KR20000057647A - 포유동물의 가역적인 면역적 거세를 위한 백신 - Google Patents
포유동물의 가역적인 면역적 거세를 위한 백신 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20000057647A KR20000057647A KR1019990705452A KR19997005452A KR20000057647A KR 20000057647 A KR20000057647 A KR 20000057647A KR 1019990705452 A KR1019990705452 A KR 1019990705452A KR 19997005452 A KR19997005452 A KR 19997005452A KR 20000057647 A KR20000057647 A KR 20000057647A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- gnrh
- gnrhm1
- mammals
- bsa
- peptide
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 11
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 title abstract description 10
- 230000002130 immunocastration Effects 0.000 title abstract description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 title description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 39
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 claims abstract description 3
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 claims abstract description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 11
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 12
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract description 8
- 241000282887 Suidae Species 0.000 abstract description 5
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 abstract description 5
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 abstract description 5
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 abstract description 5
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 abstract description 3
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 abstract description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Chemical group OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 2
- 241000894007 species Species 0.000 abstract description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 abstract 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 abstract 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 18
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 description 17
- NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N GnRH Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 201000010063 epididymitis Diseases 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000000918 epididymis Anatomy 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 7
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 7
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 4
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 4
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 description 4
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 4
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 229940035638 gonadotropin-releasing hormone Drugs 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 3
- -1 Boc-protected amino Chemical class 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 2
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 2
- ONOURAAVVKGJNM-SCZZXKLOSA-N (2s,3r)-2-azaniumyl-3-phenylmethoxybutanoate Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)OCC1=CC=CC=C1 ONOURAAVVKGJNM-SCZZXKLOSA-N 0.000 description 1
- HLUQDWRHBPWVNT-LVHVEONVSA-N (4s)-4-amino-5-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[2-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[(2s)-2-(carboxymethylcarbamoyl)pyrrolidin-1-yl]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropa Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 HLUQDWRHBPWVNT-LVHVEONVSA-N 0.000 description 1
- FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N (E)-dacarbazine Chemical compound CN(C)\N=N\c1[nH]cnc1C(N)=O FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 1
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- VGALFAWDSNRXJK-VIFPVBQESA-N L-aspartic acid beta-benzyl ester Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(=O)OCC1=CC=CC=C1 VGALFAWDSNRXJK-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000003889 chemical engineering Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000009329 sexual behaviour Effects 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
본 발명은 유전공학 및 생물공학에 속하는 것으로서, 보다 상세하게는 포유동물의 면역적 거세(immunocastration)을 위한 GnRH로부터 유래된 펩타이드의 용도에 관한 것이다. 고나도트로핀 방출 호르몬(GnRH)의 활성을 중화하는 면역반응을 촉발하기 위하여 백신반응을 포유동물에서 수행하였다. 본 발명은 포유동물의 GnRH 변형체의 용도에 관한 것으로서, 6번 위치의 글리신 잔기가 프로린으로 치환된 것이다: Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Pro-Leu-Arg-Pro-Gly. 상기 치환 또는 변화는 자연 GnRH와 비교하여 돼지에서 실험하는 경우 월등한 면역반응을 유도하였으며, 상기 호르몬이 모든 종에서 존재하기 때문에 다른 포유동물에서도 동일한 결과가 기대된다.
Description
개, 고양이, 돼지 및 소와 같은 가금용 동물에 있어서, 생식을 방해하는 것은 일반적인 것이다. 자주 사용되는 방법은 외과적 거세 및 스테로이드의 주사를 하는 것이다. 상기 두 방법은 용이하게 실시할 수 없는 것으로서 전자는 고도의 기술을 갖는 사람을 요구하고 비가역적이며 후자는 부효과를 초래한다. 상기 이유 때문에 대체 방법으로서 단백질과 컨쥬게이션된 GnRH-형 펩타이드를 개발되었으며, 이는 GnRH의 기능을 중성화 하는 면역반응을 유도한다.
본 발명은 유전공학 및 생물공학에 속하는 것으로서, 보다 상세하게는 포유동물의 면역적 거세(immunocastration)을 위한 GnRH로부터 유래된 펩타이드의 용도에 관한 것이다.
도 1은 위약 군의 정소(좌측), GnRH-TT(중앙) 군 및 GnRHm1-TT(우측) 군의 사진으로서, TT에 컨쥬게이션된 군의 효과가 명확하고 GnRHm1-TT에서는 정소의 크기가 크게 감소함을 관찰할 수 있고,
도 2a는 GnRH의 크로마토그램,
도 2b는 GnRHm1의 크로마토그램,
도 2c는 GnRH-TT의 크로마토그램,
도 2d는 GnRHml-TT의 크로마토그램.
상기의 모든 경우에 있어서, 물(0.1% TFA)내 5-60%의 아세토니트릴(0.05% TFA)의 농도구배로 역상 컬럼 C18VYDAC(4.6×100㎜)을 이용하여 측정한 것이다.
여러 종의 GnRH의 1차 구조가 공지되어 있다. 현재까지 발표된 포유동물의 모든 서열은 다음과 같이 동일하다: Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly
상기한 이유 때문에 이는 포유동물 GnRH라 한다. 조류, 어류 및 파충류의 서열을 포함하는 공지된 서열의 대부분은 6번 위치가 글리신 잔기로 밝혀졌다. 글리신은 아미노산중 마이너이고 펩타이드 사슬에 유연성을 부여한다. 글리신을 경직성을 부여하는 프롤린으로 대체하면 면역 반응을 증가시킨다. 추가적으로, 상기 변화는 상기 펩타이드를 면역계가 비-자기로 인식하는 것을 촉발함으로써 면역반응을 자극한다.
GnRH에 대한 항체 반응은 GnRH-형 펩타이드을 담체 단백질에 컨쥬게이션시킴으로써 달성된다. 상기 컨쥬게이션은 화학적 또는 유전공학적 방법에 의해 수행될 수 있다. 상기 목적을 위해 두종의 단백질을 종종 선택하는 바, 이는 BSA 단백질 및 파상풍 톡소이드의 에피토프이다. 상기 BSA는 공지된 화학적 방법에 의해 컨쥬게이션되며 파상풍 톡소이드의 에피토프 및 GnRH-형 펩타이드는 링커로서 글리신을 이용하여 이웃하여 합성된다. 상기의 경우에 있어서 펩타이드는 그 크기가 단지 27 아미노산이 되도록 화학적으로 합성한다. 큰 펩타이드의 경우에 있어서 용이한 방법은 GnRH-형 펩타이드를 담체 단백질의 일부분으로 삽입하는 유전공학적 방법에 의해 제조하는 것이다. 이는 어떠한 단백질에도 유효한 바, 이는 본 발명을 화학합성 또는 유전조작에 의해 제조된 청구된 서열을 포함하는 단백질로부터 보호하기 위한 것이다.
종전에도 GnRH의 6번째 위치에 있는 글리신을 D-아미노산 및 다른 아미노산 유사체로 치환하는 것이 알려져 있다(River et al., 미합중국 특허 제 4,215,038호; Voucher, Jr. et al., 미합중국 특허 제 4,410,514호). 본 발명의 신규성은 GnRH의 6번째 위치에 있는 글리신을 단백질에서 자연적으로 발견되는 L-아미노산 프롤린으로 치환했다는 것이다. 상기 변형체는 자연 GnRH과 비교하여 동일한 단백질에 컨쥬게이션된 경우에도 훨씬 효과적이다.
치환을 위하여 단백질에서 자연적으로 발견되는 아미노산의 사용은 D-아미노산 및 그의 유사 화합물을 포함하는 GnRH 유사체에서는 불가능한 유전적 조합의 도입 가능성을 부여한다.
실시예 1
펩타이드 합성
모든 펩타이드는 고체상 방법 및 4-메틸-벤자이드릴아민(MBHA) 레진(0.75mmol/g, BACHEM, 스위스)을 이용한 Boc/Bzl 방법으로 합성하였다. Boc-보호 아미노산은 BACHEM으로부터 구입하였다. 곁-사슬 보호기는 Arg(Tos), Asp(OBzl), Cys(4-MeBzl), Glu(Obzl), Lys(2-Cl-Z), Trp(CHO), Tyr(Cl2-Bzl), Thr(Bzl) 및 Ser(Bzl)이다.
펩타이드 서열을 확인하기 위하여 다음과 같은 독특한 방법을 수행하였다:
단계 회수×시간(분)
디클로로메탄(DCM) 세척 1×1
Boc-아미노기의 보호(DCM내 TFA 37.5%) 1×30
DCM 세척 2×1
2-프로판올 세척 2×1
DCM 세척 2×1
중성화 3×2
DCM 세척 2×1
커플링 반응 1×60
디메틸포름아마이드(DMF) 세척 2×1
DCM 세척 1×1
중성화 반응을 위하여 DCM내 5%의 N,N-에틸디이소프로필아민(DIEA)를 사용하였다.
커플링 반응은 N,N'-디이소프로필카보디이미드(DIC)를 이용하여 인 시투로 수행하였다. Asn 및 Gln의 경우에는 DIC 및 N,N-디메틸포름아마이드내 1-하이드록시벤조트리아졸(HoBt)를 이용하여 커플링 반응을 실시하였다.
상기 펩타이드는 특별하게 제작된 장치에서 표준 "로-하이" HF 방법으로 레진으로부터 절단하였다. "로" HF 단계에서 곁-사슬 보호기를 HF(25%):디메틸설파이드(65%):p-크레졸(10%)의 혼합물을 이용하여 제거하였다(120분, 0℃). 서열에서 Trp를 포함하는 펩타이드를 위하여 상기 혼합물을 HF(25%):디메틸설파이드(60%):에탄디티올(10%):p-크레졸(10%)로 바꾸었다. 상기 단계후에 탈보호된 펩타이드-레진을 디에틸 에테르, 디클로로메탄 및 2-프로판올로 여러번 세척하고 진공에서 건조시켰다.
"하이" HF 단계에서 탈보호된 펩타이드-레진을 HF(90%):아니솔(10%) 혼합물로 처리하였다(60분, 0℃). 자유 펩타이드를 30% 아세트산으로 추출하고, 물로 희석한 다음 동결건조하였다.
최종적으로, 상기 펩타이드를 C-18 VYDAC 컬럼을 이용한 rp-HPLC 및 FAB 이온화 매스 스펙트로메트리로 확인하였다. 펩타이드 정제는 정제용 C-18 VYDAC 컬럼에서 동일한 크로마토그래피 방법으로 수행하였다.
합성된 펩타이드는 다음과 같았다:
a) QHWSYGLRPG, GnRH와 동일, 고나도트로핀 방출 호르몬에 대응.
b) QHWSYGLRPGGGQYIKANSKFIGITEL, GnRH-TT와 동일, 고나도트로핀 방출 호르몬이 파상풍 톡소이드(830-844 잔기)의 Th 에피토프(Panina-Bordingnon et al., 1989)에 이웃하여 있는 것으로서, 2개의 Gly이 링커로서 이용하였다.
c) QHWSYPLRPG, GnRHm1으로 명명된 신규 GnRH 펩타이드 유사체로서 6번 위치에 있는 Gly이 Pro으로 대치됨.
d) QHWSYPLRPGGGQYIKANSKFIGITEL, GnRHm1-TT로 명명. 이 경우에 있어서 유사체 펩타이드 GnRHm1은 펩타이드 GnRH-TT와 동일한 에피토프의 N-말단에 컨쥬케이션되어 있다.
도 2는 펩타이드 GnRH(도 2a), GnRHm1(도 2b), GnRH-TT(도 2c) 및 GnRHm1-TT(도 2d)의 크로마토그램을 각각 보여준다.
컨쥬게이트 제조
BSA에의 펩타이드 컨쥬게이션은 다음과 같은 방법에 따라 실시한다:
- BSA(bovine serum albumin, Sigma) 및 펩타이드(3㎎)의 동일한 양을 선택한다.
- BSA를 0.1M Na2CO30.5㎖에 용해한다.
- 펩타이드를 0.1M Na2CO30.5㎖에 용해한다.
- 현탁된 BSA에 25% 글루타알데히도(등급 I, Sigma) 3㎕에 천천히 교반하면서 첨가한 다음 현탁된 펩타이드를 적가하였다.
- 0.1M Na2CO3를 첨가하여 최종적으로 1.5㎖을 만들었다.
- 25℃에서 12시간동안 천천히 교반하고 빛으로부터 보호하면서 혼합하였다.
- 12시간동안 1회 PBS에 대해 투석하였다.
- PBS 1×을 첨가하여 최종적으로 3㎖을 만들었다.
- 5㎖의 실린지에 1㎖씩(컨쥬게이션된 펩타이드 1㎎) 나누었다.
- 1차 면역반응을 위해 완전 프로이드 아쥬방(CFA, Sigma) 1㎖ 및 2차 면역반응을 위해 불완전 프로이드 아쥬방(IFA) 1㎖을 첨가하였다.
- 실온에서 30분동안 교반하였다.
- 이서 상기 면역원을 사용하기 전에 4℃에서 보관하였다.
실시예 2
백신 제형화 및 백신반응
백신 제형화를 위하여 PBS 1× 1㎖에 현탁된 펩타이드 1㎎을 CFA 1㎖에 유탁하였다. GnRH-TT 및 GnRHm1-TT 1㎎은 GnRH 및 GnRHm1 0.4㎎과 각각 동등한 것이다. 안정된 물-내-오일 유탁액은 추진력을 갖는 젖개로 교반하여 얻을 수 있다. 모든 경우에 있어서, 면역원은 백신반응 바로 직전에 제조하였다.
2차 백신반응은 1차 백신반응 8주후에 접종하였고, 이때 IFC에 유탁하였다.
동물: 다른 우리에서 선택한 15마리 수컷 돼지새끼를 3마리씩 5군으로 분류하였다.
백신반응: 5군을 11주 내지 12주되는 나이에 1차 백신반응을 실시한 다음 8주후에 부스터를 접종하였다. 양 경우에 있어서 백신반응은 목의 근육내 접종을 통해 실시하였다. 모든 실험동물은 2차 면역반응후 8주후에 도살하였다. 첫 번째 군은 PBS 1× 및 CFA만으로 백신반응화한 것으로서 본 실험에서 음성 대조군의 역할을 한다. 두 번째 및 세 번째 군은 GnRH-BSA 및 GnRH-TT로 각각 백신반응화 한 것으로서 양성 대조군의 역할을 한다. 네 번째 및 다섯 번째 군은 BSA에 컨쥬게이션된 신규 펩타이드 GnRHm1(GnRHm1-BSA)으로 백신반응화 및 파상풍 톡소이드에 컨쥬게이션된 신규 펩타이드 GnRHm1-TT로 각각 백신반응화 한 것이다. 백신반응 계획은 4개월로 구성되어 있다(1996. 1월 부터 4월까지).
실시예 3
백신반응 계획 동안의 평가
0일부터 도살전까지 매 4주마다 정소 및 체중를 측정하였다. 혈청 시료는 항-GnRH 역가를 결정하기 위하여 취하였다. 추가적으로, 16주되는 때에 다음과 같은 성교 행동 양식을 3일동안 조사하였다: 접근, 덮기, 발기 및 사출. 자극은 어떠한 경우에 있어서 자연열에 있는 암컷 돼지새끼로 하였고, 다른 경우에는 세릭 고나도트로핀으로 유도된 열에 있는 암컷 돼지새끼로 하였다.
| 군 | 동물 | 정소 크기, ㎜ | |||||||||
| 0주 | 4주 | 8주 | 12주 | 16주 | |||||||
| R | L | R | L | R | L | R | L | R | L | ||
| GnRH-TT | 20 | 39 | 38 | 42 | 41 | 55 | 57 | 52 | 51 | 76 | 74 |
| 30 | 41 | 42 | 47 | 47 | 53 | 53 | 55 | 54 | 52 | 52 | |
| 36 | 35 | 37 | 40 | 38 | 46 | 46 | 51 | 51 | 62 | 58 | |
| GnRHm1-TT | 15 | 45 | 43 | 50 | 49 | 65 | 64 | 50 | 46 | 58 | 62 |
| 24 | 38 | 37 | 32 | 32 | 43 | 45 | 42 | 40 | 47 | 50 | |
| 37 | 45 | 43 | 49 | 50 | 56 | 55 | nd | 50 | 42 | 42 | |
| GnRH-BSA | 2 | 44 | 43 | 44 | 43 | 52 | 51 | 50 | 58 | 74 | 72 |
| 23 | 47 | 45 | 48 | 46 | 64 | 62 | 90 | 90 | 120 | 120 | |
| 25 | 45 | 43 | 49 | 50 | 57 | 57 | 75 | 74 | 90 | 88 | |
| GnRHm1-BSA | 14 | 45 | 43 | 41 | 42 | 63 | 63 | 89 | 92 | 96 | 96 |
| 16 | 44 | 45 | 40 | 40 | 55 | 54 | 82 | 84 | 90 | 90 | |
| 39 | 43 | 42 | 44 | 45 | 55 | 55 | 77 | 75 | 87 | 87 | |
| 위약 | 1 | 48 | 46 | 52 | 51 | 60 | 59 | 85 | 83 | 100 | 98 |
| 11 | 43 | 42 | 48 | 47 | 50 | 50 | 72 | 72 | 85 | 92 | |
| 17 | 48 | 46 | 50 | 49 | 62 | 61 | 82 | 80 | 98 | 105 |
nd- 정소의 위치를 특정지울 수 없어 결정 못함
R 및 L 각각은 우측 및 좌측의 정소를 나타냄
| 군 | 동물 | 체중, kg | ||||
| 0주 | 4주 | 8주 | 12주 | 16주 | ||
| GnRH-TT | 20 | 10.6 | nd | 29.5 | 42.0 | 54.0 |
| 30 | 10.0 | 15.6 | 28.5 | 40.0 | 55.5 | |
| 36 | 10.8 | nd | 30.0 | 41.5 | 55.5 | |
| GnRHm1-TT | 15 | 12.6 | nd | 33.5 | 43.0 | 58.0 |
| 24 | 12.6 | nd | 33.0 | 43.0 | 59.0 | |
| 37 | 13.2 | nd | 37.0 | 50.0 | 61.5 | |
| GnRH-BSA | 2 | 13.4 | nd | 35.2 | 47.5 | 64.0 |
| 23 | 13.0 | nd | 33.0 | 47.5 | 61.0 | |
| 25 | 13.6 | nd | 32.7 | 40.5 | 48.0 | |
| GnRHm1-BSA | 14 | 12.0 | nd | 30.5 | 40.0 | 56.0 |
| 16 | 12.9 | nd | 27.5 | 42.5 | 48.0 | |
| 39 | 13.1 | 17.5 | 30.6 | 43.5 | 58.0 | |
| 위약 | 1 | 16.0 | nd | 37.3 | 45.5 | 57.0 |
| 11 | 14.5 | nd | 38.5 | 49.0 | 62.0 | |
| 17 | 17.0 | 24 | 39.5 | 55.0 | 70.0 |
nd- 결정되지 않음
| 군 | 평균 체중 | 평균 최종 체중 | 체중 증가량 |
| GnRH-TT | 10.46±0.41 | 55.00±0.86 | 44.54 |
| GnRHm1-TT | 12.80±0.35 | 59.50±1.80 | 46.70 |
| GnRH-BSA | 13.33±0.31 | 57.67±8.50 | 44.34 |
| GnRHm1-BSA | 12.67±0.59 | 54.00±5.29 | 41.33 |
| 위 약 | 15.83±1.26 | 63.00±6.56 | 47.17 |
| FECHA | 9 Enero 1996 | 29 Abril 1996 | |
| 나이(주) | 11-12 | 27-28 |
| 군 | 동물 | 접 근 | 덮 기 | 발 기 | 사 출 | ||||||||
| 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 | ||
| GnRH-TT | 20 | G | G | G | G | G | N | X | X | X | X | X | X |
| 30 | G* | G* | M | N | N | N | X | X | X | X | X | X | |
| 36 | G | N | N | G | N | N | X | X | X | X | X | X | |
| GnRHm1-TT | 15 | M | M | N | N | N | N | X | X | X | X | X | X |
| 24 | M | M | M | N | N | N | X | X | X | X | X | X | |
| 37 | M | G* | G | N | N | N | X | X | X | X | X | X | |
| GnRH-BSA | 2 | G | G | G | G | G | G | X | X | X | X | X | X |
| 23 | G | G | G | G | G | G | X | X | X | X | X | X | |
| 25 | G | G | G | G | G | G | X | O | O | X | O | X | |
| GnRHm1-BSA | 14 | G | G | M | N | N | N | O | X | X | X | X | X |
| 16 | G | G | G | G | G | G | X | X | X | X | X | X | |
| 39 | M | G | G | M | G | G | X | X | X | X | X | X | |
| 위 약 | 1 | G | G* | G | G | G | G | X | X | O | X | X | O |
| 11 | G | G | G | G | N | N | X | X | X | X | X | X | |
| 17 | G | G | G | G | G | G | X | O | O | X | X | O |
a) 접근:
G - 좋음, G*- 공격적 접근, M - 중간, N - 접근 안함,
b) 덮기:
G - 양호한 행동, M - 중간 행동, N - 행동 없음
실시예 4
도살 후 평가
도살한 다음, 정소를 절단하고 부고환을 제거하였다. 정소를 크기를 측정하고 무게를 측정한 다음 부고환의 무게를 측정하였다. 정소 및 부고환 시료 두개를 조직적 분석을 위해 고정하였다. 상기 조직의 모든 횡단면의 미디움 부분을 고정한 다음, 파라핀에 함침하고, 5㎛ 크기로 절단하였다. 헤마톡시린 및 에오신으로 염색을 수행하였다.
| 군 | 동물 | 정소 크기, ㎜(길이×넓이) | 부고환 무게, g | 정소 무게, g | |||
| 우측 | 좌측 | 우측 | 좌측 | 우측 | 좌측 | ||
| GnRH-TT | 20 | 67×42 | 69×41 | 31.69 | 31.56 | 57.60 | 63.37 |
| 30 | 48×27 | 50×28 | 17.42 | 17.78 | 19.46 | 20.86 | |
| 36 | 57×37 | 64×38 | 26.21 | 28.11 | 36.46 | 43.60 | |
| GnRHm1-TT | 15 | 64×31 | 57×29 | 19.34 | 15.84 | 32.53 | 26.30 |
| 24 | 48×30 | 51×38 | 27.10 | 27.67 | 28.55 | 32.63 | |
| 37 | 44×26 | 43×27 | 14.55 | 13.80 | 13.96 | 14.22 | |
| GnRH-BSA | 2 | 65×40 | 64×40 | 28.50 | 27.74 | 51.47 | 50.21 |
| 23 | 106×59 | 101×58 | 48.38 | 45.23 | 178.30 | 180.59 | |
| 25 | 67×44 | 67×44 | 36.87 | 36.25 | 66.44 | 66.50 | |
| GnRHm1-BSA | 14 | 89×51 | 87×52 | 44.31 | 43.84 | 125.00 | 122.66 |
| 16 | 82×51 | 81×48 | 30.42 | 29.51 | 100.07 | 93.03 | |
| 39 | 74×43 | 77×43 | 34.54 | 30.40 | 67.33 | 72.36 | |
| 위 약 | 1 | 82×52 | 90×55 | 53.11 | 58.42 | 116.33 | 125.23 |
| 11 | 80×54 | 81×52 | 34.35 | 35.04 | 114.00 | 111.23 | |
| 17 | 92×58 | 94×59 | 53.28 | 51.23 | 159.24 | 163.61 |
상기 결과로부터 정소 무게/체중의 비를 계산하였다:
| * | 위 약 | GnRH-BSA | GnRHm1-BSA | GnRH-TT | GnRHm1-TT |
| 우측 정소 | 2.041 | 0.804 | 2.232 | 1.067 | 0.561 |
| 1.839 | 2.923 | 2.085 | 0.351 | 0.484 | |
| 2.275 | 1.384 | 1.161 | 0.657 | 0.227 | |
| 좌측 정소 | 2.197 | 0.785 | 2.190 | 1.174 | 0.453 |
| 1.794 | 2.960 | 1.938 | 0.376 | 0.553 | |
| 2.337 | 1.385 | 1.248 | 0.786 | 0.231 | |
| 미디움 | 2.081 | 1.707 | 1.809 | 0.735 | 0.418 |
* 모든 값은 103을 곱한 값이다.
상기 표에서 각 행을 스튜던트 테스트에 관계된 확률로 계산하면 다음과 같다:
| GnRH-BSA | GnRHm1-BSA | GnRH-TT | GnRHm1-TT | |
| 위 약 | 0.194992 | 0.119628 | 5.84×10-6 | 1.9×10-8 |
| GnRH-BSA | 0.412618 | 0.023363 | 0.005215 | |
| GnRHm1-BSA | 0.000608 | 2.48×10-5 | ||
| GnRH-TT | 0.032757 |
주: 관계 확률이 0.05 미만인 경우 통계학적으로 유의한 차이가 있는 것이다.
위약 군 및 BSA에 컨쥬게이션된 두 군 사이에 통계학적으로 유의한 차이가 없다. 반대로, 상기 세 군과 파상풍 톡소이드에 컨쥬게이션된 군 사이에 통계학적으로 유의한 차이가 있다. 상기 두 군사이에도 또한 유의한 차이가 있고, GnRHm1-TT의 미디움이 모든 군 가운데 가장 작으므로 정소 크기의 주요한 감소가 있는 것이다.
상기 과정을 부고환 데이터에도 적용하였다.
| 위 약 | GnRH-BSA | GnRHm1-BSA | GnRH-TT | GnRHm1-TT | |
| 우측 부고환 | 0.932 | 0.445 | 0.791 | 0.587 | 0.333 |
| 0.554 | 0.793 | 0.634 | 0.314 | 0.459 | |
| 0.761 | 0.768 | 0.596 | 0.472 | 0.237 | |
| 좌측 부고환 | 1.025 | 0.433 | 0.782 | 0.584 | 0.273 |
| 0.565 | 0.741 | 0.614 | 0.320 | 0.469 | |
| 0.732 | 0.755 | 0.524 | 0.506 | 0.224 | |
| 미디움 | 0.761 | 0.656 | 0.657 | 0.464 | 0.333 |
동일한 방법으로 확률 매트릭스를 계산하였다.
| GnRH-BSA | GnRHm1-BSA | GnRH-TT | GnRHm1-TT | |
| 위 약 | 0.16702 | 0.134319 | 0.004564 | 0.000365 |
| GnRH-BSA | 0.495529 | 0.02377 | 0.001373 | |
| GnRHm1-BSA | 0.007825 | 0.000201 | ||
| GnRH-TT | 0.038709 |
부고환의 경우에도 상기 정소의 경우와 동일한 결과를 얻을 수 있었다.
BSA에 컨쥬게이션된 펩타이드 GnRH 및 GnRHm1에서 얻은 결과는 위약 군과 유사하다. 상기와 같은 결과는 소 및 돼지의 알부민의 높은 상동성(80%)에 따라 돼지의 면역계가 BSA를 자기 단백질로 인식하기 때문이다.
GnRHm1-TT 및 위약 군을 비교했을 때, 부고환의 경우에는 2.3배 그리고 정소의 경우에는 5배의 무게 감소가 관찰된다. GnRH-TT 및 위약군을 비교했을 때, 부고환의 경우에는 1.6배 그리고 정소의 경우에는 2.4배의 무게 감소가 관찰된다.
결론적으로, 신규 GnRH-유사 펩타이드는 파상풍 톡소이드의 공통적 에피토프에 컨쥬게이션하는 경우 자연 GnRH보다 1.4 내지 1.8배 정도 더 효과적임을 알 수 있다.
서열 목록
(1) 일반 정보:
(ⅰ) 출원인:
(A) 명칭: 센트로 데 인제니에리아 제네티카 와이 바이오테크놀로지아
(B) 거리: 아베. 31 엔트레 158 y 190, 플라야
(C) 도시: 시우다드 데 라 하바나
(E) 국가: 쿠바
(F) 우편번호(ZIP): 10600
(G) 전화번호: 53 7 218466
(H) 팩스번호: 53 7 218070/336008
(ⅱ) 발명의 명칭: 포유동물의 가역적인 면역적 거세를 위한 백신
(ⅲ) 서열 수: 1
(ⅳ) 컴퓨터 판독 형태:
(A) 매개 타입: 플로피 디스크
(B) 컴퓨터: IBM PC 적합
(C) 작동시스템: PC-DOS/MS-DOS
(D) 소프트웨어: PatentIn Release ＃1.0, Version ＃1.30(EPO)
(ⅵ) 우선 출원 데이터:
(A) 출원번호: CU 120/96
(B) 출원일: 17-DEC-1996
(2) 서열 목록 1에 대한 정보:
(ⅰ) 서열 특징:
(A) 길이: 10 아미노산
(B) 타입: 아미노산
(C) 쇄의 수: 1본쇄
(D) 토폴로지: 선형
(ⅱ) 분자의 타입: 펩타이드
(ⅲ) 추정 서열: NO
(ⅳ) 앤티센스: NO
(ⅵ) 기원:
(A) 생물명: 고나도트로핀 방출 호르몬 돌연변이체
(C) 개체분리 클론명: 포유동물
(xi) 서열 번호: 서열 1:
Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Pro-Leu-Arg-Pro-Gly
1 5 10
Claims (4)
- 고나도트로핀의 방출을 방해하고 다음과 같은 서열을 갖는 펩타이드:Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Pro-Leu-Arg-Pro-Gly
- 제 1 항에 있어서, 상기 펩타이드는 L-아미노산만을 포함하는 것을 특징으로 하는 펩타이드.
- 제 1 항의 서열을 아미노산 서열의 일부분으로 하는 펩타이드 또는 단백질.
- 제 1 항, 2 항 및 3항의 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 사람 또는 가축용 백신.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CU1996120A CU22627A1 (es) | 1996-12-17 | 1996-12-17 | Preparado vacunal para la inmuno-castración reversible de mamíferos |
| CU120/96 | 1996-12-17 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20000057647A true KR20000057647A (ko) | 2000-09-25 |
| KR100461732B1 KR100461732B1 (ko) | 2004-12-14 |
Family
ID=5459402
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR10-1999-7005452A KR100461732B1 (ko) | 1996-12-17 | 1997-12-17 | 포유동물의 가역적인 면역적 거세를 위한 백신 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0959079A1 (ko) |
| KR (1) | KR100461732B1 (ko) |
| AR (1) | AR009840A1 (ko) |
| AU (1) | AU736538B2 (ko) |
| BR (1) | BR9713735A (ko) |
| CA (1) | CA2275440A1 (ko) |
| CU (1) | CU22627A1 (ko) |
| UY (1) | UY24815A1 (ko) |
| WO (1) | WO1998027111A1 (ko) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CU23204A1 (es) * | 2002-12-27 | 2007-05-18 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | Combinaciones de factores reguladores del crecimiento y hormonas para el tratamiento de neoplasias |
| CU23739A1 (es) | 2008-09-30 | 2011-12-28 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | Composición farmacéutica utilizando combinaciones de variantes de la hormona liberadora de las gonadotropinas (gnrh) como inmunógeno |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ220932A (en) * | 1986-07-03 | 1990-05-28 | Victoria State | Composition comprising an antigenic substance, such as lhrh, conjugated to at least two different carriers and method of immunological castration and spaying |
| WO1988005308A1 (en) * | 1987-01-14 | 1988-07-28 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Or | Anti reproductive hormone |
| PT501882E (pt) * | 1991-03-01 | 2000-12-29 | Merial Sas | Processo de imunoneutralizacao anti-lhrm de animais domesticos machos nao castrados e peptido para esse fim |
| AU634379B2 (en) * | 1991-04-29 | 1993-02-18 | Csl Limited | Recombinant immunocastration vaccine |
-
1996
- 1996-12-17 CU CU1996120A patent/CU22627A1/es unknown
-
1997
- 1997-12-17 EP EP97947684A patent/EP0959079A1/en not_active Withdrawn
- 1997-12-17 UY UY24815A patent/UY24815A1/es not_active IP Right Cessation
- 1997-12-17 KR KR10-1999-7005452A patent/KR100461732B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-12-17 BR BR9713735-9A patent/BR9713735A/pt not_active IP Right Cessation
- 1997-12-17 CA CA002275440A patent/CA2275440A1/en not_active Abandoned
- 1997-12-17 AR ARP970105935A patent/AR009840A1/es unknown
- 1997-12-17 AU AU53975/98A patent/AU736538B2/en not_active Ceased
- 1997-12-17 WO PCT/CU1997/000008 patent/WO1998027111A1/es active IP Right Grant
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR100461732B1 (ko) | 2004-12-14 |
| AU5397598A (en) | 1998-07-15 |
| BR9713735A (pt) | 2000-03-28 |
| UY24815A1 (es) | 2001-03-16 |
| CA2275440A1 (en) | 1998-06-25 |
| WO1998027111A1 (es) | 1998-06-25 |
| AR009840A1 (es) | 2000-05-03 |
| CU22627A1 (es) | 2000-12-22 |
| AU736538B2 (en) | 2001-08-02 |
| EP0959079A1 (en) | 1999-11-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3993387B2 (ja) | 合成ペプチド免疫原のための免疫刺激因子としての人工的ｔヘルパー細胞エピトープ | |
| US4608251A (en) | LHRH analogues useful in stimulating anti-LHRH antibodies and vaccines containing such analogues | |
| EP0708656B1 (en) | Immunogenic lhrh peptide constructs and synthetic universal immune stimulators for vaccines | |
| TWI225069B (en) | Artificial T helper cell epitopes as immune stimulators for synthetic peptide immunogens including immunogenic LHRH peptides | |
| Hervé et al. | On the immunogenic properties of retro-inverso peptides. Total retro-inversion of T-cell epitopes causes a loss of binding to MHC II molecules | |
| AU610526B2 (en) | Improvements in or relating to hormones | |
| US4761470A (en) | Immunogenic synthetic peptide capable of eliciting herpes simplex virus neutralizing antibody | |
| GB2228262A (en) | Antigenic derivative of GnRH | |
| HUT52787A (en) | Process for production of biologically active peptides | |
| KR100461732B1 (ko) | 포유동물의 가역적인 면역적 거세를 위한 백신 | |
| EP0175613B1 (en) | Immunogenic hav peptides | |
| Gregerson et al. | Characterization of immunologically active cyanogen bromide peptide fragments of bovine and human retinal S-antigen | |
| AU652611B2 (en) | Analogs of piscine LHRH | |
| MXPA99005693A (en) | Vaccine for the reversible immunocastration of mammals | |
| CA2204256A1 (en) | Peptides for anti-allergy treatment | |
| CA1341039C (en) | Analogues of lhrh allowing increased antigenicity through conjugation | |
| Arbatti et al. | Modulation of prolactin release by a 25 kD peptide of human seminal plasma | |
| CS272790A2 (en) | Peptides with biological effect | |
| MXPA00011939A (en) | Artificial t helper cell epitopes as immune stimulators for synthetic peptideimmunogens | |
| EP0819137A1 (en) | Peptides with growth promotion properties | |
| WO1987003883A2 (en) | Use of oligopeptides in the treatment of viral infections | |
| CZ3004U1 (cs) | Peptidy a farmaceutické prostředky s jejich obsahem |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| LAPS | Lapse due to unpaid annual fee |