KR20030078524A - Ｇｔｐ－결합 단백질의 발현 및 기능을 억제하여 바이러스증식을 억제하는 방법 - Google Patents

Ｇｔｐ－결합 단백질의 발현 및 기능을 억제하여 바이러스증식을 억제하는 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20030078524A
KR20030078524A KR1020020017613A KR20020017613A KR20030078524A KR 20030078524 A KR20030078524 A KR 20030078524A KR 1020020017613 A KR1020020017613 A KR 1020020017613A KR 20020017613 A KR20020017613 A KR 20020017613A KR 20030078524 A KR20030078524 A KR 20030078524A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
gtp
binding protein
virus
fish
protein
Prior art date
Application number
KR1020020017613A
Other languages
English (en)
Inventor
박정우
정대균
Original Assignee
주식회사 알엔에이
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 알엔에이 filed Critical 주식회사 알엔에이
Priority to KR1020020017613A priority Critical patent/KR20030078524A/ko
Publication of KR20030078524A publication Critical patent/KR20030078524A/ko

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/136—Screening for pharmacological compounds
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value

Abstract

본 발명은 어류 바이러스의 증식을 억제하는 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 바이러스에 의해 감염된 어류 세포에서 발현이 증가되는 GTP-결합 단백질의 발현 및 기능을 억제함으로써 바이러스의 증식을 효과적으로 억제하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르면 어류세포에 감염된 바이러스의 증식을 억제할 수 있어, 바이러스 감염에 의한 어류의 집단 폐사를 효과적으로 억제할 수 있다.

Description

ＧＴＰ－결합 단백질의 발현 및 기능을 억제하여 바이러스 증식을 억제하는 방법{Method for controlling virus proliferation by inhibiting expression and function of GTP-binding protein}
본 발명은 어류 바이러스의 증식을 억제하는 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 바이러스에 의해 감염된 어류 세포에서 발현이 증가되는 GTP-결합 단백질의 발현 및 기능을 억제함으로써 바이러스의 증식을 효과적으로 억제하는 방법에 관한 것이다.
전염성 조혈 괴저 바이러스(IHNV:Infectious Hematopoietic Necrosis Virus)는 총알 모양의 랍도바이러스(Rhabdovirus)의 일종으로서 ssRNA 유전자와 5개의 구조 단백질로 이루어져 있다. 이 바이러스는 1969년 연어에서 최초로 분리되었으며, 연어의 조혈기관 괴사를 유발하는 병리학적 특성을 갖고 있는 것으로 알려져 있다.
처음에 북미지역에서만 발견되었던 이 바이러스가 최근에는 일본, 캐나다, 대만, 이태리 및 프랑스뿐만 아니라 한국 등의 여러 지역에서 발견되어 양식 연어의 대규모 폐사를 유발시키고 있으며, 막대한 경제적 손실을 야기시키고 있다. 이러한 바이러스에 감염된 연어의 집단 폐사를 예방하기 위하여, 구아닌-7-옥사이드(Guanine-7-oxide), TCDD(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin), 아로클로1254(Aroclor 1254) 및 아만타딘(Amantadine)과 같은 화학제가 사용되고 있으나, 대규모 양식장의 물고기를 완전히 보호한다는 것은 현실적으로 불가능하고, 화학적인 부작용과 같은 문제점이 발생될 우려가 있다.
따라서, 최근에는 백신과 같은 생물학적인 방법으로 이러한 바이러스 감염 및 증식을 억제함으로써, 어류의 집단 폐사를 예방하려는 연구가 활발히 진행되고 있다. 그러나, 바이러스는 끊임없이 변화하는 성질을 갖고 있기 때문에 그때마다 유행하는 바이러스 기질에 대처할 수 있는 적합한 조성으로 백신을 개발한다는 것은 복잡하고 비용이 많이 드는 일이다.
한편, 본 발명자들은 이미 IHNV에 감염된 어류세포에서, 새로운 종류의 GTP-결합 단백질의 일종인 fDRG2(fish developmentally regulated GTP-binding protein)의 발현이 급격하게 증가됨을 보인 바 있다. 즉, IHNV에 감염된 세포에서 이 fDRG2 단백질이 급격하게 발현되고, 결과적으로 어류 세포의 사멸을 유도함을 보여주어, 이 fDRG2 단백질의 발현이 IHNV 바이러스 감염 시 어류의 집단 폐사를 유도하는 원인임을 밝힌 바 있다(Leeet al.,FEBS Lett., 429(3):407-411, 1998).
GTP-결합 단백질(GTP-binding protein)은 세포 내의 여러 가지 조절에 관여하는 단백질로서, 최근에는 염기서열 및 기능이 서로 다른 GTP-결합 단백질들이 새롭게 발견되고 있다. 이러한 GTP-결합 단백질이 어떻게 세포의 사멸을 유도하는가에 대해서는 여러 가지 가설이 있으나, SCL(hematopoietic-specific transcription factor)과 GTP-결합 단백질간의 상호작용에 의하여 조절된다는 설이 일반적이다. 즉, 세포의 세포고사(apoptosis)를 억제하고 세포가 살아나는데 필수적인 유전자라고 알려져 있는 c-kit 단백질의 발현을 SCL이 조절하는데, GTP-결합 단백질은 이러한 SCL과 결합함으로써 c-kit 단백질의 발현을 억제하고, 세포의 사멸을 유도한다는 것이다.
그러나, IHNV 바이러스가 어떠한 기작에 의하여 GTP-결합 단백질의 발현을 유도하는 가에 대해서는 아직까지 알려진 바가 없으며, GTP-결합 단백질의 발현과 IHNV 증식간의 상호작용에 대해서도 아직까지 밝혀진 바가 없다.
본 발명자들은 IHNV에 감염된 어류의 집단 폐사를 억제하고 예방할 수 있는 방법을 찾기 위해 여러 방면으로 연구하던 중, GTP-결합 단백질의 일종인 어류의 fDRG2 단백질의 발현을 방해하고 기능을 억제함으로써 IHNV의 증식을 억제함을 확인하였고, 결과적으로 어류의 집단 폐사를 예방할 수 있음을 밝혀냄으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 GTP-결합 단백질의 발현 및 기능을 억제하여 어류바이러스의 증식을 억제함으로써, 어류의 집단 폐사를 예방하는 방법을 제공하는 것이다.
도 1a 및 도 1b는 fDRG2 유전자의 각 결실돌연변이 유전자들이 삽입된 발현벡터에 의한 CHSE-214 세포의 고사정도를 FACS로 확인한 결과를 나타낸 그림이다.
A: 벡터를 도입하지 않은 세포에 대한 FACS 결과
B: pEGFP 벡터만 도입된 세포에 대한 FACS 결과
C 내지 M: GTP-결합 단백질에 대한 각 결실변이 유전자가 연결된 pEGFP 벡터가 도입된 세포에 대한 FACS 결과
도 2는 CHSE-214 세포에 전염성 조혈 괴저 바이러스(IHNV)를 감염시킨 후, 어류의 fDRG2 유전자에 상보적인 안티센스 올리고뉴클레오티드를 처리하여 IHNV 증식 억제 효과를 본 그래프이다.
□: 음성 대조군으로 사용된 혼성 올리고뉴클레오티드
■: fDRG2 유전자에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 바이러스에 감염된 어류의 GTP-결합 단백질(GTP-binding protein)의 발현 및 기능을 억제하여 어류 바이러스의 증식을 억제하는 방법을 제공한다.
이하 본 발명을 상세히 설명하다.
본 발명에서는 바이러스에 감염된 어류의 GTP-결합 단백질(GTP-binding protein)의 발현 및 기능을 억제하여 어류 바이러스의 증식을 억제하는 방법을 제공한다. GTP-결합 단백질은 어류 바이러스 감염 시 발현이 증가함으로써 결과적으로 어류의 집단 폐사를 유발한다고 알려져 있다(Leeet al.,FEBS Lett., 429(3):407-411, 1998). 따라서, 이러한 GTP-결합 단백질의 발현 및 기능을 억제함으로써, 바이러스의 증식을 억제하고 어류의 집단 폐사를 예방할 수 있다.
상기에서 GTP-결합 단백질의 발현 억제는 GTP-결합 단백질의 전사 및 번역을 억제하는 물질에 의한 것임이 바람직하며, 구체적으로 화학물질, 효소 또는 항체인 것이 바람직하다.
또한, 상기 GTP-결합 단백질의 발현 억제는 GTP-결합 단백질의 mRNA를 분해하는 이중가닥 RNA인 RNAi(RNA Interference) 또는 GTP-결합 단백질에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드에 의한 것임이 바람직하다. 일반적으로 안티센스 올리고뉴클레오티드는 핵산(RNA 또는 DNA)내 뉴클레오티드 배열과 결합하여, 상기 핵산의 기능 또는 합성을 억제하는 역할을 한다고 알려져 있다. 즉, 어떤 특정한 유전자에 상응하는 안티센스 올리고뉴클레오티드는 RNA 및 DNA 양자 모두에 혼성화하는 능력을 지님으로써, 전사(transcription) 또는 번역(translation) 레벨에서의 특정 유전자의 발현을 방해하는 특징을 가지고 있다.
상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 GTP-결합 단백질, 구체적으로, 어류에서 분리되는 fDRG2(fish developmentally regulated GTP-binding protein) 단백질을 암호화하는 유전자 서열에 대해 상보적인 결합을 할 수 있으며, 서열번호 1로 표시되는 뉴클레오티드인 것을 특징으로 한다.
상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 당업계에 공지된 화학적 또는 효소적 방법을 이용하여 제조될 수 있다. 화학적 합성은 문헌(Stecet al.,J. Am. Chem. Soc.106:6077-6079, 1984)에 설명된 방법에 따라 포스포로아미다이트법(phosphoroamidite method)과 자동화된 합성기(모델 380-B, Applied Biosystems, Inc., 미국 캘리포니아주 포스터 시티)를 이용하여 수행될 수 있다.
한편, 상기 GTP-결합 단백질의 기능 억제는 GTP-결합 단백질을 구성하는 5개 모티프(motif) 구조단백질 중 네 번째 구조단백질인 G4 구조단백질의 기능을 저해하는 물질에 의한 것임이 바람직하다. 상기에서 G4 구조단백질의 기능을 저해하는 물질은 G4 구조단백질에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드, RNA, 화학물질, 효소 또는 항체인 것이 바람직하다.
상기에서 G4 구조단백질의 기능을 저해하는 물질은 G4 구조단백질 유전자의 변형을 유도하며, G4 구조단백질 자체의 변형을 유도하는 특징을 갖고 있다.
본 발명에 따른 어류 바이러스의 증식을 억제하는 방법은 랍도바이러스(rhabdovirus), 버나바이러스(birnavirus), 해양 헤르페스바이러스(marine herpesvirus), 채널 캣피쉬 바이러스(channel catfish virus), 해양 노다바이러스(marine nodavirus), 이리도바이러스(iridovirus), 감염성 연어 빈혈증 바이러스(infectious salmon anaemia virus),바큘로바이러스(vaculovirus), 간췌장 파보바이러스(hepatopancreatic parvovirus), 감염성 피하 및 조혈 괴저 바이러스(infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus) 또는 노란 머리 바이러스(yellow headed virus), 특히, 전염성 조혈 괴저 바이러스(IHNV:Infectious Hematopoietic Necrosis Virus)에 감염된 어류에 이용되는 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기에서 어류는 연어, 송어, 넙치, 뱀장어, 메기, 능성어, 새우 또는 돔류일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
한편, 본 발명에서는 GTP-결합 단백질의 발현을 억제하는 역할을 하는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 함유하는 어류 바이러스 감염 치료제를 제공한다. 또한, GTP-결합 단백질의 G4 구조단백질의 기능을 억제하는 역할을 하는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 함유하는 어류 바이러스 감염 치료제를 제공한다.
상기 어류 바이러스 감염 치료제를 사용함으로써, 결과적으로 어류 바이러스에 감염된 어류의 집단 폐사를 예방할 수 있다.
본 발명에 따른 어류 바이러스 감염 치료제는 약리학적으로 허용되는 담체를 포함하여 제조된 후 투여되는 것이 바람직하다.
상기 어류 바이러스 감염 치료제의 투여 방법에는 경구 투여 방법, 정맥내, 근육내, 피하 및 복강내 주사 방법, 및 국소 투여 방법이 포함된다.
상기에서 약리학적으로 허용되는 담체의 예에는 물, 식염수, 완충액 또는 탄수화물 용액과 같은 수성 용액, 및 리포좀, 미세구 또는 유제와 같은 전달 비히클(vihicle)이 포함된다. 전달 비히클은 생체내 안정성을 증진시키기 위해 활용될 수 있으며, 리포좀은 세포내 전달을 증진시키는 능력, 긴 순환 반감기, 최소의 독성 및 양호한 생분해성 때문에 사용될 수 있으며, 리포좀은 당업계에 공지된 다양한 방법에 의하여 제조될 수 있다(Banghamet al.,J. Mol. Biol. 13:238-252, 1965).
본 발명에 따른 어류 바이러스 치료제의 정확한 투여량 및 투여횟수는 질병 징후, 투여경로 등과 같은 여러 가지 인자에 따라 달라질 수 있다.
한편, 본 발명에서는 상기 GTP-결합 단백질을 이용한 어류바이러스 치료제 개발 방법 및 상기 GTP-결합 단백질을 이용한 동물 및 사람의 바이러스 감염으로 발생되는 질병에 관한 치료제의 개발 방법을 제공한다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1>
세포 배양 및 바이러스 분리
1-1) 연어세포주 배양
연어에서 유래된 CHSE-214 세포주(Chinook Salmon Embryos, ATCC CRL-1681)를 ATCC로부터 구입하여 바이러스의 숙주 세포로 사용하였다. 상기 세포주를 FBS(fetal bovine serum)가 10% 첨가된 EMEM(Eagle's minimum essential medium,Sigma)배지를 사용하여 18℃, 5% CO2조건 하에서 배양하였다.
1-2) 바이러스의 대량 분리
본 발명에서 사용되는 IHNV 바이러스를 분리하기 위하여, IHNV 바이러스에 감염되어 폐사된 무지개 송어를 분쇄한 후, 분쇄 용액을 필터(Nalgene, 0.45㎛)에 통과시켰다. 세포 배양 플라스크(Corning)에 CHSE-214 세포를 단일층으로 배양한 후, 상기 IHNV 바이러스를 0.01 M.O.I(Multiplicity of Infection)로 접종하여 16℃에서 7일 동안 키워 세포가 80% 이상 파괴되었을 때 배양액을 모아 4,000g에서 10분 동안 원심 분리하였다. 이후, 침전물에 PEG-6000을 7%농도가 되도록 넣고 4℃에서 24시간 동안 정치시켰다. 다시 6,000g에서 30분 동안 원심분리한 후, 침전물을 TNE(Tris 0.01M, pH8.0, NaCl 0.1M, EDTA 0.001M) 완충 용액으로 재현탁하였다. 115,000g에서 60분 동안 원심 분리하여 상기 액에서 PEG를 제거하였고, 침전물을 TNE 완충 용액으로 재현탁하였다. 이후, 상기 PEG를 사용하여 농축된 바이러스 용액을 단계적인 수크로즈 농도 구배(20%, 35%, 50%)상에서 80,000g로 90분 동안 초원심분리하였다(SW 50.1 rotor). 20%와 35% 수크로즈층 사이에 있는 바이러스 층을 일회용 주사기를 사용하여 모은 후, 115,000g에서 60분 동안 원심 분리하였고, 침전물을 TNE 완충 용액으로 재현탁하였다. 바이러스를 연속적인 수크로즈 농도 구배(5%-30%)상에서 50,000g로 30분 동안 다시 원심분리하여 20% 수크로즈층 주변의 바이러스를 모은 후, 115,000g에서 60분 동안 원심분리하였다. 상기 바이러스를 TNE 완충 용액에 재현탁시켜 -20℃에서 보관하였다.
<실시예 2> GTP-결합 단백질 중 세포고사를 유도하는 부위의 확인
2-1) G-결합 단백질의 결실돌연변이 유전자가 포함된 벡터의 제조
fDRG2 단백질을 구성하는 구조단백질인 5가지 모티브(motif)(G1, G2, G3, G4 및 G5, Leeet al.,FEBS Letters429:407-411, 1998) 중 어느 부분이 세포고사를 유도하는 기능을 갖고 있는 지 확인하기 위하여 G-결합 단백질의 결실돌연변이(deletion mutant) 유전자들을 제조하였다.
fDRG2 단백질의 전장 cDNA(Leeet al.,FEBS Letters429:407-411, 1998)를 주형으로 PCR을 수행하여 각각의 결실돌연변이 유전자를 제조하였다. 제조된 각 PCR 산물을 pEGFP-N1 발현벡터(Clontech)의HindIII와SalI 위치에 연결하였고, 최종 제조된 각 결실돌연변이 유전자들이 도입된 벡터의 서열을 자동 염기서열 분석기를 이용하여 확인하였다.
2-2) G4 구조단백질의 세포고사 유도 기능 확인
상기 각 결실돌연변이 유전자들이 삽입되어 있는 벡터들을 각각 CHSE-214(Chinook salmon embryo) 세포주에 도입하였다. 우선, 상기 세포주를 10% FBS(Fetal bovine serum, Gibco BRL, USA)와 페니실린-스트렙토마이신(50IU/ml and 50g/ml, Gibco BRL, USA)이 첨가된 EMEM(Eagles minimum essential medium)배지에서 18℃의 조건 하에 배양하였고, 상기 배양된 세포를 25cm2플라스크에 분주하였다. serum-free EMEM 배지 200㎕와 FuGENE6(Roche Molecular Biochemicals) 용액 6㎕가 혼합된 용액을 첨가하였고, 5분 후 상기 용액을 각 벡터가 포함된 튜브에 혼합하였다. 실온에서 15분 동안 배양한 후, 상기 FuGENE6:DNA 혼합 용액을 세포에 처리하였다. 48시간 후, 벡터가 도입된 세포를 모아 FACS flow cytometer 분석기(Becton Dickinson, Inc., San Jose, CA)로 각 결실돌연변이 유전자들이 포함된 벡터가 도입된 세포의 세포고사 정도를 확인하였다. EGFP는 488nm에서 빛을 내었으며, 빛 방출은 510/20 밴드패스 필터(bandpass filter)를 이용하여 감지하였다.
그 결과, 도 1a 및 도 1b에 도시된 바와 같이, G4 구조단백질을 포함한 벡터가 도입된 세포에서 세포고사가 많이 유도됨을 알 수 있어, G-결합 단백질의 5개 구조단백질 중 G4 구조 단백질(G4-motif)이 세포의 고사를 유도함을 확인할 수 있었다.
<실시예 3>
fDRG2 안티센스 올리고뉴클레오티드에 의한 IHNV 증식 억제 효과
IHNV 감염시 세포의 사멸을 유도하는 G-단백질의 발현을 억제하는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용하여 어류세포에서 IHNV 증식 억제 효과를 확인하였다.
연어에서 분리된 G-단백질인 fDRG2(fish developmentally regulated GTP-binding protein)에 대한 cDNA 클론(Leeet al.,FEBS Lett., 429(3):407-411, 1998)의 뉴클레오티드 서열을 기초로 하여, 서열번호 1로 표시되는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 제작하였다. 또한, 서열번호 2로 표시되는 혼성 올리고뉴클레오티드를 제작하여 음성 대조군으로 사용하였다. 상기 뉴클레오티드 제작은 문헌(Stecet al.,J. Am. Chem. Soc.106:6077-6079, 1984)에 설명된 방법에 따라 포스포로아미다이트법(phosphoroamidite method)과 자동화된 합성기(모델 380-B, Applied Biosystems, Inc., 미국 캘리포니아주 포스터 시티)를 이용하여 수행되었다.
6-웰 플레이트에 1×106개의 CHSE-214 세포를 분주하고, 24시간 후에 IHNV 1 M.O.I를 접종한 후, 1시간 동안 반응시켰다. EMEM 배지를 사용하여 접종되지 않은 바이러스를 3회 세척한 후, 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 혼성 올리고뉴클레오티드를 0, 10, 20 및 30μM의 농도(2ml의 EMEM)로 세포에 처리하였다. 37℃에서 30시간 동안 배양한 다음 세포 배양 상층액을 수집하여 IHNV 바이러스의 역가를 분석한 결과, 도 2에 도시된 바와 같이, 안티센스 올리고뉴클레오티드를 20 및 30μM의 농도로 처리한 군이 대조군에 비해 약 50% 정도의 IHNV 바이러스 증식 억제효과가 있음을 확인할 수 있었다.
본 발명에서는 GTP-결합 단백질(GTP-binding protein)의 발현 및 기능을 억제하여 어류 바이러스의 증식을 억제하는 방법을 제공하였다. 본 발명에 따르면 어류세포에 감염된 바이러스의 증식을 억제할 수 있어, 바이러스 감염에 의한 어류의 집단 폐사를 효과적으로 억제할 수 있다.

Claims (17)

  1. 바이러스에 감염된 어류의 GTP-결합 단백질(GTP-binding protein)의 발현 및 기능을 억제하여 어류 바이러스의 증식을 억제하는 방법.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 GTP-결합 단백질의 발현 억제는 GTP-결합 단백질의 전사 및 번역을 억제하는 물질에 의한 것임을 특징으로 하는 방법.
  3. 제 2항에 있어서, 상기 GTP-결합 단백질의 전사 및 번역을 억제하는 물질은 화학물질, 효소 또는 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 GTP-결합 단백질의 발현 억제는 GTP-결합 단백질의 mRNA를 분해하는 이중가닥 RNA인 RNAi(RNA Interference)에 의한 것임을 특징으로 하는 방법.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 GTP-결합 단백질의 발현 억제는 GTP-결합 단백질에대한 안티센스 올리고뉴클레오티드에 의한 것임을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 5항에 있어서, 상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 GTP-결합 단백질을 암호화하는 유전자 서열에 대해 상보적이며, 서열번호 1로 표시되는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제 1항에 있어서, 상기 GTP-결합 단백질의 기능 억제는 G4 구조단백질의 기능을 저해하는 물질에 의한 것임을 특징으로 하는 방법.
  8. 제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GTP-결합 단백질은 fDRG2(fish developmentally regulated GTP-binding protein) 단백질인 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제 7항에 있어서, 상기 G4 구조단백질의 기능을 저해하는 물질은 G4 구조단백질에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드, RNA, 화학물질, 효소 또는 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제 7항에 있어서, 상기 G4 구조단백질의 기능을 저해하는 물질은 G4 구조단백질 유전자의 변형을 유도하는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제 7항에 있어서, 상기 G4 구조단백질의 기능을 저해하는 물질은 G4 구조단백질의 변형을 유도하는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 제 1항에 있어서, 상기 바이러스는 랍도바이러스(rhabdovirus), 버나바이러스(birnavirus), 해양 헤르페스바이러스(marine herpesvirus), 채널 캣피쉬 바이러스(channel catfish virus), 해양 노다바이러스(marine nodavirus), 이리도바이러스(iridovirus), 감염성 연어 빈혈증 바이러스(infectious salmon anaemia virus), 바큘로바이러스, 간췌장 파보바이러스(hepatopancreatic parvovirus), 감염성 피하 및 조혈 괴저 바이러스(infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus) 또는 노란 머리 바이러스(yellow headed virus)인 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제 1항에 있어서, 상기 어류는 연어, 송어, 넙치, 뱀장어, 메기, 능성어, 새우 또는 돔류인 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제 5항에 따른 안티센스 올리고뉴클레오티드를 함유하는 어류 바이러스 감염 치료제.
  15. 제 9항에 따른 안티센스 올리고뉴클레오티드를 함유하는 어류 바이러스 감염 치료제.
  16. 제 1항에 따른 GTP-결합 단백질을 이용한 어류바이러스 치료제 개발방법.
  17. 제 1항에 따른 GTP-결합 단백질을 이용한 동물 및 사람의 바이러스 감염으로 발생되는 질병에 관한 치료제 개발 방법.
KR1020020017613A 2002-03-30 2002-03-30 Ｇｔｐ－결합 단백질의 발현 및 기능을 억제하여 바이러스증식을 억제하는 방법 KR20030078524A (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020020017613A KR20030078524A (ko) 2002-03-30 2002-03-30 Ｇｔｐ－결합 단백질의 발현 및 기능을 억제하여 바이러스증식을 억제하는 방법

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020020017613A KR20030078524A (ko) 2002-03-30 2002-03-30 Ｇｔｐ－결합 단백질의 발현 및 기능을 억제하여 바이러스증식을 억제하는 방법

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20030078524A true KR20030078524A (ko) 2003-10-08

Family

ID=32377316

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020020017613A KR20030078524A (ko) 2002-03-30 2002-03-30 Ｇｔｐ－결합 단백질의 발현 및 기능을 억제하여 바이러스증식을 억제하는 방법

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20030078524A (ko)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9957505B2 (en) Polynucleotides for multivalent RNA interference, compositions and methods of use thereof
US20180179526A1 (en) Method and Medicament For Inhibiting The Expression of A Given Gene
US8633028B2 (en) dsRNA induced specific and non-specific immunity in crustaceans and other invertebrates and biodelivery vehicles for use therein
ES2435774T3 (es) Agentes de ácido nucleico para la regulación negativa de H19, y métodos de uso del mismo
US8486910B2 (en) SnoRNAi-small nucleolar RNA degradation by RNA interference in trypanosomatids
RU2733361C1 (ru) Средство для ингибирования репликации вируса SARS-CoV-2, опосредованного РНК-интерференцией
US9301981B2 (en) Methods and compositions for the treatment of insulin-associated medical conditions
JP2006517916A (ja) Ｒｎａ干渉物質を用いてアポトーシス関連疾患を治療および予防する方法
EP1817416A2 (en) Compositions for treating respiratory viral infections and their use
JP2012200204A (ja) ヒラメラブドウイルス結合性アプタマー
EP1591524A1 (en) Oligoribonucleotide or peptidic nucleic acid inhibiting function of hepatitis c virus
WO2018084077A1 (ja) 有用エビ類の卵成熟抑制を解除する方法
KR20030078524A (ko) Ｇｔｐ－결합 단백질의 발현 및 기능을 억제하여 바이러스증식을 억제하는 방법
Alonso et al. Inhibition of infectious haematopoietic necrosis virus in cell cultures with peptide‐conjugated morpholino oligomers
EP1582591A2 (en) Sirna and their use for knock down expression of porcine endogenous retrovirus
EP0647716B1 (fr) Vecteur comportant un gène viral transcrit par l&#39;ARN polymérase III
JP6944692B2 (ja) ボルナウイルスベクター及びその利用
KR100647892B1 (ko) 세포배양을 통한 바이러스의 생산 방법
WO2007052629A1 (ja) オリゴ二本鎖ｒｎａ及び医薬組成物
KR100741378B1 (ko) 콕사키바이러스 ｂ ｒｎａ에 특이적인 작은 간섭 ｒｎａ 및이를 유효성분으로 포함하는 치료제
Novaes et al. Genetically modified ZIKA virus as a microRNA-sensitive oncolytic virus against central nervous system tumors
WO2023023597A1 (en) Virus-like particle
EP0816507A1 (en) Novel gene recombinant
JP2001097884A (ja) ビルナウイルスサブユニットワクチン
JP2009526516A (ja) 呼吸性ウイルス感染を処置するための組成物およびその使用

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Withdrawal due to no request for examination