KR102695401B1 - 주름 개선용 신규한 융합 펩타이드 및 이를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

주름 개선용 신규한 융합 펩타이드 및 이를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 주름 개선용 융합 펩타이드 및 이를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 상기 주름 개선용 융합 펩타이드는 우수한 콜라겐 합성 효과로 현저한 피부 주름 개선 효과를 나타낼 수 있다.

Description

주름 개선용 신규한 융합 펩타이드 및 이를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물 {Novel fusion peptide for wrinkle improvement and cosmetic composition for wrinkle improvement containing the same}
본 발명은 주름 개선용 융합 펩타이드 및 이를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 펩타이드의 콜라겐 합성 효과를 증진할 수 있는 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
피부는 표피, 진피, 피하조직으로 구성되어 있는 인체를 이루는 가장 큰 기관으로 보호기능, 장벽기능, 온도조절기능, 배설기능, 호흡기능 등 다양한 역할을 담당하고 있는 중요한 기관이다. 그러나 다양한 외부환경에 의하여 표피, 진피 및 피하조직의 두께가 얇아지고, 피부장벽의 기능을 맡고 있는 지질층(lipid barrier)의 조성과 함량이 변화되면서 그 기능은 급격하게 저하되어 노화가 발생하게 된다. 분자생물학적으로 피부노화는 피부 진피에서 매트릭스를 형성하는 콜라겐의 감소가 주원인으로 알려져 있다. 콜라겐은 피부 진피의 70~80%를 차지하는 물질로서, 피부의 탄력성 유지에 관여하는 대표적인 물질이다. 대한화장품학회지 제38권 제4호 통권87호의 연구결과에 따르면, 콜라겐 펩타이드가 피부회복, 피부재생 효과 있음이 알려져 있다. 콜라겐은 나이가 들면서 그 생성이 저하되거나, 자외선과 같은 외부환경에 의해서 분해가 촉진되어 피부 주름이 증가되며, 피부 노화가 촉진된다. 이러한 피부 노화 및 주름 개선 등의 문제를 해결하기 위하여 콜라겐의 변화에 대한 다양한 연구가 진행되고 있다.
최근들어 피부 노화 방지 및 피부 주름 예방 기능성 성분으로 펩타이드가 주목받고 있다. 펩타이드는 화장품, 식료품, 의약품 등 여러 연구영역에서 주목받는 소재로서, 20개의 필수 아미노산 중 약 2~50개가 아미드 결합(amide bond)을 통해 연결되어 있는 중합체이다. 펩타이드는 단백질보다 그 크기와 구조는 단순하나 생체 내 단백질과의 상호작용이 매우 커 생체 내 대사과정 등에서 중요한 역할을 한다고 알려져 있다. 펩타이드는 그 자체가 생체내 존재하는 물질일 뿐만 아니라 생체 내에 유입되어도 일정 기간 활성을 띈 다음 아미노산으로 분해되기 때문에 기존의 다른 소재보다 안전성이 매우 뛰어나며 단백질의 구성 성분으로서 피부 재생 활성에도 도움을 주는 소재이다. 상기와 같은 장점들로 펩타이드를 항노화 소재로 이용한 연구가 활발하게 진행중이며, 보다 더욱 향상된 항노화 효과를 나타내는 펩타이드에 대한 니즈도 계속해서 증가하고 있다.
펩타이드를 세포내로 효과적으로 전달하기 위해 세포 투과성 펩타이드 및 리포좀 등과 같은 물질 전달 방법이 연구되어 왔다. 이중 세포 투과성 펩타이드는 10~30개 정도의 짧은 세포막 투과성 펩타이드로 대부분 단백질-투과 도메인이나 막-이동 시퀀스로부터 유도되었다. 이러한 세포막 투과성 펩타이드를 다른 펩타이드 또는 단백질과 연결시켰을 때 융합 단백질이 효율적으로 세포 내로 수송하는 것이 밝혀졌다. 하지만, 세포막 투과성 펩타이드는 세포내로 전달 이후에도 융합 단백질내에 잔존하여 세포내 독성을 일으키거나, 융합 펩타이드를 세포 외로 재 방출할 위험이 있기 때문에 세포 투과성 펩타이드를 이용한 물질 전달 방법에 대한 개선이 요구되고 있다.
김인수 et al., Fractional Photothermolysis 치료 후 피부회복 촉진에 미치는 경구용 저분자 콜라겐 펩타이드의 효과, 대한화장품학회지 제38권 제4호 통권87호(2012. 12), 321-326.
본 개시의 목적은 우수한 콜라겐 합성 효과를 나타내어 피부 주름 개선효과가 뛰어난 주름 개선용 융합 펩타이드 및 이를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 개시의 또 다른 목적은 종래 세포 투과성 리간드를 포함하는 융합 펩타이드에서 세포 투과 이후에도 세포 투과성 리간드가 잔존함으로 발생하는 펩타이드 활성 저하, 세포 내 독성 및 펩타이드 재방출 문제를 해결하는 것을 목적으로 한다.
본 개시는 서열번호 1(GHK) 및 서열번호 2(KTTKS)로 이루어지는 군에서 선택되는 콜라겐 합성용 펩타이드; 상기 콜라겐 합성용 펩타이드의 일 말단에 결합되는 MMP 타겟 절단서열; 및 상기 절단서열의 일 말단에 결합된 세포 투과성 리간드;를 포함하는 주름 개선용 융합 펩타이드를 제공한다.
상기 절단서열은 상기 콜라겐 합성용 펩타이드의 N-말단에 결합된 것일 수 있다.
상기 절단서열은 MMP-1 타겟 절단서열일 수 있다.
상기 세포 투과성 리간드는 TAT 유래 펩타이드, Antp, Mph-1, HSV1, VP22, HP4, Transportan, MAP, TP10, CTP, K5-FGF, HAP-1, CADY, 폴리아르기닌, 폴리라이신, C12-C24 지방산 및 이들의 C12-C20 아실화 생성물로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있다.
일 구현예에 따르면, 상기 주름 개선용 융합 펩타이드는 하기 화학식 1로 표시되는 것일 수 있다.
[화학식 1]
Pal-A1-KTTKS
(A1은 서열번호 3 내지 7로 이루어진 군에서 선택되는 것이다.)
일 구현예에 따르면, 상기 주름 개선용 융합 펩타이드는 하기 화학식 2로 표시되는 것일 수 있다.
[화학식 2]
Pal-A1-GHK
(A1은 서열번호 3 내지 7로 이루어진 군에서 선택되는 것이다.)
본 개시는 본 개시의 일 구현예에 따른 주름 개선용 융합 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 주름 개선용 화장료 조성물은 화장수, 스킨, 로션, 영양로션, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 팩 또는 마이크로 니들 패취의 제형일 수 있다.
본 개시에 따른 주름 개선용 융합 펩타이드는 향상된 콜라겐 합성 효과를 가지며, 이를 포함한 주름 개선용 화장물 조성물은 피부 노화를 경감시키고 우수한 피부 주름 개선 효과를 나타낼 수 있다.
이하에서 본 발명에 대하여 구체적으로 설명한다. 본 명세서에서 사용되는 용어는 따로 정의하지 않는 경우 해당 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 일반적으로 이해하는 내용으로 해석되어야 할 것이다. 본 명세서의 도면 및 실시예는 통상의 기술자가 본 발명을 쉽게 이해하고 실시하기 위한 것으로 도면 및 실시예에서 발명의 요지를 흐릴 수 있는 내용은 생략될 수 있으며, 본 발명이 도면 및 실시예로 한정되는 것은 아니다.
본 명세서에서 이용되는 단수 형태는 문맥에서 특별한 지시가 없는 한 복수 형태도 포함하는 것으로 의도할 수 있다.
또한, 본 발명서에서 사용되는 수치 범위는 하한치와 상한치와 그 범위 내에서의 모든 값, 정의되는 범위의 형태와 폭에서 논리적으로 유도되는 증분, 이중 한정된 모든 값 및 서로 다른 형태로 한정된 수치 범위의 상한 및 하한의 모든 가능한 조합을 포함한다. 본 발명의 명세서에서 특별한 정의가 없는 한 실험 오차 또는 값의 반올림으로 인해 발생할 가능성이 있는 수치범위 외의 값 역시 정의된 수치범위에 포함된다.
본 명세서에서 포함하다, 가지다, 구비하다 등의 용어는 명세서 상에 기재된 특징, 또는 구성요소가 존재함을 의미하는 것이고, 특별히 한정하지 않는 한, 하나 이상의 다른 특징들 또는 구성요소가 부가될 가능성을 미리 배제하는 것은 아니다.
이하, 본 발명에 대하여 구체적으로 설명한다. 이때, 사용되는 기술 용어 및 과학 용어에 있어서 다른 정의가 없다면, 이 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 통상적으로 이해하고 있는 의미를 가지며, 하기의 설명에서 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있는 공지 기능 및 구성에 대한 설명은 생략한다.
본 발명에 기재된 아미노산 서열은 IUPAC-IUB 명명법에 따라 약어로 기재하였다. 구체적으로 알라닌은 A(Ala), 아르기닌은 R(Arg), 아스파라긴은 N(Asn), 아스파르트산은 D(Asp), 시스테인은 C(Cys), 클루탐산은 E(Glu), 글루타민은 Q(Gln), 글리신은 G(Gly), 히스티딘은 H(His), 이소루신은 I(Ile), 루신은 L(Leu), 라이신은 K(Lys), 메티오닌은 M(Met), 페닐알라닌은 F(Phe), 프롤린은 P(Pro), 세린은 S(Ser), 트레오닌은 T(Thr), 트립토판은 W(Trp), 티로신은 Y(Tyr), 발린은 V(Val)으로 기재하였다.
본 발명에 따른 주름 개선용 융합 펩타이드는 당업계에 알려진 통상의 펩타이드 합성 방법이면 제한되지 않고 이용하여 제조될 수 있다. 예를 들어 액상 펩타이드 합성법(solution phase peptide synthesis), 고상 펩타이드 합성법(solid-phase peptide synthesis), 단편 응축법 및 F-moc 또는 T-boc 화학법인 화학적 합성법; 및 주름 개선용 융합 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 유전자 조작 대장균에서 발현시켜 제조하는 생물학적 합성법;으로 합성될 수 있으며, 구체적으로 고상 펩타이드 합성법으로 합성될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 고상 펩타이드 합성 방법은 a) 레진에 보호기로 보호화된 아미노산을 로딩하는 단계; b) 아미노산의 보호기를 제거하는 단계; c) 아미노산과 커플링 반응을 하는 단계; d) 반응완료를 확인하는 단계; e) 레진 및 보호기를 제거하는 단계; 및 f) 펩타이드를 고형화 하는 단계;에 따라 수행된다.
상기 고상 펩타이드 합성 방법은 목적하는 아미노산의 개수에 따라 b)단계, c)단계 및 d)단계를 반복할 수 있으며, a) 단계의 레진은 왕 레진(wang resin), 클로로트리틸 레진(chlorotrityl resin), 폴리스티렌 레진(polystyrene resine) 등을 이용할 수 있고, 사용하기 전에 레진에 적절한 용매를 첨가하여 레진을 팽윤(swelling) 시켜 사용할 수 있다. 상기 팽윤된 레진에 보호기로 보호화된 아미노산과 DIC(Diisopropylcarbodiimide), DIPEA(N,N-Diisopropylethylamine), DMAP(4-dimethylaminopyridine) 또는 이들의 혼합물을 이용하여 반응시켜, 레진에 아미노산을 결합시킬 수 있다.
상기 b)단계는 아미노산의 보호기를 제거하는 단계로, 당업계에 일반적으로 알려진 방법이면 특별히 제한하지 않으나, a)단계 종료 후 용매를 감압하에서 제거하고 세척한 뒤, Piperidine in DMF 용액을 이용하여 보호기를 제거할 수 있다. 상기 아미노산의 보호기는 Fmoc(9-Fluorenylmethoxycarbonyl)을 들 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 c)단계에서 사용되는 커플링제는 당업계에 일반적으로 사용되는 것이면 제한하지 않으며, 예를들어, HOBt-DCC(N-Hydroxybenzotriazole-Dicyclohexylcarbodiimide) 또는 HOBt-DIC(N-Hydroxybenzotriazole-Diisopropylcarbodiimide)를 이용할 수 있으며, 이외에도 Dicyclohexylcarbodiimide(DCC), Diisopropylcarbodiimide(DIC), Benzotriazol-1-yl-oxy-tripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate(PyBOP), Benzotriazole-1-yl-oxy-tris-(dimethylamino)-phosphonium hexafluorophosphate(BOP), 1-[Bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]pyridinium 3-oxide hexafluorophosphate(HATU), N-Hydroxybenzotriazole(HOBt) 및 1-Hydroxy-7-azabenzotriazole(HOAt)에서 선택되는 하나 또는 둘 이상일 수 있고, Tirfluoroacetic acid(TFA), N,N-Diisopropylethylamine 및 N-methymorpholine과 같은 유기산 또는 유기염기가 추가될 수 있다.
상기 d)단계는 반응이 완료되었는지를 확인하기 위하여 카이저 테스트를 하는 단계이며, 소량의 레진으로 Ninhydrin을 이용하여 1차 아민의 존재에 따라 푸른색이 나타나는지를 확인하는 과정이다. 푸른색으로 나타나면 미반응 부분이 남아있는 것으로 판단하여 재 커플링 반응을 진행할 수 있다.
상기 e)단계는 레진 및 보호기를 제거하는 단계로, 당업계에 일반적으로 통용되는 방법이면 제한되지 않으며, 구체적으로 Tirfluoroacetic acid(TFA), Triisopropylsilane(TIS), Thioanisole, Ethanedithiol(EDT) 및 water에서 선택되는 하나 또는 둘 이상으로 구성되는 칵테일을 첨가하여 수행될 수 있다.
상기 f)단계는 펩타이드를 고형화 하는 단계로 디에틸에테르 용매를 과량 첨가하여 침전된 고형물을 생성시킬 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 주름 개선용 융합 펩타이드 제조방법은 상기 d)단계 종료 후, 세포 투과성 리간드를 도입시키는 반응을 추가 수행할 수 있다. 상기 제조된 세포 투과성 리간드가 도입된 반응물로 e) 및 f)단계를 진행시켜, 본 발명의 주름 개선용 융합 펩타이드 유도체를 얻을 수 있다.
본 개시는 서열번호 1(GHK) 및 서열번호 2(KTTKS)로 이루어지는 군에서 선택되는 콜라겐 합성용 펩타이드; 상기 콜라겐 합성용 펩타이드의 일 말단에 결합되는 MMP 타겟 절단서열; 및 상기 절단서열의 일 말단에 결합된 세포 투과성 리간드;를 포함하는 주름 개선용 융합 펩타이드를 제공한다.
본 개시의 주름 개선용 융합 펩타이드는 콜라겐 합성용 펩타이드와 연결되어 있는 세포 투과성 리간드를 통해 섬유아세포 내로 전달될 수 있다. 펩타이드가 세포 내 도입된 이후, 절단서열과 연결되어 있는 세포 투과성 리간드는 세포 내에 있는 MMP(matrix metalloproteinase)에 의해 펩타이드로부터 절단되고, 이에 따라 콜라겐 합성용 펩타이드의 기능을 향상시킬 수 있다.
본 개시의 주름 개선용 융합 펩타이드는 세포 내 투과 이후 펩타이드의 세포 투과성 리간드가 절단됨으로 인하여, 종래 펩타이드에 세포 투과성 리간드가 잔존함으로 발생하는 펩타이드 활성 저하, 세포 내 독성 및 펩타이드 재방출 문제를 해결하였으며, 현저하게 향상된 콜라겐 합성 효과 및 주름 개선 효과를 제공할 수 있다.
또한 피부 주름 개선용 융합 펩타이드는 고상 펩타이드 합성법으로 제조될 수 있으며, 저분자량의 아미노산으로 제조시간 및 공정비용이 절감될 수 있고, 높은 수율로 합성될 수 있는 매우 경제적인 방법으로, 대량생산에 적합하여 상업적 이용에 용이하다.
일 구현예에 따르면, 상기 콜라겐 합성용 펩타이드인 GHK(서열번호 1) 및 KTTKS(서열번호 2)는 콜라겐타입Ⅰ 의 카르복실기 말단 단편으로써, 피부결합조직에 관여하여 콜라겐을 증가시킬 수 있다. 구체적으로, 상기 콜라겐 합성용 펩타이드는 콜라겐을 생합성하는 세포인 섬유아세포 내에서 콜라겐타입Ⅰ, 콜라겐타입Ⅲ 및 성장인자인 TGF-β 합성을 촉진하며, 콜라겐 유전자의 프로모터에 결합하여 이의 전사를 촉진시킬 수 있다.
피부를 구성하고 있는 진피의 70%는 콜라겐으로 이루어져 있으며, 콜라겐은 조직결합력, 세포접착의 지탱, 상처 치유시 세포분할과 분화를 유지하는 기능을 담당한다. 본 개시의 주름 개선용 융합 펩타이드는 생체 내 콜라겐의 합성을 촉진하고, 진피의 기질 성분을 증가시켜 향상된 상처 치유 탄력 증가 등의 효과를 기대할 수 있다.
상기 MMP 타겟 절단서열은 포유동물 세포(LLC-MK2, Vero, BHK-21, HEK293, HT1080, 또는 그들의 파생주)등이 내인적으로 발현하는 프로테아제의 절단서열로서 MMP-1, MMP-8 또는 MMP-13이 타겟으로 하는 콜라겐타입Ⅰ, Ⅱ 또는 Ⅲ에 존재하는 특이적 부위일 수 있다. 구체적으로 상기 절단 서열은 MMP-1이 타겟으로하는 콜라겐타입Ⅰ에 존재하는 특이적 부위일 수 있으며, 더욱 구체적으로 상기 절단서열은 RTKR(서열번호 3), RRRR(서열번호 4), RHKR(서열번호 5), RQKR(서열번호 6) 및 RKRR(서열번호 7)으로 이루어지는 군에서 선택되는 것일 수 있다.
MMP-1은 진피의 섬유아세포에서 생성되며, 노화된 세포 내에서 과발현하여 콜라겐을 분해하고 노화를 촉진시키는 역할을 한다. 본 개시의 일 구현예에서, 절단 서열은 MMP-1 타겟 절단서열일 수 있으며, 이에 따라 본 개시의 콜라겐 합성용 펩타이드가 노화된 섬유아세포 내로 진입하였을 때, 세포 내에 존재하는 MMP-1이 절단서열을 인식하여 절단함으로써 상기 콜라겐 합성용 펩타이드로부터 세포 투과성 리간드를 제거할 수 있다.
일 구현예에 따르면, 상기 절단서열은 상기 콜라겐 합성용 펩타이드의 N-말단에 결합된 것일 수 있다. 이에 따라 상기 주름 개선용 융합 펩타이드는 N- 말단에서부터 세포 투과성 리간드, 절단 서열, 콜라겐 합성용 펩타이드의 순서로 결합된 것일 수 있으며, 세포 투과성 리간드와 콜라겐 합성용 펩타이드의 연결부에 존재하는 절단서열이 프로테아제에 의해 절단됨에 따라 펩타이드에서 세포 투과성 리간드가 제거될 수 있다.
세포 투과성 리간드는 수송대상체를 세포 내 및 생체 내 각 장기로 운반할 수 있는 리간드로, 수송대상체로서 단백질, DNA, RNA 등의 거대 분자 물질에 결합 또는 혼합된 형태로 존재하여 세포 내뿐만 아니라 세포질, 세포내 소기관, 핵 안에까지 운반할 수 있다.
본 개시의 일 구현예에 따르면, 상기 세포 투과성 리간드는 인간 면역결핍 바이러스 타입 I(HIV-1)에서 유래한 TAT(trans-activating transcriptional activator) 유래 펩타이드, 초파리의 안테나페디아 호메오도메인(Antennapedia Homeodomain)인 Antp(Antennapedia 또는 penetratin) 펩타이드, 쥐의 전사인자의 Mph-1(Mutator phenotype protein 1), HSV1(Herpes simplex virus)의 VP22(viral protein 22), 청어 프로타민의 HP4(human protamine P4), 트랜스포탄(Transportan), MAP(Model amphipathic peptide), TP10(Transportan-10), CTP(Cardiac targeting peptide), K5-FGF(K5-fibroblast growth factor, AAVALLPAVLLALLP), HAP-1(Huntingtin-associated protein 1, SFHQFARATLAS), 293P-1(SNNNVRPIHIWP), CADY(cysteamidation PTD, Ac-GLWRALWRLLRSLWRLLWRA-Cya),폴리아르기닌(polyarginine, Rn(n = 6~12)), 폴리라이신(poly-lysine), C12-C24 지방산 및 이들의 C12-C20 아실화 생성물로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있으며, 구체적으로 R9 R7, TAT 유래 펩타이드 또는 Palmitic acid(Pal), 더욱 구체적으로 Pal 일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 세포 투과성 리간드는 C12-C20 지방산에 의한 아실화(acylation)를 통해 세포 투과에 최적화된 소수성 성질을 부여받아 개선된 세포 투과성을 가질 수 있다.
본 개시에 따른 주름 개선용 융합 펩타이드는 하기 화학식 1로 표시되는 것일 수 있다.
[화학식 1]
Pal-A1-KTTKS
(A1은 서열번호 3 내지 7로 이루어진 군에서 선택되는 것이다.)
본 개시에 따른 주름 개선용 융합 펩타이드는 하기 화학식 2로 표시되는 것일 수 있다.
[화학식 2]
Pal-A1-GHK
(A1은 서열번호 3 내지 7로 이루어진 군에서 선택되는 것이다.)
상기 주름 개선용 융합 펩타이드는 세포 투과성 리간드인 Pal(palmitic acid)와 콜라겐 합성용 펩타이드(KTTKS 또는 GHK)의 연결부에 MMP-1 타겟 절단서열인 서열번호 3 내지 7을 위치시켜 상기 주름 개선용 융합 펩타이드가 노화된 섬유아세포 내로 전달되었을 때, 절단서열과 연결된 Pal(palmitic acid)가 제거될 수 있다. 이에 따라, 상기 주름 개선용 융합 펩타이드는 현저하게 향상된 콜라겐 합성 효과 및 주름 개선 효과를 제공할 수 있다.
본 개시는 본 개시의 일 실시예에 따른 주름 개선용 융합 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
일 구현예에 따르면, 상기 주름 개선용 화장료 조성물은 화장수, 스킨, 로션, 영양로션, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 팩 또는 마이크로 니들 패취의 제형일 수 있고, 상세하게 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 아이크림, 아이에센스, 에센스, 클렌징크림, 클렌징로션, 클렌징폼, 클렌징워터, 마스크팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디에센스, 바디세정제, 선스크린 크림, 염모제, 샴푸, 린스, 치약, 구강청정제, 정발제, 양모제, 로션, 연고, 젤, 크림, 패취 및 분무제에서 선택되는 하나 또는 둘 이상의 제형을 가질 수 있다.
상기 주름 개선용 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸타, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 및 산화아연에서 선택되는 하나 또는 둘 이상이 더 이용될 수 있다.
상기 주름 개선용 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 더 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
상기 주름 개선용 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 더 이용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이에 포함될 수 있다.
상기 주름 개선용 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제; 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 또는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제;가 더 이용될 수 있으며, 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라가칸타 등도 추가로 이용될 수 있다.
상기 주름 개선용 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 개시의 일 실시예에 따른 주름 개선용 화장료 조성물은 목적하는 바에 따라 추가의 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 이는 예를 들어, 안정화제, 유화제, 점증제, 보습제, 액정막 강화제, pH 조절제, pH 조정제, 수용성 고분자, 피막제, 금속이온 봉쇄제, 유기 아민, 고분자 에멀션, 피부영양제, 산화방지제, 산화방지조제, 방부제, 향료 등에서 선택되는 하나 또는 둘 이상의 수성 첨가제; 및 유지류, 왁스류, 탄화수소유, 고급지방산유, 고급알코올, 합성에스테르유, 실리콘유 등에서 선택되는 하나 또는 둘 이상의 유성 첨가제;일 수 있다.
본 발명의 주름 개선용 화장료 조성물은 일 실시예에 따른 피부 주름 개선용 펩타이드에서 선택되는 상이한 두 종류 이상의 피부 주름 개선용 펩타이드를 포함할 수 있으며, 한 종류가 단독으로 포함되는 경우보다 시너지 효과를 불러일으켜 보다 향상된 주름 개선 효과를 나타낼 수 있다.
상기 마이크로 니들 패취는 일 실시예에 따른 피부 주름 개선용 펩타이드를 함유하는 복수개의 마이크로 니들이 위치하는 마이크로 니들부; 및 상기 마이크로 니들부와 결합되는 기저부;를 포함할 수 있다.
이하, 구체적인 실시예를 통해 본 발명에 따른 주름 개선용 융합 펩타이드 및 이를 유효성분으로 함유하는 주름 개선용 화장료 조성물에 대하여 더욱 상세히 설명한다. 다만 하기 실시예는 본 발명을 상세히 설명하기 위한 하나의 참조일 뿐 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니며, 여러 형태로 구현될 수 있다. 또한 본 발명에서 설명에 사용되는 용어는 단지 특정 실시예를 효과적으로 기술하기 위함이고, 본 발명을 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
[실시예 1] 화합물 1의 제조
고상 펩타이드 합성법(solid-phase peptide synthesis)에 따라 상기 화합물 1을 합성하였다. 구체적으로 Amine 레진을 이용하였으며, 각각의 펩타이드는 Fmoc(9-fluorenylmethoxycarbonyl)을 N-terminal 보호기로 사용한 아미노산 서열 순서대로 커플링 반응에 이용하고 이후 Palmitic acid를 커플링 반응에 이용하였다. 상기 각각의 커플링 반응에는 HOBt-DIC 커플링제를 이용하였다. 각 단계의 Fmoc 보호기 제거반응에는 20% piperidine in DMF를 이용하였고, 마지막 레진 및 모든 보호기를 제거하는 단계는 TFA, TIS, Thioanisole, EDT 및 water를 90:2.5:2.5:2.5:2.5의 비율로 혼합하여 제조한 칵테일을 이용하였다.
각 아미노산이 도입되는 반응 후에 카이저 테스트를 진행하여 색깔 변화가 없는 경우 커플링 반응이 완료된 것으로 판단하고 다음 단계의 반응을 진행하였으며, 푸른색을 나타내면 미반응한 부분이 남아 있는 것으로 판단하고 아미노산의 커플링 반응을 다시 진행하였다.
상기의 과정으로 제조된 펩타이드를 정제 고성능 액체 크로마토 그래피(Prep-HPLC, column C18, 10 um, 250 mmХ22mm)를 이용하여 정제하고 동결건조 하여 화합물 1을 얻었으며, LC mass 분자량을 하기 표 1에 나타내었다.
[실시예 2 및 비교예 1 내지 6]
실시예 1와 동일한 방법으로 실시예 2에서 화합물 2, 비교예 1 내지 6에서 각각 화합물 3 내지 8을 합성하였으며, LC mass 분자량을 하기 표 1에 나타내었다.
화합물 LC mass 분자량
실시예 1 (1) Pal-RTKR-KTTKS 1343.7
실시예 2 (2) Pal-RTKR-GHK 1120.43
비교예 1 (3) Pal-KTTKS 802.08
비교예 2 (4) Pal-GHK 578.78
비교예 3 (5) RTKR-KTTKS 1105.29
비교예 4 (6) RTKR-GHK 882.03
비교예 5 (7) KTTKS 563.65
비교예 6 (8) GHK 340.38
[평가예 1] 세포독성(MTT assay) 평가
HaCaT 세포를 2 x 105 /mL 농도로 96 well plate에 seeding 하고, 24시간 후 serum-free DMEM으로 교체해준 후 실시예 1 및 2의 화합물 1 및 2를 처리하였다. plate를 37 ℃에서 24 시간 동안 배양한 후 media를 걷어내고 20 μL의 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)- 2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT, 5 ㎎/mL)을 넣어주고 CO2 배양기에서 37 ℃에서 2 시간 동안 배양하였다. 100 μL의 DMSO로 결정을 용해시킨 후에 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 하기 표 1에 세포독성 평가에 대한 결과를 나타내었다. 생존율은 control과 비교하여 %로 표시하였다.
대조군 실험군
농도(ug/ml) 0 1 10 100
실시예 1 100 99.3 99.0 97.2
실시예 2 100 100.5 101.5 94.8
상기 표 2에서 나타낸 바와 같이, 발명의 실시예는 100 ppm일 경우 실시예 1(화합물 1)은 97.2 %, 실시예 2(화합물 2)는 94.8 %로 높은 생존율을 나타내어 세포독성이 낮은 것을 알 수 있다.
[평가예 2] 콜라겐 합성 평가
사람 피부 섬유아세포(HDF-p4, Thermo Fisher, USA)를, 3 x 103 cells/well로 96 well plate에 seeding 하고, 24 시간 후 serum-free DMEM으로 교체해준 후 실시예 1,2 및 비교예 1 내지 5를 각각 50 ppm을 처리한 뒤 96 시간 동안 배양하였다. 상기 화합물이 포함되지 않은 PBS를 처리한 것을 대조군으로서 사용하였다.
배양액을 채취하여, 배양액 중에 분비된 타입 I 콜라겐 농도를 효소 결합 면역 측정법(ELISA, Collagen type I c-peptide EIA Kit, Takara, Japan)으로 분석하였다.
대조군 배양액 중의 타입 I 콜라겐 양을 100 %로 하여 각 샘플 배양액 중의 콜라겐 양을 계산하여 하기 표 3에 나타내었다.
Collagen (ng/mL)
대조군 62.2
실시예 1 165.8
실시예 2 144.8
비교예 1 116.7
비교예 2 104.8
비교예 3 98.4
비교예 4 92.5
비교예 5 102.8
비교예 6 99.1
상기 표 3에 나타낸 바와 같이, 실시예 1 및 2에서 합성된 콜라겐의 양은 비교예에 비해 현저히 높은 것을 알 수 있다. 구체적으로, 실시예 1 및 2의 콜라겐 합성량은 콜라겐 합성용 펩타이드 단독인 비교예 5 및 6보다 약 1.5배 높고, 콜라겐 합성 펩타이드에 세포 투과성 리간드만 결합된 비교예 1 및 2보다도 약 1.3배 이상 높은 효과를 나타내는 것을 알 수 있다.
이로써 본 발명의 주름 개선용 융합 펩타이드는 우수한 콜라겐 합성 효과를 나타내며, 이로 인하여 주름 개선 효과가 뛰어난 것을 알 수 있으며, 이에 따라 상기 융합 펩타이드를 포함하는 피부 주름 개선용 화장물 조성물 또한 주름 개선 효과에 탁월할 것으로 보인다.
이상과 같이 본 발명에서는 특정된 사항들과 한정된 실시예 및 비교예에 의해 설명되었으나 이는 본 발명의 보다 전반적인 이해를 돕기 위해서 제공된 것일 뿐, 본 발명은 상기의 실시예에 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 이러한 기재로부터 다양한 수정 및 변형이 가능하다.
따라서, 본 발명의 사상은 설명된 실시예에 국한되어 정해져서는 아니되며, 후술하는 특허청구범위뿐 아니라 이 특허청구범위와 균등하거나 등가적 변형이 있는 모든 것들은 본 발명 사상의 범주에 속한다고 할 것이다.
삭제
서열목록 전자파일 첨부

Claims (8)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 것인, 주름 개선용 융합 펩타이드.
    [화학식 1]
    A2-A1-A3
    (A1은 서열번호 3 내지 7로 이루어진 군에서 선택되는 MMP 타겟 절단서열이고,
    A2는 C12-C24지방산 또는 아실화된 C12-C24지방산이고,
    A3는 서열번호 1 및 서열번호 2로 이루어지는 군에서 선택되는 콜라겐 합성용 펩타이드이다)
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 제1항에 따른 주름 개선용 융합 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 주름 개선용 화장료 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 주름 개선용 화장료 조성물은 화장수, 스킨, 로션, 영양로션, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 팩 또는 마이크로 니들 패취의 제형인, 주름 개선용 화장료 조성물.
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International Journal of Innovative Research and Scientific Studies. 5(3), pp.220-225 (2022.)* *
International Journal of Recent Technology and Engineering (IJRTE). Vol.7(6S5) (2019.04.)* *
김인수 et al., Fractional Photothermolysis 치료 후 피부회복 촉진에 미치는 경구용 저분자 콜라겐 펩타이드의 효과, 대한화장품학회지 제38권 제4호 통권87호(2012. 12), 321-326.

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