KR20030085257A - 유핵세포 분리용 혈액백 및 이를 이용한 유핵세포 분리방법 - Google Patents

Abstract

제대혈로부터 유핵세포의 분리를 위생적으로 간편하게 하는 혈액백 및 이를 이용한 유핵세포 분리방법에 대해 개시한다. 이 혈액백은 제대혈이 채집되는 제1혈액백(10)과 채집된 제대혈로부터 조혈모세포를 함유하는 유핵세포층이 분리되는 제2혈액백(20)을 구비하며, 이들 제1,2혈액백은 연결튜브(12)에 의해 상호 연통되는 구조를 가진다. 제1혈액백(10)은 선단에 태반 또는 탯줄로부터 제대혈을 채취하기 위한 채혈침기(14)가 마련된 채혈튜브(11)와, 채혈된 제대혈을 채취하여 샘플링하고 유핵세포층분리제제를 투입하기 위한 제1포트(13)를 구비한다. 제2혈액백은 연결튜브(12)를 통하여 제1혈액백(10)으로부터 조혈모세포가 함유된 유핵세포가 이동되며, 제1혈액백으로부터 이동된 혈장의 일부를 배출시키기 위한 배출튜브(21)가 마련되어 있다. 제2혈액백에는 동결보존액을 주입하고 샘플을 채취하기 위한 제2포트(22)와, 수용된 유핵세포를 취출하기 위한 제3포트(23)가 더 구비되어 있다. 이와 같은 혈액백 및 이를 이용한 유핵세포분리방법은 제대혈의 채집 및 이로부터 유핵세포층의 분리를 별도의 임시 혈액저장백에 이동시키지 아니하고 상호 연결된 제1,2혈액백을 통하여 가능하게 하므로 작업이 간편하고 제대혈의 오염을 방지시킨다.

Description

유핵세포 분리용 혈액백 및 이를 이용한 유핵세포 분리방법{A blood bag and method for separating cell using of it}

본 발명은 제대혈을 채집하고 이로부터 조혈모세포를 포함하는 유핵세포를 분리시키기 위한 혈액백 및 이를 이용한 유핵세포 분리방법에 관한 것으로써, 보다 상세하게는 산모로부터 반출되는 태반 및 탯줄의 혈액으로부터 조혈모세포를 함유하는 유핵세포를 효율적으로 분리 저장시키는 혈액백 및 이를 이용한 유핵세포 분리방법에 관한 것이다.

조혈모세포란 혈액(피)을 구성하는 혈액 세포들(적혈구, 백혈구, 림프구, 혈소판 등)을 만들어 내는 전구 세포를 말하는 것으로서, 이러한 조혈모세포는 우리몸의 골수에 극히 소량 존재하지만 평생 죽지않고 일정량 우리몸이 필요로하는 만큼 적절한 수의 혈액세포들을 만들어 낸다.

또한, 태반 및 탯줄의 혈액인 제대혈에도 조혈모세포가 다량 함유되어 있어서, 이의 채집은 신생아가 분만된 뒤 제대를 이중으로 결찰하고 소독한 후에 탯줄을 절단하고 태반이 만출되기 전 제대 정맥에 수혈액의 바늘을 주입하여 중력과 자궁수축에 의해 흘러내리는 제대혈을 항응고제(CPD-A1) 23 ml이 포함된 수혈백에 채집한다.

이와 같이 수혈백에 채집된 혈액을 원심관에 수용하고 이에 혈장 확장제인 헤스판(hespan)을 첨가한 후, 원심분리하여 유핵세포만을 별도의 혈액튜브에 보관시킨다.

그러나 상기와 같이 채집된 제대혈로부터 유핵세포를 분리하여 보관시키기 위해서는 채집을 위한 수혈백 및 원심관등 분리된 여러 수용용기를 경유하게 됨으로써 비위생적이고 유핵세포의 오염염려가 높다.

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로써, 위생적으로 제대혈의 채집이 가능하고 이로부터 조혈모세포를 함유하는 유핵세포를 분리 저장이 가능한 혈액백 및 이를 이용한 유핵세포 분리방법을 제공하는 데 그 목적이있는 것이다.

도 1 내지 도 4는 본 발명 혈액백 및 이를 이용한 유핵세포 분리 방법을 설명하기 위한 개략도이다.

* 도면의 주요부분에 대한 부호의 설명

10...제1혈액백11...채혈튜브

12...연결튜브13...제1포트

14...채혈침기20...제2혈액백

21...배출튜브22...제2포트

23...제3포트50...제대혈

상기 목적을 달성하는 본 발명 유핵세포 분리용 혈액백은 선단에 태반 또는 탯줄로부터 제대혈을 채취하기 위한 채혈침기가 마련된 채혈튜브와, 채혈된 제대혈을 채취하고 혈액층분리제제를 투입하기 위한 제1포트를 구비하는 제1혈액백과;

상기 제1혈액백과 연결튜브에 의해 연결되어 제1혈액백으로부터 조혈모세포가 함유된 유핵세포가 이동되며, 제1혈액백으로부터 이동된 혈장의 일부를 배출시키기 위한 배출튜브가 구비된 제2혈액백을 구비하여 된 것을 특징으로 한다.

상기 제2혈액백에는 동결보존액을 주입하고 샘플을 채취하기 위한 제2포트와, 수용된 유핵세포를 취출하기 위한 제3포트가 더 구비된다.

또한, 상기 목적을 달성하는 본 발명은 상기 유핵세포 분리용 혈액백을 이용하여 제대혈로부터 유핵세포를 분리하는 방법에 있어서,

상기 채혈침기를 이용하여 제1혈액백에 제대혈을 채취하는 단계와,

상기 제1혈액백의 제1포트를 통하여 혈액 층분리제제를 첨가시키는 단계와,

상기 제1혈액백을 정치시켜 혈장을 포함하는 유핵세포층과 적혈구층으로 분리시키는 단계와,

상기 제1혈액백을 가압하여 혈장을 포함하는 유핵세포층을 상기 연결튜브를 통하여 상기 제2혈액백으로 이동시키는 단계와;

상기 혈장이 포함된 유핵세포층이 이동된 제2혈액백을 원심분리하여 혈장층과 조혈모세포를 함유하는 유핵세포층으로 분리시키는 단계와;

상기 배출튜브를 통하여 혈장층의 일부를 배출시키는 단계와;

상기 혈장층이 일부 배출된 제2혈액백에 상기 제2포트를 통하여 동결보존액을 첨가시키는 단계;를 포함하여 된 것을 특징으로 한다.

상기 동결보존액을 첨가시킨 후에는 상기 제3포트를 통하여 상기 동결보존액, 혈장 및 유핵세포를 분리 저장하는 단계가 더 포함된다.

상기 본 발명의 특징에 의하면, 본 발명 혈액백 및 이를 이용한 유핵세포분리방법은 제대혈의 채취 및 유핵세포층의 분리를 별도의 혈액저장백에 이동시키지 아니하고 상호 연결된 제1,2혈액백을 통하여 가능해지므로 위생적이다.

이하 첨부된 도면을 참조하면서 본 발명에 따른 바람직한 실시예를 상세히 설명한다.

본 발명에 따른 유핵세포 분리용 혈액백을 나타낸 도 1을 참조하면, 이는 제대혈이 채집되는 제1혈액백(10)과 채집된 제대혈로부터 조혈모세포를 함유하는 유핵세포층이 분리되는 제2혈액백(20)을 구비하며, 이들 제1,2혈액백(10)(20)은 연결튜브(12)에 의해 상호 연통되는 구조를 가진다.

상기 제1혈액백(10)은 선단에 태반 또는 탯줄로부터 제대혈을 채취하기 위한 채혈침기(14)가 마련된 채혈튜브(11)와, 채혈된 제대혈을 채취하여 샘플링하고 혈액 층분리제제(예컨대, HESPAN)를 투입하기 위한 제1포트(13)를 구비한다.

상기 제2혈액백(20)은 상기 연결튜브(12)를 통하여 제1혈액백(10)으로부터 조혈모세포가 함유된 유핵세포가 이동되며, 제1혈액백(10)으로부터 이동된 혈장의 일부를 배출시키기 위한 배출튜브(21)가 마련되어 있다.

또한, 상기 제2혈액백(20)에는 동결보존액(예컨대, DMSO)을 주입하고 샘플을 채취하기 위한 제2포트(22)와, 수용된 유핵세포를 취출하기 위한 제3포트(23)가 더 구비되어 있다.

한편, 채혈튜브(11),연결튜브(12) 및 배출튜브(21)에는 수용된 혈액의 누출을 방지하기 위한 클램프(31,32,33)가 결합되어 진다.

이와 같은 혈액백은 다음과 같이 사용된다. 채혈침기(14)를 이용하여 제대혈(태반 및 탯줄혈액)을 채취하여 제1혈액백(10)에 수용되고, 제1포트(13)를 통하여 채집된 제대혈(50)로부터 샘플제대혈이 채취된다. 제1혈액백(10)에 제대혈(50)을 채집한 후에는 채혈튜브(11)를 클램프(미도시)로 클램핑하여 제대혈(50)의 누출을 방지시킨다.

이어서 연결튜브(12)를 통하여 제대혈(50)중 유핵세포층을 분리하여 제2혈액백(20)에 수용시키고, 제2포트(22)를 통하여 유핵세포의 샘플링 및 동결보존액을 첨가시키며, 제3포트(23)를 통하여 동결보존백(미도시)에 이동 보관시킨다.

이와 같은 본 발명 혈액백은, 종래 제대혈을 채집하기 위한 채집백과 유핵세포층을 분리하기 위한 혈액백을 별도로 구성하였던 것과는 달리, 제대혈채집을 위한 제1혈액백(10)과 유핵세포층을 분리하기 위한 제2혈액백(20)을 연결튜브(12)에 의해서 일체로 형성함으로써 사용시 위생적으로 유리하다.

한편, 상기 유핵세포 분리용 혈액백을 이용하여 제대혈로부터 유핵세포를 분리하는 방법은 다음과 같다.

먼저, 상기 채혈침기(14)를 이용하여 제1혈액백(10)에 제대혈(50)을 채집한후 제1클램프(31)로 채혈튜브(11)를 클램핑하고, 제1포트(13)를 통하여 제대혈(50)을 샘플링한다. 제1혈액백(10)으로부터 제대혈(50)을 샘플링한 후 제1포트(13)를 통하여 층분리제제(예컨대, HESPAN)를 첨가시키고 혈액백(100)을 청정실에서 일정시간동안 정치시킨다.

이와 같이 정치된 제1혈액백(10)에는 도 2에 도시된 바와 같이, 적혈구(51)와 혈장이 포함된 유핵세포층(52)으로 분리된다.

이어서, 압착기(미도시)를 이용하여 상기 제1혈액백(10)을 압착하여서 도 3에 도시된 바와 같이, 혈장이 포함된 유핵세포층(52)을 연결튜브(12)를 통하여 제2혈액백(20)으로 이동시킨 후, 제2클램프(32)를 사용하여 연결튜브(12)를 클램핑한다.

이어서 제2혈액백(20)을 원심분리시키면, 도 4에 도시된 바와 같이 혈장이 포함된 유핵세포층(52)은 혈장층(plasma layer;52a)과 혈장이 결여되고 조혈모세포를 함유하는 유핵세포층(52b)으로 분리된다.

이후 상기 제2혈액백(20)에 잔류하는 양이 약 22.5㎖가 되도록 상기 배출튜브(21)를 통하여 혈장층(52a)의 일부를 배출시키고, 제3클램프(33)로 배출튜브(21)를 클램핑시킨다.

이후 제2혈액백(20)을 흔들어서 잔류하는 혈장층(52a)과 유핵세포층(52b)을 혼합시킨 후, 상기 제2포트(22)를 통하여 샘플링하고 동결보존액(예를들면, DMSO)을 첨가시킨다.

상기 동결보존액을 첨가시킨 후에는 상기 제3포트(23)를 통하여 혼합된 상기동결보존액, 혈장층 및 유핵세포층을 별도의 동결백(미도시)에 분리하여 저장한다.

상기와 같은 본 발명 혈액백 및 이를 이용한 유핵세포분리방법은 제대혈의 채취 및 유핵세포층의 분리를 별도의 혈액저장백에 이동시키지 아니하고 상호 연결된 제1,2혈액백(10)(20)을 통하여 가능하게 한다.

상술한 바와 같은 본 발명은 상기 실시예에 한정되지 아니하고 본원의 정신과 범위를 이탈함이 없이 많은 변형을 가하여 실시될 수 있음은 두 말 할 것도 없다.

상기와 같은 본 발명 혈액백 및 이를 이용한 유핵세포분리방법은 제대혈의 채집 및 이로부터 유핵세포층의 분리를 별도의 혈액저장백에 이동시키지 아니하고 상호 연결된 제1,2혈액백(10)(20)을 통하여 가능하게 하므로 작업이 간편하고 위생적이며 제대혈의 오염을 방지시킨다.

Claims (4)

1. 선단에 태반 또는 탯줄로부터 제대혈을 채취하기 위한 채혈침기가 마련된 채혈튜브와, 채혈된 제대혈을 채취하고 혈액층분리제제를 투입하기 위한 제1포트를 구비하는 제1혈액백과;

   상기 제1혈액백과 연결튜브에 의해 연결되어 제1혈액백으로부터 조혈모세포가 함유된 유핵세포가 이동되며, 제1혈액백으로부터 이동된 혈장의 일부를 배출시키기 위한 배출튜브가 구비된 제2혈액백을 구비하여 된 것을 특징으로 하는 유핵세포 분리용 혈액백.
2. 제 1 항에 있어서, 상기 제2혈액백에 동결보존액을 주입하고 샘플을 채취하기 위한 제2포트와, 수용된 유핵세포를 취출하기 위한 제3포트가 더 구비된 것을 특징으로 하는 유핵세포 분리용 혈액백.
3. 상기 제 2 항의 유핵세포 분리용 혈액백을 이용하여 제대혈로부터 유핵세포를 분리하는 방법에 있어서,

   상기 채혈침기를 이용하여 제1혈액백에 제대혈을 채취하는 단계와,

   상기 제1혈액백의 제1포트를 통하여 혈액 층분리제제를 첨가시키는 단계와,

   상기 제1혈액백을 정치시켜 혈장을 포함하는 유핵세포층과 적혈구층으로 분리시키는 단계와,

   상기 제1혈액백을 가압하여 혈장을 포함하는 유핵세포층을 상기 연결튜브를 통하여 상기 제2혈액백으로 이동시키는 단계와;

   상기 혈장이 포함된 유핵세포층이 이동된 제2혈액백을 원심분리하여 혈장층과 조혈모세포를 함유하는 유핵세포층으로 분리시키는 단계와;

   상기 배출튜브를 통하여 혈장층의 일부를 배출시키는 단계와;

   상기 혈장층이 일부 배출된 제2혈액백에 상기 제2포트를 통하여 동결보존액을 첨가시키는 단계;를 포함하여 된 것을 특징으로 하는 혈액백을 이용하여 제대혈로부터 유핵세포를 분리하는 방법.
4. 제 3 항에 있어서, 상기 제3포트를 통하여 상기 동결보존액, 혈장 및 유핵세포를 분리 저장하는 단계를 더 포함하여 된 것을 특징으로 하는 혈액백을 이용하여 제대혈로부터 유핵세포를 분리하는 방법.