KR20010075285A

KR20010075285A - 수불용성 기재에 결합된 서브틸리신 효소를 함유하는 신체케어 조성물

Info

Publication number: KR20010075285A
Application number: KR1020017003665A
Authority: KR
Inventors: 웨이젤버데이비드존; 올콕앤드류캠프벨
Original assignee: 데이비드 엠 모이어; 더 프록터 앤드 갬블 캄파니
Priority date: 1998-09-22
Filing date: 1999-09-14
Publication date: 2001-08-09
Also published as: BR9914026A; AU6038899A; AU743760B2; WO2000016740A1; EP1115376A1; CA2345127A1; CN1319002A; JP2002526434A

Abstract

본 발명은 수불용성 기재, 다수의 프로테아제 G 효소, 및 각각의 효소를 기재에 영구적으로 부착시키는 결합 수단으로 이루어지는 신체 케어 조성물로, 기재 상에 약 0.01 ㎍/㎠ 내지 약 1000 ㎍/㎠의 효소를 함유하는 신체 케어 조성물에 관한 것이다.

Description

수불용성 기재에 결합된 서브틸리신 효소를 함유하는 신체 케어 조성물{PERSONAL CARE COMPOSITIONS CONTAINING SUBTILISIN ENZYMES BOUND TO WATER INSOLUBLE SUBSTRATES}

활성 단백질을 함유하는 증가하고 있는 다수의 시판품이 사용가능해지고 있다. 이러한 제품의 다수는 효소를 활성 단백질로서 사용한다. 효소는 화합물 또는 기질과 반응하여 이러한 화합물에 화학적 변화를 일으키는 단백질이다. 효소는 이들이 반응하는 기질의 부류를 기준으로 수많은 군으로 분류된다. 각 부류의 효소는 일반적으로 상이한 화학적 결합들을 절단하는 것을 촉진하여 특정한 활성을 선택한다. 리파제 부류의 효소는 제한되지는 않지만 탄화수소와 폴리알코올 골격 기질 사이에 형성된 에스테르 결합을 가수분해하는 이들의 능력에 대해 알려져 있다. 이러한 기질의 예는 모노-, 디- 및 트리글리세리드 폴리글리세롤 에스테르이다. 프로테아제 부류의 효소는 단백질을 가수분해하는 이들의 능력에 대해 알려져 있다. 천연적으로 발생하고 생물공학적으로 처리된 프로테아제 효소는 가정용 세제에 혼입되어 단백질성 오물 및 얼룩을 가수분해하고, 신체 케어 제품에 혼입되어 오물 및 죽은 피부를 제거하고, 구강 세정 제품에 혼입되어 입에서 플라그를 제거하는 것을 촉진하며, 약물에 혼입되어 신체 내의 원치 않는 단백질에 작용한다.

프로테아제 효소의 혼입에 의해 현재의 시판되는 세정 제품들이 더욱 효과적이 될 수 있다는 것이 공지되어 있다. US 특허 제 4,261,868 호 (Hora et al.), US 특허 제 4,404,115 호 (Tai), US 특허 제 4,318,818 호 (Letton et al.), 유럽 특허 출원 30,756 (1985년 1월 9일 공개) 및 US 특허 5,030,378 (Venegas) 모두 프로테아제 효소의 세정 또는 세제 제품에서의 용도를 기술하고 있다.

그러나, 효소를 포함하여 많은 활성 단백질들이 잠재적인 항원이고, 특정한 상태의 인간에게 알레르기 반응을 일으킬 수 있다는 것 또한 알려져 있다. 인간의 면역계는 활성 단백질에의 노출 시 특정 항체를 생성할 수 있다. 이러한 특정 항체의 생성 과정은 임상적으로 이로운 반응이 수득될 때 "면역화"로 일컬어진다. 그러나, 반응이 과민성에 이르면, "감작"으로 일컬어진다. 활성 단백질에 대한 알레르기성 감작은 인간이 단백질에 규칙적으로 노출되는 환경에서 관찰되었다. 이같은 환경에는 작업자들이 활성 단백질을 함유하는 방치된 먼지 또는 에어로졸에 노출될 수 있는 제조 공장, 또는 소비자의 활성 단백질을 함유하는 제품의 반복된 사용이 때때로 알레르기 반응을 일으키는 시장이 포함된다.

현재, 활성 단백질에 대한 알레르기 반응은 제품에서 사용되는 이러한 단백질들의 선택을 인간 기원의 단백질로 제한함으로써 최소화될 수 있다. 이러한 접근은 알레르기성 문제를 최소화하지만, 원하는 활성 또한 갖는 이같은 활성 단백질을 찾는 것이 항상 가능하지는 않으므로 완전한 해결책이 아니다.

알레르기 반응을 감소시키는 또다른 방법은 단백질 분자의 크기를 감소시키는 것이었다 (JP 특허 출원 제 4,112,753 호 참조). 그러나, 크기 감소 또한 효소적 활성의 현저한 감소를 일으킬 수 있다.

알레르기성을 감소시키기 위한 세번째 계획은 에피토프 지도화 및 단백질 아미노산 서열의 변화를 통해 알레르기성이 감소된 단백질을 만드는 것이다. 이러한 접근에는 일반적으로 개발 시간 및 비용에 많이 투자할 것이 요구된다.

의학 분야에서, 또다른 방법에 의해 단백질의 면역원성을 감소시키는 것이 제안되었다. 이러한 방법에는 비반응성 중합체를 단백질에 부착시키는 것이 수반된다. US 특허 제 4,179,337 호 (Davis, et al.)는 실질적으로 직쇄인 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 또는 폴리프로필렌 글리콜 (PPG) 중합체 부분에 커플링된 효소에 관한 것이다. PEG/PPG 커플링은 효소의 알레르기성을 완화시키는 것으로 발견되었지만, 15 %의 생리적 활성만이 유지되었다. PCT 출원 WO 96/17929 (Olsen et al., 1996년 6월 13일 공개)는 효소를 적절한 중합체와 콘쥬게이트시켜 효소를 변형시키는 것에 관한 것이다. 이 출원에는 모 효소 활성의 39 내지 100 %를 유지하면서, 모 효소에 비해 25 내지 66 % 감소된 알레르기성을 나타내는 변형된 효소가 기술되어 있다.

일련 번호 08/903,298의 US 특허 출원에는 트윈 폴리에틸렌 글리콜 중합체 부분의 첨가에 의해 변형된 효소의 높은 효소적 활성을 제공하면서 알레르기성을 감소시키기 위한 용도가 기재되어 있다. 이러한 변형된 효소는 와이프 적용에서섬유성 기재와 조합되어 사용된다. 변형된 효소는 기재에 부착되지 않는다. 감소된 알레르기성은 효소의 변형을 통해 성취된다.

일련 번호 09/088,912의 US 특허 출원에는 효소의 면역원성 결정자를 마스크하는 것으로 발견된 세 개의 특정한 에피토프 영역 중 하나 이상에서의 서브틸리신 효소의 중합성 화학적 변형이 기재되어 있다.

활성 단백질의 알레르기성을 감소시키기 위한 또다른 접근은 활성 단백질들이 공기로 운반되는 것을 피하기 위해 이들을 과립화, 코팅 또는 용해시키는 것에 의한 것이다. US 특허 4,556,554 (Calvo)에는 중합성 지지체 입자에 부착되어 고정된 효소를 함유하는 화장용 조성물이 기재되어 있다. 효소가 부착된 입자는 화장용 부형제 내에 분산된다. 부형제를 피부에 적용할 때, 효소가 지지체로부터 방출되고 따라서 재활성화된다. 이같은 방법은 소비자가 공기를 통해 운반되는 단백질에 노출되는 것을 다루지만, 조직의 피부 상에 침착되는 방출된 효소와의 장기간에 걸친 접촉과 관련된 실질적인 위험이 여전히 남는다.

1987년 12월 1일에 허여된 캐나다 특허 1,229,808에는 효소, 특히 β-갈락토시다제 및 β-글루코시다제를 셀룰로스성 기재에 고정시키는 것이 기술되어 있고, 여기서 효소는 기재를 코팅하는 아가로스 겔 내로 흡수되어 고정된다.

1991년 7월 24일에 공개된 UK 특허 출원 GB 2,240,040 또한 기재 상에 고정된 효소를 기술하고 있다. 기재에 공유결합적으로 결합된 효소는 약물처리 드레싱에 사용된다.

바이오센서, 바이오세퍼레이터 및 바이오리액터와 같은 생물학적 장치에서 사용되는 효소의 활성을 효소를 장치 표면에 부위-특이적으로 부착시켜 강화시켰다. [Huang et al., "Improving the Activity of Immobilized Subtilisin by Site-specific Attachment to Surface",Analytical Chemistry, 69(22), November 15, 1997] 참조. Huang는 세린249 또는 세린145의 시스테인으로의 돌연변이 및 아미노 기로 관능화된 실리카 비드에의 결합을 통해 서브틸리신 효소를 고정시키는 것을 교시하고 있다.

활성 단백질에 대한 노출로부터 낮은 알레르기 반응을 유지시키면서 개선된 수준의 단백질 활성을 제공하는 조성물을 개발하는 것은 매우 바람직할 것이다. 이것이 달성되면, 소비자에게 단백질 기술의 잇점을 활용하는 더욱 안전한 방법을 제공할 것이다.

본 발명의 목적은 면역계의 자극 및 결과적인 활성화의 감소를 유지시키면서 이러한 개선된 활성을 전달하는 와이프 조성물을 제공하는 것이다.

발명의 개요

본 발명은 수불용성 기재, 다수의 단일치환된 서브틸리신 BPN' 효소 변이체 및 각각의 효소를 기재에 영구적으로 부착시키는 결합 수단으로 이루어지는 신체 케어 조성물로, 기재 상에 약 0.01 ㎍/㎠ 내지 약 1000 ㎍/㎠의 효소를 함유하는 신체 케어 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 와이프 기재에 결합된 단일치환된 서브틸리신 효소를 함유하는 신체 케어 조성물에 관한 것이다. 신체 케어 조성물의 구현예로는 신체 케어 와이프 및 신체 케어 피부 마스크가 포함된다. 조성물은 활성 단백질에 대한 사용자의 알레르기 반응의 위험을 최소화시키면서 활성 단백질의 활성으로 인해 개선된 세정 및 피부 컨디셔닝을 제공한다.

본 발명의 신체 케어 조성물은 수불용성 기재에 영구적으로 결합된 시스테인 아미노산 기의 단일 치환에 의해 변형된 서브틸리신 BPN' 효소 및 변이체로 이루어진다. 조성물은 서브틸리신 BPN' 효소 및 이의 변이체의 특정화된 활성을 활용하기에 편리한 수단을 제공하고, 여기서 효소는 기재에 결합되어 어떠한 알레르기성 반응의 위험도 최소화시킨다. 조성물의 바람직한 구현예는 피부로부터 땀, 피지, 죽은 피부 세포, 지방 및 오일을 세정하고 피부를 보습하는데 매우 효과적이다.

이론에 제한되지 않고, 효소를 기재에 영구적으로 결합시킴으로써, 효소가 사용을 위해 피부와 접촉될 수 있고, 표면 상에서 작용할 수 있는 것으로 여겨진다. 이어서, 와이프 또는 마스크가 제거되면 모든 효소들이 피부 표면으로부터 리프트되고 제거되며 사용된 와이프와 함께 폐기되어, 에어로졸화 및 장기간에 걸친 피부 노출의 위험이 제거된다. 활성 단백질은 이러한 단백질이 특정한 반응성을 갖는 화합물과 피부와의 접촉시 반응하고, 사용 후에는 면역계를 자극하여 이어서 알레르기 반응을 초래하는 항체를 형성시키는 어떤 것도 피부 상에 남지 않는다.

본 명세서에서 사용되는 "아미노산 서열"이라는 표현은 단백질을 이루는 아미노산의 특정한 배열을 가리킨다. 본 명세서에서 아미노산을 기술하기 위해 사용되는 약자의 리스트가 하기에 나타난다:

아미노산	3문자 약자	1문자 약자
알라닌	Ala	A
아르기닌	Arg	R
아스파리긴	Asn	N
아스파르트산	Asp	D
시스테인	Cys	C
글루타민	Gln	Q
글루탐산	Glu	E
글리신	Gly	G
히스티딘	His	H
이소류신	Ile	I
류신	Leu	L
리신	Lys	K
메티오닌	Met	M
페닐알라닌	Phe	F
프롤린	Pro	P
세린	Ser	S
트레오닌	Thr	T
트립토판	Trp	W
티로신	Tyr	Y
발린	Val	V
위치에 아미노산이 없음	Xaa	*

본 명세서에서 사용되는 용어 "돌연변이"는 유기체의 유전적 변형을 가리키고, 이것은 차례로 이러한 유기체에 의해 생성되는 효소의 아미노산 서열을 변화시킨다. 유기체의 돌연변이는 종종 효소의 성질을 변화시키는 것으로 발견되었다.

본 발명에서 사용되는 용어 "야생형" 은 돌연변이되지 않은 숙주에 의해 생성되는 효소를 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "변이체"는 효소를 생성시키는 숙주의 유전적 돌연변이로 인해 야생형 효소의 아미노산 서열과 다른 아미노산 서열을 갖는 효소를 의미한다.

본 명세서에서 사용되는 모든 백분율 및 비율은, 따로 언급되지 않는 한, 중량 기준이고, 따로 고안되지 않는 한 모든 측정은 25 ℃에서 이루어진다. 본 발명은, 필수 성분뿐만 아니라 선택적 성분 및 본 명세서에 기술된 구성요소로 이루어지거나, 구성되거나, 본질적으로 구성될 수 있다.

본 발명의 신체 케어 조성물의 필수 성분뿐만 아니라, 바람직하고 선택적인 성분들의 비제한적인 리스트가 하기에 자세히 기술된다.

수불용성 기재

본 발명의 제품은 수불용성 기재를 함유한다. "수불용성"은 기재가 물에 용해되거나 물에 함침시 쉽게 분해되지 않는 것을 의미한다. 수불용성 기재는 본 발명의 활성 단백질을 세정되고 보습될 피부에 전달하기 위한, 그리고 피부로부터 실질적으로 모든 단백질을 제거하기 위한 도구 또는 부형제이다.

다양한 물질이 기재로서 사용될 수 있다. 하기의 비제한적 특징들이 바람직하다: (i) 사용하기에 충분한 습윤 강도, (ii) 충분한 마모성, (iii) 충분한 로프트 (loft) 및 다공성, (iv) 충분한 두께, 및 (v) 적절한 크기.

상기 기준에 맞는 적절한 불용성 기재의 비제한적 예로는 부직포 기재, 직포 기재, 습식엉킴 기재, 공기 엉킴 기재, 천연 스폰지, 합성 스폰지, 중합성 그물화메쉬 등이 포함된다. 바람직한 구현예에서는 부직포 기재가 경제적이고 다양한 물질에서 쉽게 사용될 수 있으므로 이를 사용한다. 부직포는 직물로 짜이지는 않았지만 시트, 매트 또는 패드 층으로 형성되는 섬유로 층이 이루어진 것을 의미한다. 섬유는 무작위이거나 (즉, 무작위로 정렬됨), 소모(梳毛)될 수 있다 (즉, 주로 한 방향으로 배향되도록 빗질됨). 또한, 부직포 기재는 무작위 및 소모된 섬유 층의 조합물로 구성될 수 있다.

부직포 기재는 천연 및 합성 모두인 각종 물질로 이루어질 수 있다. 천연은 물질이 식물, 동물, 곤충, 또는 식물, 동물 및 곤충의 부산물로부터 유래되는 것을 의미한다. 합성은 물질이 인간이 제조한 각종 물질 또는 추가로 변형된 천연 물질로부터 주로 수득되는 것을 의미한다. 통상적인 기초 출발 물질은 일반적으로 임의의 평범한 합성 또는 천연의 직물-길이 섬유 또는 이들의 혼합물로 이루어지는 섬유질의 편물이다.

본 발명에서 유용한 천연 물질의 비제한적 예는 실크 섬유, 케라틴 섬유 및 셀룰로스성 섬유이다. 케라틴 섬유의 비제한적 예로는 울 섬유, 낙타털 섬유 등으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것들이 포함된다. 셀룰로스성 섬유의 비제한적 예로는 울 펄프 섬유, 면섬유, 대마섬유, 황마섬유, 아마섬유 및 이들의 혼합물로 구성되는 군으로부터 선택되는 것들이 포함된다.

본 발명에서 유용한 합성 물질의 비제한적 예로는 아세테이트 섬유, 아크릴 섬유, 셀룰로스 에스테르 섬유, 모드아크릴 섬유, 폴리아미드 섬유, 폴리에스테르 섬유, 폴리올레핀 섬유, 폴리비닐 알코올 섬유, 레이온 섬유, 폴리우레탄 발포체 및 이들의 혼합물로 구성되는 군으로부터 선택되는 것들이 포함된다. 이러한 합성 물질의 일부 예로는 아크릴 제품 예컨대 아크릴란, 크레슬란, 및 아크릴로니트릴-기재 섬유, 오를론; 셀룰로스 에스테르 섬유 예컨대 셀룰로스 아세테이트, 아르넬 및 아셀레; 폴리아미드 예컨대 나일론 (예를 들어, 나일론 6, 나일론 66, 나일론 610 등); 폴리에스테르 예컨대 포르트렐, 코델, 및 폴리에틸렌 테레프탈레이트 섬유, 다크론; 폴리올레핀 예컨대 폴리프로필렌, 폴리에틸렌; 폴리비닐 아세테이트 섬유; 폴리우레탄 발포체 및 이의 혼합물이 포함된다. 이러한 섬유 및 다른 적절한 섬유 및 이들로부터 제조되는 부직포 물질은 모두 본 발명에 전체적으로 참고로 반영된 [Riedel, "Nonwoven Bonding Methods and Materials",Nonwoven World(1987)]; [The Encyclopedia Americana, vol. 11, pp. 147-153, and vol.26, pp. 566-581 (1984)]; 미국 특허 제 4,891,227 호 (Thaman et al., 1990년 1월 2일 허여); 및 미국 특허 제 4,891,228 호에 일반적으로 기술되어 있다.

천연 물질로부터 제조된 부직포 기재는 섬유의 현탁액으로부터의 미세 와이어 스크린 상에 가장 통상적으로 형성되는 편물 또는 시트로 구성된다. 본 발명에 전체적으로 참고로 반영된 [C.A. Hampel et al.,The Encyclopedia of Chemistry, third edition, 1973, pp. 793-795 (1973)]; [The Encyclopedia Americana, vol. 21, pp. 376-383 (1984)]; 및 [G.A. Smook,Handbook of Pulp and Paper Technologies, Technical Association for the Pulp and Paper Indusrty (1986)] 참조.

본 발명에 유용한 천연 물질로부터 제조된 기재는 다양한 시판되는 원료로부터 제조될 수 있다. 본 발명에 유용한 적절한 시판되는 종이 층의 비제한적 예로는 Airtex[기본 중량이 약 71 gsy인 엠보싱된 공기가공 셀룰로스성 층, James River, Green Bay, WI 판매]; 및 Walkisoft[기본 중량이 약 75 gsy인 엠보싱된 공기가공 셀룰로스, Walkisoft U.S.A., Mount Holly, NC 판매]가 포함된다.

부직포 기재를 제조하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 일반적으로, 이러한 부직포 기재는 공기-가공, 물-가공, 용융성형, 공형성 (coforming), 스펀본딩 (spunbonding), 또는 먼저 섬유 또는 필라멘트를 긴 가닥으로부터 원하는 길이로자르고 물 또는 증기 흐름 내로 통과시킨 후 스크린 상에 침착시키고 섬유-적재 공기 또는 물을 이 스크린을 통과시키는 소모 방법에 의해 제조될 수 있다. 이어서 생성된 층을, 제조 방법 또는 조성과 상관없이, 개별적인 섬유들을 함께 고정시키기 위한 하나 이상의 여러 유형의 결합 공정에 적용시켜 자가-유지 편물을 형성시킨다. 본 발명에서, 부직포 층은 습식엉킴, 열결합시킴 또는 열-결합, 및 이러한 방법들의 조합을 포함하여 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 또한, 본 발명의 기재는 단일 층 또는 다중 층으로 구성될 수 있다. 또한, 다층 기재는 필름 및 기타 비섬유질의 물질을 함유할 수 있다.

또한 본 발명에 유용한 합성 물질로부터 제조된 부직포 기재는 다양한 시판되는 원료로부터 수득될 수도 있다. 본 발명에 유용한 적절한 부직포 물질의 비제한적 예로는 HEF 40-047 [약 50 % 레이온 및 50 % 폴리에스테르를 함유하고, 기본 중량이 약 43 g/야드 제곱 (gsy: gram per square yard)인 구멍이 난 습식엉킴 물질, Veratec, Inc., Walpole, MA 판매]; HEF 140-102 [약 50 % 레이온 및 50 % 폴리에스테르를 함유하고 기본 중량이 약 56 gsy인 구멍이 난 습식엉킴 물질, Veratec, Inc., Walpole, MA 판매]; Novonet149-616 [100 % 폴리프로필렌을 함유하고 기본 중량이 약 50 gsy인 열-결합된 격자 패턴 물질, Veratec, Inc., Walpole, MA 판매]; Novonet149-801 [약 69 % 레이온, 약 25 % 폴리프로필렌 및 약 6 % 면을 함유하고 기본 중량이 약 75 gsy인 열-결합된 격자 패턴 물질, Veratec, Inc., Walpole, MA 판매]; Novonet149-191 [약 69 % 레이온, 약 25 %폴리프로필렌 및 약 6 % 면을 함유하고 기본 중량이 약 100 gsy인 열-결합된 격자 패턴 물질, Veratec, Inc., Walpole, MA 판매]; HEF Nubtex149-801 [약 100 % 폴리에스테르를 함유하고 기본 중량이 약 70 gsy인 작은 혹이 있고(nubbed) 구멍이 난 습식엉킴 물질, Veratec, Inc., Walpole, MA 판매]; Keybak951V [약 75 % 레이온, 약 25 % 아크릴 섬유를 함유하고 기본 중량이 약 43 gsy인 건조 형성된 구멍이 난 물질, Chicopee, New Brunswick, NJ 판매]; Keybak1368 [약 75 % 레이온, 약 25 % 폴리에스테르를 함유하고 기본 중량이 약 39 gsy인 구멍이 난 물질, Chicopee, New Brunswick, NJ 판매]; Duralace1236 [약 100 % 레이온을 함유하고 기본 중량이 약 40 내지 약 115 gsy인 구멍이 난 습식엉킴 물질, Chicopee, New Brunswick, NJ 판매]; Duralace5904 [약 100 % 폴리에스테르를 함유하고 기본 중량이 약 40 내지 약 115 gsy인 구멍이 난 습식엉킴 물질, Chicopee, New Brunswick, NJ 판매]; Sontara 8868 [약 50 % 셀룰로스 및 약 50 % 폴리에스테르를 함유하고 기본 중량이 약 60 gsm인 습식엉킴 물질, Dupont Chemical Corp. 판매]이 포함된다.

대안적으로, 수불용성 기재는 본 발명에 전체적으로 참고로 반영된 유럽 특허 제 EP 702550 A1 호 (1996년 3월 27일 공개)에 기술된 대로 중합성 메쉬 스폰지일 수 있다. 중합성 스폰지는 강하고 유연한 중합체, 예컨대 올레핀 단량체의 부가 중합체 및 폴리카르복실산의 폴리아미드로부터 제조된 여러 겹의 압출된 관형 그물세공 메쉬로 이루어진다. 이러한 중합성 스폰지는 액체 세정제와 함께 사용하기 위해 고안되었지만, 이러한 유형의 스폰지는 본 발명에서 수불용성 기재로서 사용될 수 있다.

기재는 표면적이 약 1 내지 약 수백 in²의 범위인, 평평한 패드, 두꺼운 패드, 얇은 시트, 볼-모양 기구, 불규칙한 모양의 기구를 포함하여 다양한 모양 및 형태로 제조될 수 있다. 정확한 크기는 원하는 용도 및 제품의 특징에 따라 좌우될 것이다. 표면적이 약 1 내지 약 144 in², 바람직하게는 약 10 내지 약 120 in², 더욱 바람직하게는 약 30 내지 약 80 in²이고 두께는 약 1 내지 500 mil, 바람직하게는 약 5 내지 약 250 mil, 더욱 바람직하게는 약 10 내지 약 100 mil인 정사각형, 원형, 직사각형 또는 타원형 패드가 특히 편리하다.

본 발명의 수불용성 기재는 두 개 이상의 층으로 이루어질 수 있고, 각각의 층은 상이한 질감 및 접착력을 갖는다. 상이한 질감은 상이한 물질 조합의 사용 또는 상이한 제조 공정의 사용 또는 이들의 조합에 의해 생길 수 있다. 이중 질감의 기재는 박리를 위한 더욱 접착성인 면 및 부드러운 세정을 위한 더욱 부드럽고 흡수성인 면을 갖는 장점을 제공하도록 제조될 수 있다. 또한, 기재의 개별적인 층들은 상이한 색을 갖도록 제조될 수 있어, 사용자가 표면을 잘 구분하도록 돕는다.

단일치환된 서브틸리신 BPN' 효소 - "프로테아제 G"

본 발명의 필수 성분은 다수의 단일치환된 서브틸리신 BPN' 효소 (이하 프로테아제 G로 일컬음)이다. 프로테아제 G는 수불용성 기재의 표면에 약 0.01 ㎍/㎠내지 약 1000 ㎍/㎠, 바람직하게는 약 0.05 ㎍/㎠ 내지 약 100 ㎍/㎠, 가장 바람직하게는 약 0.1 ㎍/㎠ 내지 약 10 ㎍/㎠ 범위의 수준으로 존재한다.

일반적으로, 프로테아제 효소는 [Recommendations (1992) of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology (IUBMB)]에 따라 효소 분류 번호 E.C. 3.4. (카르복실산 에스테르 가수분해효소)로 분류된다. 관련된 프로테아제는 PCT 출원 WO 95/30010 (1995년 11월 9일 공개, The Procter & Gamble Company); WO 95/30011 (1995년 11월 9일 공개, The Procter & Gamble Company); WO 95/29979 (1995년 11월 9일 공개, The Procter % Gamble Company)에도 기술되어 있다.

서브틸리신 효소는 바실루스 알칼로필러스 (Bacillus alcalophilus), 바실루스 아밀로리퀴에파시엔스 (Bacillus amyloliquefaciens), 바실루스 아밀로사카리쿠스 (Bacillus amylosaccharicus), 바실루스 리케니포르미스 (Bacillus licheniformis), 바실루스 렌투스 (Bacillus lentus) 및 바실루스 서브틸리스 (Bacillus subtilis) 미생물로부터 천연적으로 제조되는 프로테아제 효소이다. 한 공지된 서브틸리신 효소는 BPN'이다. 바실루스 아밀로리퀴에파시엔스로부터의야생형 BPN'은 하기의 아미노산 서열을 특징으로 한다:

여러 BPN'의 변이체 또한 공지되어 있다. 본 발명에서 모두 "프로테아제 A"로 일컬어지는 여러 관련된 변이체는 U.S 특허 5,030,378 (1991년 7월 9일 허여, Venegas)에 기재되어 있고, 하기의 돌연변이가 있는 BPN' 아미노산 서열을 특징으로 한다:

a) 위치 Gly166의 Gly이 Asn, Ser, Lys, Arg, His, Gln, Ala 또는 Glu로 치환되고; 위치 Gly169의 Gly이 Ser으로 치환되고; 위치 Met222의 Met이 Gln, Phe, Cys, His, Asn, Glu, Ala 또는 Thr으로 치환되거나;

b) 위치 Gly166의 Gly이 Lys로 치환되고 위치 Met222의 Met이 Cys로 치환되거나; 또는

c) 위치 Gly160의 Gly이 Ala로 치환되고 위치 Met222의 Met이 Ala로 치환됨.

이하 "프로테아제 B"로 일컬어지는 추가적인 BPN'의 변이체는 Genencor International, Inc. (San Francisco, California)의 유럽 특허 EP-B-251,446 [1988년 1월 7일 공개, 1994년 12월 28일 승인]에 기재되어 있고, 하나 이상의 하기 아미노산에서의 돌연변이: Tyr21, Thr22, Ser24, Asp36, Ala45, Ala48, Ser49, Met50, His67, Ser87, Lys94, Val95, Gly97, Ser101, Gly102, Gly103, Ile107, Gly110, Met124, Gly127, Gly128, Pro129, Leu135, Lys170, Tyr171, Pro172, Asp197, Met199, Ser204, Lys213, Tyr214, Gly215 및 Ser221; 또는 두개 이상의 상기 열거된 아미노산 및 Asp32, Ser33, Tyr104, Ala152, Asn155, Glu156, Gly166, Gly169, Phe189, Tyr217, 및 Met222에서의 돌연변이 (양 돌연변이가 Asp32, Ser33, Tyr104, Ala152, Asn155, Glu156, Gly166, Gly169, Phe189, Tyr217, 및 Met222 아미노산에서 일어날 수는 없음)를 갖는 야생형 BPN' 아미노산을 특징으로 한다.

이하 "프로테아제 D"로 일컬어지는 또다른 바람직한 BPN' 변이체 프로테아제는 WO 95/10615 [Genencor International, 1995년 4월 20일 공개]에 기재되어 있으며, Asp99, Ser101, Gln103, Tyr104, Ser105, Ile107, Asn109, Ans123, Leu126, Gly127, Gly128, Leu135, Glu156, Gly166, Glu195, Asp197, Ser204, Gln206, Pro210, Ala216, Tyr217, Asn218, Met222, Ser260, Lys265 및/또는 Ala274로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 위치에서의 돌연변이와 조합된, 위치 Asn76에 대한 돌연변이를 갖는 야생형 BPN' 아미노산을 특징으로 한다.

이하 "프로테아제 F"로 일컬어지는 또다른 바람직한 BPN' 변이체 프로테아제는 U.S. 특허 제 4,760,025 호 [Estell et al., 1988년 7월 26일 허여]에 기술되어있고, Asp32, Ser33, His64, Tyr104, Asn155, Glu156, Gly166, Gly169, Phe189, Tyr217 및 Met222로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 위치에 대한 돌연변이를 갖는 야생형 BPN' 아미노산을 특징으로 한다.

본 발명의 신체 케어 조성물에서 사용되는 효소인 프로테아제 G는 상기 나열된 아미노산 서열 내에 시스테인이 단일 치환 또는 삽입된 임의의 BPN' 효소 및 이들의 변이체로 이루어진다. 시스테인이 야생형 서브틸리신 BPN' 또는 이의 변이체에서는 나타나지 않으므로 원하는 에피토프 영역 내에서의 치환을 위해 가장 바람직한 치환 아미노산이다. 치환된 또는 삽입된 아미노산은 효소 내의 특정 부위에서 본 발명의 기재에의 부착에 적절한 부분을 제공한다.

바람직하게는, 치환 또는 삽입은 단백질의 활성 부위에서 멀리 떨어진 단백질 내의 위치 내인 에피토프 영역 내의 위치에서 일어나야 한다. 서브틸리신 BPN' 및 변이체에서 이러한 활성 부위는 Asn32, His64 및 Ser221의 트리아드에 의해 공간적으로 한정된다. 프로테아제 G 효소에서, 시스테인이 이러한 트리아드로부터 멀리 떨어진 위치에서 치환된다. 치환에 바람직한 에피토프 영역은 Asp140-Val150 및 Ala230-Leu250 영역이다. 가능한 시스테인 치환의 비제한적인 예는 Ser145, Asn240 또는 Ser249이다. 시스테인이 야생형 서브틸리신 BPN' 또는 이의 변이체에서는 나타나지 않으므로 원하는 에피토프 영역 내에서의 치환을 위해 가장 바람직한 치환 아미노산이다.

결합 수단

활성 단백질은 임의의 적절한 결합 수단에 의해 수불용성 기재에 결합된다.결합 수단에는 활성 단백질을 기재에 영구적으로 결합시키는 임의의 물리적 또는 화학적 방법이 포함된다. 많은 이같은 방법은 당업계에 공지되어 있다.

물리적 엔트랩먼트

본 발명의 활성 단백질을 기재에 결합시키는 한 방법은 단백질을 기재의 몸통 부분에 물리적으로 트랩 (trap)시키는 것이다. 바람직한 엔트랩먼트 (entrapment) 방법은 단백질을 기재 표면 상의 코팅 내에 밀폐시키는 (sealing) 것이다. 당업계에 공지된 임의의 접착제 또는 중합체를 단백질을 기재에 밀폐시키기 위해 사용할 수 있다. 바람직한 코팅은 2-히드록시에틸 아크릴레이트 단량체와 철 (II) 술페이트 헵타히드레이트 개시제의 개별적인 적용에 의해 형성되는 폴리-2-히드록시에틸 아크릴레이트이다.

a) 활성 단백질과 접착제 또는 b) 활성 단백질과 단량체/개시제 조합물의 용액을 기재의 표면 상에 균일하게 분무한다. 접착제 또는 단량체/개시제 또는 별도의 개시제의 2차 코팅이 충분한 결합을 위해 필요할 수 있다. 이어서 기재를 건조시켜 중합체가 셋팅되도록 한다. 이어서 기재를 충분히 헹궈서 임의의 유리 단백질을 제거한다.

기재 상의 중합성 겔 코팅에 매달린 단백질

단백질은 기재 상의 중합성 코팅에 결합된 화학적 사슬 (tether)에 의해 기재에 결합될 수 있다. 중합체 코팅에 공유결합적으로 부착된 중합성 사슬에 단백질이 결합된다. 중합성 사슬의 한 구현예는 Shearwater Polymers, Inc.가 판매하는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-말레이미드이다. PEG-말레이미드는 시스테인 아미노산과 함께 사용되어야 하므로, 활성 단백질이 프로테아제 G일 때 사용될 수 있다. 또한 PEG-말레이미드는 폴리-2-히드록시에틸 아크릴레이트 코팅과 함께 사용될 수 있다. 바람직한 아크릴레이트-PEG-말레이미드 사슬의 일반적인 구조는 하기 화학식으로 표시될 수 있다:

와이프 기재 상의 중합성 코팅에 매달린 시스테인 함유 단백질의 또다른 구현예는 하기 화학식으로 표시되는 것과 같이 N-히드록시숙신이미드에 의해 폴리에틸렌이민 코팅에 공유결합적으로 결합된 PEG-말레이미드로 이루어진다:

매달린 단백질로 이루어진 결합 수단이, 매달린 단백질이 더욱 움직이기 쉽고 중합체 코팅에 의해 덜 커버되며 이 둘 모두는 단백질이 더욱 활성이도록 하므로, 물리적 엔트랩먼트보다 바람직하다.

활성화된 기구 표면에 공유결합적으로 연결된 단백질

본 발명의 단백질을 결합시키기 위한 또다른 수단은 기재 상의 활성화된 부위에의 공유결합적 연결이다. 이러한 결합 수단을 위해, 기재는 바람직하게는 셀룰로스성 물질이다. 화학적 연결은 기재 및 단백질과 반응하는 임의의 2관능성 화합물일 수 있다. 바람직한 화학적 연결은 에틸렌디아민/N-γ-말레이미도부티릴옥시숙신이미드 에스테르 (GMBS)이다.

바람직한 에틸렌디아민/GMBS 연결의 일반적인 구조는 하기 화학식으로 표시될 수 있다:

활성화된 기구 표면에 중합성 사슬을 통해 공유결합적으로 연결된 단백질

활성 단백질을 본 발명의 신체 케어 와이프의 기재에 결합시키는 또다른 수단은 기재 표면 상의 활성화된 부위에 공유결합적으로 결합된 중합성 사슬이다. 바람직한 사슬은 에틸렌디아민/폴리에틸렌 글리콜-말레이미드이다. 직접 결합된 에틸렌디아민/PEG-말레이미드 사슬의 일반적인 구조는 하기 화학식으로 표시될 수 있다:

선택적 성분

본 발명의 와이프 조성물은 광범위한 선택적 성분을 함유할 수 있다. 본 발명에 전체적으로 참고로 반영된 [CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary, Sixth Edition, 1995]에는 피부 케어 산업에 통상적으로 사용되는 광범위한 비제한적 화장용 및 약학적 성분들이 기재되어 있고, 이들은 본 발명의 조성물에서 사용하기에 적절하다. 성분들의 기능성 분류의 비제한적 예는 이러한 참고문헌의 537 쪽에 기술되어 있다. 이러한 기능성 분류의 예로는 연마재, 항여드름제, 케이크 형성 방지제, 항미생물제, 항산화제, 결합제, 생물학적 첨가물, 벌크화제, 킬레이트화제, 화학적 첨가물, 착색제, 화장용 아스트린젠트, 화장용 살생제, 변성제, 약물 아스트린젠트, 에멀션화제, 외부 마취제, 필름 형성제, 향료 성분, 습윤제, 부드러움 강화제 (양이온성 및 비이온성 중합체, 공-계면활성제, 지질 보습제, 탄화수소 오일, 실리콘 오일, 왁스), 불투명화제, 가소화제, 방부제, 추진제, 환원제, 피부 표백제, 피부-컨디셔닝제 (연화제, 습윤제, 기타 및 차단제), 피부 보호제, 용매, 포말 증진제, 굴수성 유발물질, 가용화제, 안정화제, 현탁제, 일광차단제, 계면활성제 (음이온성, 양이온성, 양쪽성, 쯔비터이온성), 자외선 흡수제, 및 점성 증강제 (수성 및 비수성)가 포함된다. 당업계의 숙련자에게 잘 알려진 본 발명에서 유용한 기타 기능성 부류의 물질의 예로는 가용화제, 격리제 및 각질 용해제 등이 포함된다.

사용법

본 발명의 신체 케어 조성물은 신체 세정, 화장용 피부 트리트먼트 및/또는피부 컨디셔닝에 유용하다. 본 발명은 신체 케어 와이프 또는 신체 케어 피부 마스크의 형태를 취할 수 있다. 전형적으로, 와이프는 세정될 부분을 상대적으로 짧은 시간 동안 활성 효소에 노출시키기 위해 사용된다. 사용을 위해, 와이프를 트리트먼트가 필요한 피부와 접촉시키거나 와이프로 피부를 닦은 후 제거한다. 세정에 유용한 본 발명의 와이프의 전형적인 양은 약 1 내지 약 4 와이프/사용, 바람직하게는 약 1 내지 약 2 와이프/사용 범위이다. 피부 마스크는 트리트먼트될 부분을 상대적으로 긴 시간 동안 노출시키기 위해 사용된다. 세정에 유용한 본 발명의 피부 마스크의 전형적인 양은 약 1 내지 약 2 마스크/사용, 바람직하게는 1 마스크/사용이다.

하기의 실시예들은 본 발명의 범주 내의 구현예들을 상세히 기술하고 설명한다. 하기 실시예에서, 모든 성분들은 활성 수준에서 열거된다. 실시예는 설명의 목적으로만 제공되고, 이의 다양한 변형이 본 발명의 취지 및 범주를 벗어나지 않으면서 가능하므로 본 발명을 제한하는 것으로 해석되지 않는다. 성분들은 화학적 명칭 또는 CTFA 명칭으로 확인된다.

본 발명의 활성 단백질이 결합된 와이프의 비제한적인 예가 하기에서 제공된다.

실시예 1 - 레이온/PET 기재에 아크릴레이트 겔 내에 엔트랩먼트된 프로테아제 G

프로테아제 G를 pH 5.5의 10 mM 모노포타슘 포스테이트 (KH₂PO₄) 완충액 내의3 g/㎖로 정제하고 농축한다. 2-히드록시에틸 아크릴레이트 (HEA)를 1.3 M의 최종 몰농도로 첨가한다. 50 mM 과산화수소 (H₂O₂)를 2.5 mM H₂O₂의 최종 몰농도로 첨가한다. 프로테아제 F/HEA/H₂O₂용액을 시트가 포화될 때까지 레이온/PET 시트 상에 분무한다. 철(II) 술페이트 헵타히드레이트 (FeSO₄ㆍ7H₂O)의 용액을 시트 상에 균일하게 분무한다. 시트를 5 분 동안 방치한다. 이어서 모든 유리 단백질이 제거될 때까지 계속 0.01 M KH₂PO₄조 (baths)로 시트를 헹군다. 시트를 건조시킨다.

실시예 2 - 중합성 코팅에 매달린 프로테아제 G

프로테아제 G를 pH 5.5의 10 mM KH₂PO₄완충액 내의 약 2.5 g/㎖로 정제하고 농축한다. 아크릴레이트-PEG₃₄₀₀-말레이미드 (Shearwater Polymers, Inc.)를 15:1 몰 과량으로 첨가한다. 희석된 수산화나트륨 (NaOH)으로 용액의 pH를 7로 올린다. 프로테아제 G와 아크릴레이트-PEG-말레이드를 실온에서 1-2 시간 동안 반응시킨다. 희석된 인산 (H₃PO₄)으로 용액의 pH를 5.5로 떨어뜨린다. 프로테아제 G-PEG-말레이미드 용액에 2-히드록시에틸 아크릴레이트 (HEA)를 첨가하여 최종 몰 농도가 1.3 M이 되도록 한다. 프로테아제 G-PEG/HEA 용액에 최종 몰 농도가 2.5 mM H₂O₂이도록 50 mM H₂O₂용액을 첨가한다. 용액을 레이온/PET 시트 상에 시트가 포화될 때까지 분무한다. 전체 표면 면적이 균일하게 분무되도록 50 mM 철(II)술페이트 헵타히드레이트 (FeSO₄ㆍ7H₂O) 용액을 시트 상에 별도로 분무한다. 시트를 5 분 동안 방치한다. 이어서 모든 유리 프로테아제 G가 제거될 때까지 계속 0.01 M KH₂PO₄조로 시트를 헹군다. 시트를 건조시킨다.

실시예 3 - 활성화된 기구 표면에 직접 공유결합적으로 연결된 프로테아제 G

레이온/PET 시트를 자동-진탕기 상에서 진탕하면서 1 ㎖ 용액/1 ㎠ 시트로 10 % (w/v) NaOH 수용액에 10-15 분 동안 함침시킨다. 흡인하면서 시트를 탈이온수로 세 번 세정한다 (각각의 세정마다 약 1 ㎖/㎠). 흡인하면서 시트를 아세톤으로 5 번 세정한다. 세정 사이에는 시트를 1 분 동안 아세톤에 함침시킨다. 25-30 분 동안 아세톤 내의 10 % (w/v) p-톨루엔술포닐 클로라이드 용액에서 진탕시키면서 시트를 반응시킨다 (∼1 ㎖/㎠). 흡인하면서 시트를 아세톤으로 3 번 헹궈서 과량의 p-톨루엔술포닐 클로라이드를 제거한다. 2 시간 동안 pH 13-14의 아세톤 내의 2.2 M 에틸렌디아민 용액에서 진탕시키면서 시트를 반응시킨다. 흡인하면서 시트를 아세톤으로 3 번 헹궈서 과량의 EDA를 제거한다. 흡인하면서 시트를N,N-디메틸포름아미드 (DMF)로 5 번 헹군다. 세정 사이에는 시트를 1 분 동안 DMF 내에 함침시킨다. 하룻밤 동안 10 % (w/v) N-γ-말레이미도부티릴옥시숙신이미드 에스테르 (GMBS) 내에서 진탕시키면서 시트를 반응시킨다 (∼1 ㎖/㎠). 흡인하면서 시트를 건조 DMF로 3 번 헹군다. 흡인하면서 시트를 pH 7의 0.01 M KH₂PO₄완충액으로 5 번 헹군다. 헹굼 사이에는 시트를 1 분 동안 내의 완충액 내에 함침시킨다. 시트를 pH 7의 10 mM KH₂PO₄완충액 내의 3 ㎎/㎖ 프로테아제 G내에서 약 1-2 시간 동안 반응시킨다 (∼1 ㎖/㎠). 시트를 pH 5.5의 0.01 M KH₂PO₄완충액으로 3 번 헹군다. 시트를 건조시킨다.

실시예 4 - 활성화된 기구 표면에 중합성 사슬을 통해 공유결합적으로 연결된 프로테아제 G

레이온/PET 시트를 자동-진탕기 상에서 진탕하면서 1 ㎖ 용액/1 ㎠ 시트로 10 % (w/v) NaOH 수용액에 함침시킨다. 흡인하면서 시트를 탈이온수로 세 번 세정한다 (∼1 ㎖/㎠/세정). 흡인하면서 시트를 아세톤으로 5 번 세정한다. 세정 사이에는 시트를 1 분 동안 아세톤에 함침시킨다. 25-30 분 동안 아세톤 내의 10 % (w/v) p-톨루엔술포닐 클로라이드 용액에서 진탕시키면서 시트를 반응시킨다 (∼1 ㎖/㎠). 흡인하면서 시트를 아세톤으로 3 번 헹궈서 과량의 p-톨루엔술포닐 클로라이드를 제거한다. 2 시간 동안 pH 13-14의 아세톤 내의 2.2 M 에틸렌디아민 용액에서 진탕시키면서 시트를 반응시킨다. 흡인하면서 시트를 아세톤으로 3 번 헹궈서 과량의 EDA를 제거한다. 흡인하면서 pH 8.5의 0.2 M 붕산나트륨 완충액으로 시트를 5 번 헹군다. 헹굼 사이에는 시트를 1 분 동안 완충액 내에 함침시킨다. 1-2 시간 동안 pH 8.5의 0.2 M 붕산나트륨 완충액 내의 3-5 % (w/v) 말레이미드-PEG₃₄₀₀-NHS (Shearwater Polymers, Inc.) 내에서 진탕시키면서 시트를 반응시킨다 (∼1 ㎖/㎠). 흡인하면서 시트를 pH 7의 10 mM KH₂PO₄완충액으로 5 번 헹궈 과량의 PEG를 제거한다. 약 1-2 시간 동안 pH 7의 10 mM KH₂PO₄완충액 내의 3 ㎎/㎖ 프로테아제 G 내에서 시트를 반응시킨다 (∼1 ㎖/㎠). 시트를 pH 5.5의0.01 M KH₂PO₄완충액으로 3 번 헹군다. 시트를 건조시킨다.

실시예 5 - 코팅된 기구 표면에 중합성 사슬을 통해 공유결합적으로 연결된 프로테아제 G

레이온/PET 시트를 실온에서 진탕하면서 1 시간 동안 폴리에틸렌이민의 500 ppm 조에 함침시킨다 (∼1-2 ㎖/㎠ 시트). 레이온/PET 시트를 2 번 연속적으로 pH 12의 0.2 M 붕산나트륨 완충액 조 내에서 헹군다 (∼5-10 ㎖/㎠). 시트를 2 번 연속적으로 pH 8.5의 0.2 M 붕산나트륨 완충액 조 내에서 헹군다. 시트를 실온에서 진탕하면서 1 시간 동안 pH 8.5의 0.2 M 붕산나트륨 완충액 내의 5 ㎎/㎖ NHS-PEG₃₄₀₀-말레이미드 내에서 반응시킨다. 천을 4 번 탈이온수 조에서 헹군다 (∼5-10 ㎖/㎠). 천을 pH 7-7.5의 0.01 M KH₂PO₄완충액 조에서 2 번 헹군다. 별도로, 프로테아제 G를 pH 7-7.5의 0.01 M KH₂PO₄완충액 내의 1-2 ㎎/㎖로 정제하고 농축한다. "PEG화" 시트를 실온에서 1 시간 동안 진탕하면서 pH 7-7.5의 프로테아제 G 용액에서 반응시킨다. 시트를 pH 5.5의 0.01 M KH₂PO₄조에서 5 번 연속적으로 헹궈서, 반응하지 않고 결합되지 않은 프로테아제 G를 제거한다. 시트를 건조시킨다.

실시예 6-9

신체 케어 와이프 조성물 제품을 하기와 같이 제조한다:

성분	중량%
	실시예 6	실시예 7	실시예 8	실시예 9
상 A
물	QS 100	QS 100	QS 100	QS 100
글리세린	10.00	10.00	10.00	10.00
2나트륨 라우로암포디아세테이트 (및) 나트륨 트리데세트 술페이트	4.00	4.00	---	---
나트륨 라우로암포아세테이트	---	---	2.40	2.40
나트륨 라우로일 사르코시네이트	4.00	4.00	---	---
암모늄 라우레트 술페이트	---	---	4.20	4.20
암모늄 라우릴 술페이트	---	---	1.40	1.40
폴리쿼터늄-10	0.25	0.25	0.25	0.25
2나트륨 EDTA	0.10	0.10	0.10	0.10
상 B
수크로스 에스테르 지방산 카토네이트	3.00	3.00	3.00	3.00
페트로라텀	---	1.50	---	---
세틸 디메티콘	---	---	---	2.00
상 C
부틸렌 글리콜	2.00	2.00	2.00	2.00
DMDM 하이단토인 (및)요오도프로피닐 카르바메이트	0.20	0.20	0.20	0.20

수불용성 기재

기본 중량이 약 60 gsy이고 50 % 레이온 및 50 % 폴리에스테르로 이루어지며 두께가 약 20 mil이고, 실시예 1-7의 결합된 활성 단백질을 갖는 약 6 인치 ×7.6 인치의 습식개구 부직포 기재.

적절한 용기에서, 상 A 성분들을 실온에서 혼합하여 분산액을 형성시키고 65℃로 교반하면서 가열한다. 별도의 적절한 용기에서 상 B 성분들을 혼합하고 65 ℃로 가열한다. 일단 온도가 같아지면, 상 B 성분들을 상 A의 성분들을 함유하는 용기 내로 혼합한 후, 45 ℃로 냉각한다. 이어서 상 C 성분들을 별도의 용기에서 실온에서 함께 혼합한다. 다음으로, 상 C 혼합물을 상 A와 상 B의 조합물을 함유하는 용기 내로 실온에서 첨가한다. 생성된 용액 1.5 g을 각각의 기재 상에 분무한다. 대안적으로, 생성된 용액 내에 기재를 담글 수 있다. 이어서 처리된 기재를 오븐에서 일정한 중량으로 건조시킨다. 대안적으로, 처리된 기재를 45 ℃의 대류 오븐에서 일정한 중량으로 건조시킨다.

대안적인 구현예에서, 직포 기재, 습식엉킴 기재, 천연 스폰지, 합성 스폰지 또는 중합성 망사형 메쉬와 같은 다른 기재들을 사용할 수 있다. 대안적인 구현예는 신체 케어 피부 마스크의 형태일 수 있다.

실시예 10-13

신체 케어 와이프를 하기와 같이 제조한다:

성분	중량%
	실시예 10	실시예 11	실시예 12	실시예 13
상 A
물	QS 100	QS 100	QS 100	QS 100
글리세린	10.00	10.00	10.00	10.00
판테놀	0.50	---	0.50	0.50
나트륨 라우로암포아세테이트	2.40	2.40	2.40	2.40
암모늄 라우릴 술페이트	1.40	1.40	1.40	1.40
폴리쿼터늄-10	0.25	0.25	0.25	0.25
2나트륨 EDTA	0.10	0.10	0.10	0.10
상 B
수크로스 에스테르 지방산 카토네이트	3.00	3.00	3.00	3.00
페트로라텀	---	---	---	0.50
세틸 디메티콘	---	---	---	0.50
세틸 리시놀레에이트	---	2.00	2.00	1.00
상 C
부틸렌 글리콜	2.00	2.00	2.00	2.00
DMDM 하이단토인 (및)요오도프로피닐 카르바메이트	0.20	0.20	0.20	0.20

수불용성 기재

적절한 용기에서, 상 A 성분들을 실온에서 혼합하여 분산액을 형성시키고 65℃로 교반하면서 가열한다. 별도의 적절한 용기에서 상 B 성분들을 혼합하고 65 ℃로 가열한다. 일단 온도가 같아지면, 상 B 성분들을 상 A의 성분들을 함유하는 용기 내로 혼합한 후, 45 ℃로 냉각한다. 다음으로, 상 C 혼합물을 상 A와 상 B의 조합물을 함유하는 용기 내로 실온에서 첨가한다. 생성된 용액 1.5 g을 각각의 기재 상에 분무한다. 대안적으로, 생성된 용액 내에 기재를 담글 수 있다. 이어서 처리된 기재를 오븐에서 일정한 중량으로 건조시킨다. 대안적으로, 처리된 기재를 45 ℃의 대류 오븐에서 일정한 중량으로 건조시킨다.

실시예 14-17

성분	중량%
	실시예 14	실시예 15	실시예 16	실시예 17
상 A
물	QS 100	QS 100	QS 100	QS 100
2나트륨 라우로암포디아세테이트 (및) 나트륨 트리데세트 술페이트	4.00	4.00	---	---
나트륨 라우로암포아세테이트	---	---	2.40	2.40
나트륨 라우로일 사르코시네이트	4.00	4.00	---	---
암모늄 라우레트 술페이트	---	---	4.20	4.20
암모늄 라우릴 술페이트	---	---	1.40	1.40
2나트륨 EDTA	0.10	0.10	0.10	0.10
상 B
수크로스 에스테르 지방산 카토네이트	3.00	3.00	3.00	3.00
페트로라텀	---	1.50	---	---
세틸 디메티콘	---	---	---	2.00
상 C
DMDM 하이단토인 (및)요오도프로피닐 카르바메이트	0.20	0.20	0.20	0.20

수불용성 기재

기본 중량이 약 60 gsy이고 약 50 % 레이온 및 50 % 폴리에스테르로 이루어지며 두께가 약 20 mil이고, 실시예 1-7의 결합된 활성 단백질을 갖는 약 6 인치 ×7.6 인치의 습식개구 부직포 기재.

실시예 18-21

성분	중량%
	실시예 18	실시예 19	실시예 20	실시예 21
상 A
물	QS 100	QS 100	QS 100	QS 100
나트륨 라우로암포아세테이트	2.40	2.40	2.40	2.40
암모늄 라우레트 술페이트	4.20	4.20	4.20	4.20
암모늄 라우릴 술페이트	1.40	1.40	1.40	1.40
2나트륨 EDTA	0.10	0.10	0.10	0.10
상 B
수크로스 에스테르 지방산 카토네이트	3.00	3.00	3.00	3.00
페트로라텀	---	0.50	1.00	---
세틸 디메티콘	---	0.50	---	1.00
세틸 리시놀레에이트	2.00	0.50	1.00	1.00
상 C
DMDM 하이단토인 (및)요오도프로피닐 카르바메이트	0.20	0.20	0.20	0.20

수불용성 기재

Claims

a) 수불용성 기재, b) 다수의 프로테아제 G 효소, 및 c) 각각의 효소를 기재에 영구적으로 부착시키는 결합 수단으로 이루어지는 신체 케어 와이프 조성물로, 기재 상에 약 0.01 ㎍/㎠ 내지 약 1000 ㎍/㎠의 효소를 함유하는 신체 케어 와이프 조성물.
a) 수불용성 기재, b) 다수의 프로테아제 G 효소, 및 c) 각각의 효소를 기재에 영구적으로 부착시키는 결합 수단으로 이루어지는 신체 케어 피부 마스크 조성물로, 기재 상에 약 0.01 ㎍/㎠ 내지 약 1000 ㎍/㎠의 효소를 함유하는 신체 케어 와이프 조성물.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 수불용성 기재가 실크, 케라틴, 셀룰로스, 아세테이트, 아크릴제품, 셀룰로스 에스테르, 모드아크릴제품, 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리올레핀, 폴리비닐 알코올, 목재 펄프, 면, 대마, 황마, 아마, 아크릴제품, 나일론, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 폴리비닐 아세테이트, 폴리우레탄, 레이온, 및 이들의 혼합물로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 물질로 이루어지는 신체 케어 조성물.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 수불용성 기재가 레이온 섬유, 셀룰로스 섬유, 폴리에스테르 섬유, 및 이들의 혼합물로 구성되는 군으로부터 선택된 섬유의 부직포 시트로 이루어지는 신체 케어 와이프 조성물.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 수불용성 기재가 각각 번갈아 상이한 질감을 갖는 두 개 이상의 섬유의 시트로 이루어지는 신체 케어 와이프 조성물.
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 결합 수단이 물리적 엔트랩먼트, 중합성 겔에 매달림, 활성화된 표면에의 공유결합, 활성화된 표면에 공유결합적으로 결합된 사슬, 및 코팅된 표면에 공유결합적으로 결합된 사슬로 구성되는 군으로부터 선택되는 신체 케어 와이프 조성물.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 결합 수단이 중합성 코팅으로의 물리적 엔트랩먼트인 신체 케어 와이프 조성물.
제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 중합성 코팅이 폴리-2-히드록시에틸 아크릴레이트인 신체 케어 와이프 조성물.
제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 결합 수단이 중합성 코팅에의 사슬인 신체 케어 와이프 조성물.
제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, 사슬은 폴리에틸렌 글리콜-말레이미드이고 중합성 코팅은 폴리-2-히드록시에틸 아크릴레이트로 이루어지는 신체 케어 와이프 조성물.
제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 사슬은 폴리에틸렌 글리콜-말레이미드이고 중합성 코팅은 폴리에틸렌이민으로 이루어지는 신체 케어 와이프 조성물.
제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, 결합 수단이 기재 상의 활성화된 부위에의 공유결합적 연결인 신체 케어 와이프 조성물.
제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 공유결합적 연결이 N-γ-말레이미도부티릴옥시숙신이미드 에스테르인 신체 케어 와이프 조성물.
제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 결합 수단이 기재 표면 상의 활성화된 부위에 공유결합적으로 결합된 중합성 사슬인 신체 케어 와이프 조성물.
제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서, 중합성 사슬이 폴리에틸렌글리콜-말레이미드로 이루어지는 신체 케어 와이프 조성물.
피부 보습 방법으로, 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항의 신체 케어 조성물을 이같은 트리트먼트가 필요한 피부와 접촉시키는 것으로 이루어지는 방법.