KR20060081189A - 단삼 추출물 또는 그의 성분인 크립토탄시논과１５,１６－다이하이드로 탄시논－ⅰ을 포함하는헬리코박터 파이로리용 항균 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 단삼 추출물을 포함하는 헬리코박터 파이로리용 항균 조성물에 관한 것이다.

단삼, 헬리코박터 파이로리, 크립토탄시논, 15,16-다이하이드로 탄시논-I

Description

단삼 추출물 또는 그의 성분인 크립토탄시논과 １５,１６－다이하이드로 탄시논－Ⅰ을 포함하는 헬리코박터 파이로리용 항균 조성물 {A composition for Anti-Helicobactor pylori comprising the Salvia miltiorrhiza extracts or its components, cryptotanshinone and 15,16-dihydrotanshinone I}

도 1은 탄시논-1 (T1)과 15,16-다이하이드로 탄시논-1 (DH)을 대상으로 25, 50, 100 ㎍/mL 농도에서의 헬리코박터 파이로리 성장 억제효과 결과에 대한 사진이다.

도 2는 크립토 탄시논 (CT)과 페루지놀 (FG)을 대상으로 25, 50, 100 ㎍/mL 농도에서 헬리코박터 파이로리 성장 억제 효과 결과에 대한 사진이다.

본 발명은 생약 추출물을 포함하는 헬리코박터 파이로리용 항균 조성물에 관한 것이다.

헬리코박터 파이로리 균은 각종 위 질환과 관련하여 활동성 위염에서는 88%, 위궤양 64%, 십이지장궤양 85%, 위염이 없는 경우에서는 9% 감염이 관찰되었다 (이 광호, 윤희상, 백승철, 이우곤, 조명제, 최휴진, 맹국영, 고광민, 한국인의 위염 원인균 Helicobacter pylori 보균실태, 대한미생물학회지, 25, 1990, 475-490).

이러한 헬리코박터 파이로리 감염은 위염, 위궤양, 십이지장 궤양, 위암 등의 원인으로 간주되기 때문에 이 균의 성장을 억제하면서 부작용이 적은 신약 개발은 매우 중요한 의학적 과제이다.

최근에는 헬리코박터 파이로리 감염을 치료하기 위해서 2가지 항생제와 proton pump 억제제를 병합하여 사용하는 치료법이 가장 널리 사용되고 있지만 (Asaka M, Satoh K, Sugano K, Sugiyama T, Takahashi S, Fukuda Y, Ota H, Murakami K, Kimura K, Shimoyama T. Guidelines in the management of Helicobacter pylori infection in Japan. Helicobacter. 2001 Sep;6(3):177-86), 항생제 내성 등으로 새로운 치료법 개발이 절실히 요구되는 실정이다.

생약 성분의 헬리코박터 파이로리균에 대한 작용에 있어서, 과거 녹차 추출물이 헬리코박터 파이로리 성장을 억제하는 사실이 보고된 바 있지만, 단삼이 헬리코박터 파이로리균에 대하여 항균작용을 가지는 것에 대하여는 보고된 바 없다.

단삼의 항균력에 대한 연구, 특히 본 발명에서 보고하는 크립토탄시논과 15,16-다이하이드로 탄시논-I 의 항균력이 그램염색 양성균에서 보고된 바 있다 (Lee DS, Lee SH, Noh JG, Hong SD. Antibacterial activities of cryptotanshinone and dihydrotanshinone I from a medicinal herb, Salvia miltiorrhiza Bunge. Biosci Biotechnol Biochem. 1999 Dec;63(12):2236-9). 항생 제의 균에 대한 감수성은 그램양성균 혹은 그램음성균 등의 종류에 따라 크게 다르다. 상기 논문에서 단삼의 그램음성 균인 헬리코박터 파이로리에 대한 항균효과에 대해서는 언급은 전혀 없다.

본 발명은 생약추출물을 함유하는 헬리코박터 파이로리용 항균 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명은 단삼(Radix Salvia miltiorrhiza) 추출물을 포함하는 헬리코박터 파이로리용 항균 조성물에 관한 것이다.

단삼은 중국 및 동남아 지역에서 항암치료를 위한 생약 처방에 널리 사용되고 있으며 (북경중의학원: 실용중의학. P.344, 1986), 최근에는 중국, 일본, 미국에서 단삼의 성분 및 약리적 효능이 광범위하게 연구되고 있다. 단삼의 주요 성분으로는 탄시논 (Tanshinone), 크립토 탄시논 (Cryptotanshinone), 다이하이드로 탄시논 (Dihydrotanshinone), 페루기놀 (Ferruginol), 비타민 A와 E (Vitamin A & E) 등이 있다. (Che AJ, Zhang JY, Li CH, Chen XF, Hu ZD, Chen XG. Separation and determination of active components in Radix Salviae miltiorrhizae and its medicinal preparations by nonaqueous capillary electrophoresis. J Sep Sci. 2004 May;27(7-8):569-75)

단삼의 약리 작용은 혈관확장, 진통, 진정, 혈소판 응집 억제 등이 보고 되고 있다 (Takeo S, Tanonaka K, Hirai K, Kawaguchi K, Ogawa M, Yagi A, Fujimoto K. Beneficial effect of tan-shen, an extract from the root of Salvia, on post-hypoxic recovery of cardiac contractile force. Biochem Pharmacol. 1990 Sep 1;40(5):1137-43).

또한, 본 발명에서는 단삼 추출물의 성분인 크립토탄시논 (하기 화학식 1) 및 15,16-다이하이드로 탄시논- I (하기 화학식 2)이 각각 헬리코박터 파이로리에 대하여 항균효과가 있음을 밝혔다.

상기 단삼 추출물의 성분은 단삼을 메탄올, 메틸렌클로라이드 등의 유기용매로 추출하고, 이어서 정제함으로써 얻을 수 있는데 예를 들면 실리카겔, 세파덱스 엘에이치 20 등의 충진제를 이용한 컬럼 크로마토그래피 등의 방법으로 정제함으로 써 얻을 수 있다.

본 발명은 또한, 크립토탄시논 (상기 화학식 1)을 포함하는 헬리코박터 파이로리용 항균 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 또한, 15,16-다이하이드로 탄시논-I (상기 화학식 2)을 포함하는 헬리코박터 파이로리용 항균 조성물에 관한 것이다.

상기 성분들은 단삼 추출물을 분리 정제하여 얻을 수 있다.

본 발명의 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체 즉, 희석제, 용해보조제, 안정화제, 산화방지제, 유화제, 계면활성제 등을 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구용 제제 형태로 만들어 사용할 수 있다. 상기 경구용 제제로는 액제, 시럽제, 현탁제, 캡슐제 및 정제 등이 가능하며, 비경구용 제제로는 주사제 등을 들 수 있다.

본 발명의 조성물은 사람의 건강정도, 나이, 성별, 체중 등에 따라서 달라질 수 있으나, 통상 단삼추출물로서 1일 10~1000 mg 의 양을 1회 내지 수회 분할하여 투여할 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예 및 실험예를 통해 더욱 상세히 기술하고자 한다. 다만, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 구체적으로 설명하는 것으로서, 하기 실시예 및 실험예에 의해 본 발명의 범위가 제한되지는 않는다.

실시예 1: 단삼 추출물의 제조

중국산 단삼 600 g을 실온에서 98% 메탄올 1리터로 추출하여 단삼 메탄올 추출물을 제조하였다.

실시예 2: 단삼에서 분리한 크립토탄시논과 15,16-다이하이드로 탄시논-I

상기 실시예 1에서의 단삼 메탄올 추출물을 다시 순차적으로 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 부탄올로 용매 추출하면서 활성을 측정하였다. 가장 효과가 좋은 메틸렌클로라이드 층 분획 (5.7 g)을 칼럼크로마토그래피를 이용하여, 헥산:에틸아세테이트:메탄올 = 10:1:0 → 8:1:0 → 5:1:0 → 2:1:0 → 1:1:0 → 1:2:0 → 0:0:1의 용매시스템으로 분획하였고 이를 분취박층크로마토그래피법으로 다시 분리하였다. 보다 순수한 성분을 얻기 위해 칼럼크로마토그래피를 다시 시행하여, 탄시논-I, 탄시논-IIA, 크립토탄시논과 15,16-다이하이드로 탄시논-I, 페루기놀 등을 분리 하였으며, 이들을 UV, IR, ¹H NMR, ¹³C NMR, HSQC, HMBC 와 HR-MS 등을 이용하여 구조를 확인하였다.

크립토탄시논과 15,16-다이하이드로 탄시논-I 의 결과를 다음과 같다.

크립토탄시논 (Cryptotanshinone)

M.W. 296 (C₁₉H₂₀O₃), 융점 191℃, ¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃ ) δ: 3.22 (2H, t, J=5.1 Hz, H-1), 1.80 (2H, m, H-2), 1.66 (2H, m, H-3), 7.64 (1H, d, J=8.1 Hz, H-6), 7.49 (1H, d, J=8.1 Hz, H-7), 4.37 (1H, dd, J=9.3, 6.0 Hz, H-15a), 3.60(1H, d, J=9.9 Hz, H-15b), 4.89(1H, t, J=9.6 Hz, H-16), 1.36 (3H, d, J=6.6 Hz, H-17), 1.31 (6H, s, H-18, H-19).; ¹³C-NMR (125 MHz, CDCl₃) δ: 29.6 (C-1), 19.0 (C-2), 37.8 (C-3), 34.8 (C-4), 143.7 (C-5), 132.6 (C-6), 122.5 (C-7), 128.4 (C-8), 126.2 (C-9), 152.4 (C-10), 184.0 (C-11), 175.7 (C-12), 118.3 (C-13), 170.8 (C-14), 34.6 (C-15), 81.4 (C-16), 18.8 (C-17), 31.9 (C-18, C-19).

15,16-다이하이드로탄시논 I (15,16-dihydrotanshinone I)

M.W. 278 (C₁₈H₁₄O₃), 융점 201℃, ¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃ ) δ: 9.31 (1H, d, J=8.7 Hz, H-1), 7.58 (1H, dd, J=8.7, 6.9 Hz, H-2), 7.41 (1H, d, J=6.9 Hz, H-3), 8.32 (1H, d, J=8.4 Hz, H-6), 7.77 (1H, d, J=8.4 Hz, H-7), 4.44 (1H, dd, J=9.6, 4.6 Hz, H-15a), 3.66 (1H, m, H-15b), 4.98(1H, t, J=8.1 Hz, H-16), 1.42 (3H, d, J=6.6 Hz, H-17), 2.71 (3H, s, H-18).; ¹³C-NMR (125 MHz, CDCl₃) δ: 126.2 (C-1), 130.5 (C-2), 128.3 (C-3), 135.0 (C-4), 134.8 (C-5), 132.2 (C-6), 118.4 (C-7), 128.9 (C-8), 125.1 (C-9), 132.0 (C-10), 184.0 (C-11), 176.0 (C-12), 120.4 (C-13), 170.6 (C-14), 34.8 (C-15), 81.7 (C-16), 18.9 (C-17), 19.9 (C-18).

비교예 1: 녹차 추출물 제조

헬리코박터 파이로리 성장을 억제하는 사실이 보고된 바 있는 녹차 추출물을 다음과 같이 제조하여 비교예로 이용하였다. 녹차 잎 (한국제다)을 50% 메탄올을 이용하여 2일 동안 방치하여 추출물을 얻은 후 원심 분리하였다. 원심 분리한 상청을 냉동 건조하여 녹차 추출물로 사용하였다.

실험예 1: 헬리코박터 파이로리에 대한 항균 활성 측정

실시예 1의 단삼 추출물, 실시예 2의 단삼 추출물 분리 단일 성분들 그리고 비교예 1의 녹차추출물 각각의 헬리코박터 파이로리 항균 활성을 다음과 같이 측정하였다. 본 발명에서는 단일성분의 경우 99% 이상의 순수 성분을 사용하였다.

헬리코박터 파이로리 (Helicobactor pylori 26695, 미국 ATCC (American type culture collection)에서 구입) 1×10⁴ 개를 시험시약과 함께 30분간 실온에서 부치한후 (전체 양 100 마이크로리터), 6-웰 (well) 배양판의 브루셀라 브로스 아가 (Brucellar broth agar, Gibco사에서 구입)에 접종하였다. 24시간 후 자란 헬리코박터 파이로리를 모아 브루셀라 배지에 현탁하여 균수를 흡광광도계를 이용하여 600 nm에서 측정하였으며 (OD₆₀₀1.5 = 3.8×10⁸ 헬리코박터 파이로리/ml), 대조군을 100%로 하여 계산하였다. 3회 이상의 실험 결과를 평균하였다. 한약재 및 자생식물 추출물 중 항균활성이 확인되는 단삼 추출물을 비롯한 몇가지 데이타를 표 2에 나타냈으며, 도 1과 도 2는 대표적 사진 그림이다.

상기 표 1에 나타난 바와 같이, 단삼 추출물이 동일 농도에서 헬리코박터 파이로리에 대한 가장 강력한 항균 작용을 나타내었다. 또한, 크립토탄시논과 다이하이드로 탄시논-I 이 가장 탁월한 헬리코박터 파이로리 항균 활성을 나타냄을 확인하였다. 즉, 단삼 추출물과 단삼 성분인 크립토탄시논과 15,16-다이하이드로 탄시논-I 은 25 ㎍/mL 에서 헬리코박터 파이로리 성장을 50% 이상 억제 하였다.

일찍이 녹차 추출물이 헬리코박터 파이로리를 억제 한다고 보고된 바 있으나 (Matsubara S, Shibata H, Ishikawa F, Yokokura T, Takahashi M, Sugimura T, Wakabayashi K. Suppression of Helicobacter pylori-induced gastritis by green tea extract in Mongolian gerbils. Biochem Biophys Res Commun. 2003 Oct 24;310(3):715-9) 본 실험 조건에서 녹차 추출물은 0-200 ㎍/mL 에서는 뚜렷한 헬리코박터 파이로리 성장억제 작용을 나타내지 않았다. 따라서, 단삼 추출물 및 상기 단삼 성분은 녹차 추출물 보다 헬리코박터 파이로리 성장 억제 활성이 탁월 (표 1) 하다는 것을 확인하였다.

또한, 탄시논-1 (T1)과 15,16-다이하이드로 탄시논-I (DH)을 대상으로 25, 50, 100 ㎍/mL 농도에서 헬리코박터 파이로리 성장 억제효과를 관찰하였다. 도 1에 나타난 바와 같이, 탄시논-1 (T1)의 경우는 100 ㎍/mL 농도에서도 균이 잘 자란 반면, 다이하이드로 탄시논-1 (DH)을 처리한 경우는 25 ㎍/mL 농도에서부터 균의 성장이 억제 되고 100 ㎍/mL 에서는 균의 성장이 완전 억제되었음을 볼 수 있다.

또한, 크립토 탄시논 (CT)과 페루지놀 (FG)을 대상으로 25, 50, 100 ㎍/mL 농도에서 헬리코박터 파이로리 성장 억제 효과를 관찰하였다. 도 2에 나타난 바와 같이, 페루지놀 (FG)의 경우는 100 ㎍/mL 농도에서도 균이 잘 자란 반면, 크립토 탄시논 (CT)을 처리한 경우는 25 ㎍/mL 농도에서부터 균의 성장이 억제 되고 50-100 ㎍/mL 에서는 균의 성장이 완전 억제되었음을 볼 수 있다.

본 발명에서의 단삼 추출물 또는 그의 성분인 크립토탄시논과 15,16-다이하이드로 탄시논-I이 헬리코박터 파이로리에 대한 뛰어난 항균 활성을 알 수 있다. 헬리코박터 파이로리는 위염, 십이장염, 위암 등의 원인으로 간주되고 있다. 이에 본 발명의 조성물은 상기 위장관 질환을 예방 혹은 치료에 이용될 수 있다.

Claims (4)

1. 단삼 추출물을 포함하는 헬리코박터 파이로리용 항균 조성물.
2. 제1항에 있어서, 단삼추출물의 주성분이 크립토탄시논 또는 15,16-다이하이드로 탄시논-I 인, 헬리코박터 파이로리용 항균 조성물.
3. 크립토탄시논을 포함하는 헬리코박터 파이로리용 항균 조성물.
4. 15,16-다이하이드로 탄시논-I 을 포함하는 헬리코박터 파이로리용 항균 조성물.

Images