KR20000070057A - 리조페린 합성방법 - Google Patents

Abstract

리조페린과 이의 상동물을 합성하는 방법은 보호된 폴리아민을 시트르산 디에스테르로 아실화하고; 결과의 아미드를 가수분해하여 N-보호된 리조페린 또는 이의 상동물을 생성하고; 중간 생성물에서 보호기를 제거하여 리조페린 또는 이의 상동물을 생성하는 단계를 포함한다.

Description

리조페린 합성방법{METHOD FOR SYNTHESIS OF RHIZOFERRIN}

본 발명의 연구는 국립보건원(NIH)의 ROIDK-49108 에 의해 지원받았다. 미국정부는 기술된 발명과 청구범위에 대한 권리를 가진다.

철은 거의 모든 형태의 생명에 필수적이다. 그러나 환경에서 전이금속의 주형태인 Fe(OH)₃의 불수용성(K_sp= 2 ×10^-39) 때문에 거의 모든 생명체는 이 금속을 활용하기 위해서 꽤 복잡한 철 킬레이트화 및 운송 시스템을 개발하였다. 고등동물은 철을 운송 및 동화하기 위해서 단백질을 활용하는 경향이 있다.

미생물은 일군의 저분자량 킬레이터 또는 사이드로포 (siderophore) [Bergeron, "미생물 사이드로포의 합성 및 용액구조", Chem. Rev., Vol. 84, 587-602(1984); Tait, "미구균 탈질작용에 의해 형성된 사이드로크롬의 생합성 및 확인", Biochem. J., Vol. 146, 191-204 (1975); Griffiths, "비브리오 콜레라로 부터 비브리오백틴, 사이드로포", J. Biol. Chem., Vol. 259, 383-385(1984); Aksoy, "탈라세미아에서 하이퍼트랜스퓨젼과 철 킬레이트화", 80페이지, Hans Huber Publishers, Berne(1985); Bickel, "방선균의 대사 생성물 페리옥사민 B", Helv. Chem. Acta., Vol. 43, 2129-2138(1960)]을 철습득을 목적으로 생성시킨다. 이 금속은 생물권에서 주로 불용성 철 3가 상태로 존재하므로 이러한 리간드 없이는 박테리아에 접근할 수 없다. 많은 수의 사이드로포가 확인되었지만 이들은 주로 두가지 구조적 부류에 속한다: 카테콜아미드와 히드록사메이트(상기 Bergeron 문헌). 두가지 구조의 리간드의 대부분은 폴리아민 골격을 포함한다. 트리아민 스페르미딘과 노스페르미딘 상에서 6배위 카테콜아미드 파라백틴(Trait의 상기 문헌)과 비브리오백틴(Griffiths의 상기 문헌)이 예견되지만 디아민, 푸트레신 또는 카다베린으로 부터 유도되거나 이의 생화학적 선구물질인 오르니틴 또는 라이신으로 부터 유도되는 히드록사메이트가 존재한다(Bergeron의 상기 문헌). 예컨대 스트렙토마이세스 필로서스로 부터 분리된 사이드로포인 데스페리옥사민 A-I은 골격에 반복단위인 푸트레신이나 카다베린을 갖는 일군의 히드록사메이트로 구성된다(상기 Aksoy의 문헌). 이중 가장 잘 알려진 킬레이터인 데스페리옥사민 B(DFO)(상기 Bickel의 문헌)은 철(Ⅲ)과 K_f= 1 ×10³⁰M^-1이며 매우 안정한 6배위 8면체 착염을 형성하는 선형 트리히드록사메이트 리간드이다("탈라세미아에 대한 임상적 접근", 217페이지, Grune, Stratton, London (1984)). DFO가 많은 수의 다양한 3가 양이온과 결합하지만 (예컨대 Al(Ⅲ), Ga(Ⅲ), Cr(Ⅲ)) 철(Ⅲ)에 대해 높은 특이성을 보인다. 그러므로 탈라세미아와 같은 철과다 질병의 치료를 위헤 데스페리옥사민의 메실레이트염인 Desferal(상품명)이 개발된 것은 놀라운 일이 아니다(Anderson, "생물학 및 약학에서 무기화학" Chapter 15, 미국 화학회, 워싱톤 디.시.(1973); Fisher, "돼지에 대한 정맥 데스페리옥사민 메실레이트 처리 프로토콜: 고성능 액체 크로마토그래피에 의한 데스페리옥사민과 대사물질 모니터링", Pharmacology, Vol. 41, 263-271(1990)). 그러나, 신체에서 이 약품의 짧은 반감기로 인하여 환자가 연속적으로 주사를 맞아야 한다는 사실 때문에 더 양호한 치료용 철 킬레이터에 대한 연구가 계속되었다.

N¹,N⁴-비스(1-옥소-3-히드록시-3,4-디카르복시부틸)디아미노부탄(리조페린)이 투석환자에게서 관찰되는 무코르병과 관련된 유기체인 리조푸스 마이크로스포러스 변종 리조포디포미스로 부터 처음으로 분리되었고[Drechsel, Biol. Met., Vol. 4, 238-243(1991)] 여러가지 진균류의 접합균류 계통에서 발생한다[Thieken, FEMS Microbiol. Lett., Vol. 94, 37-42 (1992)]. 천연 킬레이터인 파라백틴 및 DFO처럼 리조페린은 철(Ⅲ) 이온과 1:1 착물을 형성한다[Drechsel, Biol. Met., Vol. 5, 141-148(199)]; 그러나 킬레이트 형성상수는 측정되지 않았다. 리조페린의 구조(Drechsel(1991)의 상기 문헌)는 1-카르복실레이트에서 시트르산에 의해 대칭적으로 디아실화 반응된 푸트레신 센터를 보여준다.

따라서 리조페린이 폴리아민 골격을 포함할지라도 그것은 킬레이터의 한 구성요소가 아니다. 오히려 이것은 L-라이신 및 D-오르니틴상에서 예견되는 리조백틴[Smith, Tetrahedron Lett., Vol. 30, 313-316(1989)] 및 스타필로페린 A[Konetschny-Rapp, Eur. J. Biochem., Vol. 191, 65-74(1990)]과 함께 히드록시 폴리카르복실레이트이다. 시트르산이 대칭적으로 1,3-이중치환된 히드록사메이트 에어로백틴, 아쓰로백틴, 스키조키넨[Bergeron, "미생물 철 킬레이터 핸드북에서 카테콜아미드 및 히드록사메이트 사이드로포의 합성", Winkelmann판, CRC Press, Inc., Boca Raton, FL, 271-307 (1991)]과 난노켈린[Samejima, Chem. Pharm. Bull., Vol. 32, 3428-3435(1984)]와는 다르게 리조페린에서 각 비대칭성 시트르산의 프로카이럴(prochiral) 탄소는 비대칭적이다. 이 분자의 두 사이트는 천연(R,R)-타르타르산과 대조적으로 원편광 이색성(CD) 분광법에 따라 (R) 배위를 한다[Drechsel(1992)의 상기 문헌].

아미드 결합에서 필요한 배위의 시트레이트 부분을 함유한 리조페린 및 다른 화합물을 합성할 필요가 있다. 이러한 합성에서 원리는 최종 생성물의 절대적 배위를 확실하게 한정하도록 아민기에 결합하기 위해서 올바른 배위의 시트레이트 합성단위체에 접근하는 것이다.

이러한 합성루트를 제공하는 것이 본 발명의 목적이다. 본 발명의 또다른 목적은 신규한 중금속 킬레이터와 제약 조성물 및 이의 사용방법을 제공하는 것이다.

발명의 요약

이러한 목적은 본 발명에 의해 실현되며, 이의 한 구체예는 화학식 1 의 화합물 합성방법에 관계된다.

여기서: C*는 대장성 탄소원자이고;

a와 b는 0 내지 10의 정수이고;

R은 H, 알킬, 아릴알킬, 카르복실 또는

(C*, b는 상기 의미와 같다)이고,

상기 합성방법은 다음 단계를 포함한다:

(1) 화학식 2 의 폴리아민을 화학식 3 의 시트르산 디에스테르를 써서 아실화시켜 화학식 4 의 아미드를 생성시키고;

여기서 a,b,R은 상기 의미를 가지며 Q는 아민 보호기이다.

여기서 R'은 최대 10개의 탄소원자를 가진 알킬, 아릴, 아르알킬 또는 시클로알킬이다.

(2) 화학식 4 의 아미드를 가수분해시켜 화학식 5 의 산을 생성시키며;

(3) 화학식 5 의 산에서 보호기 Q를 제거하여 화학식 1 의 산을 생성하는 단계.

본 발명의 또다른 구체예는 화학식 6 의 신규한 중금속 킬레이터와 제약학적으로 허용되는 산 및 양이온과의 염에 관계한다.

여기서 a, b, C* 및 R은 상기 의미를 가지며 R"는 R' 또는 Q이다.

본 발명의 추가적인 구체예는 유효량의 화학식 6 의 화합물 또는 제약학적으로 허용가능한 산 또는 양이온과의 염과 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 단위 투입형 제약학적 조성물에 관계한다.

본 발명의 또다른 구체예는 유효량의 화학식 6 의 화합물 또는 제약학적으로 허용가능한 산이나 양이온과의 염을 투과하는 단계를 포함하는 인간 및 그외의 포유동물 치료방법에 관계한다.

본 발명은 킬레이터, 리조페린 제조방법에 관계한다.

본 발명은 리조페린 합성 측면에서 상술될 것이며 본 발명의 원리는 아미드 결합을 통해 아민에 연결되는 특정 거울상 이성질체 배위의 시트르산 부분을 포함하는 임의의 화합물 제조에 적용가능하다.

리조페린 제조를 위한 합성 스킴은 반응식 1 로 표시된다:

화학식 3 의 거울상 이성질체는 다음 반응식 2 를 통해 제조될 수 있다:

상기 구조식 및 스킴에서 R은 알킬(메틸, 에틸, 프로필, 부틸); 아릴(페닐); 아르알킬(벤질) 또는 시클로알킬(시클로펜틸, 시클로벤질)과 같은 최대 10개의 탄소를 가지는 적당한 에스테르화 알콜의 잔기일 수 있다.

디아민 반응물은 화학식 2 와 같은 일차아민기를 함유한 아민일 수 있다. 여기서 R은 각각 최대 10개의 탄소원자를 가지는 알킬, 아릴, 아르알킬 또는 시클로 알킬이거나

"아미노 보호기"(Q)는 합성동안 아미노기를 보호하기 위해서 아미노기의 수소원자 대신에 삽입되는 것이다.

적당한 아미노 보호기의 선택은 보호목적과 보호되는 제품의 최종 용도에 달려있다. 보호기가 합성동안 단지 보호를 위해서 사용될 경우에 종래의 아미노 보호기가 사용될 수 있다. 적당한 아미노 보호기는 당해 분야에 공지된다 (Bodanszky, 합성의 원리, Spriger-Verlag, New York (1984); Ives, 미국특허 제 4,619,915 호; Methoden der Organischen Chemie, Houben-Weyl, Vol. 15, No. 1 (보호기) 및 Vol. 15, No. 2(펩티드 합성방법)). 합성용으로 대표적인 아미노 보호기는 t-부톡시카르보닐, 벤질옥시카르보닐, 벤조일, 아세틸등과 같은 아실기와 벤질기를 포함한다. 합성용으로 다른 아미노 보호기가 상기 Bodanszky의 문헌과 Ives의 특허에 기술된다.

리조페린의 합성은 트리메틸 시트레이트에서 시작되며 이것은 입체적으로 조절되는 비누화 반응에 의해 1,2-디메틸 시트레이트로 전환된다(Hirota, Chemistry Lett., 191-194 (1980)]. 카르복실산의 거울상 이성질체는 이의 (-)-브루신 염을 형성시킴으로써 분리된다. 물에서 5번 분별 결정화한 이후에 결정성 염은 단결성 X-선 회절에 의해 (R)-배위로 1,2-디메틸 시트레이트를 함유함이 드러난다. 이 염을 1N HCl로 처리하고 에틸 아세테이트로 추출하면 (R)-1,2-디메틸 시트레이트가 수득된다.

올바른 거울상 이성질체의 산을 사용하여 N¹,N⁴-디벤질-1,4-디아미노부탄 (Samejima의 상기 문헌)이 디페닐포스포릴 아지드(Et₃N/DMF)를 사용하여 (R)-1,2-디메틸 시트레이트(2당량)으로 아실화된다[Shioiri, J. Am. Chem. Soc., Vol. 94, 6203-6205 (1972)]. 칼럼크로마토그래피 이후에 26% 수율로 디아미드가 수득되며, 칼럼 크로마토그래피는 NMR에 의해 알 수 있듯이 3차 알코올의 제거로 인해 올레핀을 포함한 부산물을 제거한다. 메틸 에스테르는 수성 메탄올에서 수산화 나트륨으로 가수분해되고 산성화는 N,N'-디벤질 리조페린을 제공한다.

마지막으로 N-벤질 아미드는 가수분해에 대해 내성이 있으므로[Williams, Tetrahedron Lett., Vol. 30, 451-454 (1989)] 용해 금속 환원 조건 (Li/NH₃/THF) [Kim, J. Org. Chem., Vol. 46, 5383-5389 (1981)]하에서 테트라산의 보호기 제거, 양이온 교환수지 칼럼상에서 염의 양성자 첨가 및 C-18 역상 칼럼상에서 정제는 최종 생성물 리조페린을 제공한다. 합성화합물의 고자기장 NMR 및 고해상도 질량 스펙트럼은 천연 생성물의 스펙트럼과 동일하다[Drechsel의 1991년 문헌]. 합성샘플과 천연 물질의 절대배위(R,R)은 둘다 동일 파장에서 음의 Cotton 효과를 보이므로 동일하다[Drechsel의 1992년 문헌].

리조페린은 방치시 탈수반응을 통해 하나 및 두개의 5각링을 포함하는 이미도리조페린과 비스-아미도리조페린으로 고리를 형성한다[Drechsel의 1992년 문헌]. pH 5.0에서 이러한 링형성에 대한 0차 속도상수는 6.9 ×10^-2h^-1임이 NMR에 의해 관찰되었다. pH 3에서 고리화 반응의 정도는 문헌치와 유사하다[Drechsel의 1992년 문헌]; 따라서 이러한 분해가 일어나기전에 분석데이타가 수득된다.

이러한 리조페린 합성방법은 히드록시 폴리카르복실화 사이드로포 스타필로페린 A 제조에 사용될 수도 있다[Konetschny-Rapp의 상기 문헌; Meiwes, FEMS Microbiol. Lett., Vol. 67, 201-206 (1990)]. 여기서 D-오르니틴은 1-카르복실레이트에서 시트르산으로 N^α,N^δ-디아실화된다. 추가로 중심 메틸렌 결합의 체인 길이가 변화된 리조페린의 상동물이 구조-활성도 연구용으로 합성될 수 있다.

중금속 킬레이터로서 유용한 화학식 6 의 화합물이 화학식 5 와 동일한 방식으로 제조된다.

본 발명의 제약 조성물은 정제, 캡슐 또는 알약으로 경구 복용하거나 비경구적 또는 혈과투여 가능한 배합물 또는 혼합물이 되게 하는데 적합한 제약학적으로 허용가능한 담체를 함유한다. 활성성분이 종래의 제약학적으로 허용가능한 담체와 혼합 또는 배합될 수 있다. 활성성분에 대해 비활성인 종래적인 담체나 임의의 투여방식이 본 발명의 조성물 제조 및 투여에 사용될 수 있다. 이러한 방법 및 담체의 예가 Remington Pharmaceutical Sciences, 4판 (1970)에 기술된다. 당해분야 숙련자라면 본 발명의 제약 조성물을 형성하기 위해서 어려움 없이 적당한 담체 및 부형제를 선택하거나 이것을 활성성분과 배합할 수 있을 것이다.

본 발명의 제약 조성물에 포함될 활성성분의 유효량은 환자의 종류, 크기 및 상태, 치료될 장애의 크기, 종류 및 상태, 투여방식, 환자가 투여를 견딜 능력과 같은 여러 인자에 따라 좌우된다. 일반적으로 활성성분의 양은 각 투여형태에서 50 내지 500㎎, 특히 50 내지 250㎎을 제공하도록 포함된다.

본 발명의 제약 조성물 및 치료방법에 사용되는 활성성분은 HCl, HAc 등과의 산염 뿐만 아니라 나트륨, 칼륨 또는 기타 비독성 금속염, 아민염과 같이 화학식 1 또는 화학식 2 화합물의 염 또는 착물을 포함한다.

본 발명의 화합물, 조성물 및 방법은 탈레세미아와 같은 철과다 질병에서 중금속 처리에 유용하다.

본 발명의 방법에 따라 환자에 투여될 본 발명의 조성물의 양은 다양한 인자에 의해 좌우된다. 그러나 일반적으로 활성성분은 50 내지 500㎎/㎏, 특히 50 내지 250㎎/㎏의 양으로 투여되며 투여 빈도 및 치료기간은 환자와 치료될 장애의 성질 및 종류에 따라 좌우된다.

실리카겔 32-63(40㎛ "플래쉬") 또는 실리카겔 60(70-230 메쉬)가 칼럼크로마토그래피에 사용된다. 100㎖당 화합물의 그램으로서 C를 사용 실온, 589㎚(Na 램프), CH₃OH에서 광학적 회전이 수행된다. 300 또는 600㎒에서¹H NMR 스펙트럼이 기록되고 D₂O 또는 중수소화된 유기용매에서 테트라메틸실란 또는 3-(트리메틸실릴)프로피온-2,2,3,3-d₄산 나트륨염으로 부터 ppm 다운필드로 케미칼 쉬프트가 제공된다. X-선 회절 데이타가 CCD 면적 탐지기와 흑연 모노크로메이터가 설비된 Siemens SMART PLATFORM상에서 MoK_α복사(λ= 0.71073Å)을 사용하여 173K에서 수집된다. 최대 6233 반사를 사용하여 셀 매개변수가 정렬된다. 데이타 절반(1381 프레임)은 ω-스캔방법(0.3°프레임폭)을 사용하여 수집된다. 설비 및 결정 안정성을 모니터링 하기 위해서 데이타 수집말엽에 처음 50프레임이 재측정된다(I상에서 최대 보정은 1% 미만). 전체 데이타 세트에 기초하여 Psi 스캔 흡수 보정이 적용된다.

원편광 이색성 스펙트럼이 Jasco IF-500II 인터페이스와 CompuAdd 286 컴퓨터가 설비된 Jasco Model J500C 스펙트로 폴라리미터를 써서 수득된다; 데이타 수집 및 처리는 Jasco DP-500/PC System 버전 1.28 소프트웨어를 사용하여 수행되었다. 셀 경로길이는 2.00㎝이다.

AST 486/33 컴퓨터 데이타 스테이션이 장착된 Shimadzu UV-2501PC를 써서 자외선 스펙트로스코피 스펙트럼이 수득된다.

실시예 1

공지된 방법[Hirota의 문헌]의 변형에 의해 1,2-디메틸 시트레이트(2)가 제조된다. 실온에서 격렬한 교반과 함께 2시간에 걸쳐 트리메틸 시트레이트(1) 용액에 수산화나트륨(0.1N, 215㎖)이 첨가된다. 이 용액을 150㎖까지 농축하고 EtOAc (3 ×150㎖)로 추출한다. 수성층은 1N HCl(45㎖)로 산성화되고 EtOAc(3 ×150㎖)로 추출된다. 유기층은 탈수되고 (MgSO₄) 농축되어서 3.70g(39%)의 무색오일(2)이 수득된다:¹H-NMR(d₆-DMSO) δ5.60 (br s, 1H, OH), 3.64(s, 3H, CO₂CH₃), 3.57(s, 3H, CO₂CH₃), 2.87(d, 1H, J=15㎐, 1/2 CH₂), 2.81(d, 1H, J=15㎐, 1/2 CH₂), 2.65(d, 1H, J=15㎐, 1/2 CH₂).

실시예 2

1,2-디메틸-3-[(S)-sec-펜에틸]시트레이트(3)가 0℃에서 무수 CH₂Cl₂(100㎖)에 든 (2)(110㎎, 0.5mmol), (S)-(-)-sec-펜에틸 알콜(61㎎, 0.5mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘(3㎎)의 용액에 1,3-디시클로헥실카보디이미드(103㎎, 0.5mmol)을 첨가함으로써 제조되고 혼합물은 하룻밤 교반한다. 이 혼합물을 여과하고 여과액을 농축하고 플래쉬 크로마토그래피(1:2 EtOAc/헥산)에 의해서 정제하면 무색오일(3) 60㎎(37%)가 수득된다:¹H NMR (CDCl₃) δ 7.35-7.28 (m, Ph), 5.97(q, J = 7㎐, CHPh), 5.88(q, J = 7㎐, CHPh), 3.77(s, CH₃O), 3.73(s, CH₃O), 3.69(s, CH₃O), 3.68(s, CH₃O), 2.98-2.74(m, CH₂), 1.54(d, J = 7㎐, C-CH₃), 1.52(d, J = 7㎐, C-CH₃).

실시예 3

격렬한 교반하에서(하룻밤) EtOAc(460㎖)에 든 (-)-브루신(12.5g, 31.8 mmol )(주의:독성)의 용액에 (2) (7g, 31.8mmol)을 첨가함으로써 (R)-1,2-디메틸 시트레이트의 (-)-브루신 염이 제조된다. 여과후 침전물(10.5g)을 물(5x)에서 재결정화 시키고 탈수시키면 2.04g의 백색결정(mp=165-168℃)이 수득된다.

부분 입체이성질체(diastereomer) 염이 모노클리닉 스페이스 그룹 C2에서 결정화되고 셀크기는 다음과 같다: a=13.8947(3), b=12.4224(3), c=17.5408Å(3); α= 90°, β= 104.556(1), δ= 90°. 구조는 SHELXTL에서 직접 방법[Sheldrick, SHELXTL, Siemens XRD 코포레이션, Madison, WI(1995)]에 의해 밝혀졌고 풀 매트릭스 최소자등법을 사용 정련되었다. H-원자가 아닌 원자는 이방성 처리되었다. 이상적인 위치에서 메틸의 수소원자가 계산되었고 각 탄소원자 상에 위치된다; 나머지 H 원자는 제한없이 정련된다. 2개의 물분자가 비대칭 유닛에 위치된다. 하나는 풀 점유도(full occupancy)로 정련되었고 H원자가 위치된다. 2-배 회전축에 위치된 다른 물 분자는 30% 점유도로 정련된다. (R)의 절대 배위가 브루신의 입체화학에 기초하여 염의 시트레이트 부위에 할당된다. I > 2σ(I)로 3855 반사를 사용한 마지막 정련사이클에서 매개변수(521)가 정련되면 R₁과 wR₂는 각각 0.0434 alc 0.1040이다. F²를 사용하여 정련이 수행되었다.

실시예 4 : (R)-1,2-디메틸 시트레이트(4)

물(50㎖)에 든 (R)-1,2-디메틸 시트레이트(2.04g, 3.32mmol)의 (-)-브루신염 용액에 HCl(1N, 4㎖)이 첨가되고 5분간 계속 교반된다. EtOAc(3 ×50㎖)로 추출하고 Na₂SO₄상에서 건조시키면 무색오일로서 630㎎(86%)의 (4)가 수득된다: [α] +4.0 (c 1.00); NMR은 (2)와 동일하다.

실시예 5 : N-N'-디벤질 리조페린, 테트라에틸 에스테르 (6)

질소하에서 0℃, DMF(20㎖)에든 (4) (610㎎, 2.77mmol)과 N¹,N⁴-디벤질-1,4-디아미노부탄[Samejima의 문헌](370㎎, 1.38mmol)의 용액에 디페닐포스포릴 아지드(760㎎, 2.76mmol) 및 NEt₃(1.5㎖, 11mmol)이 첨가된다. 용액을 1시간동안 0℃에서 교반하고 이후에 실온에서 23시간 교반한다. 고진공하에서 용매가 제거된 후 잔류물을 EtOAc(25㎖)에 취하고 포화 NaHCO₃(25㎖), 물(25㎖), 0.5N HCl(25㎖) 및 물(25㎖)로 세척한다. 유기층을 탈수시키고(MgSO₄) 농축시킨다. 4:1 EtOAc/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피는 연한 황색오일로서 (6)(240㎎, 26%)를 생성시킨다: [α] +8.25 (c 1.00);¹H NMR (CDCl₃) δ7.42-7.24 (m, 10 H), 4.65-4.48 (m, 4H), 3.81 (s, 3H, OCH₃), 3.79 (s, 3H, OCH₃), 3.69(s, 3H, OCH₃), 3.65(s, 3H, OCH₃), 3.40-3.12(m, 4H), 3.10-2.67(m, 8H), 1.57-1.41(m, 4H). Anal. calcd. for C₃₄H₄₄N₂O₁₂: C 60.70, H 6.59, N 4.16. Found: C 60.64, H 6.61, N 4.15.

실시예 6 : N,N'-디벤질 리조페린(7)

CH₃OH (7㎖) 및 1N NaOH(7㎖)에든 (6)(170㎎, 0.253mmol)의 용액이 실온에서 5시간 교반된다. HCl(1N, 8㎖)이 첨가되고 용액을 15㎖로 농축한다. EtOAc (3 ×15㎖)로 추출하 유기층을 탈수시키고(Na₂SO₄) 농축하면 무색유리로서 (7)(120㎎, 77%)이 수득된다: [α] +12.27 (c 1.00);¹H NMR (CD₃OD) δ7.42-7.20 (m, 10 H, 2 Ph), 4.67-4.47 (m, 4 H, CH₂Ph), 3.35-3.23 (m, 4 H, 2 NCH₂), 3.19-2.69 (m, 8 H, 4 CH₂CO), 1.58-1.41 (m, 4 H, 2 CH₂). Anal. calcd. for C₃₀H₃₆N₂O₁₂·H₂O: C 56.78, H 6.04, N 4.41. Found: C 56.88, H 6.08, N 4.34.

실시예 7 : 리조페린

증류된 THF(1.5㎖)에든 (7)(110㎎, 0.178mmol)의 용액이 NH3에든 Li (33㎎, 4.8mmol)에 첨가되고 혼합물을 3시간동안 -78℃에 유지한다. 푸른색이 사라질때까지 수성 CH₃OH(50%, 10㎖)가 첨가된다. 암모니아를 증발시키고 양이온 교환수지 칼럼(Bio Rad, AG 50W-X8)을 통해 잔류물을 물(50㎖)에 취한다. 생성물을 함유한 용리액(pH=3)이 EtOAc(50㎖)로 추출되고 농축된다. 잔류물을 증류된 EtOH(2㎖)에 용해하고 여과 및 농축하면 무색 유리로서 리조페린 50㎎(64%)이 수득된다: HRMS(FAB, m-니트로벤질 알콜 매트릭스) calcd. for C₁₆H₂₅N₂O₁₂437.1407 (M + H), found 437.1407 (base). Anal. calcd. for C₁₆H₂₄N₂O₁₂·H₂O: C 42.29, H 5.77, N 6.17. Found: C 42.49, H 5.80, N 5.84.

조잡한 생성물(10㎎)의 용액을 역상 HPLC[Drechsel의 1992년 문헌](C-18칼럼, 21.4㎜ ×25㎝, Rainin)로 정제한다. 0.1% TFA에서 3% CH₃CN의 초기 이동상 농도는 15분간 유지되고 이후에 35분에 걸쳐 0.1% TFA에서 3-11% CH₃CN의 용출이 수행되고 이후에 20분간 0.1% TFA에서 11% CH₃CN 농도가 유지된다. 분당 4㎖로 유속이 유지된다. 체류시간은 56분이었다. 동결건조에 의해 무색 유리로서 4.32㎎(9.90μmol)의 정제된 리조페린이 수득된다: [α] -16.7 (26℃) (c 0.1613);¹H NMR (D₂O) δ3.21-3.15 (m, 4H), 3.02 (d, 2H, J = 16.0 ㎐), 2.79 (d, 2H, J = 16.0㎐), 2.76 (d, 2H, J = 14.6㎐), 2.65 (d, 2H, J = 14.6㎐), 1.53-1.47 (m, 4H).

50.00㎖ 증류수에 정제된 생성물을 용해시켜 저장용액이 준비된다; 10.00㎖ 원액이 20.00㎖로 희석되고 0.010N HCl 1.90㎖를 써서 pH = 3.02로 조절된다(최종 리조페린 농도 = 9.04 ×10^-5M). pH 조절후 즉시 CD와 UV 스펙트럼이 수득된다. 모든 스펙트럼은 산성화된 증류수 블랭크를 써서 기준선이 보정된다.

CD 결과

리조페린의 CD 스펙트럼은 204㎚에서 기록된 단일 최소값[Drechsel의 1992년 문헌] △ε= -4.3에 비해서 205㎚에서 단일 최소값이 △ε= -2.7이며 200로 부터 220㎚까지 음의 Cotton 효과를 보인다.

UV 결과

㎚ ε ε¹⁰

196 12200 (13900)

200 10800 (13150)

210 5230 (5600)

215 2770 (3000)

220 1200 (1400)

Claims (21)

1. (1) 화학식 2 의 폴리아민을 화학식 3 의 시트르산 디에스테르로 아실화하여서 화학식 4 의 아미드를 생성하고;

   여기서 a, b 는 0 내지 10의 정수이고

   R은 H, 알킬, 아릴알킬, 카르복실 또는

   에서 선택되고

   Q는 아민 보호기이며,

   여기서 R'은 최대 10개의 탄소원자를 가지는 알킬, 아릴, 아르알킬 또는 시클로알킬이며,

   (2) 화학식 4 의 아미드를 가수분해시켜 화학식 5 의 산을 생성하며;

   (3) 화학식 5 에서 보호기 Q를 제거하여 화학식 1 의 산을 생성하는 단계를 포함하는 화학식 1 의 화합물 합성방법.

   여기서 C*는 대장성 탄소원자이고

   a, b 및 R은 위의 정의와 동일하다.
2. 제 1 항에 있어서, a=1, b=1, R=H임을 특징으로 하는 방법.
3. 제 2 항에 있어서, 상기 폴리아민이 지방족 디아민임을 특징으로 하는 방법.
4. 제 3 항에 있어서, 상기 지방족 디아민이 1,4-디아미노부탄임을 특징으로 하는 방법.
5. 제 1 항에 있어서, Q가 벤질기임을 특징으로 하는 방법.
6. 제 1 항에 있어서, R이 메틸임을 특징으로 하는 방법.
7. 제 1 항에 있어서, 화학식 3 의 시트르산의 디에스테르가 라세미 혼합물임을 특징으로 하는 방법.
8. 제 1 항에 있어서, 화학식 3 의 시트르산의 디에스테르가 거울상 이성질체임을 특징으로 하는 방법.
9. 제 8 항에 있어서, 화학식 3 의 시트르산의 디에스테르가 (R)거울상 이성질체임을 특징으로 하는 방법.
10. 제 9 항에 있어서, 상기 폴리아민이 1,4-디아미노부탄이고 상기 화학식 1 의 화합물이 리조페린임을 특징으로 하는 방법.
11. N1,N4-디벤질-1,4-디아미노부탄은 (R)-1,2-디메틸 시트레이트로 아실화시켜서 화학식 7 의 화합물을 생성시키고 화학식 7 의 화합물을 가수분해시켜 화학식 8 의 산을 생성하고 화학식 8 의 화합물에서 벤질기를 제거하여 리조페린을 생성하는 단계를 포함하는 리조페린 합성방법.
12. 제 11 항에 있어서, 상기 아실화 반응이 디페닐포스포릴 아지드와 트리에틸아민을 사용하여 이루어짐을 특징으로 하는 방법.
13. 제 12 항에 있어서, 상기 아실화반응이 디메틸포름아미드를 포함하는 용매에서 수행됨을 특징으로 하는 방법.
14. 화학식 8 의 화합물을 생성하기 위한 화학식 7 의 화합물의 가수분해가 알카리성 메탄올에서 수행됨을 특징으로 하는 방법.
15. 제 11 항에 있어서, 리조페린을 생성하기 위한 화학식 8 화합물의 벤질기 제거반응이 용해금속 환원조건하에서 수행됨을 특징으로 하는 방법.
16. 제 15 항에 있어서, 상기 용해금속 환원조건이 NH₃에 용해된 Li을 포함함을 특징으로 하는 방법.
17. 제 1 항에 있어서, 화학식 6 의 스트르산 트리에스테르의 입체적으로 조절된 비누화 반응에 의해 화학식 3 의 시트르산 디에스테르와 제약학적으로 허용가능한 산 또는 양이온과의 염을 제조하는 단계를 포함하는 방법.
18. 제 17 항에 있어서, R이 메틸이고 화학식 6 의 입체적으로 조절된 비누화반응이 메틸알콜의 알카리용액에서 수행됨을 특징으로 하는 방법.
19. 제 18 항에 있어서, 상기 화학식 3 의 시트르산 디에스테르의 거울상 이성질체를 제조하는 단계를 포함하는 방법.
20. 제 19 항에 있어서, 상기 거울상 이성질체가 화학식 3 의 시트르산 디에스테르의 라세미 혼합물에서 거울상 이성질체를 분리시켜서 제조됨을 특징으로 하는 방법.
21. 제 20 항에 있어서, 상기 라세미 혼합물이 분리되어 상기 거울상 이성질체를 생성하고 이 혼합물을 대장성 염기와 반응시켜서 부분 입체이성질체 염을 생성함을 특징으로 하는 방법.