KR20050067131A - Composition comprising the extract of morus alba l having monoamine oxidase-inhibiting activity - Google Patents

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Abstract

본 발명은 모노아민산화효소(MAO) 저해 활성을 갖는 상심자 (Morus alba L.)의 추출물을 유효성분으로 함유하는 MAO 관련 각종질환의 예방 및 치료용 조성물, 스트레스 해소 및 피로회복용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 상심자 추출물은 시험관내 실험에서 MAO 효소활성을 강력히 저해하였고, 상심자 추출물의 경구투여가, 동물의 운동 후 MAO-A 활성을 증가시키고, MAO-B 효소 활성을 저하시켜 정상수준으로 회복시키며, 또한 LDH의 활성을 저하시키고 락테이트의 함량을 저하시키므로써, 본 발명의 상심자 추출물은 MAO 효소와 관련된 우울증, 파킨슨씨병, 알츠하이머와 같은 각종 질환을 위한 의약품, 운동 후 신체의 스트레스 해소, 피로회복 및 운동능력향상을 위한 스포츠 기능성 식음료 및 건강기능식품으로 이용될 수 있다.The present invention relates to a composition for the prevention and treatment of various diseases related to MAO, a composition for relieving stress and fatigue, comprising an extract of Morus alba L. having a monoamine oxidase (MAO) inhibitory activity as an active ingredient. , The extract of the present invention strongly inhibited the MAO enzyme activity in the in vitro experiments, oral administration of the extract of the loser, increased MAO-A activity after exercise of the animal, lowered the MAO-B enzyme activity to normal levels By lowering the activity of LDH and lowering the content of lactate, the extract of the present invention can be used for various diseases such as depression, Parkinson's disease and Alzheimer's disease associated with MAO enzymes, body stress after exercise It can be used as sports functional food and beverage and health functional food for relieving fatigue, improving fatigue and improving athletic ability.

Description

모노아민산화효소 저해활성을 갖는 상심자 추출물을 함유한 조성물 {Composition comprising the extract of Morus alba L having monoamine oxidase-inhibiting activity} Composition comprising the extract of Morus alba L having monoamine oxidase-inhibiting activity

본 발명은 모노아민산화효소 저해활성을 갖는 상심자 추출물을 함유하는 모노아민산화효소저해제 및 스트레스 해소 및 피로회복용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a monoamine oxidase inhibitor and a composition for stress relief and fatigue containing a loser extract having a monoamine oxidase inhibitory activity.

모노아민산화효소 (Monoamine oxidase, amine:oxygen oxidoreductase (deaminating) EC 1.4.3.4., MAO)는 중추신경계나 말초조직 등 동물조직 중의 미토콘드리아(mitochondria)에 널리 존재하면서 신경 전달물질이나 호르몬성 아민(amines) 화합물의 대사를 관장하는 효소로서 다음과 같은 반응으로 아민 화합물의 산화적 탈아미노기반응(deamination)을 촉매하여 신경전달물질과 식사와 장내 박테리아에 의해 유래되는 호르몬성 아민(hormonal amines)을 분해한다(Cooper, J.R., et al. The biochemical Basis of Neuropharmacology, Oxford university press, New York, 1996).Monoamine oxidase (amine: oxygen oxidoreductase (deaminating) EC 1.4.3.4., MAO) is widely present in mitochondria in animal tissues, such as the central nervous system and peripheral tissues, and is a neurotransmitter or hormone amine (amines). It is an enzyme that regulates metabolism of compounds, and catalyzes the oxidative deaminoation of amine compounds by decomposing neurotransmitters and hormone amines derived from food and intestinal bacteria by the following reactions. (Cooper, JR, et al. The biochemical Basis of Neuropharmacology, Oxford university press, New York, 1996).

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MAO는 내인성 기질로서 카테콜아민과 인돌알킬아민(indolealkylamines) 또는 그 유도체를 주로 이용하며 기질 특이성에 따라 세로토닌, 노르에피네프린 (norepinephrine), 에피네프린(epinephrine)을 산화적으로 탈아미노기화 시키는 A-형과, 벤질아민(benzylamine), 펜에틸아민(phenethylamine)의 산화를 촉매 하는 B-형의 두 가지 형태으로 나눌 수 있다(Felner, A.E. and Waldmeier, P.C., Biochem. Pharmac., 28, pp995-1002, 1979).MAO mainly uses catecholamines and indolealkylamines or derivatives thereof as endogenous substrates, and benzyl, A-type, which oxidatively deaminoizes serotonin, norepinephrine, and epinephrine according to substrate specificity. It can be divided into two types, B-type catalyzing the oxidation of benzylamine and phenethylamine (Felner, AE and Waldmeier, PC, Biochem. Pharmac . , 28 , pp995-1002, 1979).

상기 MAO 효소 저해제는 전통적으로 우울증(Youdim MB, Finberg JP, and Tipton, KF. Handbook of Experimental Pharmacology. 90/1, pp119-192, 1988; Sambamoorthi U, et al., Med Care. 41(1), pp180-94, 2003)과 고혈압(Laux G, Philipp M, Kohnen R. Lancet. 11;347(9011):1330, 1996), 편두통(Silberstein SD, Curr Med Res Opin. 17 Suppl 1:s87-93, 2001)을 치료하고 파킨슨병의 진행을 지연하는 약물로 이용되어 왔으며(Danisi F., Geriatrics. 57(3), pp46-50, 2002; Ahlskog JE. Neurology. 60(3), pp381-9, 2003) 그 외에도 여러 원인에 의한 공황증세(Sheehan DV., J Clin. Psychiatry., 63 Suppl 14, pp17-21, 2002), 어린아이의 주의력 결핍과 충동적 과잉 행동을 치료하는 약물로 응용되고 있다(Spencer TJ, et al., J Clin Psychiatry. 63 Suppl 12, pp16-22, 2002). 최근에는 수면 과잉증의 자극제(Annane D, et al., Cochrane Database Syst Rev., (4):CD003218, 2002)로 무언증의 치료제(Berger I, et al., Isr Med Assoc J. 4(12), pp1135-7, 2002)로서, 금연을 돕는 약물로서도(Fowler JS, et al., Neurotoxicology. 24(1), pp75-82, 2003; Berlin I, et al., Addiction. 97(10), pp1347-54., 2002; Vessicchio JC, et al., J. Clin. Psychiatry., 3(7), pp594-5, 2002) 응용되고 있다. 또한 새로운 MAO 저해제의 기능이 연구되고 있어서 알츠하이머씨병(Alzheimer's disease)을 치료하는 강력한 후보물질로서 MAO 저해제들의 새로운 기능이 보고 되었으며(Sterling J, et al., J. Med. Chem. 21;45(24), pp5260-79, 2002) 십이지장궤양 환자의 헬리코박터 피로리(Helicobacter pylori)균 근절을 위한 약물요법(Silva FM, et al., Rev Hosp Clin Fac Med Sao Paulo. 57(5), pp205-8, 2002; Queiroz DM, et al., J. Clin. Gastroenterol., 35(4), pp315-20, 2002; Treiber G, et al., Helicobacter., 7(4), pp225-31, 2002)과 HIV 감염 환자의 우울증 치료(Brown BR. HIV Clin., 14(3)1, pp5-8, 2002), 알코올 중독 환자를 치료하는 약물의 효과 조절(Wing MK. Chemico-Biological Interactions, 130-132 pp919-930, 2001),사회적 분노 질환(social anxiety disorder)의 극복을 위한 약물치료에도 응용되고 있다(Stein DJ, et al., Int. Clin. Psychopharmacol., 17(4), pp161-70, 2002). 아직 연구 단계에 있지만 MAO 저해제의 신경모터 자극 효과(Psychomotor stimulant effects, Bergman J, Yasar S, Winger G., Psychopharmacology (Berl). 159(1), pp21-30, 2001), 기억증진활성(memory enhancing activity)(Nowakowska E, et al., J. Physiol. Pharmacol., 52, pp863-73, 2001)이 확인되기도 했다.The MAO enzyme inhibitors have traditionally been described as depression (Youdim MB, Finberg JP, and Tipton, KF. Handbook of Experimental Pharmacology. 90/1 , pp119-192, 1988; Sambamoorthi U, et al., Med Care . 41 (1) , pp180-94, 2003) and hypertension (Laux G, Philipp M, Kohnen R. Lancet. 11 ; 347 (9011): 1330, 1996), migraine (Silberstein SD, Curr Med Res Opin . 17 Suppl 1: s87-93, 2001) has been used as a drug to treat and delay the progression of Parkinson's disease (Danisi F., Geriatrics . 57 (3) , pp46-50, 2002; Ahlskog JE. Neurology . 60 (3) , pp381-9, 2003 In addition, it has been applied as a drug to treat attention deficit and impulsive hyperactivity in children (Sheehan DV., J Clin. Psychiatry. , 63 Suppl 14, pp17-21, 2002). Spencer TJ, et al., J Clin Psychiatry . 63 Suppl 12, pp 16-22, 2002). Recently, stimulants of hypersomnia (Annane D, et al., Cochrane Database Syst Rev. , (4): CD003218, 2002) have been used to treat speechlessness (Berger I, et al., Isr Med Assoc J. 4 (12) , pp1135-7, 2002), as a drug to help quit smoking (Fowler JS, et al., Neurotoxicology . 24 (1) , pp75-82, 2003; Berlin I, et al., Addiction. 97 (10) , pp1347- 54., 2002; Vessicchio JC, et al., J. Clin.Psychiatry., 3 (7) , pp594-5, 2002). In addition, the function of new MAO inhibitors is being studied, and new functions of MAO inhibitors have been reported as potent candidates for treating Alzheimer's disease (Sterling J, et al., J. Med. Chem. 21 ; 45 (24). , pp5260-79, 2002) Drug therapy for eradication of Helicobacter pylori in duodenal ulcer patients (Silva FM, et al., Rev Hosp Clin Fac Med Sao Paulo. 57 (5) , pp205-8, Queiroz DM, et al., J. Clin. Gastroenterol., 35 (4) , pp315-20, 2002; Treiber G, et al., Helicobacter ., 7 (4) , pp225-31, 2002) and HIV Treatment of depression in infected patients (Brown BR. HIV Clin. , 14 (3) 1, pp5-8, 2002), modulating the effects of drugs treating alcoholic patients (Wing MK. Chemico-Biological Interactions, 130-132 pp919-) 930, 2001), and has also been applied to drug therapy to overcome social anxiety disorders (Stein DJ, et al., Int. Clin. Psychopharmacol ., 17 (4) , pp161-70, 2002). Psychomotor stimulant effects, Bergman J, Yasar S, Winger G., Psychopharmacology (Berl) .159 (1) , pp21-30, 2001), memory enhancing activity of MAO inhibitors activity (Nowakowska E, et al., J. Physiol. Pharmacol. , 52 , pp863-73, 2001).

락테이트 탈수소효소(Lactate dehydrogenase, EC.1.1.1.27)(LDH)는 백색근섬유에서 일어나는 당분해과정의 첫 단계인 Lactate+NAD+=pyruvate+NADH의 화학반응을 촉매 하는 산화환원효소의 한 종류로서 이 반응의 역반응은 심장이나 적색 근섬유에서 일어나는 유산분해과정과 간장에서의 포도당 전환과정의 첫 단계이며 대부분 세포의 세포질에 존재하는 이 효소의 혈중 농도를 확인하여 각종 진단에 이용하고 있다. 혈뇨, 농뇨, 단백뇨, 백혈구증가증이 있는 경우, LDH 레벨이 증가되어 있으며(de Pablo Cardenas A, et al., Arch Esp Urol. 55(10), pp273-6, 2002), 신혈관성 고혈압과 신부전증, 발육부전(Parmar RC, et al., Am. J. Med. Genet., 15;117A(3), pp275-7, 2003), 정신박약, 열과 급성신부전증, 담즙울체성간염, 폐기능 부전을 동반하는 다발성골수증(Vella FS, et al., Am. J. Hematol., 72(1), pp38-42, 2003), 급성 폐부전, 암 환자의 검색, 진단, 예후, 관찰의 마커로서 이용되기도 하고(Riley RD, et al., Eur. J. Cancer., 39(1), pp19-30, 2003) 신경독성을 측정하여 허혈성심장발작을 진단하거나(Dezsi L, et al., Acta Pharm. Hung. 72(2), pp84-91, 2002), 어린아이의 급성 골수성백혈병(Zaki S, et al., J. Pak. Med. Assoc., 52(6), pp247-9, 2002), 고열, 빈혈, 혈소판장애, 골수의 혈구탐식증 (Katsumata Y, et al., Ryumachi., 42(5), pp820-6, 2002), 전립선암(Fernandez Gomez JM, et al., Arch Esp. Urol., 55(8), pp915-22, 2002), 급성 심근경색 (Yamasawa I, Baral R. Nippon Rinsho. 52 Suppl(Pt 2), pp631-5, 1994)에서도 LDH 레벨이 증가되는 것을 진단에 이용하고 있다.Lactate dehydrogenase (EC.1.1.1.27) (LDH) is a type of redox enzyme that catalyzes the chemical reaction of Lactate + NAD + = pyruvate + NADH, the first step in the glycolysis process in white muscle fibers. The reverse reaction of this reaction is the first step in the lactolysis process in the heart or red muscle fibers and the glucose conversion in the liver. The blood concentrations of the enzymes in the cytoplasm of most cells are used for various diagnosis. LDH levels are increased in hematuria, pneumoniae, proteinuria, leukocytosis (de Pablo Cardenas A, et al., Arch Esp Urol. 55 (10 ), pp 273-6, 2002), Renal Vascular Hypertension, Renal Insufficiency, Dysplasia (Parmar RC, et al., Am. J. Med. Genet., 15 ; 117A (3), pp275-7, 2003), Mental Retardation, Fever and Acute Renal Failure, Cholestatic Hepatitis , Multiple myeloma with pulmonary insufficiency (Vella FS, et al., Am. J. Hematol., 72 (1) , pp38-42, 2003), acute lung failure, screening, diagnosis, prognosis of cancer patients, It is also used as a marker of observation (Riley RD, et al., Eur. J. Cancer. , 39 (1) , pp19-30, 2003) to diagnose ischemic heart attack by measuring neurotoxicity (Dezsi L, et al. , Acta Pharm.Hung . 72 (2) , pp84-91, 2002), Acute Myeloid Leukemia in Children (Zaki S, et al., J. Pak. Med. Assoc., 52 (6) , pp247-9 , 2002), high fever, anemia, platelet disorders, hematopoiesis in the bone marrow (Katsumata Y, et al., Ryumachi ., 42 (5) , pp820-6, 2002), prostate cancer (Fernandez Gomez JM, et al., Arch Esp. Urol ., 55 (8) , pp915-22, 2002), and acute myocardial infarction (Yamasawa I, Baral R. Nippon Rinsho. 52 Suppl (Pt 2), pp631-5, 1994). The increase is used for diagnosis.

한편, 근육운동 능력을 향상시키기 위한 운동생리의 연구 분야에서는 최근 세로토닌 수용체(serotonin receptors)의 기능에 대한 체력 훈련영향에 대한 연구에서 쥐의 중추신경계에서 세로토닌과 세로토닌 수용체의 농도가 운동을 전후한 스트레스에 대한 반응으로 급속히 증가하며 운동의 강도와 기간에 따라 세로토닌의 농도와 세로토닌 모듈린 조직(serotonin modulin tissue)의 농도증가 양상이 다르게 나타난다는 사실을 동물실험을 통하여 확인하고 이 기전에 따라 다양한 운동처방이 가능하다고 주장하고 있다. 이러한 주장은 근육운동 시에 조직 내 세로토닌의 농도가 증가한다는 이미 알려진 사실에 대한 카테콜아민(catecholamine) 대사 기전의 구체적 증거이며 이러한 사실에 입각하여 근육운동의 개선과 향상을 위한 새로운 기전이 연구를 위한 바탕을 제공하고 있다. On the other hand, in the field of exercise physiology for improving muscle exercise ability, the recent study on the effect of fitness training on the function of serotonin receptors, the concentration of serotonin and serotonin receptors in the central nervous system of rats before and after exercise It is rapidly increased in response to the test results, and it is confirmed through animal experiments that the concentrations of serotonin and serotonin modulin tissue are different according to the intensity and duration of exercise. It is claimed that this is possible. These claims are concrete evidence of catecholamine metabolism mechanisms for the already known fact that the concentration of serotonin in tissues increases during muscle exercise, and based on these findings, new mechanisms for improving and improving muscle movement. To provide.

한의학의 약리학을 설명하는 이론 중 하나인 기미론 중 기론을 검정하는 지표를 마련하고자 실시한 한성 약물과 열성 약물을 경구투여한 후 동물의 체내에서 일어나는 이 약물들에 의한 모노아민산화효소(monoamine oxidase, MAO)의 활성변화를 관찰함으로서 MAO의 체내활성 변화를 측정하는 방법이 약재의 한열을 구분하는 지표가 될 수 있을 지의 시험과 한성약과 열성약이 시험관 내에서 효소활성에 미치는 효과를 실험하여 한열로 구분된 한약재들이 시험관 내에서 효소활성에 미치는 영향을 비교 관찰한 실험 결과 한성 약물들이 동물의 체내에서와 시험관 내에서 MAO 활성을 저해하는 사실을 확인하여 보고한 바 있다(황금희 외, 생약학회지, 30(2), pp145-150, 1999). 이 사실을 근거로 한성 약물들이 운동 중 체내 세로토닌의 농도 변화에 영향을 미쳐서 운동 능력을 향상하고 운동으로 인한 스트레스를 개선하는 기능을 할 수 있을 것으로 기대하고 한방과 민간에서 중추신경계에 작용하는 것을 목적으로 사용되어온 식물을 대상으로 기론에 의해 한성과 평성, 양성(凉性)으로 분류된 식물을 대상으로 약 300여 종의 식물을 수집하여 MAO 저해활성을 검색한 결과 약 40여종의 식물이 MAO-A 및 MAO-B에 대해 강력한 저해활성을 나타냈음을 확인하였다(Hwang, K.H. and Lim, S.H., Food Science and Biotechnology 투고 중). 이에 본 발명자는 이들 식물 중 식품공전에 수재되어 식품재료로 이용이 가능한 식물 중 뽕나무 열매인 상심자(오디)가 강한 MAO 저해활성을 나타내는 것을 확인하여, 상심자를 선정하여 항우울제로 널리 사용되는 MAO 효소 저해제 및 세로토닌 이론을 적용한 스포츠 식품의 재료로 이용할 수 있을 것으로 기대하고 활성성분에 대한 연구를 진행하였다.One of the theories explaining the pharmacology of oriental medicine is the monoamine oxidase (monoamine oxidase) caused by these drugs in the body after oral administration of Hansung drugs and recessive drugs, which were conducted to prepare the indicators to test the theory. By observing the change in activity of MAO), we can test whether the method of measuring the change in body activity of MAO can be an indicator to distinguish the heat of medicine, and the effects of Hansung and heat medicine on enzyme activity in vitro. As a result of comparative observation of the effects of different herbal medicines on enzyme activity in vitro, we confirmed and reported that Korean medicines inhibit MAO activity in animals and in vitro (Hwang, Geum-Hee et al., Journal of Pharmacognosy, 30) (2) , pp 145-150, 1999). Based on this fact, it is expected that Hansung drugs may function to change the concentration of serotonin in the body during exercise to improve exercise ability and improve stress due to exercise, and to act on the central nervous system in oriental medicine and civilian. About 300 plants were collected from plants classified as Han, Pyeong, and Benign by Giron and searched for MAO inhibitory activity. It was confirmed that it showed a strong inhibitory activity against A and MAO-B (during Hwang, KH and Lim, SH, Food Science and Biotechnology). Accordingly, the present inventors confirmed that the mulberry fruit, mulberry fruit (audio), among the plants that are harvested in the food industry and can be used as a food material, exhibits strong MAO inhibitory activity. In anticipation that it could be used as a material for sports foods applying the inhibitor and serotonin theory, the active ingredients were studied.

한의학에서 뽕나무 잎을 상엽(桑葉)이라 하고, 뿌리를 상근(桑根), 뿌리껍질을 상백피(桑白皮), 가지를 상지(桑枝), 열매를 상심자(桑甚子), 잎에서 나오는 유액을 상엽즙(桑葉汁), 껍질에서 채취된 유액은 상피즙(桑皮汁)이라 하며 목재를 태운 재를 상시회(桑柴灰)라고 한다. 뽕나무와 관련된 약재는 대체로 독성이 강하지 않아서 안전하게 사용할 수 있으며, 체내에 쌓인 좋지 않은 열(熱)을 없애는데 효과가 있어 고혈압과 당뇨병에 응용되고 있다(강병수 등, 본초학, 영림사, 서울, 한국, 2000).In oriental medicine, mulberry leaves are called upper leaves, roots are roots, roots are baekbaekpi, eggplants are upper, fruits are heartbreaks, leaves. The latex from the juice of the upper leaves (桑葉 汁), the extract from the husk is called epithelial juice (桑皮 汁) and wood-burned ash is called Sangsihoe (桑 柴 灰). Medicinal herbs related to mulberry trees are generally not toxic and can be used safely. They are effective in eliminating bad heat accumulated in the body and have been applied to high blood pressure and diabetes (Kang, Byung-Soo, Herbology, Younglimsa, Seoul, Korea, 2000) ).

상심자(오디)는 뽕나무과(Moraceae)에 속한 낙엽교목인 뽕나무(Morus alba L.)의 열매가 자홍색을 나타낼 때 채취하여 건조한 후 한약재로 사용되며 한방에서는 어지러움과 이명, 구갈, 소갈 등의 치료에 이용하는 것으로 알려져 있으며(강병수 등, 본초학, 영림사, 서울, 한국 2000), 일본에서는 양혈거풍의 효능과 풍열을 다스리며 강장, 진통약, 불면증, 이명, 어지러움, 요통, 변비 등의 치료에 응용하는 것으로 알려져 있다(Namba, T., The Encyclopedia of Wakan-Yaku with Color Pictures Vol. 1 Hoikusha, Osaka, Japan, 1993). 동의보감에는 소갈을 다스리고 오장을 이롭게 하며 뽕나무의 정(精)이 모여 있다고 적고 있다(동의보감국역위원회, 동의보감, 남산당, 서울, 한국, 2000). 상심자는 각종 비타민류, 유기산류, 당류 등의 성분이 보고 되어 있고 활성 성분에 대한 연구보고는 아직 없는 것 같다.The mulberry (Audi) is harvested when the fruit of Morus alba L., a deciduous tree belonging to the Moraceae family, is magenta, and used as a herbal medicine after drying. In oriental medicine, it is used for the treatment of dizziness, tinnitus, browning, and sogal. (Bangsusoo et al., Herbology, Younglimsa, Seoul, Korea 2000) In Japan, it controls the efficacy and wind fever of sheep blood breeze and is applied to the treatment of tonic, pain medicine, insomnia, tinnitus, dizziness, back pain, constipation, etc. Known (Namba, T., The Encyclopedia of Wakan-Yaku with Color Pictures Vol. 1 Hoikusha, Osaka, Japan, 1993). In Dongbogam, it governs Sogal, benefits the five chapters, and writes that the mulberry trees are gathered together. The loser has been reported with various vitamins, organic acids, sugars, etc., and there are no studies on active ingredients.

한국 특허등록 제 281003호에서는 모노아민 산화효소 저해 활성을 보이는 황련(Coptis japonica)의 추출물로부터 분리된 프로토베르베린 알칼로이드 화합물을 함유하는 항우울제에 대해 개시하고 있다. 그러나 상기 문헌 어디에도 상심자가 모노아민산화효소를 저해하는 활성을 갖는다는 교시나 개시된 바는 없다.Korean Patent Registration No. 281003 discloses an antidepressant containing a protoberberine alkaloid compound isolated from an extract of Coptis japonica showing monoamine oxidase inhibitory activity. However, none of the above teachings teaches or discloses that the loser has the activity of inhibiting monoamine oxidase.

이에 본 발명자들은 동물을 이용한 시험관 실험에서 상심자 메탄올 추출물이 추출물 수준에서 MAO 저해활성을 갖는 것을 확인하였으며, 생체내 실험(in vivo) 실험을 통해 체내 MAO 활성에 영향을 미치고 운동으로 변화된 체내 효소활성을 정상 수준으로 회복시키는 것을 확인하였고, 운동을 전후한 스트레스의 반응으로 일어나는 MAO 활성 변화를 조절하여 운동 능력을 향상하고 훈련효과를 높일 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.Therefore, the present inventors confirmed that in vitro experiments with animals, the methanol extract of the loser has MAO inhibitory activity at the extract level, and the enzyme activity in the body affecting the MAO activity in the body and changed to exercise through in vivo experiments. It was confirmed that the recovery to the normal level, and by adjusting the MAO activity changes occurring in response to the stress before and after exercise to confirm that the exercise ability can be improved and the training effect was completed to complete the present invention.

따라서, 본 발명의 목적은 모노아민산화효소(MAO) 저해활성을 나타내는 상심자 추출물을 유효성분으로 함유하는 모노아민산화효소 저해제 및 모노아민산화효소 관련 각종 질환의 예방 및 치료용 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide a composition for the prevention and treatment of various diseases related to monoamine oxidase inhibitors and monoamine oxidase, which contains as a active ingredient a extract of the loser showing monoamine oxidase (MAO) inhibitory activity. .

또한, 본 발명의 목적은 피로회복, 스트레스 해소 및 운동능력향상을 위한 조성물, 스포츠 식음료 및 건강기능식품을 제공하는 것이다.In addition, an object of the present invention is to provide a composition, sports food and beverages and health functional foods for fatigue recovery, stress relief and athletic performance.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 상심자(Morus alba L.) 조추출물 또는 비극성용매가용추출물을 함유하는 모노아민산화효소(MAO) 저해제를 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a monoamine oxidase (MAO) inhibitor containing a Morus alba L. crude extract or a non-polar solvent soluble extract.

또한, 본 발명은 모노아민산화효소 저해활성이 있는 상심자 조추출물 또는 비극성용매가용추출물을 함유하는 MAO 효소 관련 각종 질환의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.The present invention also provides a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of various diseases related to MAO enzymes containing crude extract or non-polar solvent soluble extract having monoamine oxidase inhibitory activity.

상기 MAO 효소 관련 각종 질환은 우울증, HIV 감염환자의 우울증, 고혈압, 편두통, 파킨슨씨병, 알쯔하이머씨병, 수면과잉증, 무언증 및 사회적 분노질환 등을 포함한다.The MAO enzyme-related diseases include depression, depression of HIV-infected patients, hypertension, migraine, Parkinson's disease, Alzheimer's disease, hypersomnia, mute and social anger.

또한, 본 발명은 모노아민산화효소 저해활성이 있는 상심자 조추출물을 함유하는 피로회복, 스트레스 해소 및 운동능력향상을 위한 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a composition for fatigue recovery, stress relief and athletic performance containing a crude extract having a monoamine oxidase inhibitory activity.

상기 조추출물은 물, 메탄올, 에탄올 등과 같은 극성용매 및 이들의 혼합용매에 가용한 추출물을 포함한다.The crude extract includes extracts available for polar solvents such as water, methanol, ethanol and the like, and mixed solvents thereof.

상기 비극성 용매 가용 추출물은 에틸아세테이트, 클로로포름, 헥산, 디클로로메탄과 같은 비극성 용매, 바람직하게는 에틸아세테이트에 가용한 추출물을 포함한다.The non-polar solvent soluble extract includes extracts soluble in non-polar solvents, preferably ethyl acetate, such as ethyl acetate, chloroform, hexane, dichloromethane.

또한 본 발명은 상심자 조추출물 또는 비극성용매가용추출물을 포함하는 항피로, 항스트레스 및 운동능력향상용 기능성 음료를 제공한다.In another aspect, the present invention provides anti-fatigue, anti-stress and exercise performance functional beverage comprising a crude crude extract or a non-polar solvent-soluble extract.

본 발명의 상심자로부터 조추출물 및 비극성용매 가용추출물을 분리하는 방법은 하기와 같다.The method of separating the crude extract and the non-polar solvent soluble extract from the loser of the present invention is as follows.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명의 상심자 추출물은, 건조된 상심자 무게(㎏)의 약 5배 내지 20배, 바람직하게는 약 10배 내지 15배의 물, 저급 알콜 또는 약 1:0.1 내지 1:10, 바람직하게는 1:0.2 내지 1:5의 혼합비(㎏/ℓ)를 갖는 이들의 혼합용매로 20 내지 100℃, 바람직하게는 50 내지 100℃ 추출온도에서 약 1시간 내지 2일, 바람직하게는 약 2시간 내지 1일 정도에서 열수추출, 냉침추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출 등의 추출방법에 의하여 1회 내지 5회, 바람직하게는 2회 내지 4회 반복하여 추출한 후, 추출물은 감압농축 또는 동결건조, 열풍건조하여 물, 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매에 따른 가용 추출물인 조추출물을 수득할 수 있다. The loser extract of the present invention is about 5 to 20 times, preferably about 10 to 15 times, water, lower alcohol or about 1: 0.1 to 1:10, preferably dried weight of loser Is a mixed solvent having a mixing ratio (kg / L) of 1: 0.2 to 1: 5 at 20 to 100 ° C, preferably 50 to 100 ° C at an extraction temperature of about 1 to 2 days, preferably about 2 hours 1 to 5 times, preferably 2 to 4 times, and extracted repeatedly by extraction methods such as hot water extraction, cold sediment extraction, ultrasonic extraction, reflux cooling extraction, and the like. Hot air drying may yield a crude extract that is a soluble extract according to water, lower alcohol or a mixed solvent thereof.

본 발명은 상기 추출공정에서 얻어지는 상심자의 조추출물을 함유하는 우울증, HIV 감염환자의 우울증, 고혈압, 편두통, 파킨슨씨병, 알쯔하이머씨병, 수면과잉증, 무언증 및 사회적 분노질환과 같은 모노아민산화효소 관련 각종 질환의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.The present invention provides various diseases related to monoamine oxidase, such as depression containing crude extract of the loser obtained in the extraction process, depression of HIV infected patients, hypertension, migraine, Parkinson's disease, Alzheimer's disease, hypersomnia, mute and social anger disease. It provides a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of.

본 발명은 상기 추출공정에서 수득된 조추출물을 포함하는 모노아민산화효소 저해제를 제공한다.The present invention provides a monoamine oxidase inhibitor comprising a crude extract obtained in the extraction process.

또한 본 발명은 상기 추출공정에서 얻어지는 조추출물을 포함하는 피로회복, 스트레스 해소 및 운동능력향상용 조성물을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a composition for fatigue recovery, stress relief and athletic performance comprising the crude extract obtained in the extraction process.

상심자의 조추출물은 시험관내 실험에서 모노아민 산화효소(MAO)를 저해하고, 상심자 조추출물을 경구투여한 랫트를 이용한 생체내 실험에서 운동 후, MAO-A 활성을 증가시키고, MAO-B 효소 활성을 저하시켜 정상수준으로 회복시키며, 혈중 LDH(lactate dehydrogenase) 효소 활성을 저하시키고 혈중 락테이트(lactate)의 함량을 저하시킴으로써 운동시 신체의 스트레스 해소, 피로회복 및 운동능력의 향상에 효과를 나타낸다.The crude extract of the loser inhibited monoamine oxidase (MAO) in in vitro experiments, and increased the MAO-A activity after exercise in the in vivo experiments with rats administered orally administered the loser crude extract, the MAO-B enzyme It lowers the activity, restores to normal levels, lowers the lactate dehydrogenase (LDH) enzyme activity and lowers the lactate content in the blood, which is effective in relieving stress, relieving fatigue and improving athletic performance during exercise. .

또한 본 발명의 비극성 용매 가용 추출물은 상기 조추출물을 물에 현탁한 후, 이를 현탁액이 약 1 내지 100배, 바람직하게는 약 1 내지 5배 부피의 극성 또는 비극성 용매를 가하여 1회 내지 10회, 바람직하게는 2회 내지 5회 분획하여 수득할 수 있다. 또한 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있다(Harborne J.B. Phytochemical methods: A guide to modern techniques of plant analysis. 3rd Ed. pp 6-7, 1998).In addition, the non-polar solvent soluble extract of the present invention is suspended once the crude extract in water, the suspension is added 1 to 10 times by adding about 1 to 100 times, preferably about 1 to 5 times the volume of a polar or non-polar solvent, Preferably it can be obtained by fractionation 2 to 5 times. It is also possible to further carry out conventional fractionation processes (Harborne JB Phytochemical methods: A guide to modern techniques of plant analysis. 3rd Ed. Pp 6-7, 1998).

본 발명은 상기 추출공정에서 얻어지는 상심자의 비극성용매가용추출물을 함유하는 우울증, HIV 감염환자의 우울증, 고혈압, 편두통, 파킨슨씨병, 알쯔하이머씨병, 수면과잉증, 무언증 및 사회적 분노질환과 같은 모노아민산화효소 관련 각종 질환의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.The present invention relates to monoamine oxidase-related enzymes such as depression, hypertension, migraine, Parkinson's disease, Alzheimer's disease, hypersomnia, mute speech and social anger disease, which contain the non-polar solvent-soluble extract of the loser obtained in the extraction process. It provides a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of various diseases.

본 발명은 상기 추출공정에서 수득된 비극성용매 가용추출물을 포함하는 모노아민산화효소 저해제를 제공한다.The present invention provides a monoamine oxidase inhibitor comprising a non-polar solvent soluble extract obtained in the extraction process.

또한, 본 발명은 상기 추출공정에서 얻어지는 상심자의 비극성용매 가용추출물들을 포함하는 운동능력향상 및 피로회복용 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a composition for improving athletic performance and fatigue, comprising a non-polar solvent soluble extract of the heartbreaker obtained in the extraction process.

또한 본 발명의 유효성분이 정제된 정제분획물은 상기 비극성 용매 가용추출물을 분획하고 농축한 후, 실리카겔 컬럼크로마토그래피 및 박층컬럼크로마토그래피(TLC)를 이용하여 분리할 수 있다.In addition, purified purified fraction of the active ingredient of the present invention can be separated by fractionating and concentrating the non-polar solvent soluble extract, using silica gel column chromatography and thin layer chromatography (TLC).

본 발명의 모노아민산화효소 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물 및 신체의 스트레스 해소, 피로회복 및 운동능력향상을 위한 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 상심자 추출물 또는 분획물을 0.5 ~ 50 중량%로 포함한다.The composition for the prevention and treatment of monoamine oxidase-related diseases of the present invention and the composition for relieving stress, recovering from fatigue and improving exercise ability of the monoamine oxidase-related diseases, based on the total weight of the composition, the extract or fractions of the loser may be 0.5 to 50% by weight. Include.

본 발명의 상심자 추출물을 포함하는 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.The composition comprising the loser extract of the present invention may further comprise suitable carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of pharmaceutical compositions.

본 발명의 추출물을 포함하는 조성물은 통상의 방법에 따른 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.The composition comprising the extract of the present invention may further comprise a suitable carrier, excipient and diluent according to conventional methods.

본 발명의 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.Carriers, excipients and diluents that may be included in the composition comprising the extract of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium Phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.

본 발명에 따른 추출물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.Compositions comprising extracts according to the invention are formulated in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols and the like, oral preparations, suppositories and sterile injectable solutions, respectively, according to conventional methods. Can be used.

본 발명의 추출물의 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 0.1 내지 1000 mg/㎏의 양을 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다. 또한 그 추출물의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.The amount of the extract of the present invention may vary depending on the age, sex, and weight of the patient, but may be administered once to several times in an amount of 0.1 to 1000 mg / kg. In addition, the dosage of the extract can be increased or decreased depending on the route of administration, the degree of disease, sex, weight, age and the like. Therefore, the above dosage does not limit the scope of the present invention in any aspect.

본 발명의 상심자의 추출물을 포함하는 조성물은 신체의 스트레스 해소, 피로회복 및 운동능력향상을 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 상심자 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 스포츠용 식음료, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강기능 식품류 등이 있다. The composition comprising the extract of the loser of the present invention can be used in a variety of drugs, foods and beverages for the body's stress relief, fatigue recovery and athletic performance. Examples of the food to which the present loser extract can be added include various foods, sports foods and beverages, beverages, gums, teas, vitamin complexes, and health functional foods.

본 발명의 상심자 추출물 자체는 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다. The loser extract itself of the present invention has almost no toxicity and side effects, so it is a drug that can be used with confidence even for prolonged administration for prophylactic purposes.

본 발명의 상기 추출물은 운동능력향상 및 피로회복을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강 식품 조성물은 전체 식품 중량의 0.01 내지 30 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 30 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다. The extract of the present invention can be added to food or beverages for the purpose of improving athletic performance and fatigue recovery. At this time, the amount of the extract in the food or beverage is generally added to the health food composition of the present invention to 0.01 to 30% by weight of the total food weight, the health beverage composition is 0.02 to 30 g based on 100 ml, preferably Can be added in a ratio of 0.3 to 1 g.

또한 본 발명은 상심자 조추출물 또는 비극성용매가용추출물을 포함하는 항피로, 항스트레스 및 운동능력향상용 기능성 음료를 제공한다.In another aspect, the present invention provides anti-fatigue, anti-stress and exercise performance functional beverage comprising a crude crude extract or a non-polar solvent-soluble extract.

본 발명의 기능성 음료는 안정성이 입증된 상심자 추출물을 포함하여 음료를 제조함으로써, 안전하고 복용이 용이하면서도 피로회복, 스트레스 해소 및 운동능력향상 등의 효과를 갖는 기능성 음료를 제공할 수 있다.Functional drink of the present invention by producing a beverage containing the heart extract extract proved to be stable, it is possible to provide a functional drink having the effect of safe and easy to take, but also effects such as fatigue recovery, stress relief and athletic performance.

본 발명의 기능성 음료는, 바람직하게는 상심자 조추출물 또는 상심자 비극성용매가용추출물 0.1 내지 10중량%, 감미제와 산미제등의 통상의 음료 첨가물 10 내지 25 중량 %, 나머지 중량 %의 물을 포함하는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 기능성 음료에서 통상적인 음료 첨가물로서는, 액상과당, 설탕, 말토덱스트린, 포도당, 구연산, 니코틴산 아미드, 판토텐산, 안식향산나트륨, 풍미제, 향미제 등이 포함될 수 있다.The functional beverage of the present invention preferably contains 0.1 to 10% by weight of crude crude extract or cored nonpolar solvent soluble extract, 10 to 25% by weight of ordinary beverage additives such as sweetener and acidulant, and the remaining weight% of water. Characterized in that. Typical beverage additives in the functional beverage of the present invention may include liquid fructose, sugar, maltodextrin, glucose, citric acid, nicotinic acid amide, pantothenic acid, sodium benzoate, flavoring agents, flavoring agents and the like.

또한, 본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.In addition, the health beverage composition of the present invention, except for containing the extract as an essential ingredient in the indicated ratio, there is no particular limitation on the liquid component and may contain various flavors or natural carbohydrates, etc. as additional ingredients, like ordinary drinks. . Examples of the above-mentioned natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose and the like; And conventional sugars such as polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As flavoring agents other than those mentioned above, natural flavoring agents (tauumatin, stevia extract (for example, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be advantageously used. The proportion of said natural carbohydrates is generally about 1-20 g, preferably about 5-12 g per 100 ml of the composition of the present invention.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.In addition to the above, the composition of the present invention includes various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavors such as synthetic flavors and natural flavors, coloring and neutralizing agents (such as cheese and chocolate), pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof. , Organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated beverages, and the like. The compositions of the present invention may also contain pulp for the production of natural fruit juices and fruit juice beverages and vegetable beverages. These components can be used independently or in combination. The proportion of such additives is not so critical but is generally selected from the range of 0 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.

본 발명은 다음의 실시예에 의거하여 더욱 상세히 설명되나, 본 발명이 이에 의해 제한되지는 않는다.The present invention is described in more detail based on the following examples, although the present invention is not limited thereto.

실시예 1. 상심자의 조추출물 제조예 1 Example 1 Preparation Example 1 of crude extract

건조한 상심자(경동시장, 대덕한의원, 서울) 1000g을 가정용 분쇄기(mixer)를 이용하여 분말로 만들고 여기에 약 8ℓ의 80% 에탄올 용액을 가하여 환류냉각하면서 100℃에서 6시간씩 3회 반복하여 가열추출하였다. 탈지면으로 여과하고 여액을 40℃ 수욕 상에서 감압 농축하여 에탄올 추출물 176.7g을 얻었고 이를 다시 동결 건조하여 건조된 분말 160g 을 얻었다. 동결 건조한 분말을 -80℃ 냉동고(deep freezer)에 보관하고, 실험시 증류수에 녹여 사용하였다.1000g of dried heartwort (Gyeongdong Market, Daedeok Clinic, Seoul) was made into powder using a home mixer, and heated to 3 times at 100 ° C for 3 hours while reflux cooling by adding 8L of 80% ethanol solution. Extracted. Filtration was performed with cotton wool and the filtrate was concentrated under reduced pressure on a 40 ° C. water bath to obtain 176.7 g of ethanol extract, which was freeze-dried again to give 160 g of dried powder. The lyophilized powder was stored in a -80 ° C. freezer (deep freezer) and dissolved in distilled water during the experiment.

실시예 2. 상심자 조추출물 제조예 2 Example 2 Crude Extract Extract

건조한 상심자(경동시장, 대덕한의원, 서울) 1000g을 정량하여 가정용 분쇄기로 1분간 마쇄하여 분말로 만들고 여기에 10ℓ의 80% 메탄올을 가하여 95℃ 수욕 상에서 환류냉각하면서 6시간씩 3회 반복하여 가열 추출하였다. 실온으로 식힌 후 여과하고 그 박을 80% 메탄올로 세척하여 여액이 10ℓ가 되게 하고 45℃ 수욕 상에서 감압 농축하여 메탄올 추출물 15g을 얻었다. 1000g of dried heart cake (Gyeongdong Market, Daedeok Medical Center, Seoul) was weighed and ground in a home grinder for 1 minute to make powder, and 10 liters of 80% methanol was added thereto, followed by heating three times for 6 hours while refluxing in a 95 ℃ water bath. Extracted. After cooling to room temperature, the mixture was filtered and washed with 80% methanol to make the filtrate 10 l, and concentrated under reduced pressure in a 45 ° C. water bath to obtain 15 g of methanol extract.

실시예 3. 상심자 클로로포름가용추출물 제조Example 3. Preparation of core chloroform soluble extract

실시예 2의 상심자 조추출물 15g 을 증류수 100 ㎖에 현탁시킨 다음, 클로로포름 100 ㎖와 혼합한 후 진탕하여, 클로로포름 불용성층(상층)과 클로로포름 가용성층(하층)으로 분획하고 클로로포름 가용부를 수집하였다. 상층(물층)과 동일한 부피의 클로로포름 용매를 상기한 방법과 동일한 방법으로 5회 반복하여 용액의 색이 옅어질 때까지 최대한으로 클로로포름층에 용해가 가능한 물질을 얻어낸 후, 대형농축기(EYELA사, 모델명 N-11, 일본)를 사용하여 클로로포름 용매를 제거한 후, 건조상태의 상심자 클로로포름 가용 추출물 5 g을 수득하였다.15 g of the crude crude extract of Example 2 was suspended in 100 ml of distilled water, and then mixed with 100 ml of chloroform, followed by shaking. The mixture was partitioned into an chloroform insoluble layer (upper layer) and a chloroform soluble layer (lower layer), and a chloroform soluble portion was collected. The same volume of chloroform solvent as the upper layer (water layer) was repeated five times in the same manner as described above to obtain a substance that can be dissolved in the chloroform layer as much as possible until the color of the solution became light, followed by a large concentrator (EYELA, model name). N-11, Japan) was used to remove the chloroform solvent, and then 5 g of dried core chloroform soluble extract was obtained.

실시예 4. 상심자 에틸아세테이트 가용추출물 제조Example 4 Preparation of Core Ethyl Acetate Soluble Extract

실시예 3의 상심자 클로로포름 가용 추출물을 제외한 상층(물층)에 에틸아세테이트 100㎖를 가한 후 진탕하여, 에틸아세테이트 불용성층(하층)과 에틸아세테이트 가용성층(상층)으로 분획하고 에틸아세테이트 가용부를 수집하였다. 하층(물층)과 동일한 부피의 에틸아세테이트 용매를 상기한 방법과 동일한 방법으로 5회 반복하여 용액의 색이 옅어질 때까지 최대한으로 에틸아세테이트층에 용해가 가능한 물질을 얻어낸 후, 대형농축기(EYELA사, 모델명 N-11, 일본)를 사용하여 에틸아세테이트 용매를 제거한 후, 건조상태의 상심자 에틸아세테이트 가용 추출물 0.5 g을 수득하였다.100 ml of ethyl acetate was added to the upper layer (water layer) except for the soluble chloroform extract of Example 3, followed by shaking. The mixture was partitioned into an ethyl acetate insoluble layer (lower layer) and an ethyl acetate soluble layer (upper layer), and the ethyl acetate soluble part was collected. . The same volume of ethyl acetate solvent as the lower layer (water layer) was repeated five times in the same manner as described above to obtain a substance that can be dissolved in the ethyl acetate layer as much as possible until the color of the solution becomes light. , Model name N-11, Japan) was used to remove the ethyl acetate solvent, and 0.5 g of dried ethyl acetate acetate soluble extract was obtained.

실시예 5. 상심자 부탄올가용추출물 및 수가용추출물 제조Example 5 Preparation of Boiler Butanol Soluble Extract and Soluble Extract

실시예 4의 상심자 에틸아세테이트 가용 추출물을 제외한 하층(물층)에 부탄올 100 ㎖를 가한 후 진탕하여, 부탄올 불용성층(하층)과 부탄올 가용성층(상층)으로 분획하고 부탄올 가용부를 수집하였다. 하층(물층)과 동일한 부피의 부탄올 용매를 상기한 방법과 동일한 방법으로 5회 반복하여 용액의 색이 옅어질 때까지 최대한으로 부탄올층에 용해가 가능한 물질을 얻어낸 후, 대형농축기(EYELA사, 모델명 N-11, 일본)를 사용하여 부탄올 용매를 제거한 후, 건조상태의 상심자 부탄올 가용 추출물 2 g 및 상심자 수가용추출물 10 g을 수득하였다.100 mL of butanol was added to the lower layer (water layer) except for the ethyl acetate soluble extract of Example 4, followed by shaking. The mixture was partitioned into a butanol insoluble layer (lower layer) and a butanol soluble layer (upper layer), and the butanol soluble portion was collected. The same volume of butanol solvent as the lower layer (water layer) was repeated five times in the same manner as described above to obtain a substance that can be dissolved in the butanol layer as much as possible until the color of the solution becomes light. Then, a large concentrator (EYELA, model name) N-11, Japan) was used to remove the butanol solvent, to obtain 2 g of dried butanol soluble extract and 10 g of aqueous soluble extract.

실시예 6. 상심자 각 용매분획의 TLC 크로마토그래피Example 6 TLC Chromatography of Each Solvent Fraction

상기 실시예 1 내지 5에서 수득한 5가지 용매 추출물을 사용하여 박층 크로마토그래피(Thin layer chromatography, TLC)를 수행하였다.Thin layer chromatography (TLC) was performed using the five solvent extracts obtained in Examples 1 to 5.

박층 크로마토그래피(TLC)의 전개용매는 클로로포름:메탄올:물(15:10:2.5)의 혼합용매를 사용하였고, UV 254nm 및 365nm에서 각각 아니스 알데히드 (anisaldehyde) 및 10% 황산용액을 사용하여 탐지하였다(도 1 및 도 2 참조). Thin layer chromatography (TLC) was used as a solvent for a mixed solvent of chloroform: methanol: water (15: 10: 2.5), and was detected using anisealdehyde and 10% sulfuric acid solution at UV and 254 nm and 365 nm, respectively. (See FIGS. 1 and 2).

TLC상에서 관측한 에틸아세테이트 가용분획은 다른 분획에 비해 비교적 복잡한 양상을 보였다. 우선 UV 탐지가 되는 성분은 적고 아니스알데히드 발색시약으로 발색한 결과, 테르페노이드(Terpenoid, 발색:blue)와 스테로이드(steroid, 발색:green) 계통의 화합물들이 주요 화합물로 존재할 것으로 판단되었다. 부탄올 가용분획의 TLC 양상은 비교적 간단하여 Rf 0.47과 0.43인 밴드가 특징적으로 진하게 겹쳐 보이고 이 밴드는 수가용분획에서도 공통으로 나타났다.The ethyl acetate soluble fraction observed on TLC showed a relatively complex pattern compared to other fractions. First of all, there were few UV-detectable components and color development with an anisealdehyde coloring reagent showed that the compounds of terpenoid (Terpenoid, blue) and steroid (green) were the main compounds. The TLC pattern of the butanol soluble fraction was relatively simple, with the bands Rf 0.47 and 0.43 characteristically thickly overlapping, and this band was also common in the aqueous fraction.

10% 황산 발색시약으로 발색한 결과, 스테로이드(발색:red) 계통 화합물들을 관측하여 에틸아세테이트 가용분획에는 Rf 0.5 이상의 UV 발색단이 없는 물질들로 구성된 특징을 보였다. 부탄올 가용분획의 TLC 양상은 비교적 간단하여 Rf 0.43 밴드가 특징적으로 진하게 보이고 Rf 0.47 밴드는 보이지 않았다. As a result of color development with 10% sulfuric acid coloring reagent, steroid (red color) compounds were observed and the ethyl acetate soluble fraction was composed of substances without UV chromophore of Rf 0.5 or higher. The TLC pattern of the butanol soluble fraction was relatively simple so that the Rf 0.43 band was characteristically dark and the Rf 0.47 band was not visible.

참고예 1. 뇌 MAO-A의 효소활성 측정Reference Example 1. Measurement of Enzyme Activity of Brain MAO-A

1-1. 효소원의 제조1-1. Preparation of Enzyme Source

랫트를 에테르(ether)를 가한 마취병에서 마취시키고 개복하여 좌심실로부터 채혈을 하여 실혈시키고 즉시 두개골을 절개하여 뇌를 적출하였다. 적출된 뇌를 0.01M PBS(phosphate buffered saline, pH 7.0)로 세척하고 습중량 1g당 9㎖의 차가운 0.25M 수크로즈(sucrose) 용액을 가하여 터렉스 디스퍼서(Turrax disperser)로 1분간 분쇄하여 균질화(homogenate) 하였다. 이 균질액을 4℃에서 700×g로 20분간 원심분리하고 그 상등액을 취하여 다시 18,000 x g로 20분간 고속 원심분리 하였다. 상등액을 버리고 펠렛을 중량 1g당 PBS 5㎖에 현탁 시켜 효소원으로 사용하였다.Rats were anesthetized in ether-doped anesthesia, opened, and blood was drawn from the left ventricle. The extracted brain was washed with 0.01 M PBS (phosphate buffered saline, pH 7.0), and homogenized by grinding for 1 minute with a Turex disperser with 9 ml of cold 0.25 M sucrose solution per 1 g of wet weight. (homogenate). The homogenate was centrifuged at 700 × g for 20 minutes at 4 ° C., and the supernatant was taken and again centrifuged at 18,000 × g for 20 minutes. The supernatant was discarded and the pellet was suspended in 5 ml of PBS per 1 g of weight to use as an enzyme source.

1-2. 효소활성측정1-2. Enzyme Activity Measurement

상기에서 제조한 효소원 0.5㎖를 시험관에 넣고 기질용액으로 1.0mM 세로토닌(세로토닌, Sigma사) 용액 0.5㎖를 가하고 37.5℃ 항온조에서 90분간 반응시켰다. 반응 후, 95℃ 수욕 상에서 3분간 가열하여 반응을 중단시킨 후 즉시 700 x g로 원심분리하고 상등액 1.0㎖를 취하여 미리 준비한 앰버라이트 칼럼(Amberlite CG-50, H+form, 0.6×4㎝, Sigma사)에 부어 넣었다. 증류수로 수지를 충분히(40㎖ 이상) 세척한 후 4 N 초산용액 3㎖를 수지에 부어 넣고, 이때 용출액을 시험관에 받아 277nm에서 흡광도를 측정하였다. 따로 반응 개시점 대신 반응 종말점에서 기질용액을 넣은 보정군을 시험군과 함께 실행하였다. 각 실험군의 대조군을 기준으로 하여 온도변화와 약물투여에 따른 효소 활성의 변화를 정해진 수식에 따라 계산하였다(유시용, 서울대학교 대학원 박사학위논문, 1988).0.5 ml of the enzyme source prepared above was placed in a test tube, and 0.5 ml of a 1.0 mM serotonin (Serotonin, Sigma) solution was added as a substrate solution, and the reaction was carried out for 90 minutes in a 37.5 ° C thermostat. After the reaction, the reaction was stopped by heating in a 95 ° C. water bath for 3 minutes, and immediately centrifuged at 700 xg, and 1.0 ml of the supernatant was prepared in advance for an Amberlite column (Amberlite CG-50, H + form, 0.6 × 4 cm, Sigma). Poured into). After sufficiently washing the resin with distilled water (40 ml or more), 3 ml of 4 N acetic acid solution was poured into the resin, and the eluate was received in a test tube and the absorbance was measured at 277 nm. Separately, the correction group with the substrate solution at the reaction end point instead of the reaction start point was performed with the test group. The change of enzyme activity according to temperature change and drug administration was calculated according to the defined formula based on the control group of each experimental group (Yoo-Yong Yoo, Ph.D. dissertation, Seoul National University, 1988).

참조예 2. 간 MAO-B의 효소활성 측정Reference Example 2 Determination of Enzyme Activity of Liver MAO-B

2-1. 효소원의 제조2-1. Preparation of Enzyme Source

랫트의 간 미토콘드리아(mitochondria) 분획을 상법에 따라 분리하여 효소원으로 사용하였다. 즉, 에테르 병에서 마취시킨 랫트를 즉시 복개하고 좌심실에서 채혈하여 실혈시킨 후 간을 적출하여 0.01M PBS(phosphate buffered saline, pH 7.0)에 씻고, 습 중량 1g당 0.25M 수크로즈 용액 5㎖를 가하여 터렉스 디스퍼서 (Turrax disperser)로 1분간 분쇄하여 균질화 하였다. 이 균질액을 즉시 4℃에서 700×g로 20분간 원심분리 하였다. 상등액을 취하여 다시 18,000×g에서 20분 고속원심분리하고 상등액을 버리고 가라앉은 펠렛을 PBS 5㎖에 현탁 시켜 효소원으로 사용하였다.Liver mitochondria fractions of rats were separated according to the conventional method and used as an enzyme source. In other words, rats anesthetized in ether bottles were immediately subjected to blood collection in the left ventricle, blood was drawn, livers were extracted, washed in 0.01 M PBS (phosphate buffered saline, pH 7.0), and 5 ml of 0.25 M sucrose solution was added per 1 g of wet weight. Homogenized by grinding for 1 minute with a Turrax disperser. This homogenate was immediately centrifuged at 700 x g for 20 minutes at 4 ° C. The supernatant was taken and again centrifuged at 18,000 × g for 20 minutes. The supernatant was discarded, and the pellet was suspended and suspended in 5 ml of PBS to use as an enzyme source.

2-2. 효소활성측정2-2. Enzyme Activity Measurement

맥웬 등의 방법(McEwen, C. M., et al., J. Lab. Clin. Med., 62, pp766-776, 1963)에 준하였다. 즉, 효소원 0.5㎖와 기질용액으로 4.0mM 벤질아민·HCl (benzylamine·HCl, Sigma사) 용액 0.5㎖를 시험관에 넣고 37.5℃ 항온조에서 90분간 계속 반응시켰다. 반응을 중지시키기 위하여 60% 과염소산(perchloric acid) 0.2㎖씩을 가하고 동시에 시클로헥산(cyclohexane) 4㎖를 가하여 진탕시킨 후 700×g로 20분간 원심분리 하여 시클로헥산층을 취하였다. 이 시클로헥산층을 242 nm에서 흡광도를 측정하였다. 따로 MAO-A에서와 마찬가지로 보정군을 시험군과 함께 실행하였다. 각 실험군의 대조군을 기준으로 하여 온도변화와 약물투여에 따른 효소 활성의 변화를 정해진 수식에 따라 계산하였다.McWen et al. (McEwen, CM, et al., J. Lab. Clin. Med. , 62 , pp766-776, 1963). That is, 0.5 ml of 4.0 mM benzylamine-HCl (benzylamine-HCl, Sigma) solution was added to the test tube with 0.5 ml of enzyme source and substrate solution, and the reaction was continued for 90 minutes in a 37.5 ° C thermostat. To stop the reaction, 0.2 ml of 60% perchloric acid was added each time, 4 ml of cyclohexane was added thereto, followed by shaking, followed by centrifugation at 700 × g for 20 minutes to obtain a cyclohexane layer. The absorbance of this cyclohexane layer was measured at 242 nm. Separately, the calibration group was run with the test group as in MAO-A. Based on the control group of each experimental group, the change in enzyme activity according to the temperature change and drug administration was calculated according to a prescribed formula.

참조예 3. 혈중 LDH의 효소활성 측정Reference Example 3 Determination of Enzyme Activity of Blood LDH

혈중 LDH 효소활성은 시그마사에서 판매하는 어세이 키트(assay kit,Sigma diagnostics®Lactate dehydrogenase(LD-L), Procedure No. 228-UV)를 사용하여 측정하였다. 실험동물로부터 채혈한 혈액을 즉시 3000 rpm에서 15분 원심 분리하여 혈장을 취하여 -80℃ 냉동고에 보관한 것을 냉장 온도에서 해동한 후 1 ㎖의 시약이 담긴 30℃ 큐벳에 50㎕를 가하고 조심스럽게 섞어준다. 일정한 온도가 유지되는 챔버가 장착된 스펙트로포토메터(spectrophotometer)에서 30초 후에 340 nm에서의 흡광도를 측정하고(초기 흡광도) 정확히 60초 후에 흡광도를 측정한다. 60초 후에 측정한 흡광도를 최종 흡광도로 한다. 측정된 최종 흡광도에서 초기흡광도를 빼준 값 (ΔA/분)을 분당 변화된 흡광도로 계산하고 효소활성은 다음의 수학식 1로부터 얻었다. LDH 1 단위(unit)는 효소활성 측정 조건에서 분당 NADH 1몰(mole)을 생성하도록 촉매 하는 효소의 활성으로 정의하였다. Serum LDH enzyme activity was measured using an assay kit sold by Sigma (Sigma diagnostics® Lactate dehydrogenase (LD-L), Procedure No. 228-UV). Immediately centrifuge the blood sampled from the experimental animal at 3000 rpm for 15 minutes, take the plasma, thaw it in a freezer at 50 ° F, add 50 μl to a 30 ° C cuvette containing 1 ml of reagent, and mix carefully. give. The absorbance at 340 nm is measured after 30 seconds (initial absorbance) on a spectrophotometer equipped with a chamber that maintains a constant temperature, and the absorbance is measured exactly 60 seconds later. The absorbance measured after 60 seconds is taken as the final absorbance. The value obtained by subtracting the initial absorbance (ΔA / min) from the measured final absorbance was calculated as the absorbance changed per minute and the enzyme activity was obtained from the following equation (1). One unit of LDH was defined as the activity of an enzyme that catalyzes the production of one mole of NADH per minute under enzyme activity measurement conditions.

ΔA/분 = 340 nm에서의 분당 흡광도의 변화Change in absorbance per minute at ΔA / min = 340 nm

TV = 전체 반응 혼합액 부피 (1.05 ㎖)     TV = total reaction mixture volume (1.05 ml)

SV = 시료 부피 (0.05 ㎖)     SV = sample volume (0.05 ml)

LP = 빛의 길이(light path, 1 ㎝)     LP = light path (1 cm)

참조예 4. 혈중 락테이트 함량 측정Reference Example 4. Determination of Blood Lactate Content

혈중 락테이트 함량은 시그마사의 키트 시약(Sigma kit reagent, Sigma diagnostics®Lactate (Procedure No. 735))을 이용하여 측정하였다. 실험동물로부터 채혈한 혈액을 즉시 3000 rpm에서 15분 원심 분리하여 혈장을 취하여 -80℃ 냉동고에 보관한 것을 냉장 온도에서 해동한 후, 1 ㎖의 시약이 담긴 일정하게 30℃로 유지되는 큐벳에 10㎕를 가하고 10분 동안 반응시킨다. 혈장 샘플 대신 락테이트 표준품 용액을 농도별로 가하여 같은 방법으로 측정한 표준품과 함께 블랭크(blank)를 기준으로 하는 540 nm에서의 흡광도를 측정한다. 락테이트 표준품 용액을 농도별로 가하여 캘리브래이션 커브(calibration curve)를 작성하였으며 다음의 수학식 2를 이용하여 혈액 중의 락테이트 함량을 계산하였다.Blood lactate content was measured using Sigma kit reagent, Sigma diagnostics®Lactate (Procedure No. 735). The blood collected from the experimental animals was immediately centrifuged at 3000 rpm for 15 minutes, and the plasma was taken and stored in a freezer at -80 ° C. After thawing at the refrigeration temperature, the sample was kept at a constant temperature of 30 ° C. containing 1 ml of reagent. Add μl and react for 10 minutes. Lactate standard solution is added instead of the plasma sample by concentration to measure the absorbance at 540 nm on a blank basis with the standard measured in the same manner. A calibration curve was prepared by adding lactate standard solutions by concentration, and lactate content in blood was calculated using Equation 2 below.

참조예 5. 통계처리Reference Example 5. Statistics Processing

실험결과는 SAS 통계프로그램을 이용하였으며(SAS User's Guide, Statistics, 6th edition, SAS Institute Inc., Cary, NC, U.S.A., 1988), 스튜던트 t-테스트(Student's t-test)를 사용하여 유의차 검정을 하였다. 모든 통계는 95% 수준에서 유의성을 검정하였다.Experimental results were evaluated using SAS statistical program (SAS User's Guide, Statistics, 6th edition, SAS Institute Inc., Cary, NC, USA, 1988), and the Student's t-test was used to test the significance difference. It was. All statistics tested significance at the 95% level.

참고예 6. 단백질 정량Reference Example 6. Protein Quantitation

단백질 함량은 우혈청알부민(bovine serum albumin)을 표준물질로 사용하고, 브래드포드 방법(Bradford's method)를 이용하여 측정하였다(Daniel, M.B and Stuart, J.E., Protein Methods. Wiley-Liss, N.Y. U.S.A., 1990).Protein content was measured using bovine serum albumin as a standard and Bradford's method (Daniel, MB and Stuart, JE, Protein Methods. Wiley-Liss, NYUSA, 1990). .

실험예 1. 상심자 추출물의 시험관내 MAO 저해활성Experimental Example 1. In vitro MAO inhibitory activity

상심자의 각 용매별 추출물이 시험관내 MAO-A 및 MAO-B의 활성에 미치는 영향을 알아보았다.The effect of extract of each solvent of the heartworm on the activity of MAO-A and MAO-B in vitro was investigated.

실시예 2 내지 5의 각 추출물들을 10㎎/㎖ 농도의 용액이 되도록 증류수로 녹이고, 이 액을 원액으로 1(10㎎/㎖), 1/2(5㎎/㎖), 1/4(2.5㎎/㎖) 희석액을 검액으로 사용하였다. 효소활성 측정은 참조예 1 및 2의 방법에 따라 제조된 뇌 MAO-A 및 간 MAO-B의 효소원을 사용하여 측정하였다. Each extract of Examples 2 to 5 was dissolved in distilled water to a solution of 10 mg / ml concentration, and this solution was used as a stock solution (1 (10 mg / ml), 1/2 (5 mg / ml), 1/4 (2.5). Mg / ml) diluent was used as the sample solution. Enzyme activity was measured using enzyme sources of brain MAO-A and liver MAO-B prepared according to the methods of Reference Examples 1 and 2.

각 분획의 활성 측정 결과 얻어진 IC50값과 전체 활성도(total activity) 및 특이활성도(specific activity)를 계산하여 표 1에 요약하였다.IC 50 values, total activity and specific activity obtained from the activity measurement of each fraction were calculated and summarized in Table 1.

실시예 2의 상심자 메탄올 추출물은 시험관내에서 MAO-A 및 MAO-B의 효소활성을 현저히 저해하는 것으로 나타났다. 메탄올 추출물의 MAO-A 및 MAO-B에 대한 IC50 값은 각각 6.8㎎/㎖과 3.8㎎/㎖이었다.The methanol extract of Example 2 was found to significantly inhibit the enzymatic activity of MAO-A and MAO-B in vitro. The IC 50 values for MAO-A and MAO-B of methanol extracts were 6.8 mg / ml and 3.8 mg / ml, respectively.

상심자는 비타민과 유기산이 풍부한 열매로서 생리활성을 나타내는 것으로 알려진 성분에 대한 연구가 지금까지 보고 된 바가 없으므로 활성 성분에 대한 구체적인 성분연구를 시도할 목적으로 상법에 따라 용매 추출한 각 추출물들을 대상으로 효소활성에 대한 저해효과를 측정하였다. As a fruit rich in vitamins and organic acids, research on ingredients known to exhibit physiological activity has not been reported until now, so the enzyme activity of each extract extracted from solvents according to the conventional method is aimed to study specific ingredients for active ingredients. Inhibitory effect on was measured.

에틸아세테이트가용추출물에서 가장 강력한 MAO-A 및 MAO-B에 대한 저해활성이 확인되었으며 에틸아세테이트가용추출물의 MAO-A 및 MAO-B에 대한 IC50 값은 각각 0.90㎎/㎖이었다.The most potent inhibitory activity against MAO-A and MAO-B in ethyl acetate soluble extract was identified, and the IC 50 values for MAO-A and MAO-B of ethyl acetate soluble extract were 0.90 mg / ml, respectively.

클로로포름 가용추출물의 경우 낮은 농도에서 MAO-A에 대한 저해활성을 나타내 IC50 값이 1.1㎎/㎖으로 나타났으나 고농도에서는 오히려 활성이 저하되는 것으로 나타났으며 MAO-B에 대한 저해활성은 나타나지 않아 상심자 클로로포름 가용추출물에 약하게 독성을 나타내는 성분이 함유되어 있을 것으로 추정하였다.Soluble extract of chloroform showed an inhibitory activity against MAO-A at low concentrations, but the IC 50 value was 1.1mg / ml, but the activity was lowered at high concentrations and did not show inhibitory activity against MAO-B. It was estimated that the chloroform soluble extract contained weakly toxic components.

부탄올 가용추출물은 MAO-A 및 MAO-B에 대해 비교적 강한 저해활성을 나타냈으며 각각의 IC50 값은 1.1㎎/㎖과 1.9㎎/㎖이었다.Butanol soluble extract showed relatively strong inhibitory activity against MAO-A and MAO-B, with IC 50 values of 1.1 mg / ml and 1.9 mg / ml, respectively.

물 가용추출물의 경우는 MAO-A와 MAO-B에 대해 약하게 저해활성을 나타내는 것으로 확인 되었다. Water soluble extracts were found to exhibit weak inhibitory activity against MAO-A and MAO-B.

상심자 용매별 추출물의 MAO 효소 억제활성MAO Enzyme Inhibitory Activity of Extracts from Different Solvents 추출물extract MAO AMAO A MAO BMAO B IC50 (mg/㎖)IC 50 (mg / ml) 전체 활성도(unit)*Overall activity * 특이 활성도(unit/g)Specific activity (unit / g) IC50 (mg/㎖)IC 50 (mg / ml) 전체 활성도(unit)Overall activity (unit) 특이 활성도(unit/g)Specific activity (unit / g) 80% 메탄올80% methanol 6.806.80 0.52×105 0.52 × 10 5 0.15×103 0.15 × 10 3 3.803.80 0.93×105 0.93 × 10 5 0.26×103 0.26 × 10 3 클로로포름chloroform 1.101.10 0.17×105 0.17 × 10 5 0.92×103 0.92 × 10 3 - - -- -- 에틸아세테이트Ethyl acetate 0.90 0.90 0.12×105 0.12 × 10 5 0.11×103 0.11 × 10 3 0.900.90 0.12×105 0.12 × 10 5 0.11×104 0.11 × 10 4 부탄올Butanol 1.101.10 0.79×105 0.79 × 10 5 0.91×103 0.91 × 10 3 1.901.90 0.45×105 0.45 × 10 5 0.52×103 0.52 × 10 3 물water 6.006.00 0.45×105 0.45 × 10 5 0.17×103 0.17 × 10 3 5.405.40 0.49×105 0.49 × 10 5 0.18×103 0.18 × 10 3 * 1 unit는 MAO 활성에 대해 50% 억제를 나타내는 시료의 양으로 정의한다.* 1 unit is defined as the amount of sample that shows 50% inhibition of MAO activity.

실험예 2. 상심자 메탄올 추출물이 체내 MAO 활성에 미치는 영향 : 시료의 경구 투여 Experimental Example 2. Effect of lettuce extract on MAO activity in body: Oral administration of sample

2-1. 실험동물 준비 및 상심자 추출물 경구투여2-1. Preparation of experimental animals and oral administration of lettuce extract

5주령의 스프라구 도올리(Sprague Dawley, SD)계 웅성 흰쥐를 (주)바이오제노믹스사에서 공급받아 온도 23±3℃, 습도 50±10%, 12시간 주기로 조명을 조절하는 동물 사육실에서 일반 고형 사료와 물을 자유롭게 공급하면서 2~4주간 적응시킨 후 실험에 이용하였다. Sprague Dawley (SD) male rats, 5 weeks of age, are supplied by Biogenomes Co., Ltd. Adapted for 2-4 weeks with free feeding of feed and water, it was used for the experiment.

SD계 랫트 6마리를 한 군으로 하여 12시간 전에 절식시킨 동물에게 상심자 추출물을 경구투여하고 랫트의 뇌와 간의 MAO-A 및 MAO-B의 활성 변화를 측정하였다. 실시예 1의 동결 건조한 상심자 조추출물 10㎎을 증류수 1㎖에 녹이고 이 액을 실험 12시간 내지 하루 전에 절식시킨 동물에게 전날 오후와 실험 당일 2시간 전에 2회에 걸쳐 4㎖씩 경구투여하고, 2시간 경과한 후 희생시켰으며, 대조군에는 같은 조건으로 증류수 4㎖씩을 경구투여 하였다. 상심자 투여량은 시료 건조 중량으로 동물 체중 당 0.3g/㎏되는 양으로 사람 하루 용량 18-20g/60㎏에 해당하는 양이다.Six rats of SD rats were treated orally with the lettuce extract to animals fasted 12 hours ago, and the activity changes of MAO-A and MAO-B in the brain and liver of rats were measured. 10 mg of the lyophilized crude extract of Example 1 was dissolved in 1 ml of distilled water, and the solution was fasted orally to the animals fasted 12 hours to one day before the experiment 2 times 4 ml two times before the afternoon and the day before the experiment. After 2 hours, sacrifice was performed, and 4 ml of distilled water was orally administered to the control group under the same conditions. The dosing dose is an amount equivalent to a human daily dose of 18-20 g / 60 kg in an amount of 0.3 g / kg per animal weight in dry sample weight.

1-2. 상심자 경구투여에 의한 랫트의 뇌 MAO-A와 간 MAO-B의 효소활성 변화1-2. Changes of Enzyme Activity of Brain MAO-A and Liver MAO-B in Rats by Oral Administration

대조군 및 본 발명의 상심자 투여군에서 뇌와 간을 적출하여 참조예 1 및 2의 방법을 따라 모노아민산화효소(MAO-A 및 MAO-B)를 준비하고, MAO-A 및 MAO-B의 효소활성을 측정하였다.Brain and liver were extracted from the control group and the loser administration group of the present invention to prepare monoamine oxidases (MAO-A and MAO-B) according to the methods of Reference Examples 1 and 2, and the enzymes of MAO-A and MAO-B. Activity was measured.

도 3의 결과와 같이, 상심자 추출물 대신 증류수를 투여한 대조군의 효소활성을 기준으로 비교해 보면 통계적 유의차이는 없지만, MAO-A는 상심자 추출물에 의해서 효소활성이 증가되는 것으로 나타났으며, MAO-B는 효소활성이 감소하는 경향을 나타냈다. As shown in the results of Figure 3, when compared with the enzyme activity of the control group administered distilled water instead of the loser extract, there is no statistically significant difference, MAO-A was found to increase the enzyme activity by the loser extract, MAO -B showed a tendency to decrease enzymatic activity.

실험예 3. 트래드밀 운동 및 수영에 의한 랫트의 MAO 활성, LDH 활성 및 락테이트 함량 변화 측정Experimental Example 3 Measurement of MAO Activity, LDH Activity and Lactate Content Changes of Rats by Treadmill Exercise and Swimming

3-1. 실험동물용 운동장치3-1. Exercise device for laboratory animals

실험용 운동장치로는 속도와 시간을 임의로 조절할 수 있는 랫트 한 마리용 트레드밀(treadmill)을 특수 제작하여(정도산업) 사용하였으며 수영의 경우 지름 40㎝, 높이 50㎝의 수조를 이용하여 수온을 30℃로 유지하면서 한 마리씩 따로 강제 수영을 하도록 하였다.As an experimental exercise device, a treadmill for a single rat that can arbitrarily adjust the speed and time was used (Jeong Ind.). For swimming, the water temperature is 30 ℃ using a 40cm diameter and 50cm height tank. Forced to swim one by one while maintaining a separate.

3-2. 실험동물3-2. Laboratory animals

5주령의 스프라그 도올리(Sprague Dawley, SD)계 웅성 흰쥐를 (주)바이오제노믹스사에서 공급받아 온도 23±3℃, 습도 50±10%, 12시간 주기로 조명을 조절하는 동물 사육실에서 일반 고형 사료와 물을 자유롭게 공급하면서 2~4주간 적응시킨 후 실험에 이용하였다. Sprague Dawley (SD) male rats, 5 weeks of age, are supplied from BIOGENIOMICS Co., Ltd., at a temperature of 23 ± 3 ° C, 50 ± 10% of humidity, and controlled for 12 hours. Adapted for 2-4 weeks with free feeding of feed and water, it was used for the experiment.

3-3. 실험동물의 운동3-3. Experimental Animal Movement

a. 예비운동 - 본 운동을 시작하기 일주일 전 미리 동물 사육실에서 2주간 적응시킨 동물을 대상으로 5m/5분을 시작으로 매일 운동속도와 시간을 증가시키면서 트레드밀 예비운동을 하였으며 최종일의 운동조건은 10m/8분이었다. 수영 예비운동은 30℃의 수조에서 매일 3분씩 강제 수영을 하도록 하였으며 최종일까지 운동조건의 변동은 없었다. 예비운동 중 운동능력이 현저히 낮은 동물은 제외시키고 평균 이상의 운동 능력을 보인 동물만을 본 실험을 위한 동물로 선정하였다. a. Preliminary Exercise -Treadmill preliminary exercise was performed every day starting from 5m / 5 minutes for the animals adapted for 2 weeks in the animal breeding room one week before the start of the exercise, increasing the speed and time of the day. It was minutes. The preliminary swimming exercise was forced to swim for 3 minutes every day in a 30 ℃ water bath, and there was no change in exercise conditions until the last day. Animals with significantly lower motor abilities during preliminary exercise were excluded, and only animals showing above-average motor abilities were selected for the experiment.

b. 본 운동 - 일주일간 예비운동을 거쳐 선정된 동물을 5그룹으로 나누어 2 그룹의 동물은 트레드밀 운동 (Tm, n=6, 10m/10분), (Th, 15m/10분), 그룹으로 2 그룹은 수영 운동(Sm, n=6, 3분), (Sh, 5분)그룹으로 분류하고 나머지 한 그룹은 대조군(n=6) 으로 분류하였다. 트레드밀 운동 그룹은 매일 정해진 속도의 런닝머신(running machine)에서 10분씩 운동을 하였으며, 수영 그룹은 30℃의 수조에서 각각 3분 혹은 5분씩 강제로 수영을 하게 하였다. b. Main Movement -After a week of preliminary exercise, the selected animals were divided into 5 groups, and the 2 groups animals were treadmill exercises (Tm, n = 6, 10m / 10 minutes), (Th, 15m / 10 minutes), and 2 groups. Were classified into swimming exercise (Sm, n = 6, 3 minutes), (Sh, 5 minutes) group, and the other group was classified as control group (n = 6). The treadmill exercise group exercised for 10 minutes on a running machine at a fixed speed every day, and the swimming group was forced to swim for 3 or 5 minutes in a 30 ° C water bath, respectively.

3-4. 운동에 의한 랫트 MAO의 활성 변화 측정3-4. Measurement of activity change in rat MAO by exercise

상기와 같이 일반 실험실 조건에서 적응시킨 SD계 랫트 6 마리를 한 군으로 하여 일주일 동안 예비운동을 통해 운동에 적응시키고 그룹을 나누어 다시 일주일 동안 본 운동을 시킨 후, 운동을 하지 않은 그룹을 대조군으로 운동 직후(0분), 운동 후 5분(5분), 30분 후(30분), 1시간 후(60분)에 각 동물의 뇌와 간에서 각각 MAO-A와 MAO-B의 활성 변화를 측정하였다. Six rats adapted to the general laboratory conditions as described above were adapted to exercise through a preliminary exercise for one week and divided into groups to perform the main exercise for another week, and then the non-exercised group was exercised as a control group. Immediately (0 minutes), 5 minutes (5 minutes), 30 minutes (30 minutes) and 1 hour (60 minutes) after exercise, the changes in the activity of MAO-A and MAO-B in the brain and liver of each animal Measured.

a. 트레드밀 운동을 한 랫트의 뇌 MAO-A의 효소활성 변화 a. Changes in Enzyme Activity of Brain MAO-A in Treadmill Exercise Rats

상기와 같이 트레드밀 운동을 한 그룹에 속하는 랫트의 뇌에서 MAO-A의 활성 변화를 측정한 결과는 도 4와 같다. As described above, the result of measuring the change in activity of MAO-A in the brain of rats belonging to the treadmill exercise group is shown in FIG.

도 4에서 보는 바와 같이 운동을 한 후 동물의 뇌 MAO-A 효소활성은 운동 직후부터 운동을 하지 않은 동물에 비해 현저히 낮아지는 것으로 확인되었다. 이 결과는 한의학의 기미론을 체내 MAO 활성의 변화로 설명하려는 시도로 행해진 열성 병증모델 운동시의 MAO-A의 활성 변화와 일치하는 결과이므로, 동물이 신체적인 스트레스에 노출되었을 때 뇌에서 MAO-A의 활성이 일정 기간동안 감소하는 것을 확인할 수 있는 결과이다. 이는 또한 운동을 전후한 스트레스에 대한 반응으로 신경전달물질인 세로토닌의 농도가 급속히 변화하며 강한 신체 훈련을 시킨 동물의 뇌 조직에서 세로토닌의 농도와 세로토닌 모듈린 조직의 농도가 증가하며 이 기전에 따라 다양한 운동처방이 가능하다는 사실을 MAO 활성의 변화로서 설명할 수 있는 결과이기도 하다. As shown in FIG. 4, the brain MAO-A enzyme activity of the animals after exercise was found to be significantly lower than that of animals that did not exercise immediately after exercise. This result is consistent with the change in the activity of MAO-A during exercise in recessive model attempts to explain the clinic of oriental medicine as a change in the body's MAO activity. The result is that the activity of A decreases over a period of time. In addition, the concentration of serotonin, a neurotransmitter, changes rapidly in response to stress before and after exercise, and the concentration of serotonin and serotonin-modulin tissue increases in brain tissues of animals with strong physical training. The fact that exercise prescription is possible can be explained by the change of MAO activity.

한편 트레드밀 운동 속도를 10m/분과 15m/분으로 두 그룹으로 나누어 실험을 진행하였는데 운동을 하지 않은 그룹과는 95% 수준에서 통계적인 유의차를 보이는 반면 운동 속도를 달리한 두 그룹 간의 유의적인 차이는 발견할 수 없었다.On the other hand, the experiment was conducted by dividing the treadmill exercise speed into two groups of 10m / min and 15m / min, and there was a statistically significant difference at 95% compared to the group without exercise, while the significant difference between the two groups I couldn't find it.

b. 트레드밀 운동을 한 랫트의 간 MAO-B의 효소활성 변화 b. Changes of Enzyme Activity of Liver MAO-B in Rats Treadmilled

트레드밀 운동 후 동물의 간에서 측정한 MAO-B의 활성변화를 도 5에 나타냈다. 운동을 한 후 동물의 간 MAO-B 효소활성은 운동 직후부터 운동을 하지 않은 동물에 비해 현저히 증가되는 것으로 확인되었다. 이 결과는 한의학의 기미론을 체내 MAO 활성의 변화로 설명해 보려는 시도로 행해진 열성 병증모델 운동 시의 MAO-B의 활성 변화를 관찰하는 연구 결과에서도 발견된 사실이며 MAO-A와는 달리 동물이 신체적인 스트레스에 노출되었을 때 간에서 MAO-B의 활성은 일정 기간동안 증가된 상태를 유지하는 것을 확인 할 수 있었다. 한편 트레드밀 운동 속도를 10m/분과 15m/분으로 두 그룹으로 나누어 실험을 진행하였는데 MAO-A와는 달리 증가된 상태를 유지하는 경향은 같았지만 10m/분의 속도로 달렸던 그룹에 비해 15m/분의 속도로 달렸던 그룹의 효소활성이 현저히 증가하였다. 두 그룹 간에 이러한 유의적인 차이가 나타나는 것으로 보아 운동의 강도에 따라 더욱 민감한 변화를 나타내는 효소 타입은 MAO-B인 것을 알 수 있었다.The activity change of MAO-B measured in the liver of the animal after the treadmill exercise is shown in FIG. After exercise, hepatic MAO-B enzyme activity was found to be significantly increased compared to non-exercise animals immediately after exercise. These findings were also found in the study of observing changes in MAO-B activity during the exercise of febrile conditions in an attempt to explain the traditional theory of oriental medicine as a change in the body's MAO activity. When exposed to stress, MAO-B activity in the liver was found to remain elevated for a period of time. On the other hand, the experiment was carried out by dividing the treadmill movement speed into two groups of 10m / min and 15m / min. Unlike MAO-A, the treadmill movement speed was 15m / min. The enzymatic activity of the group that was run significantly increased. This significant difference between the two groups suggests that MAO-B is the type of enzyme that is more sensitive to the intensity of exercise.

c. 수영운동한 랫트의 뇌 MAO-A의 효소활성 변화c. Changes in Enzyme Activity of Brain MAO-A in Rats Swimming

상기와 같이 수영으로 운동을 시킨 그룹의 랫트의 뇌에서 MAO-A의 활성 변화를 측정한 결과는 도 6과 같다. As described above, the result of measuring the change in the activity of MAO-A in the brain of the rats exercised by swimming as described above is shown in FIG. 6.

도 6에서 보는 바와 같이 운동을 한 후 동물의 뇌 MAO-A 효소활성은 운동 직후부터 운동을 하지 않은 동물에 비해 현저히 낮아지는 것으로 확인되었다. 이 결과는 트레드밀 운동 시보다 훨씬 급격한 변화양상을 보임으로서 동물이 신체적인 스트레스에 노출되었을 때 뇌에서 MAO-A의 활성의 변화 양상을 관찰할 수 있는 좋은 보기가 될 것으로 생각한다. 이는 또한 운동을 전후한 스트레스에 대한 반응으로 신경전달물질인 세로토닌의 농도가 급속히 변화하며 강한 신체 훈련을 시킨 동물의 뇌 조직에서 세로토닌의 농도와 세로토닌 모듈린 조직 의 농도가 증가하며 이 기전에 따라 다양한 운동처방이 가능하다는 사실을 MAO 활성의 변화로서 설명할 수 있는 결과이기도 하다. 한편 수영을 하는 시간을 3분과 5분으로 달리하여 두 그룹으로 나누어 실험을 진행하였는데 3분 동안 수영을 한 그룹이 수영을 하지 않은 그룹과 95% 수준에서 통계적 유의차를 보이며 활성 변화를 나타낸 반면 5분 동안 수영한 그룹의 경우에는 대조그룹과 큰 차이를 보이지 않는 결과를 나타내, 이후 실험에서는 3분 동안 수영하는 그룹을 대조그룹으로 하여 실험을 진행하면서 효소활성 변화를 다시 확인하였다.As shown in FIG. 6, the brain MAO-A enzyme activity of the animals after exercise was found to be significantly lower than that of animals that did not exercise immediately after exercise. This result shows a much more rapid change than the treadmill exercise, and it is a good example to observe the change of MAO-A activity in the brain when the animal is exposed to physical stress. In addition, the concentration of serotonin, a neurotransmitter, changes rapidly in response to stress before and after exercise, and the concentration of serotonin and serotonin modulatory tissue increases in brain tissues of animals with strong physical training. The fact that exercise prescription is possible can be explained by the change of MAO activity. On the other hand, the experiment was divided into two groups with 3 minutes and 5 minutes of swimming time, and the group that had been swimming for 3 minutes showed a statistically significant difference at 95% level compared to the group that did not swim, while the change in activity was 5 In the case of swimming for a minute, the group showed no significant difference with the control group, and in the subsequent experiment, the change of enzyme activity was confirmed again while the experiment was performed using the swimming group for 3 minutes as a control group.

d. 수영운동한 랫트의 간 MAO-B의 효소활성 변화 d. Changes of Enzyme Activity of Liver MAO-B in Swimmers

수영 후 랫트의 간에서 측정한 MAO-B의 활성변화를 도 7에 나타냈다. The activity change of MAO-B measured in liver of rat after swimming is shown in FIG. 7.

수영 운동을 한 후 동물의 간 MAO-B 효소활성은 운동 직후부터 운동을 하지 않은 동물에 비해 현저히 증가되는 것으로 확인되었다. 이 결과는 트레드밀 운동 후의 효소활성 변화와 일치하는 경향을 보이며 변화 양상은 MAO-A 같은 곡선을 나타내는 것으로 확인되었다. MAO-A와는 달리 동물이 신체적인 스트레스에 노출되었을 때 간에서 MAO-B의 활성은 운동 시간에 따른 변화가 관찰되었으며 세 그룹 간에 통계적인 유의차가 발견되었다. After swimming exercise, hepatic MAO-B enzyme activity of the animals was found to be significantly increased compared to the animals that did not exercise immediately after exercise. This result shows a tendency to coincide with the change of enzyme activity after treadmill exercise, and the change pattern shows MAO-A-like curve. Unlike MAO-A, when the animal was exposed to physical stress, the activity of MAO-B in the liver changed with exercise time and statistically significant differences were found among the three groups.

3-5. 운동에 의한 랫트의 혈중 LDH 활성 및 락테이트 함량 변화 측정3-5. Measurement of LDH Activity and Lactate Content in Rats by Exercise

일반 실험실 조건에서 적응시킨 SD계 랫트 6 마리를 한 군으로 하여 일주일 동안 예비운동을 통해 운동에 적응시키고 그룹을 나누어 다시 일주일 동안 본 운동을 시킨 후 운동을 하지 않은 그룹을 대조군으로 운동 직후(0분), 운동 후 5분(5분), 30분 후(30분), 1시간 후(60분)에 각 동물에서 채혈한 혈액을 3000rpm에서 15분 원심 분리하여 얻은 혈장을 -80℃ 냉동고에 보관하였다가 혈중 LDH 활성의 변화와 락테이트 함량의 변화를 측정하였다.Six SD rats adapted under normal laboratory conditions were used as a group to adapt to exercise through preliminary exercise for one week, then divided into groups for another week, and then the non-executed group was immediately used as a control group (0 min. 5 minutes (5 minutes), 30 minutes (30 minutes), and 1 hour (60 minutes) after exercise, the blood obtained from each animal was centrifuged at 3000 rpm for 15 minutes and stored in a -80 ° C freezer. Changes in blood LDH activity and lactate content were measured.

a. 트레드밀 운동을 한 랫트의 혈중 LDH 효소활성 변화a. Changes of LDH Enzyme Activity in Blood of Treadmill Exercise Rats

트레드밀 운동 후 동물의 혈액에서 측정한 LDH의 활성변화를 도 8에 나타냈다. 운동을 한 후 동물의 혈중 LDH 효소활성은 운동 직후부터 운동을 하지 않은 동물에 비해 현저히 증가되는 것으로 확인되었다. 이 결과는 간 MAO-B의 변화양상과 같은 경향을 갖는 것으로 나타난다는 흥미로운 사실을 알게 되었다. LDH는 동물체 내에서 락테이트를 분해하거나 합성하는 가역적 활성을 갖는 효소로서 무산소 운동을 할 때 간으로부터 락테이트를 분해하여 에너지 대사전구 물질인 피루브산(pyruvate)을 생성하면서 동물체가 사용하는 에너지 형태 중 하나인 NADH를 생산하는 효소이다. 혈액 중에서도 LDH는 글루코스 부족 시 락테이트를 분해하여 에너지를 생산하는 기능을 나타내지만 운동 중 근육에서 LDH는 락테이트를 합성함으로서 무산소 운동 중 근육 내의 락테이트 농도를 높여 근육의 피로를 알리는 지표로 알려져 있다. 운동 속도를 10m/분과 15m/분으로 두 그룹으로 나누어 운동했을 때 트레드밀 운동 후 동물의 혈액에서 측정한 LDH 효소활성은 운동을 하지 않은 동물에 비해 현저히 증가하였으며 운동의 강도에 따른 변화는 크지 않았으나 두 그룹 모두 약 한 시간 동안 증가된 상태를 유지하고 있는 것으로 나타났다.8 shows changes in the activity of LDH measured in the blood of the animals after the treadmill exercise. After exercise, the blood LDH enzyme activity of the animals was found to be significantly increased compared to the animals that did not exercise immediately after exercise. It is interesting to note that this result appears to have the same tendency to change in liver MAO-B. LDH is an enzyme with reversible activity that degrades or synthesizes lactate in an animal.It is one of the forms of energy that animals use while producing anabolic pyruvate, an energy metabolic precursor that breaks down lactate from the liver during anoxic exercise. Is an enzyme that produces NADH. Among the blood, LDH has a function of producing energy by decomposing lactate in the case of glucose deficiency, but LDH synthesizes lactate in muscle during exercise, which is known as an indicator of muscle fatigue by increasing lactate concentration in muscle during anaerobic exercise. . When the exercise speed was divided into two groups, 10m / min and 15m / min, the LDH enzyme activity measured in the blood of animals after treadmill exercise was significantly increased compared to the non-exerciseed animals. Both groups remained elevated for about an hour.

b. 트레드밀 운동을 한 랫트의 혈중 락테이트 함량 변화b. Changes in Blood Lactate Content in Rats Treadmilled

트레드밀 운동 후 동물의 혈액에서 측정한 락테이트의 함량 변화를 도 9에 나타냈다. 운동을 한 후 동물의 혈중 락테이트 함량은 운동 후 30분부터 운동을 하지 않은 동물에 비해 아주 약간 증가되는 것으로 확인되었다. 이 결과는 간 MAO-B의 변화양상이나 혈중 LDH 효소활성과 같은 변화 경향을 갖는 것이다. 젖산(Lactic acid)은 무산소 운동을 할 때 근육에서는 락테이트가 합성됨으로서 락테이트 농도를 높여 근육의 피로를 알리는 지표물질로 알려져 있다. 간에서 분해 되어 에너지 대사 전구물질인 피루브산(pyruvate)을 생성하면서 동물체가 사용하는 에너지 형태 중 하나인 NADH를 생산하거나 글리코겐(glycogen)으로 저장되는 물질이다. 런닝머신의 속도를 10m/분과 15m/분으로 두 그룹으로 나누어 운동했을 때 트레드밀 운동 후 동물의 혈액에서 측정한 락테이트 농도는 운동을 하지 않은 동물과 비교했을 때 큰 차이를 보이지는 않았다. 오히려 운동 직후에는 아주 약간 감소하는 경향이다가 약하게 증가하는 것으로 나타났으나 두 그룹 모두 약 한 시간 이내에 정상 수준을 회복하였다.The change in the lactate content measured in the blood of the animals after the treadmill exercise is shown in FIG. 9. After the exercise, the blood lactate content of the animals was found to increase only slightly compared to the animals that did not exercise from 30 minutes after the exercise. This result is indicative of changes in liver MAO-B and changes in blood LDH enzyme activity. Lactic acid is known as an indicator of muscle fatigue by increasing lactate concentration by synthesizing lactate in muscles during anaerobic exercise. It breaks down in the liver to produce an energy metabolic precursor, pyruvate, which produces NADH, one of the energy forms used by animals, or is stored as glycogen. When the treadmill speed was divided into two groups of 10m / min and 15m / min, the lactate concentration measured in the blood of the animals after the treadmill exercise was not significantly different from that of the non-exercised animal. Rather, they tended to decrease slightly after exercise and then increase slightly, but both groups returned to normal within about an hour.

c. 수영운동한 랫트의 혈중 LDH 효소활성 변화c. Changes in LDH Enzyme Activity in Blood of Swimming Rats

수영 후 동물의 혈액에서 측정한 LDH의 활성변화를 도 10에 그림으로 나타냈다. 수영을 한 후 동물의 혈중 LDH 효소활성은 운동 직후부터 운동을 하지 않은 동물에 비해 현저히 증가되는 것으로 확인되었다. 이 결과는 간 MAO-B의 변화양상과 같은 경향을 갖는 것으로 나타났으며 효소활성의 변화 양상이 유사한 곡선으로 나타난다는 흥미로운 사실을 알게 되었다. 운동시간을 3분과 5분으로 두 그룹으로 나누어 수영했을 때 수영 후 동물의 혈액에서 측정한 LDH 효소활성은 운동을 하지 않은 동물에 비해 현저히 증가하였으며 운동의 강도에 따라 유의적인 차이를 나타내고 두 그룹 모두 약 한 시간 후에는 정상 상태로 회복되는 것으로 나타났다. 운동의 지표효소인 LDH의 활성이 MAO-A와 MAO-B의 활성과 유사한 변화양상을 갖는다는 사실을 확인함으로써 운동 중 체내 MAO활성 변화를 조절하는 물질을 운동능력향상과 스트레스개선을 위한 식품 소재로 이용할 수 있는 근거로 제시할 수 있을 것으로 생각한다.The activity change of LDH measured in the blood of the animal after swimming is shown in FIG. 10. After swimming, the blood LDH enzyme activity of the animals was found to be significantly increased compared to the animals that did not exercise immediately after exercise. The results showed the same trends as the changes in hepatic MAO-B, and it was interesting to note that the changes in the activity of enzymes appeared in similar curves. When swimming was divided into two groups of 3 minutes and 5 minutes, the LDH enzyme activity measured in the blood of the animals after swimming was significantly increased compared to the non-exercised animals, and there was a significant difference according to the intensity of exercise. After about an hour, it returned to normal. By confirming that the activity of LDH, an index marker of exercise, has a similar pattern of activity of MAO-A and MAO-B, foods for improving exercise ability and stress improvement were identified as substances controlling the change of MAO activity in the body during exercise. We think that we can suggest on basis to be able to use.

d. 수영 운동한 랫트의 혈중 락테이트 함량 변화d. Changes in Blood Lactate Content in Rats Swimmers

수영 후 동물의 혈액에서 측정한 락테이트의 함량변화를 도 11에 나타냈다. 수영을 한 후 동물의 혈중 락테이트 함량은 수영 직후에는 운동을 하지 않은 동물에 비해 현저히 증가하였으나 운동 후 30분을 전후 하여 정상 상태를 회복하는 것으로 확인되었다. 이 결과는 간 MAO-B의 변화양상이나 혈중 LDH 효소활성과 같은 경향을 갖는 것을 알게 되었다. 운동 시간을 3분과 5분으로 두 그룹으로 나누어 운동했을 때 수영 직후부터 수영 30분 후 까지는 95% 수준에서 두 그룹 간에 유의적인 락테이트 함량 차이를 보였으나 한 시간이 경과하자 모든 그룹에서 정상적인 상태를 회복하였다.The change in the lactate content measured in the blood of the animals after swimming is shown in FIG. 11. The blood lactate content of the animals after swimming was significantly increased compared to the animals without exercise immediately after swimming, but it was confirmed that the normal state was restored about 30 minutes after the exercise. This result was found to have a tendency such as changes in liver MAO-B and LDH enzyme activity in blood. When exercise was divided into two groups of 3 minutes and 5 minutes, there was a significant difference in lactate content between the two groups at the 95% level from just after swimming to 30 minutes after swimming. Recovered.

실험예 4. 상심자 경구투여 후 운동에 의한 랫트 MAO의 활성, 혈중 LDH 활성 및 혈중 락테이트 함량 변화에 미치는 영향 측정 Experimental Example 4. Determination of the effect of exercise on rat MAO activity, blood LDH activity and blood lactate content by exercise after oral administration

상기 실험예 3의 방법과 동일하게, 일반 실험실 조건에서 적응시킨 SD계 랫트 6 마리를 한 군으로 하여 일주일 동안 점진적인 예비운동을 통해 운동에 적응시키고 그룹을 나누어 다시 일주일 동안 본 운동을 시키면서 상심자 추출물을 실험예 2-1의 방법에 따라 일주일 간 경구로 투여하고 운동 직후(0분), 운동 후 5분(5분), 30분 후(30분), 1시간 후(60분)에 각 동물의 뇌와 간에서 각각 MAO-A와 MAO-B의 활성 변화를 측정하였다. 또한 채혈한 혈액을 3000rpm에서 15분 원심 분리하여 얻은 혈장을 -80℃ 냉동고에 보관하였다가 혈중 LDH 활성의 변화와 락테이트 함량의 변화를 측정하였다. 운동 후의 체내 효소활성 변화를 관찰한 실험 결과 3분 동안 수영을 한 동물의 체내 효소활성 변화율이 가장 현저하게 변하는 것으로 확인 되었으므로 상심자 투여가 운동에 의한 동물의 체내 효소활성 변화를 측정하는 본 실험에서는 운동의 종류를 3분 수영으로 통일하여 실시하였다. 대조군은 운동을 하고 상심자 추출물 대신 증류수를 경구로 투여한 동물군 이었으며 공시험군은 운동을 하지 않고 증류수를 경구 섭취한 동물군 이었다. In the same manner as the Experimental Example 3, 6 rats adapted to general laboratory conditions in one group were adapted to exercise through a gradual preliminary exercise for one week, and divided into groups to perform this exercise for another week. Was administered orally for a week according to the method of Experimental Example 2-1 and immediately after exercise (0 minutes), 5 minutes after exercise (5 minutes), 30 minutes (30 minutes), 1 hour after each animal (60 minutes) Changes in the activity of MAO-A and MAO-B were measured in the brain and liver, respectively. Plasma obtained by centrifuging the collected blood for 15 minutes at 3000rpm was stored in a freezer at -80 ° C and the changes in blood LDH activity and lactate content were measured. As a result of observing the change of enzyme activity in the body after exercise, it was found that the rate of change of enzyme activity in the animal swimming for 3 minutes was most remarkably changed. Kind of exercise was performed unified by 3 minutes swimming. The control group was a group of animals who exercised and orally administered distilled water instead of the extract of the loser, and the test group was a group of animals who orally consumed distilled water without exercise.

a. 수영운동한 랫트의 뇌 MAO-A의 효소활성 변화a. Changes in Enzyme Activity of Brain MAO-A in Rats Swimming

각 동물의 뇌에서 MAO-A의 활성 변화를 측정한 결과는 도 12와 같다. 도 12에서 보는 바와 같이 운동 직후부터 운동을 하지 않은 동물에 비해 현저히 낮아지는 뇌 MAO-A 효소활성은 상심자 추출물을 투여한 동물에서 운동을 하지 않은 동물과 같은 수준으로 회복되는 것을 확인할 수 있었다. 이 결과로부터 상심자 추출물이 동물의 체내에서 MAO-A의 활성을 증가시킴으로서 운동으로 인한 동물체 내의 스트레스 조건에서 활성이 현저히 저하된 효소활성을 원 상태로 회복한 것으로 추정할 수 있었다. 이 결과는 한의학적으로 한성약물로 분류되는 상심자 추출물의 효소활성 증가 결과가 한의학의 기미론을 체내 MAO 활성의 변화로 설명하려는 시도로 행해진 동물실험에서 운동 시 한성약물에 의한 MAO-A의 활성 변화와 일치하는 결과이고 이는 또한 운동을 전후한 스트레스에 대한 반응으로 신경전달물질인 세로토닌의 농도가 급속히 변화하며 강한 신체 훈련을 시킨 동물의 뇌 조직에서 세로토닌의 농도와 세로토닌 모듈린 조직의 농도가 증가하며 이 기전에 따라 다양한 운동처방이 가능하다는 사실을 MAO 활성의 변화로서 설명할 수 있는 결과이기도 하다.As a result of measuring the change in the activity of MAO-A in the brain of each animal is shown in FIG. As shown in FIG. 12, the brain MAO-A enzyme activity, which is significantly lower than that of the non-exercise animal immediately after the exercise, was recovered to the same level as the non-exercise animal in the loser extract. From these results, it can be estimated that the extract of the loser increased the activity of MAO-A in the body of the animal, thereby restoring the enzyme activity whose activity was significantly reduced under stress conditions in the animal body due to exercise. This result shows that the change of MAO-A activity by Korean herbal medicines during exercise in animal experiments in which the increase in enzyme activity of the extract from the lettuce, which is classified as Korean herbal medicine, was attempted to explain the mimetics of oriental medicine as a change in the MAO activity In addition, the concentration of serotonin, a neurotransmitter, changes rapidly in response to pre and post-workout stress and increases the concentration of serotonin and serotonin modulator tissue in brain tissues of trained animals. This mechanism can be explained by the change of MAO activity that various exercise prescriptions are possible.

b. 수영운동한 랫트의 간 MAO-B의 효소활성 변화b. Changes of Enzyme Activity of Liver MAO-B in Swimmers

수영 후 동물의 간에서 측정한 MAO-B의 활성변화를 도 13에 나타냈다. 운동 직후부터 운동을 하지 않은 동물에 비해 현저히 증가되는 뇌 MAO-B 효소활성은 상심자 추출물을 투여한 동물에서 운동을 하지 않은 동물과 같은 수준으로 거의 완전히 회복되는 것을 확인할 수 있었다. 이 결과로부터 상심자 추출물이 동물의 체내에서 MAO-B의 활성을 감소시킴으로서 운동으로 인한 동물체 내의 스트레스 조건에서 활성이 현저히 증가된 MAO-B 효소활성을 원 상태로 회복시킨 것이다. 이 결과는 MAO-A에 대한 상심자 추출물의 영향을 관찰한 도 12 보다 훨씬 눈에 띄게 확실한 변화 양상을 나타냄으로서 경구로 투여한 상심자 추출물이 뇌에서 뿐 아니라 간에서도 MAO 활성에 적극적으로 영향을 미치고 있다는 사실을 확인한 것이다. 따라서 상심자 추출물이 운동능력을 향상시키고 스트레스를 개선할 수 있는 식품의 소재로 활용 가능하다. The activity change of MAO-B measured in the liver of the animal after swimming is shown in FIG. 13. Significantly increased brain MAO-B enzyme activity immediately after exercise compared to non-exercised animals was almost completely recovered to the same level as that of non-exercised animals. From these results, the extract of the loser MAMA-B in the body of the animal reduced the activity of the MAO-B enzyme activity significantly increased in the stress conditions in the animal body due to exercise to restore the original state. These results show a significantly more pronounced change than that of FIG. 12, which observed the effect of the extract on MAO-A, so that the oral administration of the extract on the MAO-A actively affected the MAO activity in the brain as well as in the liver. It is confirmed that it is going crazy. Therefore, loser extract can be used as a food material that can improve exercise ability and improve stress.

이 결과는 한성(cold) 및 열성스트레스(heat stress) 상태에 있는 동물에게 약물을 경구투여하고 효소활성의 변화를 관찰한 실험에서 확인된 결과와 같은 경향을 나타내는 것으로 확인되었다. 즉 한성약물을 경구투여하고 한성 및 열성스트레스를 유발시킨 경우 열성스트레스에 의해 감소된 MAO-A의 활성을 현저히 증가시킴으로서 병증의 개선효과를 기대하게 하는 반면, 한성 스트레스(cold stress) 유발 시에도 MAO-A의 효소활성은 증가되어 기론에 의한 한의학의 약리학적 해석이 MAO 활성 변화로 설명될 수 있음을 확인한 저자 등의 이전 실험 결과와 일치되는 결과임을 알 수 있었다(황금희 등, 대한본초학회지 14(1), pp1-14, 1999).This result was confirmed to show the same tendency as the results confirmed in the experiments in which oral administration of drugs and changes in enzyme activity to animals in cold and heat stress conditions. In other words, when oral administration of Hansung Pharm and causing Hanseong and recessive stress significantly increased the activity of MAO-A decreased by the recessive stress, the expectation of the improvement of the condition was expected, while MAO was induced even when cold stress was induced. The enzyme activity of -A was increased, which is consistent with the results of previous experiments by the authors who confirmed that the pharmacological interpretation of oriental medicine can be explained by the change in MAO activity (Hwang, Geum-Hee et al., Korean Journal of Herbal Medicine 14 ( 1) , pp 1-14, 1999).

c. 수영운동한 랫트의 혈중 LDH 효소활성 변화c. Changes in LDH Enzyme Activity in Blood of Swimming Rats

수영 후 동물의 혈액에서 측정한 LDH의 활성변화를 도 14에 나타냈다. 수영을 한 후 운동 직후부터 대조군에 비해 현저히 증가되는 것으로 확인된 동물의 혈중 LDH 효소활성은 상심자 추출물을 경구 투여한 실험동물 군에서 MAO-B와 상당히 유사한 패턴의 효소활성 변화 패턴을 보이며 원 상태로 회복되고 있는 것으로 확인되었다. 이 결과로부터 운동과 상심자 추출물 경구투여 동물에서 LDH의 변화 양상이 간 MAO-B의 변화양상과 같은 경향을 갖는다는 흥미로운 사실을 확인할 수 있었고 이러한 사실로부터 MAO에 대하여 저해활성을 갖는 상심자가 운동이나 신체의 스트레스로부터 회복을 촉진하는 활성을 갖는 것을 확인하였다.The activity change of LDH measured in the blood of the animal after swimming is shown in FIG. 14. The blood LDH enzyme activity of the animals that were found to be significantly increased compared to the control group immediately after the exercise after swimming showed a pattern similar to that of MAO-B in the experimental animals group orally administered with the extracts. It was confirmed that it is recovering. From these results, it can be found that the change of LDH tends to be the same as that of hepatic MAO-B in oral and exercise extracts. It was confirmed to have an activity for promoting recovery from the stress of the body.

d. 수영운동한 랫트의 혈중 락테이트 함량 변화d. Changes in Blood Lactate Content in Rats Swimming

수영 후 동물의 혈액에서 측정한 락테이트의 함량변화를 도 15에 나타냈다. 수영을 한 후 운동 직후부터 대조군에 비해 현저히 증가되는 것으로 확인된 동물의 혈중 락테이트 함량은 상심자 추출물을 경구 투여한 실험동물 군에서 LDH와 마찬가지로 MAO-B와 상당히 유사한 패턴의 효소활성 변화 패턴을 보이며 원 상태로 회복되고 있는 것으로 확인되었다. 이 결과로부터 운동과 상심자 추출물 경구투여 동물에서 LDH와 락테이트의 변화 양상이 간 MAO-B의 변화양상과 같은 경향을 갖는다는 흥미로운 사실을 확인할 수 있었고 이러한 사실로부터 MAO에 대하여 저해활성을 갖는 상심자가 운동이나 신체의 스트레스로부터 회복을 촉진하는 활성을 갖는 것을 확인할 수 있었다.Figure 15 shows the change in the lactate content measured in the blood of the animal after swimming. The blood lactate content of the animals found to be significantly increased compared to the control group immediately after the exercise after swimming was similar to that of MAO-B in the animals group orally administered with the extract from the loser extract. It was confirmed that it was recovering to its original state. From these results, it was found that the change of LDH and lactate tended to be the same as that of hepatic MAO-B in oral administration of exercise and lettuce extract. It was confirmed that it has an activity for promoting recovery from self-exercise or physical stress.

실험예 5. 급성독성 시험Experimental Example 5. Acute Toxicity Test

ICR계 마우스(20±5 g, 바이오제노믹스)와 스프라그 도올리 랫트(235±10 g, 바이오제노믹스)를 사용하여 상심자 추출물의 급성독성 시험을 실시하였다. ICR계 마우스와 스프라그-도올리 랫트를 각각 10마리씩 4군으로 나누어 본 발명의 상심자 추출물을 각각 250, 500 및 1000 ㎎/㎏의 용량으로 경구 투여한 후 2주간 독성여부를 관찰한 결과 3군 모두에서 사망한 예가 한 마리도 없었고 외견상 대조군과 별다른 증상을 찾아볼 수 없었다.The acute toxicity test of the extract from perilla was carried out using ICR mice (20 ± 5 g, Biogenomes) and Sprague Dooli rats (235 ± 10 g, Biogenomes). ICR-based mice and Sprague-Dawley rats were divided into four groups of 10 rats each. Oral administration of the lettuce extract of the present invention at 250, 500 and 1000 mg / kg doses was observed for 2 weeks. No deaths occurred in all groups and no symptoms were apparent from the control group.

급성독성 시험 결과 상심자 메탄올 추출물의 경우 LD50이 1000 ㎎/㎏ 이상이었으며, 상심자 에탄올 추출물 역시 LD50이 1000 ㎎/㎏ 이상이었다. 또한 그 투여 가능 용량인 2000 ㎎/㎏에서 사망 예를 전혀 관찰할 수 없었으며, 체중 증가, 사료 섭취량 등에서 전혀 유의한 이상을 발견할 수 없었다. 따라서 상심자 추출물의 경우 안전한 약물임을 알 수 있었다.For the acute toxicity test results upset chair methanol extract LD 50 was more than 1000 ㎎ / ㎏, upset character ethanol extract were also LD 50 is more than 1000 ㎎ / ㎏. In addition, no mortality was observed at the dose of 2000 mg / kg, and no significant abnormality was found in weight gain and feed intake. Therefore, it was found that the extract of the loser was a safe drug.

하기에 상기 조성물의 제제 예를 설명하나, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.Examples of the formulation of the composition are described below, but are not intended to limit the present invention but to explain in detail only.

제제예 1. 정제의 제조 Formulation Example 1 Preparation of Tablet

실시예 1 조추출물................................. 200 ㎎Example 1 Crude Extract ... 200 mg

유당 .............................................. 100 ㎎Lactose 100 mg

전분............................................... 100 ㎎Starch ......................................... 100 mg

스테아린산 마그네슘 ............................... 적 량Magnesium Stearate ...............

상기의 성분을 혼합하고 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.The tablets were prepared by mixing the above components and tableting according to a conventional method for producing tablets.

제제예 2. 캡슐제의 제조 Formulation Example 2 Preparation of Capsule

실시예 1 조추출물 ............................... 100 ㎎Example 1 Crude Extract ......................................... 100 mg

유당 ............................................ 50 ㎎Lactose ...... 50 mg

전분 ............................................ 50 ㎎Starch ............................ 50 mg

탈크 ............................................ 2 ㎎Talc ........................................ 2 mg

스테아린산 마그네슘 ............................ 적 량Magnesium Stearate ...............

상기의 성분을 혼합하고 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.The capsules were prepared by mixing the above components and filling the gelatin capsules according to a conventional method for preparing capsules.

제제예 3. 액제의 제조 Formulation Example 3 Preparation of Liquid

실시예 1 조추출물 ........................... 1000 ㎎Example 1 Crude Extract ..................... 1000 mg

설탕 ........................................... 20 gSugar ........................... 20 g

이성화당 ....................................... 20 gIsomerized sugar ......................................... 20 g

레몬향 ......................................... 적량Lemon scent .........................

정제수를 가하여 전체 100 ㎖으로 맞추었다.Purified water was added to adjust the total volume to 100 ml.

상기의 성분을 통상의 액제의 제조방법에 따라서 혼합하고 100 ㎖ 의 갈색병에 충전하고 멸균시켜서 액제를 제조하였다.The above-mentioned components were mixed according to a conventional method for preparing a liquid solution, filled into a 100 ml brown bottle, and sterilized to prepare a liquid solution.

또한 하기와 같은 방법으로 스포츠 기능성 음료, 건강기능식품 및 건강기능음료를 제조하였다.In addition, sports functional drinks, health functional foods and health functional drinks were prepared in the following manner.

제제예 4. 스포츠 음료Formulation Example 4 Sports Drink

실시예 1 조추출물 ........................... 1000 ㎎Example 1 Crude Extract ..................... 1000 mg

시트르산 ...................................... 0.375 gCitric acid ............... 0.375 g

비타민 C ....................................... 0.075 gVitamin C ..................... 0.075 g

염화나트륨...................................... 0.125 gSodium Chloride ............... 0.125 g

염화칼륨........................................ 0.125 gPotassium chloride ..................................... 0.125 g

락트산칼슘..................................... 0.3 gCalcium Lactate ... 0.3 g

탄산마그네슘.................................... 5 mgMagnesium Carbonate ......................................... 5 mg

글루탐산나트륨.................................. 0.015 gSodium Glutamate ......................................... 0.015 g

향료..............................................적량Spices ..............................

정제수를 가하여 전체 250 ㎖으로 맞추었다.Purified water was added to adjust the total volume to 250 ml.

상기의 성분을 통상의 음료의 제조방법에 따라서 혼합하고 250 ㎖ 의 캔에 충전하여 스포츠 음료를 제조하였다.The above ingredients were mixed according to a conventional beverage production method and filled into 250 ml of can to prepare a sports drink.

제제예 5. 건강기능식품의 제조Formulation Example 5 Preparation of Health Functional Food

실시예 1 조추출물........................... 1000 ㎎Example 1 Crude extract ..................... 1000 mg

비타민 혼합물 .............................. 20 gVitamin Blend ............... 20 g

비타민 A 아세테이트......................... 70 ㎍Vitamin A Acetate ............... 70 μg

비타민 E ................................... 1 ㎎Vitamin E ......................... 1 mg

비타민 B1 .................................. 0.13 ㎎Vitamin B1 ..................................... 0.13 mg

비타민 B2 .................................. 0.15 ㎎Vitamin B2 ..................... 0.15 mg

비타민 B6 .................................. 0.5 ㎎Vitamin B6 ......................................... 0.5 mg

비타민 B12 ................................. 0.2 ㎍Vitamin B12 ................................. 0.2 μg

비타민 C ................................... 10 ㎎Vitamin C ......................................... 10 mg

비오틴 ..................................... 10 ㎍Biotin .......................... 10 μg

니코틴산아미드 ............................. 1.7 ㎎Nicotinic Acid Amide ......................................... 1.7 mg

엽산 ....................................... 50 ㎍Folic acid ......................................... 50 μg

판토텐산 칼슘 ............................... 0.5 ㎎Calcium Pantothenate ......................................... 0.5 mg

무기질 혼합물 ............................... 적량Mineral mixture ...............

황산제1철 ................................... 1.75 ㎎Ferrous Sulfate ............... 1.75 mg

산화아연 .................................... 0.82㎎Zinc Oxide ......................................... 0.82mg

탄산마그네슘 ................................ 25.3 ㎎Magnesium Carbonate ......................................... 25.3 mg

제1인산칼륨 .................................. 15 ㎎Potassium monophosphate ......................................... 15 mg

제2인산칼슘 .................................. 55 ㎎Dicalcium Phosphate ............... 55 mg

구연산칼륨 ................................... 90 ㎎Potassium Citrate ......................................... 90 mg

탄산칼슘 ..................................... 100 ㎎Calcium Carbonate ... 100 mg

염화마그네슘 ................................. 24.8 ㎎Magnesium Chloride ................................. 24.8 mg

상기 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강기능식품 제조 방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강기능식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.Although the composition ratio of the vitamin and mineral mixture is a composition suitable for a relatively healthy food in a preferred embodiment, the compounding ratio may be arbitrarily modified, and the above ingredients are mixed according to a conventional health functional food production method. The granules may be prepared and used for preparing the nutraceutical composition according to a conventional method.

제제예 6. 건강기능음료의 제조Formulation Example 6 Preparation of Health Functional Drink

실시예 1 조추출물........................... 1000 ㎎Example 1 Crude extract ..................... 1000 mg

구연산...................................... 100 ㎎Citric Acid ..................... 100 mg

올리고당 ................................... 100 gOligosaccharide ......................................... 100 g

매실농축액 ................................. 2 gPlum concentrate ..................... 2 g

타우린 ..................................... 1 gTaurine ..................................... 1 g

정제수를 가하여 전체 ....................... 900㎖Purified water is added.

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강기능음료 조성물 제조에 사용한다.After mixing the above components in accordance with a conventional healthy beverage production method, and stirred and heated at 85 ℃ for about 1 hour, the resulting solution is filtered and obtained in a sterilized 2 L container, sealed sterilization and then refrigerated and stored in the present invention It is used to prepare a health functional beverage composition.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.Although the composition ratio is a composition suitable for a preferred beverage in a preferred embodiment, the compounding ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences such as demand hierarchy, demand country, and use purpose.

본 발명은 상심자의 추출물은 시험관내 실험에서 MAO 효소활성을 강력히 저해하였고, 랫트에 경구 투여하고 운동한 후의 MAO-B 효소 저해효과, LDH 효소 저해 효과 및 락테이트 함량 감소효과를 나타냄을 밝힘으로서, 모노아민 산화효소 저해제, 항우울제 또는 우울증, 파킨슨씨병, 알츠하이머씨병을 위한 의약품 및 피로회복, 스트레스 해소 및 운동기능향상에 효과적인 스포츠용 기능성 식음료 뿐만 아니라 건강기능식품으로 이용가능하다.As the present invention reveals that the extract of the loser strongly inhibited the MAO enzyme activity in the in vitro experiments, and exhibited the effect of inhibiting the MAO-B enzyme, LDH enzyme inhibition and lactate content after oral administration and exercise in rats, Monoamine oxidase inhibitors, antidepressants or medicines for depression, Parkinson's disease, Alzheimer's disease, as well as functional foods and beverages for sports effective in fatigue recovery, stress relief and exercise function as well as health functional foods.

도 1 은 본 발명의 상심자의 각 용매별 분획의 박층크로마토그램으로, 254mn UV에서 아니스 알데히드 용액을 사용하여 탐지한 것이고,1 is a thin layer chromatogram of each solvent fraction of the heart of the present invention, which is detected using an anise aldehyde solution at 254mn UV,

도 2 는 본 발명의 상심자의 각 용매별 분획의 박층크로마토그램으로, 365mn UV에서 10% 황산 용액을 사용하여 탐지한 것이고,2 is a thin layer chromatogram of each solvent fraction of the loser of the present invention, which was detected using a 10% sulfuric acid solution at 365mn UV,

도 3 은 본 발명의 상심자 추출물을 랫트에 경구투여하였을 때 MAO-A 및 MAO-B의 활성정도의 변화를 나타낸 도이고,Figure 3 is a diagram showing the change in activity of MAO-A and MAO-B when oral administration of the loser extract of the present invention to rats,

도 4 는 트레드밀 운동 후 랫트의 뇌에서의 MAO-A 효소 활성변화를 나타낸 도이고, 4 is a diagram showing the change of MAO-A enzyme activity in the brain of the rat after treadmill exercise,

도 5 는 트레드밀 운동 후 랫트의 간에서의 MAO-B 효소 활성변화를 나타낸 도이고, 5 is a diagram showing the change of MAO-B enzyme activity in the liver of the rat after treadmill exercise,

도 6 은 수영 후 랫트의 뇌에서의 MAO-A 효소 활성변화를 나타낸 도이고, 6 is a diagram showing the change of MAO-A enzyme activity in the brain of the rat after swimming,

도 7 은 수영 후 랫트의 간에서의 MAO-B 효소 활성변화를 나타낸 도이고, Figure 7 is a diagram showing the change in MAO-B enzyme activity in the liver of the rat after swimming,

도 8 은 트레드밀 운동 후 랫트의 혈중 락테이트 탈수소효소(LDH) 활성변화를 나타낸 도이고,8 is a diagram showing changes in lactate dehydrogenase (LDH) activity in rats after treadmill exercise,

도 9 는 트레드밀 운동 후 랫트의 혈중 락테이트 함량변화를 나타낸 도이고,9 is a diagram showing the change in blood lactate content of rats after treadmill exercise,

도 10 은 수영 후 랫트의 혈중 LDH 효소 활성변화를 나타낸 도이고,10 is a diagram showing the change in blood LDH enzyme activity of the rat after swimming,

도 11 은 수영 후 랫트의 혈중 락테이트 함량변화를 나타낸 도이고,11 is a diagram showing the change in blood lactate content of rats after swimming,

도 12 는 상심자 추출물을 경구투여한 랫트를 수영시킨 후, 뇌의 MAO-A 효소 활성변화를 나타낸 도이고,12 is a diagram showing the change in MAO-A enzyme activity of the brain after swimming rats orally administered with the extract of the loser,

도 13 은 상심자 추출물을 경구투여한 랫트를 수영시킨 후, 간의 MAO-B 효소 활성변화를 나타낸 도이고,Figure 13 is a diagram showing the change in liver MAO-B enzyme activity after swimming rats orally administered to the loser extract,

도 14 는 상심자 추출물을 경구투여한 랫트를 수영시킨 후, 혈중 LDH 효소 활성변화를 나타낸 도이고,FIG. 14 is a diagram showing changes in LDH enzyme activity in blood after swimming rats administered oral administration of lettuce extract,

도 15 는 상심자 추출물을 경구투여한 랫트를 수영시킨 후, 혈중 락테이트 함량변화를 나타낸 도이다.Figure 15 is a diagram showing the change in lactate content in the blood after swimming rats orally administered the loser extract.

Claims (1)

상심자를 물, 에탄올, 메탄올 및 이들의 혼합용매에 가용한 추출물 또는 에틸아세테이트에 가용한 추출물을 포함하는 항피로 및 항스트레스용 약학 조성물.A pharmaceutical composition for anti-fatigue and antistress, comprising a extract which is available in water, ethanol, methanol, and a mixed solvent thereof or in an ethyl acetate.
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