 615 620 ctg gca act ggt aaa aca ctg aca att aat acc gaa agt ggc agt att 1920 Leu Ala Thr Gly Lys Thr Leu Thr Ile Asn Thr Glu Ser Gly Ser Ile 625 630 635 640 tac aat ctt ggt ggg aca tta ggt gct gga aaa tca tta aaa ctg act 1968 Tyr Asn Leu Gly Gly Thr Leu Gly Ala Gly Lys Ser Leu Lys Leu Thr 645 650 655 gct aaa tca acg gaa gaa ggt atg gga aat att gtt aac caa gaa aac 2016 Ala Lys Ser Thr Glu Glu Gly Met Gly Asn Ile Val Asn Gln Glu Asn 660 665 670 ggt tta ttc cat aca ctc ggt aat atg atg tta gaa gca gag cgt tct 2064 Gly Leu Phe His Thr Leu Gly Asn Met Met Leu Glu Ala Glu Arg Ser 675 680 685 gtt tat aat att ggc gat att tat gcg agt aaa aaa tta aca gtt cat 2112 Val Tyr Asn Ile Gly Asp Ile Tyr Ala Ser Lys Lys Leu Thr Val His 690 695 700 act cat aat ttg att aat gat gtg cgt tta tct ggc aat gtg agt tat 2160 Thr His Asn Leu Ile Asn Asp Val Arg Leu Ser Gly Asn Val Ser Tyr 705 710 715 720 aag cct atc ggt tca agt cgt gat tat gat atc agt cgt gtt gcg gta 2208 Lys Pro Ile Gly Ser Ser Arg Asp Tyr Asp Ile Ser Arg Val Ala Val 725 730 735 cat ggt tgg cac aat aat gtt tat aag ctc aac tta aat ctg caa gaa 2256 His Gly Trp His Asn Asn Val Tyr Lys Leu Asn Leu Asn Leu Gln Glu 740 745 750 caa gat aaa acc gat att aaa gtt gtg aaa atg ggg gct atc cgt tct 2304 Gln Asp Lys Thr Asp Ile Lys Val Val Lys Met Gly Ala Ile Arg Ser 755 760 765 gat ggt gat ttt gac ttt aag gga ata aag gcg aca tca tca gaa tca 2352 Asp Gly Asp Phe Asp Phe Lys Gly Ile Lys Ala Thr Ser Ser Glu Ser 770 775 780 aaa ccg cag tta att aat cat gga tta att aat gtc aaa gga aca ttt 2400 Lys Pro Gln Leu Ile Asn His Gly Leu Ile Asn Val Lys Gly Thr Phe 785 790 795 800 aat gcg gaa gct gat caa gtg gtg aac caa atg aaa gcg ttt aac caa 2448 Asn Ala Glu Ala Asp Gln Val Val Asn Gln Met Lys Ala Phe Asn Gln 805 810 815 aat gca tta gca agc gtg ttt aag aat cca gcg aaa atc acg atg tac 2496 Asn Ala Leu Ala Ser Val Phe Lys Asn Pro Ala Lys Ile Thr Met Tyr 820 825 830 tat caa cca ctt act cgt tat att tgg aca cca tta tcg ggt aat gca 2544 Tyr Gln Pro Leu Thr Arg Tyr Ile Trp Thr Pro Leu Ser Gly Asn Ala 835 840 845 tcg cgt gaa ttt aac aat tta gag tct ttc ctc gat gcc ttg ttt ggc 2592 Ser Arg Glu Phe Asn Asn Leu Glu Ser Phe Leu Asp Ala Leu Phe Gly 850 855 860 tca aca aca atc tta aaa tca agt ttc tat agt acg gaa aat ttt agt 2640 Ser Thr Thr Ile Leu Lys Ser Ser Phe Tyr Ser Thr Glu Asn Phe Ser 865 870 875 880 gct tat cag ctt cta tct cat att cag cat tca cca atg tac caa aaa 2688 Ala Tyr Gln Leu Leu Ser His Ile Gln His Ser Pro Met Tyr Gln Lys 885 890 895 gcg atg gca caa gtg ttt ggt gca gag tgg cat agt aaa tcc tat gat 2736 Ala Met Ala Gln Val Phe Gly Ala Glu Trp His Ser Lys Ser Tyr Asp 900 905 910 gag atg cga aac aaa tgg aaa agc ttt aaa gaa aat cca aca gat ttc 2784 Glu Met Arg Asn Lys Trp Lys Ser Phe Lys Glu Asn Pro Thr Asp Phe 915 920 925 att tat tac cca tca gaa aaa gca aaa atc cta gcg gga aaa cta gaa 2832 Ile Tyr Tyr Pro Ser Glu Lys Ala Lys Ile Leu Ala Gly Lys Leu Glu 930 935 940 ggt aag ctt aca acg cta caa aat ggt gaa tat gcc gaa cgt ggt aag 2880 Gly Lys Leu Thr Thr Leu Gln Asn Gly Glu Tyr Ala Glu Arg Gly Lys 945 950 955 960 ttt gat gag agt atc caa att ggt aaa cac caa tta tcg cta cca tca 2928 Phe Asp Glu Ser Ile Gln Ile Gly Lys His Gln Leu Ser Leu Pro Ser 965 970 975 gta gag ctt aaa gcg gag ttt agt gat aaa gaa cgt ttg gaa gag gac 2976 Val Glu Leu Lys Ala Glu Phe Ser Asp Lys Glu Arg Leu Glu Glu Asp 980 985 990 ggg gta gat tta tcc tcg atc gcc gaa ctc tta gaa atg cca aac tta 3024 Gly Val Asp Leu Ser Ser Ile Ala Glu Leu Leu Glu Met Pro Asn Leu 995 1000 1005 ttt att gat aat agt atc caa tta gaa aag aaa aag ttg tct cct att 3072 Phe Ile Asp Asn Ser Ile Gln Leu Glu Lys Lys Lys Leu Ser Pro Ile 1010 1015 1020 gag gat cta gat gaa gaa cca cgt aaa aat ctg gat ata gaa gaa agc 3120 Glu Asp Leu Asp Glu Glu Pro Arg Lys Asn Leu Asp Ile Glu 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Lys Arg Trp Gly His Glu Thr 115 120 125 atc aac aac ggc aaa ggt aca gac att ctc ggc gaa cat cga ggt aaa 432 Ile Asn Asn Gly Lys Gly Thr Asp Ile Leu Gly Glu His Arg Gly Lys 130 135 140 ccc aat ccg ctc aac tac tat act aca tca tgg tta acg aaa gtc ggt 480 Pro Asn Pro Leu Asn Tyr Tyr Thr Thr Ser Trp Leu Thr Lys Val Gly 145 150 155 160 tac gat att aat aac act cat cgt ttt aca ctg ttt tta gaa gat cgc 528 Tyr Asp Ile Asn Asn Thr His Arg Phe Thr Leu Phe Leu Glu Asp Arg 165 170 175 cgt gaa aag aag ctt acc gaa gaa aaa aca tta ggg ctt agt gat gca 576 Arg Glu Lys Lys Leu Thr Glu Glu Lys Thr Leu Gly Leu Ser Asp Ala 180 185 190 gtg cgt ttt gct aat gat caa acc cct tat ctc cgt tat ggt att gaa 624 Val Arg Phe Ala Asn Asp Gln Thr Pro Tyr Leu Arg Tyr Gly Ile Glu 195 200 205 tat cga tat aac ggc ttg tct tgg ttg gaa acg gta aag ctt ttt ttg 672 Tyr Arg Tyr Asn Gly Leu Ser Trp Leu Glu Thr Val Lys Leu Phe Leu 210 215 220 gca aag cag aaa atc gaa caa cgt tct gct ctc caa gag ttt gat att 720 Ala Lys Gln Lys Ile Glu Gln Arg Ser Ala Leu Gln Glu Phe Asp Ile 225 230 235 240 aat aat agg aat aaa ttg gat tcg act atg tcg ttt gta tat tta caa 768 Asn Asn Arg Asn Lys Leu Asp Ser Thr Met Ser Phe Val Tyr Leu Gln 245 250 255 aga cag aat ata gct cgg gga gaa ttt tca acg agt cct tta tat tgg 816 Arg Gln Asn Ile Ala Arg Gly Glu Phe Ser Thr Ser Pro Leu Tyr Trp 260 265 270 ggg ccg agt cgc cat cgt tta tct gcg aaa ttc gaa ttt cgt gat aag 864 Gly Pro Ser Arg His Arg Leu Ser Ala Lys Phe Glu Phe Arg Asp Lys 275 280 285 ttt tta gaa aat atg aat aag cat ttt acg ttt cgg ccg tgg caa atc 912 Phe Leu Glu Asn Met Asn Lys His Phe Thr Phe Arg Pro Trp Gln Ile 290 295 300 aat aga ttc aga caa caa ggt cga aat aac tat aca gaa gtg ttt ccc 960 Asn Arg Phe Arg Gln Gln Gly Arg Asn Asn Tyr Thr Glu Val Phe Pro 305 310 315 320 gtt aaa tcc cga gag ttt tct ttt tct ctt atg gac gac att aag att 1008 Val Lys Ser Arg Glu Phe Ser Phe Ser Leu Met Asp Asp Ile Lys Ile 325 330 335 ggc gaa ttg cta cat ctc gga ttg ggc ggt cgg tgg gat cac tat aac 1056 Gly Glu Leu Leu His Leu Gly Leu Gly Gly Arg Trp Asp His Tyr Asn 340 345 350 tat aag cca tta tta aat tct cag cat aat atc aac agg aca cag aga 1104 Tyr Lys Pro Leu Leu Asn Ser Gln His Asn Ile Asn Arg Thr Gln Arg 355 360 365 tta cct tat cca aaa aca tca tcc aaa ttt tcg tat caa ttg agt tta 1152 Leu Pro Tyr Pro Lys Thr Ser Ser Lys Phe Ser Tyr Gln Leu Ser Leu 370 375 380 gag tat caa tta cat cca tca cat caa att gca tac cgt tta agt acc 1200 Glu Tyr Gln Leu His Pro Ser His Gln Ile Ala Tyr Arg Leu Ser Thr 385 390 395 400 ggt ttt agg gtt ccc cgt gtt gaa gat ctt tat ttt gaa gac cga gga 1248 Gly Phe Arg Val Pro Arg Val Glu Asp Leu Tyr Phe Glu Asp Arg Gly 405 410 415 aaa agt tct tca caa ttt ctt cct aac ccc gat cta caa ccg gaa act 1296 Lys Ser Ser Ser Gln Phe Leu Pro Asn Pro Asp Leu Gln Pro Glu Thr 420 425 430 gca ctg aat cat gaa ata agt tac cgt ttc caa aat caa tat gcc cat 1344 Ala Leu Asn His Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Asn Gln Tyr Ala His 435 440 445 ttc agc gtc ggg ctt ttc cgt aca cgt tat cat aac ttt att caa gaa 1392 Phe Ser Val Gly Leu Phe Arg Thr Arg Tyr His Asn Phe Ile Gln Glu 450 455 460 cgt gag atg acc tgt gat aaa att cca tat gag tat aat agg act tat 1440 Arg Glu Met Thr Cys Asp Lys Ile Pro Tyr Glu Tyr Asn Arg Thr Tyr 465 470 475 480 gga tat tgc acg cat aat act tat gta atg ttt gtt aat gaa cct gaa 1488 Gly Tyr Cys Thr His Asn Thr Tyr Val Met Phe Val Asn Glu Pro Glu 485 490 495 gcc gtg att aaa ggg gtt gaa gta agc ggt gct tta aat ggg tcg gca 1536 Ala Val Ile Lys Gly Val Glu Val Ser Gly Ala Leu Asn Gly Ser Ala 500 505 510 ttc gga ctt tcc gac ggt tta act ttc cgt ctc aaa ggg agc tac agc 1584 Phe Gly Leu Ser Asp Gly Leu Thr Phe Arg Leu Lys Gly Ser Tyr Ser 515 520 525 aaa ggt caa aat cat gac ggc gat ccg tta aaa tct att caa cca tgg 1632 Lys Gly Gln Asn His Asp Gly Asp Pro Leu Lys Ser Ile Gln Pro Trp 530 535 540 aca gtg gta acc ggt att gat tac gaa act gaa ggg tgg agc gtg agt 1680 Thr Val Val Thr Gly Ile Asp Tyr Glu Thr Glu Gly Trp Ser Val Ser 545 550 555 560 ttg agc ggg cgt tat agt gcg gct aaa aaa gcc aaa gat gcg ata gaa 1728 Leu Ser Gly Arg Tyr Ser Ala Ala Lys Lys Ala Lys Asp Ala Ile Glu 565 570 575 acg gaa tac aca cat gat aaa aag gtt gtc aaa caa tgg ccg cat tta 1776 Thr Glu Tyr Thr His Asp Lys Lys Val Val Lys Gln Trp Pro His Leu 580 585 590 agt cca tcc tac ttt gtt gtt gat ttt acg ggg caa gtt aac ctc agt 1824 Ser Pro Ser Tyr Phe Val Val Asp Phe Thr Gly Gln Val Asn Leu Ser 595 600 605 aaa aat gtc att ttg aat atg ggg gta ttt aac ttg ttc aat cgt gat 1872 Lys Asn Val Ile Leu Asn Met Gly Val Phe Asn Leu Phe Asn Arg Asp 610 615 620 tat atg acg tgg gac agt gca tat aac ttg ttt act agg ggg tat act 1920 Tyr Met Thr Trp Asp Ser Ala Tyr Asn Leu Phe Thr Arg Gly Tyr Thr 625 630 635 640 tcc cgt tct gtc cgt gct aac agc cca ggc att aat cgg ttt acc gca 1968 Ser Arg Ser Val Arg Ala Asn Ser Pro Gly Ile Asn Arg Phe Thr Ala 645 650 655 cca aaa cgt aat ttt gct gcc tcg gtg gaa att cgt ttt ta 2009 Pro Lys Arg Asn Phe Ala Ala Ser Val Glu Ile Arg Phe 660 665 <210> 105 <211> 669 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 105 Ile Arg Gly Val Asp Lys Asp Arg Val Ala Val Ile Val Asp Gly Ile 1 5 10 15 Pro Gln Ala Glu Ser Thr Ile Ser Thr Ser Ala Arg Tyr Ser Thr Glu 20 25 30 Arg His Asn Gly Asn Ile Asn Asn Ile Glu Tyr Glu Asn Val Ser Ser 35 40 45 Leu Lys Val Gln Lys Gly Ala Ala Ser Val Met Tyr Gly Ser Gly Ala 50 55 60 Leu Gly Gly Thr Val Glu Phe Thr Thr Lys Asp Ile Glu Asp Phe Val 65 70 75 80 Glu Pro Gly Arg His Leu Gly Phe Leu Ser Lys Thr Gly Tyr Thr Ser 85 90 95 Lys Asn Arg Glu Tyr Arg Gln Val Ile Gly Val Gly Gly Lys Gly Glu 100 105 110 His Phe Phe Gly Phe Val Gln Leu Thr Lys Arg Trp Gly His Glu Thr 115 120 125 Ile Asn Asn Gly Lys Gly Thr Asp Ile Leu Gly Glu His Arg Gly Lys 130 135 140 Pro Asn Pro Leu Asn Tyr Tyr Thr Thr Ser Trp Leu Thr Lys Val Gly 145 150 155 160 Tyr Asp Ile Asn Asn Thr His Arg Phe Thr Leu Phe Leu Glu Asp Arg 165 170 175 Arg Glu Lys Lys Leu Thr Glu Glu Lys Thr Leu Gly Leu Ser Asp Ala 180 185 190 Val Arg Phe Ala Asn Asp Gln Thr Pro Tyr Leu Arg Tyr Gly Ile 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Gly 405 410 415 Lys Ser Ser Ser Gln Phe Leu Pro Asn Pro Asp Leu Gln Pro Glu Thr 420 425 430 Ala Leu Asn His Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Asn Gln Tyr Ala His 435 440 445 Phe Ser Val Gly Leu Phe Arg Thr Arg Tyr His Asn Phe Ile Gln Glu 450 455 460 Arg Glu Met Thr Cys Asp Lys Ile Pro Tyr Glu Tyr Asn Arg Thr Tyr 465 470 475 480 Gly Tyr Cys Thr His Asn Thr Tyr Val Met Phe Val Asn Glu Pro Glu 485 490 495 Ala Val Ile Lys Gly Val Glu Val Ser Gly Ala Leu Asn Gly Ser Ala 500 505 510 Phe Gly Leu Ser Asp Gly Leu Thr Phe Arg Leu Lys Gly Ser Tyr Ser 515 520 525 Lys Gly Gln Asn His Asp Gly Asp Pro Leu Lys Ser Ile Gln Pro Trp 530 535 540 Thr Val Val Thr Gly Ile Asp Tyr Glu Thr Glu Gly Trp Ser Val Ser 545 550 555 560 Leu Ser Gly Arg Tyr Ser Ala Ala Lys Lys Ala Lys Asp Ala Ile Glu 565 570 575 Thr Glu Tyr Thr His Asp Lys Lys Val Val Lys Gln Trp Pro His Leu 580 585 590 Ser Pro Ser Tyr Phe Val Val Asp Phe Thr Gly Gln Val Asn Leu Ser 595 600 605 Lys Asn Val Ile Leu Asn Met Gly Val Phe Asn Leu Phe Asn Arg Asp 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Phe Pro Val Gln Ile Ser Tyr Ile Ser Leu 65 70 75 80 gca aca tat gca agg cta aaa gcg gca gag tat ttg ccg gat aat tta 288 Ala Thr Tyr Ala Arg Leu Lys Ala Ala Glu Tyr Leu Pro Asp Asn Leu 85 90 95 aat aaa att att tat tta gat gtt gat gtt ttg gtt ttt aac tca tta 336 Asn Lys Ile Ile Tyr Leu Asp Val Asp Val Leu Val Phe Asn Ser Leu 100 105 110 gaa atg tta tgg aat gtt gat gtt aat aat ttt ctt acc gca gcc tgt 384 Glu Met Leu Trp Asn Val Asp Val Asn Asn Phe Leu Thr Ala Ala Cys 115 120 125 tat gat tct ttc atc gaa aat gaa aag tct gag cat aaa aaa tcg att 432 Tyr Asp Ser Phe Ile Glu Asn Glu Lys Ser Glu His Lys Lys Ser Ile 130 135 140 tca atg tca gat aag gaa tat tat ttt aat gca gga gta atg cta ttt 480 Ser Met Ser Asp Lys Glu Tyr Tyr Phe Asn Ala Gly Val Met Leu Phe 145 150 155 160 aat tta gat gaa tgg cgg aag atg gat gta ttc tca aga gct tta gac 528 Asn Leu Asp Glu Trp Arg Lys Met Asp Val Phe Ser Arg Ala Leu Asp 165 170 175 ctg tta gct atg tat cct aat caa atg att tat cag gat caa gat ata 576 Leu Leu Ala Met Tyr Pro Asn Gln Met Ile Tyr Gln Asp Gln Asp Ile 180 185 190 ttg aat atc ctt ttt agg aat aaa gtc tgt tat tta gat tgc aga ttt 624 Leu Asn Ile Leu Phe Arg Asn Lys Val Cys Tyr Leu Asp Cys Arg Phe 195 200 205 aat ttc atg cca aat caa ctt gaa aga ata aaa caa tac cat aaa gga 672 Asn Phe Met Pro Asn Gln Leu Glu Arg Ile Lys Gln Tyr His Lys Gly 210 215 220 aaa ttg agc aac tta cat tct tta gaa aaa aca acg atg cct gtc gtt 720 Lys Leu Ser Asn Leu His Ser Leu Glu Lys Thr Thr Met Pro Val Val 225 230 235 240 att tca cat tat tgt ggt cca gaa aaa gcg tgg cat gcg gat tgt aaa 768 Ile Ser His Tyr Cys Gly Pro Glu Lys Ala Trp His Ala Asp Cys Lys 245 250 255 cat ttt aat gta tat ttc tat cag aaa ata tta gca gaa ata acg aga 816 His Phe Asn Val Tyr Phe Tyr Gln Lys Ile Leu Ala Glu Ile Thr Arg 260 265 270 ggc acg gat aaa gaa cgc gta tta tct ata aaa act tat ctc aag gcc 864 Gly Thr Asp Lys Glu Arg Val Leu Ser Ile Lys Thr Tyr Leu Lys Ala 275 280 285 ttg att aga agg att aga tat aaa ttc aaa tat caa gtc tat ta 908 Leu Ile 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Gln Asp Gln Asp Ile 180 185 190 Leu Asn Ile Leu Phe Arg Asn Lys Val Cys Tyr Leu Asp Cys Arg Phe 195 200 205 Asn Phe Met Pro Asn Gln Leu Glu Arg Ile Lys Gln Tyr His Lys Gly 210 215 220 Lys Leu Ser Asn Leu His Ser Leu Glu Lys Thr Thr Met Pro Val Val 225 230 235 240 Ile Ser His Tyr Cys Gly Pro Glu Lys Ala Trp His Ala Asp Cys Lys 245 250 255 His Phe Asn Val Tyr Phe Tyr Gln Lys Ile Leu Ala Glu Ile Thr Arg 260 265 270 Gly Thr Asp Lys Glu Arg Val Leu Ser Ile Lys Thr Tyr Leu Lys Ala 275 280 285 Leu Ile Arg Arg Ile Arg Tyr Lys Phe Lys Tyr Gln Val Tyr 290 295 300 <210> 108 <211> 2054 <212> DNA <213> Pasteurella multocida <220> <223> pnp <220> <221> CDS <222> (1)..(2052) <400> 108 atg gca agt atg gat gat act act gtg ttt gtc aca gtg gtt gcc aaa 48 Met Ala Ser Met Asp Asp Thr Thr Val Phe Val Thr Val Val Ala Lys 1 5 10 15 aaa gat gtg aaa gaa ggt caa gac ttc ttc cca tta act gtt aac tat 96 Lys Asp Val Lys Glu Gly Gln Asp Phe Phe Pro Leu Thr Val Asn Tyr 20 25 30 caa gag cgt act tat gct gca ggc cgt att cct ggt ggc ttt ttc aaa 144 Gln Glu Arg Thr Tyr Ala Ala Gly Arg Ile Pro Gly Gly Phe Phe Lys 35 40 45 cgt gaa ggt cgt cct tct gaa ggc gaa act tta att gct cgt tta att 192 Arg Glu Gly Arg Pro Ser Glu Gly Glu Thr Leu Ile Ala Arg Leu Ile 50 55 60 gac cgt cca att cgt cct ctt ttc cca gaa ggt ttt tat aac gaa atc 240 Asp Arg Pro Ile Arg Pro Leu Phe Pro Glu Gly Phe Tyr Asn Glu Ile 65 70 75 80 caa atc gtg gcg aca gtg gtg tct gtt aat ccg caa att tgt cca gat 288 Gln Ile Val Ala Thr Val Val Ser Val Asn Pro Gln Ile Cys Pro Asp 85 90 95 tta gtg gca atg atc ggt gca tct gcg gca ctt tct tta tca ggt gtg 336 Leu Val Ala Met Ile Gly Ala Ser Ala Ala Leu Ser Leu Ser Gly Val 100 105 110 cca ttt aat ggc cct atc ggt gcg gca cgt gtt ggt ttt att gat gat 384 Pro Phe Asn Gly Pro Ile Gly Ala Ala Arg Val Gly Phe Ile Asp Asp 115 120 125 caa ttt gtg tta aac cca acc atg aac gag caa aaa caa agc cgt tta 432 Gln Phe Val Leu Asn Pro Thr Met Asn Glu Gln Lys Gln Ser Arg Leu 130 135 140 gac ttg gtt gtc gcg gga aca gat aaa gcg gtg tta atg gtg gaa tct 480 Asp Leu Val Val Ala Gly Thr Asp Lys Ala Val Leu Met Val Glu Ser 145 150 155 160 gaa gcc gat gta tta acc gaa gaa caa atg tta gct gcg gtg gtg ttt 528 Glu Ala Asp Val Leu Thr Glu Glu Gln Met Leu Ala Ala Val Val Phe 165 170 175 ggt cat cag caa caa caa gtg gtg att gac gcg atc aaa gaa ttt acc 576 Gly His Gln Gln Gln Gln Val Val Ile Asp Ala Ile Lys Glu Phe Thr 180 185 190 gca gaa gcc ggt aaa ccg cgt tgg gat tgg gtg gca cct gaa cca aat 624 Ala Glu Ala Gly Lys Pro Arg Trp Asp Trp Val Ala Pro Glu Pro Asn 195 200 205 acc gcg tta att gaa aaa gtg aaa gcg att gca gaa gcg cgt tta ggc 672 Thr Ala Leu Ile Glu Lys Val Lys Ala Ile Ala Glu Ala Arg Leu Gly 210 215 220 gaa gca tac cgt atc act gaa aaa caa gca cgt tat gaa caa att gat 720 Glu Ala Tyr Arg Ile Thr Glu Lys Gln Ala Arg Tyr Glu Gln Ile Asp 225 230 235 240 gcg att aaa gct gat gtg att gca caa atc aca gct gaa gta gca gaa 768 Ala Ile Lys Ala Asp Val Ile Ala Gln Ile Thr Ala Glu Val Ala Glu 245 250 255 ggc gaa gac atc agt gaa 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465 470 475 480 atc aaa atc gaa ggt atc aca gca gaa atc atg caa att gcg tta aac 1488 Ile Lys Ile Glu Gly Ile Thr Ala Glu Ile Met Gln Ile Ala Leu Asn 485 490 495 caa gcg aaa agc gca cgt tta cac att tta ggt gtg atg gag caa gcg 1536 Gln Ala Lys Ser Ala Arg Leu His Ile Leu Gly Val Met Glu Gln Ala 500 505 510 atc cca gcg cca cgt gcg gat att tct gat ttt gca ccg cgt att tac 1584 Ile Pro Ala Pro Arg Ala Asp Ile Ser Asp Phe Ala Pro Arg Ile Tyr 515 520 525 act atg aaa att gat ccg aag aaa atc aaa gat gtg atc ggt aaa ggt 1632 Thr Met Lys Ile Asp Pro Lys Lys Ile Lys Asp Val Ile Gly Lys Gly 530 535 540 ggt gca acc att cgt gcc tta aca gaa gaa aca ggt acc tca att gat 1680 Gly Ala Thr Ile Arg Ala Leu Thr Glu Glu Thr Gly Thr Ser Ile Asp 545 550 555 560 atc gat gat gat ggt acg gtg aag att gct gcg gtt gat ggc aat tca 1728 Ile Asp Asp Asp Gly Thr Val Lys Ile Ala Ala Val Asp Gly Asn Ser 565 570 575 gca aaa gag gtg atg gcg cgt att gaa gat att act gca gaa gtt gaa 1776 Ala Lys Glu Val Met Ala Arg Ile Glu Asp Ile Thr Ala Glu Val Glu 580 585 590 gcg ggt gca gtg tat aaa ggt aaa gtt act cgt tta gct gat ttt ggt 1824 Ala Gly Ala Val Tyr Lys Gly Lys Val Thr Arg Leu Ala Asp Phe Gly 595 600 605 gcc ttc gtt tct atc gta ggt aac aaa gaa ggc tta gtg cat att tct 1872 Ala Phe Val Ser Ile Val Gly Asn Lys Glu Gly Leu Val His Ile Ser 610 615 620 caa atc gcg gaa gag cgt gtt gag aaa gtg agt gat tat ctt gca gtg 1920 Gln Ile Ala Glu Glu Arg Val Glu Lys Val Ser Asp Tyr Leu Ala Val 625 630 635 640 ggg caa gaa gtg act gtt aaa gtg gtt gag att gat cgt caa ggt cgt 1968 Gly Gln Glu Val Thr Val Lys Val Val Glu Ile Asp Arg Gln Gly Arg 645 650 655 att cgt tta acc atg aaa gaa gtt gca cca aag caa gaa cac gtt gat 2016 Ile Arg Leu Thr Met Lys Glu Val Ala Pro Lys Gln Glu His Val Asp 660 665 670 tct gtt gtc gca gac gtt gcc gca gaa gaa aac gca ta 2054 Ser Val Val Ala Asp Val Ala Ala Glu Glu Asn Ala 675 680 <210> 109 <211> 684 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 109 Met Ala Ser Met Asp Asp Thr Thr Val Phe Val Thr Val Val Ala Lys 1 5 10 15 Lys Asp Val Lys Glu Gly Gln Asp Phe Phe Pro Leu Thr Val Asn Tyr 20 25 30 Gln Glu Arg Thr Tyr Ala Ala Gly Arg Ile Pro Gly Gly Phe Phe Lys 35 40 45 Arg Glu Gly Arg Pro Ser Glu Gly Glu Thr Leu Ile Ala Arg Leu Ile 50 55 60 Asp Arg Pro Ile Arg Pro Leu Phe Pro Glu Gly Phe Tyr Asn Glu Ile 65 70 75 80 Gln Ile Val Ala Thr Val Val Ser Val Asn Pro Gln Ile Cys Pro Asp 85 90 95 Leu Val Ala Met Ile Gly Ala Ser Ala Ala Leu Ser Leu Ser Gly Val 100 105 110 Pro Phe Asn Gly Pro Ile Gly Ala Ala Arg Val Gly Phe Ile Asp Asp 115 120 125 Gln Phe Val Leu Asn Pro Thr Met Asn Glu Gln Lys Gln Ser Arg Leu 130 135 140 Asp Leu Val Val Ala Gly Thr Asp Lys Ala Val Leu Met Val Glu Ser 145 150 155 160 Glu Ala Asp Val Leu Thr Glu Glu Gln Met Leu Ala Ala Val Val Phe 165 170 175 Gly His Gln Gln Gln Gln Val Val Ile Asp Ala Ile Lys Glu Phe Thr 180 185 190 Ala Glu Ala Gly Lys Pro Arg Trp Asp Trp Val Ala Pro Glu Pro Asn 195 200 205 Thr Ala Leu Ile Glu Lys Val Lys Ala Ile Ala Glu Ala Arg Leu Gly 210 215 220 Glu Ala Tyr Arg Ile Thr Glu Lys Gln Ala Arg Tyr Glu Gln Ile Asp 225 230 235 240 Ala Ile Lys Ala Asp Val Ile Ala Gln Ile Thr Ala Glu Val Ala Glu 245 250 255 Gly Glu Asp Ile Ser Glu Gly Lys Ile Val Asp Ile Phe Thr Ala Leu 260 265 270 Glu Ser Gln Ile Val Arg Ser Arg Ile Ile Ala Gly Glu Pro Arg Ile 275 280 285 Asp Gly Arg Thr Val Asp Thr Val Arg Ala Leu Asp Ile Cys Thr Gly 290 295 300 Val Leu Pro Arg Thr His Gly Ser Ala Ile Phe Thr Arg Gly Glu Thr 305 310 315 320 Gln Ala Leu Ala Val Ala Thr Leu Gly Thr Glu Arg Asp Ala Gln Ile 325 330 335 Ile Asp Glu Leu Thr Gly Glu Arg Ser Asp His Phe Leu Phe His Tyr 340 345 350 Asn Phe Pro Pro Tyr Ser Val Gly Glu Thr Gly Met Ile Gly Ser Pro 355 360 365 Lys Arg Arg Glu Ile Gly His Gly Arg Leu Ala Lys Arg Gly Val Ala 370 375 380 Ala Val Met Pro Thr Leu Ala Glu Phe Pro Tyr Val Val Arg Val Val 385 390 395 400 Ser Glu Ile Thr Glu Ser Asn Gly Ser Ser Ser Met Ala Ser Val Cys 405 410 415 Gly Ala Ser Leu Ala Leu Met Asp Ala Gly Val Pro Ile Lys Ala Ala 420 425 430 Val Ala Gly Ile Ala Met Gly Leu Val Lys Glu Asp Glu Lys Phe Val 435 440 445 Val Leu Ser Asp Ile Leu Gly Asp Glu Asp His Leu Gly Asp Met Asp 450 455 460 Phe Lys Val Ala Gly Thr Arg Thr Gly Val Thr Ala Leu Gln Met Asp 465 470 475 480 Ile Lys Ile Glu Gly Ile Thr Ala Glu Ile Met Gln Ile Ala Leu Asn 485 490 495 Gln Ala Lys Ser Ala Arg Leu His Ile Leu Gly Val Met Glu Gln Ala 500 505 510 Ile Pro Ala Pro Arg Ala Asp Ile Ser Asp Phe Ala Pro Arg Ile Tyr 515 520 525 Thr Met Lys Ile Asp Pro Lys Lys Ile Lys Asp Val Ile Gly Lys Gly 530 535 540 Gly Ala Thr Ile Arg Ala Leu Thr Glu Glu Thr Gly Thr Ser Ile Asp 545 550 555 560 Ile Asp Asp Asp Gly Thr Val Lys Ile Ala Ala Val Asp Gly Asn Ser 565 570 575 Ala Lys Glu Val Met Ala Arg Ile Glu Asp Ile Thr Ala Glu Val Glu 580 585 590 Ala Gly Ala Val Tyr Lys Gly Lys Val Thr Arg Leu Ala Asp Phe Gly 595 600 605 Ala Phe Val Ser Ile Val Gly Asn Lys Glu Gly Leu Val His Ile Ser 610 615 620 Gln Ile Ala Glu Glu Arg Val Glu Lys Val Ser Asp Tyr Leu Ala Val 625 630 635 640 Gly Gln Glu Val Thr Val Lys Val Val Glu Ile Asp Arg Gln Gly Arg 645 650 655 Ile Arg Leu Thr Met Lys Glu Val Ala Pro Lys Gln Glu His Val Asp 660 665 670 Ser Val Val Ala Asp Val Ala Ala Glu Glu Asn Ala 675 680 <210> 110 <211> 1514 <212> DNA <213> Pasteurella multocida <220> <223> purF <220> <221> CDS <222> (1)..(1512) <400> 110 atg tgt ggt att gtt ggt att gtt agc caa agc ccc gtt aac caa tca 48 Met Cys Gly Ile Val Gly Ile Val Ser Gln Ser Pro Val Asn Gln Ser 1 5 10 15 att tat gat gcg tta acc tta ttg caa cac cgc ggg caa gac gcc gcc 96 Ile Tyr Asp Ala Leu Thr Leu Leu Gln His Arg Gly Gln Asp Ala Ala 20 25 30 ggg att gta acc gta gat gat gaa aac cga ttc cgc ttg cgt aaa gcg 144 Gly Ile Val Thr Val Asp Asp Glu Asn Arg Phe Arg Leu Arg Lys Ala 35 40 45 aac ggg tta gtc agc gat gta ttt gaa caa gtt cat atg tta cgt tta 192 Asn Gly Leu Val Ser Asp Val Phe Glu Gln Val His Met Leu Arg Leu 50 55 60 caa ggc aat gct ggc att gga cat gtt cgt tat cct acg gct ggg agc 240 Gln Gly Asn Ala Gly Ile Gly His Val Arg Tyr Pro Thr Ala Gly Ser 65 70 75 80 tca agt gtc tct gaa gcg caa cct ttt tat gta aat tcg cct tat ggc 288 Ser Ser Val Ser Glu Ala Gln Pro Phe Tyr Val Asn Ser Pro Tyr Gly 85 90 95 tta acc tta gtg cat aat ggt aac ttg acc aat tca agt gaa tta aaa 336 Leu Thr Leu Val His Asn Gly Asn Leu Thr Asn Ser Ser Glu Leu Lys 100 105 110 gaa aag tta ttt cgt ctc gca cgt cgc cat gta aat acc aat tca gat 384 Glu Lys Leu Phe Arg Leu Ala Arg Arg His Val Asn Thr Asn Ser Asp 115 120 125 tct gaa tta tta ctc aat atc tta gcc aat cac ctt gat cac ttc gaa 432 Ser Glu Leu Leu Leu Asn Ile Leu Ala Asn His Leu Asp His Phe Glu 130 135 140 aaa tac caa tta gat ccg caa gat gta ttc agt gct gtc aaa caa acg 480 Lys Tyr Gln Leu Asp Pro Gln Asp Val Phe Ser Ala Val Lys Gln Thr 145 150 155 160 cat cag gat att cgt ggt gct tat gct tgt atc gcc atg att att ggt 528 His Gln Asp Ile Arg Gly Ala Tyr Ala Cys Ile Ala Met Ile Ile Gly 165 170 175 cat ggt atg gtc gcg ttt cgt gat ccg aac ggt atc cgt ccg tta gtg 576 His Gly Met Val Ala Phe Arg Asp Pro Asn Gly Ile Arg Pro Leu Val 180 185 190 tta ggg aaa cgc gag gaa aat ggc aaa aca gag tat atg ttt gcc tcc 624 Leu Gly Lys Arg Glu Glu Asn Gly Lys Thr Glu Tyr Met Phe Ala Ser 195 200 205 gaa agt atc gca tta gat aca gtg ggt ttt gag ttt gta cga gat gta 672 Glu Ser Ile Ala Leu Asp Thr Val Gly Phe Glu Phe Val Arg Asp Val 210 215 220 caa ccc ggc gaa gcg att tat gtc acg ttt gaa ggg gaa atg tat gct 720 Gln Pro Gly Glu Ala Ile Tyr Val Thr Phe Glu Gly Glu Met Tyr Ala 225 230 235 240 cag caa tgc gca gac aaa cca aca tta aca cct tgt att ttt gaa tac 768 Gln Gln Cys Ala Asp Lys Pro Thr Leu Thr Pro Cys Ile Phe Glu Tyr 245 250 255 gtc tat ttt gca cgt cca gac tct tgc atc gat ggg gtt tct gtt tat 816 Val Tyr Phe Ala Arg Pro Asp Ser Cys Ile Asp Gly Val Ser Val Tyr 260 265 270 gct gcc cgt gtt cat atg gga caa cgt tta ggt gaa aaa att gca cgg 864 Ala Ala Arg Val His Met Gly Gln Arg Leu Gly Glu Lys Ile Ala Arg 275 280 285 gaa tgg gcg gat gtg gat gat att gat gtg gtc att cct gtg cct gaa 912 Glu Trp Ala Asp Val Asp Asp Ile Asp Val Val Ile Pro Val Pro Glu 290 295 300 acc tct aac gat att gct tta cgt att gcg cgc gtg tta aat aaa ccg 960 Thr Ser Asn Asp Ile Ala Leu Arg Ile Ala Arg Val Leu Asn Lys Pro 305 310 315 320 tat cgt caa ggt ttt gtg aaa aat cgc tat gta gga cgt acg ttt att 1008 Tyr Arg Gln Gly Phe Val Lys Asn Arg Tyr Val Gly Arg Thr Phe Ile 325 330 335 atg ccg ggg cag gca ttg cga gtc agt tct gtt aga cgt aaa ctc aat 1056 Met Pro Gly Gln Ala Leu Arg Val Ser Ser Val Arg Arg Lys Leu Asn 340 345 350 acc att gct tca gaa ttt aaa gat aag aat gtg tta tta gtt gac gac 1104 Thr Ile Ala Ser Glu Phe Lys Asp Lys Asn Val Leu Leu Val Asp Asp 355 360 365 tcg att gta cgt ggt acc acg tct gaa caa att gtc gaa atg gcg aga 1152 Ser Ile Val Arg Gly Thr Thr Ser Glu Gln Ile Val Glu Met Ala Arg 370 375 380 gcg gca ggt gcg aag aaa att tat ttt gcc tct gct gca cca gaa att 1200 Ala Ala Gly Ala Lys Lys Ile Tyr Phe Ala Ser Ala Ala Pro Glu Ile 385 390 395 400 cgt tat cca aat gtg tat ggt att gat atg cca acc aaa aat gaa ttg 1248 Arg Tyr Pro Asn Val Tyr Gly Ile Asp Met Pro Thr Lys Asn Glu Leu 405 410 415 atc gct tat ggt cgt gat gta gat gaa att gct aac tta att ggt gtg 1296 Ile Ala Tyr Gly Arg Asp Val Asp Glu Ile Ala Asn Leu Ile Gly Val 420 425 430 gat aaa ttg att ttc caa gat ttg gat gcg tta act ggt tct gtg caa 1344 Asp Lys Leu Ile Phe Gln Asp Leu Asp Ala Leu Thr Gly Ser Val Gln 435 440 445 caa gaa aat cca agt att caa gac ttt gat tgt tcg gtg ttt aca ggg 1392 Gln Glu Asn Pro Ser Ile Gln Asp Phe Asp Cys Ser Val Phe Thr Gly 450 455 460 gtt tat gtg acg ggc gat att aca cct gaa tat ctg gat aat att gca 1440 Val Tyr Val Thr Gly Asp Ile Thr Pro Glu Tyr Leu Asp Asn Ile Ala 465 470 475 480 gaa cag cgt aat gat atc gcc aag aaa aag cgt gaa aaa gat gct acc 1488 Glu Gln Arg Asn Asp Ile Ala Lys Lys Lys Arg Glu Lys Asp Ala Thr 485 490 495 aat ctt gaa atg cac aat gaa aaa ta 1514 Asn Leu Glu Met His Asn Glu Lys 500 <210> 111 <211> 504 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 111 Met Cys Gly Ile Val Gly Ile Val Ser Gln Ser 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Asp Val Ile Glu Arg Tyr Gln 50 55 60 aat gaa gtg tct ata act aaa aaa ggc gcg cga aat gaa att ata aga 240 Asn Glu Val Ser Ile Thr Lys Lys Gly Ala Arg Asn Glu Ile Ile Arg 65 70 75 80 tta aac cgc ttt tta aga tat gat att tct aat ctg tat att cgt gat 288 Leu Asn Arg Phe Leu Arg Tyr Asp Ile Ser Asn Leu Tyr Ile Arg Asp 85 90 95 tta aga aaa gaa gat ttt gag gag tgg atc aga att cgc cta acc gaa 336 Leu Arg Lys Glu Asp Phe Glu Glu Trp Ile Arg Ile Arg Leu Thr Glu 100 105 110 gta tcg gat gct agc gtt aga cgt gag ctt gtt act ata tcg tca gtg 384 Val Ser Asp Ala Ser Val Arg Arg Glu Leu Val Thr Ile Ser Ser Val 115 120 125 ctg aca aca gca ata aat aag tgg gga tat att tca agg cat cca atg 432 Leu Thr Thr Ala Ile Asn Lys Trp Gly Tyr Ile Ser Arg His Pro Met 130 135 140 act ggt att gaa aaa cca aaa aac tcg gca gaa aga aaa gaa cga tat 480 Thr Gly Ile Glu Lys Pro Lys Asn Ser Ala Glu Arg Lys Glu Arg Tyr 145 150 155 160 tca gaa cag gac att aaa aca ata tta gaa aca gct aga tat tgt gaa 528 Ser Glu Gln Asp Ile Lys Thr Ile Leu Glu Thr Ala Arg Tyr Cys Glu 165 170 175 gat aaa cta ccc ata aca ctc aaa caa aga gta gca att gca atg tta 576 Asp Lys Leu Pro Ile Thr Leu Lys Gln Arg Val Ala Ile Ala Met Leu 180 185 190 ttt gct att gaa acc gct atg cgt gct ggt gag att gct agt ata aaa 624 Phe Ala Ile Glu Thr Ala Met Arg Ala Gly Glu Ile Ala Ser Ile Lys 195 200 205 tgg gat aat gtt ttt ctt gaa aag aga ata gta cat tta ccg aca act 672 Trp Asp Asn Val Phe Leu Glu Lys Arg Ile Val His Leu Pro Thr Thr 210 215 220 aaa aac ggg cac tct aga gat gtg ccg ctt tcg caa aga gct gtt gcg 720 Lys Asn Gly His Ser Arg Asp Val Pro Leu Ser Gln Arg Ala Val Ala 225 230 235 240 cta att tta aaa atg aaa gag gta gaa aat gga gat ctt gtg ttt cag 768 Leu Ile Leu Lys Met Lys Glu Val Glu Asn Gly Asp Leu Val Phe Gln 245 250 255 acc acg cct gaa tca tta agc acc acg ttt aga gtg tta aag aaa gag 816 Thr Thr Pro Glu Ser Leu Ser Thr Thr Phe Arg Val Leu Lys Lys Glu 260 265 270 tgt gga ctt gaa cat ctc cat ttt cat gat acg aga agg gaa gcg ttg 864 Cys Gly Leu Glu His Leu His Phe His Asp Thr Arg Arg Glu Ala Leu 275 280 285 acg aga tta tct aag aaa gta gat gta atg act cta gcc aaa att agc 912 Thr Arg Leu Ser Lys Lys Val Asp Val Met Thr Leu Ala Lys Ile Ser 290 295 300 gga cat aga gat tta aga att tta caa aac aca tat tac gca ccg aat 960 Gly His Arg Asp Leu Arg Ile Leu Gln Asn Thr Tyr Tyr Ala Pro Asn 305 310 315 320 atg agt gaa gtg gca aac ttg ttg gat ta 989 Met Ser Glu Val Ala Asn Leu Leu Asp 325 <210> 113 <211> 329 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 113 Met Ala Thr Ile Arg Lys Arg Gly Asn Ser Tyr Arg Ala Glu Ile Ser 1 5 10 15 Lys Asn Gly Val Arg Lys Ser Ala Thr Phe Lys Thr Lys Ser Glu Ala 20 25 30 Asn Ala Trp Ala Val Asp Glu Glu Arg Lys Leu Ala Asp Leu Ala Lys 35 40 45 Gly Ile Ala Pro Asp Ile Ile Phe Arg Asp Val Ile Glu Arg Tyr Gln 50 55 60 Asn Glu Val Ser Ile Thr Lys Lys Gly Ala Arg Asn Glu Ile Ile Arg 65 70 75 80 Leu Asn Arg Phe Leu Arg Tyr Asp Ile Ser Asn Leu Tyr Ile Arg Asp 85 90 95 Leu Arg Lys Glu Asp Phe Glu Glu Trp Ile Arg Ile Arg Leu 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Lys Val Glu Ile Asp Tyr Ala 195 200 205 gtc act cgt gcg gcg gca atg cgt gca tat ctt gat aaa gaa cag ggc 672 Val Thr Arg Ala Ala Ala Met Arg Ala Tyr Leu Asp Lys Glu Gln Gly 210 215 220 tgg cat acg tct att tca aat aaa ggc att aat ggc gtg agc ggt gtc 720 Trp His Thr Ser Ile Ser Asn Lys Gly Ile Asn Gly Val Ser Gly Val 225 230 235 240 aca caa cca ctc tat ttt gac att aac gac agc tcg act gat gtg aac 768 Thr Gln Pro Leu Tyr Phe Asp Ile Asn Asp Ser Ser Thr Asp Val Asn 245 250 255 tat ctc aat gaa caa ggc atc acg tgt tgc gtg aat cat aat ggc ttt 816 Tyr Leu Asn Glu Gln Gly Ile Thr Cys Cys Val Asn His Asn Gly Phe 260 265 270 cgt ttt tgg ggc tta cgc acg act gca gaa gat cca tta ttc aag ttt 864 Arg Phe Trp Gly Leu Arg Thr Thr Ala Glu Asp Pro Leu Phe Lys Phe 275 280 285 gaa gtg tac acc cgc act gca caa atc tta aaa gat acg att gca ggg 912 Glu Val Tyr Thr Arg Thr Ala Gln Ile Leu Lys Asp Thr Ile Ala Gly 290 295 300 gcg ttt gat tgg gca gtg gat aaa gat att tct gtc acg cta gtg aaa 960 Ala Phe Asp Trp Ala Val Asp Lys Asp Ile Ser Val Thr Leu Val Lys 305 310 315 320 gat att att gaa gca atc aat gcg aag tgg cgt gat tac acc aca aaa 1008 Asp Ile Ile Glu Ala Ile Asn Ala Lys Trp Arg Asp Tyr Thr Thr Lys 325 330 335 ggc tac tta att ggc ggt aaa gcg tgg ctt aat aaa gag ctt aac agt 1056 Gly Tyr Leu Ile Gly Gly Lys Ala Trp Leu Asn Lys Glu Leu Asn Ser 340 345 350 gca acg aat tta aaa gat gcg aag ttg ttg atc tct tat gat tat cac 1104 Ala Thr Asn Leu Lys Asp Ala Lys Leu Leu Ile Ser Tyr Asp Tyr His 355 360 365 cca gta cca ccg ctc gaa cag cta ggc ttt aat cag tac att tct gat 1152 Pro Val Pro Pro Leu Glu Gln Leu Gly Phe Asn Gln Tyr Ile Ser Asp 370 375 380 gaa tac ctt gtt gat ttt tca aat cgt tta gca tcg ta 1190 Glu Tyr Leu Val Asp Phe Ser Asn Arg Leu Ala Ser 385 390 395 <210> 115 <211> 396 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 115 Met Ser Glu Glu Tyr Leu His Gly Val Lys Val Thr Glu Ile Asn Gln 1 5 10 15 Ala Ile Arg Thr Ile Gln Ser Leu Ser Thr Ala Val Ile Gly Ile Val 20 25 30 Cys Thr Ala Asn Asp Ala Asp Asn 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tct gca gta gga aat gcc tca 96 Leu Val Pro Val Ala Glu Thr Ile Asn Ser Ala Val Gly Asn Ala Ser 20 25 30 tca aaa gac gtt tct gac acc gag ata agt gct tct caa cca gcg ctc 144 Ser Lys Asp Val Ser Asp Thr Glu Ile Ser Ala Ser Gln Pro Ala Leu 35 40 45 aac tcg ccg ctt tcg acc ctt tct gta tta gtc aaa acc gca ttt aat 192 Asn Ser Pro Leu Ser Thr Leu Ser Val Leu Val Lys Thr Ala Phe Asn 50 55 60 ccg gtt tca aca ttg atg tcg ttg act tgg aaa gaa tac gcc gtt tta 240 Pro Val Ser Thr Leu Met Ser Leu Thr Trp Lys Glu Tyr Ala Val Leu 65 70 75 80 tta tta agt gtg gtg tct ttt cct ctt atg gca caa gcc tct gat aca 288 Leu Leu Ser Val Val Ser Phe Pro Leu Met Ala Gln Ala Ser Asp Thr 85 90 95 gat tca gtg gta caa aga aaa cct gaa tta act gat gtg acg aat agc 336 Asp Ser Val Val Gln Arg Lys Pro Glu Leu Thr Asp Val Thr Asn Ser 100 105 110 aac agc tat cat gtg gaa tta gat aga gag cat cat aaa ggg gag cat 384 Asn Ser Tyr His Val Glu Leu Asp Arg Glu His His Lys Gly Glu His 115 120 125 caa aca aaa atc aaa cat act gag aat aat gtc atc att gtt gat att 432 Gln Thr Lys Ile Lys His Thr Glu Asn Asn Val Ile Ile Val Asp Ile 130 135 140 gca aaa cca aac caa aag ggc att tca gat aac cgt ttt aaa cac ttc 480 Ala Lys Pro Asn Gln Lys Gly Ile Ser Asp Asn Arg Phe Lys His Phe 145 150 155 160 aac atc cca aat ggg gcg gta ttt aac aat agc gcc aag gaa aaa cgc 528 Asn Ile Pro Asn Gly Ala Val Phe Asn Asn Ser Ala Lys Glu Lys Arg 165 170 175 tca cag tta gtg ggg tat ttg cca ggt aac cag aat tta acg gaa ggt 576 Ser Gln Leu Val Gly Tyr Leu Pro Gly Asn Gln Asn Leu Thr Glu Gly 180 185 190 agt gaa gca aaa gcg atc tta aat cag gtg act gga ccg gat gcc agt 624 Ser Glu Ala Lys Ala Ile Leu Asn Gln Val Thr Gly Pro Asp Ala Ser 195 200 205 aaa att gaa ggc gcc ctt gaa att tta ggg caa aaa gcc gat ttg gtg 672 Lys Ile Glu Gly Ala Leu Glu Ile Leu Gly Gln Lys Ala Asp Leu Val 210 215 220 att gcg aac caa aat ggc att gtg ctt aat ggg gta aaa acc att aat 720 Ile Ala Asn Gln Asn Gly Ile Val Leu Asn Gly Val Lys Thr Ile Asn 225 230 235 240 gcc aat cgt ttt gtg gca 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Arg Phe Trp Gly Leu Arg 50 55 60 acg act gca gaa gat cca tta ttc aag ttt gaa gtg tac acc cgc act 240 Thr Thr Ala Glu Asp Pro Leu Phe Lys Phe Glu Val Tyr Thr Arg Thr 65 70 75 80 gca caa atc tta aaa gat acg att gca ggg gcg ttt gat tgg gca gtg 288 Ala Gln Ile Leu Lys Asp Thr Ile Ala Gly Ala Phe Asp Trp Ala Val 85 90 95 gat aaa gat att tct gtc acg cta gtg aaa gat att att gaa gca atc 336 Asp Lys Asp Ile Ser Val Thr Leu Val Lys Asp Ile Ile Glu Ala Ile 100 105 110 aat gcg aag tgg cgt gat tac acc aca aaa ggc tac tta att ggc ggt 384 Asn Ala Lys Trp Arg Asp Tyr Thr Thr Lys Gly Tyr Leu Ile Gly Gly 115 120 125 aaa gcg tgg ctt aat aaa gag ctt aac agt gca acg aat tta aaa gat 432 Lys Ala Trp Leu Asn Lys Glu Leu Asn Ser Ala Thr Asn Leu Lys Asp 130 135 140 gcg aag ttg ttg atc tct tat gat tat cac cca gta cca ccg ctc gaa 480 Ala Lys Leu Leu Ile Ser Tyr Asp Tyr His Pro Val Pro Pro Leu Glu 145 150 155 160 cag cta ggc ttt aat cag tac att tct gat gaa tac ctt gtt gat ttt 528 Gln Leu Gly Phe Asn Gln Tyr Ile Ser Asp Glu Tyr Leu Val Asp Phe 165 170 175 tca aat cgt tta gca tcg ta 548 Ser Asn Arg Leu Ala Ser 180 <210> 121 <211> 182 <212> PRT <213> Pasteurella multocida <400> 121 Met Arg Ala Tyr Leu Asp Lys Glu Gln Gly Trp His Thr Ser Ile Ser 1 5 10 15 Asn Lys Gly Ile Asn Gly Val Ser Gly Val Thr Gln Pro Leu Tyr Phe 20 25 30 Asp Ile Asn Asp Ser Ser Thr Asp Val Asn Tyr Leu Asn Glu Gln Gly 35 40 45 Ile Thr Cys Cys Val Asn His Asn Gly Phe Arg Phe Trp Gly Leu Arg 50 55 60 Thr Thr Ala Glu Asp Pro Leu Phe Lys Phe Glu Val Tyr Thr Arg Thr 65 70 75 80 Ala Gln Ile Leu Lys Asp Thr Ile Ala Gly Ala Phe Asp Trp Ala Val 85 90 95 Asp Lys Asp Ile Ser Val Thr Leu Val Lys Asp Ile Ile Glu Ala Ile 100 105 110 Asn Ala Lys Trp Arg Asp Tyr Thr Thr Lys Gly Tyr Leu Ile Gly Gly 115 120 125 Lys Ala Trp Leu Asn Lys Glu Leu Asn Ser Ala Thr Asn Leu Lys Asp 130 135 140 Ala Lys Leu Leu Ile Ser Tyr Asp Tyr His Pro Val Pro Pro Leu Glu 145 150 155 160 Gln Leu Gly Phe Asn Gln Tyr Ile Ser Asp Glu Tyr Leu Val Asp Phe 165 170 175 Ser Asn Arg Leu Ala Ser 180 <210> 122 <211> 69 <212> DNA <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <220> <223> apvA-or1 <220> <221> CDS <222> (1)..(69) <400> 122 atg ttt tat gtc atg ctt gcc aat agg acg tct ata att tca tca atc 48 Met Phe Tyr Val Met Leu Ala Asn Arg Thr Ser Ile Ile Ser Ser Ile 1 5 10 15 gat aag ttt aag ata ctt agc 69 Asp Lys Phe Lys Ile Leu Ser 20 <210> 123 <211> 23 <212> PRT <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <400> 123 Met Phe Tyr Val Met Leu Ala Asn Arg Thr Ser Ile Ile Ser Ser Ile 1 5 10 15 Asp Lys Phe Lys Ile Leu Ser 20 <210> 124 <211> 64 <212> DNA <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <220> <223> apvA-or2 <220> <221> CDS <222> (3)..(62) <400> 124 ag cta agt atc tta aac tta tcg att gat gaa att ata gac gtc cta 47 Leu Ser Ile Leu Asn Leu Ser Ile Asp Glu Ile Ile Asp Val Leu 1 5 10 15 ttg gca agc atg aca ta 64 Leu Ala Ser Met Thr 20 <210> 125 <211> 20 <212> PRT <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <400> 125 Leu Ser Ile Leu Asn Leu Ser Ile Asp Glu Ile Ile Asp Val Leu Leu 1 5 10 15 Ala Ser Met Thr 20 <210> 126 <211> 653 <212> DNA <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <220> <223> apvB <220> <221> CDS <222> (1)..(651) <400> 126 tta att agc ttt cct ttt att act ttt gca agt aat gtt aat gga gcc 48 Leu Ile Ser Phe Pro Phe Ile Thr Phe Ala Ser Asn Val Asn Gly Ala 1 5 10 15 gaa att gga ttg gga gga gcc cgt gag agt agt att tac tat tct aaa 96 Glu Ile Gly Leu Gly Gly Ala Arg Glu Ser Ser Ile Tyr Tyr Ser Lys 20 25 30 cat aaa gta gca aca aat ccc ttt tta gca ctt gat ctt tct tta ggt 144 His Lys Val Ala Thr Asn Pro Phe Leu Ala Leu Asp Leu Ser Leu Gly 35 40 45 aat ttt tat atg aga ggg act gca gga att agc gaa ata gga tat gaa 192 Asn Phe Tyr Met Arg Gly Thr Ala Gly Ile Ser Glu Ile Gly Tyr Glu 50 55 60 caa tct ttc act gac aat ttc agc gta tca ctg ttt gtt aac cca ttt 240 Gln Ser Phe Thr Asp Asn Phe Ser Val Ser Leu Phe Val Asn Pro Phe 65 70 75 80 gat ggt ttt tca att aaa gga aaa gac ttg tta cct gga tat caa agt 288 Asp Gly Phe Ser Ile Lys Gly Lys Asp Leu Leu Pro Gly Tyr Gln Ser 85 90 95 att caa act cgc aaa act caa ttt gcc ttt ggt tgg gga tta aat tat 336 Ile Gln Thr Arg Lys Thr Gln Phe Ala Phe Gly Trp Gly Leu Asn Tyr 100 105 110 aat ttg gga ggt tta ttc ggc tta aat gat act ttt ata tcc ttg gaa 384 Asn Leu Gly Gly Leu Phe Gly Leu Asn Asp Thr Phe Ile Ser Leu Glu 115 120 125 gga aaa agc gga aaa cgt ggt gcg agt agt aat gtc agc tta ctt aaa 432 Gly Lys Ser Gly Lys Arg Gly Ala Ser Ser Asn Val Ser Leu Leu Lys 130 135 140 tcg ttt aat atg acg aaa aat tgg aaa gtt tca cca tat att ggc tca 480 Ser Phe Asn Met Thr Lys Asn Trp Lys Val Ser Pro Tyr Ile Gly Ser 145 150 155 160 agt tat tat tca tct aaa tat aca gat tat tac ttt ggt att aaa caa 528 Ser Tyr Tyr Ser Ser Lys Tyr Thr Asp Tyr Tyr Phe Gly Ile Lys Gln 165 170 175 tcc gaa tta ggt aat aaa att aca tcc gta tat aaa cct aaa gca gct 576 Ser Glu Leu Gly Asn Lys Ile Thr Ser Val Tyr Lys Pro Lys Ala Ala 180 185 190 tat gca aca cac ata ggt att aat act gat tat gct ttc acg aac aat 624 Tyr Ala Thr His Ile Gly Ile Asn Thr Asp Tyr Ala Phe Thr Asn Asn 195 200 205 ctt ggc atg ggt tta tct gtc ggt tgg at 653 Leu Gly Met Gly Leu Ser Val Gly Trp 210 215 <210> 127 <211> 217 <212> PRT <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <400> 127 Leu Ile Ser Phe Pro Phe Ile Thr Phe Ala Ser Asn Val Asn Gly Ala 1 5 10 15 Glu Ile Gly Leu Gly Gly Ala Arg Glu Ser Ser Ile Tyr Tyr Ser Lys 20 25 30 His Lys Val Ala Thr Asn Pro Phe Leu Ala Leu Asp Leu Ser Leu Gly 35 40 45 Asn Phe Tyr Met Arg Gly Thr Ala Gly Ile Ser Glu Ile Gly Tyr Glu 50 55 60 Gln Ser Phe Thr Asp Asn Phe Ser Val Ser Leu Phe Val Asn Pro Phe 65 70 75 80 Asp Gly Phe Ser Ile Lys Gly Lys Asp Leu Leu Pro Gly Tyr Gln Ser 85 90 95 Ile Gln Thr Arg Lys Thr Gln Phe Ala Phe Gly Trp Gly Leu Asn Tyr 100 105 110 Asn Leu Gly Gly Leu Phe Gly Leu Asn Asp Thr Phe Ile Ser Leu Glu 115 120 125 Gly Lys Ser Gly Lys Arg Gly Ala Ser Ser Asn Val Ser Leu Leu Lys 130 135 140 Ser Phe Asn Met Thr Lys Asn Trp Lys Val Ser Pro Tyr Ile Gly Ser 145 150 155 160 Ser Tyr Tyr Ser Ser Lys Tyr Thr Asp Tyr Tyr Phe Gly Ile Lys Gln 165 170 175 Ser Glu Leu Gly Asn Lys Ile Thr Ser Val Tyr Lys Pro Lys Ala Ala 180 185 190 Tyr Ala Thr His Ile Gly Ile Asn Thr Asp Tyr Ala Phe Thr Asn Asn 195 200 205 Leu Gly Met Gly Leu Ser Val Gly Trp 210 215 <210> 128 <211> 242 <212> DNA <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <220> <223> apvC <220> <221> CDS <222> (1)..(240) <400> 128 atg tgg cgg atg gga gat ttt atg tct aaa aaa gag agg ctg aat gat 48 Met Trp Arg Met Gly Asp Phe Met Ser Lys Lys Glu Arg Leu Asn Asp 1 5 10 15 atg gct cgc cag att tta tca gcg gcg gag ttg ctc att gca aag gaa 96 Met Ala Arg Gln Ile Leu Ser Ala Ala Glu Leu Leu Ile Ala Lys Glu 20 25 30 ggt ttg caa aat tta tcg atg agg aaa atc gca agt gaa gcc ggt atc 144 Gly Leu Gln Asn Leu Ser Met Arg Lys Ile Ala Ser Glu Ala Gly Ile 35 40 45 gca aca ggc acg ctt tat ctc tat ttc aaa acg aaa gac gag tta ctg 192 Ala Thr Gly Thr Leu Tyr Leu Tyr Phe Lys Thr Lys Asp Glu Leu Leu 50 55 60 gat tgt ttg gcg gaa caa tta cat gaa cga tat tat cgt tat ctg aat 240 Asp Cys Leu Ala Glu Gln Leu His Glu Arg Tyr Tyr Arg Tyr Leu Asn 65 70 75 80 at 242 <210> 129 <211> 80 <212> PRT <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <400> 129 Met Trp Arg Met Gly Asp Phe Met Ser Lys Lys Glu Arg Leu Asn Asp 1 5 10 15 Met Ala Arg Gln Ile Leu Ser Ala Ala Glu Leu Leu Ile Ala Lys Glu 20 25 30 Gly Leu Gln Asn Leu Ser Met Arg Lys Ile Ala Ser Glu Ala Gly Ile 35 40 45 Ala Thr Gly Thr Leu Tyr Leu Tyr Phe Lys Thr Lys Asp Glu Leu Leu 50 55 60 Asp Cys Leu Ala Glu Gln Leu His Glu Arg Tyr Tyr Arg Tyr Leu Asn 65 70 75 80 <210> 130 <211> 527 <212> DNA <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <220> <223> apvD <220> <221> CDS <222> (1)..(525) <400> 130 aat att caa aaa aca gtt att gct agc ggc aca ttg caa gcg act gaa 48 Asn Ile Gln Lys Thr Val Ile Ala Ser Gly Thr Leu Gln Ala Thr Glu 1 5 10 15 caa gta gat att ggt gca caa gta tct ggg cag att aag cat att tta 96 Gln Val Asp Ile Gly Ala Gln Val Ser Gly Gln Ile Lys His Ile Leu 20 25 30 gta caa gaa gga cag aag gtt aaa aaa ggt gag cta tta gct gta att 144 Val Gln Glu Gly Gln Lys Val Lys Lys Gly Glu Leu Leu Ala Val Ile 35 40 45 gat cca cgt ctg gct gaa acg gaa tta aaa cta gca aaa gct gag cta 192 Asp Pro Arg Leu Ala Glu Thr Glu Leu Lys Leu Ala Lys Ala Glu Leu 50 55 60 gca aat gct tct gct aat ttg gat aca aaa aaa att aat ctt aag caa 240 Ala Asn Ala Ser Ala Asn Leu Asp Thr Lys Lys Ile Asn Leu Lys Gln 65 70 75 80 ctg caa tca gat tgg gaa cgt cat caa cgt ttg ata cga acc aat gcg 288 Leu Gln Ser Asp Trp Glu Arg His Gln Arg Leu Ile Arg Thr Asn Ala 85 90 95 aca agc caa aag gaa aca gaa gaa gca aaa agt aga tta aat acg gcc 336 Thr Ser Gln Lys Glu Thr Glu Glu Ala Lys Ser Arg Leu Asn Thr Ala 100 105 110 aaa gca gaa ctt caa att gcg caa aat aat cta gat atc gct aaa atc 384 Lys Ala Glu Leu Gln Ile Ala Gln Asn Asn Leu Asp Ile Ala Lys Ile 115 120 125 aga gtg gaa aaa gct gaa acc gaa cta gga tat aca gaa att cgt tct 432 Arg Val Glu Lys Ala Glu Thr Glu Leu Gly Tyr Thr Glu Ile Arg Ser 130 135 140 cca ctt gat gca aca gta att tca gta ttt gcg caa aat ggt caa act 480 Pro Leu Asp Ala Thr Val Ile Ser Val Phe Ala Gln Asn Gly Gln Thr 145 150 155 160 tta gtc acc acc caa caa gta cca gtg ctg atg aaa tta gct aat at 527 Leu Val Thr Thr Gln Gln Val Pro Val Leu Met Lys Leu Ala Asn 165 170 175 <210> 131 <211> 175 <212> PRT <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <400> 131 Asn Ile Gln Lys Thr Val Ile Ala Ser Gly Thr Leu Gln Ala Thr Glu 1 5 10 15 Gln Val Asp Ile Gly Ala Gln Val Ser Gly Gln Ile Lys His Ile Leu 20 25 30 Val Gln Glu Gly Gln Lys Val Lys Lys Gly Glu Leu Leu Ala Val Ile 35 40 45 Asp Pro Arg Leu Ala Glu Thr Glu Leu Lys Leu Ala Lys Ala Glu Leu 50 55 60 Ala Asn Ala Ser Ala Asn Leu Asp Thr Lys Lys Ile Asn Leu Lys Gln 65 70 75 80 Leu Gln Ser Asp Trp Glu Arg His Gln Arg Leu Ile Arg Thr Asn Ala 85 90 95 Thr Ser Gln Lys Glu Thr Glu Glu Ala Lys Ser Arg Leu Asn Thr Ala 100 105 110 Lys Ala Glu Leu Gln Ile Ala Gln Asn Asn Leu Asp Ile Ala Lys Ile 115 120 125 Arg Val Glu Lys Ala Glu Thr Glu Leu Gly Tyr Thr Glu Ile Arg Ser 130 135 140 Pro Leu Asp Ala Thr Val Ile Ser Val Phe Ala Gln Asn Gly Gln Thr 145 150 155 160 Leu Val Thr Thr Gln Gln Val Pro Val Leu Met Lys Leu Ala Asn 165 170 175 <210> 132 <211> 867 <212> DNA <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <220> <223> atpG <220> <221> CDS <222> (1)..(864) <400> 132 atg gca ggt gcg aaa gag ata aga acc aaa att gca agt gtg aaa aat 48 Met Ala Gly Ala Lys Glu Ile Arg Thr Lys Ile Ala Ser Val Lys Asn 1 5 10 15 act caa aaa atc acc aaa gca atg gaa atg gtt gct acc tct aaa atg 96 Thr Gln Lys Ile Thr Lys Ala Met Glu Met Val Ala Thr Ser Lys Met 20 25 30 cgt aaa acg caa gag cgt atg gct gcc agt cgt cct tat tcg gaa aca 144 Arg Lys Thr Gln Glu Arg Met Ala Ala Ser Arg Pro Tyr Ser Glu Thr 35 40 45 atc cgt aag gtg att agc cat att gcg aaa gga agc att ggt tat aag 192 Ile Arg Lys Val Ile Ser His Ile Ala Lys Gly Ser Ile Gly Tyr Lys 50 55 60 cac ccg ttt tta act gaa cgt gat att aaa aaa gta ggc tat ctt gtc 240 His Pro Phe Leu Thr Glu Arg Asp Ile Lys Lys Val Gly Tyr Leu Val 65 70 75 80 gtt tcg acc gat cgc ggt tta tgc ggt ggc ctt aat atc aat tta ttc 288 Val Ser Thr Asp Arg Gly Leu Cys Gly Gly Leu Asn Ile Asn Leu Phe 85 90 95 aaa gcg act ttg aat gaa ttt aaa acg tgg aaa gat aaa gac gtt agt 336 Lys Ala Thr Leu Asn Glu Phe Lys Thr Trp Lys Asp Lys Asp Val Ser 100 105 110 gtt gag ctt ggt tta gta ggg tcg aaa ggc gta agc ttt tac caa aat 384 Val Glu Leu Gly Leu Val Gly Ser Lys Gly Val Ser Phe Tyr Gln Asn 115 120 125 cta ggc tta aac gtg aga tct caa gta acg gga tta ggc gat aat ccg 432 Leu Gly Leu Asn Val Arg Ser Gln Val Thr Gly Leu Gly Asp Asn Pro 130 135 140 gaa atg gaa cgt atc gtg ggc gca gtt aat gaa atg att aat gcg ttc 480 Glu Met Glu Arg Ile Val Gly Ala Val Asn Glu Met Ile Asn Ala Phe 145 150 155 160 cga aac gga gaa gtg gat gcg gtt tac gtc gct tac aac cgt ttt gaa 528 Arg Asn Gly Glu Val Asp Ala Val Tyr Val Ala Tyr Asn Arg Phe Glu 165 170 175 aat acg atg tca caa aaa cct gtt atc gca cag tta ctt ccg tta cct 576 Asn Thr Met Ser Gln Lys Pro Val Ile Ala Gln Leu Leu Pro Leu Pro 180 185 190 aaa cta gat gac gat gaa tta gat acg aaa ggt tca tgg gat tat att 624 Lys Leu Asp Asp Asp Glu Leu Asp Thr Lys Gly Ser Trp Asp Tyr Ile 195 200 205 tat gaa ccg aat cca caa gtt tta ttg gat agt tta ctt gtt cgt tat 672 Tyr Glu Pro Asn Pro Gln Val Leu Leu Asp Ser Leu Leu Val Arg Tyr 210 215 220 tta gaa act cag gta tac caa gca gtt gta gat aac cta gct tct gaa 720 Leu Glu Thr Gln Val Tyr Gln Ala Val Val Asp Asn Leu Ala Ser Glu 225 230 235 240 caa gcc gct cga atg gta gcg atg aaa gcc gca aca gat aat gcg ggt 768 Gln Ala Ala Arg Met Val Ala Met Lys Ala Ala Thr Asp Asn Ala Gly 245 250 255 aca tta atc gat gaa tta caa tta gtg tat aac aaa gct cgc caa gca 816 Thr Leu Ile Asp Glu Leu Gln Leu Val Tyr Asn Lys Ala Arg Gln Ala 260 265 270 agc att aca aat gaa tta aac gaa att gtt gcg ggt gcc gca gca att 864 Ser Ile Thr Asn Glu Leu Asn Glu Ile Val Ala Gly Ala Ala Ala Ile 275 280 285 taa 867 <210> 133 <211> 288 <212> PRT <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <400> 133 Met Ala Gly Ala Lys Glu Ile Arg Thr Lys Ile Ala Ser Val Lys Asn 1 5 10 15 Thr Gln Lys Ile Thr Lys Ala Met Glu Met Val Ala Thr Ser Lys Met 20 25 30 Arg Lys Thr Gln Glu Arg Met Ala Ala Ser Arg Pro Tyr Ser Glu Thr 35 40 45 Ile Arg Lys Val Ile Ser His Ile Ala Lys Gly Ser Ile Gly Tyr Lys 50 55 60 His Pro Phe Leu Thr Glu Arg Asp Ile Lys Lys Val Gly Tyr Leu Val 65 70 75 80 Val Ser Thr Asp Arg Gly Leu Cys Gly Gly Leu Asn Ile Asn Leu Phe 85 90 95 Lys Ala Thr Leu Asn Glu Phe Lys Thr Trp Lys Asp Lys Asp Val Ser 100 105 110 Val Glu Leu Gly Leu Val Gly Ser Lys Gly Val Ser Phe Tyr Gln Asn 115 120 125 Leu Gly Leu Asn Val Arg Ser Gln Val Thr Gly Leu Gly Asp Asn Pro 130 135 140 Glu Met Glu Arg Ile Val Gly Ala Val Asn Glu Met Ile Asn Ala Phe 145 150 155 160 Arg Asn Gly Glu Val Asp Ala Val Tyr Val Ala Tyr Asn Arg Phe Glu 165 170 175 Asn Thr Met Ser Gln Lys Pro Val Ile Ala Gln Leu Leu Pro Leu Pro 180 185 190 Lys Leu Asp Asp Asp Glu Leu Asp Thr Lys Gly Ser Trp Asp Tyr Ile 195 200 205 Tyr Glu Pro Asn Pro Gln Val Leu Leu Asp Ser Leu Leu Val Arg Tyr 210 215 220 Leu Glu Thr Gln Val Tyr Gln Ala Val Val Asp Asn Leu Ala Ser Glu 225 230 235 240 Gln Ala Ala Arg Met Val Ala Met Lys Ala Ala Thr Asp Asn Ala Gly 245 250 255 Thr Leu Ile Asp Glu Leu Gln Leu Val Tyr Asn Lys Ala Arg Gln Ala 260 265 270 Ser Ile Thr Asn Glu Leu Asn Glu Ile Val Ala Gly Ala Ala Ala Ile 275 280 285 <210> 134 <211> 534 <212> DNA <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <220> <223> atpH <220> <221> CDS <222> (1)..(531) <400> 134 atg tca gaa tta agt aca gta gct cgc ccc tac gct aaa gca gct ttt 48 Met Ser Glu Leu Ser Thr Val Ala Arg Pro Tyr Ala Lys Ala Ala Phe 1 5 10 15 gat ttt gct tta gaa caa ggt cag ttg gac aaa tgg caa gaa atg tta 96 Asp Phe Ala Leu Glu Gln Gly Gln Leu Asp Lys Trp Gln Glu Met Leu 20 25 30 cag ttt tcg gca ttc gtt gct gaa aac gaa caa gtg gcg gaa tat att 144 Gln Phe Ser Ala Phe Val Ala Glu Asn Glu Gln Val Ala Glu Tyr Ile 35 40 45 aat tct tcc ctt gca agc ggt cag att tct gaa act ttt atc aaa atc 192 Asn Ser Ser Leu Ala Ser Gly Gln Ile Ser Glu Thr Phe Ile Lys Ile 50 55 60 tgc ggc gac caa ctt gat caa tat ggg caa aat ttt att cgt gta 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Actinobacillus pleuropneumoniae <400> 135 Met Ser Glu Leu Ser Thr Val Ala Arg Pro Tyr Ala Lys Ala Ala Phe 1 5 10 15 Asp Phe Ala Leu Glu Gln Gly Gln Leu Asp Lys Trp Gln Glu Met Leu 20 25 30 Gln Phe Ser Ala Phe Val Ala Glu Asn Glu Gln Val Ala Glu Tyr Ile 35 40 45 Asn Ser Ser Leu Ala Ser Gly Gln Ile Ser Glu Thr Phe Ile Lys Ile 50 55 60 Cys Gly Asp Gln Leu Asp Gln Tyr Gly Gln Asn Phe Ile Arg Val Met 65 70 75 80 Ala Glu Asn Lys Arg Leu Ala Val Leu Pro Met Val Phe Asp Thr Phe 85 90 95 Val Ser Leu Arg Ala Glu His Glu Ala Val Lys Asp Val Thr Ile Val 100 105 110 Ser Ala Asn Glu Leu Ser Gln Ala Gln Glu Asp Lys Ile Ala Lys Ala 115 120 125 Met Glu Lys Arg Leu Gly Gln Lys Val Arg Leu Thr Asn Gln Ile Asp 130 135 140 Asn Ser Leu Ile Ala Gly Val Ile Ile Lys Tyr Asp Asp Val Val Ile 145 150 155 160 Asp Gly Ser Ser Arg Gly Gln Leu Asn Arg Leu Ala Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Leu <210> 136 <211> 321 <212> DNA <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <220> <223> dksA <220> <221> CDS <222> (1)..(318) <400> 136 gca tgg cat gtg caa att atg gac gaa gct gag cgt aca aaa aac caa 48 Ala Trp His Val Gln Ile Met Asp Glu Ala Glu Arg Thr Lys Asn Gln 1 5 10 15 atg cag gaa gaa gtc gct aat ttc gcc gat cct gcg gac cgc gcc act 96 Met Gln Glu Glu Val Ala Asn Phe Ala Asp Pro Ala Asp Arg Ala Thr 20 25 30 cag gaa gaa gaa ttc agt ctt gaa tta aga aac cgt gac cgt gag cgt 144 Gln Glu Glu Glu Phe Ser Leu Glu Leu Arg Asn Arg Asp Arg Glu Arg 35 40 45 aaa ttg ctt aag aag att gag caa acg tta aat agc att gcc gaa gac 192 Lys Leu Leu Lys Lys Ile Glu Gln Thr Leu Asn Ser Ile Ala Glu Asp 50 55 60 gaa tac ggc tat tgc gaa act tgc ggt gtt gaa atc ggt tta cgt cgt 240 Glu Tyr Gly Tyr Cys Glu Thr Cys Gly Val Glu Ile Gly Leu Arg Arg 65 70 75 80 tta gaa gcg cgc ccg acc gcg gat atg tgt atc gat tgc aaa aca ctt 288 Leu Glu Ala Arg Pro Thr Ala Asp Met Cys Ile Asp Cys Lys Thr Leu 85 90 95 gcg gaa atc cgt gaa aag caa atg ggc tta taa 321 Ala Glu Ile Arg Glu Lys Gln Met Gly Leu 100 105 <210> 137 <211> 106 <212> PRT <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <400> 137 Ala Trp His Val Gln Ile Met Asp Glu Ala Glu Arg Thr Lys Asn Gln 1 5 10 15 Met Gln Glu Glu Val Ala Asn Phe Ala Asp Pro Ala Asp Arg Ala Thr 20 25 30 Gln Glu Glu Glu Phe Ser Leu Glu Leu Arg Asn Arg Asp Arg Glu Arg 35 40 45 Lys Leu Leu Lys Lys Ile Glu Gln Thr Leu Asn Ser Ile Ala Glu Asp 50 55 60 Glu Tyr Gly Tyr Cys Glu Thr Cys Gly Val Glu Ile Gly Leu Arg Arg 65 70 75 80 Leu Glu Ala Arg Pro Thr Ala Asp Met Cys Ile Asp Cys Lys Thr Leu 85 90 95 Ala Glu Ile Arg Glu Lys Gln Met Gly Leu 100 105 <210> 138 <211> 33 <212> DNA <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <220> <223> dnaK <220> <221> CDS <222> (1)..(30) <400> 138 gct gag ttt gaa gaa gtg aaa gat aat aaa taa 33 Ala Glu Phe Glu Glu Val Lys Asp Asn Lys 1 5 10 <210> 139 <211> 10 <212> PRT <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <400> 139 Ala Glu Phe Glu Glu Val Lys Asp Asn Lys 1 5 10 <210> 140 <211> 453 <212> DNA <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <220> <223> exbB <220> <221> CDS <222> (1)..(450) <400> 140 atg gaa caa atg ctt gaa ctt tta caa ggt cat gtt gat tat att att 48 Met Glu Gln Met Leu Glu Leu Leu Gln Gly His Val Asp Tyr Ile Ile 1 5 10 15 tta ggc tta tta cta tta atg agt gtt gtg ttg gta tgg aaa att att 96 Leu Gly Leu Leu Leu Leu Met Ser Val Val Leu Val Trp Lys Ile Ile 20 25 30 gaa cgc gta ctt ttc tac aaa caa ttg gat gtg acc aaa tat gac acg 144 Glu Arg Val Leu Phe Tyr Lys Gln Leu Asp Val Thr Lys Tyr Asp Thr 35 40 45 cta caa gat ttg gaa att gat acc act cgc aat tta acc acc att tcc 192 Leu Gln Asp Leu Glu Ile Asp Thr Thr Arg Asn Leu Thr Thr Ile Ser 50 55 60 act atc ggt gcc aac gcc cct tat atc ggt tta tta gga acc gta tta 240 Thr Ile Gly Ala Asn Ala Pro Tyr Ile Gly Leu Leu Gly Thr Val Leu 65 70 75 80 ggg atc tta ctt acc ttc tat cat tta ggg cat tcc ggc ggt gat att 288 Gly Ile Leu Leu Thr Phe Tyr His Leu Gly His Ser Gly Gly Asp Ile 85 90 95 gac gcc gca tcc att atg gtt cac ctt tcg ctt gca tta aaa gca acc 336 Asp Ala Ala Ser Ile Met Val His Leu Ser Leu Ala Leu Lys Ala Thr 100 105 110 gca gcc ggt atc tta gtc gct att ccg gca atg atg ttc tac agc ggt 384 Ala Ala Gly Ile Leu Val Ala Ile Pro Ala Met Met Phe Tyr Ser Gly 115 120 125 ttt aac cgt aaa gtg gat gaa agc aaa ctt aaa tgg caa gcg att caa 432 Phe Asn Arg Lys Val Asp Glu Ser Lys Leu Lys Trp Gln Ala Ile Gln 130 135 140 gct cgt aaa gcc aat caa taa 453 Ala Arg Lys Ala Asn Gln 145 150 <210> 141 <211> 150 <212> PRT <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <400> 141 Met Glu Gln Met Leu Glu Leu Leu Gln Gly His Val Asp Tyr Ile Ile 1 5 10 15 Leu Gly Leu Leu Leu Leu Met Ser Val Val Leu Val Trp Lys Ile Ile 20 25 30 Glu Arg Val Leu Phe Tyr Lys Gln Leu Asp Val Thr Lys Tyr Asp Thr 35 40 45 Leu Gln Asp Leu Glu Ile Asp Thr Thr Arg Asn Leu Thr Thr Ile Ser 50 55 60 Thr Ile Gly Ala Asn Ala Pro Tyr Ile Gly Leu Leu Gly Thr Val Leu 65 70 75 80 Gly Ile Leu Leu Thr Phe Tyr His Leu Gly His Ser Gly Gly Asp Ile 85 90 95 Asp Ala Ala Ser Ile Met Val His Leu Ser Leu Ala Leu Lys Ala Thr 100 105 110 Ala Ala Gly Ile Leu Val Ala Ile Pro Ala Met Met Phe Tyr Ser Gly 115 120 125 Phe Asn Arg Lys Val Asp Glu Ser Lys Leu Lys Trp Gln Ala Ile Gln 130 135 140 Ala Arg Lys Ala Asn Gln 145 150 <210> 142 <211> 720 <212> DNA <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <220> <223> fkpA <220> <221> CDS <222> (1)..(717) <400> 142 atg tta aaa aat aaa ctt tct gtt ctt gca atc gta gcc ggt acg ttc 48 Met Leu Lys Asn Lys Leu Ser Val Leu Ala Ile Val Ala Gly Thr Phe 1 5 10 15 gtt tca gct caa act gca ttt gca gcg gat caa aaa ttc att gac gat 96 Val Ser Ala Gln Thr Ala Phe Ala Ala Asp Gln Lys Phe Ile Asp Asp 20 25 30 tca tca tat gca gtc ggc gta ttg atg ggt aaa aat atc gaa ggc gtc 144 Ser Ser Tyr Ala Val Gly Val Leu Met Gly Lys Asn Ile Glu Gly Val 35 40 45 gtt gaa tca caa aaa gaa att ttt tct tat aac caa gat aaa atc ttg 192 Val Glu Ser Gln Lys Glu Ile Phe Ser Tyr Asn Gln Asp Lys Ile Leu 50 55 60 gcg ggt gtc caa gat acc atc aaa aaa acc ggt aaa tta acc gat gaa 240 Ala Gly Val Gln Asp Thr Ile Lys Lys Thr Gly Lys Leu Thr Asp Glu 65 70 75 80 gat cta caa aaa caa tta aaa tcg ctt gat act tat ctt gca agt caa 288 Asp Leu Gln Lys Gln Leu Lys Ser Leu Asp Thr Tyr Leu Ala Ser Gln 85 90 95 gaa agc aaa att gcg gcg gag aaa agc aaa gca acc gta gaa gcc ggt 336 Glu Ser Lys Ile Ala Ala Glu Lys Ser Lys Ala Thr Val Glu Ala Gly 100 105 110 aat aaa ttt cgt acc gac tac gaa aaa caa agc ggc gtg aaa aaa acc 384 Asn Lys Phe Arg Thr Asp Tyr Glu Lys Gln Ser Gly Val Lys Lys Thr 115 120 125 gct tcc ggt tta ctt tat aaa att gaa aaa gcc ggc acg ggc gaa tcg 432 Ala Ser Gly Leu Leu Tyr Lys Ile Glu Lys Ala Gly Thr Gly Glu Ser 130 135 140 cct aaa gcg gaa gat acc gtt aaa gtt cac tat aaa ggg aca tta acc 480 Pro Lys Ala Glu Asp Thr Val Lys Val His Tyr Lys Gly Thr Leu Thr 145 150 155 160 gat ggt acg gta ttc gat agc tca tac gat cgc ggt gag ccg att gaa 528 Asp Gly Thr Val Phe Asp Ser Ser Tyr Asp Arg Gly Glu Pro Ile Glu 165 170 175 ttc caa tta aac caa tta att ccg ggt tgg att gaa gcg att cca atg 576 Phe Gln Leu Asn Gln Leu Ile Pro Gly Trp Ile Glu Ala Ile Pro Met 180 185 190 ttg aaa aaa ggc gga aaa atg gaa atc gtc gtt 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Asp Tyr Glu Lys Gln Ser Gly Val Lys Lys Thr 115 120 125 Ala Ser Gly Leu Leu Tyr Lys Ile Glu Lys Ala Gly Thr Gly Glu Ser 130 135 140 Pro Lys Ala Glu Asp Thr Val Lys Val His Tyr Lys Gly Thr Leu Thr 145 150 155 160 Asp Gly Thr Val Phe Asp Ser Ser Tyr Asp Arg Gly Glu Pro Ile Glu 165 170 175 Phe Gln Leu Asn Gln Leu Ile Pro Gly Trp Ile Glu Ala Ile Pro Met 180 185 190 Leu Lys Lys Gly Gly Lys Met Glu Ile Val Val Pro Pro Glu Leu Gly 195 200 205 Tyr Gly Glu Arg Gln Ala Gly Lys Ile Pro Ala Ser Ser Thr Leu Lys 210 215 220 Phe Glu Ile Glu Leu Leu Asp Phe Lys Ala Ala Glu Ala Lys Lys 225 230 235 <210> 144 <211> 290 <212> DNA <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <220> <223> HI0379 <220> <221> CDS <222> (3)..(287) <400> 144 tg cat agc gtg aga ggt ccg ggc ggc ggt tat caa ctc ggt aag caa 47 His Ser Val Arg Gly Pro Gly Gly Gly Tyr Gln Leu Gly Lys Gln 1 5 10 15 cct gaa gag att agt gtg ggg atg att att gcg gcg gtg aat gaa aat 95 Pro Glu Glu Ile Ser Val Gly Met Ile Ile Ala Ala Val Asn Glu Asn 20 25 30 ctc gac gta acc aaa tgt aaa ggt agc ggc aac tgt agc aaa aac tct 143 Leu Asp Val Thr Lys Cys Lys Gly Ser Gly Asn Cys Ser Lys Asn Ser 35 40 45 cag tgc tta acc cat cat tta tgg gaa cgt tta gaa gaa caa atc ggt 191 Gln Cys Leu Thr His His Leu Trp Glu Arg Leu Glu Glu Gln Ile Gly 50 55 60 gtg ttt tta aat acg att act tta gcg gaa ctt gtt gaa gaa cat tcg 239 Val Phe Leu Asn Thr Ile Thr Leu Ala Glu Leu Val Glu Glu His Ser 65 70 75 gat cac gat tgt gaa aaa gaa cat tgc cac gat cat tca cac aaa cat 287 Asp His Asp Cys Glu Lys Glu His Cys His Asp His Ser His Lys His 80 85 90 95 taa 290 <210> 145 <211> 95 <212> PRT <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <400> 145 His Ser Val Arg Gly Pro Gly Gly Gly Tyr Gln Leu Gly Lys Gln Pro 1 5 10 15 Glu Glu Ile Ser Val Gly Met Ile Ile Ala Ala Val Asn Glu Asn Leu 20 25 30 Asp Val Thr Lys Cys Lys Gly Ser Gly Asn Cys Ser Lys Asn Ser Gln 35 40 45 Cys Leu Thr His His Leu Trp Glu Arg Leu Glu Glu Gln Ile Gly Val 50 55 60 Phe Leu Asn Thr Ile Thr Leu Ala Glu Leu Val Glu Glu His Ser 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Arg Tyr Ser Thr Leu Gly Gly Val Cys Leu Asn Val 35 40 45 ggt tgt att ccg tct aaa gca tta tta cac gtt gca aaa gtt atc gaa 192 Gly Cys Ile Pro Ser Lys Ala Leu Leu His Val Ala Lys Val Ile Glu 50 55 60 gaa gca aaa cac gca gag aaa aac ggt att act ttc ggt gag ccc aac 240 Glu Ala Lys His Ala Glu Lys Asn Gly Ile Thr Phe Gly Glu Pro Asn 65 70 75 80 att gat tta gat aaa gtg cgt gcg ggt aaa gaa gcg gtt gtt tct aaa 288 Ile Asp Leu Asp Lys Val Arg Ala Gly Lys Glu Ala Val Val Ser Lys 85 90 95 tta acc ggc ggt tta gcg ggt atg gct aaa gca cgt aaa gta aca gta 336 Leu Thr Gly Gly Leu Ala Gly Met Ala Lys Ala Arg Lys Val Thr Val 100 105 110 gtg gaa ggt tta gcg gcg ttt acc gat ccg aat act tta gta gct cgt 384 Val Glu Gly Leu Ala Ala Phe Thr Asp Pro Asn Thr Leu Val Ala Arg 115 120 125 gac cgt gac ggt aat ccg aca acg att aaa ttt gat tat gca att att 432 Asp Arg Asp Gly Asn Pro Thr Thr Ile Lys Phe Asp Tyr Ala Ile Ile 130 135 140 gca gcc ggt tct cgt ccg att cag ctt ccg ttc att cca cac gaa gat 480 Ala Ala Gly Ser Arg Pro Ile Gln Leu Pro Phe Ile Pro His Glu Asp 145 150 155 160 ccg cgt gtg tgg gat tct acg gat gca ctt aaa tta aaa gaa gta ccc 528 Pro Arg Val Trp Asp Ser Thr Asp Ala Leu Lys Leu Lys Glu Val Pro 165 170 175 gaa aaa att act cat tat ggg cc 551 Glu Lys Ile Thr His Tyr Gly 180 <210> 149 <211> 183 <212> PRT <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <400> 149 Met Ser Lys Glu Ile Lys Thr Gln Val Val Val Leu Gly Ala Gly Pro 1 5 10 15 Ala Gly Tyr Ser Ala Ala Phe Arg Cys Ala Asp Leu Gly Leu Glu Thr 20 25 30 Val Ile Val Glu Arg Tyr Ser Thr Leu Gly Gly Val Cys Leu Asn Val 35 40 45 Gly Cys Ile Pro Ser Lys Ala Leu Leu His Val Ala Lys Val Ile Glu 50 55 60 Glu Ala Lys His Ala Glu Lys Asn Gly Ile Thr Phe Gly Glu Pro Asn 65 70 75 80 Ile Asp Leu Asp Lys Val Arg Ala Gly Lys Glu Ala Val Val Ser Lys 85 90 95 Leu Thr Gly Gly Leu Ala Gly Met Ala Lys Ala Arg Lys Val Thr Val 100 105 110 Val Glu Gly Leu Ala Ala Phe Thr Asp Pro Asn Thr Leu Val Ala Arg 115 120 125 Asp Arg Asp Gly Asn Pro Thr Thr Ile Lys Phe Asp Tyr Ala Ile Ile 130 135 140 Ala Ala Gly Ser Arg Pro Ile Gln Leu Pro Phe Ile Pro His Glu Asp 145 150 155 160 Pro Arg Val Trp Asp Ser Thr Asp Ala Leu Lys Leu Lys Glu Val Pro 165 170 175 Glu Lys Ile Thr His Tyr Gly 180 <210> 150 <211> 1095 <212> DNA <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <220> <223> Omp5-2 <220> <221> CDS <222> (1)..(1092) <400> 150 atg aaa aaa tca tta gtt gct tta aca gta tta tcg gct gca gcg gta 48 Met Lys Lys Ser Leu Val Ala Leu Thr Val Leu Ser Ala Ala Ala Val 1 5 10 15 gct caa gca gcg cca caa caa aat act ttc tac gca ggt gcg aaa gca 96 Ala Gln Ala Ala Pro Gln Gln Asn Thr Phe Tyr Ala Gly Ala Lys Ala 20 25 30 ggt tgg gcg tca ttc cat gat ggt atc gaa caa tta gat tca gct aaa 144 Gly Trp Ala Ser Phe His Asp Gly Ile Glu Gln Leu Asp Ser Ala Lys 35 40 45 aac aca gat cgc ggt aca aaa tac ggt atc aac cgt aat tca gta act 192 Asn Thr Asp Arg Gly Thr Lys Tyr Gly Ile Asn Arg Asn Ser Val Thr 50 55 60 tac ggc gta ttc ggc ggt tac caa att tta aac caa gac aaa tta ggt 240 Tyr Gly Val Phe Gly Gly 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Val Glu Tyr Gln Trp Leu Asn Asn Ala Gly Lys Ala 180 185 190 agc tac tct act tta aat cgt atg ggt gca act gac tac cgt tcg gat 624 Ser Tyr Ser Thr Leu Asn Arg Met Gly Ala Thr Asp Tyr Arg Ser Asp 195 200 205 atc agt tcc gta tct gca ggt tta agc tac cgt ttc ggt caa ggt gcg 672 Ile Ser Ser Val Ser Ala Gly Leu Ser Tyr Arg Phe Gly Gln Gly Ala 210 215 220 gca ccg gtt gca gct ccg gca gtt gaa act aaa aac ttc gca ttc agc 720 Ala Pro Val Ala Ala Pro Ala Val Glu Thr Lys Asn Phe Ala Phe Ser 225 230 235 240 tct gac gta tta ttc gca ttc ggt aaa tca aac tta aaa ccg gct gcg 768 Ser Asp Val Leu Phe Ala Phe Gly Lys Ser Asn Leu Lys Pro Ala Ala 245 250 255 gca aca gca tta gat gca atg caa acc gaa atc aat aac gca ggt tta 816 Ala Thr Ala Leu Asp Ala Met Gln Thr Glu Ile Asn Asn Ala Gly Leu 260 265 270 tca aat gct gcg atc caa gta aac ggt tac acg gac cgt atc ggt aaa 864 Ser Asn Ala Ala Ile Gln Val Asn Gly Tyr Thr Asp Arg Ile Gly Lys 275 280 285 gaa gct tca aac tta aaa ctt tca caa cgt cgt gcg gaa aca gta gct 912 Glu Ala Ser Asn Leu Lys Leu Ser Gln Arg Arg Ala Glu Thr Val Ala 290 295 300 aac tac atc gtt tct aaa ggt gct ccg gca gct aac gta act gca gta 960 Asn Tyr Ile Val Ser Lys Gly Ala Pro Ala Ala Asn Val Thr Ala Val 305 310 315 320 ggt tac ggt gaa gca aac cct gta acc ggc gca aca tgt gac aaa gtt 1008 Gly Tyr Gly Glu Ala Asn Pro Val Thr Gly Ala Thr Cys Asp Lys Val 325 330 335 aaa ggt cgt aaa gca tta atc gct tgc tta gca ccg gat cgt cgt gtt 1056 Lys Gly Arg Lys Ala Leu Ile Ala Cys Leu Ala Pro Asp Arg Arg Val 340 345 350 gaa gtt caa gtt caa ggt act aaa gaa gta act atg taa 1095 Glu Val Gln Val Gln Gly Thr Lys Glu Val Thr Met 355 360 <210> 151 <211> 364 <212> PRT <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <400> 151 Met Lys Lys Ser Leu Val Ala Leu Thr Val Leu Ser Ala Ala Ala Val 1 5 10 15 Ala Gln Ala Ala Pro Gln Gln Asn Thr Phe Tyr Ala Gly Ala Lys Ala 20 25 30 Gly Trp Ala Ser Phe His Asp Gly Ile Glu Gln Leu Asp Ser Ala Lys 35 40 45 Asn Thr Asp Arg Gly Thr Lys Tyr Gly Ile Asn Arg Asn Ser Val Thr 50 55 60 Tyr Gly Val Phe Gly Gly Tyr Gln Ile Leu Asn Gln Asp Lys Leu Gly 65 70 75 80 Leu Ala Ala Glu Leu Gly Tyr Asp Tyr Phe Gly Arg Val Arg Gly Ser 85 90 95 Glu Lys Pro Asn Gly Lys Ala Asp Lys Lys Thr Phe Arg His Ala Ala 100 105 110 His Gly Ala Thr Ile Ala Leu Lys Pro Ser Tyr Glu Val Leu Pro Asp 115 120 125 Leu Asp Val Tyr Gly Lys Val Gly Ile Ala Leu Val Asn Asn Thr Tyr 130 135 140 Lys Thr Phe Asn Ala Ala Gln Glu Lys Val Lys Thr Arg Arg Phe Gln 145 150 155 160 Ser Ser Leu Ile Leu Gly Ala Gly Val Glu Tyr Ala Ile Leu Pro Glu 165 170 175 Leu Ala Ala Arg Val Glu Tyr Gln Trp Leu Asn Asn Ala Gly Lys Ala 180 185 190 Ser Tyr Ser Thr Leu Asn Arg Met Gly Ala Thr Asp Tyr Arg Ser Asp 195 200 205 Ile Ser Ser Val Ser Ala Gly Leu Ser Tyr Arg Phe Gly Gln Gly Ala 210 215 220 Ala Pro Val Ala Ala Pro Ala Val Glu Thr Lys Asn Phe Ala Phe Ser 225 230 235 240 Ser Asp Val Leu Phe Ala Phe Gly Lys Ser Asn Leu Lys Pro Ala Ala 245 250 255 Ala Thr Ala Leu Asp Ala Met Gln Thr Glu Ile Asn Asn Ala Gly Leu 260 265 270 Ser Asn Ala Ala Ile Gln Val Asn Gly Tyr Thr Asp Arg Ile Gly Lys 275 280 285 Glu Ala Ser Asn Leu Lys Leu Ser Gln Arg Arg Ala Glu Thr Val Ala 290 295 300 Asn Tyr Ile Val Ser Lys Gly Ala Pro Ala Ala Asn Val Thr Ala Val 305 310 315 320 Gly Tyr Gly Glu Ala Asn Pro Val Thr Gly Ala Thr Cys Asp Lys Val 325 330 335 Lys Gly Arg Lys Ala Leu Ile Ala Cys Leu Ala Pro Asp Arg Arg Val 340 345 350 Glu Val Gln Val Gln Gly Thr Lys Glu Val Thr Met 355 360 <210> 152 <211> 1110 <212> DNA <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <220> <223> Omp5 <220> <221> CDS <222> (1)..(1107) <400> 152 atg aaa aaa tca tta gtt gct tta gca gta tta tcg gct gca gca gta 48 Met Lys Lys Ser Leu Val Ala Leu Ala Val Leu Ser Ala Ala Ala Val 1 5 10 15 gct caa gca gct cca caa caa aat act ttc tac gca ggt gcg aaa gtt 96 Ala Gln Ala Ala Pro Gln Gln Asn Thr Phe Tyr Ala Gly Ala Lys Val 20 25 30 ggt caa tca tca ttt cac cac ggt gtt aac caa tta aaa tct ggt cac 144 Gly Gln Ser Ser Phe His His Gly Val Asn Gln Leu Lys Ser Gly His 35 40 45 gat gat cgt tat aat 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Ala Val Leu Ser Ala Ala Ala Val 1 5 10 15 Ala Gln Ala Ala Pro Gln Gln Asn Thr Phe Tyr Ala Gly Ala Lys Val 20 25 30 Gly Gln Ser Ser Phe His His Gly Val Asn Gln Leu Lys Ser Gly His 35 40 45 Asp Asp Arg Tyr Asn Asp Lys Thr Arg Lys Tyr Gly Ile Asn Arg Asn 50 55 60 Ser Val Thr Tyr Gly Val Phe Gly Gly Tyr Gln Ile Leu Asn Gln Asn 65 70 75 80 Asn Phe Gly Leu Ala Ala Glu Leu Gly Tyr Asp Tyr Tyr Gly Arg Val 85 90 95 Arg Gly Asn Val Asp Glu Phe Arg Thr Val Lys His Ser Ala His Gly 100 105 110 Leu Asn Leu Ala Leu Lys Pro Ser Tyr Glu Val Leu Pro Asp Leu Asp 115 120 125 Val Tyr Gly Lys Val Gly Ile Ala Val Val Arg Asn Asp Tyr Lys Lys 130 135 140 Tyr Gly Ala Glu Asn Thr Asn Glu Ser Thr Thr Lys Phe His Lys Leu 145 150 155 160 Lys Ala Ser Thr Ile Leu Gly Ala Gly Val Glu Tyr Ala Ile Leu Pro 165 170 175 Glu Leu Ala Ala Arg Val Glu Tyr Gln Tyr Leu Asn Lys Ala Gly Asn 180 185 190 Leu Asn Lys Ala Leu Val Arg Ser Gly Thr Gln Asp Val Asp Phe Gln 195 200 205 Tyr Ala Pro Asp Ile His Ser Val Thr Ala Gly Leu Ser 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Lys Arg Arg Glu Ile Gly His Gly Arg Leu Ala Lys Arg 180 185 190 Gly Val Leu Ala Val Met Pro Thr Ala Glu Glu Phe Pro Tyr Val Val 195 200 205 Arg Val Val Ser Glu Ile Thr Glu Ser Asn Gly Ser Ser Ser Met Ala 210 215 220 Ser Val Cys Gly Ala Ser Leu Ala Leu Met Asp Ala Gly Val Pro Ile 225 230 235 240 Lys Ala Ala Val Ala Gly Ile Ala Met Gly Leu Val Lys Glu Glu Glu 245 250 255 Lys Phe Val Val Leu Ser Asp Ile Leu Gly Asp Glu Asp His Leu Gly 260 265 270 Asp Met Asp Phe Lys Val Ala Gly Thr Arg Glu Gly Val Thr Ala Leu 275 280 285 Gln Met Asp Ile Lys Ile Glu Gly Ile Thr Pro Glu Ile Met Gln Ile 290 295 300 Ala Leu Asn Gln Ala Lys Gly Ala Arg Met His Ile Leu Ser Val Met 305 310 315 320 Glu Gln Ala Ile Pro Ala Pro Arg Ala Asp Ile Ser Asp Phe Ala Pro 325 330 335 Arg Ile His Thr Met Lys Ile Asp Pro Lys Lys Ile Lys Asp Val Ile 340 345 350 Gly Lys Gly Gly Ala Val 355 <210> 156 <211> 1055 <212> DNA <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <220> <223> potD <220> <221> CDS <222> (1)..(1053) <400> 156 atg aaa 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<222> (1)..(522) <400> 158 atg caa aag gta aaa cta ccc ctc acc att gac cca tat aaa gac gct 48 Met Gln Lys Val Lys Leu Pro Leu Thr Ile Asp Pro Tyr Lys Asp Ala 1 5 10 15 cag cgt cga atg gat tac gaa ggc tac atc tca cgt agt ctg ctt aat 96 Gln Arg Arg Met Asp Tyr Glu Gly Tyr Ile Ser Arg Ser Leu Leu Asn 20 25 30 cgt ttg ggt gaa tct gtg agc aat gtg cta agc gat gca caa gtt act 144 Arg Leu Gly Glu Ser Val Ser Asn Val Leu Ser Asp Ala Gln Val Thr 35 40 45 ctc tcg tta tat atc gat ccg caa cgc tta acc gtt att aaa ggt acg 192 Leu Ser Leu Tyr Ile Asp Pro Gln Arg Leu Thr Val Ile Lys Gly Thr 50 55 60 gcg aca gtg gaa gtg gaa ttc gat tgc caa cga tgc ggt aac ccg ttt 240 Ala Thr Val Glu Val Glu Phe Asp Cys Gln Arg Cys Gly Asn Pro Phe 65 70 75 80 aca caa acg ctt gac tgt tcg ttt tgt ttc agt ccg gtg tcc aat atg 288 Thr Gln Thr Leu Asp Cys Ser Phe Cys Phe Ser Pro Val Ser Asn Met 85 90 95 gat cag gcg gac aat ttg ccc gaa att tat gaa cca atc gaa gta aac 336 Asp Gln Ala Asp Asn Leu Pro Glu Ile Tyr Glu Pro Ile Glu Val Asn 100 105 110 gag ttc ggt gaa gta aat tta cta gat atg atc gaa gat gga ttt atc 384 Glu Phe Gly Glu Val Asn Leu Leu Asp Met Ile Glu Asp Gly Phe Ile 115 120 125 atc gaa ttg cct cta gtc ccg atg cat agt gaa gaa cac tgt gaa gtg 432 Ile Glu Leu Pro Leu Val Pro Met His Ser Glu Glu His Cys Glu Val 130 135 140 tcc gtg agt gaa cag gtg ttt ggc gaa ttg cct gaa gaa ttg gcg aaa 480 Ser Val Ser Glu Gln Val Phe Gly Glu Leu Pro Glu Glu Leu Ala Lys 145 150 155 160 aaa cct aac ccg ttc gct gta tta gct aat tta aag aaa aac tag 525 Lys Pro Asn Pro Phe Ala Val Leu Ala Asn Leu Lys Lys Asn 165 170 <210> 159 <211> 174 <212> PRT <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <400> 159 Met Gln Lys Val Lys Leu Pro Leu Thr Ile Asp Pro Tyr Lys Asp Ala 1 5 10 15 Gln Arg Arg Met Asp Tyr Glu Gly Tyr Ile Ser Arg Ser Leu Leu Asn 20 25 30 Arg Leu Gly Glu Ser Val Ser Asn Val Leu Ser Asp Ala Gln Val Thr 35 40 45 Leu Ser Leu Tyr Ile Asp Pro Gln Arg Leu Thr Val Ile Lys Gly Thr 50 55 60 Ala Thr Val Glu Val Glu Phe Asp Cys Gln Arg 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Phe Arg Lys Gly Lys 35 40 45 gta ccg cac gca att atc gaa caa cgt ttc ggt tta gcg gct cgc caa 192 Val Pro His Ala Ile Ile Glu Gln Arg Phe Gly Leu Ala Ala Arg Gln 50 55 60 gac gta tta tcc gat gaa atg caa cgt gcg ttc ttt gat gcg gta atc 240 Asp Val Leu Ser Asp Glu Met Gln Arg Ala Phe Phe Asp Ala Val Ile 65 70 75 80 gct gag aaa att aac ctt gcc ggt cgt cct acc ttc aca ccg aac aac 288 Ala Glu Lys Ile Asn Leu Ala Gly Arg Pro Thr Phe Thr Pro Asn Asn 85 90 95 tac caa ccg agt caa gaa ttc agc ttc act gca act ttt gaa gta ttc 336 Tyr Gln Pro Ser Gln Glu Phe Ser Phe Thr Ala Thr Phe Glu Val Phe 100 105 110 ccg gaa gtt gaa tta aaa ggc tta gaa aat atc gaa gtt gaa aaa ccg 384 Pro Glu Val Glu Leu Lys Gly Leu Glu Asn Ile Glu Val Glu Lys Pro 115 120 125 gtt gta gaa atc aca gaa gct gat tta gac aaa atg atc gat gtg tta 432 Val Val Glu Ile Thr Glu Ala Asp Leu Asp Lys Met Ile Asp Val Leu 130 135 140 cgt aaa caa caa gcg act tgg gct gaa tct caa gca gcg gca caa gcg 480 Arg Lys Gln Gln Ala Thr Trp Ala Glu Ser Gln Ala Ala Ala Gln Ala 145 150 155 160 gaa gac cgt gtt gta atc gac ttc gta ggt tct gta gac ggt gaa gag 528 Glu Asp Arg Val Val Ile Asp Phe Val Gly Ser Val Asp Gly Glu Glu 165 170 175 ttt gaa ggc ggt aaa gcg aca gac ttc act tta gca atg ggt caa agt 576 Phe Glu Gly Gly Lys Ala Thr Asp Phe Thr Leu Ala Met Gly Gln Ser 180 185 190 cgt atg atc cct ggt ttt gaa gaa ggt atc gtt ggt cac aaa gcc ggc 624 Arg Met Ile Pro Gly Phe Glu Glu Gly Ile Val Gly His Lys Ala Gly 195 200 205 gaa caa ttc gat atc gat gtt act ttc cct gaa gaa tac cac gct gaa 672 Glu Gln Phe Asp Ile Asp Val Thr Phe Pro Glu Glu Tyr His Ala Glu 210 215 220 aac tta aaa ggt aaa gcg gcg aaa ttc gca att aca ctt aag aaa gta 720 Asn Leu Lys Gly Lys Ala Ala Lys Phe Ala Ile Thr Leu Lys Lys Val 225 230 235 240 gaa aat atc gta tta cct gaa tta acc gaa gaa ttc gtg aaa aaa ttc 768 Glu Asn Ile Val Leu Pro Glu Leu Thr Glu Glu Phe Val Lys Lys Phe 245 250 255 ggt tca gca aaa act gta gaa gat tta cgt gcg gaa att aag aaa aat 816 Gly Ser Ala Lys Thr Val Glu Asp Leu Arg Ala Glu Ile Lys Lys Asn 260 265 270 atg caa cgt gaa ctt aaa aac gca gta acc gca cgc gtt aaa aac caa 864 Met Gln Arg Glu Leu Lys Asn Ala Val Thr Ala Arg Val Lys Asn Gln 275 280 285 gta atc aac ggt tta atc gca caa aat gaa att gaa gtg ccg gct gca 912 Val Ile Asn Gly Leu Ile Ala Gln Asn Glu Ile Glu Val Pro Ala Ala 290 295 300 gcg gta gcg gaa gaa gtg gac gta tta cgt cgt caa gcg gtt caa cgt 960 Ala Val Ala Glu Glu Val Asp Val Leu Arg Arg Gln Ala Val Gln Arg 305 310 315 320 ttc ggt ggt aaa ccg gaa atg gct gca caa tta ccg gcg gaa tta ttc 1008 Phe Gly Gly Lys Pro Glu Met Ala Ala Gln Leu Pro Ala Glu Leu Phe 325 330 335 gaa gcg gat gca aaa cgt cgt gtt caa gta ggt tta tta ctt tca acc 1056 Glu Ala Asp Ala Lys Arg Arg Val Gln Val Gly Leu Leu Leu Ser Thr 340 345 350 gta atc ggt act aac gaa tta aaa gtt gat gaa aaa cgt gtt gaa gaa 1104 Val Ile Gly Thr Asn Glu Leu Lys Val Asp Glu Lys Arg Val Glu Glu 355 360 365 acg att gca gaa atc gct tca gct tac gaa caa ccg gcg gaa gtt gtt 1152 Thr Ile Ala Glu Ile Ala Ser Ala Tyr Glu Gln Pro Ala Glu Val Val 370 375 380 gct cat tat gcg aaa aac cgt caa tta acc gaa aat atc cgt aac gta 1200 Ala His Tyr Ala Lys Asn Arg Gln Leu Thr Glu Asn Ile Arg Asn Val 385 390 395 400 gtg tta gaa gag caa gcg gtt gaa gtt gta ctt gcg aaa gca aaa gta 1248 Val Leu Glu Glu Gln Ala Val Glu Val Val Leu Ala Lys Ala Lys Val 405 410 415 act gaa aaa gcg act tct ttt gat gaa gta atg gct caa caa gct caa 1296 Thr Glu Lys Ala Thr Ser Phe Asp Glu Val Met Ala Gln Gln Ala Gln 420 425 430 ggc taa 1302 Gly <210> 161 <211> 433 <212> PRT <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <400> 161 Met Ser Ile Ser Ile Glu Thr Leu Glu Gly Leu Gln Arg Arg Val Thr 1 5 10 15 Ile Thr Val Ala Ala Asp Lys Ile Glu Ala Ala Tyr Lys Glu Gln Leu 20 25 30 Lys Gly Tyr Ala Lys Asn Ala Arg Val Asp Gly Phe Arg Lys Gly Lys 35 40 45 Val Pro His Ala Ile Ile Glu Gln Arg Phe Gly Leu Ala Ala Arg Gln 50 55 60 Asp Val Leu Ser Asp Glu Met Gln Arg Ala Phe Phe Asp Ala Val Ile 65 70 75 80 Ala Glu Lys Ile Asn Leu Ala Gly Arg Pro Thr Phe Thr Pro Asn Asn 85 90 95 Tyr Gln Pro Ser Gln Glu Phe Ser Phe Thr Ala Thr Phe Glu Val Phe 100 105 110 Pro Glu Val Glu Leu Lys Gly Leu Glu Asn Ile Glu Val Glu Lys Pro 115 120 125 Val Val Glu Ile Thr Glu Ala Asp Leu Asp Lys Met Ile Asp Val Leu 130 135 140 Arg Lys Gln Gln Ala Thr Trp Ala Glu Ser Gln Ala Ala Ala Gln Ala 145 150 155 160 Glu Asp Arg Val Val Ile Asp Phe Val Gly Ser Val Asp Gly Glu Glu 165 170 175 Phe Glu Gly Gly Lys Ala Thr Asp Phe Thr Leu Ala Met Gly Gln Ser 180 185 190 Arg Met Ile Pro Gly Phe Glu Glu Gly Ile Val Gly His Lys Ala Gly 195 200 205 Glu Gln Phe Asp Ile Asp Val Thr Phe Pro Glu Glu Tyr His Ala Glu 210 215 220 Asn Leu Lys Gly Lys Ala Ala Lys Phe Ala Ile Thr Leu Lys Lys Val 225 230 235 240 Glu Asn Ile Val Leu Pro Glu Leu Thr Glu Glu Phe Val Lys Lys Phe 245 250 255 Gly Ser Ala Lys Thr Val Glu Asp Leu Arg Ala Glu Ile Lys Lys Asn 260 265 270 Met Gln Arg Glu Leu Lys Asn Ala Val Thr Ala Arg Val Lys Asn Gln 275 280 285 Val Ile Asn Gly Leu Ile Ala Gln Asn Glu Ile Glu Val Pro Ala Ala 290 295 300 Ala Val Ala Glu Glu Val Asp Val Leu Arg Arg Gln Ala Val Gln Arg 305 310 315 320 Phe Gly Gly Lys Pro Glu Met Ala Ala Gln Leu Pro Ala Glu Leu Phe 325 330 335 Glu Ala Asp Ala Lys Arg Arg Val Gln Val Gly Leu Leu Leu Ser Thr 340 345 350 Val Ile Gly Thr Asn Glu Leu Lys Val Asp Glu Lys Arg Val Glu Glu 355 360 365 Thr Ile Ala Glu Ile Ala Ser Ala Tyr Glu Gln Pro Ala Glu Val Val 370 375 380 Ala His Tyr Ala Lys Asn Arg Gln Leu Thr Glu Asn Ile Arg Asn Val 385 390 395 400 Val Leu Glu Glu Gln Ala Val Glu Val Val Leu Ala Lys Ala Lys Val 405 410 415 Thr Glu Lys Ala Thr Ser Phe Asp Glu Val Met Ala Gln Gln Ala Gln 420 425 430 Gly <210> 162 <211> 316 <212> DNA <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <220> <223> tRNA-glu <400> 162 aatattgcgc tcaaatggca aagcggagag catctttaaa tgttgtcccc atcgtctaga 60 ggcctaggac atcgcccttt cacggcggta accggggttc gaatccccgt ggggacgcca 120 tttaaagatg acttttgttg tctgaattgt tctttaaaaa attggaaaca agctgaaaac 180 tgagagattt tcgaaagaaa gtctgagtag 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Ile Asn 50 55 60 atc ggt cgt tcc gta ccg ttt att att ttg tta gtc gtg ttg tta cct 240 Ile Gly Arg Ser Val Pro Phe Ile Ile Leu Leu Val Val Leu Leu Pro 65 70 75 80 ttt acg cgt tta ttg gtc ggg aca acg ctc ggt act acg gcg gcg att 288 Phe Thr Arg Leu Leu Val Gly Thr Thr Leu Gly Thr Thr Ala Ala Ile 85 90 95 gtg ccg tta agc gtt tcg gca att ccg ttt ttt gcg cgt tta act tca 336 Val Pro Leu Ser Val Ser Ala Ile Pro Phe Phe Ala Arg Leu Thr Ser 100 105 110 aat gcg tta tta gaa atc cca gca ggt tta acc gaa gcg gcg aaa tcg 384 Asn Ala Leu Leu Glu Ile Pro Ala Gly Leu Thr Glu Ala Ala Lys Ser 115 120 125 atg ggc gca acg aat tgg caa gtg gtc agt aaa ttt tat tta ccg gaa 432 Met Gly Ala Thr Asn Trp Gln Val Val Ser Lys Phe Tyr Leu Pro Glu 130 135 140 tca ctg ccg att tta atc aat ggt atc aca tta act tta gtc gct tta 480 Ser Leu Pro Ile Leu Ile Asn Gly Ile Thr Leu Thr Leu Val Ala Leu 145 150 155 160 atc ggt tat tcg gca atg gcg ggt gcg gtc ggc ggc ggc ggt ttg ggt 528 Ile Gly Tyr Ser Ala Met Ala Gly Ala Val Gly Gly Gly Gly Leu Gly 165 170 175 aac ctt gcc atc agt tac ggt gaa cac cga aat atg gtc tat gta aaa 576 Asn Leu Ala Ile Ser Tyr Gly Glu His Arg Asn Met Val Tyr Val Lys 180 185 190 tgg atc tca aca att att atc gta gcg att gtg atg atc agt caa aa 623 Trp Ile Ser Thr Ile Ile Ile Val Ala Ile Val Met Ile Ser Gln 195 200 205 <210> 165 <211> 207 <212> PRT <213> Actinobacillus pleuropneumoniae <400> 165 Met Gln Glu Leu Thr Pro Gln Met Trp Gly Leu Val Gly Thr Ser Thr 1 5 10 15 Leu Glu Thr Leu Tyr Met Gly Phe Ala Ala Thr Leu Leu Ala Val Val 20 25 30 Val Gly Leu Pro Ile Gly Phe Leu Ala Phe Leu Thr Gly Lys Gly Glu 35 40 45 Ile Leu Glu Asn Pro Arg Leu His Gln Val Leu Asp Val Ile Ile Asn 50 55 60 Ile Gly Arg Ser Val Pro Phe Ile Ile Leu Leu Val Val Leu Leu Pro 65 70 75 80 Phe Thr Arg Leu Leu Val Gly Thr Thr Leu Gly Thr Thr Ala Ala Ile 85 90 95 Val Pro Leu Ser Val Ser Ala Ile Pro Phe Phe Ala Arg Leu Thr Ser 100 105 110 Asn Ala Leu Leu Glu Ile Pro Ala Gly Leu Thr Glu Ala Ala Lys Ser 115 120 125 Met Gly Ala Thr Asn Trp Gln Val Val Ser Lys Phe Tyr Leu Pro Glu 130 135 140 Ser Leu Pro Ile Leu Ile Asn Gly Ile Thr Leu Thr Leu Val Ala Leu 145 150 155 160 Ile Gly Tyr Ser Ala Met Ala Gly Ala Val Gly Gly Gly Gly Leu Gly 165 170 175 Asn Leu Ala Ile Ser Tyr Gly Glu His Arg Asn Met Val Tyr Val Lys 180 185 190 Trp Ile Ser Thr Ile Ile Ile Val Ala Ile Val Met Ile Ser Gln 195 200 205 <210> 166 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> <400> 166 Cys Ser Thr Met 1 <210> 167 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> <400> 167 His Phe Trp Tyr 1 <210> 168 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> <400> 168 Asn Gln Asp Glu 1 <210> 169 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220 <223> <400> 169 Ala Leu Ile Val Pro 1 5

Claims

서열 80에 기재된 뉴클레오티드 서열을 갖는 yleA 유전자, 또는 그의 종 동족체의 오픈 리딩 프레임(open reading frame) 또는 조절 DNA 서열을 손상시켜(disrupt) 세균의 독성을 감소시키고 약화시키는 돌연변이를 포함하는 독성약화 파스테우렐라세아 (Pasteurellaceae) 세균.
제1항에 있어서, 상기 돌연변이의 결과로써 돌연변이된 유전자에 의해 코딩되는 유전자 산물의 발현이 감소되고, 상기 유전자 발현의 감소가 세균을 약화시키는 독성약화 파스테우렐라세아 세균.
제1항에 있어서, 상기 돌연변이의 결과로써 돌연변이된 유전자에 의해 코딩되는 불활성 유전자 산물이 발현되는 것인 독성약화 파스테우렐라세아 세균.
제1항에 있어서, 상기 돌연변이의 결과로써 yleA 유전자의 전부 또는 일부가 결실되는 것인 독성약화 파스테우렐라세아 세균.
제1에 있어서, 상기 돌연변이의 결과로써 상기 유전자의 약 10％ 이상이 결실되는 것인 독성약화 파스테우렐라세아 세균.
제1항에 있어서, 상기 돌연변이의 결과로써 상기 유전자에 삽입이 발생하며, 상기 삽입으로 인해 돌연변이된 유전자에 의해 코딩되는 유전자 산물의 발현이 감소되고(거나) 돌연변이된 유전자에 의해 코딩되는 불활성 유전자 산물이 발현되는 것인 독성약화 파스테우렐라세아 세균.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 파스테우렐라 헤몰리티카(Pasteurella haemolytica), 파스테우렐라 멀토시다(Pasteurella multocida), 악티노바실러스 플레우로뉴모니아(Actinobacillus pleuropneumoniae) 및 헤모필러스 솜너스(Haemophilus somnus)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 독성약화 파스테우렐라세아 세균.
제7항에 있어서, 파스테우렐라 멀토시다(Pasteurella multocida)인 독성약화 파스테우렐라세아 세균.
제7항에 따른 세균을 포함하는 면역원성 조성물.
제9항의 면역원성 조성물 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 백신 조성물.
제10항에 있어서, 면역보강제를 더 포함하는 백신 조성물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 세균을 포함하는 면역원성 조성물.
제12항의 면역원성 조성물 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 백신 조성물.
제13항에 있어서, 면역보강제를 더 포함하는 백신 조성물.
서열 80에 기재된 뉴클레오티드 서열을 갖는 yleA 유전자, 또는 그의 종 동족체의 오픈 리딩 프레임 또는 조절 DNA 서열을 손상시켜 세균의 독성을 감소시키고 약화시키는 돌연변이를 도입하는 단계를 포함하는 독성약화 그람 음성 세균의 제조 방법.
서열 80에 기재된 뉴클레오티드 서열을 갖는, 정제 및 단리된 파스테우렐라세아 폴리뉴클레오티드 또는 그의 종 동족체.
a) 제16항의 폴리뉴클레오티드, 및

b) 폴리뉴클레오티드 (a)에 의해 코딩되는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드

로 이루어진 군으로부터 선택되며, 파스테우렐라세아의 독성 유전자 산물을 코딩하는, 정제 및 단리된 폴리뉴클레오티드 또는 그의 종 동족체.
서열 81에 기재된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는, 정제 및 단리된 파스테우렐라세아 폴리뉴클레오티드 또는 그의 종 동족체.
제18항에 있어서, DNA인 폴리뉴클레오티드.
제19항의 DNA를 포함하는 벡터.
제20항에 있어서, 상기 DNA가 발현 조절 DNA 서열에 작동가능하게 연결된 발현 벡터인 벡터.
코딩된 폴리펩티드가 숙주 세포 내에서 발현되도록 제19항의 DNA가 안정하게 형질전환 또는 형질감염된 비인간 숙주 세포.
영양 배지에서 제22항의 숙주 세포를 배양하고, 상기 숙주 세포 또는 상기 영양 배지로부터 코딩된 폴리펩티드를 단리하는 것을 포함하는 재조합 폴리펩티드의 제조 방법.
서열 81에 기재된 아미노산 서열을 갖는 정제된 폴리펩티드 또는 그의 종 동족체.
제24항의 폴리펩티드와 특이적으로 반응하는 단리된 항체.
제25항에 있어서, 모노클로날 항체인 항체.
세균 추출물을 제26항의 모노클로날 항체와 접촉시키고 상기 모노클로날 항체가 결합하는지 또는 결합하지 않는지를 검출하는 단계를 포함하는,

제26항의 모노클로날 항체를 이용하여 제1항의 세균을 확인하는 방법.
세균 추출물을 제26항의 모노클로날 항체와 접촉시키고 상기 모노클로날 항체가 결합하는지 또는 결합하지 않는지를 검출하는 단계를 포함하는,

제26항의 모노클로날 항체를 이용하여 제7항의 세균을 확인하는 방법.
서열 81에 기재된 아미노산 서열로 표시되는 yleA 유전자 산물 또는 그의 종 동족체의 발현 또는 활성을 방해하는 능력에 대해 잠재적 약제를 분석하고, 상기 유전자 산물의 발현 또는 생물학적 활성을 방해하는 약제를 확인하는 단계를 포함하는 항균제의 동정 방법.
a) 서열 81에 기재된 아미노산 서열로 표시되는 yleA 유전자 산물 또는 그의 종 동족체의 발현 또는 활성을 측정하는 단계,

b) (a)의 유전자 산물을 시험 화합물과 접촉시키는 단계,

c) 시험 화합물의 존재하에 상기 유전자 산물의 발현 또는 활성을 측정하는 단계, 및

d) 시험 화합물 부재시에 나타나는 발현 또는 활성에 비해 시험 화합물의 존재시에 나타나는 유전자 산물의 발현 또는 활성이 감소되는 경우에 시험 화합물이 항균제임을 확인하는 단계

를 포함하는 항균제의 동정 방법.
코딩된 폴리펩티드가 숙주 세포 내에서 발현되도록 제19항의 DNA가 안정하게 시험관내 형질전환 또는 형질감염된 숙주 세포.