KR20050046301A - 펠리누스 질부스 균사체 추출물을 함유하는 면역 활성증강용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 펠리누스 질부스 균사체 추출물을 함유하는 면역 활성 증강용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물은 생체내 대식세포에 활성이 있으며, 비장내 면역세포의 증가, 비장내 면역세포 중에서 B 세포의 활성을 특이적으로 증가시키므로, 암과 같은 면역 관련 질환의 예방 및 치료에 유용한 의약품 및 건강식품으로 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 펠리누스 질부스 균사체 추출물을 함유하는 면역 활성 증강용 조성물에 관한 것이다.
인체는 각종 질병에 대항할 수 있는 면역체계를 갖추고 있으나 계속하여 나쁜 환경에 의해 축척되는 각종 독소, 과한 음주, 흡연 및 반복되는 스트레스는 인체의 면역체계를 무너뜨리고 저항력이 저하되거나 노화되면서 인후 근처의 흉선(胸腺)이 퇴화되어 면역체계의 T 세포의 활성이 약해져 암세포가 증식하게 된다.
암의 발생과 종양세포의 증식에 대응하는 숙주의 생체 방어기구로서 생체의 면역작용에 의한 면역감시 기능은 중요한 역할을 담당하며, 이러한 항종양 면역작용은 T 세포와 B 세포 등의 임파구(lymphocyte), 대식세포(macrophage) 및 킬러세포(natural killer cell) 등에 의해 수행되어진다.
면역세포의 활성화로 발생되는 대식세포의 증식 및 활성화, B 및 T 임파구 세포의 증식 및 분화는 생체의 방어기능인 면역계 초기 조절에 매우 중요한 단계이다. 즉 면역세포의 활성화가 계속 진행되면 세포들의 증식과 분화과정에서 각종 사이토킨(cytokine)들이 분비되어 연속적인 면역기능의 증폭과 조절이 가능해진다.
면역활성 저하로 발생되는 대표적인 질환인 암은 외과적 수술요법, 화학요법 및 방사선요법 등이 행하여지고 있으나, 일반적인 암치료 방법으로 사용되는 대부분의 항암제는 인체의 면역작용을 하는 백혈구나 혈소판을 감소시키는 등 정상세포에 까지 악영향을 주는 것으로 알려져 있어, 치료의 한계성과 부작용으로 인해 많은 단점이 지적되어 왔다. 그러므로 면역력을 증강시켜 암세포의 발병을 억제시킴으로써 암을 치료하고, 암세포의 발병 자체를 예방하는 일은 아주 중요하다.
따라서, 면역조절제를 이용한 치료는 인체에 세포독성을 주지 않고 무해하면서도 효과적으로 면역증강에 의해 암세포를 억제할 수 있으므로 효과적이다.
천연물에서 면역활성 조절물질의 활성이 보고된 것으로는 담자균류인 버섯(영지, 운지, 상황버섯 등)의 단백다당체, 표고버섯의 레티난(lentinan; Chihara 등, 1970), 구름버섯의 크레스틴(krestin; Tsukagoshi와 Ohashi, 1974), 치마버섯의 시조필란(schizophyllan; Tabata 등, 1981) 및 상황버섯의 메시마(Meshima; Han 등, 1995)와 같은 다당체가 있으며, 현재 항암 및 면역요법제 등으로 널리 사용되어지고 있다. 이중에서 종양저지율은 표고버섯이 80.7%, 구름버섯이 77.5%, 영지버섯이 64.9% 이며, 상황버섯이 96.7%로 가장 높다고 보고되어 있다.
상황(桑黃)이란 말은 중국에서 유래된 말로 우리나라에서는 목질진흙버섯으로 불리우며, 번식이 잘 되지 않고 매우 희귀한 담자균류로 학명은 펠리누스 린테우스(Phellinus linteus)이다.
상황버섯 또는 목질진흙버섯의 자실체 열수추출물은 소화기 계통의 암에 저지효과(Ikekawa, 1968)와 간암, 환자절제 수술후 화학요법 병용에 의한 면역기능 항진이 있는 것으로 나타나 많은 연구가 진행되어 왔으며, 균사체 추출물로부터 면역 활성(Lee 등, 1996) 및 항암 활성(정 등, 1993)도 입증되었다. 상황버섯에서 추출된 다당체의 항종양 작용에 대한 기작은 확실히 밝혀지지 않았으나, 이들이 주로 대식세포나 보체 시스템(complement system) 등의 면역체계를 활성화시켜 항종양 효과를 나타내는 것으로 보고되고 있다(Suzuki 등, 1989). 특히, Okuda 등(1973)은 항종양 활성과 혈청 용혈성(serum hemolytic activity)의 손실이 밀접한 관계가 있음을 입증하여, 보체계 성분의 활성화가 항종양 작용에 관여함을 관찰하였다.
상황버섯은 여러 연구에서 다른 버섯과 비교할 때 면역증강제 및 항암제로서의 효과가 탁월한 것으로 알려져 있는데, 그 활성성분은 인체의 면역력을 높이는 역할을 하는 다당류 베타글루칸(β-glucan)으로 밝혀졌다. 펠리누스 린테우스의 다당체 함량은 97.6%이며, 단백질 함량은 4.2%이다. 다당체 분석 결과 분획 추출된 분말은 글루코스 58%, 만노스 12.1%, 갈락토오스 4.9%로 구성되어 있으며, 단백질을 구성하는 아미노산 조성은 발린, 알라닌, 글리신등 15종으로 이루어져 있다고 보고되어 있다. 항암력의 주요성분은 단백결합당체 또는 다당체와 염기성 단백들이 작용하는 것으로 알려져 있으며 기존의 항암제와 병행할 때 이상적인 치료효과를 나타낸다고 한다. 펠리누스 린테우스 배양액에서 추출한 산성 헤테로글루칸은 쥐에서 B 림프구와 T 림프구의 활성은 5배, 자연 살해 세포의 활성은 2.5배, 대식 세포의 활성은 2배로 올리는 것으로 밝혀졌으며, 또한 암에 걸린 쥐의 수명이 1.8배까지 연장되는 것으로 나타났다. 펠리누스 린테우스의 약리 작용으로는 소화기 계통의 암인 위암, 간암에 유용한 결과를 나타내었으며, 초기암의 증식을 막는 효과가 뛰어나고, 암 수술후 재발 방지에도 효과가 있다는 보고도 있다.
펠리누스 린테우스 추출물의 종양 치유력은 8마리의 실험쥐에 Sarcoma 180이라는 종양세포를 이식한 뒤 야생 상황버섯 추출물을 투여해 7마리가 완치되었으며, 종양저지율 96.7%라는 발표도 보고되어 있다.
또한, 암환자를 대상으로 절제술 후 화학요법제와 펠리누스 린테우스 배양균 추출액을 병용해 50% 이상의 수명연장 효과를 거둘수 있다.
따라서, 펠리누스 린테우스는 암세포의 증식저지, 전이 억제, 및 항암제로 인한 부작용을 경감시키는 효과를 가지고 있다.
상기와 같이, 상황버섯 중 펠리누스 린테우스에 대한 활성 연구는 많이 진행되어 왔지만, 펠리누스 질부스에 대한 생리활성 연구는 거의 없으며, 특히 펠리누스 질부스의 균사체에 대한 연구는 전무한 상태이다.
따라서, 본 발명자들은 펠리누스 질부스(KCTC 26232)의 균사체를 배양하고 추출한 후, 펠리누스 질부스 균사체 추출물이 생체내에서 면역 활성 증강 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 펠리누스 질부스 균사체 추출물을 함유하는 면역 활성 증강용 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명은 펠리누스 질부스 균사체 추출물을 함유하는 면역 활성 증강용 조성물을 제공한다.
본 발명의 조성물은 면역 활성 증강을 위한 약학적 조성물 및 건강식품 조성물을 포함한다.
이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.
본 발명에 사용한 펠리누스 질부스(KCTC 26232) 균사체의 액체 배양 및 추출방법은 다음과 같다.
수돗물에 말트 엑기스, 효모 엑기스를 혼합한 액체배지를 초기 pH 6.3으로 조절한 다음, 121℃에서 15분간 멸균하고 실온으로 식힌다. 여기에 포테이토 덱스트로스 아가(Potato dextrose agar; PDA) 배지 플레이트에서 키우던 펠리누스 질부스 균사체를 넣고 온도 26℃, 회전수 200 rpm 조건에서 7일간 종 배양한다.
물 1L당 설탕, 여러 가지 농도(2.5, 3.5, 5.0 중량%)의 물엿, 대두분을 넣고 초기 pH를 6.5로 조정한 액체생산배지를 121℃에서 15분간 멸균한 후 실온으로 식힌다. 여기에 상기 제조한 종 배양액을 2% 접종하여 온도 26℃, 회전수 200 rpm 조건에서 9일간 배양한다. 배양이 끝난 배양액을 원심분리한 후 균사체를 얻는다.
배양된 균사체를 증류수로 10배 희석시켜 100℃에서 2시간동안 열수 추출한 후 여과한다. 여과액을 증류수로 희석하고 동결건조하여 황갈색의 조추출 건조분말을 얻는다.
액체생산배지 조성중 물엿의 농도를 2.5, 3.5, 5.0 중량%로 시험한 것은 본 발명의 펠리누스 질부스 균사체의 활성물질의 생산량 최적화를 알아보기 위한 것이다.
본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물은 액체생산배지 조성중 물엿의 농도를 3.5 중량%, 5.0 중량%로 하여 생산한 것이 비장내 면역세포의 활성이 높게 나타난다.
또한, 본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물은 액체생산배지 조성중 물엿의 농도 변화(2.5, 3.5, 5.0 중량%)에 따라 비장의 무게가 모두 증가한다. 그 중에서도 액체생산배지 조성중 물엿의 농도를 3.5 중량%로 하여 생산한 펠리누스 질부스 균사체 추출물의 경우 비장의 무게가 가장 높게 나타난다.
또한, 본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물은 액체생산배지 조성중 물엿의 농도 변화(2.5, 3.5, 5.0 중량%)에 따라 비장내 B 세포 활성에 관여하는 CD19 세포의 분포도가 현저히 증가하며, 그 중에서 액체생산배지 조성중 물엿의 농도를 3.5 중량%로 하여 생산한 펠리누스 질부스 균사체 추출물이 비장내 면역세포의 분포가 가장 높게 나타난다.
본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물은 생체내 대식세포에 활성이 있으며, 비장내 면역세포의 증가, 비장내 면역세포 중에서 B 세포의 활성을 특이적으로 증가시키므로, 암과 같은 면역 관련 질환의 예방 및 치료에 유용한 의약품 및 건강식품으로 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 상기 펠리누스 질부스 균사체 추출물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물은, 투여를 위해서 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당분야의 적정한 방법으로 또는 Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 일일 투여량은 펠리누스 질부스 균사체 추출물이 약 100~500㎎/㎏ 이고, 바람직하게는 300~500㎎/㎏ 이며, 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 더욱 바람직하다.
본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물을 마우스에 경구 투여하여 독성 실험을 수행한 결과, 경구 투여시 최소치사량(LD50)은 1g/㎏ 이상인 것으로 나타나 안전한 물질로 판명되었다.
본 발명의 조성물은 면역 관련 질환의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 약물 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 면역 관련 질환의 개선을 목적으로 건강식품에 첨가될 수 있다. 본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 펠리누스 질부스 균사체 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에는 본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물은 원료에 대하여 1~20 중량%, 바람직하게는 5~10 중량%의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖당 일반적으로 약 0.01~0.04g, 바람직하게는 약 0.02~0.03g 이다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1
: 펠리누스 질부스(Phellinus gilvus)의 균사체 배양 및 추출
1. 펠리누스 질부스의 균사체 배양
본 발명의 펠리누스 질부스 균사체를 다량으로 생산하기 위하여, 하기와 같은 방법으로 배양하였다.
1) 종 배양액 제조
본 발명에 사용한 균주인 펠리누스 질부스(KCTC 26232)의 균사체를 액체 배양하기 위하여 수돗물에 말트 엑기스 2 중량%, 효모 엑기스 0.2 중량%를 혼합한 액체배지를 초기 pH 6.3으로 조절한 다음, 밑에 배플이 4개 달린 500㎖ 삼각플라스크에 상기 액체배지 100㎖씩을 넣고 121℃에서 15분간 멸균하고 실온으로 식혔다. 여기에 포테이토 덱스트로스 아가(Potato dextrose agar; PDA) 배지 플레이트에서 키우던 펠리누스 질부스 균사체의 가장자리에서 2 x 2 ㎜ 블록으로 잘라 6개씩 넣어 온도 26℃, 회전수 200 rpm 조건에서 7일간 종 배양하였다.
2) 액체생산배지 제조
물 1L당 2 중량% 설탕, 여러 가지 농도(2.5, 3.5, 5.0 중량%)의 물엿, 0.9 중량% 대두분을 넣고 초기 pH를 6.5로 조정하여 액체생산배지를 제조하였다.
3) 균사체의 제조
밑에 배플이 1개 가로 지른 5L 삼각플라스크에 상기 2)에서 제조한 액체생산배지 1L를 넣고 121℃에서 15분간 멸균한 후 실온으로 식혔다. 여기에 상기 1)에서 제조한 종 배양액을 2% 접종하여 온도 26℃, 회전수 200rpm 조건에서 9일간 배양하였다. 배양이 끝난 배양액을 1500 xg에서 10분간 원심분리한 후 균사체를 얻었다.
2. 배양된 펠리누스 질부스의 균사체 추출
배양된 균사체를 증류수로 10배 희석시켜 100℃에서 2시간동안 열수 추출한 후 치즈 여과천으로 여과하였다. 여과액을 증류수로 희석하고 동결건조하여 황갈색의 조추출 건조분말을 얻었다.
액체생산배지 조성중 물엿의 조성을 각각 2.5, 3.5, 5.0 중량%로 변화시킨 배양액에서 펠리누스 질부스 균사체 추출물 건조분말을 각각 1.0, 1.6, 1.5g 얻었다.
실시예 2
: 본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물의 비장내 면역세포의 활성 측정
본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물의, 액체생산배지 조성중 물엿의 농도 변화에 따른 비장내 면역세포의 활성을 알아보기 위하여 다음과 같은 실험을 수행하였다.
C3H 마우스를 경구 탈구법에 의해 치사시킨 후 무균적으로 비장을 적출하여 100 mesh 망 위에서 분쇄하여 세포 부유액을 얻었다. 얻어진 세포 부유액을 LSM 용액에 천천히 2:1 (v/v) 비율로 적가시킨 후, 2000 rpm에서 20분간 원심 분리하였다. 단핵 세포층만 조심스럽게 취하여 1500 rpm에서 5분간 3회 원심 세척한 다음, 웰당 1 x 105 개의 세포를 가하고, Con A 2 ㎍/㎖, LPS(lipopolysaccharide) 50 ㎍/㎖, 본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물 시료를 일정농도(1, 10, 50 ㎍/㎖)로 가하여 최종 부피가 200㎕가 되도록 하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 48시간 배양한 후 각각의 웰에 [메틸-3H] 티미딘 2μCi 씩을 가하고 37℃, 5% CO2 배양기에서 12시간 정도 배양하였다.
배양 후 세포를 인산완충용액(PBS)으로 세척한 후 0.5% SDS, 0.2N NaOH 0.5 ㎖로 세포를 가수분해하여 합성된 DNA로 들어간 [메틸-3H] 티미딘의 양을 액체섬광계수기(liquid scintillation counter)로 측정하였다.
결과는 도 1에 나타내었다.
도 1에 나타난 바와 같이, 본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물의 농도를 각각 1, 10, 50 ㎍/㎖ 로 처리하였을때, 액체생산배지 조성중 물엿의 농도를 2.5 중량%로 생산한 펠리누스 질부스 균사체 추출물의 활성은 변화가 없었으나, 물엿의 농도를 3.5 중량%, 5.0 중량%로 하여 생산한 펠리누스 질부스 균사체 추출물의 활성은 높게 나타났다.
실시예 3
: 본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물의 면역세포의 분포 측정
본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물의, 액체생산배지 조성중 물엿의 농도 변화에 따른 면역세포 분포를 알아보기 위하여 다음과 같은 실험을 수행하였다.
C3H 마우스에 상기 실시예 2에서 제조한 펠리누스 질부스 균사체 추출물 시료를 1, 10, 50 ㎍/㎖씩 5일간 복강내 투여한 후, C3H 마우스를 경구 탈구법에 의해 치사시킨 후 무균적으로 비장을 적출하여 비장의 무게를 측정하였다.
적출된 비장을 100 mesh 망 위에서 분쇄하고, 이로부터 얻은 비장세포를 PBS로 세척한 후 RBC 용해 완충액(lysis buffer)을 가해 RBC를 제거하였다.
대식세포의 분포를 측정하기 위하여 FITC conjugated goat anti mouse Mac-1 항체를 가하고, 보조 T 세포를 측정하기 위하여 FITC conjugated goat anti mouse CD4 항체, 세포 독성 T 세포를 측정하기 위하여 FITC conjugated goat anti mouse CD8 항체, B 세포를 측정하기 위하여 FITC conjugated goat anti mouse Ig G 항체를 각각 넣어 얼음 욕조(ice bath)상에서 30분간 반응시키고 PBS로 세척한 다음 흘림세포계측법(flowcytometry)을 이용하여 각각의 면역세포들의 분포를 측정하였다.
본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물의, 액체생산배지 조성중 물엿의 농도 변화에 따른 비장의 무게 지수는 도 2에 나타내었고, 비장내 면역세포의 분포는 도 3에 나타내었다.
도 2에 나타난 바와 같이, 본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물의 농도를 각각 1, 10, 50 ㎍/㎖ 로 처리하였을때, 펠리누스 질부스 균사체 추출물을 처리하지 않은 대조군에 비하여 비장의 무게가 모두 증가하였다. 그 중에서도 액체생산배지 조성중 물엿의 농도를 3.5 중량%로 하여 생산한 펠리누스 질부스 균사체 추출물의 활성이 가장 높게 나타났다.
또한, 도 3에 나타난 바와 같이, 각 처리구에서 면역활성에 관련된 T 세포 관련 CD4, T 세포 상해성 관련 CD8, 골수계 부착에 관련된 CD11, B 세포활성관련 CD19 세포의 분포도 중에서, 본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물을 처리하였을때 B 세포 활성에 관여하는 CD19 세포의 분포도가 현저히 늘어났으며, 그 중에서 액체생산배지 조성중 물엿의 농도를 3.5 중량%로 하여 생산한 균사체 추출물의 활성이 가장 높게 나타났다.
따라서, 본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물은 액체생산배지 조성중 물엿의 농도를 3.5 중량%로 하여 생산하였을때 활성이 가장 좋은 최적의 상태임을 알 수 있다.
실험예
: 경구투여 급성독성 시험
본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물을 임상적으로 활용하기 위하여 하기와 같은 방법으로 급성독성을 조사하였다.
6주령의 특정병원부재(SPF) SD계 랫트(rat)를 군당 5 마리씩으로 나누어 본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물을 0.5% 메틸셀룰로오즈 용액에 현탁하여 1 g/kg의 용량으로 단회 경구투여 하였다. 투여 후 동물의 폐사여부, 임상증상, 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상여부를 관찰하였다.
그 결과 본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물을 투여한 동물에서는 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학적 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다. 실험에 사용한 상기 추출물은 랫트에서 1 g/kg까지 독성변화를 나타내지 않았으며, 경구 투여시 최소치사량(LD50)은 1 g/kg 이상인 물질로 판단되었다.
하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.
제제예 1
: 약학적 제제의 제조
1. 산제의 제조
펠리누스 질부스 균사체 추출물 2g
유당 1g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
2. 정제의 제조
펠리누스 질부스 균사체 추출물 100㎎
옥수수전분 100㎎
유 당 100㎎
스테아린산 마그네슘 2㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
3. 캡슐제의 제조
펠리누스 질부스 균사체 추출물 100㎎
옥수수전분 100㎎
유 당 100㎎
스테아린산 마그네슘 2㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
제제예 2
: 식품의 제조
본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물을 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.
1. 조리용 양념의 제조
펠리누스 질부스 균사체 추출물 20 ~ 95 중량%로 건강 증진용 조리용 양념을 제조하였다.
2. 토마토 케찹 및 소스의 제조
펠리누스 질부스 균사체 추출물 0.2 ~ 1.0 중량%를 토마토 케찹 또는 소스에 첨가하여 건강 증진용 토마토 케찹 또는 소스를 제조하였다.
3. 밀가루 식품의 제조
펠리누스 질부스 균사체 추출물 0.5 ~ 5.0 중량%를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
4. 스프 및 육즙(gravies)의 제조
펠리누스 질부스 균사체 추출물 0.1 ~ 5.0 중량%를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
5. 그라운드 비프(ground beef)의 제조
펠리누스 질부스 균사체 추출물 10 중량%를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
6. 유제품(dairy products)의 제조
펠리누스 질부스 균사체 추출물 5 ~ 10 중량%를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
7. 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다.
검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다.
본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물을 진공 농축기에서 감압·농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 펠리누스 질부스 균사체 추출물의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류(현미 30중량%, 율무 15중량%, 보리 20중량%),
종실류(들깨 7중량%, 검정콩 8중량%, 검정깨 7중량%),
펠리누스 질부스 균사체 추출물의 건조분말(3 중량%),
영지(0.5중량%),
지황(0.5중량%)
제제예 3
: 음료의 제조
1. 탄산음료의 제조
설탕 5~10%, 구연산 0.05~0.3%, 카라멜 0.005~0.02%, 비타민 C 0.1~1%의 첨가물을 혼합하고, 여기에 79~94%의 정제수를 섞어서 시럽을 만들고, 상기 시럽을 85~98℃에서 20~180초간 살균하여 냉각수와 1:4의 비율로 혼합한 다음 탄산가스를 0.5~0.82%를 주입하여 본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물을 함유하는 탄산음료를 제조하였다.
2. 건강음료의 제조
액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 펠리누스 질부스 균사체 추출물을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강음료를 제조하였다.
3. 야채쥬스의 제조
펠리누스 질부스 균사체 추출물 5g을 토마토 또는 당근 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 야채쥬스를 제조하였다.
4. 과일쥬스의 제조
펠리누스 질부스 균사체 추출물 1g을 사과 또는 포도 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 과일쥬스를 제조하였다.
본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물은 생체내 대식세포에 활성이 있으며, 비장내 면역세포의 증가, 비장내 면역세포 중에서 B 세포의 활성을 특이적으로 증가시키는 효과가 있다.
따라서, 본 발명의 조성물은 암과 같은 면역 관련 질환의 예방 및 치료에 유용한 의약품 및 건강식품으로 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물의, 액체생산배지 조성중 물엿의 농도 변화에 따른 비장내 면역세포의 활성을 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물의, 액체생산배지 조성중 물엿의 농도 변화에 따른 비장의 무게 지수를 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 펠리누스 질부스 균사체 추출물의, 액체생산배지 조성중 물엿의 농도 변화에 따른 비장내 면역세포의 분포를 나타낸 도이다.
Claims (8)
- 펠리누스 질부스(KCTC 26232)의 균사체 추출물을 함유하는 면역 활성 증강용 약학 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 면역 활성 증강은 B 세포 활성의 특이적 증가에 의한 것임을 특징으로 하는 약학 조성물.
- 펠리누스 질부스(KCTC 26232)의 균사체 추출물을 함유하는 면역 활성 증강용 식품 조성물.
- 제 3항에 있어서, 상기 면역 활성 증강은 B 세포 활성의 특이적 증가에 의한 것임을 특징으로 하는 식품 조성물.
- 2 중량% 설탕, 2.5~5.0 중량%의 물엿, 0.9 중량% 대두분을 포함하는 pH가 6.5인 펠리누스 질부스 배양용 액체생산배지.
- 제 5항에 있어서, 상기 물엿의 농도는 3.5 중량%인 것을 특징으로 하는 펠리누스 질부스 배양용 액체생산배지.
- 1) 수돗물에 말트 엑기스 2 중량%, 효모 엑기스 0.2 중량%를 혼합하여 초기 pH를 6.3으로 조정한 액체배지에서, 펠리누스 질부스 균사체를 7일간 종 배양하는 단계,2) 2 중량% 설탕, 2.5~5.0 중량% 물엿, 0.9 중량% 대두분을 넣고 초기 pH를 6.5로 조정한 액체생산배지에 상기 1)에서 제조한 종 배양액을 2% 접종하여 9일간 배양한 후, 배양액을 1500 xg에서 10분간 원심분리한 후 균사체를 얻는 단계, 및3) 상기 2)에서 제조한 균사체를 증류수로 10배 희석시켜 100℃에서 2시간동안 열수 추출하고 여과한 후, 여과액을 증류수로 희석하고 동결건조하는 단계로 이루어진 펠리누스 질부스 균사체의 배양 및 추출방법.
- 제 7항에 있어서, 상기 2)단계에서 물엿의 농도는 3.5 중량%인 것을 특징으로 하는 펠리누스 질부스 균사체의 배양 및 추출방법.
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