KR20010071666A

KR20010071666A - 펩티드 또는 단백질 제조를 위한 종결정

Info

Publication number: KR20010071666A
Application number: KR1020007014921A
Authority: KR
Inventors: 플레밍 마니큐; 크리스티안 일쇠
Original assignee: 한센 핀 베네드, 안네 제헤르, 웨이콥 마리안느; 노보 노르디스크 에이/에스
Priority date: 1998-06-30
Filing date: 1999-06-30
Publication date: 2001-07-31
Also published as: AU4768599A; JP2002519437A; PL345260A1; WO2000001727A1; ES2273501T3; CA2336112A1; BR9911678A; IL140341A0; HUP0102577A2; EP1091979B1; NO20006701D0; EP1091979A1; DE69933296D1; ATE340189T1; HUP0102577A3; DE69933296T2; AU758496B2; CN1307589A; NO20006701L

Abstract

비-인간 췌장 인슐린이 없는 인간 인슐린의 미접종 현탁액을 제공하고, 상기 인슐린 현탁액을 가압하에 균질화시켜 아연 인슐린 제품 생산을 위한 미세종결정으로서 사용하기에 적합한 인간 인슐린 미세결정을 얻는 단계를 포함하여 구성되는, 비-인간 췌장 인슐린이 없는, 인간 인슐린 제조를 위한 미세종결정의 제조방법. 본 발명의 가압하 균질화 방법은 특히 인슐린, GLP-1, 글루카곤 및 성장 호르몬과 같은 다른 펩티드와 단백질을 위한 미세종결정의 제조에도 이용될 수 있다.

Description

펩티드 또는 단백질 제조를 위한 종결정 {SEEDING CRYSTALS FOR THE PREPARATION OF PEPTIDES OR PROTEINS}

아연 인슐린 제품의 "Lente"족은 원래 1일 1회의 주사로 당뇨병 환자의 인슐린 요구사항을 만족시킬 수 있도록 해주는 인슐린 제제를 생산하려는 목적에서 1950년대에 개발된 인슐린 아연 현탁액이다 (예컨대 Jens Brange, Galenics of Insulin, 1987 참조). 덴마크의 Novo Nordist A/S는 상이한 활성 프로필을 갖는 여러가지 Lente 인슐린 제품을 무정형 및/또는 결정성 인슐린 입자의 여러가지 조합 형태로 시판하고 있다. 여기에는 무정형 인슐린 입자의 현탁액인 SEMILENTE, 결정성 인슐린 입자 현탁액인 ULTRALENTE, 및 30% 무정형 및 70% 결정성 인슐린 입자의 혼합물인 LENTE가 포함된다.

지난 수십년간, "Lente" 아연 인슐린 제품을 제조하기 위한 종결정 (seeding crystals)이 1950년대 초에 개발 및 특허된 것과 같은 기초적인 동결-건조법에 의해 제조되어왔다. 영국특허명세서 제 766,994호에 설명된 이 방법은 동결건조된 무정형 인슐린, 전형적으로는 쇠고기 인슐린을 인슐린-함유 결정화 배지에 첨가하여약 2 - 7μm 크기의 인슐린 미세결정 현탁액을 만드는 것이다. 궁극적으로 최종의 결정성 아연 인슐린 제품의 제조에 사용되기 위한 이 현탁액은, 소형 바이알 (예컨대 10ml) 내로 충전되어, 알코올/이산화탄소 혼합물 중에 동결된 다음 -18℃ 이하의 온도에서 냉동보관된다.

이 방법은 비록 아직도 사용되고 있긴 하지만 다음과 같은 많은 단점을 가지고 있다:

1. 아직까지 순수한 인간의 인슐린의 허용가능한 미세결정을 제조하는 것이 불가능하기 때문데, 이 방법은 쇠고기 인슐린을 사용하는데 기초하고 있다. 이와 같이 미세결정을 형성하기 위해 쇠고기 인슐린 액을 사용하기 때문에, 최종산물은 바람직하지 못한 쇠고기 인슐린을 소량 함유한다.

2. 동결-건조법은 동결기를 필요로 하며 후속적으로 -18℃ 이하의 온도에서 선적 및 보관을 해야만 한다. 이것은 높은 경비와 많은 공간을 요한다.

3. 이 제조바업은 충분히 무균적인 방식으로 수행되기에는 극히 어렵다.

따라서 공지 방법의 단점이 없는 방법을 이용하여 인슐린 종결정을 제조할 수 있다면 매우 유리할 것이다. 놀랍게도 비교적 단순하고 저렴한 공정을 이용하여 쇠고기 인슐린이 전혀 없고, 실온에서 보관가능하며 예컨대 결정입도 및 균질성 측면에서 유리한 특성을 갖는 인슐린 제제를 생산케 할 수 있는 인슐린 종결정을 생산하는 것이 가능하다는 것이 밝혀졌다. 뿐만 아니라, 이 방법은 다른 펩티드와 단백질, 특히 약품으로 사용되는 펩티드나 단백질 제조를 위한 종결정을 제조하는데도 응용가능할 것으로 생각된다.

발명의 요약

본 발명의 한가지 목적은 펩티드 또는 단백질 종결정의 새로운 제조방법을 제공하는 것이다. 더욱 구체적으로, 본 발명의 한가지 목적은 쇠고기 인슐린의 사용을 필요로 하지 않고, 보관 및 운송을 위해 영하의 온도에서 동결-건조 및 보관하기 위한 값비싼 장비를 필요로 하지 않으며, 밀폐된 시스템에서 수행가능함으로 해서 무균생산법의 이용을 보다 용이하게 해 주는, 인슐린 종결정 생산방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 입도 분포가 좁은 결정성 아연 인슐린 현탁액 제조를 위한 인슐린 종결정의 제조방법을 제공하는 것이다.

넓은 의미에서, 본 발명은 따라서 접종되지 않은 펩티드 또는 단백질 현탁액을 제공하고 상기 현탁액을 가압하에 균질화시켜 미세종결정으로서 사용하는데 적합한 펩티드 또는 단백질 미세결정을 생산하기 위한 미세종결정의 제조방법에 관한 것이다.

특정 구체예에서, 본 발명은 비-인간 췌장 인슐린을 함유하지 않는, 인간의 인슐린 제조를 위한 미세종결정의 제조방법에 관한 것으로, 이 방법은 비-인간 췌장 인슐린이 없는 미접종 인간 인슐린의 현탁액을 제공하고, 상기 인슐린 현탁액을 가압하에 균질화시켜 아연 인슐린 제품의 제조에 미세종결정으로서 사용되는데 적합한 인간의 인슐린 미세결정을 제조하는 단계를 포함하여 이루어진다.

본 발명의 또 다른 측면은 펩티드 또는 단백질의 미접종 현탁액을 제공하고 상기 현탁액에 상기한 방법으로 제조된 미세결정을 접종하는 것을 포함하여 이루어진 펩티드 또는 단백질 제품의 제조방법에 관한 것이다.

본 발명의 이러한 측면에 관한 특정 구체예에서, 제조하고자 하는 펩티드 또는 단백질 제품은 아연 인슐린 제품이며, 미접종 현탁액은 인간 인슐린의 현탁액이다.

본 발명의 또 다른 측면은 아연 인슐린 제품의 제조를 위한 미세종결정으로서 사용되는데 적합하며, 비-인간 췌장 인슐린이 전혀 없는 인간 인슐린 미세결정에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 측면은 비-인간 췌장 인슐린이 없는 인간의 아연 인슐린 제품에 관한 것이다.

본 발명은 아연 인슐린 제품과 같은 펩티드 또는 단백질의 제조를 위한 종 결정에 관한 것이다.

도 1은 본 발명에 따른 바람직한 구체예를 도시한 도면임.

상술한 바와 같이, 본 발명의 방법은 일반적으로 펩티드와 단백질, 특히, 약제로 사용되는 펩티드 및 단백질용 미세종결정의 제조방법에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 이 방법은 인슐린, GLP-1, 글루카곤, 및 인간의 성장호르몬과 같은 성장 호르몬, 이러한 펩티드와 단백질의 동족체 및 유도체와 같은 치료학적 펩티드 또는 단백질의 제조를 위한 미세종결정에 관한 것이다. 후술하는 바와 같이 펩티드 또는 단백질은 특히 인간의 인슐린 또는 그의 동족체 또는 유도체이다. 인슐린 이외의 다른 펩티드와 단백질에 있어서, "동족체(analogue)" 및 "유도체 (derivative)"라는 용어는 인슐린에 관하여 설명되니 다음의 정의와 유사한 의미로 이해하면 된다.

본 명세서에서, "인간 인슐린 (human insulin)"이라 함은 자연발생적인 인간의 인슐린 뿐만 아니라 인슐린 동족체와 인슐린 유도체를 모두 지칭하는 것이다. "인슐린 동족체"라 함은 자연발생적인 인슐린의 한가지 이상의 아미노산 잔기를 치환, 한가지 이상의 아미노산 잔기를 결실 및/또는 한가지 이상의 아미노산 잔기를 부가시킴으로써 자연발생적인 인슐린으로부터 유도된, 인슐린 활성을 갖는 펩티드를 가리키는 것이다. 인슐린 또는 인슐린 동족체는 임의로 "인슐린 유도체"의 형태일 수 있으며, 여기서 "유도체"라는 용어는 그의 모 펩티드 (parent peptide)의 하나 이상의 아미노산 잔기가 예컨대 알킬화, 아실화, 에스테르 형성 또는 아미드 형성과 같이 화학적으로 변형된 펩티드를 말한다. "아실화 인슐린" (또는 인슐린 동족체)는 하나 이상의 아미노산 잔기, 종종 라이신 잔기의 ε-아미노기에 아실기를 갖는 인슐린 (또는 인슐린 동족체)이다.

본문에서, "비-인간 췌장 인슐린 (non-human pandreatic insulin)"이라 함은 예컨대 소 또는 돼지 인슐린과 같이 인간이 아닌 소스로부터 얻어진 자연발생적인 인슐린을 가리키는 것이다.

본 발명에 제시된 바람직한 구체예에의 기본 원리를 도 1에 도식적으로 나타내었다. 도 1의 장치는 수기 (1), 그로부터 나오는 인슐린 현탁액을 균질화기 (3)에 전달해주기 위한 펌프 (2)를 포함한다. 균질화기 (3)은 매우 작은 개구부를 갖는 밸브를 가지며 그를 통해 인슐린 현탁액이 예컨대 약 1000 bars 이상의 고압하에 펌핑된다. 밸브 밖으로 나온 인슐린 현탁액은 급작스런 압력강하를 겪게 하여 인슐린 결정의 파열, 즉 균질화 효과를 얻는다. 인슐린 현탁액은 소망되는 입도와 입도분포를 가질 수 있도록 충분히 균질한 미세결정 현탁액을 제공하기 위해 균질화 사이클을 여러차례 수행하는 것이 바람직하고, 균질화기 (3)에서 이용되는 고압은 현탁액의 온도를 상승시키는 결과를 초래하므로, 이 장치는 현탁액의 온도를 하강시키기 위해 균질화기 (3)의 하류 부분에 열교환기 (4)도 포함하는 것이 바람직하다. 필요에 따라 추가의 균질화 사이클을 수행하기 위해, 인슐린 현탁액은 열교환기 (4)로부터 나와서 수기 (1)로 되돌아간다.

현탁액의 온도는 다음 방정식에 따라 상승한다:

ΔT = P/(cxδ)

식 중,

ΔT = 온도 증가분 (℃)

P = 현탁액의 압력 (N x m^-2)

δ = 현탁액의 밀도 (g x m^-3)

c = 비열 (J x g^-1x ℃^-1)이다.

공정이 진행되는 동안 압력과 온도를 모니터링하여, 공정의 장치 및 규제에 상기 방정식을 이용할 수 있다.

본 발명에 따른 방법에서, 균질화는 대개 적어도 약 500 bars, 바람직하게는 적어도 약 800 bars, 더욱 바람직하게는 적어도 약 1000 bars의 압력에서 수행된다. 특별한 경우, 비록 일반적으로 그럴 필요까지는 없으리라고 믿어지긴 하지만, 압력이 예컨대 적어도 약 1200 bars, 예컨대 약 1500 bars 이상까지 될 수 있다.

바람직한 구체예에서, 균질화 사이클을 복수회 수행하면 개선된 결과, 즉, 종결정의 크기 및 균질성을 최적화시키는 것으로 밝혀졌기 때문에 현탁액의 균질화는 복수회의 균질화 사이클, 즉 2 사이클 이상 수행한다. 따라서 2 사이클 넘게, 예컨대 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 사이클 이상, 예컨대 15 또는 20 사이클 이상, 또는 20 사이클 넘게 수행하는 것이 일반적으으로 유리하다고 고려될 수 있다. 가장 유리한 균질화 사이클의 수는 당업자가 인슐린 현탁액의 특성, 사용된 균질화 장치의 특성, 균질화에 이용된 압력, 및 소망되는 인슐린 미세결정의 입도 및 입도 분포를 고려하여 결정할 수 있을 것이다.

상기한 바와 같이, 균질화기에 이용되는 고압은 현탁액의 온도를 증가시키기 때문에, 균질화 사이클을 복수회 수행할 경우 현탁액 온도를 감소시켜서 균질화 공정을 통해 적절한 온도로 현탁액이 유지될 수 있도록 열 교환기의 사용을 수반하는 것이 바람직하다. 이러한 열 교환기는 기술 분야에 잘 알려져 있고 당업자라면 주어진 공정과 장치에 적합하게 열 교환기의 특성을 맞출 수 있을 것이다. 바람직하게는, 리사이클된 인슐린 현탁액의 온도가 약 10 - 40℃, 예컨대 약 20-35℃의 범위로 유지되는 것이 좋다.

비록 결과적인 인슐린 미세결정의 입도가 소망용도에 따라 변화될 수 있긴 하지만, 적절한 미세결정의 평균 입도는 결정의 최장 대각선을 입도라 정의하였을 때, 약 0.5-4μm, 예컨대 약 1-3μm 범위가 될 것이다.

균질화 공정의 결과 아연 인슐린 제품 제조를 위한 미세종결정으로 사용하기에 적합하고, 비-인간 췌장 인슐린이 전혀 없다는 중요한 특성을 갖는, 인간의 인슐린 미세결정이 어어진다. 아연 인슐린 제품을 제조하기 위해, 본 발명의 미세종결정을 통상적인 방식으로 이용한다. 즉, 인간 인슐린의 미접종 현탁액을 상술한바와 같이 제조된 미세결정 현탁액에 접종해서, 기술분야에 잘 알려진 방식으로 결정화를 진행시키는 것이다. 이 기술분야에서 일상적인 바와 같이, 주어진 미접종 인슐린 현탁액에 첨가될 미세결정의 정확한 양은 실험적으로 결정될 수 있다.

다음에 비-제한적인 실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.

재료 및 방법

상술한 기본적인 균질화 공정 및 장치, 즉, 열교환기가 장착된 재순환 균질화기를 이용하여 수차례 실험을 수행함으로써 균질화 사이클의 횟수가 갖는 효과와 균질화 압력 및 시간이 갖는 영향을 테스트하였다.

사용된 장치는 세라믹 밸브, 타잎 SEO 719685가 장착된 Rannie 고압 균질화기, 모델 LAB 10,41VH (시리즈 1.89239)였다. 이 균질화기의 용량은 1000 bars의 압력에서 80l/h이었다. 원심 펌프는 주입고 압력 4.5-5 bars를 제공하였다. 이 실험을 위해 열교환기에는 약 20℃의 냉각수가 사용되었다. 그러나, 열교환기의 용량이 이 특정 균질화기에 비해 불충분했기 때문에, 인슐린 현탁액의 출력 온도는 최대 균질화기 출구에서 약 28-29℃로 다소 더 높았지만, 약 65l/h의 보다 낮은 균질화기 출력온도, 즉 24-28℃에서는 약간 더 낮았다. 수기는 100L의 압력 탱크와 약 3L 용량의 작은 원추형 용기로 이루어졌다.

미세결정을 제조하기 위해 사용된 인슐린 현탁액은 Novo Nordisk A/S사 제품인 미접종 ULTRALENTE HM(ge), 100U/ml의 푸울(pooled) 뱃치 (2 x 20 L)였다.

실시예 1

ULTRALENTE 인슐린 현탁액의 푸울 뱃치 10L를 1000 bars의 압력하에 균질화시키고, 상기한 바와 같이 복수회의 균질화 사이클을 수행하기 위해 현탁액을 재순환시켜 균질화도를 점차 증가시켰다. 유속은 80 L/h였다. 총 18회의 균질화 사이클을 수행하고 샘플은 처음 10회의 사이클에 대해, 그리고 최종 사이클 후에 채취하였다. 인슐린 현탁액의 온도를 균질화기와 열교환기 사이의 출구 도관에서 측정하였다. 여러가지 사이클에 있어서의 시간 및 측정된 온도를 다음 표 1에 나타내었다:

실시예 번호	균질화 사이클 횟수	시작부터의 경과시간 (분)	온도(℃)
1-0	0	0	12.5
1-1	1	5	29
1-2	2	12	29
1-3	3	19	28.3
1-4	4	26	29.5
1-5	5	33	29.5
1-6	6	40	29.8
1-7	7	47	29.5
1-8	8	54	29.2
1-9	9	61	28.1
1-18	18	122	28.1

샘플 수를 현미경으로 조사하여 다음 관찰 사항을 얻었다:

실시예 1-0: 약 3-80μm 크기의 대체로 온전하고 가장자리가 날카로운 능면체 (rhombohedric) 결정;몇몇 파괴된 결정과 결정 단편.

실시예 1-1: 약 20-40μm 크기의 온전한 능면체 결정이 여전히 많이 있지만, 크기가 3μm 미만인 작은 결정 단편도 많다.

실시예 1-2: 크기가 약 20μm 이하인 온전한 능면체 결정이 여전히 상당수 있을 뿐만 아니라 약 40μm 까지 되는 보다 큰 결정 응집체도 몇개 있음: 보다 작은 3μm 미만의 결정 단편도 있다.

실시예 1-18: 약 1μm 이하의 작은 미세결정; 약 10μm 이하의 결정 단편도 몇개 있음; 온전한 능면체 결정은 없음.

실시예 2

ULTRALENTE 인슐린 현탁액의 푸울 뱃치 5L를 1000 bars의 압력에서 균질화시키고, 현탁액을 상기한 바와 같이 복수회의 균질화 사이클을 수행하기 위해 65 L/h의 유속을 이용하여, 현탁액을 재순환시켰다. 총 10회의 균질화 사이클을 수행하고 샘플은 각 사이클 후마다 채취하였다. 이 실시예에서는, 열교환기로부터 수기로 직접 재순환시키는 대신, 현탁액을 매 사이클 후마다 수집하였다. 각각의 부분으로부터 샘플을 채취하고 나머지 부분을 다음번의 균질화 사이클을 위해 수기로 되돌렸다. 시간 및 측정된 온도는 다음과 같았다:

실시예 번호	균질화 사이클 횟수	시작부터의 경과시간 (분)	온도(℃)
2-0	0	0	-
2-1	1	-	24.5
2-2	2	-	26.3
2-3	3	-	27.1
2-4	4	15	27.7
2-5	5	-	27.8
2-6	6	-	28-0
2-7	7	-	28.0
2-8	8	-	28.0
2-9	9	-	-
2-10	10	30	-

실시예 3

균질화 압력의 효과를 조사힉 위해, 총 9회의 균질화 사이클로 1400-1500 bars에서 테스트를 수행하였다. 높은 압력 및 그에 부수되는 현탁액의 온도 증가로 인해, 유속을 54 L/h로 더욱 감소시켜서 열교환기가 온도를 충분히 낮출수 있게 하였다. 이 실시예에서 뱃치 크기는 3L였다. 현탁액의 온도를 약 26-29℃로 유지시켯다.

실시예 번호	균질화 사이클 횟수	시작부터의 경과시간 (분)	온도(℃)
3-0	0	0	16.3
3-9	9	30	28.6

실시예 4

사용된 ULTRALENTE 인슐린 현탁액이 결정화 동안 갈라진 결정 ("roses")를 형성한 것을 제외하고 실시예 3과 동일한 공정을 이용하엿다. 뱃치 크기는 2L였고, 균질화 시간은 따라서 총 21분에 해당되는 정도로 감소시켰다.

실시예 번호	균질화 사이클 횟수	시작부터의 경과시간 (분)	온도(℃)
4-0	0	0	-
4-9	9	21	27.7

실시예 5

선택된 미세결정 뱃치를 이용한 접종 실험

상기한 바와 같이 제조된 인간 인슐린 미세결정의 선택된 뱃치를 테스트하기 위해 접종 시험을 수행하였다. 표준의 소 미세결정 접종 뱃치도 레퍼런스로서 테스트하였다. 이 실험들은 ULTRALENTE (40U/ml) 1L 뱃치를 이용하여 수행하였다. 20시간 동안 프로펠러 교반을 이용하여 결정화를 수행하였다. 결과를 다음 표 5에 나타내었다.

실시예 번호의 미세결정	평균 결정 입도 (μm)	10%-90% 편차 (μm)
레퍼런스	28	16
1-18	23	15
2-10	26	17
3-9	26	17
4-9	27	16

표 5의 결과로부터 본 발명에 따라 제조된 인간 인슐린 미세결정이 표준의 소 미세결정을 이용해서 얻어진 것과 필적할만한 인슐린 입도와 편차를 나타내었음과, 5개의 접종 팻치가 대체로 동일한 결과를 나타내었음을 알 수 있다.

상기한 바와 같이 제조된 5개의 인슐린 뱃치를 pH, 인슐린 강도, A+M+H 성분, 무정형 인슐린의 백분률, 메틸 파라-히드록시벤조에이트의 성분, 다이머 및 폴리머 함량, 산성 및 중성 데사미도인 함량, 및 아연 함량을 비롯한 다른 여러가지 변수에 대해 더 분석하였다. 본 발명에 따른 미세결정을 이용해서 제조된 인슐린 뱃치들은 표준의 소 미세결정을 이용해서 만들어진 인슐린에 대체로 필적하는 것으로 밝혀졌다.

결정화 시간 및 교반 유형이 형성된 능면체 모양에 영향을 미칠 수 있다는 것이 알려져 있기 때문에, 본 발명에 따라 제조된 하나의 뱃치 (실시예 3-9)를 결정화 시간과 교반 유형을변화시켜가면서 접종 테스트에 사용하였다. 교반의 경우, 프로펠러 교반과 "요람 운동"을 이용한 교반을 이용하여 얻어진 결정들 사이에서 실질적인 차이는 관찰되지 않았다. 결정화 시간에 있어서는, 4시간이면 충분한 것으로, 즉, 20시간씩 결정화시키는 것은 불필요한 것으로 밝혀졌다. 프로펠러 교반과 4시간의 결정화 시간을 이용한 경우 일탈성 (deviating) 결정량이 최소였으므로 이 조건에서 최상의 결과가 얻어지는 경향이 있었다.

결론

미접종 ULTRALENTE HM (ge) 제제를 고압 균질화시킴으로써 인간 인슐린의 순수한 미세결정을 제조할 수 있다고 결론지을 수 있다. 이 방법은 입도가 약 1-2μm 인 작은 결정 단편과 입도가 약 10μm 이하인 좀 더 큰 단편들의 형태로 미세결정을 생성시킨다.

압력을 1000 bars에서 약 1500 bars로 변화시키는 것은 미세결정에 이렇다할 영향을 미치지 않았다. 반대로, 균질화 사이클의 횟수는 적어도 다음의 점에서, 즉, 사이클의 수가 증가될수록 약 1-2μm의 크기를 갖는 미세결정의 비율이 커지고 그보다 큰 결정 단편의 비율은 작아지며 온전하고 능면체인 결정도 감소된, 보다 균질한 미세결정 현탁액이 얻어진다는 점에 있어서 영향을 미쳤다.

그러나, 주어진 균질화도에 필요한 균질화 사이클의 수 역시 사이클당 균질화 시간에 관계되어 잇다.

균질화 진행 결과 이 실험들에서 측정된 현탁액의 온도 증가는 화학적 분해 측면에서는 미세결정에 영향을 미치지 않은 것으로 보였다. 온도 조절은 예컨대 열교환기의 디자인과 용량을 적절히 변화시킴으로써 최적화시킬 수 있다.

이 테스트들에서 생산된 미세결정의 입도 변화 및 이들 미세결정성을 이용하여 제조된 아연 인슐린 제품의 입도의 그에 따른 변화는 소망되거나 필요한 경우, 예컨대 침강 또는 원심분리에 의해 감소시킬 수 있다.

미세결정이 허용가능한 결정크기를 갖는 능면체 결정을 갖는 아연 인슐린 제품을 결과시키므로 본 발명에 따라 생산된 미세결정의 접종량은 허용가능한 것으로 나타났다.

Claims

펩티드 또는 단백질의 미접종 현탁액을 제공하고 상기 현탁액을 가압하에 균질화시켜 펩티드 또는 단백질을 제조하기 위한 미세종결정으로서 사용하기에 적합한 펩티드 또는 단백질 미세결정을 얻는 것을 포함하여 구성되는, 펩티드 또는 단백질 제조를 위한 미세종결정의 제조방법.
제 1항에 있어서, 펩티드 또는 단백질이 약학적 펩티드 또는 단백질인 방법.
제 2항에 있어서, 펩티드 또는 단백질이 인슐린, GLP-1, 글루카곤, 및 인간 성장 호르몬과 같은 성장 호르몬, 이들의 동족체 및 유도체 중에서 선택되는 방법.
제 1항에 있어서, 비-인간 췌장 인슐린이 전혀 없는 인간 인슐린의 미접종 현탁액을 제공하고, 상기 인슐린 현탁액을 가압하에 균질화시켜 아연 인슐린 제품을 제조하기 위한 미세종결정으로서 사용하기에 적합한 인간 인슐린 미세결정을 얻는 것을 포함하여 구성되는, 비-인간 췌장 인슐린이 없는, 인간 인슐린 제조용 미세종결정의 제조방법.
제 1항 내지 4항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 약 500 bars, 바람직하게는 적어도 약 800 bars, 더욱 바람직하게는 적어도 약 1000 bars, 예컨대 적어도약 1200 bars의 압력하에 균질화를 수행하는 방법.
제 1항 내지 5항 중 어느 한 항에 있어서, 복수회의 균질화 사이클을 이용해서 균질화를 수행하는 방법.
제 6항에 있어서, 재순환된 현탁액의 온도가 열교환기를 이용해서 제어되는 방법.
제 7항에 있어서, 재순환된 현탁액의 온도를 약 10-40℃, 예컨대 약 20-35℃의 범위로 유지시키는 방법.
제 1항 내지 8항 중 어느 한 항에 있어서, 결정의 최장 대각선으로 정의되는 미세결정의 평균 입도가 약 0.5-4μm, 예컨대 약 1-3μm인 방법.
제 4항 내지 9항 중 어느 한 항의 방법에 따라 제조된 인간 인슐린 미세결정.
비-인간 췌장 인슐린이 전혀 없고, 아연 인슐린 제품의 제조를 위한 미세종결정으로서 사용하는데 적합한 인간 인슐린 미세결정.
제 11항에 있어서, 평균 입도가 약 0.5-4μm, 예컨대 약 1-3μm인 미세결정.
펩티드 또는 단백질의 미접종 현탁액을 제공하고 제 1항 내지 9항 중 어느 한 항에 따른 방법에 따라 생산된 미세결정을 상기 현탁액에 접종하는 단계를 포함하여 구성되는, 펩티드 또는 단백질 제푼의 제조방법.
제 13항에 있어서, 제조하고자 하는 펩티드 또는 단백질 제품은 아연 인슐린 제품이고, 미접종 현탁액은 인간 인슐린의 현탁액이며 미세종결정은 인간 인슐린 미세결정인 방법.
제 14항의 방법에 따라 제조된, 비-인간 췌장 인슐린이 없는 인간 인슐린 제품.
비-인간 췌장 인슐린이 없는 인간의 아연 인슐린 제품.