KR20040070688A

KR20040070688A - 지질대사개선효능을 갖는 미생물을 함유한 성인병 예방 및치료용 조성물 및 이의 용도

Info

Publication number: KR20040070688A
Application number: KR1020030006868A
Authority: KR
Inventors: 최현우; 전영민
Original assignee: 최현우; 전영민
Priority date: 2003-02-04
Filing date: 2003-02-04
Publication date: 2004-08-11
Also published as: KR100527103B1

Abstract

본 발명은 지질대사 개선효능을 가지는 미생물을 함유한 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 본 발명의 대두의 비지, 찹쌀 또는 쌀겨를 혼합한 배지에 유산균과 효모를 배양하여 수득한 미생물을 함유하는 지질대사와 관련한 성인병의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 미생물을 함유한 조성물은 혈중 중성지질 및 콜레스테롤의 함량을 유의적으로 억제하고, 활성산소 및 과산화지질을 효과적으로 억제하고 있으며, 활성산소종 제거효소활성을 증가시킴으로써 성인병 및 노화과정의 억제에 효과적인 의약품 및 건강기능식품을 제공할 수 있다.

Description

지질대사개선효능을 갖는 미생물을 함유한 성인병 예방 및 치료용 조성물 및 이의 용도{Composition comprising microorganism having lipid metabolism-improving activity for prevention and treatement of geriatric diseases and the use thereof}

본 발명은 대두의 비지, 찹쌀 또는 쌀겨를 혼합한 배지에 유산균과 효모를 배양하여 수득한 미생물을 함유하는 노화억제 및 지질대사와 관련된 성인병의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

성인병의 하나인 인슐린 비의존형 당뇨병 (type Ⅱ)은 우리나라 당뇨병 환자의 84%를 차지하고 있으며, 특히 type Ⅱ 당뇨병은 40대 이후의 성인중에서 비만형이고 활동량이 적은 사람 그리고 고혈압의 합병증과 혈중 중성지질의 함량이 높은 사람에게 많이 발병하는 특징을 갖고 있다. 이러한 당뇨병에서 동맥경화증을 비롯한 심혈관성 장애가 빈발하는 주된 요인의 하나로는 프리 라디칼(free radical)의 반응으로 지질과산화가 촉진된다는 연구 결과 [Bastar I,Res. Commun. Mol.Pathol. Pharmacol., 102(3), pp265-272, 1998]와 또한 산화적 스트레스에 대한 감수성이 높아 지질과산화가 쉽게 일어난다고 보고되어 있다 [Behrens WA, Madere R,Metabolism, 40(1), pp72-76, 1991].

인체 생리과정 중 발생하는 활성산소(O₂ ^-, H₂O₂, OH 및 O₂)는 반응성이 매우 강하여 이들에 의하여 야기되는 프리 라디칼 반응은 지질을 포함한 주요 거대분자의 파괴효과를 나타낸다 [Davies KJ, Goldberg AL,J. Biol. Chem., 262(17), pp8220-8226, 1987]. 이들은 정상적인 대사과정, 광증감반응, 약물대사과정 및 기타 세포대사의 이상을 초래하는 여러 요인에 의해 그 생성이 증가하며, 따라서 생체는 이들에 의하여 일어나는 프리라디칼 반응의 유해효과에 항상 노출되어 있다고 볼 수 있다 [Aust SD, Morehouse LA, Thomas CE,J. Free. Radic. Biol. Med., 1(1), pp3-25, 1985]. 특히 세포가 나이가 들어감에 따라 이들의 유해 라디칼에 의한 유해작용이 계속적으로 누적될 경우 발암, 동맥경화, 심장질환 및 피부노화 등 연령증가에 따른 여러 성인병과 관련된 질환은 물론 전반적인 세포의 노화를 야기하여 인간의 질병발생과 노화의 원인으로 제시되고 있다 [Harman D. 2001. Aging: overview.Ann. N. Y. Acad. Sci., 928, pp1-21, 2001]. 따라서 반응성 산소대사물에 의해 생체내 프리라디칼 반응을 억제시키거나 인체에 누적되어 있는 유해 활성산소를 제거함으로써, 지질대사, 면역질환 및 암 등의 질환 치료에 유용할 것으로 예상되는 후보물질을 찾고자 하는 연구들이 계속되어 왔다.

유산균은 정장작용 및 변비의 예방효과 [Mizutani T, Mitsuoka T,J. Natl.Cancer. Inst., 63(6), pp1365-1370, 1979; Reuter G,Zentralbl. Bakteriol. Mikrobiol. Hyg., 187(4-6), pp564-577, 1989], 면역증강효과 [Hosoi T et al.,Can. J. Microbiol., 46(10), pp892-897, 2000], 비피더스균의 산업화 [Roy DG et al.,Mol. Gen. Genet., 239(1-2), pp33-40, 1993] 등에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다. 특히 본 연구에 이용된 락토바실러스 훼멘텀(Lactobacillus fermentum)은 콜레스테롤 저하 효과 [Pereira DI, Gibson GR,Appl. Environ. Microbiol., 68(9), pp4689-4693, 2002], 지질과산화 억제 및 항산화 효소의 증가 [Kullisaar T, et al.,Int. J. Food Microbilol., 72(3), pp215-224, 2002; Gonzalez SN, et al.,Chem. Pharm. Bull., 37(11), pp3026-3028, 1989], 식후 혈당을 억제하는 물질인 아카보스(acarbose)의 분리 [Talamond P, et al.,Comp. Biochem. Physiol. B. Biochem. Mol. Biol., 133(3), pp351-360, 2002; Calderon Santoyo M, et al.,Int. J. Food. Microbiol., 80(1), pp77-87, 2003] 등에 대한 연구가 다수 보고되어 있다.

최 등이 개발한 (특허출원 2002-69983호) 락토바실러스 훼멘텀(식물성 유산균 음료), 즉 종래의 유산균과 달리 열과 산에 강하며 학설상 불가능하다고 하는 암모니아 성분을 분해하는 전혀 새로운 성질을 가지고 있는 균으로, 유산균의 장점과 효모의 장점을 공존시켜 배양한 균으로서 혈당강하 효과에도 탁월한 효능을 보인다.

따라서 본 발명자는 유산균과 효모의 섭취에 따른 지질대사와 관련된 성인병 치료 및 예방작용을 과학적으로 구명하기 위하여 본 발명의 미생물 함유 조성물을투여하여 중성지질, 콜레스테롤 함량 변화를 측정하고, 활성산소 및 과산화지질, 활성산소 제거효소활성을 측정한 결과, 본 발명의 조성물이 지질대사와 관련된 성인병 치료에 효과가 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 노화억제 및 지질대사와 관련된 성인병 예방 및 치료에 효과적인 유산균과 효모를 배양하여 만든 미생물 함유 조성물을 제공하는데 있다.

또한, 본 발명의 목적은 노화억제 및 지질대사와 관련된 성인병 예방 및 치료에 효과적인 약학조성물 및 기능성 식물성 유산균 제품을 제공하는 데 있다.

상기의 목적을 수행하기 위하여, 본 발명은 대두의 비지, 찹쌀 또는 쌀겨를 혼합한 배지에 유산균 또는 효모를 배양하여 수득한 미생물을 함유하는 노화억제 및 지질대사와 관련된 성인병의 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명에서 콩비지는 두부를 만들때 콩즙에서 두유를 뺀 나머지 찌꺼기를 사용한다. 즉, 대두유를 그대로 쓰는 것이 아니고 두유를 뺀 비지를 사용하므로 미생물 함유 조성물을 경제적인 방법으로 제공할 수 있다.

또한, 찹쌀에는 통상 멥쌀에 비하여 아미노 펙친을 많이 함유하고 있기 때문에 유산균과 효모의 발효율을 향상시킬 수 있으므로 찹쌀을 사용하는 것이 미생물 함유 조성물의 제조에 있어 더욱 효과적이다.

두부 제조시 생산되는 비지와 찹쌀과의 배합율은 전체 배지 조성물에 대하여 비지 약 70 중량 내지 약 95중량%, 찹쌀 약 30중량 내지 약 5중량%로 하여 전체 중량이 100% 되게 한다.

또한, 이 배지에는 쌀겨를 첨가할 수 있으며, 이 경우에는 전체 배지 조성물에 대하여 콩비지, 찹쌀 및 쌀겨의 질량 비율은 약 80중량% 내지 약 90중량%, 약 15중량% 내지 약 7중량% 및 약 5중량% 내지 약 3중량%로 전체 100중량%가 된다.

본 발명에서 사용하는 유산균으로는, 예를 들어, 락토바실러스 훠멘텀(Lactobacillus Fermentum), 락토바실러스 아시도휠러스(Lactobacillus Acidophilus), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus Casei), 락토바실러스 델브루에키(Lactobacillus Delbrueckii), 락토바실러스 아라비노수스(Lactobacillus Arabinosus), 락토바실러스 카우카시커스(Lactobacillus Caucasicus), 락토바실러스 락티스(Lactobacillus Lactis), 락토바실러스 레이시매니(Lactobacillus Leishmanni), 락토바실러스 무시커스(Lactobacillus Musicus), 락토바실러스 테르모휠러스(Lactobacillus Thermophilus), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus Plantarum), 스트렙토코커스 테르모휠러스(Streptococcus Thermophillus), 스트렙토코커스 훼칼리스(Streptococcus Faecalis), 스트렙토코커스 랙티스 (Streptococcus Lactis), 스트렙토코커스 불가리커스(Streptococcus Bulgaricus), 및 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc Mesenteroides)의 속에서 하나 이상을 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명에서 사용하는 유산균으로는 보통의 방법보다 동결 건조하여 제조한것 혹은 냉장 보관한 것을 사용할 수 있다. 또한 일반적인 동물성 유산균은 열이나 산에 약하기 때문에 식물성 유산균, 예를 들어, 락토바실러스 훠멘텀 (Lactobacillus Fermentum)을 사용하는 것이 바람직하다.

또한 본 발명에서 사용하는 효모는, 예를 들어 피치아 크루이베리(Pichia Kluyveri), 사카로마이세스 세리비시에(Saccharomyces Cerevisiae), 사카로마이세스 파스토리아누스(Saccharomyces Pastorianus), 사카로마이세스 인터메디우스 (Saccharomyces Intermedius), 사카로마이세스 발리더스(Saccharomyces Validus), 사카로마이세스 엘립소이듀스(Saccharomyces Ellipsoideus), 사카로마이세스 말리시슬러(Saccharomyces Malisisler), 사카로마이세스 멘드슈리커스(Saccharomyces Mandshuricus), 사카로마이세스 보르데르만니(Saccharomyces Vordermannii), 사카로마이세스 페카(Saccharomyces Peka), 사카로마이세스 삿싱(Saccharomyces Shasshing), 사카로마이세스 피리훠미스(Saccharomyces Piriformis), 사카로마이세스 아나멘시스(Saccharomyces Anamensis), 사카로마이세스 카틸라지노서스 (Saccharomyces Cartilaginosus), 사카로마이세스 아와모리(Saccharomyces Awamori), 사카로마이세스 바타테(Saccharomyces Batatae), 사카로마이세스 코리너스 (Saccharomyces Coreanus), 사카로마이세스 로버스투스(Saccharomyces Robustus), 사카로마이세스 칼스버젠시스(Saccharomyces Carlsbergensis), 사카로마이세스 모나센시스(Saccharomyces Monacensis), 사카로마이세스 마시안너스(Saccharomyces Marxianus), 지고 사카로마이세스 메저(Zygo Saccharomyces Major), 사카로마이세스 랙티스(Saccharomyces Lactis), 사카로마이세스 루시(Saccharomyces Rouxii), 그리고 한세누라 아노마라(Hansenula Anomala)로 이루어진 군에서 하나 이상을 선택하여 사용할 수가 있으며, 피치아 크루이베리(Pichia kluyveri)를 사용하는 것이 바람직하다.

또한, 배지에서 식균할 때 유산균과 효모와의 균수 비율은 약 1:10 내지 10:1의 범위에서 설정할 수가 있다.

배지에서 유산균과 효모를 식균한 후에는 비교적 저온, 예를 들어, 약 10℃ 내지 20℃에 두어 수일 내지 수십일, 예를 들어 10일 내지 50일간 배양시킨다.

이렇게 하여 배양된 유산균과 효모와의 공존물을 본 명세서 중에서 모균이라고 한다. 모균(배지를 포함)에는 1g 중에 약 10⁸개 정도의 균체가 함유되어 있다. 상기 모균은 약 4℃에 두면 장기간에 걸쳐 보존할 수가 있다. 그리고 이 경우에는 공기(혹은 산소)를 뺀 상태로 다시 말해서 진공팩(혹은 탈산소팩) 중에서 보존하여 두는 것이 좋다. 또한 모균에는 적당한 산소(예를 들면, 파파야 산소 등)를 함유시켜 두기도 한다.

하기에 기술하는 바와 같이 모균은 대단히 유용한 조성물이므로 용도에 따라서는 반드시 모균을 그대로 사용할 필요가 없는 경우가 많다.

여기서 모균을 이차적으로 배양하여 원균을 제조하여 그 원균을 이용할 수가 있다, 모균의 중량 1에 대하여 물 약 5 내지 20배 중량만큼, 바람직하게는 약 8 내지 12 배 중량만큼을 첨가한 상태에서 휘저은 후 혼합액을 약 35℃ 내지 45℃에서 약 2 내지 5일간, 바람직하게는 약 3 내지 4일간 배양한다.

이렇게 하여 얻은 균을 1차 원균이라 한다. 1차 원균에는 수 종류의 균이 포함되어 있으므로 그 균명을 한정하지 않고 1차 원균이라고 한다. 1차 원균에는 1㎖당 약 2×10⁷개의 유산균이 함유되어 있다.

다시 1차 원균의 중량 1에 대하여 물 약 2 내지 8배 중량만큼, 바람직하게는 약 4 내지 6배 중량만큼을 첨가한 상태에서 휘저은 후 이 혼합액을 약 35℃ 내지 45℃에서 약 2일간 내지 5일간, 바람직하게는 약 3일간 내지 4일간 배양한다. 이렇게 하여 얻은 균을 2차 원균이라고 한다. 상기 2차 원균에는 1㎖당 약 1.5 ×10⁷개의 유산균이 함유되어 있다.

모균을 2회 배양하게 되면 모균에 함유되어 있는 콩비지 및 쌀겨의 탁도가 엷어져 투명도가 향상되므로 사용범위를 넓힐 수 있다.

본 발명에 의해 제조된 미생물 함유 조성물의 지질대사와 관련된 성인병 효능을 구명하기 위한 수단으로서, 동맥경화지수, 총콜레스테롤, 중성지질, 프리라디칼 및 항산화 효소를 동물 실험에 의해 확인한 결과, 지질대사와 관련된 성인병이 대조군 및 동물성 유산균 음료보다 뛰어난 결과를 얻었다.

또한, 본 발명은 상기 제법으로 제조된 미생물(모균 또는 원균)을 유효성분으로 함유하는 지질대사와 관련된 성인병 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.

상기 성인병은 고혈압, 관상동맥질환, 지방간 또는 간손상, 동맥경화증, 동맥경화증으로 인한 합병증, 심근경색, 비만, 고중성지방혈증 등의 다양한 고지혈증, 골다공증, 갱년기증세, 퇴행성 관절염, 중풍질환 등을 포함한다.

또한, 본 발명은 상기 제법으로 제조된 미생물을 유효성분으로 함유하는 노화억제용 약학조성물을 제공한다.

본 발명의 미생물을 함유하는 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 트레할로스, 폴리덱스트로스(폴리덱스트린) 및 광물유를 들 수 있다.

본 발명의 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물의 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 10 내지 500 ㎖의 양을 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다. 또한 그 추출물의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

또한 본 발명의 조성물은 기타 식품의 주, 부원료 및 식품첨가제로서 사용이 가능하다.

본 발명은 대두의 비지와 찹쌀을 혼합한 배지에 유산균 및 효모를 배양하여 얻어진 미생물을 주성분으로 함유하는 식품첨가물을 제공하며, 상기식품첨가물을 식품소재(부원료)로 사용하는 것을 특징으로 하는 식품첨가물의 이용방법을 제공한다.

또한 본 발명은 지질대사능과 관련된 성인병 치료 및 예방을 위한 상기 미생물 함유 조성물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 조성물은 지질대사능과 관련된 성인병 예방 및 치료를 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있다.

본 발명의 유산균 자체는 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.

본 발명의 상기 조성물은 지질대사능과 관련된 성인병 예방을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강 식품 조성물은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 % 중량으로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며, 통상의 음료와 같이 여러가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린, 트레할로스등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명은 다음의 실시예에 의거하여 더욱 상세히 설명되나, 본 발명이 이에 의해 제한되지는 않는다.

실시예 1. 모균의 제조 (1)

콩비지 180kg과 찹쌀 20kg을 포함한 배지에 유산균(Lactobacillus fermentum) 0.2g과 효모(Pichia kluyveri) 0.2g을 접종하였다. 유산균과 효모와의 균수는 합계로 약 10⁵내지10⁷개로 적의 변경하여 그 균수비는 약 1:10 내지 10:1의 사이로 적당히 설정하였다.

상기 유산균과 효모를 접종한 배지를 약 10℃ 내지 20℃ 사이에 설정한 저온실에 넣어 약 30일 동안(배양일수는 배지의 상태에 따라 약 10일 내지 50일 사이에서 적당히 변경하였다.) 배양하여 모균 200kg을 제조하였다. 상기 모균은 공기의 통과를 차단하는 진공팩에 밀봉한 다음 약 4℃에 보존하면 장기간, 예를 들어, 수개월 내지 수년에 걸쳐 보존할 수가 있다.

하기 실시예 3의 원균을 제조하는 경우에는, 장기간에 걸쳐 저온 보존한 모균을 사용하였다. 역시 이 모균에는 1g 당 약 10⁸개의 유산균과 효모가 포함되어 있다.

실시예 2. 모균의 제조(2)

콩비지 170kg과 찹쌀 22kg 및 쌀겨 8kg을 합한 배지에 유산균(Lactobacillus fermentum)과 효모(Pichia kluyveri)를 접종하였다. 유산균과 효모와의 균수비는 상기 모균의 제조(1)에서와 같다.

이렇게 하여 식균한 배지를 상기 모균의 제조(1)에서와 같이 처리하여 모균200kg을 제조하였다. 그리고 이 모균에는 상기와 같이 1g당 약 10⁸개의 유산균과 효모가 함유되어 있다.

실시예 3. 1차 원균의 제조

상기한 바와 같이 제조한 모균에 1kg에 대하여 지하수를 질량의 약 8 내지 12배를 첨가하여 휘저어 혼합한 물을, 약 40℃에서 3일 내지 4일간 배양하였다. 이렇게 하여 얻어진 1차 원균의 1㎖ 중 유산균수 약 10⁷개와효모수 10⁶개의 양으로 미생물을 수득하였다.

실시예 4. 2차 원균의 제조

위에서와 같이 제조한 1차 원균의 질량 1에 대하여 지하수를 질량의 약 4 내지 6배를 첨가한 상태에서 휘저어 혼합한 물을 40℃에서 3일 내지 4일간 배양하였다.

이렇게 하여 얻어진 2차 원균의 1㎖ 중에는 약 1.5×10⁷개의 유산균이 함유되어 있었다.

실험예 1. 지질대사능과 관련된 치료 및 예방효과 실험

본 발명의 식물성 유산균의 지질대사능과 관련된 성인병 치료 효능을 확인하기 위하여 하기와 같은 동물 실험을 수행하였다.

1-1. 실험동물의 준비

본 동물실험에서 사용한 실험동물은 C57BL/6J-Lep^ob(ob mouse)는 비만형 당뇨연구실험에 사용되는 동물로써 미국 잭슨 연구실(The Jackson Laboratory, JAX)에서 구입하였으며, 실험동물사육시설은 SPF 배리어 시스템(barrier system)에서 행하여졌으며, 본 실험에 이용한 시험동물의 경우는 3-4주령이 되면 비만을 나타내는 동물을 선별하여 사용하였으며, 시험동물의 연령은 9주령의 수컷을 이용하였다. 시험 직전에 체중과 혈당(basal blood glucose)를 측정하여 평균 수치가 각 군마다 비슷하게 조정하여 사용하였는데, 이 때의 평균 혈당치는 380~430mg/㎗ 내외로 하였다.

1-2. 미생물 함유 조성물 준비 및 투여

본 실험에 이용한 미생물 함유 조성물 1 (Lac.F-100)은 실시예 3의 원균 100%로 된 것으로, 원균 1㎖당 유산균수는 약 2 ×10⁷개이다.

미생물 함유 조성물 1, 상기 조성물 1 을 두 배로 묽힌 미생물 함유 조성물 2 (Lac.F-50), 시판중인 동물성 유산균 음료 (HYW-100, 한국야구르트(주) 발효유 윌(will)), 그리고 이 음료를 두배로 묽힌 동물성 유산균 음료 (HYW-50)를 프리로이 섭취할 수 있도록 물병에 넣어 3주동안 투여하였다. 또한 대조군(Control group)은 물만을 물병에 넣어 자유로이 섭취할 수 있도록 투여하였다.

1-3. 혈액 중 중성지질, 단백질 및 콜레스테롤 함량 측정

성인병의 원인물질로 알려진 중성지질 (triglyceride: TG)과 콜레스테롤 및 리포단백 콜레스테롤의 함량에 미치는 효과를, 본 발명의 미생물 함유 조성물 1, 2 (Lac.F-100 및 Lac.F-50) 및 동물성 유산균 음료 (HYW-100, 50)를 각각 자유롭게 섭취토록 하면서 약 3주간의 투여의 영향을 비교 관찰하였다.

1-3-1. 혈액의 채취 및 분리

실험동물을 에테르로 마취시킨 후, 심장에서부터 혈액을 분취하여 저온에서 2시간동안 방치하여 700×g에서 10분간 원심분리하여 상등액(혈청)을 항응고제(sodium heparin)가 혈액 1.0㎖당 0.05㎖로 처리된 CBC병 (complete blood cell count; 녹십자)에 넣고, -70℃에서 동결 보존하면서 분석에 사용하였다.

1-3-2. 중성지질, 단백질 및 콜레스테롤 함량의 측정

상기에서 수득한 혈청 중의 중성지질로서 트리글리세리드 (triglyceride : TG)의 함량은 혈청 중성지질 측정용 TG 킷트시약 (Sigma, 미국)로 처리하여 표준 검량선에 의거, 혈청중의 중성지질의 함량을 정량하였다.

혈청 중의 단백질의 함량 [Lowry OH, et al.,J. Biol. Chem.,193, pp265-275, 1951]은 BSA (표준혈청 알부민) 방법에 따라 측정하였다.

총 콜레스테롤의 함량 [Rudel LL and Morris MD,J. Lipid. Res., 14, pp364-366, 1973]은o-프탈알데히드 (phthalaldhyde) 법으로 측정하여 표준 검량선에 의하여 혈액 중의 총 콜레스테롤의 함량을 측정하였다. 혈청 중의 저밀도리포단백 (LDL) 및 고밀도리포단백 (HDL)-콜레스테롤의 함량은 킷트시약 (HDL-C 555, Eiken, 일본), LDL-콜레스테롤 (BLF, Eiken, 일본)의 방법에 따라 측정하였다.

성인병의 초기증상으로 알려진 동맥경화증의 발병지표로서 활용되고 있는 동맥경화지수 (atherogenic index : AI)는 문헌 [Haglund O, et al.,J. Nutr., 121, pp165-169, 1991]의 방법에 따라 (총 콜레스테롤-HDL 콜레스테롤)/HDL 콜레스테롤의 식에 의거하여 정량하였다.

표 1에서 보는 바와 같이, 미생물 함유 조성물 1, 2를 투여한 군의 중성지질과 총 콜레스테롤의 함량은 각각 대조군 대비 8.6 내지 12.8% 및 6.6 내지 15.8%나 현저히 억제됨을 알 수 있다. 실제 성인병의 발병과 직접 관계가 있는 LDL-콜레스테롤의 억제효과를 비교하여 보면 대조군 대비 약 18.8 내지 25.3% 이상의 억제효과가 인정되었다. 또한 성인병의 초기 발병지표로 알려진 동맥경화지수 (atherogenic index : AI)도 본 발명의 미생물 함유 조성물 투여군에서는 거의 37.2 내지 56.2%나 현저하게 억제됨을 알 수 있다. 이러한 동맥경화지수의 감소가 LDL-콜레스테롤의 함량의 감소와 거의 일치하고 있다는 사실은 매우 흥미로운 사실이다. 왜냐하면 LDL-콜레스테롤의 함량과 동맥경화지수의 증가가 바로 성인병의 발병과 밀접한 관계가 있음을 시사하고 있기 때문이다. 항콜레스테롤 인자로 널리 알려진 특히 운동 및 장수와 연관성이 높은 HDL-콜레스테롤의 수치 역시 본 발명의 미생물 함유 조성물 투여군이 16.9 내지 21.5%나 증가되었다는 것으로 성인병의 예방에 매우 효과적인 사실이 확인되었다.

동물성 유산균 음료 역시 대조군 대비 중성지질 및 LDL-콜레스테롤의 수치 역시 억제함을 보여주었다. 그러나 본 발명의 미생물 함유 조성물에 비교하면 그 억제정도가 약하다는 것을 보여주고 있다.

결론적으로 본 발명의 미생물 함유 조성물은 중성지질 함량을 억제할 것으로 판단되고, 지질대사에 중요한 역할을 담당하는 혈중 콜레스테롤의 함량을 유의적으로 억제하므로 성인병의 예방에도 큰 도움을 줄 것으로 기대된다.

지질대사에 미치는 본 발명의 미생물 함유 조성물의 영향

항 목	대조군	미생물 함유 조성물 1Lac.F-100	미생물 함유 조성물 2Lac.F-50	동물성 유산균 음료-100	동물성 유산균 음료-50
단백질(㎎/㎖ 혈청)	25.52±0.59^*(100.0%)	25.92±0.66(101.6%)	26.96±0.33^b(105.6%)	27.17±0.41^c(106.5%)	27.23±0.34^c(106.7%)
중성지질(㎎/㎗ 혈청)	137.53±1.38(100.0%)	119.90±0.41^c(87.2%)	125.65±7.16^b(91.4%)	124.59±4.82^c(90.6%)	129.71±2.34^c(94.3%)
총콜레스테롤(㎎/㎗ 혈청)	123.96±6.93(100.0%)	104.34±2.24^c(84.2%)	115.73±3.24^a(93.4%)	112.61±5.46^a(90.8%)	121.82±4.56(98.3%)
LDL-콜레스테롤(㎎/㎗ 혈청)	112.04±5.79(100%)	83.64±0.48^c(74.7%)	90.94±1.79^c(81.2%)	91.88±2.28^c(82.0%)	95.47±3.45^c(85.2%)
HDL-콜레스테롤(㎎/㎗ 혈청)	56.03±2.91(100.0%)	68.08±0.97^c(121.5%)	65.48±0.39^c(116.9%)	59.18±2.13(105.6%)	58.22±1.16(103.9%)
동맥경화지수 (AI)	1.21±0.13(100.0%)	0.53±0.10^c(43.8%)	0.76±0.08^c(62.8%)	0.90±0.16^a(74.4%)	1.09±0.17(90.1%)
^평균값 ± S.E. (n=5).^*대조군 대비^ap<0.05;^bp<0.01;^cp<0.001

실시예 2. 활성산소 및 과산화지질 (LPO), 활성산소 제거효소의 측정

본 발명의 미생물을 함유한 조성물의 지질과산화에 대한 영향 및 항산화에 대한 효과를 알아보기 위하여, 조성물 투여후 혈중의 지질과산화, 히드록시 라디칼, 슈퍼옥시드 라디칼, 슈퍼옥시드 디스무타아제, 글루타치온 퍼옥시다제의 함량을 측정하였다.

활성산소 중에서 가장 강력한 프리 라디칼 (free radicals)로 알려진 히드록시 라디칼의 측정은 데옥시리보스 (Deoxyribose)의 파괴 정도로 히드록시 라디칼 (hydroxyl radical) 생성 정도를 측정하는 방법으로서 반응성 산소대사물에 의해 데옥시리보스가 파괴되어 알데히드가 생성되며 이 알데히드는 산성용액에서 티오바비튜릭 산과 반응하여 발색되는 것을 이용한 [Halliwell B and Gutteridge JMC,FEBS Lett.,128, pp347-350, 1981] 방법에 따라 측정하였다.

이들 활성산소 (oxygen radicals)에 의해서 생성되는 것으로 알려진 혈청중의 과산화지질 (lipid peroxide : LPO)의 함량은 [Choi JH and Yu BP,AGE,17, pp93-97, 1994] 기재된 바와 같이 측정하였다.

활성산소종의 제거효소로서 중요한 수퍼옥시드 디스무타아제 (SOD)활성의 측정은 [Oyanagui Y,Anal. Biochem., 42, pp290-296, 1984] 방법에 따라 정량하였다. 또한 생체 내의 중요한 제거효소로서 340㎚에서 NADPH의 감소를 측정하기 위한 방법으로 혈청 중의 글루타치온 퍼옥시다아제 (glutathione peroxidase: GSHPx)의 활성을 측정하였다 [Lawrence RA and Burk RF,Lipid,19, pp444-452, 1978].

본 발명의 미생물을 함유한 조성물 1, 2 (Lac.F-100, 50) 투여가 비만(obese) 마우스의 혈액 중의 지질과산화에 미치는 영향으로서 활성산소 중에서 프리 라디칼 중 초기 단계에서 발생하는 활성산소로 보고되어 있는 수퍼옥시드 라디칼 (superoxide radical)과 가장 강력한 프리 라디칼로 알려진 히드록시 라디칼(hydroxyl radical)의 생성과 이 때 생성되는 과산화지질 (lipid peroxide : LPO)의 함량을 비교하여 보면 표 2와 같다. 또한 생체방어효소로서 수퍼옥시드 디스무타아제 (superoxide dismutase : SOD), 글루타치온 퍼옥시다아제 (glutathione peroxidase : GSHPx) 등은 체내에 존재하는 강력한 항산화효소로서 널리 알려져 있는데, 이들의 생성량을 표 2에 제시하였다.

표 2에서 보는 바와 같이 미생물 함유 조성물을 투여에 의해 거의 8.4 내지 13.8%의 히드록시 라디칼의 생성을 매우 효과적으로 억제하고 있었으며, 또한 10.1 내지 17.1%나 수퍼옥시드 라디칼의 활성 역시 효과적으로 억제하고 있었다. 이러한 본 발명의 미생물 함유 조성물의 투여로 인한 프리 라디칼의 활성을 억제함으로 인하여 이 때 생성되는 과산화지질의 함량 역시 10.6 내지 14.3%나 억제하고 있음을 알 수 있었다.

상기의 결과로, 본 발명의 미생물 함유 조성물은 강력한 활성산소로서의 히드록시 라디칼 및 수퍼옥시드 라디칼 등의 프리 라디칼의 생성을 억제할 수 있을 뿐만 아니라 성인병의 발병이나 노화와 밀접한 관계가 있는 것으로 알려진 과산화지질의 생성도 아주 효과적으로 억제한다는 사실을 알 수 있었다.

또한, 본 발명의 미생물 함유 조성물의 투여가 활성산소를 무력화 시키는 항산화효소가 바로 제거효소인데, 그 중에서 가장 강력한 제거효소인 SOD의 활성에 미치는 영향을 비교하여 보면 대조군과 비교하였을 때 15.2 내지 21.7%로서 효과적으로 활성이 증가하고 있음을 알 수 있었다. 또한 GSHPx의 활성 역시 대조군 대비 거의 8.7 내지 18.0%로서 생체내의 항산화효소를 생산하고 있음을 증명하였다.

본 연구에서 이용된 미생물 함유 조성물는 이러한 활성산소종의 생성을 억제할 뿐만 아니라 이와 상반되는 항산화효소를 유의적으로 상승시킴으로 성인병 뿐만 아니라 노화과정의 억제도 관여할 것으로 판단된다.

노화방지 효과에 미치는 본 발명의 미생물 함유 조성물의 영향

항목	대조군	미생물 함유조성물 1Lac.F-100	미생물 함유조성물 2Lac.F-50	동물성 유산균 음료-100	동물성 유산균 음료-50
지질과산화 (LPO)(nmol/㎖ 혈청)	5.10±0.23^*(100.0%)	4.37±0.15^c(85.7%)	4.56±0.28^b(89.4%)	4.49±0.39^a(88.0%)	4.52±0.33^a(88.6%)
히드록시 라디칼(nmol/㎎ 단백질)	4.27±0.42(100.0%)	3.68±0.27^a(86.2%)	3.91±0.13(91.6%)	3.80±0.13(89.0%)	3.92±0.10(91.8%)
수퍼옥시드 라디칼(nmol/㎎ 단백질)	86.60±3.01(100.0%)	71.75±3.11^c(82.9%)	77.84±4.86^b(89.9%)	78.30±4.11^b(90.4%)	82.24±0.90^a(95.0%)
수퍼옥시드 디스무타아제 (SOD)(unit/㎎ 단백질)	212.83±7.97(100.0%)	258.98±5.51^c(121.7%)	245.28±3.06^c(115.2%)	257.30±8.62^c(120.9%)	242.44±5.33^c(113.9%)
글루타치온 퍼옥시다아제(GSHPx)(IU/g 단백질)	7.32±0.24(100.0%)	8.64±0.57^b(118.0%)	7.96±0.11^b(108.7%)	7.91±0.52(108.1%)	7.54±0.55(103.0%)
^평균값±S.E. (n=5).^*대조군 대비^ap<0.05;^bp<0.01;^cp<0.001

실험예 3. 급성독성 실험

ICR계 마우스와 스프라그 도올리(Sprague Dawley, 대구효창사이언스)를 각각 10마리씩 4군으로 나누어 본 발명의 실시예 3의 원균함유 조성물을 각각 500, 725, 1000 및 5000 mg/kg의 용량으로 경구투여한 후 2주간 독성여부를 관찰한 결과 4군 모두에서 사망한 예가 한 마리도 없었고 외견상 대조군과 별다른 증상을 찾아볼 수 없었다.

이상의 결과에서 본 발명의 조성물은 급성독성이 거의 없음이 확인되었다.

하기에 상기 약학조성물의 제제예를 설명하나, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 정제의 제조

실시예 3의 원균 건조물 200mg

유당 100mg

전분 100mg

스테아린산 마그네슘 적 량

상기의 성분을 혼합하고 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

제제예 2. 캡슐제의 제조

실시예 3의 원균 건조물 100mg

유당 50mg

전분 50mg

탈크 2mg

스테아린산 마그네슘 적 량

상기의 성분을 혼합하고 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에충전하여 캡슐제를 제조하였다.

제제예 3. 액제의 제조

실시예 3의 원균 건조물 1000mg

설탕 20g

이성화당 20g

레몬향 적량

정제수를 가하여 전체 100㎖으로 맞추었다.

상기의 성분을 통상의 액제의 제조방법에 따라서 혼합하고 100㎖ 의 갈색병에 충전하고 멸균시켜서 액제를 제조하였다.

제제예 4. 건강음료의 제조

실시예 3 원균 0.1 ∼ 80%

설탕 5 ~ 10%

구연산 0.05 ~ 0.3%

캬라멜 0.005 ~ 0.02%

비타민C 0.1 ~ 1%

여기에 정제수 79 ~ 94%를 섞어서 시럽을 만들고, 상기 시럽을 85~98 ??에서 20~180초간 살균하여 냉각수와 1 : 4의 비율로 혼합한 다음 탄산가스를 0.5~0.82%를 주입하여서 제조되는 미생물을 함유하는 탄산음료를 제조하였다.

액상과당 (0.5%), 올리고당 (2%), 설탕 (2%), 식염 (0.5%), 물 (75%)와 같은 부재료와 실시예 3 원균을 균질하게 배합하여 순간살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강음료를 제조하였다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

이와같이, 본 발명의 대두의 비지와 찹쌀 및 쌀겨를 혼합한 배지에 유산균 또는 효모를 배양하여 수득한 미생물을 함유한 조성물은 순수한 식물성 유산균으로서 현재 시중에 나와있는 동물성 유산균 음료보다 지질대사개선에 효과적임을 확인하였다. 본 발명의 미생물 함유 조성물은 지질대사와 관련된 성인병 예방 및 치료에 뛰어난 효과가 있으므로 생물의약 산업상 및 건강기능식품으로 매우 유용한 발명이다.

Claims

대두의 비지 및 찹쌀을 혼합한 배지에 유산균과 효모를 배양하여 수득한 미생물을 함유하는 노화억제 및 지질대사와 관련된 성인병 예방 및 치료용 약학 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 배지에 쌀겨를 추가로 함유하는 것을 특징으로 하는 약학조성물.
제 1항에 있어서, 유산균은 락토바실러스 훠멘텀(Lactobacillus fermentum)이고, 효모는 피치아 크루이베리(Pichia kluyveri)인 약학조성물.
제 1항에 있어서, 성인병은 고혈압, 관상동맥질환, 지방간 또는 간손상, 동맥경화증, 동맥경화증으로 인한 합병증, 심근경색, 비만, 고중성지방혈증 같은 고지혈증, 골다공증, 갱년기 증세, 퇴행성 관절염, 중풍질환인 약학조성물.
노화억제 및 지질대사 관련 성인병 예방을 위한 대두의 비지와 찹쌀을 혼합한 배지에 유산균 및 효모를 배양하여 얻어진 미생물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 건강기능식품.
제 5항에 있어서, 건강음료인 건강기능식품.
대두의 비지와 찹쌀을 혼합한 배지에 유산균 및 효모를 배양하여 얻어진 미생물을 주성분으로 함유하는 식품첨가제.
제 7항의 식품첨가물을 식품소재(부원료)로 사용하는 것을 특징으로 하는 식품첨가물의 이용방법.