KR20060028913A - 돼지 증식성 회장염 감염돈에서 로소니아인트라셀룰라리스 균을 분리하는 방법 - Google Patents
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Abstract
Description
접종 후 경과일자 실험군 | 0 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 | 14 | 16 | 18 | 20 | 21 | |
순수배양균 접종군 | 돼지A | - | - | + | + | + | + | + | + | + | + | + |
돼지B | - | - | + | + | + | + | + | + | + | + | + | |
장점막추출균 접종군 | 돼지C | - | - | + | + | + | + | + | + | + | + | + |
돼지D | - | - | + | + | + | + | + | + | + | + | + | |
음성 대조군 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
접종 후 일자 실험군 | 0 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 | 14 | 16 | 18 | 20 | 21 |
장점막조추출균접종군 | - | - | + | + | + | + | + | + | + | + | + |
순수배양균접종군 | - | - | + | + | + | + | + | + | + | + | + |
비접종군 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
Claims (11)
- 하기의 단계 포함하는 증식성 회장염 증상을 나타내는 비육돈에서 Lawsonia intracellularis를 분리하는 방법:(a) 증식성 회장염 소견을 보이는 비육돈의 소장을 채취하여, 면역조직화학염색법 및/또는 PCR 법으로 증식성 회장염의 병변 부위임을 확정하는 단계;(b) 상기 소장의 장관 점막조직을 채취하여 균질화시키는 단계;(c) 상기 균질화된 조직을 배지용액에 부유시킨 다음, 여과시키는 단계;(d) Lawsonia intracellularis가 함유된 상기 여과액을 배양된 McCoy(ATCC CRL 1696) 세포에 적용한 다음, 혐기조건에서 McCoy세포를 Lawsonia intracellularis로 감염시키는 단계;(e) 상기 감염된 McCoy 세포를 2~5시간 배양한 다음, 항생제가 첨가된 배지로 교체하는 단계;(f) 0.1% 염화칼륨 용액과 주사기를 사용하여 감염세포를 파열시키고, 세포핵을 제거한 상층액을 신선한 McCoy 세포에 접종하는 단계; 및(g) 상기 (f) 단계를 5회 이상 반복하여 순수한 Lawsonia intracellularis로 감염된 McCoy 세포를 수득하는 단계.
- 제1항에 있어서, 상기 여과는 스텐레스 재질의 철망으로 여과시킨 후, 여과 구멍의 크기가 각각 2.7㎛, 1.2㎛, 0.8㎛ 및 0.65㎛인 여과막을 순차적으로 통과시키는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 혐기조건은 8.0% 수소, 8.8% 이산화탄소, 83.2%의 질소로 구성되는 조건인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 항생제는 네오마이신, 겐타마이신 또는 반코마이신을 각각 50~300ppm의 농도로 첨가하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 서열번호 3의 16S rDNA 염기서열을 가지는 Lawsonia intracellularis KCTC 10686BP.
- 제5항의 Lawsonia intracellularis KCTC 10686BP 균주를 10세대 내지 20세대 계대하여 약독화시키는 것을 특징으로 하는 Lawsonia intracellularis KCTC 10686BP 백신의 제조방법.
- 제6항의 방법에 의해 제조된 Lawsonia intracellularis KCTC 10686BP 백신.
- 하기 단계를 포함하는 증식성 회장염 치료제의 스크리닝 방법:(a) 대상 동물의 기왕력(旣往歷)을 확인하고, 질병의 음성여부를 확인하는 단계;(b) 상기 대상동물에 6~9번 계대한 Lawsonia intracellularis 균으로 감염된 세포를 파쇄한 용액을 농축한 다음, 접종하는 단계;(c) 상기 Lawsonia intracellularis 감염이 확인된 대상동물에 증식성 회장염의 치료제 후보물질을 접종하는 단계; 및(d) 상기 대상동물의 임상증상을 개선시킨 후보물질을 증식성 회장염의 치료제로 선택하는 단계.
- 제8항에 있어서, 상기 Lawsonia intracellularis 균은 Lawsonia intracellularis KCTC 10686BP인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제8항에 있어서, 상기 대상동물은 돼지 또는 햄스터인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제8항에 있어서, 상기 (d) 단계는 분변에서 DNA를 추출한 다음, 서열번호 1과 2의 프라이머를 이용한 PCR 증폭을 수행하여, PCR 증폭물이 없는 후보물질을 증식성 회장염의 치료제로 선택하는 것을 특징으로 하는 방법.
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KR100621882B1 KR100621882B1 (ko) | 2006-09-19 |
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KR1020040077819A KR100621882B1 (ko) | 2004-09-30 | 2004-09-30 | 돼지 증식성 회장염 감염돈에서 로소니아인트라셀룰라리스 균을 분리하는 방법 |
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KR (1) | KR100621882B1 (ko) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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WO2018092974A1 (ko) * | 2016-11-18 | 2018-05-24 | 녹십자수의약품(주) | 신규한 로소니아 인트라셀룰라리스 균주 및 이의 용도 |
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US5885823A (en) * | 1995-06-05 | 1999-03-23 | Nobl Laboratories, Inc. | Lawsonia intracellularis cultivation, anti-Lawsonia intracellularis vaccines and diagnostic agents |
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2004
- 2004-09-30 KR KR1020040077819A patent/KR100621882B1/ko active IP Right Grant
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WO2018092974A1 (ko) * | 2016-11-18 | 2018-05-24 | 녹십자수의약품(주) | 신규한 로소니아 인트라셀룰라리스 균주 및 이의 용도 |
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