KR20000029773A

KR20000029773A - 2,4-디엔산형살충제를육상포유동물에게전신투여하는개선된방법

Info

Publication number: KR20000029773A
Application number: KR1019997000888A
Authority: KR
Inventors: 루돌프로빈리차드
Original assignee: 한스 루돌프 하우스;헨리테 브룬너;베아트리체 귄터; 노파르티스 아게
Priority date: 1996-08-02
Filing date: 1997-08-01
Publication date: 2000-05-25
Also published as: CN1103544C; DE69723274T2; PT923292E; IL128218A0; AU723124B2; ATE243935T1; AU4013697A; WO1998005211A1; BR9710910A; JP2000515533A; IL128218A; RU2225113C2; EP0923292B1; DK0923292T3; CA2262840C; NZ333930A; ES2202636T3; KR100441239B1; CN1228678A; CA2262840A1

Abstract

본 발명에서는, 2,4-디엔산, 이의 염 또는 에스테르를 벼룩 및/또는 벼룩 알에 대해 치사적인 양이지만 벼룩 또는 벼룩 알이 숙주동물의 혈액만을 직접 섭취하는 경우의 벼룩과 벼룩 알에 대해 치사적인 숙주동물 혈중 살충제 농도를 유지하는 데에는 불충분한 양으로 육상 포유동물에게 전신 투여함으로써, 벼룩이 육상 포유동물, 특히 개 또는 고양이의 털 외피 속으로 침입하는 것을 억제, 제거 또는 방지한다.

Description

2,4-디엔산형 살충제를 육상 포유동물에게 전신 투여하는 개선된 방법{Improved method for systemic administration of 2,4-dienoic acid-type insecticides to terrestrial mammals}

다양한 유기 화합물이 육상 포유동물 내의 벼룩 억제용 전신성 살충제로서 활성이 있는 것으로 공지되어 있다. 테노세팔리데스 펠리스(Ctenocephalides felis)와 테노세팔리데스 카니스(Ctenocephalides canis)(각각, 고양이 벼룩과 개 벼룩이다)에 의한 침입을 억제, 방지 또는 제거하기 위한 개와 고양이에 대한 경구 투여용 화합물이 특히 중요하다. 이들 화합물에는 유년성 호르몬(juvenile hormone)과 화학적으로 이와 유사한 화합물, 벤조일우레아 유도체 및 트리아진 유도체가 포함된다. 유년성 호르몬에는 2,4-디엔산과 페녹시페녹시 화합물, 특히 페녹시페녹시알콕시 헤테로사이클이 포함된다. 2,4-디엔산 및 이와 관련된 화합물의 예는 메토프렌, 하이드로프렌, 네오테닌 및 에피페노난이다. 페녹시페녹시 화합물의 예는 펜옥시카브와 피리프록시펜이다. 벤조일우레아의 예는 루펜우론, 디플루벤즈우론, 터플루벤즈우론, 트리플루마론, 헥사플루마론 및 플루사이클록스우론이다. 트리아진 유도체의 예는 2-사이클로프로필아미노-4,6-비스(디메틸아미노)-s-트리아진이다.

초기에 이들 화합물 및 구조적으로 관련된, 활성이 유사한 기타 화합물이 벼룩에 직접 이용하는 용도로 명시되어 있었다. 이후의 연구에 의하면, 숙주(host) 동물에 이들 화합물을 전신적으로 이용함으로써 활성이 수득될 수 있는 것으로 나타났다. 이러한 연구는 바넷트(Barnett)[시바-가이기 코포레이션(Ciba-Geigy Corporation)] 등의 미국 특허 제4,973,589호(1990년 11월 27일), 바넷트(시바-가이기 코포레이션) 등의 미국 특허 제5,416,102호(1995년 5월 16일) 및 밀러(Miller)[버백, 인코포레이티드(Virbac, Inc.)]의 미국 특허 제5,439,924호(1995년 8월 8일)에 기재되어 있다. 이들 특허 문헌 각각의 기재사항은 이들에 의해 제공될 모든 법적 목적을 위해 참고로 기재되어 있다.

이들 특허를 제출한 살충제 공급업자들에 의해 발간된 이들 특허와 기술 문헌에 따르면, 성충 벼룩으로의 성장 방지는 부모 벼룩이 당해 화합물을 투여한 숙주동물의 혈액을 섭취하는 경우 달성된다. 성충 벼룩은 동물의 표피를 통해 혈액을 직접 섭취하는 반면, 유충 벼룩은 성충 벼룩의 배설물에 존재하는 부분적으로 소화된 혈액을 섭취한다. 따라서, 최소 유효 농도로서 인지되는 농도를 초과하는 혈중 살충제 농도를 유지함으로써 살충 활성이 달성되는 것으로 추측되어 왔다. 살충제를 살아있는 동물에게 투여하고 동물 외피 속의 벼룩과 벼룩 알에 대한 영향을 관찰하는 방법으로만 최소 유효 농도가 입증되었기 때문에, 직접적인 동물 환경 속에서의 벼룩 유충에 대해 살란 효과를 나타내는 숙주동물에 대한 살충제 투여량은 동물 혈액 속에서의 살충제의 치사량이 되는 것으로 추측된다.

발명의 요지

특정 살충제는 숙주동물에게 경구 투여시 동물의 혈액 속에서 살충제량을 더 이상 검출할 수 없게 된 후에도 벼룩에 대해 장기간 계속적으로 유효한 것으로 밝혀졌다. 또한, 벼룩이 숙주동물의 외피와 접촉하지 않은 상태에서 숙주동물로부터 채취한 혈액(만)을 직접 섭취하는 경우에 살충 효과 또는 살란 효과를 달성하는 데 필요한 농도가, 동물에 대한 전신 투여에 의해 벼룩을 죽이는 경우의 숙주동물 혈중 농도보다 상당히 더 큰 것으로 밝혀졌다. 따라서, 본 발명은 이들 살충제를 이전에 최소 혈중 유효 농도라 생각되었던 농도를 유지하는 데에는 불충분하지만 여전히 살충 효과 또는 살란 효과를 달성하는 데에는 충분한 투여량으로 숙주동물에게 전신 투여하여 벼룩과 벼룩 알을 억제하는 데 있다. 따라서, 이러한 살충제를 전신 투여함으로써 선행 기술과 대조적으로 숙주동물의 혈중 최소 농도를 초과하는 데 필요한 양보다 훨씬 더 적은 양에서도 효과적으로 벼룩을 억제한다.

본 발명의 이러한 특징과 이점 및 기타 특징과 이점에 대한 상세한 사항은 이후의 기재사항으로부터 명백히 알 수 있다.

본 발명의 상세한 설명과 바람직한 양태

본 발명은 화학식

의 2,4-디엔산, 이의 염 또는 에스테르[여기서, R¹은 C₁-C₆알킬이고, R²는 H, 메틸 또는 에틸이고, R³은 H 또는 메틸이고, R⁴는 메틸 또는 에틸이고, R⁵는 H 또는 메틸이고, R⁶은 H 또는 메틸이고, R⁷은 메틸 또는 에틸이고, R⁸은 H, C₁-C₆알킬, C₃-C₆알케닐, C₃-C₆알키닐, C₃-C₈사이클로알킬, 페닐, 나프틸, C₇-C₁₂아르알킬 또는, 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 스트론튬, 구리, 망간 또는 아연의 양이온이고, X는 Br, Cl, F, I 또는 OR⁹(여기서, R⁹는 H, C₁-C₆알킬 또는 C₁-C₆알카노일이다)이고, m은 0, 1, 2 또는 3이고, n은 0, 1, 2 또는 3이다]에 이용할 수 있다.

본원에서 사용하는 바와 같은 "사이클로알킬"이라는 용어는 환 탄소로부터 쇄를 형성하는 하나 이상의 알킬 그룹을 갖는 환을 포함하는 포화 탄화수소를 의미한다. 예를 들면, 사이클로프로필, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 메틸사이클로헥실 및 사이클로헥실메틸이다. 바람직한 사이클로알킬 그룹은 C₃-C₆사이클로알킬이고, 사이클로펜틸과 사이클로헥실이 특히 바람직하다. "아르알킬"이라는 용어는 환 탄소로부터 쇄를 형성하는 하나 이상의 알킬 그룹을 추가로 포함하거나 포함하지 않은 방향족 그룹으로 치환된 알킬 그룹을 의미한다. 아르알킬 그룹의 예는 벤질, 페닐에틸, 나프틸메틸 및 에틸벤질이다. 바람직한 아르알킬 그룹은 C₇-C₉아르알킬이고, 벤질과 페닐에틸이 특히 바람직하다. "알카노일"이라는 용어는 카복실 그룹에 결합된 알킬 그룹을 의미한다. 예를 들면, 아세틸, 프로피오닐, 부티릴 및 헥사노일이다. 바람직한 알카노일 그룹은 C₁-C₃알키노일이고, 아세틸과 프로피오닐이 특히 바람직하다.

2,4-디엔산, 이의 염 및 이의 에스테르에 대한 위의 화학식의 범위에 속하는 특정 소그룹(subgenus)이 바람직하다. 이러한 소그룹의 하나는, 예를 들면, 이중결합이 E,E 또는 Z,E 배열, 가장 바람직하게는 E,E 배열인 소그룹으로서 정의된다. 이러한 소그룹 중 또 하나는, R¹이 메틸 또는 에틸이고, R²가 메틸 또는 에틸이고, R⁷이 메틸이고, R⁸이 C₁-C₆알킬 또는 C₃-C₆알키닐이고, X가 Cl 또는 OR⁹이고, m이 0 또는 1이고, n이 1이며, 나머지 모든 변화가능한 그룹은 위에서 정의한 바와 동일한 것으로 정의된다. 제3 소그룹은 R¹이 메틸 또는 에틸이고, R²가 메틸이고, R³이 H이고, R⁴가 메틸이고, R⁵가 H이고, R⁶이 H이고, R⁷이 메틸이고, R⁸이 C₁-C₄알킬 또는 C₃-C₄알키닐이고, X가 Cl 또는 OR⁹이고, m이 1이고, n이 1인 것으로 정의된다. 바람직한 제4 소그룹은 제3 소그룹과 동일하고, 단 R⁹는 H, 메틸, 에틸, 이소프로필, 3급-부틸 또는 아세틸이다. 제5 소그룹은 제3 소그룹과 동일하고, 단 R⁹는 메틸, 에틸, 이소프로필 또는 3급-부틸이다. 위의 화학식의 범위 내의 공지된 화합물의 특정 예는 1-이소프로필 (E,E)-11-메톡시-3,7,11-트리메틸 도데카디-2,4-에노에이트(메토프렌, 기타 명칭: 트랜스(2),트랜스(4)-이소프로필 11-메톡시-3,7,11-트리메틸도데카-2,4-디에노에이트), 메틸 (E,E)-3,7,11-트리메틸 도데카디-2,4-에노에이트(하이드로프렌) 및 2-프로피닐 (E,E)-3,7,11-트리메틸도데카-2,4-디에노에이트(키노프렌)이다. 메토프렌과 특히 (S)-메토프렌이 특히 중요하다. 하이드로프렌의 경우, 바람직한 광학적 배열은 (R,S)와 (S)인 반면에, 키노플렌의 경우, 바람직한 광학적 배열은 (S)이다.

본 발명의 목적은 활성 성분을 동물의 혈액을 직접 섭취하는 성충 벼룩으로부터 태어난 벼룩에 대한 치사율이 약 50%인 동물 혈중 농도를 유지하는 데에는 불충분한 양으로 사용하여, 동물의 피부 또는 털과 접촉하고 있는 벼룩에 대한 치사율 약 80% 이상을 달성하는 것이다. 이러한 파라미터(parameter) 내에서, 단일 거환(bolus)으로서 또는 1일 투여량으로서 숙주동물에 투여하는 활성 성분의 양은 상당히 변할 수 있다. 대부분의 용도에서, 당해 화합물을 가장 효과적으로 사용하여 수득한 가장 양호한 결과는 1일당 활성 성분 약 0.3 내지 약 10.0mg/동물 체중kg의 투여량을 이용하거나 동물 체내에서 이와 거의 동량이 되는 투여량 스케쥴을 이용하여 달성한다. 바람직한 범위는 약 1.0 내지 약 5.0mg/kg이다. 동물의 혈중 활성 성분 농도의 측정량은 일반적으로 동물 체내에 존재하는 양에 대한 지표이고, 또한 바람직한 투여량을 특정 혈중 활성 성분 농도를 유지하는 데 충분한 양으로서 나타낼 수 있다. 이러한 용어로 나타내는 경우, 일반적으로 가장 양호한 결과는, 혈중 활성 성분 농도 70중량ppb를 유지하는 데에는 불충분하지만, 동물의 털 또는 지방 조직 속에서 활성 성분의 치사 농도를 유지하는 데에는 충분한 양을 투여하여 달성할 수 있다.

이론적으로 연관시키려는 것은 아니지만, 활성 성분이 동물 체내의 혈액, 특정 조직 및 내분비선, 특히 소수성 조직(예: 지방 세포)에 대한 선택적 친화도를 갖고서 이들 조직과 내분비선 사이에 분배되는 것으로 생각된다. 벼룩 또는 벼룩 알에 대한 활성 성분이 혈액 또는 친수성 조직보다는 친유성 조직, 피지선 및 아프로크린 선(aprocrine gland)을 통해 통과되어 상당한 효과와 심지어는 대부분의 효과를 달성할 수 있다. 그러나, 이러한 설명은 한가지 가능성으로서 제시된 것이며, 본 발명의 범위를 제한하려는 것이 아니다.

숙주동물에 투여하기 위해 활성 성분을 통상적인 방법으로 제형화할 수 있다. 제형의 선택은 편이성 및 비용과 같은 기타 요인들 중에서 동물 부류, 동물 크기 및 투여방법에 따라 달라진다. 다양한 제형의 예는 분말, 정제, 과립, 캅셀 및 유액이다. 경구 투여용으로는, 활성 성분을 동물 먹이와 단순히 혼합하거나, 먹이 물질의 펠렛, 덩어리 및 입자에 혼입하거나, 활성 성분으로 이들을 피복하여 동물 먹이와 혼합할 수 있다. 활성 성분으로 피복하거나 침지시킨 비스켓, 트리트(treat) 또는 츄잉 정제(chewable tablet) 및 물에 분산시킬 수 있는 활성 성분의 액상 형태를 예로 들 수 있다. 추가로, 예를 들면, 방향제 또는 풍미제와 같은 동물의 자발적인 섭취를 촉진시키는 보조제 뿐만 아니라, 제형 보조제로서 통상적으로 사용하는 보조제를 활성 성분에 보충할 수 있다. 제형 속에 함유되는 보조제의 예는 당류(예: 락토스, 삭카로스, 만니톨 또는 솔비톨), 셀룰로즈 제형, 인산칼슘, 전분(예: 옥수수전분, 밀전분, 쌀전분 또는 감자전분), 젤라틴, 트라가칸트, 메틸셀룰로즈, 한천 및 알긴산나트륨을 포함하는 충전제와 결합제이다. 기타 예는, 유동성 억제제와 윤활제, 예를 들면, 실리카, 활석, 스테아르산과 이의 염 및 폴리에틸렌 글리콜이다. 추가의 예는 제형 분야의 숙련가들이 용이하게 알 수 있을 것이다.

투여는 또한 비경구적으로 또는 이식물에 의해 가능하다. 비경구 투여는 피하, 정맥내 또는 근육내 주사에 의해, 또는 경피 투여에 의해 수행할 수 있다. 이식물은, 예를 들면, 활성 성분이 용출될 수 있는 고체 고무와 같은 매트릭스 전체에 활성 성분을 분산시키거나, 활성 성분이 확산될 수 있는 막(wall)을 갖는 중공 캅셀(hollow capsule)에 활성 성분을 넣어 이식물을 제조할 수 있다. 이들 모든 제형과 투여방법은 당해 분야의 숙련가들에게 공지되어 있다.

본 발명은 육상 포유동물의 처리에 이용되며, 이의 범위와 의미는 축산과 동물 분야의 숙련가들에게 익히 공지되어 있다. 이 분야에는 가정용 동물, 가축 및 다양한 애완용 동물이 포함된다. 특정 예는 개, 고양이, 햄스터 및 흰족제비(ferret)이다. 개와 고양이가 특히 중요하며, 아마도 개가 가장 중요할 것이다.

본 발명의 방법은 벼룩의 침입을 받는 동물에게 투여함으로써 벼룩의 침입을 제거하거나 감소시키는 데 사용할 수 있다. 또한, 이 방법은 개 또는 고양이에 벼룩이 침입하지는 않았지만 투여받지 않으면 벼룩의 침입을 받는 상황에 놓이게 되거나 그러한 상황에 직면하게 될 것으로 예상되는 동물에게 투여함으로써 벼룩의 침입을 방지하는 데 이용할 수 있다. 본원에서 "벼룩의 억제"라는 용어는 이미 침입한 벼룩의 제거 또는 감소 및 벼룩 침입의 사전 예방 둘다를 나타내는 데 사용된다.

단지 설명하기 위해 아래의 실시예를 제공한다.

실시예 1

실시예 1에 의해, (S)-메토프렌은 단일 경구 투여 형태로서 개에게 투여되는 경우, 개의 혈액 속에서 48 내지 96시간 이상 유지되지 않는 것으로 입증된다. 이 시험에서 투여되는 투여량은, 마찬가지로 단일 경구 투여 형태로서 벼룩을 14일 동안 억제하는 데 효과적인 아래의 실시예 2에 기재된 투여량과 동일하다.

체중이 마리당 14 내지 22kg의 범위이고 나이가 2 내지 5살의 범위인 6마리의 건강한 잡종개(3마리는 수컷이고 3마리는 암컷이다)를 이용한다. 각각의 개에 대하여 개의 체중을 기준으로 하여, 단일 젤라틴 캅셀 속의 50mg/(개의 체중kg)의 단일 투여 형태가 되도록 측정된 용적의 (S)-메토프렌을 함유하는 젤라틴 캅셀을 제조한다. 각각의 캅셀을 투여하기 전 24시간 동안 개를 단식시키고, 각각의 개의 인후 뒤쪽에 캅셀을 넣고 삼키도록 하여 투여한다. 이어서, 물은 항상 먹을 수 있게 하지만, 먹이는 8시간 동안 공급하지 않고, 일단 익일 아침이 되면 개에게 먹이를 공급한다.

매번 샘플링할 때마다, 각각의 개의 대퇴부 정맥으로부터 혈액 50㎖를 2개의 25㎖ 용량의 주사기로 수집한다. 샘플은 투여하기 7일 전에 채취(기준선을 설정하기 위함)한 다음, 투여한 지 3시간, 1일, 2일, 4일 및 7일 후에 채취한다. 각각의 샘플에 적혈구 용적법(hematocrit)을 수행하여 적혈구 용적이 시험 기간 동안 30% 이상 감소하지 않게 한다.

메토프렌 함량 측정용 혈액 샘플을 제조하기 위해, 각각의 혈액 샘플 25㎖를 혼합기 속에서 1분짜리 3세그먼트(segment) 동안 아세토니트릴 200㎖, 무수 Na₂SO₄25g 및 셀라이트^R(CELITE^R) 10g과 혼합하고, 혼합기 블레이드(blade)를 세그먼트 사이의 30초 동안 냉각시킨다. 이어서, 혼합물을 아세토니트릴 50㎖로 세척하면서 진공여과한다. 여액을 석유 에테르로 1분 동안 추출한 후, 탈이온수 700㎖로 희석한다. 이 희석액에 NaCl 50g을 첨가하고, 이 용액을 0.5N HCl을 사용하여 pH 2가 되도록 산성화한다. 이어서, 수성 상(aqueous phase)을 버리고, 석유 에테르 상(phase)을 탈이온수 600㎖로 2회 세척한다. 이어서, 석유 에테르를 Na₂SO₄50g으로 토핑된 석면 플러그(plug)를 통해 여과한다. 이어서, Na₂SO₄를 석유 에테르 15㎖로 세척하고, 온도 30℃의 욕을 이용하여 회전 증류기 속에서 추출물을 10㎖로 농축시킨다. 이어서, 농축된 추출물을 냉장고 속에 저장하여 다음 단계에서 분석한다.

플로리실^R(FLORISIL^R)(규산마그네슘 흡수제)을 200℃에서 24시간 동안 가열 활성화시킨 후, 플로리실을 45분 동안 냉각시키고, 플로리실 50g당 증류수 5㎖를 가한 다음, 혼합물을 진탕하고 3시간 동안 평형상태에 도달시켜 추출 컬럼을 제조한다. 내경 28mm의 유리 컬럼을 석면으로 틀어 막고 석유 에테르로 충전시킨다. Na₂SO₄를 서서히 컬럼에 주입하여 두께 1cm의 층을 만든 후, 플로리실 6.5cm와 Na₂SO₄1.5cm를 주입한다. 이어서, Na₂SO₄층이 나타날 때까지 석유 에테르를 배출시킨다. 이어서, 앞 문단에서 사용한 용매를 유리 피펫으로 컬럼 상부에 적재하고, 함유된 부분을 석유 에테르로 세척하고 컬럼에 첨가한다. 이어서, 컬럼을 배출시켜 용매 층을 Na₂SO₄층 위에 존재시키고 용출액을 버린다.

이어서, 각각의 샘플에 대하여 5% 디에틸 에테르/석유 에테르 1ℓ를 사용하여 용출시키고, 175㎖의 분획과 825㎖의 분획을 수집한다. 이어서, 825㎖의 분획을 증발시켜 5㎖로 만들고 냉장고에 보관한다.

기체 크로마토그래피용 825㎖의 분획을 제조하기 위해, 내부 표준액(internal standard) 1㎖를 샘플에 가하고, 질소를 사용하여 샘플 용적이 약 0.3㎖가 되도록 증발시킨다. 각각 5㎕의 표본(aliquot) 2개를, 3% OV-101 크롬(Chrom) W HP 100/120 메쉬로 충전된 6피트×1/4인치 규격의 유리 컬럼이 장착되어 있고 운반 기체로서 유속 60㎖/분의 질소를 사용하며, 주입기, 컬럼 및 검출기의 온도가 각각 300℃, 166℃ 및 280℃인 기체 크로마토그래피 분석기[퍼킨 엘머(Perkin Elmer)사, 시그마(Sigma) 300, 섬광 이온화 검출기와 데이터 시스템 장착]에 주입한다.

결과를 아래의 표 I에 나타내었다.

이 결과에 의하면, 6마리의 개 중 2마리의 경우, 메토프렌 양이 48시간 후에 검출가능한 양 미만으로 감소하고, 나머지 4마리의 경우, 메토프렌 양이 96시간 후에 검출가능한 양 미만으로 감소한다.

실시예 2

이 시험에 의해, (S)-메토프렌이 실시예 1의 투여량 이하의 단일 투여량으로서 게에게 투여되는 경우의 살란 효과가 입증된다.

체중이 7.5 내지 14.9kg이고 나이가 7 내지 68개월의 범위이며, 털 외피가 미세 내지 조야하고 길이가 1.0 내지 2.5cm의 범위인 9마리의 랜덤한 종의 임상학적으로 건강한 개(5마리는 수컷이고 4마리는 암컷이다)를 이용한다. 개들을 체중을 기준으로 하여 3개의 처리 그룹으로 나누며, 제1 그룹은 플라시보[(S)-메토프렌을 함유하지 않는 젤라틴 캅셀]을, 제2 그룹은 한 마리의 특정 개에게 (S)-메토프렌 25.0mg/체중kg을 제공하도록 각각 적당량의 (S)-메토프렌을 함유시켜 제조한 젤라틴 캅셀을 공급받고, 제3 그룹은 각각 (S)-메토프렌 50.0mg/체중kg을 제공하도록 제조한 젤라틴 캅셀을 공급받는다. 각각의 개에게 개 먹이와 물로 짜여진 규칙적인 먹이 스케쥴에 추가하여, 0일 후에는 한 개의 캅셀을 경구 투여하고, 33일 후에는 또 하나의 캅셀을 경구 투여한다.

첫 번째 젤라틴 캅셀을 투여하기 11일 전(즉, -11일 후)과 이후 59일 동안 매주, 먹이를 공급하지 않은 혼성비의 생후 1 내지 2주일된 C. 펠리스 성충 벼룩 약 200마리를 각각의 개에게 침입시킨다. 각각의 개를 약 1분 동안 묶어 놓고, 개의 등을 따라 벼룩을 풀어 놓는다.

-7일, 0일, 1일, 2일, 4일 및 7일 후와 이후 63일 동안 매주, 벼룩 알을 수집한다. 알을 수집하기 전에, 개가 사는 우리와 수집 용기를 이소프로필 알콜로 세척하고, 물 공급을 중단하고, 먹이 용기와 휴식용 패드를 각각의 우리로부터 제거한다. 8인치 하드웨어용 천(hardware cloth)으로 제조된 스크린으로 덮은 트레이를 우리 아래에 놓고, 두꺼운 백색 도살용 종이를 하드웨어용 천 아래에 놓는다. 14 내지 16시간 간격을 둔 후에, 도살용 종이를 털고 이와 같이 수집한 부스러기와 벼룩 알을 금속 팬에 옮긴다. 벼룩 알로부터 부스러기를 체질하여 분리하고, 벼룩 알을 0.5파인트 용량의 플라스틱 상자에 넣은 후, 10cm×10cm 규격의 유리판에 옮긴다. 해부용 현미경과 끝이 미세한 미술용 붓을 사용하여 각각의 개에게서 수집한 알로부터 100개의 벼룩 알을 세고, 각각 25개의 알로 이루어진 4개의 반복물(replicate)로 분리한다. 이 벼룩 알을 15mm×60mm 규격의 1회용 플라스틱 페트리 디쉬에 넣고 온도 79 내지 80℉와 상대습도 80%에서 부화시킨다. 수집한 지 72시간 후, 유충의 발생이 관찰된다. 죽은 유충과 살아 있는 유충 둘다의 수를 세어 이 처리에 의한 살란 효과를 측정한다.

결과를 아래의 표 II에 나타내었으며, 표 II에서, 각각 기재한 수는 플라시보 그룹에 대한 벼룩 알로부터의 벼룩의 부화 억제율(%)을 나타내고, 특정 처리 그룹의 모든 반복물 및 3마리 개의 평균값이다.

이 결과에 의하면, (S)-메토프렌을 숙주 개에 전신 투여하는 경우, (S)-메토프렌은 실시예 1에서 사용한 투여량과 이의 절반이 되는 양 모두에서 벼룩에 대하여 살란 효과를 나타내며, 이 살란 효과는 (S)-메토프렌의 개의 혈중 농도가 검출가능한 양 미만으로 감소되는 시점이 상당히 경과한 후 2주 이상 동안 지속된다.

실시예 3

이 시험은 개에게 경구 투여하는 경우의 (S)-메토프렌의 살란 효과를, 동일한 개로부터 채취하여 시험관 투여로 벼룩에게 직접 공급한 개 혈액 속의 (S)-메토프렌의 살란 효과와 비교함을 포함한다. (S)-메토프렌을 초기 거환 투여 형태로 투여한 후, 저 비율로 매일 투여한다.

시험관 시험을 위해, 문헌에 기재된 바와 같이, 성충의 고양이 벼룩인 C. 펠리스에 대하여 우리와 함께 인공적인 먹이 공급 시스템을 이용한다[참고: Wade, S.E 등, J. Med. Ent. 25(3): 186-190(May 1988)]. 각각의 우리 내부에 먹이를 공급하지 않은 생후 1주일된 성충 C. 펠리스 100마리를 넣는다. 각각의 우리에는 파라필름^R(PARAFILM^R) 막을 사용하여 벼룩으로부터 분리한 처리 혈액용 용기와, 느슨하게 배열된 청결한 개털을 지지하고 벼룩이 막을 통해 혈액을 섭취할 때 이들을 위한 지지대를 제공하기 위한 얇은 종이 조각이 담긴 칸막이가 포함되어 있다.

체중이 10.29 내지 13.87kg의 범위인 생후 1년된 건강한 수컷 사냥개 15마리를 각각 5마리씩 3개의 그룹으로 나눈다. 제1 그룹은 (S)-메토프렌 50mg/kg을 함유하는 초기 거환을 공급한 후, (S)-메토프렌을 0.02% 함유하는 표준 유지 먹이를 공급한다. 제2 그룹은 (S)-메토프렌 25mg/kg을 함유하는 초기 거환을 공급한 후, (S)-메토프렌을 0.01% 함유하는 표준 유지 먹이를 공급한다. 제3 그룹은 (S)-메토프렌를 함유하지 않은 동일한 먹이를 공급하여 대조군로서 이용한다. 제1 그룹의 경우, 매일 (S)-메토프렌 0.02%를 공급하면 약 3.6mg/kg에 이르는 반면, 제2 그룹의 경우, 매일 (S)-메토프렌 0.01%를 공급하면 약 1.8mg/kg에 이르게 된다. (S)-메토프렌은 젤라틴 캅셀에 넣어 공급하며, 대조군은 (S)-메토프렌 대신에 식물성 오일을 함유하는 젤라틴 캅셀을 투여하고, 표준 먹이는 사이언스 다이어트 캐닌 메인티넌스(Science Diet Canine Maintenance)이다. 초기 거환을 공급한 후 6주 동안 계속해서 (S)-메토프렌을 매일 공급한다.

초기 거환을 투여한 지 7일 후와 이후 4주 후를 제외한 5주 이상 동안 매주, 20중량%의 구연산 수용액 3㎖를 예비충전시킨 주사기에 각각의 개로부터 혈액 40 내지 50㎖를 수집한다. 각각의 처리 그룹으로부터 50㎖ 분량의 샘플 5개를 출혈시마다 모은다. 각각의 푸울로부터의 10㎖의 표본을 인공의 벼룩 먹이 공급 우리의 분리된 먹이 공급 챔버에 넣는다.

벼룩 알을 적당한 시간 간격으로 각각의 우리로부터 수집한다. 해부용 현미경하에 각각의 우리로부터 건강해 보이는 벼룩 100마리의 수를 세고, 2개의 서브샘플(subsample)로 분할한 다음, 60mm×15mm 규격의 플라스틱 페트리 디쉬에 넣는다. 이 샘플을 온도 78℉와 상대습도 85%에서 3일 동안 배양한 후, 해부용 현미경을 통해 육안으로 관찰하여 부화된 유충의 수를 센다. 각각의 처리 그룹의 모든 반복물의 데이터를 결합시켜 평균 알 부화율(%)을 산출하고, 알 부화 억제율(%)을 대조군을 기준으로 하여 계산한다.

제4 주의 데이터 기록 시기 3일 전에, 각각의 개에게 실시예 2에 기재된 방법으로 벼룩을 침입시킨다. 제4 주의 시점에서, 벼룩 알을 실시예 2에 기재된 방법으로 개 자체로부터 수집하고, 이러한 방법으로 수집한 벼룩에 대하여 알 부화 억제율(%)을 실시예 2에서와 같이 측정한다.

인공 먹이 챔버를 사용한 시험관내 시험 결과는 표 III에 나타내었고, 생체내 시험 결과는 표 IV에 나타내었다.

(S)-메토프렌의 시험관내 벼룩 살란 활성

시험 개시 후의 일 수	벼룩 알 부화 억제율(%)
시험 개시 후의 일 수	초기 거환:50mg/kg	25mg/kg	대조군
1	33	6	0
2	-^*	-	-
3	48	38	0
5	38	24	0
6	22	19	0
^*: 벼룩 알 생산이 부족하여 부화율을 측정할 수 없음

숙주 개에 대한 경구 전신 투여시 메토프렌의 전신성 벼룩 살란 활성

시험 개시 후의 주일 수	벼룩 알 부화 억제율(%)
시험 개시 후의 주일 수	초기 거환:50mg/kg	25mg/kg	대조군
4	100	100	0

이들 결과를 종합하면, 직접 혈액을 통해 효과적인 살란 효과를 달성하기에 불충분한 혈중 메토프렌 함량은 살란 효과를 나타내는 전신 투여에 의해 나타난 혈중 함량과 동일함이 입증된다. 이로써, 살란 효과를 달성하기 위해 최소 살란 함량을 초과하는 혈중 메토프렌 농도를 유지할 필요가 없으며, 이 효과가 살란 함량 미만의 혈중 함량이 되는 투여량을 전신 투여함으로써 달성할 수 있음이 증명된다.

실시예 4

이 시험은 본 발명의 범위를 벗어나 살란제에 대해 수행한 비교시험이다. 살란제는 루펜우론(플루페나커)이고, 이 실시예에서 수행한 시험에서는 살란제의 살란 활성과 포유동물의 혈중 농도 사이의 관계를 연구한다. 이것은, 시험관내 인공 먹이 공급 시스템 내에서, 벼룩이 살란제를 함유하는 혈액을 직접 섭취하게 함으로써 수행한다. 이 시험의 결과는 실시예 5의 결과와 함께 연결되어 선행기술이 주장하는 살란 메카니즘을 반증한다.

실시예 3에 기재된 성충의 고양이 벼룩용 인공 먹이 공급 시스템과 우리를 이용한다. 소 혈액을 먹이 공급 시스템에 이용하며, 이것은 응혈을 방지하기 위해 혈액 ℓ당 20% 구연산나트륨 용액 35㎖를 첨가하여 제조한다. 디메틸 설폭사이드(DMSO) 4.951g에 공업용 루펜우론 50.1mg을 첨가하여 1.0% 용액을 수득함으로써 루펜우론 저장 용액을 제조한다. 이어서, 1.0% 용액 1.0㎖를 DMSO 9.0㎖ 속에 희석하여 1,000ppm 용액을 제조하고, 1,000ppm 용액 1.0㎖를 DMSO 9.0㎖ 속에 희석하여 100ppm 용액을 제조한다. 디메틸 설폭사이드 자체를 대조군으로서 사용한다. 혈액을 처리하기 위해, 각종 용액(0.05㎖)을 구연산 처리한 소 혈액(100.0㎖)에 첨가하여 루펜우론 5.0ppm, 0.5ppm, 0.05ppm 및 0.00ppm을 함유하는 소 혈액 용액을 제조한다. 각각의 용액을 완전히 혼합하고, 각각의 농도에서 10㎖를 인공 먹이 공급 시스템 내의 5개의 공급물 각각에 넣어 반복물로서 이용한다. 매일 원래와 동일한 신선한 혈액 용액을 공급물에 넣는다.

3일, 5일 및 7일 후에 각각의 반복물로부터 벼룩 알을 수집한다. 해부용 현미경하에 각각의 반복물로부터 건강해 보이는 벼룩 100마리의 수를 세고, 반복물당 2개의 서브샘플(subsample)로 분할한 다음, 60mm×15mm 규격의 플라스틱 페트리 디쉬에 넣는다. 이 샘플을 온도 78℉와 상대습도 85%에서 3일 동안 배양한 후, 해부용 현미경을 통해 육안으로 관찰하여 부화된 유충의 수를 센다. 각각의 농도에서 모든 반복물의 데이터를 결합시켜 평균 알 부화율(%)을 산출하고, 알 부화 억제율(%)을 대조군을 기준으로 하여 계산한다.

결과를 아래의 표 V에 나타내었다.

루펜우론의 시험관내 벼룩 살란 활성

시험 개시 후의 일 수	벼룩 알 부화 억제율(%)
시험 개시 후의 일 수	혈중 루펜우론 농도:5.0ppm	0.5ppm	0.05ppm
3	100	80.6^*	^**
5	99.8	56.5	10.8
7	100	63.2	6.9
^: 대조군과 처리 그룹 둘다에서 생산한 알 중 적은 수^*: 알을 생산하지 않음

루펜우론을 소 혈액 속에 희석시켜 성충의 고양이 벼룩에게 직접 공급하는 경우(시험관내), 루펜우론의 살란 활성에 대한 99% 유효 농도(EC99)의 범위는 0.5 내지 5.0ppm이다. 이 결과를 이후의 실시예에서 수득된 결과와 비교한다.

실시예 5

실시예 5는 숙주 개에 대한 경구 전신 투여시 루펜우론의 효과를 연구하기 위해 추가로 수행하는 시험이다.

각각 체중이 5.5 내지 17.2kg이고 나이가 5 내지 42개월의 범위이며, 털 외피가 미세 내지 조야하고 길이가 1.0 내지 5.0cm의 범위인 6마리의 랜덤한 종의 임상학적으로 건강한 순종 개(3마리는 수컷이고 3마리는 암컷이다)를 이용한다. 개들을 각각 3마리씩 2개의 처리 그룹으로 나눈다. 개들을 모두 개 먹이와 물로 짜여진 규칙적인 먹이 스케쥴 상에서 유지하고, 2개 그룹 중 1개 그룹의 각각의 개에게 루펜우론을 함유하는 젤라틴 캅셀을 10mg/(개의 체중kg)의 투여량이 되도록 적당량 투여한다. 이 투여량은 공급업자의 기술 문헌에 개의 C. 펠리스에 대한 최소 유효 투여량으로서 밝혀져 있으며, 단일 투여량을 투여한 후 14일 이상 동안 혈중 농도 0.05ppm을 잔류시키는 투여량이다. 0일 후와 추가로 28일 후에 투여한다.

-8일(루펜우론을 투여하기 8일 전), -4일, 3일, 10일, 17일, 24일, 31일, 38일, 45일, 52일 및 59일 후에, 먹이를 공급하지 않은 성충의 C. 펠리스 벼룩 약 100마리를 표준방법으로 각각의 개에게 사용한다. 벼룩 알을 수집하고, -4일, 0일, 1일, 2일, 4일, 7일, 14일, 21일, 28일, 35일, 42일, 49일 및 56일 후에 실시예 2의 방법으로 유충 발생(알 부화)을 측정한다.

0일 후와 28일 후에 10mg/kg의 단일 투여량을 사용하는, 숙주 개에 대한 경구 투여시 루펜우론의 전신성 벼룩 살란 활성

초기 투여를 기준으로 한 일 수	벼룩 알 부화 억제율(%)
-4	-
0	-
1	39.9
2	70.6
4	54.5
7	54.1
14	52.1
21	10.7
28	0
35	48.6
42	0
49	72.7
56	20.5

이 결과를 위의 표 V의 결과(실시예 4)와 비교하면, 동일한 혈중 농도에서 숙주 개에 대한 경구 전신 투여시의 벼룩 알의 부화 억제율(%)이 벼룩 알에 대한 직접적인 시험관내 먹이 공급시의 부화 억제율보다 훨씬 높다. 이것은 그 자체로 놀라운 결과이다. 추가로, 기술 문헌에 의하면, 루펜우론의 혈중 농도는 메토프렌의 혈중 농도와 같이 전신 투여 후 48시간 이내에 검출가능한 양 미만으로 감소하지는 않기 때문에, 실시예 1과 2에서 나타낸 바와 같은 메토프렌의 지속적인 효과는 훨씬 더 놀라운 것이다.

실시예 6

(S)-메토프렌을 다시 보면, 실시예 6은 실시예 4와 비교하기 위해 소 혈액을 사용한 시험관내 벼룩에 대한 살란 효과를 나타낸다. 소 혈액을 사용하는 방법은 앞의 실시예에서 나타낸 방법과 동일하다. 결과를 아래의 표 VII에 나타내었다.

(S)-메토프렌의 시험관내 벼룩 살란 활성(소 혈액을 사용함)

시험 개시 후의일 수	벼룩 알 부화 억제율(%)
시험 개시 후의일 수	혈중 (S)-메토프렌농도(ppm):0.5	0.25	0.1	0.075	0.05
3	99.1%	-	-	-	47.3
5	-	100.0	97.4	-	-
6	-	99.0	95.7	-	-
7	100.0	-	-	-	-
8	-	-	-	a: 66.0b: 78.0	-
10	100.0	-	-	-	65.4
13	100.0	-	-	-	-
평균	99.8	99.5	96.6	72.0	56.4

실시예 7

실시예 7은 (S)-메토프렌이 생체내 투여된 래트의 혈액과 지방 조직 사이의 (S)-메토프렌의 분포를 나타낸다.

스프레이그-도올리(Sprague-Dawley) CD^RVAF/PLUS^R수컷 래트를 미국 미시건주 포티지 소재의 찰스 리버 브리딩 라보라토리즈 인코포레이티드(Charles River Breeding Laboratories, Inc.)로부터 구입한다. 투여량 투여시 래트의 체중은 평균 200g이다. 경정맥(jugular vein)에 캐뉼라를 삽입한 래트를 제외하고는 받은 지 1 내지 3일 후에 투여량을 투여한 래트를, 이용하기 전에 5일 동안 격리시킨다. 래트를¹⁴C-(S)-메토프렌을 사용하여 투여하기 위해 3개 그룹으로 나눈다.

그룹 A는 경정맥을 통한 정맥내 주사를 통해 살란제 10mg/kg의 단일 투여량을 공급받는다. 3마리의 래트 각각을 투여한 지 0.5시간, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간 및 7시간 후에 죽인다.

그룹 B는 위관 영양 투여에 의한 경구 투여를 통해 살란제 10mg/kg의 단일 투여량을 공급받는다. 3마리의 래트 각각을 투여한 지 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간 및 8시간 후에 죽인다.

그룹 C는 위관 영양 투여에 의한 경구 투여를 통해 살란제 100mg/kg의 단일 투여량을 공급받는다. 3마리의 래트 각각을 투여한 지 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간 및 8시간 후에 죽인다.

투여 후, 래트를 각각 우리 속에서 살게 한다. 매일 실온은 69 내지 75℃로 유지하고, 상대습도는 40 내지 70%이다. 모든 래트는 먹이와 신선한 수돗물에 자유롭게 접근한다.

혈중 (S)-메토프렌을 분석하기 위해, 혈액 약 7㎖를 각각의 래트로부터 헤파린 60㎕와 파라옥손 70㎕ 속으로 추출한다[(S)-메토프렌의 분해를 방지하기 위함]. 각각의 혈액 샘플을 혼합하고 초음파 처리기로 1분 동안 용혈시킨 후, 헥산과 디에틸 에테르의 1:1 혼합물(용적비) 20㎖로 추출한다. 추출물을 3분 동안 초음파처리하고, 추가로 3분 동안 볼텍싱 혼합한 후, 원심분리한다. 이 방법을 3회 반복한다. 헥산/에테르 추출물을 합하고, 방사능 분석한 후, 회전 증류기로 증발시키고 질소 스트림하에 응축시킨다. 방사능 분석은 액체 섬광 카운팅(liquid scintillation counting)에 의해 수행하며, 혈액 100㎕를 과산화수소 20㎕와 혼합하여 용매 추출 전에 샘플을 탈색시킨다. 형광 지시제와 함께 두께 0.25mm의 예비피복시킨 실리카겔 G 크로마토플레이트를 사용하여 응축시킨 혈액 샘플에 대하여 박층 크로마토그래피(TLC)를 수행한다. 유기 추출물을 단독으로 스포팅(spotting)하거나 참고 표준물질인 메토프렌 및 메토프렌 산과 동시에 크로마토그래프 분석한 후, 헥산/디에틸 에테르/아세트산 50:50:1(용적비)로 전개시킨다. 방사성 밴드와 스포트를 묘사하고 정량한다.

지방 속의 살란제를 분석하기 위해, 내장 지방을 죽은 래트로부터 수집한다. 각각의 래트로부터 수집한 지방 샘플을 셀룰로즈 분말과 1:1의 비율로 완전히 혼합하고 몇 방울의 물을 사용하여 균질화시킨다. 각각의 지방 샘플 일부(0.5 내지 1g)을 헥산/디에틸 에테르 혼합물(1:1) 10㎖로 추출하고, 이것을 4분 동안 초음파처리기 상에서 강하게 처리한 후, 2분 동안 볼텍싱 혼합하고 원심분리한다. 이 단계를 2회 반복한다. 이어서 추출물을 합하고, 방사능 분석한 후, 회전 증류기로 증발시키고 TLC 분석을 위해 질소하에 응축시킨다. 소량의 메탄올을 가하여 지방을 침전시킴으로써 TLC 분리능을 향상시킨다. 혈액 샘플의 경우와 동일한 방법으로 방사능 분석과 TLC 분석을 수행한다.

분해되지 않은 (S)-메토프렌(TLC로 분리함)에 대한 결과를 표 VIII과 IX에 나타내었다. 이들 표들의 비교에 의하면, 혈액과 지방 사이의 살란제의 분포에 있어서 더 많은 양이 지방 조직에 존재하여 현저한 불균형이 나타난다.

생체내 투여시 래트의 혈중 (S)-메토프렌 농도

시간(hr)	혈중 (S)-메토프렌 농도(ppm)^*
시간(hr)	그룹 A10mg/kg, 정맥내 투여	그룹 B10mg/kg, 경구 투여	그룹 C100mg/kg, 경구 투여
0.5	0.703±0.307	-	-
1	0.345±0.107	0.112±0.038	0.165±0.070
2	0.113±0.028	0.264±0.122	3.487±1.324
3	0.079±0.002	0.202±0.065	1.302±0.402
4	0.066±0.028	0.130±0.066	1.504±0.533
5	0.048±0.001	0.052±0.026	0.930±0.449
6	0.046±0.027	0.045±0.014	0.527±0.341
7	0.019±0.008	0.020±0.005	0.608±0.292
8	-	0.021±0.009	0.483±0.221
^*: 이 표에 각각 기재한 수는 3마리 동물의 평균값이다.

생체내 투여시 래트의 지방 내의 (S)-메토프렌 농도

시간(hr)	지방 속의 (S)-메토프렌 농도(ppm)^*
시간(hr)	그룹 A10mg/kg, 정맥내 투여	그룹 B10mg/kg, 경구 투여	그룹 C100mg/kg, 경구 투여
0.5	4.193±1.566	-
1	6.936±3.259	0.272±0.103	1.060±0.270
2	5.929±1.197	1.138±0.388	14.726±3.371
3	5.233±0.457	1.715±0.680	22.868±3.322
4	8.179±3.532	2.327±1.090	45.316±16.910
5	7.596±3.990	2.980±0.657	38.420±2.765
6	6.734±2.209	3.369±0.814	41.898±11.568
7	8.077±1.082	2.921±1.345	39.393±17.952
8	-	2.408±0.702	47.162±20.116
^*: 이 표에 각각 기재한 수는 3마리 동물의 평균값이며, 단 그룹 C의 1시간후의 경우, 2마리의 동물의 평균값이다.

실시예 8

실시예 8은 경구 투여시 개의 털과 혈액 사이의 (S)-메토프렌의 분포를 나타낸다.

다양한 성별의 중간 털 외피를 가진 랜덤한 종의 어른 개 12마리를 털 외피, 건강 및 각각의 체질을 기준으로 하여 선택한다. 12마리의 개들을 각각 6마리씩 2개 그룹으로 나눈다. 개의 체중은 22.5 내지 35.0kg의 범위이고, 다양한 체중과 각각의 성별은 각각의 그룹에 나타나 있다. 개들에게 적당량의 사이언스 다이어트 메인티넌스 개 사료를 매일 공급하며, 물도 공급되어 있다. 2개 그룹의 개들을 격리시켜 살게 한다. 제1 그룹의 개들은 어떠한 처리도 하지 않는 반면, 제2 그룹의 개들은 연구 초기(0일 후)에만 공업용 (S)-메토프렌 50mg/kg을 각각 1회 공급한다.

혈액 샘플을 10cc 용량의 1회용 주사기로 뽑아 내고, 농도 1×10^-2M의 파라옥손 용액 50㎖로 처리한, 라벨링된 5㎖의 헤파린화한 EDTA 배큐테이너(vacutainer)에 혈액 샘플을 옮긴다. 혈액 샘플을 분석할 준비가 될 때까지 냉동시킨다. 혈액 샘플을 채취한 날과 동일한 날에 개로부터 털 샘플을 잘라낸 후, 알루미늄 호일로 밀봉한 라벨링한 냉동기 용기에 넣고 냉동시킨다.

개털을 분석하기 위해, 중량을 알고 있는 각각의 개털 샘플(4 내지 8g)을 헥산으로 추출하고, 추출물을 증발시킨 후, 잔류물을 헥산 2㎖ 속에서 재구성한다. 추출물 1㎖를 3cc/500mg의 실리카 카트리지를 사용하여 고체상 추출에 의해 세정한다. 이어서, 5% 에틸 아세테이트/헥산으로 카트리지로부터 (S)-메토프렌을 용출시킨다. 잔류물을 아세토니트릴 1㎖ 속에서 재구성하고, 파장 264nm에서 다이오드 어레이 검출법(diode array detection)을 이용하는 C₁₈컬럼(250×4.6mm, 직경 10㎛) 상에서, 메탄올:물 90:10의 유동상을 유속 1.5㎖/분으로 하고 주입 용적을 100㎖로 하여 역상 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 분석을 수행한다. (S)-메토프렌 피크는 약 5.1분에서 용출된다. 일련의 표준 물질을 동시에 흘려보내어 생성시킨 보정 곡선을 기준으로 하여 (S)-메토프렌의 농도를 계산한다. 정량 한계는 약 20ppb이다.

혈액 샘플을 분석하기 위해 메틸 3급-부틸 에테르로 3회 추출하고, 증발시킨 후, 메탄올 1㎖로 재구성하고, 털 분석에서와 같이 HPLC로 분석한다.

털 시험의 결과를 표 X(A)와 X(B)에 나타내었으며, 표 X(B)는 대조군 데이터를 나타낸다. 혈액 시험의 결과를 표 XI(A)와 XI(B)에 나타내었으며, 표 XI(B)는 대조군 데이터를 나타낸다. 각각의 경우, 결과는 ppb, 즉 개털 또는 총 혈액 10억 중량부당 1중량부로 기재되어 있다. "ND"라는 문자는 (S)-메토프렌의 함량이 검출 한계 미만임을 나타낸다.

50mg/kg의 경구 투여 후의 개털에서의 (S)-메토프렌 농도

일 수	(S)-메토프렌 농도(ppb)
일 수	#529	#528	#98	#532	#535	#60
0	ND^*	ND	ND	ND	ND	ND
1	86.6	76.6	47.4	ND	49.3	6000
3	82.2	199	125	62.4	424	33,900
5	58.3	114	161	98.6	276	12,500
7	34.5	150	126	117	294	2,400
10	60.5	126	167	255	681	12,300
14	85.5	103	200	350	800	5,300
17	39.7	137	345	331	1,092	3,600
21	93.5	31.2	231	342	675	12,100
28	106	47.2	287	230	461	5,200
^*ND: 최저 검출 한계 미만

처리하지 않은 개의 개털에서의 (S)-메토프렌 농도

일 수	(S)-메토프렌 농도(ppb)
일 수	#380	#527	#531	#534	#536	#538
0	ND	ND	ND	ND	ND	ND
1	ND	ND	ND	ND	ND	ND
3	ND	ND	ND	ND	ND	ND
5	ND	ND	ND	ND	ND	ND
7	ND	ND	ND	ND	ND	ND
10	ND	ND	ND	ND	ND	ND
14	ND	ND	ND	ND	ND	ND
17	ND	ND	ND	ND	ND	ND
21	ND	ND	ND	ND	ND	ND
28	ND	ND	ND	ND	ND	ND

50mg/kg의 경구 투여 후의 개의 혈중 (S)-메토프렌 농도

일 수	(S)-메토프렌 농도(ppb)
일 수	#529	#528	#98	#534	#535	#60
0	ND	ND	ND	ND	ND	ND
1	172	165	97.2	146	239	117
3	52.1	63.6	ND	94.2	93.3	36.0
5	ND	ND	ND	66.8	47.7	ND
7	55.7	ND	ND	ND	ND	ND
10	ND	ND	ND	ND	ND	ND
14	ND	ND	ND	ND	ND	ND
17	ND	ND	ND	ND	ND	ND
21	ND	ND	ND	ND	ND	ND
28	ND	ND	ND	ND	ND	ND

처리하지 않은 개의 혈중 (S)-메토프렌 농도

이들 표의 데이터에 의하면, 명확하게도, 개털 속에 더 높은 비율의 살란제가 존재하며 혈액 속에서 살란제가 더 이상 검출되지 않게 된 이후에도 살란제가 개털 속에 여전히 장기간 존재한다.

앞의 기재 사항은 주로 설명하기 위해 제공된 것이다. 본원에 기재된 방법의 비율, 투여량, 투여방법, 제형 및 기타 파라미터는 본 발명의 정신과 범위를 벗어나지 않는 상태에서 추가로 다양하게 변형하거나 대체할 수 있다.

본 발명은 체외 기생충과 체내 기생충 억제용의 전신성 활성 물질(systemic active substances) 분야에 속한다.

Claims

2,4-디엔산, 이의 염 또는 에스테르를 육상 포유동물의 혈액을 직접 섭취하는 성충 벼룩으로부터 생겨난 성장 중인 벼룩에 대한 치사율이 약 50%인 육상 포유동물 혈중 농도를 유지하는 데에는 불충분하지만 육상 포유동물의 피부 또는 털과 접촉하고 있는 성장 중인 벼룩에 대한 치사율이 약 80% 이상인 양으로 육상 포유동물에게 전신 투여함을 포함하여, 육상 포유동물의 외피 속의 벼룩을 억제하는 방법.
제1항에 있어서, 살충제 투여량이 약 0.3 내지 약 15.0mg/육상 포유동물의 체중kg/1일인 방법.
제1항에 있어서, 살충제 투여량이 약 1.0 내지 약 5.0mg/육상 포유동물의 체중kg/1일인 방법.
제1항에 있어서, 살충제 투여량이 육상 포유동물 혈중 농도를 70중량ppb로 유지하는 데 필요한 투여량 미만인 방법.
제1항에 있어서, 살충체가 경구 투여되는 방법.
제1항에 있어서, 육상 포유동물이 개 또는 고양이인 방법.
제1항에 있어서, 육상 포유동물이 개인 방법.
제1항에 있어서, 살충제가 화학식

의 화합물[여기서, R¹은 C₁-C₆알킬이고, R²는 H, 메틸 또는 에틸이고, R³은 H 또는 메틸이고, R⁴는 메틸 또는 에틸이고, R⁵는 H 또는 메틸이고, R⁶은 H 또는 메틸이고, R⁷은 메틸 또는 에틸이고, R⁸은 H, C₁-C₆알킬, C₃-C₆알케닐, C₃-C₆알키닐, C₃-C₈사이클로알킬, 페닐, 나프틸, C₇-C₁₂아르알킬 및, 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 스트론튬, 구리, 망간 및 아연으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 금속의 양이온으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 멤버이고, X는 Br, Cl, F, I 및 OR⁹(여기서, R⁹는 H, C₁-C₆알킬 및 C₁-C₆알카노일로 이루어진 그룹으로부터 선택된 멤버이다)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 멤버이고, m은 0, 1, 2 또는 3이고, n은 0, 1, 2 또는 3이다]인 방법.
제8항에 있어서, R¹이 메틸 또는 에틸이고, R²가 메틸 또는 에틸이고, R⁷이 메틸이고, R⁸이 C₁-C₆알킬과 C₃-C₆알키닐로 이루어진 그룹으로부터 선택된 멤버이고, X가 Cl 또는 OR⁹이고, m이 0 또는 1이고, n이 1인 방법.
제8항에 있어서, R¹이 메틸 또는 에틸이고, R²가 메틸이고, R³이 H이고, R⁴가 메틸이고, R⁵가 H이고, R⁶이 H이고, R⁷이 메틸이고, R⁸이 C₁-C₄알킬과 C₃-C₄알키닐로 이루어진 그룹으로부터 선택된 멤버이고, X가 Cl 또는 OR⁹이고, m이 1이고, n이 1인 방법.
제8항에 있어서, R¹이 메틸 또는 에틸이고, R²가 메틸이고, R³이 H이고, R⁴가 메틸이고, R⁵가 H이고, R⁶이 H이고, R⁷이 메틸이고, R⁸이 C₁-C₄알킬과 C₃-C₄알키닐로 이루어진 그룹으로부터 선택된 멤버이고, X가 Cl 또는 OR⁹(여기서, R⁹는 H, 메틸, 에틸, 이소프로필, 3급-부틸 및 아세틸로 이루어진 그룹으로부터 선택된 멤버이다)이고, m이 1이고, n이 1인 방법.
제8항에 있어서, R¹이 메틸 또는 에틸이고, R²가 메틸이고, R³이 H이고, R⁴가 메틸이고, R⁵가 H이고, R⁶이 H이고, R⁷이 메틸이고, R⁸이 C₁-C₄알킬과 C₃-C₄알키닐로 이루어진 그룹으로부터 선택된 멤버이고, X가 OR⁹(여기서, R⁹는 메틸, 에틸, 이소프로필 및 3급-부틸로 이루어진 그룹으로부터 선택된 멤버이다)이고, m이 1이고, n이 1인 방법.
제8항에 있어서, 살충제가 E,E와 Z,E로 이루어진 그룹으로부터 선택된 배열을 갖는 방법.
제8항에 있어서, 살충제가 E,E 배열을 갖는 방법.
제8항에 있어서, 살충제가 이소프로필 11-메톡시-3,7,11-트리메틸도데카-2,4-디에노에이트인 방법.
제8항에 있어서, 살충제가 이소프로필 (E,E)-(7S)-11-메톡시-3,7,11-트리메틸도데카-2,4-디에노에이트인 방법.