가시오가피, 백복령, 어성초, 감초, 녹용을 각각 동일량(중량)으로 조성하여 완전 건조한 후 건조 중량에 대하여 추출 용매로서 물, 에탄올, 메탄올, 에틸아세테이트, 헥산, 글리세린, 에틸렌글리콜, 부틸렌글리콜 및 프로필렌글리콜로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 용매를 1∼20배 부피량을 가한다. 추출방법으로는 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 50∼95℃, 4∼20시간 가열하여 추출하거나 5∼37℃에서 1∼15일간 침적시켜 유효성분을 추출하는 방법을 사용할 수 있다. 이렇게 추출한 추출물을 냉각 콘덴서가 달린 증류장치를 이용하여 증발되어 나오는 용매를 회수하면서 완전히 감압 농축한 후 그 건조중량으로서 0.001∼10%, 바람직하게는 0.001∼5%의 양으로 화장료에 첨가하는 것이다.
다시 말하면 유연화장수(스킨), 영양화장수(로숀), 영양크림, 맛사지크림, 엣센스, 팩, 유화형 화운데이션 등에 첨가하는 것이다. 아래의 실시예 및 실험예는 본 발명의 내용을 설명한, 본 발명의 내용이 여기에 한정되지는 않는다.
실시예 1.
정제수로 세척한 가시오가피 100g, 백복령 100g, 어성초 100g, 감초 100g, 녹용 100g을 30% 함수 에탄올 6kg에 넣고 추출기로 상온에서 5일간 추출한 후 400 메쉬 여과포로 여과하고 0.45um 의 필터 여과하여 추출액 4.8kg 을 얻었다.
실시예 2-9.
하기 표1의 용매를 사용하고 실시예 1과 동일한 방법으로 추출하여 그 결과를 하기 표 1에 기재하였다.
<표1>
|
용 매 |
수 득 량 (㎏) |
실시예 2 |
정 제 수 |
4.6 |
실시예 3 |
95% 에탄올 |
5.2 |
실시예 4 |
글 리 세 린 |
4.8 |
실시예 5 |
부틸렌글리콜 |
4.8 |
실시예 6 |
프로필렌글리콜 |
4.8 |
실시예 7 |
30% 함수프로필렌글리콜 |
4.6 |
실시예 8 |
30% 함수부틸렌글리콜 |
4.7 |
실시예 9 |
30% 함수글리세린 |
4.7 |
실시예 10.
정제수로 세척한 가시오가피 100g, 백복령 100g, 어성초 100g, 감초 100g, 녹용 100g을 30% 함수 에탄올 6kg에 넣고 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 80℃, 3시간 가열한 후 400메쉬 여과포로 여과한 후 0.45um 의 필터 여과하여 추출액 5.3kg을 얻었다.
실시예 11-18.
하기 표2의 용매를 사용하고 실시예 10과 동일한 방법으로 추출하여 그 결과를 하기 표 2에 기재하였다.
<표2>
|
용 매 |
수 득 량 (㎏) |
실시예 11 |
정 제 수 |
5.1 |
실시예 12 |
95% 에탄올 |
5.3 |
실시예 13 |
글 리 세 린 |
5.2 |
실시예 14 |
부틸렌글리콜 |
5.2 |
실시예 15 |
프로필렌글리콜 |
5.2 |
실시예 16 |
30% 함수프로필렌글리콜 |
5.3 |
실시예 17 |
30% 함수부틸렌글리콜 |
5.1 |
실시예 18 |
30% 함수글리세린 |
5.1 |
실시예 19.
정제수로 세척한 가시오가피 100g, 백복령 100g, 어성초 100g, 감초 100g, 녹용 100g을 30% 함수 에탄올 6kg에 넣고 추출기로 상온에서 6일간 추출한 후 400 메쉬 여과포로 여과하고, 0.45um의 필터 여과한다. 여과되어 나온 용액을 냉각 콘덴서가 달린 증류장치를 이용하여 감압 건조시켜 32g의 분말상태의 추출물을 얻었다
실시예 20-22.
하기 표3의 용매를 사용하고 실시예 19와 동일한 방법으로 추출하여 그 결과를 하기 표 3에 기재하였다.
<표3>
|
용 매 |
고 형 분 (㎏) |
실시예 20 |
물 |
38 |
실시예 21 |
95% 에탄올 |
30 |
실시예 22 |
50% 에탄올 |
32 |
실험1. 항염증 실험
본 추출물에 대한 항염증 효과를 알아보기 위하여 마우스 좌측귀를 대조부위, 우측귀를 시험부위로 하여 시료를 적용 전 에탄올로 귀를 깨끗하게 세척하고 시료 20㎕를 1일 1회 4일간 지속적으로 도포하고 마지막 도포 1시간 후에 좌측귀에 에탄올을 우측귀에는 아라키돈산(Arachidonic acid)을 2㎎/ear을 도포하여 1시간 후 귀의부종(ear edema)정도를 마이크로미터로 양쪽귀를 3회씩 반복 측정하였다.
항염효과는 아라키돈산(Arachidonic acid) 처리군을 기준으로 부종억제 정도로 판정하였으며 그 결과를 표5에 나타내었다.
<표5> 국소적용에 의한 귀두께 및 염증억제율
※ 억제율(%) = (A ̄B) / A ×100
A : 대조군귀의 평균두께(아라키돈산 처리귀의 두께 - 처리 전 귀의두께)
B : 시료도포군 귀의두께(아라키돈산 처리귀의 두께 - 처리 전 귀의 두께)
시 료 |
농도(%) |
용 매 |
귀두께(㎛ |
억제율(%) |
아라키돈산처리 전 |
아라키돈산처리 후 |
아라키돈산 |
- |
에탄올 |
277 |
570 |
- |
Indomethacin |
1 |
에탄올 |
273 |
415 |
51.5 |
실시예 1 추출물 |
2.5 |
에탄올 |
277 |
540 |
10.2 |
실시예 1 추출물 |
5 |
에탄올 |
265 |
531 |
9.2 |
실시예 2 추출물 |
5 |
에탄올 |
275 |
532 |
12.3 |
실시예 3 추출물 |
5 |
에탄올 |
290 |
556 |
9.2 |
실시예 4 추출물 |
5 |
에탄올 |
301 |
569 |
8.5 |
실시예 5 추출물 |
5 |
에탄올 |
257 |
521 |
9.9 |
실시예 6 추출물 |
5 |
에탄올 |
245 |
507 |
10.6 |
실시예 7 추출물 |
5 |
에탄올 |
275 |
543 |
8.5 |
실시예 8 추출물 |
5 |
에탄올 |
258 |
509 |
14.3 |
실시예 9 추출물 |
5 |
에탄올 |
292 |
563 |
7.5 |
실시예 10 추출물 |
5 |
에탄올 |
275 |
542 |
8.9 |
실시예 11 추출물 |
5 |
에탄올 |
274 |
538 |
9.9 |
실시예 12 추출물 |
5 |
에탄올 |
265 |
530 |
9.6 |
실시예 13 추출물 |
5 |
에탄올 |
254 |
519 |
9.6 |
실시예 14 추출물 |
5 |
에탄올 |
275 |
533 |
11.9 |
실시예 15 추출물 |
5 |
에탄올 |
292 |
558 |
9.2 |
실시예 16 추출물 |
5 |
에탄올 |
245 |
499 |
13.3 |
실시예 17 추출물 |
5 |
에탄올 |
285 |
544 |
11.6 |
실시예 18 추출물 |
5 |
에탄올 |
258 |
518 |
11.2 |
실험 2. 분말상 시료의 항염증 실험
분말상태의 추출물 0.5g을 100g의 에탄올에 녹여 실험 1과 동일한 방법으로 시행하였고 결과를 표6 에 나타내었다.
<표6> 국소적용에 의한 귀두께 및 염증억제율
시 료 |
농도(%) |
용 매 |
귀두께(㎛ |
억제율(%) |
아라키돈산처리 전 |
아라키돈산처리 후 |
아라키돈산 |
- |
에탄올 |
277 |
570 |
- |
Indomethacin |
1 |
에탄올 |
273 |
379 |
63.8 |
실시예 19 추출물 |
0.5 |
에탄올 |
276 |
539 |
10.2 |
실시예 20 추출물 |
0.5 |
에탄올 |
265 |
525 |
11.3 |
실시예 21 추출물 |
0.5 |
에탄올 |
273 |
539 |
9.2 |
실시예 22 추출물 |
0.5 |
에탄올 |
273 |
540 |
8.9 |
표 5, 6에서 보는 바와 같이 가시오가피, 백복령, 어성초, 감초, 녹용 혼합 추출물은 높은 염증 억제율을 보였다.
실험 3. 보습실험(1)
상기 가시오가피, 백복령, 어성초, 감초, 녹용 혼합 추출물 실시예 8에 대하여 보습 효과를 측정하기 위해 정제수, 가시오가피, 백복령, 어성초, 감초, 녹용 혼합 추출물을 각각의 Plate에 적정한 후, 완전 건조된 CaCl2를 흡습제로 사용하여 상대습도를 40%, 온도 35℃로 조절한 데시게이터에서 24시간 동안 방치하며 각 시료의 무게를 6회 측정하여 표 7에 나타내었다.
<표 7> 약전동싸리 추출물의 보습효과
흡습율(%) = (Wa-Wb) / Wa ×100
여기서 Wa는 방치 전의 시료 무게이며, Wb는 일정 시간 방치 후의 시료 무게이다.
시료측정시간 |
정 제 수 |
30% 함수부틸렌글리콜 |
가시오가피, 백복령, 어성초, 감초, 녹용 혼합 추출물 |
0 |
100.00 |
100.00 |
100.00 |
2 |
88.73 |
90.22 |
91.75 |
4 |
81.68 |
82.70 |
83.70 |
19 |
35.23 |
48.56 |
54.06 |
21 |
25.62 |
41.19 |
46.35 |
24 |
15.91 |
34.76 |
39.81 |
실험 4. 보습실험(2)
상기 가시오가피, 백복령, 어성초, 감초, 녹용 혼합 추출물 실시예 8에 대하여 Courage+Khazaka 사의 Corneometer CM 825를 사용하여 보습 효과를 측정하였다. 20대 여성 20명을 대상으로 상박부 2 ×2 ㎠ , 8구획을 물로 여러 차례 세정한 후 자극 없이 수분을 제거한다. 5분 경과 후, 정제수, 가시오가피, 백복령, 어성초, 감초, 녹용 혼합 추출물을 각각 2구획에 대하여 10㎕ 씩 점적하여 고르게 도포한다. 10분 후, Corneometer를 이용하여 하나의 구획 당 5회 측정한다. 1구획에 대하여 5분 간격으로 6회 측정한다. 실내온도는 20℃, 상대습도 20%였다. 그 결과는 표 8에 나타내었다.
<표 8> 가시오가피, 백복령, 어성초, 감초, 녹용 혼합 추출물의 보습효과(2)
흡습율(%) = 시료 도포 후 Corneometer Value - 시료 도포전 Corneometer Value이며, data 값은 20명에 대한 평균치로 나타냈다.
시료시간(분) |
정 제 수 |
30% 함수부틸렌글리콜 |
가시오가피, 백복령, 어성초, 감초, 녹용 혼합 추출물 |
10 |
15.2 |
23.8 |
29.5 |
15 |
10.4 |
12.5 |
18.7 |
20 |
4.2 |
9.8 |
15.9 |
25 |
3.5 |
7.6 |
13.1 |
30 |
1.9 |
6.9 |
11.8 |
35 |
0.6 |
5.5 |
8.9 |
40 |
0.0 |
5.2 |
7.7 |
실험 5. 피부자극성시험(폐쇄첩포실험)
본 추출물 1.0%, 3.0% 수용액 및 소디움라우릴설페이트0.08% 수용액을 건강한 성인 남,여 20명을 대상으로 등부위에 각 시료의 일정량(0.2g)을 24시간 첩포한 후 핀챔버를 제거하고 4시간 경과한 다음 육안으로 피부상태 변화를 판독하여 그결과를 표9에 나타내었다.
<표 9> 피부 자극성 시험결과
※ 판정기준 - : 홍반이나 특이한 현상 없음
+- : 주위보다 약간 붉어짐
+ : 주위보다 현저히 붉어짐
++ : 주위보다 심하게 붉어지고 부풀어오름
{(+-)수×1} + {(+)수×2} + {(++)수×3}
자극도 = ----------------------------------
피시험자수
시 료 |
피시험자 수 |
판 정 결 과 |
자극도 |
++ |
+ |
+- |
- |
소디움라우릴설페이트 0.08% |
20 |
1 |
1 |
3 |
16 |
0.4 |
정 제 수 |
20 |
0 |
0 |
3 |
17 |
0.15 |
실시예1 추출물1.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
0 |
1 |
1 |
18 |
0.15 |
실시예2 추출물3.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
0 |
2 |
0 |
18 |
0.2 |
실시예3 추출물3.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
0 |
2 |
1 |
17 |
0.25 |
실시예4 추출물1.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
0 |
1 |
3 |
16 |
0.25 |
실시예5 추출물3.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
0 |
2 |
3 |
15 |
0.35 |
실시예6 추출물3.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
1 |
0 |
2 |
17 |
0.25 |
실시예7 추출물1.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
0 |
1 |
4 |
15 |
0.3 |
실시예8 추출물3.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
0 |
0 |
2 |
18 |
0.1 |
실시예9 추출물3.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
0 |
1 |
2 |
17 |
0.25 |
실시예10 추출물3.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
0 |
2 |
3 |
15 |
0.35 |
실시예11 추출물1.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
1 |
1 |
1 |
17 |
0.3 |
실시예12 추출물3.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
0 |
0 |
3 |
17 |
0.15 |
실시예13 추출물3.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
1 |
1 |
2 |
17 |
0.35 |
실시예14 추출물3.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
0 |
2 |
0 |
18 |
0.2 |
실시예15 추출물1.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
0 |
2 |
2 |
16 |
0.3 |
실시예16 추출물3.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
0 |
0 |
4 |
16 |
0.2 |
실시예17 추출물3.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
1 |
2 |
0 |
17 |
0.25 |
실시예18 추출물1.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
0 |
3 |
0 |
17 |
0.3 |
실험 6. 분말상 시료의 피부1차 자극성시험(폐쇄첩포실험)
분말상태의 추출물 0.5g을 100g의 정제수에 녹여 실험5와 동일한 방법으로 시행하였고 결과를 표10에 나타내었다.
<표 10> 피부 자극성 시험결과
시 료 |
피시험자 수 |
판 정 결 과 |
자극도 |
++ |
+ |
+- |
- |
실시예19 추출물1.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
0 |
0 |
3 |
17 |
0.15 |
실시예20 추출물3.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
0 |
2 |
2 |
16 |
0.3 |
실시예21 추출물3.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
1 |
1 |
0 |
18 |
0.25 |
실시예22 추출물1.0%+소디움라우릴설페이트0.08% |
20 |
0 |
0 |
4 |
16 |
0.2 |
상기 실시예에서 제조 원료를 사용하여 아래 처방예와 같은 방법으로 제조하였다.
처방예 1.
가시오가피, 백복령, 어성초, 감초, 녹용 혼합 추출물을 함유한 화장료 중 화장수(스킨로션)의 처방예는 다음과 같다. 여기에서 가시오가피, 백복령, 어성초, 감초, 녹용 혼합 추출물은 실시예 8의 것이다.
번호 |
원 료 |
제형예 1 |
비교제형예 1 |
1 |
가시오가피, 백복령, 어성초, 감초, 녹용 혼합 추출물(실시예8) |
10.0 |
- |
2 |
글리세린 |
3.0 |
3.0 |
3 |
부틸렌글리콜 |
2.0 |
2.0 |
4 |
프로필렌글리콜 |
2.0 |
2.0 |
5 |
폴리옥시에칠렌(60)경화 피마자유 |
1.00 |
1.0 |
6 |
에탄올 |
10.0 |
10.0 |
7 |
트리에탄올아민 |
0.1 |
0.1 |
8 |
방부제 |
미량 |
미량 |
9 |
색소 |
미량 |
미량 |
10 |
향료 |
미량 |
미량 |
11 |
정제수 |
잔량 |
잔량 |
<제조방법〉
제형예 1 :11번에 2, 3, 4, 8번을 순서대로 투입하여 교반하여 용해시킨 후 5번을 60℃정도 가열하여 용해시킨 후 10번을 투입 교반하여 11번에 투입한다. 마지막으로 1, 6, 7, 9번을 투입하여 충분히 교반한 뒤 숙성시킨다.
비교제형예 1: 11번에 2, 3, 4, 8번을 순서대로 투입하여 교반하여 용해시킨 후 5번을 60℃정도 가열하여 용해시킨 후 10번을 투입 교반하여 11번에 투입한다. 마지막으로 6, 7, 9번을 투입하여 충분히 교반한 뒤 숙성시킨다.
처방예 2.
가시오가피, 백복령, 어성초, 감초, 녹용 혼합 추출물을 함유한 화장료 중 영양로숀의 처방예는 다음과 같다. 여기에서 가시오가피, 백복령, 어성초, 감초, 녹용 혼합 추출물은 실시예 8의 것이다.
번호 |
원 료 |
제형예 2 |
비교제형예 2 |
1 |
가시오가피, 백복령, 어성초, 감초, 녹용 혼합 추출물(실시예8) |
10.0 |
- |
2 |
시토 스테롤 |
1.70 |
1.70 |
3 |
폴리글리세릴 2-올레이트 |
1.50 |
1.50 |
4 |
세라마이드 |
0.7 |
0.7 |
5 |
세테아레스-4 |
1.2 |
1.2 |
6 |
콜레스테롤 |
1.5 |
1.5 |
7 |
디세틸포스페이트 |
0.4 |
0.4 |
8 |
농글리세린 |
5.0 |
5.0 |
9 |
선플라우어오일 |
10.0 |
10.0 |
10 |
카르복시비닐폴리머 |
0.2 |
0.2 |
11 |
산탄검 |
0.3 |
0.3 |
12 |
방부제 |
미량 |
미량 |
13 |
향료 |
미량 |
미량 |
14 |
정제수 |
잔량 |
잔량 |
<제조방법>
제형예 2 :원료물질 2, 3, 4, 5 및 6을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질이라 칭한다. 상기 비이온계 양친매성 지질과 원료물질 1, 7, 8 및 14을 혼합하고 일정한 온도에서 균질화한 후 원료물질 9를 일정한 온도에서 서서히 첨가하여 균질화 한다. 그 후 10, 11, 12, 13을 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시킨다.
비교제형예 2 :원료물질 2, 3, 4, 5 및 6을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질이라 칭한다. 상기 비이온계 양친매성 지질과 원료물질 7, 8 및 14를 혼합하고 일정한 온도에서 균질화한 후 원료물질 9를 일정한 온도에서 서서히 첨가하여 균질화 한다. 그 후 10, 11, 12, 13을 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시킨다.
처방예 3
가시오가피, 백복령, 어성초, 감초, 녹용 혼합 추출물을 함유한 화장료 중영양크림의 처방예는 다음과 같다. 여기에서 가시오가피, 백복령, 어성초, 감초, 녹용 혼합 추출물은 실시예 8의 것이다.
번호 |
원 료 |
제형예 3 |
비교제형예 3 |
1 |
가시오가피, 백복령, 어성초, 감초, 녹용 혼합 추출물(실시예8) |
10.0 |
- |
2 |
시토 스테롤 |
4.0 |
4.0 |
3 |
폴리글리세릴 2-올레이트 |
3.0 |
3.0 |
4 |
세라마이드 |
0.7 |
0.7 |
5 |
세테아레스-4 |
2.0 |
2.0 |
6 |
콜레스테롤 |
3.0 |
3.0 |
7 |
디세틸포스페이트 |
0.4 |
0.4 |
8 |
농글리세린 |
5.0 |
5.0 |
9 |
선플라우어오일 |
22.0 |
22.0 |
10 |
카르복시비닐폴리머 |
0.5 |
0.5 |
11 |
트리에탄올아민 |
0.5 |
0.5 |
12 |
방부제 |
미량 |
미량 |
13 |
향료 |
미량 |
미량 |
14 |
정제수 |
잔량 |
잔량 |
<제조방법〉
제형예 3 :원료물질 2, 3, 4, 5 및 6을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질이라 칭한다. 상기 비이온계 양친매성 지질과 원료물질 1, 7, 8 및 14를 혼합하고 일정한 온도에서 균질화 한다. 그리고 원료물질 9를 일정한 온도에서 서서히 첨가하여 균질화한 후 10, 11, 12, 13를 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시킨다.
비교제형예 3 :원료물질 2, 3, 4, 5 및 6을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질이라 칭한다. 상기 비이온계 양친매성 지질과 원료물질 7, 8 및 14를 혼합하고 일정한 온도에서 균질화 한다. 그리고 원료물질 9를 일정한 온도에서 서서히 첨가하여 균질화한 후 10, 11, 12, 13를 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시킨다.
시험예 1.
상기 처방예 1∼3에서의 제형예 1∼3과 비교 제형예 1∼3에 대하여 피부 자극 효과에 관한 실험을 다음과 같이 측정하였다.
제형 및 소디움라우릴설페이트 0.08% 수용액을 건강한 성인 남, 여 20명을 대상으로 등부위에 각 시료의 일정량(0.2g)을 24시간 첩포한 후 핀챔버를 제거하고 4시간 경과한 다음 육안으로 피부상태 변화를 판독하여 그 결과를 표11에 나타내었다.
<표11> 피부 자극성 시험결과
※ 판정기준 - : 홍반이나 특이한 현상 없음
+- : 주위보다 약간붉어짐
+ : 주위보다 현저히 붉어짐
++ : 주위보다 심하게 붉어지고 부풀어오름
{(+-)수×1} + {(+)수×2} + {(++)수×3}
자극도 = ----------------------------------
피시험자수
시 료 |
피시험자 수 |
판 정 결 과 |
자극도 |
++ |
+ |
+- |
- |
소디움라우릴설페이트 0.08% |
20 |
1 |
2 |
2 |
15 |
0.45 |
처방예1의 제형예1+소디움라우릴페이트 0.08% |
20 |
0 |
2 |
2 |
16 |
0.3 |
처방예1의 비교제형예2+소디움라우릴페이트 0.08% |
20 |
1 |
1 |
3 |
15 |
0.4 |
처방예2의 제형예2+소디움라우릴페이트 0.08% |
20 |
0 |
1 |
2 |
17 |
0.2 |
처방예2의 비교제형예2+소디움라우릴페이트 0.08% |
20 |
0 |
0 |
4 |
16 |
0.2 |
처방예3의 제형예3+소디움라우릴페이트 0.08% |
20 |
2 |
0 |
1 |
17 |
0.35 |
처방예3의 비교제형예3+소디움라우릴페이트 0.08% |
20 |
1 |
2 |
0 |
17 |
0.35 |