KR102665779B1 - 체외충격파를 방출하는 프로브를 포함하는, 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치 - Google Patents
체외충격파를 방출하는 프로브를 포함하는, 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치 Download PDFInfo
- Publication number
- KR102665779B1 KR102665779B1 KR1020210114296A KR20210114296A KR102665779B1 KR 102665779 B1 KR102665779 B1 KR 102665779B1 KR 1020210114296 A KR1020210114296 A KR 1020210114296A KR 20210114296 A KR20210114296 A KR 20210114296A KR 102665779 B1 KR102665779 B1 KR 102665779B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- stem cells
- erectile dysfunction
- sdf
- group
- genetically engineered
- Prior art date
Links
- 230000035939 shock Effects 0.000 title claims abstract description 87
- 208000010228 Erectile Dysfunction Diseases 0.000 title claims abstract description 65
- 201000001881 impotence Diseases 0.000 title claims abstract description 65
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 55
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 239000000523 sample Substances 0.000 title claims abstract description 17
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 101710088580 Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 claims abstract description 108
- 102100021669 Stromal cell-derived factor 1 Human genes 0.000 claims abstract description 103
- 210000005226 corpus cavernosum Anatomy 0.000 claims abstract description 40
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 34
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims abstract description 33
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 61
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 claims description 19
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 18
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 claims description 16
- 210000003899 penis Anatomy 0.000 claims description 14
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 11
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims description 9
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 6
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 claims description 5
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 claims description 4
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 claims description 4
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 claims description 4
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 claims description 4
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 claims description 4
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 claims description 4
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 claims description 4
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 claims description 4
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 claims description 4
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 claims description 4
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000001178 neural stem cell Anatomy 0.000 claims description 3
- ZOOGRGPOEVQQDX-UUOKFMHZSA-N 3',5'-cyclic GMP Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=C(NC2=O)N)=C2N=C1 ZOOGRGPOEVQQDX-UUOKFMHZSA-N 0.000 abstract description 18
- 102100022397 Nitric oxide synthase, brain Human genes 0.000 abstract description 12
- 101710111444 Nitric oxide synthase, brain Proteins 0.000 abstract description 12
- 230000009986 erectile function Effects 0.000 abstract description 11
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 abstract description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 7
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 abstract description 7
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 abstract description 7
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 abstract description 5
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 abstract description 5
- 230000006872 improvement Effects 0.000 abstract description 3
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 10
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 10
- CDEURGJCGCHYFH-CFCGPWAMSA-N 5-ethynyl-1-[(2r,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]pyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1C(O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C#C)=C1 CDEURGJCGCHYFH-CFCGPWAMSA-N 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N streptozocin Chemical compound O=NN(C)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 238000009213 extracorporeal shockwave therapy Methods 0.000 description 8
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 6
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 6
- ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N Streptozotocin Natural products O=NN(C)C(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 6
- 239000007926 intracavernous injection Substances 0.000 description 6
- 238000009168 stem cell therapy Methods 0.000 description 6
- 238000009580 stem-cell therapy Methods 0.000 description 6
- 229960001052 streptozocin Drugs 0.000 description 6
- 229940123333 Phosphodiesterase 5 inhibitor Drugs 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 239000002590 phosphodiesterase V inhibitor Substances 0.000 description 5
- 238000002660 stem cell treatment Methods 0.000 description 5
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004872 arterial blood pressure Effects 0.000 description 4
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 4
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 4
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 4
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 3
- 206010052004 Organic erectile dysfunction Diseases 0.000 description 3
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 210000003953 foreskin Anatomy 0.000 description 3
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 3
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000024883 vasodilation Effects 0.000 description 3
- 230000007998 vessel formation Effects 0.000 description 3
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 2
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 2
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 2
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N bicinchoninic acid Chemical compound C1=CC=CC2=NC(C=3C=C(C4=CC=CC=C4N=3)C(=O)O)=CC(C(O)=O)=C21 AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003990 capacitor Substances 0.000 description 2
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 2
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 210000002464 muscle smooth vascular Anatomy 0.000 description 2
- 230000007383 nerve stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 2
- 230000018052 penile erection Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 2
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BUOYTFVLNZIELF-UHFFFAOYSA-N 2-phenyl-1h-indole-4,6-dicarboximidamide Chemical compound N1C2=CC(C(=N)N)=CC(C(N)=N)=C2C=C1C1=CC=CC=C1 BUOYTFVLNZIELF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008035 Back Pain Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 235000005956 Cosmos caudatus Nutrition 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 101100285402 Danio rerio eng1a gene Proteins 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 206010016825 Flushing Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010078321 Guanylate Cyclase Proteins 0.000 description 1
- 102000014469 Guanylate cyclase Human genes 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010057672 Male sexual dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010028735 Nasal congestion Diseases 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009018 Nitrate/Nitrite Fluorometric Assay Kit Methods 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 208000000450 Pelvic Pain Diseases 0.000 description 1
- 208000004362 Penile Induration Diseases 0.000 description 1
- QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M Pentobarbital sodium Chemical compound [Na+].CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)[N-]C1=O QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000020758 Peyronie disease Diseases 0.000 description 1
- 206010052005 Psychogenic erectile dysfunction Diseases 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 1
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- ZOOGRGPOEVQQDX-UHFFFAOYSA-N cyclic GMP Natural products O1C2COP(O)(=O)OC2C(O)C1N1C=NC2=C1NC(N)=NC2=O ZOOGRGPOEVQQDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 1
- 239000008151 electrolyte solution Substances 0.000 description 1
- 229940021013 electrolyte solution Drugs 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000003631 expected effect Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000002350 laparotomy Methods 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 210000002894 multi-fate stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004118 muscle contraction Effects 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003961 neuronal insult Effects 0.000 description 1
- 230000001129 nonadrenergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002536 noncholinergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229960002275 pentobarbital sodium Drugs 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 208000024335 physical disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000004648 relaxation of smooth muscle Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 238000013222 sprague-dawley male rat Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000003966 vascular damage Effects 0.000 description 1
- 238000007631 vascular surgery Methods 0.000 description 1
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 description 1
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 210000003905 vulva Anatomy 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
- A61F5/00—Orthopaedic methods or devices for non-surgical treatment of bones or joints; Nursing devices; Anti-rape devices
- A61F5/41—Devices for promoting penis erection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61H—PHYSICAL THERAPY APPARATUS, e.g. DEVICES FOR LOCATING OR STIMULATING REFLEX POINTS IN THE BODY; ARTIFICIAL RESPIRATION; MASSAGE; BATHING DEVICES FOR SPECIAL THERAPEUTIC OR HYGIENIC PURPOSES OR SPECIFIC PARTS OF THE BODY
- A61H19/00—Massage for the genitals; Devices for improving sexual intercourse
- A61H19/30—Devices for external stimulation of the genitals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61H—PHYSICAL THERAPY APPARATUS, e.g. DEVICES FOR LOCATING OR STIMULATING REFLEX POINTS IN THE BODY; ARTIFICIAL RESPIRATION; MASSAGE; BATHING DEVICES FOR SPECIAL THERAPEUTIC OR HYGIENIC PURPOSES OR SPECIFIC PARTS OF THE BODY
- A61H23/00—Percussion or vibration massage, e.g. using supersonic vibration; Suction-vibration massage; Massage with moving diaphragms
- A61H23/008—Percussion or vibration massage, e.g. using supersonic vibration; Suction-vibration massage; Massage with moving diaphragms using shock waves
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/10—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for impotence
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
- A61F5/00—Orthopaedic methods or devices for non-surgical treatment of bones or joints; Nursing devices; Anti-rape devices
- A61F5/41—Devices for promoting penis erection
- A61F2005/417—Devices for promoting penis erection by vibrating means
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61H—PHYSICAL THERAPY APPARATUS, e.g. DEVICES FOR LOCATING OR STIMULATING REFLEX POINTS IN THE BODY; ARTIFICIAL RESPIRATION; MASSAGE; BATHING DEVICES FOR SPECIAL THERAPEUTIC OR HYGIENIC PURPOSES OR SPECIFIC PARTS OF THE BODY
- A61H2201/00—Characteristics of apparatus not provided for in the preceding codes
- A61H2201/10—Characteristics of apparatus not provided for in the preceding codes with further special therapeutic means, e.g. electrotherapy, magneto therapy or radiation therapy, chromo therapy, infrared or ultraviolet therapy
- A61H2201/105—Characteristics of apparatus not provided for in the preceding codes with further special therapeutic means, e.g. electrotherapy, magneto therapy or radiation therapy, chromo therapy, infrared or ultraviolet therapy with means for delivering media, e.g. drugs or cosmetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61H—PHYSICAL THERAPY APPARATUS, e.g. DEVICES FOR LOCATING OR STIMULATING REFLEX POINTS IN THE BODY; ARTIFICIAL RESPIRATION; MASSAGE; BATHING DEVICES FOR SPECIAL THERAPEUTIC OR HYGIENIC PURPOSES OR SPECIFIC PARTS OF THE BODY
- A61H2205/00—Devices for specific parts of the body
- A61H2205/08—Trunk
- A61H2205/087—Genitals
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Virology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nursing (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Hematology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
본 발명은 체외충격파를 방출하는 프로브를 포함하는, 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치에 관한 것이다.
본 발명에 따른 체외충격파와 SDF-1을 발현하는 줄기세포 치료를 하는 경우, 평활근세포 및 신경세포 특이적 단백질(nNOS, NO, cGMP)의 수준을 증가시켜 음경 해면체 내피세포의 재생을 유도하여 음경 발기력(ICP/MAP)을 증가시키는 등 우수한 발기부전 개선효과를 가지므로, 발기부전 치료 및 예방에 유용하게 활용될 수 있다.
본 발명에 따른 체외충격파와 SDF-1을 발현하는 줄기세포 치료를 하는 경우, 평활근세포 및 신경세포 특이적 단백질(nNOS, NO, cGMP)의 수준을 증가시켜 음경 해면체 내피세포의 재생을 유도하여 음경 발기력(ICP/MAP)을 증가시키는 등 우수한 발기부전 개선효과를 가지므로, 발기부전 치료 및 예방에 유용하게 활용될 수 있다.
Description
본 발명은 체외충격파를 방출하는 프로브를 포함하는, 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치에 관한 것으로, 보다 상세하게는 평활근세포 및 신경세포 특이적 단백질의 수준을 증가시켜 음경 해면체 내피세포의 재생을 유도하여 음경 발기력을 증가시키기 위한 발명에 관한 것이다.
발기부전은 음경해면체 조직 중에 정상적으로 혈액의 유입이 이루어지지 못하는 현상으로서, 음경이 충분히 발기되지 않거나 되더라도 지속되지 못하는 경우가 전체 성생활 중 25% 이상 일어나는 경우를 말한다(Goldstein Iet al, New Eng1 J Med 1998. 338: 397-404.). 발기부전을 치료하기 위하여 상기 기전에 작용하는 약물을 적용하거나 남성 호르몬을 투여하는 내과적 치료방법과 혈관 수술 또는 음경 보형물 삽입 등의 외과적 치료 및 음경해면체내 혈관 확장제 주입법 등이 제시되어 있다. PDE5I(Phosphodiesterase 5 inhibitor)는 발기부전 치료를 위한 1차 약물(first-line drug) 중 하나이다. 그러나, 이러한 약물은 진성 당뇨병으로 인한 원위 혈관 질환(distal vessel disorder)과 같은 발기부전의 병리생리학적 교란을 변화시키는 것이 아니라, 단순히 발기부전의 증상을 개선하는데 그친다. PDE5I는 무반응 이외에도, 두통, 소화불량, 안면 홍조, 코 막힘 및 요통과 같은 부작용이 나타나며, 심장병을 갖는 환자에서는 사용이 제한되어 왔다. 또한, PDE5I는 당뇨병성 발기부전 환자에서 감소된 효능을 나타내며, 근본적인 치료법이 아니기 때문에 지속적인 사용이 요구된다.
최근 몇 년 동안 저강도 체외충격파 치료법(low-intensity extracorporeal shock wave treatment, Li-ESWT)이 광범위하게 사용되었으며, 비뇨기과에서는 체외충격파 치료법이 페이로니병(Peyronie's disease)과 만성 골반 통증뿐만 아니라 발기부전에도 사용되어 왔다. Vardi et al은 2010년 초에 체외충격파 치료법에 대한 상세한 지침을 기록했다(Y, AppelB, Jacob G, Massarwi O, Gruenwald I. Can low-intensity extracorporeal shockwave therapy improve erectile function? A 6-month follow-up pilot study in patients with organic erectile dysfunction. EurUrol 2010; 58: 243-248). 이후 몇 년 동안, 많은 연구자들이 발기부전 치료법으로 체외충격파 치료법을 사용한 연구를 발표하였으며, 체외충격파 치료법이 발기부전에 대한 긍정적인 영향을 미친다는 주요 결과를 보고하였다.
한편, 전 세계적으로 세포를 이용한 치료 방법이 개발되고 있으며, 성체줄기세포를 이용한 세포 치료제에 대해 많은 연구가 진행 중이다. 성체줄기세포인 중간엽줄기세포(Mesenchymal Stem cell; MSC)는 뼈, 연골, 근육, 지방, 섬유아세포 등으로 분화할 수 있는 다능성(multipotent) 세포이다. 상기 MSC는 골수, 제대혈, 지방 등 다양한 성체조직에서 비교적 쉽게 얻을 수 있다. MSC는 염증 또는 손상부위로 이동하는 특이성이 있어, 치료 약물을 전달하기 위한 전달체로서도 큰 장점이 있다. 또한, T 세포, B 세포, 수지상 세포 및 자연살해 세포와 같은 면역 세포의 기능을 억제하거나 활성화시켜, 인체의 면역기능을 조절할 수 있다. 그뿐 아니라, MSC는 시험관 내(in vitro)에서 비교적 쉽게 배양할 수 있다는 장점이 있다. 이러한 특성으로 인해 MSC를 세포 치료제로 이용하기 위한 연구가 활발히 진행되고 있다.
대한민국 공개특허 제10-2012-0040875에서는 지방조직-유리된 기질혈관분획을 유효성분으로 포함하는 내피세포 재생용 조성물을 이용하여 발기부전에 치료하기 위한 발명에 대하여 개시하고 있으며, 대한민국 공개특허 제10-2018-0119790에서는 마우스 배아 줄기세포 유래 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 발기부전 예방 또는 치료용 조성물에 관한 발명에 대해 개시한다.
그러나, ESWT와 SDF-1을 발현하는 MSC를 병용 투여한 경우의 발기부전 예방 또는 치료 상승효과를 갖는지에 대한 실험 결과는 아직 알려진 바가 없다.
본 발명자들은 당뇨병성 발기부전 랫트 모델을 확립한 후 ESWT 및 MSC를 투여하여 발기부전에 대한 효과를 ICP/MAP, NOS 발현정도, 평활근 발현 정도를 측정함으로써 평가한 결과, 각각의 단독 투여에 비해 우수한 상승효과가 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 상술한 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 줄기세포 요법과 병용 시 발기부전 예방 또는 치료효과를 증진시킬 수 있는 체외충격파장치를 제공하는 것이다.
상술한 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 체외충격파를 방출하는 프로브를 포함하는, 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치를 제공한다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 체외충격파는 0.05 내지 0.12mJ/mm2의 에너지 수준 및 100 내지 150의 충격/분으로 200 내지 400회의 충격파를 처리하는 것일 수 있다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 체외 충격파 발생 장치는 다수의 초점을 갖는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 체외 충격파 발생 장치의 초점 거리는 0 내지 65mm 범위인 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 줄기세포는 SDF-1을 발현하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 줄기세포는 중간엽 줄기세포일 수 있다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 줄기세포는 제대, 제대혈, 골수, 지방, 근육, 신경, 피부, 양막 및 태반으로 구성된 군에서 선택되는 조직으로부터 유래된 것일 수 있다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 발기부전은 당뇨병, 음경조직손상, 관상동맥질환, 신장병증, 신경병증, 고혈압, 동맥경화 및 고지혈증으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 원인에 의한 것일 수 있다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 줄기세포치료는 체외충격파 치료법과 동시에(simultaneous), 별도(separate), 또는 순차적 (sequential)으로 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 체외충격파를 방출하는 프로브를 포함하는, 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치는 평활근세포 및 신경세포 특이적 단백질의 수준을 증가시켜 음경 해면체 내피세포의 재생을 유도하여 음경 발기력을 증가시키는 등 우수한 발기부전 개선효과를 가지고 있는 바, 발기부전의 치료 및 예방에 유용하게 이용될 수 있다.
도 1(A)는 음경 해면체의 면역형광염색으로 α-SMA 평활근 함량을 평가한 결과를 나타낸 것이며, 빨간색은 MSC를, 초록색은 α-SMA를, 파란색은 세포 핵을 나타낸다. (B)는 각 군의 α-SMA의 평균 강도를 나타낸 것이다.
도 2는 각 군의 SDF-1 발현을 비교한 것으로, (A)는 음경 해면체의 면역형광염색으로 SDF-1 발현을 평가한 결과를 나타낸 것이며, 빨간색은 MSC를, 초록색은 SDF-1을, 파란색은 세포 핵을 나타낸다. (B)는 각 군의 SDF-1 발현 평균 강도를 나타낸 것이다.
도 3은 EdU(5-ethynyl-2-deoxyuridine)이 표지된 음경 전구세포의 수를 증가시키는 것을 확인한 이미지로, (A)의 분홍색은 EdU가 표지된 전구세포의 수, 파란색은 핵을 의미한다. (B)는 각 군에서 EdU 표지된 세포 수의 비율을 나타낸다.
도 4는 각 군의 ICP 값 및 ICP/MAP 비율을 나타낸 것으로, (A)는 해면신경 자극에 의한 ICP를 측정하여 나타낸 것이고, (B)는 신경자극 후 각 군의 ICP/MAP 비율을 나타낸 것이다. (ICP : 음경해면체내 압력, MAP : 평균 동맥압).
도 5는 각 군의 nNOS 발현을 비교한 것으로 (A)는 음경해면체의 염색된 이미지를 나타내며, (B)는 nNOS의 각 군별 비율을 나타낸다. (C)는 NO와 cGMP의 각 군별 비율을 나타낸다.
도 2는 각 군의 SDF-1 발현을 비교한 것으로, (A)는 음경 해면체의 면역형광염색으로 SDF-1 발현을 평가한 결과를 나타낸 것이며, 빨간색은 MSC를, 초록색은 SDF-1을, 파란색은 세포 핵을 나타낸다. (B)는 각 군의 SDF-1 발현 평균 강도를 나타낸 것이다.
도 3은 EdU(5-ethynyl-2-deoxyuridine)이 표지된 음경 전구세포의 수를 증가시키는 것을 확인한 이미지로, (A)의 분홍색은 EdU가 표지된 전구세포의 수, 파란색은 핵을 의미한다. (B)는 각 군에서 EdU 표지된 세포 수의 비율을 나타낸다.
도 4는 각 군의 ICP 값 및 ICP/MAP 비율을 나타낸 것으로, (A)는 해면신경 자극에 의한 ICP를 측정하여 나타낸 것이고, (B)는 신경자극 후 각 군의 ICP/MAP 비율을 나타낸 것이다. (ICP : 음경해면체내 압력, MAP : 평균 동맥압).
도 5는 각 군의 nNOS 발현을 비교한 것으로 (A)는 음경해면체의 염색된 이미지를 나타내며, (B)는 nNOS의 각 군별 비율을 나타낸다. (C)는 NO와 cGMP의 각 군별 비율을 나타낸다.
이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
상술한 바와 같이, 기존의 발기부전 치료를 위한 1차 약물(first-line drug) 중 하나인 PDE5I는 진성 당뇨병으로 인한 원위 혈관 질환(distal vessel disorder)과 같은 발기부전의 병리생리학적 교란을 변화시키는 것이 아니라, 단순히 발기부전의 증상을 개선하는데 그쳐, 발기부전의 근본적인 원인을 치료할 수 있는 효과적인 치료법의 개발이 요구되고 있다.
이에, 본 발명에서는 체외충격파를 방출하는 프로브를 포함하는, 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치를 제공함으로써, 상술한 문제의 해결방안을 모색하였다. 본 발명의 장치는 음경 평활근의 증가, SDF-1 발현의 증가, 음경조직의 등쪽 신경에서 nNOS, NO, cGMP 발현 증가, 음경 내압 증가 및 음경조직의 체조직에서 내피세포 재생 촉진 효과를 나타내어 발기부전 치료에 효과적이다.
본 발명에서 사용되는 용어는 다음과 같이 정의된다.
“치료”는 이롭거나 바람직한 임상적 결과를 수득하기 위한 접근을 의미한다. 본 발명의 목적을 위해서, 이롭거나 바람직한 임상적 결과는 비제한적으로, 증상의 완화, 질병 범위의 감소, 질병 상태의 안정화(즉, 악화되지 않음), 질병 진행의 지연 또는 속도의 감소, 질병 상태의 개선 또는 일시적 완화 및 경감 (부분적이거나 전체적으로), 검출 가능하거나 또는 검출되지 않거나 여부를 포함한다. 또한, “치료”는 치료를 받지 않았을 때 예상되는 생존율과 비교하여 생존율을 늘이는 것을 의미할 수도 있다. “치료”는 치료학적 치료 및 예방적 또는 예방조치 방법 모두를 가리킨다. 상기 치료들은 예방되는 장애뿐만 아니라 이미 발생한 장애에 있어서 요구되는 치료를 포함한다. 질병을 “완화(alleviating)”하는 것은 치료를 하지 않은 경우와 비교하여, 질병상태의 범위 및/또는 바람직하지 않은 임상적 징후가 감소되거나 및/또는 진행의 시간적 추이(time course)가 늦춰지거나 길어지는 것을 의미한다. 또한,“치료”는 치료를 받지 않았을 때 예상되는 생존율과 비교하여 생존율을 늘이는 것을 의미할 수도 있다. “치료”는 치료학적 치료 및 예방적 또는 예방조치 방법 모두를 가리킨다. 상기 치료들은 예방되는 장애뿐만 아니라 이미 발생한 장애에 있어서 요구되는 치료를 포함한다.
"상승적인(synergistic)"은 각 성분이 병용(조합) 투여될 때 발생되는 효과가, 단일 성분으로서 단독으로 투여될 때 발생되는 효과의 합보다 더 큰 것을 말한다[Chou and Talalay, Adv. Enzyme. Regul., 22:27-55, 1984].
본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한, 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다.
본 발명은 체외충격파를 방출하는 프로브를 포함하는, 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치를 제공한다.
일 실시예에 있어서, 상기 장치는 펄스 전원을 선택적으로 인가받아 서로 다른 중심 주파수를 갖는 충격파를 선택적으로 생성하는 충격파 생성기를 포함함으로써, 서로 다른 중심 주파수의 체외 충격파를 선택적으로 또는 동시에 생성할 수 있다. 따라서, 사용 용도에 적합한 중심 주파수를 가지는 충격파가 생성되도록 할 수 있다.
구체적으로, 상기 장치는 서로 다른 중심 주파수를 가지는 펄스 전원을 생성하는 가변형 펄스 파워 생성기; 상기 가변형 펄스 파워 생성기에서 생성된 펄스 전원을 선택적으로 인가받아 서로 다른 중심 주파수를 가지는 충격파를 선택적으로 생성하는 충격파 생성기; 및 상기 충격파 생성기에 의해 생성된 충격파를 집속하는 충격파 집속기;를 포함할 수 있다.
예를 들어, 상기 가변형 펄스 파워 생성기는 커패시턴스와 인덕턴스의 크기를 조절함으로써 서로 다른 중심 주파수를 가지는 펄스 전원을 생성하도록 형성될 수 있으며, 구체적으로는 복수의 커패시터와 복수의 인덕터, 그리고 상기 복수의 커패시터와 인덕터를 선택적으로 온/오프 하여 전체 커패시턴스와 전체 인덕턴스를 조절할 수 있도록 형성되는 복수의 스위치를 포함할 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 충격파 생성기는 가변형 펄스 파워 생성기에서 생성된 펄스 전원을 각각 인가받아 서로 다른 중심 주파수의 충격파를 생성하는 전자기식(EM) 충격파 생성기일 수 있다.
본 발명에 따른 장치는, 예를 들어, 다초점 체외 충격파가 방출되는 프로브를 포함하며, 상기 프로브를 치료하고자 하는 개체 또는 환자의 특정 부위 (예를 들어, 환부, 환부 주변 부위 또는 의도한 효과를 유도할 수 있는 적용 부위)에 접촉시켜 상기 개체 또는 환자에 다초점 체외 충격파를 적용할 수 있다.
본 발명에서 체외충격파는 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 정도로 처리되며, 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 질환의 진행 정도, 체외충격파의 활성, 체외충격파에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 적절히 조절될 수 있다.
본 발명의 체외충격파를 방출하는 프로브를 포함하는, 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치에 있어서, 상기 체외충격파는 통상적인 체외충격파 요법에 사용되는 에너지 수준이라면 제한없이 사용될 수 있으나, 바람직하게는 0.01 내지 1.24mJ/mm2, 보다 바람직하게는 0.05 내지 0.8mJ/mm2, 가장 바람직하게는 0.05 내지 0.12mJ/mm2의 에너지 수준으로 처리될 수 있다. 상기의 에너지 범위를 벗어나는 경우, 본 발명에서 목적으로 하는 상승효과가 감소하는 문제점이 발생할 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 체외충격파를 방출하는 프로브를 포함하는, 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치 약 1 내지 약 8 충격/초의 빈도수로 약 1 회 내지 약 9,999 회 체외 충격파 발생 횟수를 갖는 것을 특징으로 할 수 있다. 본 발명에 따른 체외 충격파 방출 장치는 상기 빈도수 범위를 가짐에 따라 상기 서술한 평활근 세포 및 신경세포 특이적 단백질의 증가, 음경 해면체 내피세포의 재생을 유도할 수 있으며, 만약 약 1 충격/초 미만의 빈도수를 가질 경우 발기부전 개선 치료 상승효과를 나타내지 못할 수 있고, 약 8 충격/초의 빈도수를 초과할 경우 의도한 바람직한 효과와 상반되는 효과가 발생할 수 있으므로, 상기 범위 내의 에너지 수준을 갖는 것이 바람직하다. 보다 바람직하게, 상기 체외 충격파 발생 장치는 약 1 내지 약 4 충격/초의 빈도수를 가지는 것일 수 있다.
빈도수(frequency) 및 총 충격파 전달 횟수와 같은 다른 체외충격파 처리 조건은 체외충격파장치에 따라 적절하게 당업자가 조절할 수 있다. 예를 들어, 상기 에너지 수준 범위에서 바람직하게는 30 내지 300 충격/분, 보다 바람직하게는 50 내지 200 충격/분, 가장 바람직하게는 100 내지 150 충격/분의 빈도수 일 수 있다. 총 충격파 전달 횟수는 바람직하게는 50 내지 2000회, 보다 바람직하게는 100 내지 1000회, 가장 바람직하게는 200 내지 400회 처리될 수 있다.
일 실시예에 있어서, 본 발명의 체외 충격파 발생 장치는 다수의 초점을 갖는 것을 특징으로 할 수 있다. 다수의 초점을 갖는다는 것은 다초점, 즉 여러 개의 초점을 갖는다는 의미로, 1개 이상의 초점을 생성할 수 있음을 의미한다.
일 실시예에 있어서, 상기 체외 충격파 발생 장치의 초점 거리는 약 0 내지 약 65 mm 범위인 것을 특징으로 할 수 있다. 본 발명에 따른 체외 충격파 발생 장치는, 예를 들어, 0 내지 25 mm 초점 영역을 갖는 제1 어댑터, 5 내지 35 mm의 초점 영역을 갖는 제2 어댑터, 15 내지 45 mm의 초점 영역을 갖는 제3 어댑터 및 35 내지 65 mm의 초점 영역을 갖는 포커스 헤드(focus head)를 포함할 수 있다. 이에 따라, 본 발명에 따른 체외 충격파 발생 장치는 서로 다른 중심 주파수의 체외 충격파를 선택적으로 또는 동시에 생성하여, 다수의 초점으로 한번에 넓은 영역을 효과적으로 치료할 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 체외 충격파 발생 장치는 발기부전을 예방 또는 치료하는데 유용하다. 예를 들어, 본 발명에 따른 다초점 체외 충격파 발생 장치는 약 0 내지 약 65 mm 범위의 초점 거리 및 약 0.03 내지 약 0.30 mJ/mm2 범위의 에너지 수준을 가지며, 약 1 내지 약 8 충격/초의 빈도수로 약 1 회 내지 약 9,999 회의 체외 충격파를 발생함에 따라, 발기부전을 예방 또는 치료효과를 상승시키는 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명에 따른 체외충격파를 방출하는 프로브를 포함하는, 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치는 평활근 세포 특이적 단백질인 α-SMA(alpha Smooth Muscle Actin), 뉴런 특이적 단백질인 β-Ⅲ 튜불린의 발현을 증가시키고, 음경해면체 내피세포의 혈관 형성능을 개선시킨다. 즉, 본 발명은 일시적인 혈류량 증가를 통한 발기부전 개선 효과를 꾀했던 종래의 발기부전 치료약들과는 달리 비정상화된 음경해면체의 구조를 근본적으로 해결하여 발기부전 치료효과를 가진다.
음경이 발기하기 위해서는 먼저 음경 해면체 동맥과 음경평활근의 완전한 이완 및 음경해면체내동상 혈관강(sinysoidal space) 혈액 축적이 일어나야 하며, 이 과정에서 신경전달물질과 비신경전달물질이 작용한다. 특히 비아드레날린성, 비콜린성 신경 및 내피로부터의 일산화질소(nitric oxide, NO) 방출은 음경해면체 내의 구아닐 사이클라제(guanylate cyclase)를 활성화시키고 세포내 cGMP(cyclic GMP) 수준을 증가시킨다. 세포내 cGMP의 증가는 세포내 칼슘 수준을 감소시키고, 이는 주상 평활근 이완을 유발하여 다시 해면체 부피 확장을 통해 음경발기를 유도한다. 상기와 같이 음경해면체내의 혈류의 증가는 평상시보다 5배 내지 6배 이상 활발하게 일어나는데 이로 인하여 일어난 음경의 발기를 유지하고 강직도를 나타내려면, 음경의 해면체 내 증가된 혈류가 밖으로 유출되지 못하도록 유지되어야 하며 외음부의 근육 수축이 요구된다.
본 발명의 체외충격파를 방출하는 프로브를 포함하는, 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치는 음경 내압 증가, 음경 평활근의 증가, 음경조직의 체조직에서 SDF-1 발현 증가, 음경조직의 등쪽 신경에서 nNOS, NO 및 cGMP 발현 증가, 및 음경조직의 체조직에서 내피세포 재생촉진으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 활성을 나타낼 수 있다.
따라서, 본 발명의 또 다른 구체적인 일실시예에서는 음경해면체내의 혈류의 증가 및 평활근의 이완이 유발되는지 확인하기 위해 줄기세포 치료와 체외충격파 장치를 이용한 치료를 한 랫트를 대상으로 nNOS, NO 및 cGMP 발현 수준을 확인하였다. 그 결과, 도 5에서 확인되는 바와 같이, 줄기세포 치료나 체외충격파 치료를 단독으로 한 그룹에 비해 동시에 치료한 그룹에서 nNOS, NO 및 cGMP 발현 수준이 현저히 높게 나타났다. 또한, [표 3]에 나타난 바와 같이 줄기세포 치료 혹은 체외충격파 치료를 단독으로 수행한 군에 비해 줄기세포 치료와 체외충격파 장치를 이용한 치료를 한 그룹에서 NO수준이 예측치보다 실측치가 더 높은 결과를 나타내며, 상승효과를 나타냈다. 이를 통해, NO 및 cGMP 수준이 높아지면서 세포내 칼슘 수준을 감소시키고, 주상 평활근 이완을 유발하여 해면체 부피확장을 통해 발기 기능이 유도되므로, 줄기세포 치료와 체외충격파를 동시에 수행하는 경우 발기부전 개선 치료 상승효과를 갖는다는 것을 확인할 수 있었다.
본 발명에 있어서, "줄기세포"는 각종 세포로 분화할 수 있는 능력을 갖추고 있으며 자가증식 능력을 가지는 세포를 말한다.
일 실시예에 있어서, 줄기세포는 SDF-1을 발현하는 것을 특징으로 한다. SDF-1은 기질세포 유래인자(Stromal Cell-Derived Factor 1; SDF1)로, 국소 전달된 SDF-1이 내피 전구세포(Endothelial Progenitor Cell, EPC)를 증가시켜 혈관 형성을 개선할 수 있으므로, 혈관신생을 증가시켜 발기부전 치료에 이용될 수 있다.
따라서, 본 발명의 구체적인 일실시예에서는 줄기세포 치료와 체외 충격파 장치를 이용한 치료를 한 랫트를 대상으로 SDF-1 발현 수준을 측정하였다. 그 결과 도 2에서 확인되는 바와 같이 줄기세포만을 단독으로 투여한 그룹보다 체외충격파를 함께 투여한 그룹에서 SDF-1의 발현수준이 가장 높게 나타났다. 이를 통해 체외충격파가 SDF-1의 발현 수준을 크게 증가시켜 내피 전구 세포를 모집하고, 코퍼스의 혈관화를 도울 수 있음을 보여줌을 확인할 수 있었다.
본 발명에 따른 SDF-1은 또한 포유류 SDF-1의 변이체, 예컨대, 포유류 SDF-1의 단편, 유사체 및 유도체일 수 있다. 그러한 변이체는, 예를 들어, 천연 SDF-1 유전자의 자연발생 대립형질 변이체 (즉, 자연발생 포유류 SDF-1폴리펩티드를 인코딩하는 자연발생 핵산)에 의해 인코딩된 폴리펩티드, 천연 SDF-1 유전자의 선택적 스플라이스(splice) 형태에 의해 인코딩된 폴리펩티드, 천연 SDF-1 유전자의 상동체(homolog) 또는 오르토로그(ortholog)에 의해 인코딩된 폴리펩티드, 및 천연 SDF-1 유전자의 비자연발생 변이체에 의해 인코딩된 폴리펩티드를 포함한다.
상술한 SDF-1 변이체는 하나 이상의 아미노산이 천연 SDF-1 폴리펩티드와 상이한 펩티드 서열을 갖는다. 그러한 변이체의 펩티드 서열은 SDF-1 변이체의 하나 이상의 아미노산의 결실, 첨가, 또는 치환을 특징으로 할 수 있다. 아미노산 삽입은 바람직하게는 약 1 내지 4개의 연속적인 아미노산에 대해 일어나고, 결실은 바람직하게는 약 1내지 10개의 연속적인 아미노산에 대해 일어난다. 변이 SDF-1 폴리펩티드는 천연 SDF-1의 기능적 활성을 실질적으로 유지한다. SDF-1 폴리펩티드 변이체의 예는 침묵 또는 보존 변화를 특징으로 하는 본 발명에서의 핵산분자를 발현시킴으로써 만들어질 수 있다. SDF-1 변이체의 일 예가 미국 특허 제7,405,195호에 나열되어 있으며, 이는 전체로서 본 명세서에 참고로 포함된다.
본 발명에서 용어 "세포 치료제(cellular therapeutic agent)" 란, 개체로부터 분리, 배양 및 특수한 조작을 통해 제조된 세포 및 조직으로 치료, 진단 및 예방의 목적으로 사용되는 의약품(미국 FDA규정)으로서, 세포 혹은 조직의 기능을 복원시키기 위하여 살아있는 자가, 동종, 또는 이종세포를 체외에서 증식 선별하거나 다른 방법으로 세포의 생물학적 특성을 변화시키는 등의 일련의 행위를 통하여 치료, 진단 및 예방의 목적으로 사용되는 의약품을 의미한다.
본 발명의 세포 치료제는 생리학적으로 양립가능한 담체에 현탁될 수 있다. 본 발명에서 용어 "생리학적으로 양립가능한 담체(physiologically compatible carrier)"는 제형의 다른 성분들과 양립가능하며, 이의 수용자에게 유해하지 않은 담체를 가리킨다. 당해 기술분야의 숙련가는 생리학적으로 양립가능한 담체에 대해 잘 알고 있다. 적합한 담체의 예에는 세포 배양배지(예컨대, 이글의 최소필수배지), 인산완충식염수, 행크의 균형잡힌 염 용액 +/-글루코오스(Hank's balanced salt solution: HBSS), 및 다중 전해질 용액, 예컨대 Plasma-Lyte™ A (Baxter)가 포함된다.
본 발명에 따른 줄기세포 치료제는 일반적으로, 의도된 용도에 따라 최종 농도의 범위를 제공하기 위해 제약학상 허용가능한 희석제 또는 부형제, 예컨대, 멸균 수용액과 혼합된 SDF-1 또는 작용제의 양을 포함할 것이다. 제조 기술은 본 명세서에 참고로서 포함된 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th Ed. Mack Publishing Company, 1980]에 예시된 바와 같이, 일반적으로 본 기술 분야에 공지되어 있다. 더욱이, 인간 투여를 위해, 제조는 FDA 생물학 표준실이 요구하는 멸균, 발열성, 일반적인 안전성 및 순도 표준을 만족해야 한다.
일실시예에 있어서, 줄기세포의 예로는 중간엽 줄기세포, 조혈모세포, 신경 줄기세포, 지방 줄기세포 등을 들 수 있다. 본 발명에서는 바람직하게 중간엽 줄기세포, 더 바람직하게는 골수 유래 중간엽 줄기세포를 사용하였다.
일실시예에 있어서, 이용 가능한 줄기세포는, 포유동물의 제대, 제대혈, 골수, 지방, 근육, 신경, 피부, 양막 및 태반 등으로부터 유래된 모든 다능성 줄기세포를 포함한다.
본 발명에 있어서, 발기부전은 남성 성기능 장애의 일종으로서, 남성의 성기가 발기되지 않거나 발기 상태가 지속되지 않아 성행위를 할 수 없는 상태, 즉 질환을 지칭하는 것으로, 혈관신생 과정 중 이동, 증식한 내피세포들이 분열을 계속하여 속이 빈 튜브 모양으로 성장하여 최종 혈관으로 분화하고 여기에 혈액이 들어가 혈관 생성이 완성되는 혈관형성(tube formation)에 의하여 개선될 수 있다.
본 발명에 있어서, 체외충격파를 방출하는 프로브를 포함하는, 발기부전에 대한 줄기세포 치료효과 증진 및 예방용 장치는 원인에 관계없이 발기부전 개선에 효과적이다. 예를 들면, 발기부전의 원인은 심리적인 요인에 기인하는 심인성 발기부전과 육체적인 장애에 기인하는 기질성 발기부전으로 크게 나눌 수 있으며, 상기 기질성 발기부전은 당뇨병, 음경조직손상, 관상동맥질환, 신장병증, 신경병증, 고혈압, 동맥경화 및 고지혈증으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 원인에 의한 발기부전일 수 있으나 이로 한정되는 것은 아니며, 발기에 영향을 줄 수 있는 질병이라면 제한 없이 포함된다. 특히 본 발명은 당뇨병성 발기부전에 효과적이다.
따라서, 본 발명의 또 다른 구체적인 일실시예에서는, 줄기세포 치료와 체외 충격파 장치를 이용한 치료를 한 랫트를 대상으로 발기 기능을 검사하기위해 전신마취하에 해면체내압(Intracavernous pressure, ICP)과 평균동맥압(Mean Arterial Pressure, MAP)을 측정하였다. 그 결과, 도 4에서 확인되는 바와 같이 줄기세포치료와 체외충격파 치료를 함께 실시한 그룹에서의 ICP/MAP 비율이 정상그룹과 가까운 것으로 나타났다. 또한, [표 2]에 각각의 단독치료를 한 경우보다 유의미하게 상승효과가 있음이 나타났다. 이를 통해 각각의 단독 처리군보다 복합 처리군에서 월등히 뛰어난 발기기능 상승효과를 나타낼 수 있음을 확인할 수 있었다.
일실시예에 있어서, 체외충격파는 줄기세포를 포함하는 치료제와 동시에(simultaneous), 별도(separate), 또는 순차적(sequential)으로 투여될 수 있고, 단일 투여 또는 다중 투여될 수 있으며, 랫트, 생쥐,가축, 인간 등의 포유동물에 투여될 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
1-1. 실험동물 및 연구 설계
본 발명에서는 체중이 250-300g 인 50마리의 8주령 수컷 Sprague-Dawley 랫트(Orient Bio Co.,한국 성남)를 사용하였다. 진성 당뇨병은 65mg/kg 체중의 용량으로 streptozotocin(STZ, Sigma-Aldrich chemical company, USA)을 복강내 주사하여 유도하였다. 일반 그룹랫트에게는 STZ를 용해하는 데 사용된 동일한 양의 용액(0.1 mol/L 시트르산-인산염 완충액, pH 4.5)을 주사했다. 72시간 후, Accu-Chek 능동 혈당 측정기(Hoffmann-La Roche Ltd., Basel,스위스)로, 혈당 수치가 300mg/dL 이상일 때 진성 당뇨병이 유도되었음을 확인하였다. 혈액 샘플은 꼬리 정맥에서 채취하였다. 12주 후 발기 기능 검사를 시행하였고 정상적인 발기 기능 랫트는 제외하였다. 스트렙토조토신으로 유도된 DM 랫트와 암컷 랫트를 합친 후 일주일이 지나도 정액 균주가 발견되지 않으면 이 실험 랫트를 다음 과정에 포함시켰다. 정액 얼룩이 나타난 랫트는 제외되었다. 이후 랫트를 5개 그룹으로 나누었다(그룹당 n=10)
| 그룹 | 투여 물질 및 투여 스케줄 |
| 정상그룹(Ⅰ) | 정상 그룹(n=10, STZ 없음), |
| DM ED그룹(Ⅱ) | 65 mg/kg 스트렙토조토신 |
| DM ED + ESWT그룹(Ⅲ) | 65 mg/kg 스트렙토조토신 투여 후, 총 300회의 충격이 0.1mJ/mm2의 에너지 준위와 120회의 충격/분의 빈도로 4주 동안 1일 휴식을 포함하여 주 3회 수행. |
| DM ED + SDF-1 eMSC그룹(Ⅳ) | 65 mg/kg 스트렙토조토신 투여 후, 1×106 SDF-1 eMSC를 포함하는 200μL PBS 양측 해면체 내 주사를 매주 1회 4주 동안 투여. |
| DM ED + ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ) | 65 mg/kg 스트렙토조토신 투여 후, 1×106 SDF-1 eMSC를 포함하는 200μL PBS 양측 해면체 내 주사를 매주 1회 4주 동안 투여. 총 300회의 충격이 0.1mJ/mm2의 에너지 준위와 120회의 충격/분의 빈도로 4주 동안 1일 휴식을 포함하여 주 3회 수행. |
실험은 동물의 관리 및 사용에 대한 기관 지침에 따라 가톨릭대학교 동물보호이용위원회에서 부여한 프로젝트 라이선스(NO.: UMC 2016-0310-01) 하에 수행되었다.
1-2. SDF-1 발현 MSC의 준비
골수 중간엽 줄기 세포(BM-MSC)의 배양은 37℃, 5% CO2환경에서 20% 소태아 혈청(FBS; Gibco) 및 5ng/mL 염기성 섬유아세포 성장 인자(bFGF; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA)가 보충된 Dulbecco의 변형된 Eagle 배지(DMEM, Gibco, Gaithersburg, MD, USA)에서 수행되었다. 조작된 BM-MSC는 10% FBS DME에서 배양했다. 조작된 BM-MSC를 생성하기 위해, SDF-1 유전자, hTERT, C-myc 및 테트라사이클린 트랜스활성제(tTA)가 합성되었고, pBD 렌티바이러스 벡터(SL BIGEN, 한국 성남)를 사용하여 적용하였다. 단클론성 세포 집단을 얻기 위해 항생제를 사용하여 형질감염된 조작된 MSC를 선택했다. SDF-1 발현 및 세포 증식에 *?*기초하여 최종 단일클론 세포를 선택하였다. SDF-1 발현 조작된 BM-MSC(SDF-1 eMSC)는 생체내 주사 직전에 조사되었다. SDF-1 서열은 GenBank(수탁 번호: NM_000609.6)로부터 입수하였다. 도입된 염기서열의 프레임을 확인하기 위해 DNA 염기서열분석을 수행하였다(코스모제네텍, 서울, 한국). 조작된 세포는 한 well당 1x105 세포의 밀도로 12-웰 플레이트에 흩뿌려져 수행되었다. 48시간의 세포 배양 후, SDF-1 단백질 수준은 수확된 상층액으로부터 ELISA 키트(R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)를 사용하여 측정되었다. SDF-1 발현 수준은 약 10ng/mL이었다.
1-3. ESWT 투여
마취하에, 각 랫트를 앙와위 자세(supine position)로 배치하고 면도하고 포피를 제거하였다. 초음파 젤을 음경에 도포하고 충격파 어플리케이터(CENOWAVE; HNT MEDICAL Co., Ltd., 서울, 한국)를 음경에 두었다. 총 300회의 충격이 0.1mJ/mm2의 에너지 준위와 120회의 충격/분의 빈도로 전달되었다. 이 절차는 임상에서 발기부전 환자에게 사용되는 치료 과정과 유사하게 4주 동안 1일 휴식을 포함하여 주 3회 수행되었다.
1-4. ESWT 및 SDF-1 eMSC 치료
정상 그룹(I)을 제외하고 DM ED그룹(Ⅱ), DM ED + ESWT그룹(Ⅲ), DM ED + SDF-1 eMSC그룹(Ⅳ)및 DM ED + ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)의 모든 랫트는 양측 해면체내 주사를 받았다. 2.0% 이소플루란 흡입으로 마취한 후, 하복부를 면도하고 음경 포피에서 음경을 빼낸 앙와위 자세(supine position)로 두었다. SDF-1 eMSC의 위치를 추적하기 위해 형광 염료(CellTracker™ CM-DiI; Molecular Probes, Eugene, OR, 미국)로 MSC를 표지하는 작업을 SDF-1 eMSC의 양측 해면체 내 주사 전에 수행했다. DM ED + SDF-1 eMSC그룹(Ⅳ) 및 DM + ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)은 1×106 SDF-1 eMSC를 포함하는 200μL PBS 양측 해면체 내 주사가 수행되었다. 정상그룹(Ⅰ), DM ED그룹(Ⅱ) 및 DM ED + ESWT그룹(Ⅲ)의 랫트에 대해서는 200μL PBS 양측 해면체 내 주사가 수행되었다. SDF-1 eMSC 주사는 매주 1회 제공되었고 4주 동안 반복되었다. 주사 후 DM ED + ESWT그룹(Ⅲ), DM + ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)은 전기 충격파 치료를 받았다. 앙와위(supine position)의 이소플루란 마취하에 포피에서 음경을 빼냈다. 초음파 젤로 덮인 음경에 충격파 어플리케이터를 배치하여, 이전 연구에 따라 각 음경은 120회의 충격/분의 빈도로 0.1mJ/mm2의 에너지 플럭스 밀도에서 300회의 ESWT 충격으로 치료되었다. 하루의 휴식과 함께 ESWT는 주당 3회 치료되었으며 4주 동안 반복되었다.
1-5. 이미지 및 통계 분석
Image-J 및 Image-Pro Plus(Media Cybernetics, Silver Spring, MD, 미국)를 사용하여 연구 결과의 이미지를 정량화했다. 통계 분석은 SPSS 22.0 소프트웨어(IBM, Armonk, NY, 미국)를 사용하여 수행되었다. 데이터는 평균 ± 표준 편차(SD)로 표시되었으며. 다중 그룹 비교는 ANOVA로 이루어졌다. 비율로 표현된 데이터는 카이제곱 검정으로 평가되었으며, P<0.05의 값은 통계적으로 유의한 차이로 간주되었다.
α-평활근 액틴(α-SMA) 함량 개선의 면역조직화학적 분석
α-평활근 액틴(α-SMA) 함량 개선되었는지 확인하기 위해 면역조직화학적 분석을 수행하였다. 파라핀 블록을 제조하기 위해, 새로운 음경 중간간부 조직을 수확하고 4℃에서 24시간 동안 4% 파라포름알데히드에 고정하였다. 핵을 염색하기 위해 4,6-diamidino-2-phenylindole(DAPI; Vector Laboratories Inc., Burlingame, CA, 미국)과 함께 배양하였다. Zeiss LSM 510 Meta 공초점 현미경(Zeiss, Oberkochen, 독일)을 사용하여 디지털 이미지를 얻고, ZEN 2009(Zeiss)를 사용하여 평균 강도를 계산했다.
도 1(A)에서 볼 수 있듯이, α-평활근 액틴(α-SMA) 농도는 처리된 그룹에서 상승했으며, 도 1(B)는 각 그룹의 정량적 결과를 보여준다. 도 1(A)는 음경해면체의 면역형광 이미지를 나타내며, 빨간색(CM-Dil)은 MSC를, 초록색은 α-SMA를, 파란색(DAPI)은 세포 핵을 나타낸다.
DM ED + ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)의 α-SMA 수준이 가장 높았고 DM ED + SDF-1 eMSC그룹(Ⅳ)과 DM ED + ESWT 그룹(Ⅲ)이 그 뒤를 이었다. 손상된 해면체 조직에서 더 높은 α-SMA 농도는 조직 복구에 더 긍정적인 영향을 의미한다. CM-Dil과 DAPI 역시 ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)에서 가장 높은 농도를 나타내어 ESWT가 SDF-1 MSC의 양을 증가시킬 수 있음을 나타냈다. 도 1(B)의 정량 분석에서 α-SMA의 평균 강도는 DM ED그룹(Ⅱ)보다 ESWT(Ⅲ) 또는 SDF-1 eMSC 그룹(Ⅳ)에서 더 높았으며,(*P<0.05) ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)에서 가장 높았다(#P<0.01). DM ED + ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)은 α-평활근 액틴(α-SMA) 농도의 유의한 증가를 보여 손상된 해면체 조직의 평활근 수준이 증가하여 조직에 보다 긍정적인 영향을 미쳤음을 나타낸다.
DM ED+ ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)에서 ESWT(Ⅲ) 또는 SDF-1 eMSC (Ⅳ)가 단독으로 처리된 그룹보다 매우 우수한 α-SMA 발현 강도가 확인되었으며, 이를 통해 각각의 단독 처리군보다 복합 처리군에서 우수한 해면체 평활근 조직 복구 효과가 나타나 발기기능을 효과적으로 개선할 수 있음을 보여준다.
SDF-1 발현의 강도 증가 확인
내피 전구세포를 증가시켜 혈관 형성을 개선하여 발기부전 치료를 위한 SDF-1의 발현 강도 증가를 확인하기 위해 실시예 2에서 기재한 면역조직화학을 실시하였다. 도 2(A)는 음경해면체의 면역형광 이미지를 나타내며, 빨간색(CM-Dil)은 MSC를, 초록색은 SDF-1을, 파란색(DAPI)은 세포 핵을 나타낸다. 도 2(B)는 각 그룹의 정량적 결과를 보여준다.
도 2(A)에서 CM-Dil과 SDF-1은 ESWT + SDF-1 eMSC로 처리된 그룹 (Ⅴ)에서 가장 높은 농도(#P<0.01)를 나타낸다. 도 2(B)에 도시된 바와 같이, ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)에서 SDF-1 발현 수준은 SDF-1 eMSC 단독으로 처리된 그룹(Ⅳ)보다 더 높았으며, 정상그룹(I)보다 훨씬 높았다.
이 결과는 ESWT가 SDF-1 발현을 크게 증가시켜 내피 전구 세포를 모집하여 해면체의 혈관 형성을 도울 수 있음을 나타낸다.
음경 전구세포의 증가
DM ED 랫트의 전구 세포 5-ethynyl-2-deoxyuridine(EdU)은 중간엽 기질 세포의 표지 및 추적에 사용할 수 있다. 모든 랫트는 이전에 50 mg/kg EdU의 복강내 주사를 받았다. 4주 후, 해면체 내의 음경 전구 세포를 검사하기 위해 실시예 2에서 기재한 면역형광 염색을 수행했다.
도 3(A)에 도시된 바와 같이, EdU 양성 세포는 DM ED그룹(Ⅱ) 및 SDF-1 eMSC 그룹(Ⅳ)보다 EWST + SDF-1 eMSC그룹(Ⅴ) 및 ESWT 그룹(Ⅲ)에서 더 두드러졌다. 이것은 ESWT가 음경 전구 세포를 유도하고 해면체에서 SDF-1 eMSC를 향상시킬 수 있음을 의미한다. 정량적 결과는 도 3(B)에 나와 있으며, ESWT 그룹(Ⅲ)(*P<0.05)과 ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)(#P<0.01)에서 다른 그룹에 비해 EdU 양성 세포가 더 많았다.
이것은 ESWT가 해면체에서 음경 전구 세포를 유도하는 데 도움이 될 수 있음을 의미하며, SDF-1 eMSC 처리와 더불어 ESWT를 함께 투여했을 때 가장 큰 효과를 보임을 나타낸다.
음경해면체내압(Intracavernous Pressure, ICP)의 측정
모든 랫트는 4주 동안 치료를 받은 후 전신마취하에 해면체내압 (Intracavernous pressure, ICP)과 평균동맥압(Mean Arterial Pressure, MAP)을 측정함으로써 발기 기능 검사를 받았다. 정중선 개복술을 통해 경동맥과 해면신경을 노출시켰다. 해면체에 헤파린(250U/mL)으로 채워진 25게이지의 나비모양 바늘 캐뉼라를 삽입했다. 압력 변환기(Grass model S48 K; Astro-Med Inc., West Warwick, RI, 미국)를 캐뉼라에 연결하고 ICP를 기록했다. 그런 다음 경동맥에 삽입된 A BD Intramedic PE-50 튜브(BD, Franklin Lakes, NJ, 미국)로 MAP을 측정했다. ICP와 MAP 모두 연속적으로 기록되었다. ED를 검사한 후, 랫트를 펜토바르비탈 나트륨(50mg/kg)을 복강내 주사한 후 양측 개흉술을 통해 희생시켰다. 그리고 웨스턴 블롯 분석과 면역조직화학을 위해 음경을 채취했다.
도 4(A)은 ICP 결과를 보여준다. ICP의 정량적 결과는 DM ED그룹(Ⅱ) 보다 처리군에서 더 높았다. ICP는 정상그룹(Ⅰ) 0.69±0.13, DM ED그룹(Ⅱ) 0.27±0.08, DM ED + ESWT그룹(Ⅲ) 0.41±0.06, DM ED + SDF-1 eMSC그룹(Ⅳ) 0.53±0.08, DM ED+ ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ) 0.60±0.09였다. ICP/MAP 비율은 DM ED 그룹(Ⅱ)보다 DM ED + ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)에서 유의하게 더 높았다(P<0.05). 다른 치료군보다 정상그룹(I)의 ICP/MAP 비율에 더 가까웠다.
ICP/MAP 비율은 DM ED + ESWT 그룹(Ⅲ) 또는 ED + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅳ)보다 DM ED + ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)에서 더 높다는 것을 발견했다.(p<0.05) 이는 ESWT와 SDF-1 eMSC의 조합이 단일 요법보다 더 효율적일 수 있음을 나타낸다.
DM ED + ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)의 현저한 상승 효과를 보다 구체적으로 확인하기 위해, 도 4(B)의 각 군에 대한 ICP/MAP 비율 값을 바탕으로, DM 군 대비 ICP/MAP 비율값의 상승률(%) 실측치를 계산하여 [표 2]에 나타냈으며, 단독 처리군의 ICP/MAP 비율값의 상승률 실측치를 하기 콜비(Colby) 공식에 대입하여 계산된 복합 처리군의 상승률 예측치 또한 [표 2]에 나타냈다.
[콜비 공식]
E = (A + B) - (A × B / 100)
상기 식에서, A는 A로 인한 효과이고, B는 B로 인한 효과이며, E는 예측치로 성분 A와 성분 B (A+B)가 혼합되었을 경우의 예측되는 효과이다.
| 정상그룹(Ⅰ) | DM ED그룹(Ⅱ) |
DM ED + ESWT그룹(Ⅲ) | DM ED + SDF-1 eMSC그룹(Ⅳ) | DM ED + ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ) | |
| ICP/MAP | 0.69±0.13 | 0.27±0.08 | 0.41±0.06 | 0.53±0.08 | 0.60±0.09 |
| DM군 대비 상승률 실측치(%) | - | - | 51.85 | 96.30 | 122.22 |
| DM 군 대비 상승률 예측치(%) | - | - | - | - | 98.22 |
그 결과, DM ED + ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)에서 실측치가 예상치를 현저하게 뛰어넘는 매우 우수한 ICP/MAP 비율값의 상승률이 확인되었으며, 이를 통해 각각의 단독 처리군 보다 복합 처리군에서 월등히 뛰어난 발기기능 상승효과를 나타낼 수 있음을 보여준다.
해면체에서 nNOS 및 NO/cGMP 발현
고혈당에 의한 혈관 손상으로 인한 산화 스트레스는 신경세포 손상을 유발하고 해면체의 eNOS 수준을 감소시킬 수 있으며, 감소된 NO 수준은 ED를 유발할 수 있으므로, nNOS는 해면체의 혈관 확장에 필수적이다.
이를 확인하기 위해 60mg의 수확된 음경 조직을 350mL의 0.1M HCL에 별도로 담그고 2mL 용해 완충액(Precellys 24; Bertin Technologies, Montignyle-Bretonneux, 프랑스)에 균질화했다. 4℃에서 10분 동안 14,000xg에서 원심분리하였다. 상등액을 채취하고 BCA(bicinchoninic acid) 분석을 수행하여 각 샘플의 단백질 농도를 측정했다. 해면상 cGMP 수준과 총 NO 수준은 cGMP(cyclic guanosine monophosphate) 직접 면역분석 키트(K372, BioVision, San Francisco, 미국)를 사용하여 계산되었다. 마지막으로 Nitrate/Nitrite Fluorometric Assay Kit(Cayman Chemical)을 사용하여 총 질산염 + 아질산염 농도를 계산했다.
그 결과, 도 5(A)는 해면체에서 nNOS 염색의 대표적인 이미지이며, 도 5(B)는 각 그룹의 정량적 결과를 보여준다. nNOS 농도는 DM ED그룹(Ⅱ)에 비해 처리된 그룹에서 증가했고, ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)에서 가장 높았다. NO는 NO/cGMP 경로를 통해 혈관 평활근의 혈관 확장을 매개할 수 있다고 밝혀져있다. 도 5(C)는 ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)에서 NO 및 cGMP 수준이 다른 그룹보다 더 높으며, 정상그룹(I)과 가장 유사함을 나타낸다(#P<0.01).
DM ED + ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)의 현저한 상승효과를 보다 구체적으로 확인하기 위해, 대표적을 도 5(C)의 각 군에 대한 NO발현 강도 값을 바탕으로, DM ED그룹(± 대비 NO 발현 강도의 상승률 실측치(%)를 계산하여 [표 3]에 나타냈다.
| 정상그룹(Ⅰ) | DM ED그룹(Ⅱ) |
DM ED+ESWT그룹(Ⅲ) | DM ED + SDF-1 eMSC그룹(Ⅳ) | DM ED+ ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ) | |
| NO | 347.71±60.82 | 97.73±11.15 | 143.35±51.34 | 162.44±53.85 | 251.68±25.95 |
| DM군 대비 상승률 실측치(%) | - | - | 46.68 | 66.21 | 157.53 |
| DM 군 대비 상승률 예측치(%) | - | - | - | - | 81.98 |
그 결과, DM ED + ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)에서 실측치가 예측치를 뛰어넘는 매우 우수한 NO 발현 강도가 확인되었다. 이 실험에서 nNOS 및 NO, cGMP의 양은 ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)에서 SDF-1 eMSC 단독 그룹(Ⅳ)의 발현보다 높았으며, DM ED그룹(Ⅱ)보다 훨씬 높았다. ESWT + SDF-1 eMSC 그룹(Ⅴ)의 NO 및 cGMP 수준은 다른 그룹보다 높았으며 이는 ED를 개선하기 위해 혈관 평활근의 혈관 확장을 의미한다.
각 도면에서 데이터는 평균 ±SD로 나타냈다. *= DM ED 군과 비교한 통계적 유의성(P value <0.05)을 나타내고, # = DM ED 군과 비교한 통계적 유의성(P value <0.01)을 나타낸다.
Claims (14)
- SDF-1을 발현하도록 유전자 조작된 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치로서,
상기 장치는 체외충격파를 방출하는 프로브를 포함하고,
상기 체외충격파는 0.05 내지 0.12mJ/mm2의 에너지 수준 및 100 내지 150의 충격/분으로 200 내지 400회의 충격파로 처리되며,
상기 체외충격파는 SDF-1을 발현하도록 유전자 조작된 줄기세포의 주사 후에 별도(separate) 또는 순차적(sequential)으로 처리되어 음경해면체내압 증가 또는 음경해면체 내 NO 수준 증가에 대한 상승 효과를 나타내는, SDF-1을 발현하도록 유전자 조작된 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치.
- 삭제
- 제1항에 있어서,
상기 장치는 다수의 초점을 갖는 것을 특징으로 하는, SDF-1을 발현하도록 유전자 조작된 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치.
- 제1항에 있어서,
상기 장치의 초점 거리는 0 내지 65mm 범위인 것을 특징으로 하는, SDF-1을 발현하도록 유전자 조작된 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치.
- 삭제
- 제1항에 있어서,
상기 줄기세포는 중간엽 줄기세포, 조혈모세포, 신경 줄기세포 또는 지방 줄기세포인 것을 특징으로 하는, SDF-1을 발현하도록 유전자 조작된 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치.
- 제1항에 있어서,
상기 줄기세포는 제대, 제대혈, 골수, 지방, 근육, 신경, 피부, 양막 및 태반으로 구성된 군에서 선택되는 조직으로부터 유래된 것을 특징으로 하는, SDF-1을 발현하도록 유전자 조작된 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치.
- 제1항에 있어서,
상기 발기부전은 당뇨병, 음경조직손상, 관상동맥질환, 신장병증, 신경병증, 고혈압, 동맥경화 및 고지혈증으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 원인에 의한 것을 특징으로 하는, SDF-1을 발현하도록 유전자 조작된 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치.
- 삭제
- 발기 부전 환자에서, SDF-1을 발현하도록 유전자 조작된 줄기세포에 의한 음경해면체내압 증가 또는 음경해면체 내 NO 수준 증가의 상승 효과를 유도하기 위한 장치로서,
상기 장치는 체외충격파를 방출하는 프로브를 포함하고,
상기 체외충격파는 0.05 내지 0.12mJ/mm2의 에너지 수준 및 100 내지 150의 충격/분으로 200 내지 400회의 충격파로 처리되며,
상기 체외충격파는 SDF-1을 발현하도록 유전자 조작된 줄기세포의 주사 후에 별도(separate) 또는 순차적(sequential)으로 처리되는, 발기 부전 환자에서, SDF-1을 발현하도록 유전자 조작된 줄기세포에 의한 음경해면체내압 증가 또는 음경해면체 내 NO 수준 증가의 상승 효과를 유도하기 위한 장치.
- 제10항에 있어서,
상기 줄기세포는 중간엽 줄기세포, 조혈모세포, 신경 줄기세포 또는 지방 줄기세포인 것을 특징으로 하는, 발기 부전 환자에서, SDF-1을 발현하도록 유전자 조작된 줄기세포에 의한 음경해면체내압 증가 또는 음경해면체 내 NO 수준 증가의 상승 효과를 유도하기 위한 장치.
- 제10항에 있어서,
상기 줄기세포는 제대, 제대혈, 골수, 지방, 근육, 신경, 피부, 양막 및 태반으로 구성된 군에서 선택되는 조직으로부터 유래된 것을 특징으로 하는, 발기 부전 환자에서, SDF-1을 발현하도록 유전자 조작된 줄기세포에 의한 음경해면체내압 증가 또는 음경해면체 내 NO 수준 증가의 상승 효과를 유도하기 위한 장치.
- 제10항에 있어서,
상기 발기 부전 환자는 당뇨병, 음경조직손상, 관상동맥질환, 신장병증, 신경병증, 고혈압, 동맥경화 및 고지혈증으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 원인에 의해 발기 부전이 유발된 것을 특징으로 하는, 발기 부전 환자에서, SDF-1을 발현하도록 유전자 조작된 줄기세포에 의한 음경해면체내압 증가 또는 음경해면체 내 NO 수준 증가의 상승 효과를 유도하기 위한 장치. - 삭제
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020210114296A KR102665779B1 (ko) | 2021-08-27 | 2021-08-27 | 체외충격파를 방출하는 프로브를 포함하는, 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020210114296A KR102665779B1 (ko) | 2021-08-27 | 2021-08-27 | 체외충격파를 방출하는 프로브를 포함하는, 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20230031741A KR20230031741A (ko) | 2023-03-07 |
| KR102665779B1 true KR102665779B1 (ko) | 2024-05-10 |
Family
ID=85512451
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020210114296A KR102665779B1 (ko) | 2021-08-27 | 2021-08-27 | 체외충격파를 방출하는 프로브를 포함하는, 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR102665779B1 (ko) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020055702A1 (en) | 1998-02-10 | 2002-05-09 | Anthony Atala | Ultrasound-mediated drug delivery |
| US20120215142A1 (en) * | 2009-10-30 | 2012-08-23 | Avner Spector | Method and apparatus for treatment of erectile dysfunction with extracorporeal shockwaves |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101275224B1 (ko) * | 2010-10-20 | 2013-06-14 | 인하대학교 산학협력단 | 지방조직-유래된 기질혈관분획을 유효성분으로 포함하는 발기부전 예방 또는 치료용 조성물 |
| KR101904977B1 (ko) * | 2016-08-16 | 2018-10-08 | 정진구 | 필터를 포함하는 코골이 방지구 |
| KR102302256B1 (ko) * | 2019-02-19 | 2021-09-13 | 가톨릭대학교 산학협력단 | 체외충격파 치료법의 남성 성기능 개선효과 또는 남성 불임 치료효과 증진용 약학 조성물 |
-
2021
- 2021-08-27 KR KR1020210114296A patent/KR102665779B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020055702A1 (en) | 1998-02-10 | 2002-05-09 | Anthony Atala | Ultrasound-mediated drug delivery |
| US20120215142A1 (en) * | 2009-10-30 | 2012-08-23 | Avner Spector | Method and apparatus for treatment of erectile dysfunction with extracorporeal shockwaves |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20230031741A (ko) | 2023-03-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lin et al. | In situ activation of penile progenitor cells with low-intensity extracorporeal shockwave therapy | |
| Bivalacqua et al. | Mesenchymal stem cells alone or ex vivo gene modified with endothelial nitric oxide synthase reverse age-associated erectile dysfunction | |
| Fujio et al. | Stromal cell-derived factor-1 enhances distraction osteogenesis-mediated skeletal tissue regeneration through the recruitment of endothelial precursors | |
| JP5607176B2 (ja) | 新規ペプチドおよびその用途 | |
| ES2435847T3 (es) | Composiciones de microesferas para curar heridas | |
| ES2383169T3 (es) | Aumento del número de células madre neurales inducido por prolactina y uso terapéutico del mismo | |
| KR102146815B1 (ko) | Hmgb1 단편을 이용한 신규 심근경색의 치료법 | |
| Kim et al. | Clinical application of adipose stem cells in plastic surgery | |
| US8263400B2 (en) | Method for expanding adult stem cells from blood and compositions and methods for using the same | |
| KR20120006481A (ko) | 무혈관 조직의 복구를 촉진하기 위한 방법 및 조성물 | |
| CN103861087B (zh) | 神经生长因子在制备用于治疗中老年男性性功能低下综合征的药物中的用途 | |
| CN113633663A (zh) | 诱导性多能干细胞分化来源的epc在制备脑卒中治疗剂中的应用 | |
| Li et al. | Influence of neural stem cell transplantation on angiogenesis in rats with spinal cord injury | |
| JP2001515505A (ja) | 軸索再生を促進する単核貪食細胞及びその使用 | |
| Ti et al. | Comparison of the therapeutic effects of human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells and adipose-derived stem cells on erectile dysfunction in a rat model of bilateral cavernous nerve injury | |
| KR102665779B1 (ko) | 체외충격파를 방출하는 프로브를 포함하는, 줄기세포의 발기부전 예방 또는 치료효과 증진용 장치 | |
| Ichim et al. | Intracavernous administration of bone marrow mononuclear cells: a new method of treating erectile dysfunction? | |
| WO1993008821A1 (en) | Side effect inhibitor for cancer therapy | |
| US11007229B2 (en) | Method for inducing transdifferentiation of fibroblasts into chondrocytes | |
| CN109112094A (zh) | 一种脂肪间充质干细胞诱导分化为血管内皮细胞的方法 | |
| RU2292212C1 (ru) | Кондиционная среда, обладающая лечебным эффектом | |
| US20210379104A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising isolated mitochondria for preventing or treating tendinopathy | |
| WO2014140930A2 (en) | Compostions and methods for enhancing the therapeutic potential of stem cells | |
| EP3921029A1 (en) | Periosteal skeletal stem cells in bone repair | |
| KR101816964B1 (ko) | 피부 또는 혈관조직 손상 치료 보조용 약학 조성물 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E90F | Notification of reason for final refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant |