KR20060017526A - 고정화 담체 및 그 제조 방법, 전극 및 그 제조 방법, 및전극 반응 이용 장치 및 그 제조 방법 - Google Patents

고정화 담체 및 그 제조 방법, 전극 및 그 제조 방법, 및전극 반응 이용 장치 및 그 제조 방법 Download PDF

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Abstract

글루타르알데히드와 폴리-L-리신에 더하여 전자 수용체 화합물을 포함하는 고정화 담체를 사용하여, 효소 및 전자 수용체 화합물을 전극에 동시 고정한다. 예를 들면, 효소로서 디아포라제, 아미노기를 갖는 전자 수용체 화합물로서 2-아미노-3-카르복시-1, 4-나프토퀴논(ACNQ)을 사용한다.
글루타르알데히드, 폴리-L-리신, 효소 및 전자 수용체 화합물, 고정화, 디아포라제, 2-아미노-3-카르복시-1, 4-나프토퀴논(ACNQ)

Description

고정화 담체 및 그 제조 방법, 전극 및 그 제조 방법, 및 전극 반응 이용 장치 및 그 제조 방법{IMMOBILIZATION SUPPORT, PROCESS FOR PRODUCING THE SAME, ELECTRODE, PROCESS FOR PRODUCING THE SAME, ELECTRODE REACTION UTILIZING APPARATUS AND PROCESS FOR PRODUCING THE SAME}
본 발명은, 고정화 담체 및 그 제조 방법, 전극 및 그 제조 방법, 및 전극 반응 이용 장치 및 그 제조 방법에 관한 것으로서, 예를 들면, 바이오 센서, 바이오 리액터, 바이오 연료 전지 등, 생체 대사를 모방하여, 전극 반응에 이용한 각종 전극 반응 이용 장치에 적용하기에 적합한 것이다.
생물 내에서 행해지고 있는 생체 대사는 기질 선택성이 높고, 매우 고효율인 반응 기구로서, 실온·중성의 비교적 온화한 분위기 하에서 반응이 진행하는 특징을 가진다. 여기서 말하는 생체 대사에는, 산소나 당류·지방·단백질 등의 여러 가지 영양소를, 미생물이나 세포의 성장에 필요한 에너지로 변환하는 호흡이나 광합성 등이 포함된다.
이와 같은 생체내 반응에는, 단백질로 이루어지는 생체 촉매, 즉 효소가 크게 관여하고 있다. 이 효소의 촉매 작용을 이용한다는 사고 방식은, 인류의 역사와 함께 오래전부터 실천되어 왔다. 그 응용 범위는, 양조업, 발효업, 섬유 공업, 피혁 공업, 식품 공업, 의약품 공업 등 다종에 걸치고, 최근에는, 그 촉매 기능을 전극계에 짜넣은 바이오 센서, 바이오 리액터, 바이오 연료 전지 등, 일렉트로닉스 분야에의 응용도 검토, 실용화되어오고 있다.
그런데, 효소는 단백질로 이루어지고, 일반적으로, 열, 강산, 강알칼리, 유기 용매 등에 불안정하기 때문에, 효소의 사용은, 오로지 수 용매 중에 제한되어 왔다. 종래, 효소 반응을 행하기 위해서는, 효소를 수 용매 중에 용해시켜 기질에 작용시키는 뱃치법(batch process)이 이용되고 있지만, 반응 종료액 중에서 효소만을 변성시키지 않고 회수·재이용하는 것은 기술적으로 매우 어렵기 때문에, 1반응마다 효소를 버리게 되어, 경제적이지 못한 사용법이라고 말할 수 있다.
이러한 배경에서, 물에 불용인 고정화 효소의 제안이 이루어져 있다. 이에 의하면, 물에 불용화시킴으로써, 특이성이 높은 효소를 일반의 화학 반응에 사용되고 있는 것 같은 고체 촉매와 마찬가지로 취급할 수 있어, 효소의 이용 방법으로서 대단히 유용하다.
효소를 전극계에 응용하는 경우에도 마찬가지로 말할 수 있으며, 전극 상에 효소를 고밀도로 고정화함으로써, 전극 근방에서 일어나고 있는 효소 반응 현상을 효율적으로 전기 신호로서 받아들이는 것이 가능해진다. 덧붙여서 말하면, 전극계를 검토하는 경우, 단백질인 효소와 전극 사이에서는, 일반적으로, 전자 매개가 일어나기 어렵고, 전자 전달 매체로 되는 전자 수용체 화합물이 필요하게 되지만, 이 전자 수용체 화합물도 효소와 마찬가지로 고정화되는 것이 바람직하다.
효소의 고정화법은 크게 나누면 포괄법과 결합법의 2종으로 분류된다. 포괄 법은, 격자형과 마이크로캡슐형으로 세분된다. 한편, 결합법은, 그 결합 양식에 따라 흡착법 및 공유 결합법(가교법) 등으로 세분된다.
포괄법은, 효소 자신과는 결합 반응을 일으키지 않고, 수 불용성의 반투막성의 고분자 물질에 의해서 효소를 감싸는 방법으로서, 그 장점은 비교적 온화한 조건에서 고정화되기 때문에, 효소 활성을 손상할 우려가 낮은 점을 들 수 있다. 반면, 고정화하였을 때에 효소는 용출하지 않고, 한편, 효소의 반응 기질은 투과하기 쉬운 빈 구멍을 가질 필요가 있기 때문에, 효소-기질의 조합이 바뀔 때마다 적당한 포괄제의 선택이 요구된다.
흡착법은, 효소의 이온 흡착 또는 물리 흡착을 이용하는 것으로서, 고정화의 방법이 용이한 반면, 사용 조건에 따라 흡착 상태가 영향을 받기 쉽고, 효소의 흡착 및 탈리가 불안정하게 되기 쉽기 때문에, 일반적인 고정화법이라고는 말하기 어렵다.
공유 결합법은, 가교 시약을 사용하여 효소의 아미노기, 카르복시기 등을 결합에 사용하는 방법으로서, 효소가 비교적 용이한 방법으로 안정되게 고정화되는 반면, 가교 시약이 효소의 활성 중심 부근을 수식하거나, 가교되는 조건이 효소에게 있어서 엄격한 것 등의 경우가 있어, 효소 활성이 실활하는 경우가 적지 않다.
또한, 다공체 전극의 내부에 도전성 고분자를 생성하는 모노머와 지지 전해질을 함유시킨 용액을 함침시키고, 이것을 지지 전해질 용액 안에서 전해 산화시킴으로써, 다공체 전극 내 전체 표면에 도전성 고분자 피막을 형성하는 기능 전극의 제조 방법이 제안되어 있다(일본 특허 공개 평6-271655호 공보). 또한, 효소 반응 을 이용한 D-락트산과 L-락트산 등의 광학 이성체의 측정 방법이 제안되어 있다(일본 특허 공개 평6-121697호 공보).
이상과 같이, 전술한 종래의 각 고정화법은, 모두 단점이 존재하기 때문에, 효소-기질의 조합마다 최적의 고정화법을 검토할 필요가 있었다. 또한, 전극계에의 고정화를 검토하는 경우에는, 앞서 설명한 바와 같이 전자 전달 매체로 되는 전자 수용체 화합물의 고정화도 바람직하고, 효소-전자 수용체 화합물-기질 각각의 능력을 살리는 고정화가 필요로 되어, 더욱 어렵게 한다.
따라서, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는, 효소를 전극계에 고정화하거나 또는 효소 및 전자 수용체 화합물을 동시에 고정화하여, 효소의 촉매 기능을 전극계에 짜넣은, 고효율의 기능성 전극을 실현하기에 적합한 고정화 담체, 이것을 사용한 전극 및 이 전극을 사용한 전극 이용 반응 장치 그리고 이들의 제조 방법을 제공하는 데 있다.
본 발명자들은, 상기한 과제를 해결하고자 예의 검토를 한 결과, 가교제에 글루타르알데히드와 폴리-L-리신을 사용한 고정화 담체의 사용이 유효한 것을 발견하였다. 바람직하게는, 이들 가교제와 더불어 전자 수용체 화합물, 특히 아미노기를 갖는 전자 수용체 화합물을 조합하는 것이 유효하다. 더욱 검토를 한 결과, 일반적으로는, 가교제에, 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물(상기 글루타르알데히드는 그 일례)과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물(상기 폴리-L-리신은 그 일례)을 포함하는 고정화 담체, 또는 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물을 포함하는 고정화 담체의 사용이 유효하다고 하는 결론에 도달하였다.
본 발명은, 상기 검토에 기초하여 도출된 것이다.
즉, 상기 과제를 해결하기 위해서, 본 발명의 제1 발명은, 글루타르알데히드와 폴리-L-리신을 포함하는 것을 특징으로 하는 고정화 담체이다.
본 발명의 제2 발명은, 글루타르알데히드와 폴리-L-리신이 가교한 구조를 갖는 것을 특징으로 하는 고정화 담체이다.
글루타르알데히드(글루타르디알데히드)는 2개의 알데히드기를 갖고, 쉬프 염기를 형성하는 것으로서, 가교법에 사용되는 시약으로서 응용되어오고 있다. 그러나, 글루타르알데히드 단체를 사용한 실제의 효소 고정화에서는 그 효소 고정화량에 한계가 있고, 또한, 효소의 막외 용출도 완전히는 억제되어 있지 않다. 한편, 폴리-L-리신(폴리펩티드)을 구성하는 L-리신은 α-아미노산의 일종으로서, 거의 모든 단백질의 구성 아미노산으로서 존재하고 있고, 측쇄에 1급 아미노기를 갖기 때문에 풍부한 양전하를 갖고, 효소에 대한 독성도 없다. 또한, 폴리-L-리신은 그 풍부한 양전하로부터, 음전하를 갖는 효소와의 정전 작용적인 폴리이온 콤플렉스법의 고정화 담체로서 사용되어지는 경우도 있지만, 주위의 전하 밸런스의 영향을 받기 쉽고, 사용 조건에 따라 효소 고정화량이나 안정성이 크게 변화한다. 또한, 이들 고정화법·재료를 사용한 효소·전자 수용체 화합물의 동시 고정화의 실시예는 적고, 효소·전자 수용체 화합물의 고정화량과 활성 유지를 양립시키고, 더구나, 효소 고정화 전극이 반응 전체의 율속으로 되지 않은 고효율의 기능성 전극의 보고 예는 없었다.
이에 대하여, 제1 및 제2 발명에서는, 상기한 바와 같이 글루타르알데히드와 폴리-L-리신의 조합으로 이루어지는 고정화 담체를 사용함으로써, 각각이 갖는 효소 고정화 능력을 크게 개선하는 것이 가능해지고, 고정화 담체 전체적으로 뛰어난 효소 고정화 능력을 얻을 수 있다.
글루타르알데히드와 폴리-L-리신의 조성비는, 고정화하는 효소와, 그에 대응하는 기질에 따라 최적의 값이 달라지지만, 일반적으로는 임의의 조성비로 상관없다.
제1 및 제2 발명에서, 고정화 담체는, 바람직하게는 추가로 전자 수용체 화합물을 포함한다. 이 전자 수용체 화합물은, 기본적으로는, 고정화 담체를 전극에 형성한 경우에, 전극과 비교적 용이하게 전자의 주고받음을 행할 수 있는 것이면 어떠한 것이라도 좋지만, 아미노기를 갖고 있으면, 더욱 바람직하다. 글루타르알데히드 및 폴리-L-리신으로 이루어지는 가교제에 이 전자 수용체 화합물을 조합함으로써, 전자 수용체 화합물의 고정화와 동시에, 글루타르알데히드와 폴리-L-리신의 가교를 지지하는 역할도 하는 것이 가능하다.
고정화 담체에는, 필요에 따라, 상기의 전자 수용체 화합물 이외의 화합물을 포함시켜도 된다.
본 발명의 제3 발명은, 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 고정화 담체이다.
본 발명의 제4 발명은, 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물이 가교한 구조를 갖는 것을 특징으로 하는 고정화 담체이다.
본 발명의 제5 발명은, 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 고정화 담체이다.
본 발명의 제6 발명은, 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물이 가교한 구조를 갖는 것을 특징으로 하는 고정화 담체이다.
본 발명의 제7 발명은, 글루타르알데히드와 폴리-L-리신을 포함하는 고정화 담체와 효소를 포함하는 것을 특징으로 하는 전극이다.
본 발명의 제8 발명은, 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물을 포함하는 고정화 담체와 효소를 포함하는 것을 특징으로 하는 전극이다.
본 발명의 제9 발명은, 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물이 가교한 구조를 갖는 고정화 담체와 효소를 포함하는 것을 특징으로 하는 전극이다.
본 발명의 제10 발명은, 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물을 포함하는 고정화 담체와 효소를 포함하는 것을 특징으로 하는 전극이다.
본 발명의 제11 발명은, 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물이 가교한 구조를 갖는 고정화 담체와 효소를 포함하는 것을 특징으로 하는 전극이다.
본 발명의 제12 발명은, 고정화 담체와 효소를 포함하는 전극을 사용한 전극 반응 이용 장치로서, 고정화 담체가, 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 것이다.
본 발명의 제13 발명은, 고정화 담체와 효소를 포함하는 전극을 사용한 전극 반응 이용 장치로서, 고정화 담체가, 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물이 가교한 구조를 갖는 것을 특징으로 하는 것이다.
본 발명의 제14 발명은, 고정화 담체와 효소를 포함하는 전극을 사용한 전극 반응 이용 장치로서, 고정화 담체가, 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 것이다.
본 발명의 제15 발명은, 고정화 담체와 효소를 포함하는 전극을 사용한 전극 반응 이용 장치로서, 고정화 담체가, 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물이 가교한 구조를 갖는 것을 특징으로 하는 것이다.
본 발명의 제16 발명은, 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물을 중합 반응시키도록 한 것을 특징으로 하는 고정화 담체의 제조 방법이다.
본 발명의 제17 발명은, 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물을 중합 반응시키도록 한 것을 특징으로 하는 고정화 담체의 제조 방법이다.
본 발명의 제18 발명은, 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물을 포함하는 고정화 담체에 효소를 고정화하도록 한 것을 특징으로 하는 전극의 제조 방법이다.
본 발명의 제19 발명은, 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물을 포함하는 고정화 담체에 효소를 고정화하도록 한 것을 특징으로 하는 전극의 제조 방법이다.
본 발명의 제20 발명은, 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물을 중합 반응시킨 고정화 담체에 효소를 고정화하도록 한 것을 특징으로 하는 전극의 제조 방법이다.
본 발명의 제21 발명은, 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물을 중합 반응시킨 고정화 담체에 효소를 고정화하도록 한 것을 특징으로 하는 전극의 제조 방법이다.
본 발명의 제22 발명은, 고정화 담체와 효소를 포함하는 전극을 사용한 전극 반응 이용 장치의 제조 방법으로서, 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물을 포함하는 고정화 담체에 효소를 고정화함으로써 전극을 제조하는 공정을 갖는 것을 특징으로 하는 것이다.
본 발명의 제23 발명은, 고정화 담체와 효소를 포함하는 전극을 사용한 전극 반응 이용 장치의 제조 방법으로서, 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물을 포함하는 고정화 담체에 효소를 고정화함으로써 전극을 제조하는 공정을 갖는 것을 특징으로 하는 것이다.
본 발명의 제24 발명은, 고정화 담체와 효소를 포함하는 전극을 사용한 전극 반응 이용 장치의 제조 방법으로서, 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물을 중합 반응시킨 고정화 담체에 효소를 고정화함으로써 전극을 제조하는 공정을 갖는 것을 특징으로 하는 것이다.
본 발명의 제25 발명은, 고정화 담체와 효소를 포함하는 전극을 사용한 전극 반응 이용 장치의 제조 방법으로서, 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물을 중합 반응시킨 고정화 담체에 효소를 고정화함으로써 전극을 제조하는 공정을 갖는 것을 특징으로 하는 것이다.
제3∼제25 발명에서, 제1 화합물과 제2 화합물의 조성비 또는 제3 화합물과 제4 화합물의 조성비는, 사용하는 화합물의 종류와, 고정화하는 효소와, 그에 대응하는 기질에 따라 최적의 값이 달라지지만, 일반적으로는 임의의 조성비로 상관없다. 고정화 담체가 바람직하게는 추가로 전자 수용체 화합물을 포함하는 것, 필요에 따라 전자 수용체 화합물 이외의 화합물을 포함시켜도 되는 것은, 제1 및 제2 발명과 마찬가지이다.
가교제(가교 시약)로서 사용되는 제1∼제4 화합물의 구체예를 들면, 다음과 같다. 다만, 이하의 가교제의 예에서, R 또는 R'는, 지방족 탄화수소, 지환식 탄화수소, 방향족 탄화수소, α, β, γ-시클로덱스트린 등의 시클로덱스트린, 크라운에테르, 칼릭스아렌, 펩티드, 효소, 발색 색소 등으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종이다. 또한, R 및 R'는 서로 다르거나 동일하여도 상관없다.
우선, 효소의 NH2기, 또는 고정화 담체에 NH2기를 갖는 전자 수용체 화합물도 포함시키는 경우에는 그 NH2기와 가교할 수 있는 것으로서, 예를 들면, 이하에 예시하는 가교제 중에서 선택되는 1종 또는 2종 이상을 사용할 수 있다. 글루타르알데히드는 알데히드(R-CHO)의 1종이다.
·카르복실산(R-COOH)
·과산(R-CO(OOH))
·티오카르복실산(R-CSOH)
·이소시안화합물(R-NC)
·시안산에스테르(R-OCN)
·이소시안산에스테르(R-NOC)
·티오시안산에스테르(R-SCN)
·알데히드(R-CHO)
·티오알데히드(R-CHS)
·케톤(R-CO-R')
·티오케톤(R-CS-R')
·티올(R-SH)
·이민(R=NH)
·과산화물(R-OOR')
다음으로, 효소의 COOH기, 또는 고정화 담체에 COOH기를 갖는 전자 수용체 화합물도 포함시키는 경우에는 그 COOH기와 가교할 수 있는 것으로서, 예를 들면, 이하에 예시하는 가교제 중에서 선택되는 1종 또는 2종 이상을 사용할 수 있다.
·아민(R-NH2, RR'NH)
·과산(R-CO(OOH))
·티오카르복실산(R-CSOH)
·에스테르(R-COOR')
·할로겐 화합물(R-X, X:할로겐원자)
·산할로겐화물(R-COX, X:할로겐원자)
·아미드(R-CONH2)
·히드라지드(R-CO-NHNH2)
·이미드(R-CO-NH-OC-R')
·아미딘(R-CNH(NH2))
·니트릴(R-CN)
·이민(R=NH)(폴리에틸렌이민 등)
또한, 덴드리머(예를 들면, 폴리아미드아민이나 폴리프로필렌이민 등)를 사용하는 것도 가능하다.
본 발명에 의한 효소의 고정화법은 어떠한 효소에도 적용할 수 있고, 효소 단백질 중의 관능기에 아미노기를 갖는 것이면 더욱 바람직하지만, 아미노기를 갖고 있지 않더라도 상관없다. 또한, 효소는 1종이어도 되고, 2종류 이상의 것을 조합하여도 되고, 후술하는 보효소가 필요한 1종 또는 2종류 이상의 효소와 보효소가 필요하지 않은 1종 또는 2종류 이상의 효소를 조합하여도 된다. 효소의 구체예를 들면, NADH(환원형 니코틴아미드아데닌디뉴클레오티드)/NAD+(니코틴아미드아데닌디뉴클레오티드)의 산화 환원 효소로서 알려지는 디아포라제나, 글루코스데히드로게나제(NAD 의존형 효소) 등이다.
여기서, 효소의 분류(IUBMB:국제 생화학 분자생물학 연합/효소 명명 위원회)에 관해서 설명한다.
효소는 효소 번호(EC 번호)에 의해 분류되어 있고, 다음 6종류(EC1∼EC6)로 크게 나누어진다.
EC1 ; 옥시도리덕타아제 ( oxidoreductase )(산화 환원 효소)
·산화 환원에 관여하는 효소는 모두 여기에 분류되고, 효소 표의 약 26%를 차지한다.
[예] alcohol dehydrogenase[EC1.1.1.1]
diaphorase[EC1.6.99.-](후술하는 발명의 실시예에서 사용하는 디아포라제도 여기에 분류된다)
이후, 제2, 제3 숫자로 세분화된다. 제4 숫자는 위원회에 공인되고 나서 주어지는 번호이다.
상기 예의 경우, [EC1.1.--](산화 환원 효소 중) 공여체의 CH-OH기에 작용하는 것
[EC1.6.--]:NADH 또는 NADPH에 작용하는 것
EC2 ; 트랜스페라제 ( transferase )(전이 효소)
·1개의 화합물(공여체)의 어떤 관능기를 다른 화합물(수용체)에 옮기는 반응을 촉매한다.
[예] aspartate carbamoyltransferase[EC2.1.3.2]
hexokinase[EC2.7.1.1]
EC3 ; 히드로라제 ( hydrolase )(가수 분해 효소)
·기질의 가수 분해를 촉매한다.
[예] β-amylase [EC3.2.1.2]
pepsin A[EC3.4.23.1]
EC4 ;리아제( lyase )
·C-C 결합, C-O 결합, C-N 결합 등으로부터 탈리 반응에 의해 이중 결합을 남기는 반응이나 그 역반응을 촉매하는 효소가 여기에 분류된다.
[예] oxaloacetate decarboxylase[EC4.1.1.3]
fumarate hydratase[EC4.2.1.2]
EC5 ; 이소메라제 ( isomerase )(이성화 효소)
·이성화 반응을 촉매한다.
[예] alanine racemase[EC5.1.1.1]
triose-phosphate isomerase[EC5.3.1.1]
EC6 : 리가제 ( ligase )(합성 효소)
·합성 반응을 촉매한다.
[예] tyrosine-tRNA ligase[EC6.1.1.1]
acetate-CoA ligase[EC6.2.1.1]
또한, 효소가 작용하기 위해서는 효소와 기질 이외에, 보효소라고 불리는, 효소와 결합하여 반응에 불가결한 작용을 하는 저분자의 유기 화합물을 필요로 하는 경우가 있고, 이 보효소도 효소나 전자 수용체 화합물과 마찬가지로 고정화되는 것이 바람직하다. NADH나 NAD+, 또는 NADPH(환원형 니코틴아미드아데닌디뉴클레오티드 인산)이나 NADP(니코틴아미드아데닌디뉴클레오티드 인산)는 이 보효소의 예이다.
전극의 재료는, 도전성을 갖고, 또한 물에 불용인 물질이면 어떠한 물질이라도 되고, 이들 물질을 단독으로 사용하거나, 이들 물질을 다른 물질과 조합하여도 된다. 카본 펠트, 활성탄 등의 고 표면적을 갖는 재료를 전극 재료에 사용하면, 단위 체적당 고정화되는 효소·전자 수용체 화합물량의 증대도 기대할 수 있다.
전극 반응 이용 장치로서는, 구체적으로는, 예를 들면, 생체 대사를 모방한 바이오 센서, 바이오 리액터, 바이오 연료 전지 등을 들 수 있다.
전술한 바와 같이 구성된 본 발명에 의하면, 고정화 담체에 포함되는 제1 화합물과 제2 화합물이 가교하거나, 또는, 제3 화합물과 제4 화합물이 가교함으로써, 구체적으로는 예를 들면, 글루타르알데히드와 폴리-L-리신이 가교함으로써, 충분히 길고, 또한 3차원적으로 거의 자유로운 구조를 취할 수 있는 폴리머가 형성된다. 그리고, 전극에 효소를 고정화하는 경우에 이 고정화 담체를 사용함으로써, 이 폴리머에 의해 효소를 양호한 형태로 포괄할 수 있다. 또한, 고정화 담체에 전자 수용체 화합물도 포함시킴으로써, 효소와 전극 사이의 전자 전달도 용이하게 할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일실시 형태로 고정화 담체에 의한 효소 및 전자 수용체 화합물의 전극 상에의 동시 고정화의 이미지를 나타내는 개략도이다.
도 2는 NADH를 전기 화학적으로 산화시켰을 때의 반응 기구 모델을 도시한 개략도이다.
도 3은 NADH를 전기 화학적으로 산화시켰을 때의, 직접 산화파를 나타내는 시클릭 볼타모그램(cyclic voltammogram)을 나타내는 개략도이다.
도 4는 디아포라제 및 ACNQ를 사용하여 NADH를 전기 화학적으로 산화시켰을 때의 반응 기구 모델을 도시한 개략도이다.
도 5a 및 도 5b는 촉매 전류에서의, 시그모이드형 및 피크형을 나타내는 시클릭 볼타모그램을 나타내는 개략도이다.
도 6a 및 도 6b는 VK3및 ACNQ의 구조를 나타내는 개략도이다.
도 7은 실시예 4에서 얻어진 시클릭 볼타모그램을 나타내는 개략도이다.
도 8은 본 발명의 일실시 형태에 의한 효소 고정화 전극을 이용한 효소형 연료 전지를 도시한 개략도이다.
도 9는 도 8에 도시한 효소형 연료 전지에 사용되는 효소 고정화 전극의 일부를 확대하여 도시한 개략도이다.
도 10은 본 발명의 일실시 형태에 의한 효소 고정화 전극을 이용한 바이오 리액터를 도시한 개략도이다.
<부호의 설명>
11, 20:반응조
12:칸막이
13:반응 용액
14:바이오 캐소드
15:바이오 애노드
18:전극 기판
19:효소/전자 수용체 화합물 고정화층
22:워킹 전극
23:참조 전극
24:대향 전극
<발명을 실시하기 위한 최선의 형태>
이하, 본 발명의 일실시 형태에 관해서 도면을 참조하면서 설명한다.
이 일실시 형태에서는, 글루타르알데히드와 폴리-L-리신에 더하여, 전자 수용체 화합물을 포함하는 고정화 담체를 사용하여, 효소 및 전자 수용체 화합물, 또는, 효소, 보효소 및 전자 수용체 화합물을 전극에 동시 고정화한다. 여기서, 전자 수용체 화합물로서는, 아미노기를 갖는 것이거나 그렇지 않아도 된다.
고정화 담체에 의한 효소 및 전자 수용체 화합물의 전극 상에의 동시 고정화의 이미지를 도 1에 나타낸다. 다만, 고체화 담체는, 글루타르알데히드와 폴리-L-리신에 더하여, 아미노기를 갖는 전자 수용체 화합물을 포함하고, 또한, 효소는 아미노기를 갖는 것으로 한다. 도 1 중, PLL은 폴리-L-리신, NH2-R은 아미노기를 갖는 전자 수용체 화합물을 나타낸다. 도 1에 나타낸 바와 같이, 글루타르알데히드의 양단의 2개의 알데히드기와 폴리-L-리신의 아미노기가 아미드 결합을 형성하여 가교함으로써 충분히 길고, 또한 3차원적으로 거의 자유로운 구조를 취할 수 있는 폴리머가 형성되어 있고, 이 폴리머 전체로 아미노기를 갖는 효소가 포괄되어 있다(파선으로 그려진 타원은 포괄의 이미지를 나타낸다). 이에 더하여, 이 경우, 효소 및 전자 수용체 화합물 모두 아미노기를 갖기 때문에, 글루타르알데히드의 한쪽 말단의 알데히드기와 폴리-L-리신의 아미노기가 아미드 결합을 형성함과 동시에 글루타르알데히드의 다른쪽 말단의 알데히드기와 효소의 아미노기가 아미드 결합을 형성하여 가교하거나, 글루타르알데히드의 한쪽 말단의 알데히드기와 폴리-L-리신의 아미노기가 아미드 결합을 형성함과 동시에 글루타르알데히드의 다른쪽 말단의 알데히드기와 전자 수용체 화합물의 아미노기가 아미드 결합을 형성하여 가교하거나, 글루타르알데히드의 한쪽 말단의 알데히드기와 효소의 아미노기가 아미드 결합을 형성함과 동시에 글루타르알데히드의 다른쪽 말단의 알데히드기와 전자 수용체 화합물의 아미노기가 아미드 결합을 형성하여 가교하거나 하는 것이 가능하다. 도 1에 나타낸 구조체는 폴리이온 콤플렉스의 일례이다.
다음으로, 실시예에 관해서 설명한다.
실시예 1
우선, 효소로서 디아포라제, 아미노기를 갖는 전자 수용체 화합물로서 2-아미노-3-카르복시-1, 4-나프토퀴논(ACNQ)을 고정화한 기능성 전극의 NADH 산화능을 평가한다. 디아포라제를 사용하지 않은 반응계의 경우, 도 2에 나타낸 바와 같이, NADH는 전극 상에서 직접 산화되어 NAD+로 되어 전자(e- )를 전극에 방출하고, 도 3에 나타낸 바와 같이, 시클릭 볼타모그램(CV) 상에서는 0.7V 부근에 피크로서 나타난다. 이와 같이, NADH를 전극 상에서 직접 산화하는 경우에는 큰 과전압이 필요한 것을 알 수 있다. 그 때문에, 효소 고정화 전극에는, 이 과전압을 저감시키고, 또한 효율적으로 NADH를 산화시키는 기능이 요구된다. 도 4는 디아포라제(DI), ACNQ를 통한 NADH 산화 반응 기구로서, NADH가 디아포라제-ACNQ를 통해 산화되고, CV 상에서는 ACNQ의 산화 환원 전위인 -0.3V 부근에 촉매 전류로서 그 상태가 관측되어, NADH의 산화 과전압이 저감된다. 이하, 실제의 실험 조건을 나타낸다.
용량 1㎖의 폴리테트라플루오로에틸렌제 전해 셀을 반응조로 하여, 전압을 인가함으로써 NADH의 전기 화학적 산화 반응을 행하였다. 반응조에 수성 완충 용액으로서 인산 완충 용액 pH 8.0-1㎖를 주입하고, 15분간의 질소 가스 치환을 행하여, 충분량에 해당하는 NADH 인산 완충 용액(10mM)을 첨가하였다. 이 반응 용액 중에 대극으로서 백금선을 침지하고, 참조 전극에는 은(Ag)/염화은(AgCl) 전극을 사용하였다. 다음으로, 글래시카본 전극(BAS,Φ=3.0㎜) 상에, 디아포라제(유니티카, Bacillus stearothermophilus로부터 얻음) 인산 완충 용액(47μM)을 2㎕, ACNQ 에탄올 용액(10mM)을 2.8㎕, 글루타르알데히드 수용액(0.125%)을 3㎕, 폴리-L-리신 수용액(1%)을 3㎕ 적하하고, 잘 혼합시켜 실온에서 풍건 후, 증류수로 수세하여, 디아포라제/ACNQ 고정화 전극으로 하였다. 또한, 비교를 위해, 디아포라제와 ACNQ 적하량(각 2㎕, 2.8㎕)은 그대로로, 글루타르알데히드와 폴리-L-리신의 적하량을, 합계 적하량 6㎕인 채로, 각각 2㎕와 4㎕, 및 4㎕와 2㎕로 조성을 변화시킨 것, 나아가 글루타르알데히드 및 폴리-L-리신만을 각각 단독으로 6㎕ 사용한 것을 마찬가지의 방법으로 제작하여, 각각 고정화 전극을 준비하였다. 디아포라제/ACNQ 고정화 부위를 인산 완충 용액 중에 침지하였다. 이들 대극, 참조 전극 및 디아포라제/ACNQ 고정화 전극을 포텐시오스타트에 접속하고, 전위 주사법(cyclic voltammentry, CV)로써 전위 소인(sweep)을 행하여, 전기 화학적으로 반응을 관찰하였다. 전위의 소인 범위는 -0.5∼0.1V로 하고, 이 범위에서 관측되는 최대 촉매 전류 값을 표 1에 나타냈다. 또한, 실험에 사용한 효소, 시약, 장치 또는 실험 분위기는 실험 내내 동일 조건이고, 제작한 효소 고정화 부위의 고정화량·안정성·막 특성 등의 우열이 최대 촉매 전류의 차로서 나타나 있다. 또한, 이 때의 CV 상에서의 곡선 형상도 함께 나타냈다. 글루타르알데히드와 폴리-L-리신을 조합한 것은, 각각 단독으로 동량을 사용한 것과 비교하여 우위성을 확인할 수 있다(표 1-(1), (2) vs. (4), (5)). 또한, CV 상에서의 곡선 형상에 관해서는, 도 5a(시그모이드형(표 1-(6)) 및 도 5b(피크형(표 1-(1))에서 그 구체예를 나타낸다. 시그모이드형의 촉매 전류는, 즉 전극 성능의 한계(전극 성능 율속)를 시사하는 전류로서, 0.7V 부근에 직접 산화파가 나타나는 점에서도 충분히 NADH가 남아 있음을 나타내고 있는 것에 대하여, 글루타르알데히드와 폴리-L-리신을 조합한 것에 보이는 피크형의 것은, 기질인 NADH의 공급 율속을 나타내는 것으로서, 0.7V 부근의 NADH의 직접 산화파가 관측되지 않은 점에서, 전극 근방의 NADH가 모두 효소 반응에 소비되어, 전극 성능이 나은 점을 시사하고 있고, 새로운 전류 값 상승을 기대할 수 있는 고기능 전극임을 알 수 있다.
고정화 조건 최대 촉매 전류값(㎕) CV 형상
가교 시험 첨가량(㎕) 효소·전자 전도 매체
(1) GA+PLL 3+3 DI, ACNQ 67.5 피크
(2) GA+PLL 2+4 DI, ACNQ 58.9 피크
(3) GA+PLL 4+2 DI, ACNQ 10.7 시그모이드
(4) GA 6 DI, ACNQ 24.9 시그모이드
(5) PLL 6 DI, ACNQ 7.49 시그모이드
(6) GA+PLL 3+3 DI 13.1 시그모이드
(7) 용존계 - DI, ACNQ 0.663 시그모이드
(8) GA+PLL 3+3 DI, VK3 26.4 시그모이드
(9) GA 6 DI, VK3 18.1 시그모이드
(10) PLL 6 DI, VK3 6.82 시그모이드
※ 표중의 약어 GA:글루타르알데히드, PLL:폴리-L-리신, DI:디아포라제
실시예 2
상기 실시예 1과 마찬가지의 측정 장치를 사용하고, 효소 고정화 전극의 조건을 변경하여 동일한 실험을 행하였다. 실시예 1의 고정화 전극 제작 방법에 대하여, 글루타르알데히드와 폴리-L-리신의 적하량(각 3㎕)은 그대로로, 디아포라제만을 2㎕ 적하·고정화한 디아포라제 고정화 전극을 준비하였다. 이 때의 최대 촉매 전류 값을 표 1에 나타냈다. 디아포라제·ACNQ 모두 전극 상에 고정화하지 않고, 인산 완충 용액 중에 용해시킨 경우(무고정 상태)와 비교하여, 디아포라제 고정화 전극은 얻어지는 촉매 전류의 면에서 우위이고(표 1-(6) vs. (7)), 글루타르알데히드와 폴리-L-리신의 조합에 의해 효소만의 고정화도 가능함을 알 수 있지만, 실시예 1의 결과와 비교하면, 아미노기를 갖는 ACNQ를 동시 고정화시킨 쪽이 전극 성능으로서 바람직함을 알 수 있다(표 1-(1) vs. (6)).
실시예 3
상기 실시예 1의 고정화 전극 제작 방법에 대하여, 전자 수용체 화합물에 2-메틸-3-카르복시-1, 4-나프토퀴논(비타민 K3, VK3)을 사용하여, 글루타르알데히드와 폴리-L-리신을 조합한(각 3㎕) 것, 또한 글루타르알데히드 및 폴리-L-리신만을 각각 단독으로 6㎕ 사용한 VK3 고정화 전극을 제작하고, 동일 조건 하에서 마찬가지의 측정을 행하였다. 또한, VK3의 적하 농도는 ACNQ의 경우와 동량으로 하였다. 도 6a에 VK3의 구조를 나타내지만, 아미노기가 존재하지 않는 것 이외에는 도 6b에 나타낸 ACNQ와 구조가 유사하고, 전기 화학적 특성도 같은 경향을 나타낸다. 이 때의 최대 촉매 전류 값을 표 1에 나타냈다. 글루타르알데히드와 폴리-L-리신의 조합은, 각각을 단독으로 사용한 경우보다 우위인 것이 아미노기를 갖지 않는 VK3에서도 시사되었다(표1- (8) vs. (9), (10)). 그러나, 실시예 1의 결과로부터도, 전자 수용체 화합물에 ACNQ를 사용한 경우 쪽이 우위이고, 아미노기를 갖는 전자 수용체 화합물을 동시 고정화시킨 쪽이 전극 성능으로서 우위인 것을 알 수 있다(표 1-(1) vs. (8)). 또한, 효소를 글루코스옥시다제로 한 경우에도, 마찬가지의 경향이 있음을 확인하였다.
이상의 실시예 1∼3으로부터, 글루타르알데히드와 폴리-L-리신의 조합으로 이루어지는 고정화 담체는 유용하고, 어떠한 효소, 어떠한 전자 수용체 화합물 수용체에도 적용 가능한 것을 알 수 있지만, 바람직하게는, 전자 수용체 화합물에는 아미노기를 갖는 것을 사용한 쪽이 전극 성능, 고정화 부위 안정화에서 우위이다.
실시예 4
실시예 1의 효소 고정화 전극에서는, 효소로서 디아포라제 및 전자 수용체 화합물로서 ACNQ가 동시 고정화되어 있지만, 이 실시예 4에서는, 이들 외에 추가로, 효소로서 글루코스데히드로게나제 및 그 보효소인 NADH(NAD+)도 동시 고정화하였다. 글루코스데히드로게나제의 고정화에 의해, 글루코스(포도당)로부터 전류를 빼낼 수 있는 것이 확인되었다. 이 경우, 글루코스→글루코스데히드로게나제→NADH(NAD+)→디아포라제→전자 수용체 화합물→전극의 순으로 전자가 전파한다. NADH부터 하류는 실시예 1과 마찬가지이다. 이 경우에 얻어진 시클릭 볼타모그램을 도 7에 나타내었다.
다음으로, 이 일실시 형태에 의한 효소 고정화 전극의 전극 반응 이용 장치에의 적용예에 관해서 설명한다.
도 8은 이 효소 고정화 전극을 이용한 바이오 연료 전지(Bio Fuel Cell)인 효소형 연료 전지를 도시하였다.
도 8에 도시한 바와 같이, 이 효소형 연료 전지에서는, 반응조(11) 내가 칸막이(12)에 의해 2개로 나누어져 있고, 각각에 반응 용액(13)이 담겨 있다. 그리고, 칸막이(12)에 의해 나누어진 한쪽 측의 반응 용액(13) 내에 바이오 캐소드(14)(음극)가 침지되고, 다른 쪽 측의 반응 용액(13) 내에 바이오 애노드(15)(양극)가 침지되어 있다. 바이오 캐소드(14)와 바이오 애노드(15) 사이에는 배선(16)을 통해 부하 저항(17)이 접속된다.
바이오 캐소드(14) 및 바이오 애노드(15)로서는 이 일실시 형태에 의한 효소 고정화 전극이 사용되고, 예를 들면 도 9에 도시한 바와 같은 구조를 갖는다. 도 9에 도시한 바와 같이, 이들 바이오 캐소드(14) 및 바이오 애노드(15)는, 전극 기판(18) 상에 효소/전자 수용체 화합물 고정화층(19)이 형성된 것이다. 도 9 중, Enzy는 효소를 나타내고, Med는 전자 수용체 화합물을 나타낸다.
이 효소형 연료 전지에서는, 바이오 캐소드(14)에 예를 들면 NADH를 연료로서 보냄과 아울러, 바이오 애노드(15)에는 산화제로서 예를 들면 산소 등을 보냄으로써 발전을 행한다. 이 경우, 바이오 캐소드(14)에서는, 효소/전자 수용체 화합물 고정화층(19)의 효소 및 전자 수용체 화합물에 의해, 실시예 1에서 설명한 원리로 NADH로부터 공급된 전자(e-)가 전극 기판(18)에 주고받아지고, 이 전자가 배선(16)을 통과하여 바이오 애노드(15)로 이동하여, 발전이 행해진다.
도 10은 이 효소 고정화 전극을 이용한 바이오 리액터를 도시한다. 도 10에 도시한 바와 같이, 이 바이오 리액터에서는, 반응조(20) 내에 반응 용액(21)이 담겨 있고, 그 속에 워킹 전극(22), 참조 전극(23) 및 대향 전극(24)이 침지되어 있다. 워킹 전극(22)으로서는 이 일실시 형태에 의한 효소 고정화 전극이 사용되고, 예를 들면 도 9에 도시한 바와 같은 구조를 갖는다. 참조 전극(23)과 대향 전극(24) 사이에는 정전압 발생 장치(25)가 접속되어, 참조 전극(23)이 일정 전위에 유지되도록 되어 있다. 워킹 전극(22)은, 정전압 발생 장치(25)의 참조 전극(23)이 접속된 단자에 접속되어 있다.
이 바이오 리액터에서는, 기질(예를 들면, NADH)을 워킹 전극(22)에 보내고, 효소 반응을 일으켜 원하는 생성물을 생성한다.
이상과 같이, 이 일실시 형태에 의하면, 글루타르알데히드와 폴리-L-리신에 더하여, 전자 수용체 화합물을 포함하는 고정화 담체를 사용하고, 효소 및 전자 수용체 화합물을 전극에 동시 고정화하여 효소 고정화 전극을 구성하고 있기 때문에, 종래의 고정화 담체, 예를 들면 글루타르알데히드 단체나 폴리-L-리신 단체를 사용하여 효소 및 전자 수용체 화합물을 전극에 동시 고정화하는 경우와 비교하여, 효소 고정화량을 증가시킬 수 있고, 효소의 용출도 거의 완전하게 억제할 수 있어, 주위의 전하 밸런스의 영향을 받기 어렵고, 사용 조건에 따른 효소 고정화량이나 안정성의 변화도 적고, 효소의 활성도 유지할 수 있고, 또한 효소 고정화 전극이 반응 전체의 율속으로 되지 않는 고효율의 기능성 전극을 얻을 수 있다. 그리고, 이 효소 고정화 전극을 이용함으로써, 고성능의 전극 반응 이용 장치, 예를 들면 바이오 연료 전지, 바이오 리액터, 바이오 센서 등을 실현하는 것이 가능해진다.
이상, 본 발명의 일실시 형태 및 실시예에 관해서 구체적으로 설명하였지만, 본 발명은, 전술한 실시 형태 및 실시예에 한정되는 것이 아니라, 본 발명의 기술적 사상에 기초한 각종 변형이 가능하다.
예를 들면, 전술한 일실시 형태 및 실시예에서 예로 든 수치, 구조, 재료, 프로세스 등은 어디까지나 예에 불과하고, 필요에 따라 이들과 상이한 수치, 구조, 재료, 프로세스 등을 사용해도 된다.
본 발명에 의하면, 고정화 담체에 의한 전극에의 효소의 고정화 또는 효소 및 전자 수용체 화합물의 동시 고정화 및 고밀도 고정화가 가능해지고, 기질 공급 율속을 실현하는 고효율의 기능성 전극을 실현하는 것이 가능해진다. 또한, 측정계에 해당하는 전극 성능 율속이 없어짐으로써, 바이오 센서, 바이오 리액터, 바이오 연료 전지 등에서의 반응계의 상세한 검토가 가능해지고, 각 바이오 디바이스의 발전에 크게 공헌하는 것이 가능해진다. 또한, 본 발명은 전극계 이외에의 효소의 고정화에도 응용 가능하다.

Claims (28)

  1. 글루타르알데히드와 폴리-L-리신을 포함하는 것을 특징으로 하는 고정화 담체.
  2. 제1항에 있어서,
    전자 수용체 화합물을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 고정화 담체.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 전자 수용체 화합물은 아미노기를 갖는 것을 특징으로 하는 고정화 담체.
  4. 글루타르알데히드와 폴리-L-리신이 가교한 구조를 갖는 것을 특징으로 하는 고정화 담체.
  5. 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 고정화 담체.
  6. 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이 상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물이 가교한 구조를 갖는 것을 특징으로 하는 고정화 담체.
  7. 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 고정화 담체.
  8. 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물이 가교한 구조를 갖는 것을 특징으로 하는 고정화 담체.
  9. 글루타르알데히드와 폴리-L-리신을 포함하는 고정화 담체와 효소를 포함하는 것을 특징으로 하는 전극.
  10. 제9항에 있어서,
    보효소를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 전극.
  11. 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물을 포함하는 고정화 담체와 효소를 포함하는 것을 특징으로 하는 전극.
  12. 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물이 가교한 구조를 갖는 고정화 담체와 효소를 포함하는 것을 특징으로 하는 전극.
  13. 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물을 포함하는 고정화 담체와 효소를 포함하는 것을 특징으로 하는 전극.
  14. 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물이 가교한 구조를 갖는 고정화 담체와 효소를 포함하는 것을 특징으로 하는 전극.
  15. 상기 고정화 담체가, 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는, 고정화 담체와 효소를 포함하는 전극을 사용한 전극 반응 이용 장치.
  16. 상기 고정화 담체가, 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화 합물이 가교한 구조를 갖는 것을 특징으로 하는, 고정화 담체와 효소를 포함하는 전극을 사용한 전극 반응 이용 장치
  17. 상기 고정화 담체가, 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는, 고정화 담체와 효소를 포함하는 전극을 사용한 전극 반응 이용 장치.
  18. 상기 고정화 담체가, 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물이 가교한 구조를 갖는 것을 특징으로 하는, 고정화 담체와 효소를 포함하는 전극을 사용한 전극 반응 이용 장치.
  19. 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물을 중합 반응시키도록 한 것을 특징으로 하는 고정화 담체의 제조 방법.
  20. 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물을 중합 반응시키도록 한 것을 특징으로 하는 고정화 담체의 제조 방법.
  21. 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물을 포함하는 고정화 담체에 효소를 고정화하도록 한 것을 특징으로 하는 전극의 제조 방법.
  22. 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물을 포함하는 고정화 담체에 효소를 고정화하도록 한 것을 특징으로 하는 전극의 제조 방법.
  23. 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물을 중합 반응시킨 고정화 담체에 효소를 고정화하도록 한 것을 특징으로 하는 전극의 제조 방법.
  24. 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물을 중합 반응시킨 고정화 담체에 효소를 고정화하도록 한 것을 특징으로 하는 전극의 제조 방법.
  25. 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물을 포함하는 고정화 담체에 효소를 고정화함으로써 상기 전극을 제조하는 공정을 갖는 것을 특징으로 하는, 고정화 담체와 효소를 포함하는 전극을 사용한 전극 반응 이용 장치의 제 조 방법.
  26. 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물을 포함하는 고정화 담체에 효소를 고정화함으로써 상기 전극을 제조하는 공정을 갖는 것을 특징으로 하는, 고정화 담체와 효소를 포함하는 전극을 사용한 전극 반응 이용 장치의 제조 방법.
  27. 아미노기 또는 이미노기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제1 화합물과 아미노기 또는 이미노기를 갖는 제2 화합물을 중합 반응시킨 고정화 담체에 효소를 고정화함으로써 상기 전극을 제조하는 공정을 갖는 것을 특징으로 하는, 고정화 담체와 효소를 포함하는 전극을 사용한 전극 반응 이용 장치의 제조 방법.
  28. 카르복시기를 갖는 화합물과 중합 반응할 수 있는 기를 2개 이상 갖는 제3 화합물과 카르복시기를 갖는 제4 화합물을 중합 반응시킨 고정화 담체에 효소를 고정화함으로써 상기 전극을 제조하는 공정을 갖는 것을 특징으로 하는, 고정화 담체와 효소를 포함하는 전극을 사용한 전극 반응 이용 장치의 제조 방법.
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