KR20020087210A - 상처치유 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 계란의 난황막에서 추출한 콜라겐을 포함하는 상처치유 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 상처치유 조성물은 계란의 난황막에서 분리한 콜라겐 타입Ⅰ, 콜라겐 타입Ⅴ, 콜라겐 타입Ⅹ 또는 전기물질의 혼합물을 유효성분으로 포함하고, 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 본 발명의 상처치유 조성물은 피부재생 능력이 우수하고, 천연물로부터 제조되어 환경친화적이며, 버려지는 자원으로부터 제조되어 경제적이므로, 창상의 치료에 널리 활용될 수 있을 것이다.

Description

상처치유 조성물{Composition for Healing Injury}

본 발명은 상처치유 조성물에 관한 것이다. 좀 더 구체적으로 본 발명은 계란의 난황막에서 추출한 콜라겐을 포함하는 상처치유 조성물에 관한 것이다.

일반적으로, 생물은 몸에 상처가 생길 경우, 그 상처 부위를 어느 정도 스스로 방어하고 자가치유를 하려고 하는 성질을 가지고 있다. 특히, 창상과 같은 외상에 의하여 피부가 손상될 경우, 일정 수준의 이하의 피부손상은 자가치유 능력으로 회복될 수 있으나, 일정 수준 이상의 피부손상은 세균의 감염 등과 같은 기타 요인으로 인하여, 다른 질병으로 확산될 수도 있다. 이를 방지하기 위하여, 상처치료 조성물을 사용하는데, 전기 조성물은 생체 친화성이 우수하여 상처 부위에 있어서의 거부반응이 적고, 상처 부위와 밀착할 수 있어야 하며, 상처 부위의 세균 감염을 방지할 수 있어야 하고, 다른 의약품과 혼합하여 사용 하더라도 반응성이 없어야한다.

현재 화상이나 외상의 치료보조에 사용되고 있는 창상피복 조성물은 손상을 입은 피부가 회복될 때까지 한시적으로 상처를 보호하고, 체내의 수분 누출을 방지하며, 삼출액-염증이 있을 때 병소(病巢)에 모인 액체를 흡수할 뿐만 아니라, 세균의 감염을 방지한다는 특징을 공유하고 있다. 이들을 종류별로 살펴보면, 피부흡수성이 우수한 겔을 주성분으로 하는 조성물, 폴리우레탄 막 또는 돼지 가죽의 동결건조물을 주성분으로 하는 조성물, 천연다당류인 키틴으로 피복된 다공질 막을 주성분으로 하는 조성물, 합성고분자 또는 함수성 젤라틴을 주성분으로 포함하는 조성물 등이 있다. 아울러, 이외의 물질을 사용한 상처치료 조성물이 개발되고 있으나, 이들은 합성된 물질을 주요성분으로 포함하고 있으며, 이들 물질들은 피부의 손상된 부위를 치료하는데 도움이 되지만, 정상조직에 대한 부작용이 조금씩 상존하고 있으므로, 이러한 문제점을 해결하기 위하여 천연물질을 주요성분으로 포함하는 상처치유 조성물을 개발하려는 노력이 계속되고 있다. 그러나, 대부분의 천연물로부터 제조되는 상처치유 조성물은 재료의 구입단가와 제조과정 중에 소요되는 비용이 막대하여 경제성이 없다는 단점을 극복하지 못하고 있는 실정이다.

따라서, 경제적인 방법을 통하여, 천연물질을 주요성분으로 포함하는 상처치유 조성물을 개발하여야 할 필요성이 끊임없이 대두되었다.

이에, 본 발명자들은 경제적인 방법을 통하여, 천연물질을 주요성분으로 포함하는 상처치유 조성물을 개발하고자 예의 연구노력한 결과, 현재 폐기되는 자원인 계란의 난황막에서 분리한 콜라겐 타입Ⅰ, 콜라겐 타입Ⅴ, 콜라겐 타입Ⅹ 또는 그들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 상처치유 조성물을 제조하여, 이들의 지혈효과와 상처치유 효과가 우수함을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.

결국, 본 발명의 주된 목적은 계란의 난황막에서 분리한 콜라겐 타입Ⅰ, 콜라겐 타입Ⅴ, 콜라겐 타입Ⅹ 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 상처치유 조성물을 제공하는 것이다.

도 1a는 수술 후 3일이 경과한, 본 발명의 상처치유 조성물을 처리하지 않은 대조군의 창상 사진이다.

도 1b는 수술 후 3일이 경과한, 본 발명의 상처치유 조성물을 처리한 실험군의 창상 사진이다.

도 2a는 수술 후 6일이 경과한, 본 발명의 상처치유 조성물을 처리하지 않은 대조군의 창상 사진이다.

도 2b는 수술 후 6일이 경과한, 본 발명의 상처치유 조성물을 처리한 실험군의 창상 사진이다.

도 3a는 수술 후 9일이 경과한, 본 발명의 상처치유 조성물을 처리하지 않은 대조군의 창상 사진이다.

도 3b는 수술 후 9일이 경과한, 본 발명의 상처치유 조성물을 처리한 실험군의 창상 사진이다.

도 4a는 수술 후 7일이 경과된, 본 발명의 상처치유 조성물을 처리하지 않은 대조군의 피부조직단면을 나타내는 현미경사진이다.

도 4b는 수술 후 7일이 경과된, 본 발명의 상처치유 조성물을 처리한 실험군의 피부조직단면을 나타내는 현미경사진이다.

도 5a는 수술 후 7일이 경과된, 본 발명의 상처치유 조성물을 처리하지 않은 대조군의 상피조직단면을 나타내는 전자 현미경사진이다.

도 5b는 수술 후 7일이 경과된, 본 발명의 상처치유 조성물을 처리하지 않은 대조군의 진피조직단면을 나타내는 전자 현미경사진이다.

도 5c는 수술 후 7일이 경과된, 본 발명의 상처치유 조성물을 처리한 실험군의 상피조직단면을 나타내는 전자 현미경사진이다.

도 5d는 수술 후 7일이 경과된, 본 발명의 상처치유 조성물을 처리한 실험군의 진피조직단면을 나타내는 전자 현미경사진이다.

본 발명의 상처치유 조성물은 계란의 난황막에서 분리한 콜라겐 타입Ⅰ, 콜라겐 타입Ⅴ, 콜라겐 타입Ⅹ 또는 전기물질의 혼합물을 유효성분으로 포함하고, 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함한다.

계란의 난황막에는 콜라겐 타입Ⅰ, 콜라겐 타입Ⅴ 및 콜라겐 타입Ⅹ가 존재한다(참조: Arias JL et al., Connect Tissue Res., 26(1-2):37-45, 1991; Wong M, et al., Dev Biol., 104:28-36, 1984). 전기 콜라겐들은 현재 의료용 재료로서 사용되고 있는 콜라겐 타입Ⅰ, 콜라겐 타입IV 및 콜라겐 타입Ⅴ콜라겐과는 달리 상처부위에서 나오는 삼출액이 콜라겐에 서서히 흡수되어 상처면과의 밀착력이 좋으며 세균에 의한 2차 감염을 방지할 수 있고, 동시에 피부를 재생시킬 수 있다.

본 발명의 상처치유 조성물의 유효성분으로 함유되는 콜라겐 타입Ⅰ, 콜라겐 타입Ⅴ 또는 콜라겐 타입Ⅹ는 약학적으로 허용가능한 결합제(예, 폴리비닐피롤리돈, 하이드록시프로필셀룰로오스), 붕해제(예, 카복시메틸셀룰로오스칼슘, 전분글리콜산나트륨), 희석제(예, 옥수수전분, 유당, 콩기름, 결정셀룰로오스, 만니톨), 활택제(예, 스테아린산 마그네슘, 탈크), 안정제(카복시메틸셀룰로오스나트륨, 알파 또는 베타 싸이클로 덱스트린, 비타민 C, 구연산, 백납), 보존료(예, 파라옥시안식향산메틸, 파라옥시안식향산프로필, 안식향산나트륨) 또는 향료(예, 에틸바닐린, 마스킹후레바, 멘톨후라보노, 허브향)와 혼합하여, 정제, 다공성 막, 분말제, 겔제, 연고제, 크림제, 액제 등의 약학적 제제로 제조될 수 있다. 또한, 진피감염을 막기 위하여, 상용량의 공지된 항생물질을 추가로 포함할 수도 있다.

투여량

상처치유 조성물의 투여량은 환자의 연령, 체중 및 창상의 정도에 따라 차이가 있으나, 통상 성인(체중 60kg 기준)의 경우 비경구로 1일 1 내지 5회 0.01 내지 0.06g/cm²의 양으로 창상부위에 도포하는 것이 바람직하며, 본 발명의 분야에서 통상의 지식을 가진 자의 경험에 의하여 적절히 결정될 수도 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 상처치료 조성물의 피부창상치유효과

계란껍질로부터 난황막을 수득한 후 10배 중량의 증류수가 담겨진 용기로 옮기고 반복적인 원심분리과정을 통해 증류수로 3회 세척하고 75% 에탄올로 3회 세척하였다. 이러한 과정을 통해 섬유상의 콜라겐 복합물을 제외한 지질 및 기타 난황막 단백질들을 제거하였다. 이와 같이 얻어진 콜라겐 복합물을 질소용액에서 급속 냉동시킨 후 막자사발에서 분말화 하고 미네랄 오일을 1:1 중량비로 첨가하여 교반하며 겔상으로 제형화하고, 0.001mg/ml의 농도로 네오마이신을 첨가하여 상처치료 조성물을 제조하였다.

8주령(체중 2 Kg)의 건강한 웅성 가토(New Zealand White Rabbit, 대한 동물 사육 센터)를 사육실 조건에서 사료(제일유지 사료)와 물(drinking water)은 무제한 공급하며 사육하였다. 이어, 실험동물 피부 중, 견갑하각(inferior border of scapular)에서 수평으로 5cm 이동한 부위에 위치한 2 ×2cm 넓이의 피부를 수술부위로 지정하고, 수술부위를 소독한 다음, 2％ 리도카인(lidocaine)을 사용하여 국소 마취하고, 수술부위의 진피를 포함한 피부조직을 절개한 후, 압박술로 지혈하고, 상처 부위를 소독하였다. 이어, 전기 제조된 상처치료 조성물을 수술 2일째 부터 상처 부위에 0.025g/cm²양으로 도포한 실험군과 포타딘을 이용하여 소독치료만을 수행한 대조군을 제작하고, 대조군과 심험군에 있어서, 초기 창상면적에 대하여, 경과 일수에 따른 창상면적의 비율을 구하여 창상잔존율(%)을 측정하였다(참조: 표 1)

시간의 경과에 따른 창상잔존율의 변화

경과일수	대조군	실험군
2	95 ±2	94 ±3
7	64 ±7	23 ±5
15	37 ±10	12 ±3

상기 표 1에서 보듯이, 실험군의 창상잔존율이 신속하게 감소함을 알 수 있었다.

또한, 시간의 경과에 따른 창상의 변화를 육안으로 관찰하였다(참조: 도 1a도 1b, 도 2a, 도 2b, 도 3a, 도 3b). 도 1a는 수술 후 3일이 경과한 대조군의 창상 사진이고, 도 1b는 수술 후 3일이 경과한 실험군의 창상 사진이며, 도 2a는 수술 후 6일이 경과한 대조군의 창상 사진이고, 도 2b는 수술 후 6일이 경과한 실험군의 창상 사진이며, 도 3a는 수술 후 9일이 경과한 대조군의 창상 사진이고, 도3b는 수술 후 9일이 경과한 실험군의 창상 사진이다. 수술 후 3일 경과시, 대조군에서는 계속적인 피하출혈과 상처면 가장자리 부위의 염증 및 부종현상이 나타났으나(참조: 도 1a), 실험군에서는 빠른 가피의 형성과 상처 수축이 확인되었고 화농성 반응은 나타나지 않았으므로(참조: 도 1b), 본 발명의 상처치유 조성물을 처리한 경우, 초기재생 반응이 빠르게 진행됨을 알 수 있었다. 수술 후 6일 경과시, 대조군에서는 손상 부위의 화농성 염증 반응이 현저하게 발생하였으나(참조: 도 2a), 실험군에서는 상처부위 전체에서 가피가 완전히 형성되고, 가피 밑으로 붉은 색을 띤 육아 조직의 형성과 더불어 상처면의 재생피화가 빠르게 진행됨을 알 수 있었다(참조: 도 2b). 수술 후 9일 경과시, 대조군의 경우, 가피를 제거한 상처부위가 원래 상처크기의 1/2 정도로 상처가 수축되었음을 확인 할 수 있었으나(참조:도 3a), 실험군의 경우, 대조군에 비하여 비교적 빠른 상처 치유과정을 관찰 할 수 있었다(참조:도 3b).

실시예 2: 창상조직 단면의 비교

대조군과 실험군에 있어서, 창상조직 단면의 변화를 비교하기 위하여, 조직을 채취하고, 이의 절편을 제작하여, 광학 현미경과 전자 현미경으로 비교관찰하였다.

실시예 2-1: 광학 현미경을 이용한 비교

실시예 1에서 수술 후 7일이 경과된 대조군과 실험군의 조직을 수득하고, 완충 포르말린(NBF, neutral buffered formaldehyde) 고정액으로 30분 동안 가고정한 다음, 5㎟크기로 세절하여, 다시 동일 고정액에서 3시간 동안 고정하였다. 이어, 흐르는 물로 세척하고, 70%로부터 단계적으로 100%에 이르는 에탄올을 이용하여 조직을 탈수시키며, 자일렌으로 치환하여 첨명시킨 후, 파라핀으로 포매한 다음, 4 내지 5㎛의 두께로 박절하고, 헤마톡실린과 에오신으로 염색하여 광학현미경으로 관찰하였다(참조: 도 4a, 도 4b). 도 4a는 수술 후 7일이 경과된 대조군의 피부조직단면을 나타내는 현미경사진이고, 도 4b는 수술 후 7일이 경과된 실험군의 피부조직단면을 나타내는 현미경사진이다. 도 4a에서 보듯이, 대조군에서는 상피층이 형성되지 못하고 기저막이 관찰되지 않았으며, 진피층에는 다수의 염증세포들이 관찰되고 있다. 반면에, 도 4b에서 보듯이, 실험군에서는 상피층과 진피층의 형성이 뚜렷하였고 기저막의 형성이 명확하였다. 이를 통해 콜라겐을 함유하는 상처치유 조성물이 진피재생은 물론 상피세포의 분화에도 효과적으로 작용함을 알 수 있었다.

실시예 2-2: 전자 현미경을 이용한 비교

실시예 2-1과 동일한 조직을 각각 2.5%(v/v) 글루타르알데히드(pH 7.2)에 30분 동안 침지하여 가고정하고, 1㎟ 크기로 세절한 다음, 동일 고정액으로 3시간 동안 전고정한 후, 0.1M 인산완충요액(pH 7.2)으로 세척하고, 1%(v/v) 오스뮴테트라옥시드에 2시간 동안 침지하여 후고정시켰다. 이어, 0.1M 인산완충요액(pH 7.2)으로 세척하고, 50%로부터 단계적으로 100%에 이르는 에탄올을 이용하여 조직을 탈수시키며, 에탄올을 프로필렌옥시드로 치환하였다. 치환 후, 에폭시 수지로 포매하여 시료를 제작하고, 600∼800nm의 두께를 가지는 초박절편을 제작한 후, 우라닐아세테이트(uranyl acetate)와 리드사이트레이트(lead citrate)로 염색하고, 전자현미경(Hitachi H-700, 일본)으로 관찰하였다(참조: 도 5a, 도 5b, 도 5c, 도 5d). 도 5a는 수술 후 7일이 경과된 대조군의 상피조직단면을 나타내는 전자 현미경사진이고, 도 5b는 수술 후 7일이 경과된 대조군의 진피조직단면을 나타내는 전자 현미경사진이며, 도 5c는 수술 후 7일이 경과된 실험군의 상피조직단면을 나타내는 전자 현미경사진이고, 도 5d는 수술 후 7일이 경과된 실험군의 진피조직단면을 나타내는 전자 현미경사진이다. 도 5a 및 도 5b에서 보듯이, 대조군에서는 다수의 염증세포가 관찰되고, 섬유아세포의 분화가 관찰되지 않고 있다. 반면에, 도 5c 및 도 5d에서 보듯이, 실험군에서는 섬유아세포의 분화가 관찰되고 있으며 교원질의 형성이 현저히 증가하여 진피 및 상피층의 재생이 원활히 이루어 지고 있음을 알 수 있었다.

실시예 3: 상처치료 조성물의 피부 독성 평가

본 발명의 상처치유 조성물의 피부 부작용을 살펴보기 위하여 웅성가토를 대상으로 하여 폐쇄첩포 방법을 이용한 피부 독성 평가를 실시 하였다.

먼저, 콜라겐 복합물의 함량이 0, 0.1, 1, 10, 25 또는 50%(w/w)인 것을 제외하고는, 실시예 1과 동일한 방법으로 각 농도별 상처치료 조성물을 제조하였다. 8주령(체중 2 Kg)의 건강한 웅성 가토(New Zealand White Rabbit, 대한 동물 사육 센터)를 사육실 조건에서 사육하고, 실험동물의 등쪽 피부를 동물용 치퍼(clipper)를 사용하여 제모한 후, 전기 제조한 농도별 상처치료 조성물을 5g/cm²의 양으로 첩포용지(3M paper)에 도포한 다음, 제모 부위에 첩포하고 첩포가 떨어지지 않도록 압박붕대로 웅성 가토의 등배부위를 감싸 주었다. 이어, 48시간이 경과한 후, 첩포를 제거하고 첩포 부위를 육안 관찰한 결과, 어떠한 실험동물의 제모부위에서도 홍반이나 부종 등의 부작용이 발생하지 않음을 알게되어, 본 발명의 상처치료 조성물이 충분히 안전함을 알 수 있었다.

이상에서 상세히 설명하고 입증하였듯이, 본 발명은 계란의 난황막에서 추출한 콜라겐을 포함하는 상처치유 조성물을 제공한다. 본 발명의 상처치유 조성물은 계란의 난황막에서 분리한 콜라겐 타입Ⅰ, 콜라겐 타입Ⅴ, 콜라겐 타입Ⅹ 또는 전기물질의 혼합물을 유효성분으로 포함하고, 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 본 발명의 상처치유 조성물은 피부재생 능력이 우수하고, 천연물로부터 제조되어 환경친화적이며, 버려지는 자원으로부터 제조되어 경제적이므로, 창상의 치료에 널리 활용될 수 있을 것이다.

Claims (11)

1. 계란의 난황막에서 분리한 콜라겐 타입Ⅰ, 콜라겐 타입Ⅴ, 콜라겐 타입Ⅹ 또는 전기물질의 혼합물을 유효성분으로 포함하고, 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 상처치유 조성물.
2. 제 1항에 있어서,

   상용량의 공지된 항생물질을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는

   상처치유 조성물.
3. 제 1항에 있어서,

   약제학적으로 허용가능한 담체는 결합제, 붕해제, 희석제, 활택제,

   안정제, 보존료 또는 향료인 것을 특징으로 하는

   상처치유 조성물.
4. 제 2항에 있어서,

   결합제는 폴리비닐피롤리돈 또는 하이드록시프로필셀룰로오스인 것을

   특징으로 하는

   상처치유 조성물.
5. 제 2항에 있어서,

   붕해제는 카복시메틸셀룰로오스칼슘 또는 전분글리콜산나트륨인 것을

   특징으로 하는

   상처치유 조성물.
6. 제 2항에 있어서,

   희석제는 옥수수전분, 유당, 콩기름, 결정셀룰로오스 또는 만니톨인

   것을 특징으로 하는

   상처치유 조성물.
7. 제 2항에 있어서,

   활택제는 스테아린산 마그네슘 또는 탈크인 것을 특징으로 하는

   상처치유 조성물.
8. 제 2항에 있어서,

   안정제는 카복시메틸셀룰로오스나트륨, 알파 또는 베타 싸이클로

   덱스트린, 비타민 C, 구연산 또는 백납인 것을 특징으로 하는

   상처치유 조성물.
9. 제 2항에 있어서,

   보존료는 파라옥시안식향산메틸, 파라옥시안식향산프로필 또는

   안식향산나트륨인 것을 특징으로 하는

   상처치유 조성물.
10. 제 2항에 있어서,

    향료는 에틸바닐린, 마스킹후레바, 멘톨후라보노 또는 허브향인 것을

    특징으로 하는

    상처치유 조성물.
11. 제 1항에 있어서,

    정제, 다공성 막, 분말제, 겔제, 연고제, 크림제 또는 액제의

    제형인 것을 특징으로 하는

    상처치유 조성물.