KR20030058934A - 중추신경계의 급성 및 만성적 손상에 기인한 신경세포의퇴화를 방지하기 위한 화합물, 조성물 및 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 신경세포 사멸에 의해 수반되는 신경학적 질환의 방지와 예방을 위한 조성물 및 방법을 제공한다. 본 발명은 5-벤질아미노살리실산(5-benzylaminosalicylic acid; BAS) 및 그의 유도체의 합성을 포함한다. BAS 및 그의 유도체는 N-메틸-D-아스파테이트(N-methyl-D-aspartate), Zn²⁺및 반응성 산소류에 의한 유독한 손상으로부터 대뇌피질 신경세포를 보호한다. 그러므로, 본 발명은 흥분성 독성(excitotoxicity), Zn²⁺신경독성(neurotoxicity) 및 자유 라디칼 신경독성이 뛰따르는 심각한 신경세포 손상에 의해 수반되는 발작(stroke), 뇌의 외상(traumatic brain injury)과 척추 손상(spinal cord injury), 간질(epilepsy) 및 신경세포 퇴행성 질환(neurodegnerative disease)을 치료하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다.

Description

중추신경계의 급성 및 만성적 손상에 기인한 신경세포의 퇴화를 방지하기 위한 화합물, 조성물 및 방법{Compounds, Compositions and Methods for Preventing Neurodegeneration in Acute and Chronic Injuries in the Central Nervous System}

< 흥분성 독성(excitoxicity) 및 뇌 질환(brain disease) >

N-메틸-D-아스파테이트(N-methyl-D-aspartate)에 민감한 이온이동성 글루타메이트 수용체(ionotropic glutamate receptor; NMDA receptor)의 과도한 활성은 신경세포의 사멸을 가져오고, 다양한 신경계 질환을 유발한다고 알려져 있다(Choi, Neuron 1:623-634 (1988)). 저산소-허혈성 신경손상(hypoxic-ischemic injury) 환자의 뇌에 대량으로 축적되는 흥분성 신경전달물질(excitatory neurotransmitter)인 글루타메이트(glutamate)는, Ca²⁺및 Na⁺을 투과시키는 이온이동성 글루타메이트수용체의 과도한 활성을 유발하여 신경세포의 사멸을 유발시킨다(Choi and Rothman,Annu Rev Neurosci13:171-182 (1990)). NMDA 수용체에 대한 길항제(antagonist)는 저혈당증(hypoglycemia), 저산소증(hypoxia) 또는 저산소-허혈에 의한 뇌 질환을 놀라울 정도로 경감시킨다(Simon, Swan, Griffiths, and Meldrum.Science226:850-852 (1984); Park, Nehls, Graham, Teasdale, and McCulloch,Ann Neurol24:543-551 (1988).;Wieloch,Science230:681-683 (1985); Kass, Chambers, and Cottrell,Exp.Neurol.103:116-122 (1989); Weiss, Goldberg, and Choi,Brain Res.380:186-190 (1986)). 따라서, NMDA 수용체에 대한 길항제는 저혈당증, 저산소증 및 저산소-허혈로부터 뇌를 보호하는 치료제로 주목을 받고 있다.

흥분성 독성은 뇌의 외상(traumatic brain injury; TBI)에 따른 신경세포의 사멸(neuronal degeneration)에 관여하는 것으로 알려져 있다. TBI환자에서 NMDA 수용체에 대한 내생성 작용제(endogenous agonist)인 퀴놀린산(quinolinic acid)의 생성량이 5 내지 50배가 증가하였다(E. H. Sinz, P. M. Kochanek, M. P. Heyes, S. R. Wisniewski, M. J. Bell, R. S. Clark, S. T. DeKosky, A. R. Blight, and D. W. Marion). TBI 환자에서 퀴놀린산은 뇌척수액(cerobrospinal fluid)에 그 양이 증가할 뿐만 아니라 사망과도 연관된다(J.Cereb.Blood Flow Metab.18:610-615, (1998)). 뇌의 외상이 유발된 동물 모델에 있어서, 글루타메이트와 아스파테이트의 양이 상당히 증가하였다(Faden, Demediuk, Panter, and Vink,Science244:798-800 (1989)). 또한, 충격외상 후의 쥐(rat)의 척추에서도 글루타메이트의방출이 관찰되었다(Demediuk, Daly, and Faden. J Neurochem J. Neurochem.52 :1529-1536 (1989)). NMDA 수용체에 대한 길항제는 뇌의 외상 또는 척추 손상에 따른 신경세포의 사멸을 경감시킨다(Faden, Lemke, Simon, and Noble.J.Neurotrauma.5:33-45(1988); Okiyama, Smith, White, Richter, and McIntosh.J.Neurotrauma.14:211-222 (1997)).

글루타메이트는 간질성 발작(seizure)의 유발과 진행에 있어서 중요한 역할을 담당한다(Dingledine, McBain, and McNamara,Trends.Pharmacol.Sci.11:334-338 (1990); Holmes.Cleve.Clin.J.Med.62:240-247 (1995)). NMDA 수용체에 대한 길항제는 다양한 간질(epilepsy)의 유형에서 항경련제(anticonvulsant) 및 항발작유발제(antiepiltogenic drug)로서 작용함이 입증되었다(Anderson, Swartzwelder, and Wilson,J.Neurophysiol.57:1-21 (1987); Wong, Coulter, Choi, and Prince.Neurosci.Lett.85:261-266 (1988); McNamara, Russell, Rigsbee, and Bonhaus,Neuropharmacology27:563-568 (1988)).

근위축성 측삭경화증(amyotrophic lateral sclerosis; ALS)은 상부 및 하부 척추운동 신경세포 모두의 퇴화를 수반하고, 신경의 위축(neurogenic atrophy), 약화 및 섬유속성 경축(纖柔束性痙縮)(fasciculation)으로 특징지워진다. ALS의 발병원인은 미해결로 남아있지만, 흥분성 독성이 ALS 과정중에 발생할 것이라고 예측되었다. 구체적으로, ALS 환자는 세포외(extracellur) 글루타메이트의 운송에 대한 장애가 나타나는데, 이는 신경연접부위에 글루타메이트가 축적될 가능성을 제시하다. ALS 환자 척추의 병리학상의 변화와 유사한 양상이 흥분성독소(excitotoxin)의 투여시에도 일어난다(Rothstein.Clin.Neurosci.3:348-359 (1995); Ikonomidou, Qin, Labruyere, and OlneyJ.Neuropathol.Exp.Neurol.55:211-224 (1996)).

NMDA 수용체에 대한 길항제는 파킨슨씨 병(Parkinson's disease; PD)을 치료하는 데에도 적용할 수 있는 것으로 인식된다. NMDA 수용체에 대한 몇 가지 길항제가 신경독소 (neurotoxin) MPTP(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine)에 의한 손상으로부터 도파민 신경세포 (dopaminergic neuron)를 보호한다(Lange, Loschmann, Sofic, Burg, Horowski, Kalveram, Wachtel, and Riederer.Naunyn Schmiedebergs Arch.Pharmacol.348:586-592 (1993); Brouillet and Beal.Neuroreport.4:387-390 (1993)). 또한, NMDA 수용체에 대한 길항제는 레보도파(levodopa)에 의한 운동장애(dyskinesia)를 개선시키므로, 레보도파에 대한 치료효과를 증진시킬 수 있다(Papa and Chase,Ann.Neurol.39:574-578 (1996); Marin, Papa, Engber, Bonastre, Tolosa, and Chase,Brain Res.736:202-205 (1996)). NMDA 수용체에 대한 2종류 길항제인 메만틴(memantine) 및 덱스트로메토판(dextromethophan)은 PD 환자를 치료하는데 있어서 효과적임이 입증되었다(Verhagen, Del Dotto, Natte, van den Munckhof, and Chase,Neurology51:203-206 (1998); Merello, Nouzeilles, Cammarota, and Leiguarda.Clin.Neuropharmacol.22:273-276 (1999)).

헌팅톤씨 병(Huntiongton's disease; HD)은 선조체 신경세포(striata) 내에 소마토스타틴(somatostatin) 및 신경펩티드(neuropeptide)를 포함하는 NADPH-디아포레이즈(NADH-diaphorase)를 발현하는 신경세포의 생존 및 세포의 크기가 중소형인 신경세포의 사멸이 특징적으로 나타나는 퇴행성 신경질환이다. 선조체 신경세포에 퀴놀린산 및 NMDA를 투여하면 위에서 기술한 HD의 병리학적 특징이 관찰되기 때문에, NMDA 수용체의 과도활성을 통하여 나타나는 흥분성 신경독성이 HD에서 신경세포사멸의 주 경로로서 제시되고 있다 (Koh, Peters, and Choi,Science234:73-76 (1986); Beal, Kowall, Ellison, Mazurek, Swartz, and Martin,Nature321:168-171 (1986); Beal, Ferrante, Swartz, and Kowall.J.Neurosci.11:1649-1659 (1991)).

< 자유 라디칼(free radical) 및 뇌 질환 >

저산소-허혈 또는 뇌의 외상 및 척추 손상에 따른 퇴행성 뇌부위에서는 자유 라디칼이 생성된다(Hall and Braughler,Free Radic.Biol.Med.6:303-313 (1989); Anderson and Hall,Ann.Emerg.Med.22:987-992 (1993); Siesjo and Siesjo,Eur.J.Anaesthesiol.13:247-268(1996); Love,Brain Pathol.9:119-131 (1999)). 자유 라디칼의 제거를 위한 항산화제 또는 처치방법(maneuver)은 저산소-허혈 또는 외상에 의한 뇌 질환을 경감시킨다(Faden,Pharmacol.Toxicol.78:12-17 (1996); Zeidman, Ling, Ducker, and Ellenbogen,J.Spinal.Disord.9:367-380 (1996); Chan,Stroke27:1124-1129 (1996); Hall,Neurosurg.Clin.N.Am.8:195-206 (1997)). ALS 환자에 있어서는 Cu/Zn 슈퍼옥사이드 디스뮤타제(superoxide dismutase)에 점돌연변이(point mutation)가 유발되어서, PD 환자에게서는 글루타치온(glutathione)의 감소 및 철(iron)의 증가에 기인하여, 알츠하이머 병(Alzheimer's disease; AD) 환자에게서는 철 축적에 기인하거나, HD 환자에게서는 미토콘드리아의 기능장애(dysfunction)가 유발되어서, 신경세포의 퇴행성 질환으로 인한 퇴화가 진행됨으로써 자유 라디칼이 뇌부위에 생성될 수 있다는 것을 많은 증거들이 뒷받침하고 있다(Rosen, Siddique, Patterson, Figlewicz, Sapp, Hentati, Donaldson, Goto, O'Regan, and Deng.Nature362:59-62 (1993); Jenner and Olanow,Neurology47:S161-S170 (1996); Smith, Harris, Sayre, and Perry,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.94:9866-9868 (1997); Browne, Ferrante, and Beal,Brain Pathol.9:147-163 (1999)). 따라서, 항산화제는 상기의 신경세포의 퇴행성 질환에 대한 신경보호제이기도 하다(Jenner,Pathol. Biol.(Paris.)44:57-64 (1996); Beal,Ann. Neurol.38:357-366 (1995); Prasad, Cole, and Kumar.J.Am.Coll.Nutr.18:413-423 (1999); Eisen and Weber,Drugs Aging14:173-196 (1999); Grundman,Am.J.Clin.Nutr.71:630S.-636S (2000)).

< 아연(zinc)과 뇌질환 >

Zn²⁺은 간질성 발작, 허혈, 외상 및 AD 에서 관찰되는 신경세포 퇴화 과정을 매개한다. 발작-유도 흥분성 독소(excitotoxin)인 카이네이트(kainate)의 중추신경계에의 투여는, 몇몇 전뇌(forebrain) 부위의 표적신경세포로 Zn²⁺의 전이를 수반한다 (Frederickson, Hernandez, and McGinty.Brain Res.480:317-321 (1989)).Ca-EDTA를 이용한 Zn²⁺전이의 방해는 전뇌 허혈 또는 뇌의 외상에 따른 신경세포의 사멸을 경감시킨다(Koh, Suh, Gwag, He, Hsu and Choi, Science272: 1013-1016 (1996); Suh, Chen, Motamedi, Bell, Listiak, Pons, Danscher, and Frederickson,Brain Res.852 :268-273 (2000)). Zn²⁺은 AD 환자의 세포밖에 쌓이는 플라크(extracellular plaque) 및 퇴화되는 신경세포에서 발견되는데, 이것은 AD 환자의 신경세포 퇴화에도 작용할 것으로 판단된다(Bush, Pettingell, Multhaup, Paradis, Vonsattel, Gusella, Beyreuther, Masters, and Tanzi,Science265:1464-1467 (1994); Suh, Jensen, Jensen, Silva, Kesslak, Danscher, and Frederickson.Brain Res.852:274-278 (2000)).

본 발명은 신경세포의 사멸(neuronal death)로 유발되는 신경계 질환의 방지와 예방을 위한 신규 살리실산염 화합물, 조성물 및 방법에 관한 것이다.

도 1은 배양한 후 12 내지 14일(DIV 12-14)된 생쥐 대뇌피질세포(corticalcell)에 300μM NMDA를 단독 또는 10 내지 300 μM 5-아미노 살리실산(AS)을 첨가하여 10분간 처리(1a), 50μM Fe²⁺를 단독 또는 10 내지 300 μM AS를 첨가하여 24시간 처리(1b), 또는 300μM Zn²⁺를 단독 또는 10 내지 300 μM AS를 첨가하여 30분간 처리(1c)하고, 허위 세척(sham wash)(= 0) 및 500μM NMDA(= 100)에 계속 노출 후 24시간 동안 평균 LDH 유출량으로 이루어진, 24시간 후 배싱(bathing) 배양액으로 유리되는 LDH의 양을 측정하여 신경세포의 사멸을 정량한 결과를 나타낸 그래프이다(평균 ± SEM, n = 9-12 (1a), n = 4-8 (1b) 또는 n = 4 (1c) 배양 웰(well)/조건). *는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트(Student-Newman-Keuls test)를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 상대적 대조군(NMDA 단독, Fe²⁺단독 또는 Zn²⁺단독)과의 유의적 차이를 보여준다.

도 2는 배양한 후 12 내지 14일(DIV 12-14)된 생쥐의 대뇌피질세포에 300μM NMDA를 단독 또는 30 내지 300 μM 5-벤질아미노 살리실레이트(5-benzylamino salicyclate; BAS)를 첨가하여 10분간 처리(2a), 50μM Fe²⁺를 단독 또는 1 내지 300 μM BAS를 첨가하여 24시간 처리(2b), 10 mM BSO를 단독 또는 3 내지 300 μM BAS를 첨가하여 24시간 처리(2c), 또는 300μM Zn²⁺를 단독 또는 30 내지 300 μM BAS를 첨가하여 30분간 처리(2d)하고, 24시간 후 배양액으로 유리되는 LDH의 양을 측정하여 신경세포의 사멸을 정량한 결과를 나타낸 그래프이다(평균 ± SEM, n =7-8(2a), n = 3-6(2b), n = 4(2c) 또는 n = 4(2d) 배양 웰/조건). *는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 상대적 대조군(NMDA 단독, Fe²⁺단독, BSO 단독 또는 Zn²⁺단독)과의 유의적 차이를 보여준다.

도 3은 배양한 후 12 내지 14일(DIV 12-14)된 생쥐의 대뇌피질세포에 300μM NMDA를 단독 또는 30 내지 300 μM 5-(4-니트로벤질)아미노살리실산(5-(4-nitrobenzyl)aminosalicylic acid; NBAS)을 첨가하여 10분간 처리(3a), 50μM Fe²⁺를 단독 또는 1 내지 300 μM NBAS를 첨가하여 24시간 처리(3b), 또는 300μM Zn²⁺를 단독 또는 30 내지 300 μM NBAS를 첨가하여 30분간 처리(3c)하고, 24시간 후 배양액으로 유리되는 LDH의 양을 측정하여 신경세포의 사멸을 정량한 결과를 나타낸 그래프이다(평균 ± SEM, n = 7-8(3a), n = 3-6(3b) 또는 n = 4(3c) 배양 웰/조건). *는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 상대적 대조군(NMDA 단독, Fe²⁺단독 또는 Zn²⁺단독)과의 유의적 차이를 보여준다.

도 4는 배양한 후 12 내지 14일(DIV 12-14)된 생쥐의 대뇌피질세포에 300μM NMDA를 단독 또는 30 내지 300 μM 5-(4-클로로벤질)아미노살리실산(5-(4-chlorobenzyl)aminosalicylic acid; CBAS)을 첨가하여 10분간 처리(4a), 50μM Fe²⁺를 단독 또는 0.1 내지 300 μM CBAS를 첨가하여 24시간 처리(4b), 또는 300μM Zn²⁺를 단독 또는 30 내지 300 μM CBAS를 첨가하여 30분간 처리(4c)하고, 24시간 후 배양액으로 유리되는 LDH의 양을 측정하여 신경세포의 사멸을 정량한 결과를 나타낸 그래프이다(평균 ± SEM, n = 3-4(4a), n = 3-12(4b) 또는 n = 4(4c) 배양 웰/조건). *는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 상대적 대조군(NMDA 단독, Fe²⁺단독 또는 Zn²⁺단독)과의 유의적 차이를 보여준다.

도 5는 배양한 후 12 내지 14일(DIV 12-14)된 생쥐의 대뇌피질세포에 300μM NMDA를 단독 또는 30 내지 300 μM 5-(4-트리플루오로메틸벤질)아미노살리실산(5-(4-trifluoromethylbenzyl)aminosalicylic acid; TBAS)을 첨가하여 10분간 처리(5a), 50μM Fe²⁺를 단독 또는 0.1 내지 300 μM TBAS를 첨가하여 24시간 처리(5b), 또는 300μM Zn²⁺를 단독 또는 30 또는 300 μM TBAS를 첨가하여 30분간 처리(5c)하고, 24시간 후 배양액으로 유리되는 LDH의 양을 측정하여 신경세포의 사멸을 정량한 결과를 나타낸 그래프이다(평균 ± SEM, n = 3-4(5a), n = 3-11(5b) 또는 n = 4(5c) 배양 웰/조건). *는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 상대적 대조군(NMDA 단독, Fe²⁺단독 또는 Zn²⁺단독)과의 유의적 차이를 보여준다.

도 6은 배양한 후 12 내지 14일(DIV 12-14)된 생쥐의 대뇌피질세포에 300μM NMDA를 단독 또는 30 내지 300 μM 5-(4-플루오로벤질)아미노살리실산(5-(4-fluorobenzyl)aminosalicylic acid; FBAS)을 첨가하여 10분간 처리(6a), 또는 50μM Fe²⁺를 단독 또는 1 내지 300 μM FBAS를 첨가하여 24시간 처리(6b)하고, 24시간 후 배양액으로 유리되는 LDH의 양을 측정하여 신경세포의 사멸을 정량한 결과를 나타낸 그래프이다(평균 ± SEM, n = 7-8(6a) 또는 n = 4-8(6b) 배양 웰/조건). *는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 상대적 대조군(NMDA 단독 또는 Fe²⁺단독)과의 유의적 차이를 보여준다.

도 7은 배양한 후 12 내지 14일(DIV 12-14)된 생쥐의 대뇌피질세포에 300μM NMDA를 단독 또는 30 내지 300 μM 5-(4-메톡시벤질)아미노살리실산(5-(4-methoxybenzyl)aminosalicylic acid; MBAS)을 첨가하여 10분간 처리(7a), 또는 50μM Fe²⁺를 단독 또는 1 내지 300 μM MBAS를 첨가하여 24시간 처리(7b)하고, 24시간 후 배양액으로 유리되는 LDH의 양을 측정하여 신경세포의 사멸을 정량한 결과를 나타낸 그래프이다(평균 ± SEM, n = 7-8(7a) 또는 n = 4-8(7b) 배양 웰/조건).*는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 상대적 대조군(NMDA 단독 또는 Fe²⁺단독)과의 유의적 차이를 보여준다.

도 8은 배양한 후 12 내지 14일(DIV 12-14)된 생쥐의 대뇌피질세포에 300μM NMDA를 단독 또는 30 내지 1000 μM 5-(펜타플루오로벤질)아미노살리실산(5-(pentafluorobenzyl)amino salicyclic acid; PBAS)을 첨가하여 10분간 처리(8a), 50μM Fe²⁺를 단독 또는 1 내지 300 μM PBAS를 첨가하여 24시간 처리(8b), 10 mM BSO를 단독 또는 3 내지 300 μM PBAS를 첨가하여 24시간 처리(8c), 또는 300μM Zn²⁺를 단독 또는 30 내지 300 μM PBAS를 첨가하여 30분간 처리(8d)하고, 24시간 후 배양액으로 유리되는 LDH의 양을 측정하여 신경세포의 사멸을 정량한 결과를 나타낸 그래프이다(평균 ± SEM, n = 11-16(8a), n = 3-6(8b), n = 4-11(8c) 또는 n = 12(8d) 배양 웰/조건). *는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 상대적 대조군(NMDA 단독, Fe²⁺단독, BSO 단독 또는 Zn²⁺단독)과의 유의적 차이를 보여준다.

도 9는 배양한 후 12 내지 14일(DIV 12-14)된 생쥐의 대뇌피질세포에 300μM NMDA를 단독 또는 30 내지 300 μM 에틸-5-(4-니트로벤질)아미노-2-하이드록시 에틸벤조에이트(ethyl-5-(4-nitrobenzyl)amino-2-hydroxy ethylbenzoate; NAHE)를 첨가하여 10분간 처리(9a), 또는 50μM Fe²⁺를 단독 또는 10 내지 300 μM NAHE를 첨가하여 24시간 처리(9b)하고, 24시간 후 배양액으로 유리되는 LDH의 양을 측정하여 신경세포의 사멸을 정량한 결과를 나타낸 그래프이다(평균 ± SEM, n = 10-12(9a) 또는 n = 3-4(9b) 배양 웰/조건). *는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 상대적 대조군(NMDA 단독 또는 Fe²⁺단독)과의 유의적 차이를 보여준다.

도 10은 배양한 후 12 내지 14일(DIV 12-14)된 생쥐의 대뇌피질세포에 300μM NMDA를 단독 또는 30 내지 300 μM 5-(4-니트로벤질)-N-아세틸아미노-2-하이드록시 에틸벤조에이트(5-(4-nitrobenzyl)-N-acetylamino-2-hydroxy ethylbenzoate; NNAHE)를 첨가하여 10분간 처리(10a), 또는 50μM Fe²⁺를 단독 또는 10 내지 100 μM NNAHE를 첨가하여 24시간 처리(10b)하고, 24시간 후 배양액으로 유리되는 LDH의 양을 측정하여 신경세포의 사멸을 정량한 결과를 나타낸 그래프이다(평균 ± SEM, n = 3-4(10a) 또는 n = 3-4(10b) 배양 웰/조건). *는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 상대적 대조군(NMDA 단독 또는 Fe²⁺단독)과의 유의적 차이를 보여준다.

도 11은 배양한 후 12 내지 14일(DIV 12-14)된 생쥐의 대뇌피질세포에300μM NMDA를 단독 또는 30 내지 300 μM 5-(4-니트로벤질)-N-아세틸아미노-2-아세톡시 에틸벤조에이트(5-(4-nitrobenzyl)-N-acetylamino-2-acetoxy ethylbenzoate; NNAAE)를 첨가하여 10분간 처리(11a), 또는 50μM Fe²⁺를 단독 또는 10 내지 100 μM NNAAE를 첨가하여 24시간 처리(11b)하고, 24시간 후 배양액으로 유리되는 LDH의 양을 측정하여 신경세포의 사멸을 정량한 결과를 나타낸 그래프이다(평균 ± SEM, n = 10-12(11a), n = 7-8(11b) 또는 n = 4(11c) 배양 웰/조건). *는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 상대적 대조군(NMDA 단독 또는 Fe²⁺단독)과의 유의적 차이를 보여준다.

도 12는 배양한 후 12 내지 14일(DIV 12-14)된 생쥐의 대뇌피질세포에 300μM NMDA를 단독 또는 30 내지 300 μM 5-(4-니트로벤질)아미노살리실산(5-(4-nitrobenzyl)aminosalicylic acid; NBAA)을 첨가하여 10분간 처리(12a), 또는 50μM Fe²⁺를 단독 또는 10 내지 100 μM NBAA를 첨가하여 24시간 처리(12b)하고, 24시간 후 배양액으로 유리되는 LDH의 양을 측정하여 신경세포의 사멸을 정량한 결과를 나타낸 그래프이다(평균 ± SEM, n = 7-8(12a) 또는 n = 3-4(12b) 배양 웰/조건). *는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 상대적 대조군(NMDA 단독 또는 Fe²⁺단독)과의 유의적 차이를 보여준다.

도 13은 배양한 후 12 내지 14일(DIV 12-14)된 생쥐의 대뇌피질세포에 300μM NMDA를 단독 또는 30 내지 300 μM 5-(4-니트로벤젠설포닐)아미노살리실산(5-(4-nitrobenzenesulfonyl)aminosalicylic acid; NBSAA)을 첨가하여 10분간 처리(13a), 또는 50μM Fe²⁺를 단독 또는 1 또는 300 μM NBSAA를 첨가하여 24시간 처리(13b)하고, 24시간 후 배양액으로 유리되는 LDH의 양을 측정하여 신경세포의 사멸을 정량한 결과를 나타낸 그래프이다(평균 ± SEM, n = 3-4(13a) 또는 n = 2-8(13b) 배양 웰/조건). *는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 상대적 대조군(NMDA 단독 또는 Fe²⁺단독)과의 유의적 차이를 보여준다.

도 14는 배양한 후 12 내지 14일(DIV 12-14)된 생쥐의 대뇌피질세포에 300μM NMDA를 단독 또는 30 내지 300 μM 5-[2-(4-니트로페닐)에틸]아미노살리실산(5-[2-(4-nitrophenyl)ethyl]aminosalicylic acid; NPAA)을 첨가하여 10분간 처리(14a), 또는 50μM Fe²⁺를 단독 또는 1 또는 300 μM NPAA를 첨가하여 24시간 처리(14b)하고, 24시간 후 배양액으로 유리되는 LDH의 양을 측정하여 신경세포의 사멸을 정량한 결과를 나타낸 그래프이다(평균 ± SEM, n = 4(14a) 또는 n = 4-8(14b) 배양 웰/조건). *는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 상대적 대조군(NMDA 단독 또는 Fe²⁺단독)과의 유의적 차이를보여준다.

도 15는 배양한 후 12 내지 14일(DIV 12-14)된 생쥐의 대뇌피질세포에 300μM NMDA를 단독 또는 30 내지 300 μM 5-[3-(4-니트로페닐)-n-프로필]아미노살리실산(5-[3-(4-nitrophenyl)-n-prophyl]aminosalicylic acid; NPPAA)을 첨가하여 10분간 처리(15a), 또는 50μM Fe²⁺를 단독 또는 1 내지 300 μM NPPAA를 첨가하여 24시간 처리(15b)하고, 24시간 후 배양액으로 유리되는 LDH의 양을 측정하여 신경세포의 사멸을 정량한 결과를 나타낸 그래프이다(평균 ± SEM, n = 4(15a) 또는 n = 3-8(15b) 배양 웰/조건). *는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 상대적 대조군(NMDA 단독 또는 Fe²⁺단독)과의 유의적 차이를 보여준다.

본 발명은 다음과 같은 구조식(I)로 나타내어지는 신규 5-벤질아미노 살리실산(5-benzylamino salicyclic acid; BAS) 및 그의 유도체를 제공한다:

(I)

상기 식 중에서,

X는 CO, SO₂또는 (CH₂)n(n은 1 내지 5의 정수이다);

R₁은 수소, 알킬(alkyl) 또는 알카노일(alkanoyl) 그룹;

R₂는 수소 또는 알킬 그룹;

R₃는 수소 또는 아세톡시(acetoxy) 그룹; 및

R₄는 비치환 또는 니트로(nitro), 할로겐(halogen), 할로알킬(haloalkyl) 및 C₁-C₅알콕시(alkoxy)로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 또는 그 이상으로 치환된 페닐(phenyl) 그룹; 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이다.

본 발명은 또한 중추신경계(central nervous system; CNS) 손상으로 고통받는 환자 또는 동물에게 구조식(I)로 나타내어지는 신경보호 화합물을 치료 가능한 적당량으로 투여하는 것을 포함하는, 상기 CNS의 급성 또는 만성적 손상으로부터 중추 신경을 보호하는 방법을 제공한다.

본 발명은 아울러 구조식(I)로 나타내어지는 신경보호 화합물을 치료 가능한 적당량으로 투여하는 것을 포함하는, 중추신경계의 급성 또는 만성적 손상으로부터 중추 신경을 보호하는 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 중추신경계의 급성 또는 만성적 손상으로 고통받는 환자 또는 동물에게 구조식(I)로 나타내어지는 상기 화합물을 치료 가능한 유효량으로 투여하는 것을 포함하는, NMDA 신경독성(neurotoxicity), Zn²⁺신경독성 또는 산화적 스트레스와 연관된 신경계 질환의 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 중추신경계(CNS)의 급성 또는 만성적 손상으로부터 중추 신경을 보호하기 위한 약물의 제조를 위한 구조식(I)의 화합물의 용도를 제공한다.

본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 당업자들은 본 발명의 상기 및 다른 특징들을 하기에서 제시된 상세한 설명으로부터 쉽게 이해할 것이다.

본 발명자들은 5-벤질아미노 살리실산(BAS) 및 그의 유도체를 합성하고, 상기 합성된 화합물이 복수의 신경보호작용 효과를 가짐을 입증하였다. 첫째, BAS 및 그의 유도체는 100 내지 1,000 μM의 복용량에서 NMDA 신경독성을 경감시킨다. 둘째, BAS 및 그의 유도체는 항산화제이고, 1 내지 300μM의 복용량으로 자유 라디칼 신경독성을 차단한다. 마지막으로, BAS 및 그의 유도체는 Zn²⁺신경독성을 경감시킨다. 이러한 BAS 및 그의 유도체의 신규한 복수의 신경보호 효과는 흥분성 독성, Zn²⁺신경독성 및 자유 라디칼 신경독성에 의해 수반되는 발작(stroke), 뇌의 외상과 척추 손상, 간질, 및 신경세포 퇴행성 질환을 치료하는데 유효하다.

5-아미노 살리실산을 적당한 화합물과 반응시킴에 의하여 상기 5-아미노 살리실산으로부터 BAS 및 그의 유도체를 합성할 수 있다. BAS 및 그의 유도체의 합성은 다음과 같은 반응식으로 나타낼 수 있다.

반응시약 (a): 벤질 브로마이드(benzyl bromide), 4-니트로벤질 브로마이드(4-nitrobenzyl bromide), 4-클로로벤질 클로라이드(4-chlorobenzyl chloride), 4-(트리플루오로메틸)벤질 클로라이드(4-(trifluoro methyl)benzyl chloride), 4-플루오로벤질 브로마이드(4-fluorobenzyl bromide), 4-메톡시벤질 클로라이드(4-methoxybenzyl chloride), N,N-디메틸 포름아미드(N,N-dimethyl formamide; DMF), 트리에틸아민(triethylamine), 실온, 4시간

구조식(I)의 바람직한 화합물 종류는 다음의 화합물을 포함한다:

상기 식에서, X는 CO, SO₂또는 (CH₂)n(n은 1 내지 5의 정수이다); R₁은 수소, C₁내지 C₅알킬 또는 C₂내지 C₅알카노일 그룹; R₂는 수소 또는 C₁내지 C₅알킬 그룹; R₃는 수소 또는 아세톡시 그룹; 및, R₄는 비치환 또는 니트로, 할로겐, 할로알킬 및 C₁내지 C₅알콕시로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 또는 그 이상으로 치환된 페닐 그룹; 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이다.

반응시약 (a): N,N-디메틸 포름아미드(DMF), 트리에틸아민, 실온, 4시간

반응시약 (a): EtOH, H₂SO₄, 환류(reflux), 6시간

(b): 아세틱 무수물(acetic anhydride), MeOH, 0 ℃, 30분

(c): 아세틱 무수물, H₂SO₄, 0 ℃, 30분

구조식(I)의 바람직한 화합물 종류는 다음의 화합물을 포함한다:

상기 식에서, X는 CO, SO₂또는 (CH₂)n(n은 1,2,3); R₁은 수소, C₁내지 C₃알킬 또는 C₂내지 C₃알카노일 그룹; R₂는 수소 또는 C₁내지 C₃알킬 그룹; R₃는 수소 또는 아세톡시 그룹; 및, R₄는 비치환 또는 니트로, 할로겐, 할로알킬(C₁-C₃) 및 C₁내지 C₃알콕시로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 또는 그 이상으로 치환된 페닐 그룹; 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이다.

<실시예 5>

반응시약 (a): N,N-디메틸 포름아미드(DMF), 트리에틸아민, 실온, 4시간

구조식(I)의 바람직한 특정 화합물은 다음과 같다:

5-벤질아미노살리실산(5-benzylaminosalicylic acid; BAS),

5-(4-니트로벤질)아미노살리실산(5-(4-nitrobenzyl)aminosalicylic acid; NBAS),

5-(4-클로로벤질)아미노살리실산(5-(4-chlorobenzyl)aminosalicylic acid; CBAS),

5-(4-트리플루오로메틸벤질)아미노살리실산(5-(4-trifluoromethylbenzyl)aminosalicylic acid; TBAS),

5-(4-플루오로벤질)아미노살리실산(5-(4-fluorobenzyl)aminosalicylic acid; FBAS),

5-(4-메톡시벤질)아미노살리실산(5-(4-methoxybenzyl)aminosalicylic acid; MBAS),

5-(펜타플로오로벤질)아미노살리실산(5-(pentafluorobenzyl)aminosalicylic acid; PBAS),

5-(4-니트로벤질)아미노-2-하이드록시 에틸벤조에이트(5-(4-nitrobenzyl)amino-2-hydroxy ethylbenzoate; NAHE),

5-(4-니트로벤질)-N-아세틸아미노-2-하이드록시 에틸벤조에이트(5-(4-nitrobenzyl)-N-acetylamino-2-hydroxy ethylbenzoate; NNAHE),

5-(4-니트로벤질)-N-아세틸아미노-2-아세톡시 에틸벤조에이트(5-(4-nitrobenzyl)-N-acetylamino-2-acetoxy ethylbenzoate; NNAAE),

5-(4-니트로벤조일)아미노살리실산(5-(4-nitrobenzoyl)aminosalicylic acid; NBAA),

5-(4-니트로벤젠설포닐)아미노살리실산(5-(4-nitrobenzenesulfonyl)aminosalicylic acid; NBSAA),

5-[2-(4-니트로페닐)에틸]아미노살리실산(5-[2-(4-nitrophenyl)ethyl]aminosalicylic acid; NPAA), 및

5-[3-(4-니트로페닐)-n-프로필]아미노살리실산(5-[3-(4-nitrophenyl)-n-propyl]aminosalicylic acid; NPPAA), 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이다.

"약학적으로 허용가능한 염(pharmaceutically-acceptable salts)"이라는 용어는 알카리 금속염 및 자유산 또는 자유염기의 부가염을 생산하기 위하여 통상적으로 사용되는 염을 포함한다. 약학적으로 허용가능하기만 하다면, 염의 특성은 특별히 한정되지는 아니하며, 상기 염을 형성하기 위하여 사용될 수 있는 산 또는 염기는 종래 기술의 당업자라면 쉽게 채택할 수 있을 것이다. 약학적으로 허용가능한 산 부가염을 형성하기 위하여 사용될 수 있는 산의 종류에는 염산, 황산 및 인산과 같은 무기산과 말레산(maleic acid), 숙신산(succinic acid) 및 시트르산(citric acid)과 같은 유기산이 포함된다. 기타의 염에는 나트륨(sodium), 칼륨(potassium), 칼슘 및 마그네슘과 같은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속(alkaline earth metal), 또는 디사이클로헥실아민(dicyclohexylamine)과 같은 유기염기로 이루어진 염이 포함된다. 상기 모든 염들은, 구조식(I)에 상응하는 화합물로부터, 예를 들어, 구조식(I)의 화합물을 적당한 산 또는 염기와 반응시키는 것과 같은, 통상적인 수단으로 제조될 수 있다.

합성예들은 대표적 화합물(I)의 제조를 위한 예시적인 방법을 제시한다.

<합성예 1> 5-벤질아미노살리실산(BAS)의 제조

질소 대기압하의 실온에서, 건조 DMF(25㎖)에 용해된 5-아미노살리실산(2.0 g, 13 mmole; 미국 Aldrich Chemical Company로부터 구입)과 트리에틸아민의 용액에 벤질브로마이드(2.68 g, 1.90 ㎖, 15.6 mmole)를 첨가하였다. 반응 혼합액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 얼음 조각을 반응 혼합액에 첨가한 후에 진공(invacuo)하에서 용매를 제거하였다. 상기 반응 혼합액을 물로 희석한 후에 에틸아세테이트(ethyl acetate)로 추출하였다. 유기층을 물과 소금물로 세척한 후에, MgSO₄무수물로 건조하였다. 용매의 증발후에, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피에 의하여 정제하고, 메탄올/에틸아세테이트/헥산(1:3:1)하에서 재결정함으로써 5-벤질아미노살리실산 3.6 g(73% 수율)을 백색 고체상으로 얻었다: 녹는점 173.5 - 174.5 ℃(분해).

C₁₄H₁₃NO₃의 원소분석

	% C	% H	% N
이론값	69.12	5.39	5.76
실험값	69.30	5.18	5.63

<합성예 2> 5-(4-니트로벤질)아미노살리실산(NBAS)의 제조

5-아미노살리실산(2.00 g, 13.0 mmole) 및 4-니트로벤질 브로마이드(3.38 g, 15.6 mmole)를 사용하여 합성예 1과 유사한 방법에 따라, 5-(4-니트로벤질)아미노살리실산 2.90 g(79% 수율)을 엷은 황색 고체상으로 얻었다: 녹는점 211 - 212 ℃.

C₁₄H₁₃N₂O₅의 원소분석

	% C	% H	% N
이론값	58.33	4.20	9.72
실험값	58.38	4.21	9.71

<합성예 3> 5-(4-클로로벤질)아미노살리실산(CBAS)의 제조

5-아미노살리실산(500 ㎎, 3.26 mmole) 및 4-클로로벤질 클로라이드(630 ㎎, 3.91 mmole)를 사용하여 합성예 1과 유사한 방법에 따라, 5-(4-클로로벤질)아미노살리실산 480 ㎎(53% 수율)을 백색 고체상으로 얻었다: 녹는점 227 - 228 ℃.

C₁₄H₁₂ClNO₃의 원소분석

	% C	% H	% N
이론값	60.55	4.36	5.04
실험값	60.43	4.21	5.02

<합성예 4> 5-(4-트리플루오로메틸벤질)아미노살리실산(TBAS)의 제조

5-아미노살리실산(500 ㎎, 3.26 mmole) 및 4-(트리플루오로메틸)벤질 클로라이드(760 ㎎, 3.92 mmole)를 사용하여 합성예 1과 유사한 방법에 따라, 5-(4-트리플루오로메틸벤질)아미노살리실산 510 ㎎(50% 수율)을 백색 고체상으로 얻었다: 녹는점 188 ℃ 이상(분해).

C₁₄H₁₂F₃NO₃의 원소분석

	% C	% H	% N
이론값	57.88	3.89	4.50
실험값	57.61	3.98	4.44

<합성예 5> 5-(4-플루오로벤질)아미노살리실산(FBAS)의 제조

5-아미노살리실산(500 ㎎, 3.26 mmole) 및 4-플루오로벤질 브로마이드(740 ㎎, 3.92 mmole)를 사용하여 합성예 1과 유사한 방법에 따라, 5-(4-플루오로벤질)아미노살리실산 480 ㎎(44% 수율)을 백색 고체상으로 얻었다: 녹는점 210 ℃ 이상(분해).

C₁₄H₁₂FNO₃의 원소분석

	% C	% H	% N
이론값	64.36	4.63	5.36
실험값	64.10	4.42	5.07

<합성예 6> 5-(4-메톡시벤질)아미노살리실산(MBAS)의 제조

5-아미노살리실산(1.00 g, 6.53 mmole) 및 4-메톡시벤질 클로라이드(1.23 g, 7.84 mmole)를 사용하여 합성예 1과 유사한 방법에 따라, 5-(4-메톡시벤질)아미노살리실산 890 ㎎(50% 수율)을 백색 고체상으로 얻었다: 녹는점 205 - 206 ℃.

C₁₅H₁₅NO₄의 원소분석

	% C	% H	% N
이론값	65.92	5.53	5.13
실험값	65.83	5.45	5.07

<합성예 7> 5-(펜타플루오로벤질)아미노살리실산의 제조

5-아미노살리실산(500 ㎎, 3.26 mmole) 및 펜타플루오로벤질 브로마이드(1.02 g, 3.92 mmole)를 사용하여 합성예 1과 유사한 방법에 따라, 5-(펜타플루오로벤질)아미노살리실산 650 ㎎(60% 수율)을 백색 고체상으로 얻었다: 녹는점 190 ℃ 이상(분해).

C₁₄H₈F₅NO₃의 원소분석

	% C	% H	% N
이론값	50.46	2.42	4.20
실험값	50.53	2.19	4.23

<합성예 8> 5-(4-니트로벤질)아미노-2-하이드록시 에틸벤조에이트의 제조

0 ℃에서 에탄올(35 ㎖)에 용해된 5-(4-니트로벤질)아미노살리실산(1.0 g, 3.4 mmole) 용액에 진한 H₂SO₄(3.5 ㎖)를 주의하여 첨가하였다. 상기 반응 혼합액을 80 ℃하에서 6시간 동안 교반시킨 후에 실온으로 냉각하였다. 용매를 진공하에서 제거한 후에 반응 혼합액을 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기층을 H₂O, 10% NaHCO₃용액, 5% HCl 용액 및 소금물로 세척하였다. 상기 유기층을 MgSO₄무수물로 건조하고, 진공하에서 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피에 의하여 정제하고, 에틸아세테이트/헥산(1:2)하에서 재결정함으로써 5-(4-니트로벤질)아미노-2-하이드록시 에틸벤조에이트 500 ㎎(46% 수율)을 황색 고체상으로 얻었다: 녹는점 106.5 - 107.5 ℃.

C₁₆H₁₆N₂O₅의 원소분석

	% C	% H	% N
이론값	60.75	5.10	8.86
실험값	60.68	5.24	9.04

<합성예 9> 5-(4-니트로벤질)-N-아세틸아미노-2-하이드록시 에틸벤조에이트의 제조

질소 대기압하의 0 ℃에서, 건조 메탄올(dried methanol)(50 ㎖)에 용해된 5-(4-니트로벤질)아미노-2-하이드록시 에틸벤조에이트(500 ㎎, 1.58 mmole) 용액에 아세틱 무수물(5 ㎖)를 주의하여 첨가하였다. 반응 혼합액을 10 ℃하에서 2시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합액에 얼음 조각을 천천히 첨가한 후에, 용매를 진공하에서 제거하였다. 상기 반응 혼합액을 에틸아세테이트와 H₂O로 추출한 후에, 유기층을 H₂O, 10% NaHCO₃(30 ㎖ x 3) 용액, 5% HCl(30 ㎖ x 2) 용액 및 소금물로 세척하였다. 상기 유기층을 MgSO₄무수물로 건조하고, 증발시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피에 의하여 정제하고, 에틸아세테이트/헥산(1:3)하에서 재결정함으로써 5-(4-니트로벤질)-N-아세틸아미노-2-하이드록시 에틸벤조에이트 400 ㎎(70% 수율)을 엷은 황색 고체상으로 얻었다: 녹는점 105.5 - 106.0 ℃.

C₁₈H₁₈N₂O₆원소분석

	% C	% H	% N
이론값	60.33	5.06	7.82
실험값	60.54	5.35	8.12

<합성예 10> 5-(4-니트로벤질)-N-아세틸아미노-2-아세톡시 에틸벤조에이트의 제조

질소 대기압하의 0 ℃에서, 아세틱 무수물(10 ㎖)에 용해된 5-(4-니트로벤질)아미노-2-하이드록시 에틸벤조에이트(500 ㎎, 1.58 mmole) 용액에 진한 H₂SO₄(0.5 ㎖)를 주의하여 첨가하였다. 반응 혼합액을 10 ℃하에서 30분 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합액에 얼음 조각을 천천히 첨가한 후에, 용매를 진공하에서 제거하였다. 상기 반응 혼합액을 물로 희석한 후에, 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기층을 H₂O, 10% NaHCO₃(30 ㎖ x 3) 용액, 5% HCl(30 ㎖ x 2) 용액 및 소금물로 세척하고, MgSO₄무수물로 건조하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 컬럼 크로마토그라래에 의하여 정제함으로써 5-(4-니트로벤질)-N-아세틸아미노-2-아세톡시 에틸벤조에이트 450 ㎎(71% 수율)을 엷은 황색 유지로 얻었다.

C₂₀H₂₀N₂O₇의 원소분석

	% C	% H	% N
이론값	60.00	5.03	7.00
실험값	59.96	4.84	7.15

<합성예 11> 5-(4-니트로벤조일)아미노살리실산의 제조

5-아미노살리실산(500 ㎎, 3.26 mmole) 및 4-니트로벤조일 클로라이드(700 ㎎, 3.77 mmole)를 사용하여 합성예 1과 유사한 방법에 따라, 5-(4-니트로벤조일)아미노살리실산 550 ㎎(56% 수율)을 엷은 황색 고체상으로 얻었다: 녹는점 270 - 271 ℃.

C₁₄H₁₀N₂0₆의 원소분석

	% C	% H	% N
이론값	55.63	3.33	9.27
실험값	55.82	3.43	9.08

<합성예 12> 5-(4-니트로벤젠설포닐)아미노살리실산의 제조

5-아미노살리실산(500 ㎎, 3.26 mmole) 및 4-니트로벤젠설포닐 클로라이드(720 ㎎, 3.26 mmole)를 사용하여 합성예 1과 유사한 방법에 따라, 5-(4-니트로벤젠설포닐)아미노살리실산 390 ㎎(35% 수율)을 황색 고체상으로 얻었다: 녹는점 239 - 240 ℃.

C₁₃H₁₀N₂0₇S의 원소분석

	% C	% H	% N	% S
이론값	46.15	2.98	8.28	9.48
실험값	46.27	2.92	8.34	9.51

<합성예 13> 5-[2-(4-니트로페닐)에틸]아미노살리실산의 제조

5-아미노살리실산(500 ㎎, 3.26 mmole) 및 4-니트로페네틸 브로마이드(900 ㎎, 3.92 mmole)를 사용하여 합성예 1과 유사한 방법에 따라, 5-(4-니트로페네틸)아미노살리실산 890 ㎎(50% 수율)을 엷은 황색 고체상으로 얻었다: 녹는점 234 - 236 ℃.

C₁₅H₁₄N₂O₅의 원소분석

	% C	% H	% N
이론값	59.60	4.67	9.27
실험값	59.77	4.79	9.24

<합성예 14> 5-[3-(4-니트로페닐)-n-프로필]아미노살리실산의 제조

5-아미노살리실산(500 ㎎, 3.26 mmole) 및 3-(4-니트로페닐)프로필 브로마이드(950 ㎎, 3.92 mmole)을 사용하여 합성예 1과 유사한 방법에 따라, 5-[3-(4-니트로페닐)-n-프로필]아미노살리실산 520 ㎎(50% 수율)을 엷은 황색 고체상으로 얻었다: 녹는점 229 - 231 ℃.

C₁₆H₁₆N₂O₅의 원소분석

	% C	% H	% N
이론값	60.75	5.10	8.86
실험값	60.77	5.07	8.89

배아기 생쥐로부터 제1 대뇌피질 세포배양액을 제조하여, 각 화합물의 신경보호 작용을 연구하는데 사용하였다. 신경계 질환에 있어서, 신경세포 사멸의 기전과 약리학적 관여를 연구하는데 생쥐 대뇌피질 세포배양계가 광범위하게 사용되어 왔다. 요약하면, 동물보호위원회(institutional animal care committee)에 의해 승인된 프로토콜에 따라서, 태생 후 15일의 생쥐의 뇌로부터 생쥐의 대뇌피질을 제거하였다. 상기 신피질(neocortice)을 부드럽게 분말화한 후, 100 ㎍/㎖ 폴리-D-라이신(poly-D-lysine)과 4 ㎍/㎖ 라미닌(laminine)으로 미리 코팅된 24 웰 플레이트에 도말하였다(5개 영역/플레이트). 도말 배지는 5% 말 혈청, 5% 소 태아 혈청, 2 mM 글루타민 및 21 mM 포도당을 보충시킨 이글스 최소필수배지(Eagles minimal essential media; MEM, Earles salts, 글루타민-결여로 공급된)로 이루어진다. 가습화된 5% CO₂대기하, 37 ℃에서 배양을 유지하였다. 생체 밖의 조건(in vitro)하에서 7일 동안 배양(DIV 7)한 후에, 배양액을 도말배지와 동일하나 태아 혈청이 결핍된 성장배지로 계대시켰다. 7일 내지 9일 동안 배양(DIV 7-9)한 후에, 아교세포(glia)의 과도한 성장을 차단하기 위하여, 10 mM 사이토신 아라비노푸라노시드(cytosine arabinofuranoside)를 주입하였다. 이후에 한 주당 2회씩에 걸쳐 신경세포와 아교세포의 혼합된 배양을 하였다.

NMDA 또는 Zn²⁺에 의한 신경세포의 사멸을 유도하기 위하여, 대뇌피질 세포배양액을 HEPES-완충된 대조군 염용액(HCSS)하에서 10분 동안 NMDA 또는 30분 동안 Zn²⁺의 유독 복용량에 접촉시켰다: (단위 mM) 120 NaCl, 5 KCl, 1.6 MgCl₂, 2.3 CaCl₂, 15 포도당, 20 HEPES 및 10 NaOH. 접촉 후에, 25 mM 포도당 및 26.2 mM 소듐바이카보네이트(sodium bicarbonate)로 조절된 MEM으로 배양액을 3번 세척하고 교체한 다음, 20-24시간 동안 CO₂배양기에 방치하였다. 자유 라디칼 신경독성을 유도하기 위하여, 25 mM 포도당 및 26.2 mM 소듐바이카보네이트로 조절된 MEM하에서, 대뇌피질 세포 배양액을 계속하여 20-24시간 동안 Fe²⁺또는 BSO에 접촉시켰다.

상대비(phase-contrast) 광학현미경하 또는 상기에서 설명한 방식(Koh and Choi, J Neurosci Methods 20:83-90, 1987)에 따라 신경독소에 의한 손상 후 24시간 동안 배싱 배양액으로 유리되는 젖산 탈수소효소(lactate dehydrogenase; LDH)의 양을 측정하여 전체 세포손상을 정량하였다. 24시간 후에 500 μM NMDA(= 100) 또는 허위 대조(= 0)의 계속적인 접촉 후에 유리된 LDH의 평균 양으로써 신경세포 사멸 퍼센트를 표준화하였다.

항산화 효과를 조사하기 위하여, 안정한 자유 라디칼인 DPPH(2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl radical)를 에탄올에 용해시켜 100 μM 용액을 제조하였다. 화합물을 DPPH 또는 에탄올과 반응시켰다. 30분 동안 배양후에, 517 ㎚에서 DPPH 흡광도의 상대적인 감소를 분광광도계로 측정하였다.

<실시예 1> 5-아미노 살리실산의 항산화 작용

5-아미노 살리실산(AS)의 신경보호 작용을 제1 대뇌피질 세포 배양액에서 조사하였다. 10 내지 300 μM AS의 주입으로 300 μM NMDA에 10분-접촉 후에 24시간 동안 전개된 신경세포 사멸은 경감되지 않았다(도 1a). 흥미롭게도, 10 내지 100 μM AS의 주입으로 Fe²⁺에 24시간-접촉 후에 자유 라디칼 신경독성은 복용량-의존적으로 방지되었다(도 1b). 300 μM Zn²⁺에 30분-접촉 후에 24시간 동안 전개된 신경세포의 사멸은 Zn²⁺처리 동안 및 그 이후의 AS의 계속적인 주입에 의하여도 감소되지 아니하였다(도 1c). 자유 라디칼 신경독성에 대한 AS의 신경보호 작용은, AS가안정한 자유 라디칼인 DPPH의 양을 감소시킴과 같이, 화합물의 직접적인 항산화 특성에 기인한다(표 1). 비타민 E의 막-투과가능한 형태인 트로록스(trolox)와 비교할 때, AS는 약한 항산화제이다.

AS의 항산화 특성

	반응물	트로록스 또는 AS의 농도(μM)
		0	3	10	30	100	300
A517㎚	DPPH 단독	1.2 ± 0.05
	DPPH + 트로록스		1.08 ± 0.1	0.89 ± 0.08*	0.39 ± 0.06*	0.05 ± 0.01*	0.03 ± 0.01*
	DPPH + AS		-	1.03 ± 0.05	0.9 ± 0.06*	0.45 ± 0.07*	0.16 ± 0.00*

AS 또는 트로록스를 에탄올에 용해시킨 100 μM DPPH와 30분 동안 반응시켰다. 에탄올 단독으로부터 얻은 바탕값을 공제한 후에, 평균 ± SEM(한 조건당 n = 3 시험관)으로써 517 ㎚에서 DPPH의 양의 변화를 측정함에 의하여 항산화 특성을 분석하였다. *는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 DPPH 단독과의 유의적 차이를 보여준다.

AS는 NMDA 또는 Zn²⁺신경독성에 대한 유익한 효과가 없이 자유 라디칼 손상으로부터 신경세포를 보호할 수 있다. 그러나, AS는 자유 라디칼을 제거하는 것이 트로록스 보다는 약하다.

<실시예 2> 5-벤질아미노살리실산 및 그의 유도체의 신경보호 효과

<2-1> 5-벤질아미노살리실산의 신경보호 효과

BAS를 합성하여 대뇌피질 세포배양액에 유도된 신경세포 사멸에 대하여 연구하였다. 300 μM 5-벤질아미노살리실산(BAS)의 동시적인 주입은 NMDA-유도 신경세포 사멸을 대략 50% 정도 감소시켰다(도 2a). 50 μM Fe²⁺(도 2b) 또는 10 mM BSO(도 2c)에 접촉시킨 후의 신경세포 사멸은 1 μM BAS의 존재하에서 실질적으로 감소하였고, 3 μM BAS의 주입에 의해서는 거의 완전히 차단되었다. 신경세포 사멸은 30 내지 300 μM BAS의 투여로써 30분 동안 300 μM Zn²⁺에 접촉시킨 후 24시간 동안 복용량-의존적으로 감소되었다(도 2d). AS 또는 트로록스와 같이, BAS는 직접적인 항산화제로서 작용하였다(표 2). BAS의 항산화 특성은 1 μM의 낮은 복용량에서도 관찰되었다.

BAS의 항산화 특성

[BAS], μM	0	1	3	10	30	100	300
A517㎚	1.2 ± 0.05	1.07 ± 0.07	1.01 ± 0.07	0.71 ± 0.09*	0.21 ± 0.04*	0.15 ± 0.02*	0.16 ± 0.01*

BAS를 에탄올에 용해시킨 100 μM DPPH와 30분 동안 반응시켰다. 에탄올 단독으로부터 얻은 바탕값을 공제한 후에, 평균 ± SEM(한 조건당 n = 3 시험관)으로써 517 ㎚에서 DPPH의 양의 변화를 측정함에 의하여 항산화 특성을 분석하였다. *는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 DPPH 단독([BAS] = 0)과의 유의적 차이를 보여준다.

<2-2> BAS 유도체

벤질아미노 그룹의 파라(para) 위치의 -H를, -NO₂로[5-(4-니트로벤질아미노)살리실산; NBAS], -Cl로[5-(4-클로로벤질아미노)살리실산; CBAS], -CF₃로[5-(4-트리플루오로메틸벤질아미노)살리실산; TBAS] 치환하는 것에 의하여 BAS 유도체를 합성하였다. 전자-받게 그룹(electron-withdrawing group)으로의 이러한 치환으로 NMDA, Zn²⁺또는 자유 라디칼 신경독성에 대한 BAS의 신경보호 효과는 감소되지 않았다(도 3 내지 도 5). 이러한 BAS 유도체는 자유 라디칼 신경독성을 방지하는데 있어서 BAS 보다도 더 강력하였다.

NBAS의 항산화 특성

[BAS], μM	0	10	30	100	300
A517㎚	1.2 ± 0.01	0.37 ± 0.1*	0.04 ± 0.01*	0.04 ± 0.00*	0.04 ± 0.00*

NBAS를 에탄올에 용해시킨 100 μM DPPH와 30분 동안 반응시켰다. 에탄올단독으로부터 얻은 바탕값을 공제한 후에, 평균 ± SEM(한 조건당 n = 3 시험관)으로써 517 ㎚에서 DPPH의 양의 변화를 측정함에 의하여 항산화 특성을 분석하였다. *는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 DPPH 단독([반응물] = 0)과의 유의적 차이를 보여준다.

-NO₂를 -F 또는 -OCH₃로 치환한 경우에는 NMDA 독성에 대하여 신경보호가 감소된 것으로 나타났으나, 자유 라디칼 손상에 대해서는 신경보호의 잠재력이 증가한 것으로 나타났다(도 6 및 도 7).

<실시예 3> 5-(펜타플루오로벤질)아미노살리실산의 신경보호 효과

5-(펜타플루오로벤질)아미노살리실산(PBAS)을 합성하여 신경세포 손상에 대하여 시험하였다. 100 내지 1000 μM PBAS의 동시적인 주입으로 NMDA-유도 신경세포 사멸은 복용량-의존적인 경향으로 감소되었다. 300 μM PBAS의 처리로 NMDA 신경독성은 대략 65% 정도 감소되었다(도 8a). 1 mM 까지 PBAS의 증가된 복용량으로 300 μM NMDA의 접촉에 이은 신경세포 사멸은 완전히 차단되었다. 50 μM Fe²⁺의 계속적인 접촉에 따른 신경세포 사멸은 1 μM PBAS의 주입으로 유효하게 감소하였다. Fe²⁺-유도 신경세포 사멸은 3 μM PBAS의 존재로 거의 완전히 차단되었다. 10 mM BSO의 접촉으로부터 예상되는 자유 라디칼 신경독성은 1 μM PBAS의 주입으로 차단되었다. PBAS가 DPPH의 양을 감소시켰고(표 4), 이것은 PBAS가 직접적인 항산화제로서 자유 라디칼 신경독성을 차단하였음을 제시한다. 100 내지 300 μM PBAS의 동시적인 주입으로 Zn²⁺신경독성은 경감되었다(도 8d).

PBAS의 항산화 특성

[BAS], μM	0	1	3	10	30	100	300
A517㎚	1.2 ± 0.01	1.07 ± 0.07	1.01 ± 0.07	0.71 ± 0.09*	0.21 ± 0.04*	0.15 ± 0.02*	0.16 ± 0.01*

PBAS를 에탄올에 용해시킨 100 μM DPPH와 30분 동안 반응시켰다. 에탄올 단독으로부터 얻은 바탕값을 공제한 후에, 평균 ± SEM(한 조건당 n = 3 시험관)으로써 517 ㎚에서 DPPH의 양의 변화를 측정함에 의하여 항산화 특성을 분석하였다. *는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 DPPH 단독([PBAS] = 0)과의 유의적 차이를 보여준다.

<실시예 4> NBAS 유도체(X = CH₂)의 신경보호 효과

5-(4-니트로벤질)아미노-2-하이드록시 에틸벤조에이트(NAHE; R₁= H, R₂= CH₂CH₃, R₃= H), 5-(4-니트로벤질)-N-아세틸아미노-2-하이드록시 에틸벤조에이트(NNAHE; R₁=COCH₃, R₂= CH₂CH₃, R₃= H) 및 5-(4-니트로벤질)-N-아세틸아미노-2-아세톡시 에틸벤조에이트(NNAAE; R₁= COCH₃, R₂=CH₂CH₃, R₃= COCH₃)와같은 몇 종류의 PBAS 유도체를 합성하여, 대뇌피질 세포배양액에 대한 신경보호 작용을 연구하였다. 상기 유도체들은 300 μM에서 NMDA 신경독성을 경감시켰다(도 9 내지 11). 10 μM NAHE, NNAHE 또는 NNAAE의 주입으로 Fe²⁺-유도 자유 라디칼 신경 독성은 차단되었다.

<실시예 5> NBAS 유도체(X = CO, SO₂, CH₂CH₂또는 CH₂CH₂CH₂)의 신경보호 효과

NBAS의 X(CH₂) 그룹을 CO[5-(4-니트로벤조일)아미노살리실산; NBAA], SO₂[5-(4-니트로벤젠설포닐)아미노살리실산; NBSAA], CH₂CH₂[5-(4-니트로페네틸)아미노살리실산; NPAA], 또는 CH₂CH₂CH₂[5-[3-(4-니트로페닐)-n-프로필]아미노살리실산; NPPAA]으로 치환하였다. 30 μM 복용량에서 NBAA는 NMDA의 신경독성을 유효하게 경감시켰다. 그러나, NMDA에 대한 이러한 보호 효과는 300 μM의 복용량까지 더 이상 증가하지 않았다(도 12a). 흥미롭게도, 30 내지 300 μM NBSAA의 주입으로 NMDA 신경독성은 복용량-의존적인 경향으로 경감되었다(도 13a). 300 μM NBSAA의 주입으로, 300 μM NMDA의 접촉에 이은 90 - 100% 신경세포 사멸은 현저하게 감소하였다. NBAA 및 NBSAA 역시 Fe²⁺손상에 대한 신경보호제이기는 하지만, 자유 라디칼 신경독성을 감소시키는데 있어서는 NBAS 보다 약하였다(도 12 및 도 13; 표 5).

CH₂의 X(CH₂CH₂또는 CH₂CH₂CH₂)로의 치환으로 NMDA 신경독성에 대한 NBAS의 보호 잠재력은 감소되었다. 300 μM NPAA 또는 NPPAA의 투여로 대뇌피질 신경세포에서 NMDA-유도 신경세포 사멸은 약간 감소되었다(도 14 및 도 15). 대조적으로, 1 μM NPAA 또는 NPPAA의 존재하에서, Fe²⁺-유도 신경세포 사멸은 완전히 차단된 것으로 나타난 바와 같이, NPAA 또는 NPPAA는 자유 라디칼 신경독성을 차단하는데 있어서, NBAS보다 더 효과적임이 입증되었다.

NBAS 유도체의 항산화 특성

반응물	DPPH	DPPH + NBAA	DPPH + NBSAA	DPPH + NPAA	DPPH + NPPAA
A517㎚	1.2 ± 0.01	0.42 ± 0.22*	0.15 ± 0.05*	0.09 ± 0.01*	0.09 ± 0.02*

NBAS 유도체(각각 100 μM)를 에탄올에 용해시킨 100 μM DPPH와 30분 동안 반응시켰다. 에탄올 단독으로부터 얻은 바탕값을 공제한 후에, 평균 ± SEM(한 조건당 n = 3 시험관)으로써 517 ㎚에서 DPPH의 양의 변화를 측정함에 의하여 항산화 특성을 분석하였다. *는 ANOVA 및 스튜던트-뉴만-케일츠 테스트를 이용하였을 때,p< 0.05 에서의 DPPH 단독과의 유의적 차이를 보여준다.

상기의 결과들은 구조식(I)의 화합물이 흥분성 독성, Zn²⁺신경독성 및 자유 라디칼 신경독성과 연관된 신경세포 퇴행성 질환을 예방하는데 효과적으로 이용될 수 있음을 나타낸다.

사람에게 구조식(I)의 화합물의 투여는 구강 투여를 포함한 사람환자 또는 동물의 혈관 내에 상기 화합물을 도입할 수 있는 임의의 방법, 및 정맥주사, 근육내주사 및 피하주사에 의하여 이루어질 수 있다. 상기 동물에는 고양이, 개, 가금, 가축 등을 포함하지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.

예방적 치료를 위해 지시된 화합물은 바람직하게는 일반적으로 체중 킬로그람 당 약 0.1 ㎎ 내지 약 20 ㎎의 범위에서 매일 복용하는 것이다. 보다 바람직하게는 체중 킬로그람 당 약 0.2 ㎎ 내지 약 10 ㎎의 범위에서 복용하는 것이다. 가장 바람직하게는 체중 킬로그람 당 약 0.5 내지 약 5 ㎎의 범위에서 매일 복용하는 것이다. 적당한 복용량은 매일 복수의 하위-복용량(sub-dose)으로 투여될 수 있다. 이러한 하위-복용량은 단위복용 형태로 투여될 수 있다. 일반적으로, 복용량 또는 하위-복용량은 단위복용 형태 당 약 1 ㎎ 부터 약 100 ㎎의 활성 화합물을 포함할 수 있다. 보다 바람직한 복용량은 단위복용 형태 당 약 2 ㎎ 부터 50 ㎎의 활성 화합물을 포함할 것이다. 가장 바람직한 복용량은 단위복용 당 약 3 ㎎ 부터 약 25 ㎎의 활성 화합물을 포함하는 복용 형태이다.

활성 화합물은 통상적으로 약학적으로-허용가능한 제제로 투여된다. 상기 제제는 하나 또는 그 이상의 약학적으로-허용가능한 담체 또는 희석제와 함께 활성 화합물을 포함할 수 있다. 또한 다른 치료제가 제제에 포함될 수 있다. 약학적으로-허용가능한 담체 또는 희석제는 바람직하지 못한 부작용의 유발 없이 상기 활성 화합물의 운반을 위한 적당한 운반체를 제공한다. 상기 제제에서 활성 화합물의 운반은 경구, 비강, 국부(topical route), 구강(buccal route) 및 설하(sublingualroute)를 포함한 다양한 경로 또는 피하, 근육내, 정맥 및 피내경로와 같은 비경구적 투여에 의하여 수행될 수 있다.

구강 투여를 위한 제제는 윤활제, 방부제, 계면활성제 또는 분산제의 하나 또는 그 이상과 함께 젤라틴 또는 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스(hydroxypropylmethyl cellulose)와 같은 결합제 내에 분산된 활성 화합물을 포함하는 캡슐의 형태일 수 있다. 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스 내에 활성 화합물의 배치로 제공될 수 있는 바와 같이 상기 캡슐 또는 정제는 제어-방출 제제를 포함할 수 있다.

비경구적 투여를 위한 제제는 수용성 또는 비수용성 등장멸균 주사용액이나 현탁액의 형태일 수 있다. 이러한 용액 및 현탁액은 구강 투여용 제제로의 사용를 위하여 상기에서 언급된 하나 또는 그 이상의 담체 또는 희석제를 포함한 멸균된 분말이나 과립으로부터 제조될 수 있다.

본 발명이 비록 구체적 실시예의 형태로 설명되기는 하였지만, 이러한 상세한 실시예로 본 발명이 제한되어 이해되어져서는 안된다. 본 발명의 사상과 범위를 벗어나지 않고도 다양한 균등물, 변화 및 변형이 이루어질 수 있으며, 이러한 균등 실시예도 본 발명의 일부분으로 이해되어져야 한다.

<참고문헌(References)>

A. I. Faden.Pharmacol.Toxicol.78 (1):12-17, 1996.

C. K. Joo, J. S. Choi, H. W. Ko, K. Park, S. Sohn, M. H. Chun, Y. J. Oh and B. J. Gwag. IOVS (16) 43:22, 1999.

D. E. Bredesen, M. Wiedau-Pazos, J. J. Goto, S. Rabizadeh, J. A. Roe, E. B. Gralla, L. M. Ellerby, and J. S. Valentine.Neurology47:S36-8, 1996.

J.W. Olney.Retina2:341-359, 1982.

D. W. Choi and J. Y. Koh.Annu.Rev.Neurosci.21:347-75:347-375, 1998.

D. W. Choi.Neuron1:623-634, 1988.

E. D. Hall, J. M. Braughler, and J. M. McCall.J.Neurotrauma.5 (1):81-89, 1988.

E. Y. Kim, J. Y. Koh, Y. H. Kim, S. Sohn and B. J. Gwag. Eur. J Neurosci. 11: 327-334. 1999

J. L. Montastruc, O. Rascol, and J. M. Senard.Neurosci.Biobehav.Rev.21 (4):477-480, 1997.

K. A. Jellinger and C. Bancher.J.Neural Transm.Suppl.54:77-95:77-95, 1998.

M. F. Beal.Ann.Neurol.38 (3):357-366, 1995.

M. P. Cuajungco and G. J. Lees.Brain Res.Rev.23 (3):219-236, 1997.

P. H. Chan.Stroke27 (6):1124-1129, 1996.

S. J. Won, E. C. Park, B. R. Ryu, H. W. Ko, S. Sohn, H. J. Kwon, and B. J. Gwag.Neurobiology of Disease(in press), 2000

Claims (10)

1. 다음의 구조식(I)로 나타내어지는 화합물:

   (I)

   상기 식 중에서,

   X는 CO, SO₂또는 (CH₂)n(n은 1 내지 5의 정수이다);

   R₁은 수소, 알킬(alkyl) 또는 알카노일(alkanoyl) 그룹;

   R₂는 수소 또는 알킬 그룹;

   R₃는 수소 또는 아세톡시(acetoxy) 그룹; 및

   R₄는 비치환 또는 니트로(nitro), 할로겐(halogen), 할로알킬(haloalkyl) 및 C₁-C₅알콕시(alkoxy)로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 또는 그 이상으로 치환된 페닐(phenyl) 그룹; 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이다.
2. 제 1항에 있어서, X는 CO, SO₂또는 (CH₂)n(n은 1 내지 5의 정수이다); R₁은수소, C₁-C₅알킬 또는 C₂-C₅알카노일 그룹; R₂는 수소 또는 C₁-C₅알킬 그룹; R₃는 수소 또는 아세톡시 그룹; 및 R₄는 비치환 또는 니트로, 할로겐, 할로알킬 및 C₁-C₅알콕시로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 또는 그 이상으로 치환된 페닐 그룹; 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염임을 특징으로 하는 화합물.
3. 제 1항에 있어서, X는 CO, SO₂또는 (CH₂)n(n은 1, 2, 3); R₁은 수소, C₁-C₃알킬 또는 C₂-C₃알카노일 그룹; R₂는 수소 또는 C₁-C₃알킬 그룹; R₃는 수소 또는 아세톡시 그룹; 및 R₄는 비치환 또는 니트로, 할로겐, 할로(C₁-C₃)알킬 및 C₁-C₃알콕시로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 또는 그 이상으로 치환된 페닐 그룹; 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염임을 특징으로 하는 화합물.
4. 제 1항에 있어서,

   5-벤질아미노살리실산(5-benzylaminosalicylic acid; BAS),

   5-(4-니트로벤질)아미노살리실산(5-(4-nitrobenzyl)aminosalicylic acid; NBAS),

   5-(4-클로로벤질)아미노살리실산(5-(4-chlorobenzyl)aminosalicylic acid; CBAS),

   5-(4-트리플루오로메틸벤질)아미노살리실산(5-(4-trifluoromethylbenzyl)aminosalicylic acid; TBAS),

   5-(4-플루오로벤질)아미노살리실산(5-(4-fluorobenzyl)aminosalicylic acid; FBAS),

   5-(4-메톡시벤질)아미노살리실산(5-(4-methoxybenzyl)aminosalicylic acid; MBAS),

   5-(4-펜타플루오로벤질)아미노살리실산(5-(4-pentafluorobenzyl)aminosalicylic acid; PBAS),

   5-(4-니트로벤질)아미노-2-하이드록시 에틸벤조에이트(5-(4-nitrobenzyl)amino-2-hydroxy ethylbenzoate),

   5-(4-니트로벤질)-N-아세틸아미노-2-하이드록시 에틸벤조에이트(5-(4-nitrobenzyl)-N-acetylamino-2-hydroxy ethylbenzoate),

   5-(4-니트로벤질)-N-아세틸아미노-2-아세톡시 에틸벤조에이트(5-(4-nitrobenzyl)-N-acetylamino-2-acetoxy ethylbenzoate),

   5-(4-니트로벤조일)아미노살리실산(5-(4-nitrobenzoyl)aminosalicylic acid),

   5-(4-니트로벤젠설포닐)아미노살리실산(5-(4-nitrobenzenesulfonyl)aminosalicylic acid),

   5-(4-니트로페네틸)아미노살리실산(5-(4-nitrophenethyl)aminosalicylic acid), 및

   5-[3-(4-니트로페닐)-n-프로필]아미노살리실산(5-[3-(4-nitrophenyl)-n-propyl]aminosalicylic acid), 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나인 것을 특징으로 하는 화합물.
5. 중추신경계(CNS)의 급성 또는 만성적 손상으로부터 중추신경을 보호하기 위한 약물의 제조를 위한 제 1항 내지 제 4항 중 어느 하나의 항에 따른 화합물의 용도.
6. 제 5항에 있어서, 상기 CNS 손상은 허혈성 신경손상(ischemia), 저산소증(hypoxia), 저혈당증(hypoglycemia), 뇌의 외상(traumatic brain injury), 척추 외상(traumatic spinal cord injury), 간질(epilepsy), 헌팅톤씨 병(Huntington's disease), 파킨슨씨 병(Parkinson's disease), 알츠하이머 병(Alzheimer's disease) 또는 근위축성 측삭경화증(amyotrophic lateral sclerosis)으로부터 유발되는 것을 특징으로 하는 용도.
7. 제 5항에 있어서, 상기 CNS 손상은 N-메틸-D-아스파테이트(N-methyl-D-aspartate; NMDA) 글루타메이트 수용체의 활성, Zn²⁺의 출입 및 축적, 또는 자유 라디칼에 의하여 유발되는 것을 특징으로 하는 용도.
8. 제 5항 내지 제 7항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 화합물은 NMDA 신경독성, Zn²⁺신경독성을 경감시키고 직접적인 항산화제로서 자유 라디칼 신경독성을 차단하는 것을 특징으로 하는 용도.
9. NMDA 신경독성, Zn²⁺신경독성 또는 산화적 스트레스와 연관된 신경계 질환을 치료하고 예방하기 위한 약물의 제조를 위한 제 1항 내지 제 4항 중 어느 하나의 항에 따른 화합물의 용도.
10. 약학적으로 적당한 양으로 제 1항 내지 제 4항 중 어느 하나의 항에 따른 신경보호 화합물을 포함하는 중추신경계(CNS)의 급성 또는 만성적 손상으로부터 중추 신경을 보호하기 위한 조성물.