KR102616690B1 - 아연-γ-PGA 조성물 및 암을 치료하기 위한 방법 - Google Patents

아연-γ-PGA 조성물 및 암을 치료하기 위한 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR102616690B1
KR102616690B1 KR1020197015744A KR20197015744A KR102616690B1 KR 102616690 B1 KR102616690 B1 KR 102616690B1 KR 1020197015744 A KR1020197015744 A KR 1020197015744A KR 20197015744 A KR20197015744 A KR 20197015744A KR 102616690 B1 KR102616690 B1 KR 102616690B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
zinc
pga
delete delete
formulation
polyglutamic acid
Prior art date
Application number
KR1020197015744A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20190120159A (ko
Inventor
진혁 프레드 정
Original Assignee
자일로닉스 아이피 홀딩스 피티이. 엘티디.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 자일로닉스 아이피 홀딩스 피티이. 엘티디. filed Critical 자일로닉스 아이피 홀딩스 피티이. 엘티디.
Publication of KR20190120159A publication Critical patent/KR20190120159A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102616690B1 publication Critical patent/KR102616690B1/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/30—Zinc; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/02—Peptides of undefined number of amino acids; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/55—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug, i.e. a dimer, oligomer or polymer of pharmacologically or therapeutically active compounds
    • A61K47/551—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug, i.e. a dimer, oligomer or polymer of pharmacologically or therapeutically active compounds one of the codrug's components being a vitamin, e.g. niacinamide, vitamin B3, cobalamin, vitamin B12, folate, vitamin A or retinoic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/645—Polycationic or polyanionic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. polylysine, polyarginine, polyglutamic acid or peptide TAT
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Abstract

본 발명은 아연2 + 염 및 γ-폴리글루탐산 담체, 및, 임의로, 종양-민감화제로서 NF-kB 억제제를 포함하는 약제학적 조성물, 및 그러한 조성물을 사용하여 환자 내 종양을 치료하기 위한 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 치료적으로 효과적인 양의 Zn(II) 염 및 γ-폴리글루탐산 담체의 액체 제형 또는 고체 제형을 필요로 하는 환자에 투여하는 것을 포함한다. 공개된 조성물을 사용하는, 약물-내성 표현형을 갖는 종양을 포함하는, 넓은 스펙트럼의 사람 종양을 치료하기 위한 방법이 제공된다. 본 명세서에서 공개된 약제학적 조성물에 대응하는 종양은 신경내분비 (신경아세포종), 위장, 자궁, 및 폐 종양을 포함한다.

Description

아연-γ-PGA 조성물 및 암을 치료하기 위한 방법
본 발명은 감마-폴리글루탐산 (γ-PGA) 담체 및 아연 염을 포함하는 조성물, 및, 임의로, NF-kB 억제제, 그의 약제학적 제제, 및 환자 내 암을 치료하기 위한 항-종양 물질로서 임의의 조성물 및 제제를 사용하는 방법에 관한 것이다.
암 약물에 대한 선천성 및 후천성 약물 내성은 암 치료 실패의 주요 원인이다. 내성에 대한 일반적인 메커니즘 p53 세포자멸사 단백질의 기능 장애 및/또는 MDR1 또는 MRP1 유전자에 의해 암호화된 에너지-의존성 약물 배출 펌프의 과발현을 포함한다. 약물 내성 문제를 극복하기 위한 하나의 종양파괴성 전략은 기능 장애 p53 세포자멸사 기능을 개별적으로 바로 잡거나 또는 약물 배출 펌프 억제하는 것이다. 대체 접근법은 p53-매개 세포자멸사 메커니즘 모두를 우회하는 PARP1-매개 에너지 고갈-유도 세포 괴사 메커니즘 ("PARP1-매개 괴사")을 활용하는 것이다.
심장 또는 뇌 조직의 허혈-후 괴사에서 초기에 관찰되는, PARP1-매개 괴사는 PARP1 효소에 의한 과도한 DNA-수복 활성으로부터의 세포 에너지 (NAD+ 및 ATP)의 고갈에 의해 초래된다. 유전적 손상에 대한 반응 내 PARP1/PARG의 과활성화는 NAD+ 및 ATP 세포 에너지 물자의 고갈을 촉발하고, 이어서 MPTP 활성화로부터의 미토콘드리아-개시 괴사를 촉발한다. 이 사건의 세트는 도 1에서 보여진다. 괴사 메커니즘이 p53-매개 세포자멸사를 우회하기 때문에, 이 메커니즘이 암을 표적으로 하는데 사용될 수 있다는 것이 제안되었다 (NPL3). 하지만, 방법이 너무나 독성을 보였기 때문에 이 아이디어를 내로 임상적으로 유용한 치료법으로 변환하는 것을 아무도 성공하지 못했다. PARP1-매개 괴사는 실험적 종양에서 과도한 방사선 노출 및/또는 고도로 독성인 화학 요법 물질 가령 독소루비신의 투여에 의해서만 유발될 수 있다. PARP1-매개 괴사 활성화를 위한 독성 물질을 사용하는 또 다른 문제는, 물질이 p53 단백질을 임계치 이하 수준으로 또한 활성화시켜, 효과적으로 PARP1 효소의 p53-유도 단편화를 통해 PARP1-매개 괴사를 불능화시키는 것이다. 종양 이내에 약물 분포는 물리 및 구조 제약으로 인해 비균질인 것을 감안할 때, 독성 물질은 PARP1이 없는 암 종양 질량의 많은 부분을 동시에 만들고 그러므로 PARP1-매개 괴사에 민감하지 않은 것을 추론했다.
많은 임상적 암 경우에서 해결되어야 할 문제는, 몇몇 암은 종래의 항암 약물에 선천적으로 내성이고 다른 암은 전신성 치료 과정 동안 다제 내성으로 발달하여, 치료 실패를 야기하는 것이다. 방사선 및 화학 요법 물질의 과도한 투여를 통해 PARP1-매개 종양 괴사를 활용하는 것이 암을 치료하기 위해 사용된다는 이론적 제안이 있었지만, 이 잠재적인 결과는, 치료의 내재하는 독성 및 상기 언급된 메커니즘의 내재하는 자기 모순적 성질로 인해 어렵다는 것을 깨달았다. 따라서, PARP1-매개 종양 괴사를 적극적으로 유도하는 것에 기초하는 조성물 및/또는 치료 방법을 발견할 충족되지 않은 필요가 남아있다. 게다가, 종양 괴사 공정을 방해하지 않고 또는 과도하게 독성이지 않은 그러한 유도 인자를 종양 조직에 구체적으로 전달할 수 있는, 담체 및 표적화 시스템을 포함하는 조성물 및/또는 치료 방법은 매우 요망된다. 광범위한 암 유형 및/또는 약물 내성 특성에 대해 필요한 종양파괴성 투여량을 감소시키고, 건강한 조직 내 요망되지 않는 부작용을 감소시키키 위한 계속된 요망이 또한 있다.
아연 염의 신경독성을 평가하는 보고는, 단순 아연 염 (400 mM 또는 26 μg/mL)으로부터의 높은 농도의 아연 이온은 PARP/PARG-매개 NAD+ 및 ATP 고갈 및 그 다음 배양된 피질 세포 내 괴사를 유발한다는 것을 기술한다 (NPL6). 하지만, 보고는, 아연 염의 종양파괴성 활성 또는 암에 대항하는 그들의 치료적인 용도를 연구하지 않았다.
면역 세포에 대한 아연 피리티온의 독성을 평가하는 보고는, 아연 피리티온의 나노몰 농도는, 쥐 흉선 세포, 쥐 비장 림프구, 사람 Ramos B, 및 사람 Jurkat T 세포 (NPL7)를 포함하는, 다양한 백혈구-유래 세포 내 아연-특이적 세포자멸사를 유발한다는 것을 보여주었다. 보고는, 아연 피리티온은, 세포 괴사를 차단하는 효과를 갖는 카스파제 9의 활성화를 통해 세포자멸사를 유발한다는 것을 공개했다 (NPL11). 종합적으로, 이들 보고는, 아연 피리티온의 나노몰 투여량은 연구된 면역 세포 내 세포 자멸사를 유발하고 세포 괴사를 유발하지 않는다는 것을 명시한다.
후에, 미세몰 농도의 아연 피리티온 (1-10 mM)은 안드로겐-의존성 LNCaP 및 안드로겐-독립성 PC3, DU145 전립선 암 세포주 내 ATP-고갈 및, 결국, ERK 및 PKC-의존성 괴사를 끌어냈다는 것을 보여주었다 (NPL2). 하지만, 괴사를 끌어내기 위한 NPL2에서 사용되는 아연 피리티온의 투여량은 식이 요법 투여 (240 ppm)의 9~14 일 이후 랫트에서 진행성 뒷-다리 약화, 운동 실조증, 근 위축을 갖는 척추 후만증 및 음경 탈출증의 임상적 증상과 함께 급성 신경 독성을 초래하는 것으로 이전에 보여졌다 (NPL10).
따라서, 아연 피리티온은, 물질의 높은 (mM) 농도를 요구하는, 전립선 암 세포주에 대항하여 선택적 세포 괴사를 초래할 수 있었다는 보고가 있었지만 (NPL2), 아연 피리티온은 그러한 농도에서 심각한 및 영구적인 신경독성을 초래하는 것으로 나타났고 (NPL12), 이는 아연 피리티온을 항종양 치료제로 개발하는 것을 꺼려하게 만들었다. 게다가, NPL2는 다중 암 세포 유형에 대항하여 광범위 항암 활성을 입증하지 않았고, MDR1 또는 MRP1 다제 내성 유전자 과발현으로부터 발생하는 약물 내성을 역전시키는 것에 대한 효능을 보여주지 않았고, 또는 임의의 동물 암 모델 내 괴사 효능을 입증하지 않았다.
NPL5는 인슐린-모방 아연 (2+) 복합체를 개발하고 시험관 내 인슐린-모방 활성 뿐만 아니라 아연(감마-폴리글루탐산) 복합체의 유형-2 당뇨 KKAy 마우스에서의 생체 내 항당뇨 효과를 조사했다. 구체적으로, 연구는, 감마-폴리글루탐산-복합체화된 아연으로 체중 kg 당 10-20 mg Zn의 30 일 동안의 경구 투여는 KKAy 마우스 내 고혈당을 정상화시켰고, 손상된 글루코오스 내성을 개선했고, HbA(1c) 수준을 상승시켰고, ZnSO4을 이용한 처리에 관한 대사 증후군을 보여주었다 (NPL5). NPL5에서, 저자는, 아연(감마-폴리글루탐산) 복합체는 그들의 높은 혈당-강하 효과 및 유형-2 당뇨 KKAy 마우스에서의 인슐린의 세포 분비 및 인슐린 내성에서의 교란을 약화시키는 그들의 능력을 통해 항당뇨 역가를 갖는다고 결론을 내렸지만, 그들은 복합체의 인슐린-모방 활성의 원인이 되는 작용의 메커니즘을 이해하지 못했고, 그들은 아연(감마-폴리글루탐산) 복합체에 대한 항종양 활성 또는 약물-난치성 암 유형을 치료하는 것에 대한 그의 효과를 어떤 식으로든 제시하지 못했다.
요약하자면, 본 업계는 심지어 제안하지도 않았고, 중요한 약물-내성 특성을 갖는 것을 포함하는, 생체 내 광범위한 암을 효과적으로 치료하기 위한 상기-언급된 목적을 달성하기 위해, 및 더욱이 심각한 독성 위험 없이 그렇게 하기 위해 아연 화합물을 사용하는데 있어서 훨씬 덜 성공적이었다. 이런 이유로, 암을 치료하기 위한 많은 암 유형 전반에 걸쳐 작동하는 임상적으로 활성이고 안전한 및, 독성 문제 없이 심지어 약물-내성 표현형 (예를 들어, 기능 장애 p53, MDR1 과발현, MRP1 과발현)을 갖는 아연 조성물에 대한 충족되지 않은 필요가 있다. 이 제를 해결하기 위해 발명자는 분야 내 체계적인 연구를 수행했고 이들 필요를 충족하는 아연 복합체의 제제를 개발했고, 그에 따라 본 명세서에서 기술된 것과 같이 발명자의 발명을 완성했다.
참고 문헌
NPL1. Aoki, T., Kataoka, H., Ishibashi, R., Nakagami, H., Nozaki, K., Morishita, R., and Hashimoto, N. (2009). Pitavastatin suppresses formation and progression of cerebral aneurysms through inhibition of the nuclear factor kappaB pathway. Neurosurgery 64, 357-365; discussion 365-356.
NPL2. Carraway, R.E., and Dobner, P.R. (2012). Zinc pyrithione induces ERK- and PKC-dependent necrosis distinct from TPEN-induced apoptosis in prostate cancer cells. Biochimica et Biophysica Acta 1823, 544-557.
NPL3. Cho, Y.S., and Park, S.Y. (2014). Harnessing of Programmed Necrosis for Fighting against Cancers. Biomolecules & Therapeutics 22, 167-175.
NPL4. Cvek, B., and Dvorak, Z. (2007). Targeting of nuclear factor-kappaB and proteasome by dithiocarbamate complexes with metals. Current Pharmaceutical Design 13, 3155-3167.
NPL5. Karmaker, S., Saha, T.K., Yoshikawa, Y., and Sakurai, H. (2009). A Zinc(II)/poly(gamma-glutamic acid) complex as an oral therapeutic for the treatment of type-2 diabetic KKAy mice. Macromolecular Bioscience 9, 279-286.
NPL6. Kim, Y.H., and Koh, J.Y. (2002). The role of NADPH oxidase and neuronal nitric oxide synthase in zinc-induced poly(ADP-ribose) polymerase activation and cell death in cortical culture. Experimental Neurology 177, 407-418.
NPL7. Mann, J.J., and Fraker, P.J. (2005). Zinc pyrithione induces apoptosis and increases expression of Bim. Apoptosis : An International Journal on Programmed Cell Death 10, 369-379.
NPL8. Mason, R.P. (2011). Optimal therapeutic strategy for treating patients with hypertension and atherosclerosis: focus on olmesartan medoxomil. Vascular Health and Risk Management 7, 405-416.
NPL9. Nakano, A., Hattori, Y., Aoki, C., Jojima, T., and Kasai, K. (2009). Telmisartan inhibits cytokine-induced nuclear factor-kappaB activation independently of the peroxisome proliferator-activated receptor-gamma. Hypertension Research : Official Journal of the Japanese Society of Hypertension 32, 765-769.
NPL10. Snyder, D.R., de Jesus, C.P., Towfighi, J., Jacoby, R.O., and Wedig, J.H. (1979). Neurological, microscopic and enzyme-histochemical assessment of zinc pyrithione toxicity. Food and Cosmetics Toxicology 17, 651-660.
NPL11. Uchiyama, R., Kawamura, I., Fujimura, T., Kawanishi, M., Tsuchiya, K., Tominaga, T., Kaku, T., Fukasawa, Y., Sakai, S., Nomura, T., et al. (2007). Involvement of caspase-9 in the inhibition of necrosis of RAW 264 cells infected with Mycobacterium tuberculosis. Infection and Immunity 75, 2894-2902.
NPL12. Vaitilingam, B., Chelvam, V., Kularatne, S.A., Poh, S., Ayala-Lopez, W., and Low, P.S. (2012). A folate receptor-a-specific ligand that targets cancer tissue and not sites of inflammation. The Journal of Nuclear Medicine 53, 1127-1134.
NPL13. Leamon, C.P., Parker, M.A., Vlahov, I.R., Xu, L., Reddy, J.A., Vetzel, M., and Douglas, N. (2002). Synthesis and biological evaluation of EC20: a new folate-derived, 99mTc-based radiopharmaceutical. Bioconjugate Chemistry 13, 1200-1210.
본 명세서에서 공개된 조성물, 약제학적 제제, 및 방법은 아연 및 γ-폴리글루탐산 (γ-PGA)의 복합체는 다양한 사람 및 마우스 암 세포주 내 세포 괴사를 유발할 수 있다는 놀라운 관찰에 기초한다.
본 발명은 PARP1-매개 세포 괴사 메커니즘을 촉발하는 아연-함유하는 γ-폴리글루탐산 조성물에 관한 것이다. 이론에 의해 제한되는 것 없이, 아연은 분명히 PARP1을 과-활성시키고, 이는 차례차례 세포 내 ATP 및 NAD+의 고갈로 이어진다. 결과적으로, 세포는 에너지 공급원을 고갈시키고, 그 다음 세포 괴사 경로로 진입한다.
괴사를 유발하는 이 메커니즘은 대부분의 암 세포 유형에서 유사하게 이용 가능할 것으로 예상되고 따라서 아연-함유하는 γ-폴리글루탐산 조성물은 광범위 종양파괴성 활성을 입증한다. 게다가, 이 메커니즘은 상이한 종양파괴성 메커니즘에 대하여 약물-내성 표현형을 갖는 종양은 또한 이 PARP1-매개 메커니즘에 대응할 수 있다는 것을 암시한다.
본 발명에 따른 조성물은 (i) 활성 성분으로서 아연(II) 종 (동등하게는, Zn2+) 및 (ii) 비개질된 형태 및/또는 개질된 형태인 담체로서 γ-PGA를 포함하고, 여기서 엽산 및/또는 RGD 종양 표적화 펩티드는 γ-PGA에 공유 결합된다. 조성물은 Zn(II) 및 γ-PGA의 종양 세포 (그들을 더욱 감수성으로 만드는) 종양파괴성 효과를 민감하게 하는 NF-kB 억제제 또는 NF-kB 신호전달 캐스케이드 억제제를 추가로 포함할 수 있다.
조성물은 경구 투여를 위해 제제화될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 위의 강력하게 산성인 환경에서 복합체로부터 아연 이온의 해리를 예방, 지연, 또는 약화시키기 위해, 위장-내성 물질, 가령 장용성 결합 및 코팅, 또는 왁스 코팅을 포함하는 경구 제제가 제공된다.
본 발명은 또한 상기-언급된 조성물 및 약제학적 제제를 제조하기 위한 방법, 및 그의 치료적인 용도에 관한 것이다.
본 발명의 하나의 목적은 PARP1-매개 종양 괴사를 적극적으로 유발할 수 있는 조성물을 제공하는 것이고, 추가적인 목적은 환자에게 독성이 아닌 조성물 및 제제를 사용하여 그렇게 하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 환자 내 약물-내성 표현형을 갖는 매우 다양한 종양 및 암 세포의 치료에서의 사용을 위한 약제학적 제제를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 종양 세포로의 Zn(II)의 전달을 표적으로 할 수 있는 γ-PGA 담체를 포함하는 조성물을 제공하는 것이다. 또한, 본 발명의 목적은 감소된 투여량 필요조건을 갖는, 또는 건강한 조직 내 원치 않는 부작용의 감소된 프로파일을 갖는 강력한 종양파괴성 물질을 제공하는 것이다.
환자 내 종양에서 PARP1-매개 종양 괴사를 유도하는 방법의 하나의 구체예는 종양을 갖는 환자에게 치료적으로 효과적인 양의 Zn(II) 염 및 γ-폴리글루탐산 담체를 투여하는 것을 포함하고 여기서 상기 γ-폴리글루탐산 담체는 γ-폴리글루탐산 및/또는 종양-표적화 γ-폴리글루탐산 유도체 및/또는 전하-개질된 γ-폴리글루탐산 유도체 및/또는 종양-표적화 전하-개질된 γ-폴리글루탐산 유도체를 포함한다. 방법의 또 다른 구체예에서, 치료적으로 효과적인 양의 Zn(II) 염 및 γ-폴리글루탐산 담체 (달리 명시되지 않는 한, γ-폴리글루탐산 담체 또는 조성물에 대한 언급은 상기 열거된 것과 같이 γ-폴리글루탐산의 다양한 유형의 유도체를 포함하는 조성물을 포함한다)는 약물-내성 표현형을 갖는 종양을 갖는 환자에게 투여된다.
방법의 또 다른 구체예에서, Zn(II) 염 및 γ-폴리글루탐산 담체의 치료적으로 효과적인 양은 치료적인 양의 NF-kB 억제제 및/또는 NF-kB 신호전달 캐스케이드 억제제와 조합하여 투여된다.
하나의 구체예에서, 치료적인 양의 Zn(II) 염 및 γ-폴리글루탐산 담체는 고체 제형으로 또는 액체 제형으로 함께 투여된다. 몇몇의 구체예에서, 고체 제형은 정제, 미니탭, 경질 캡슐, 연질 캡슐, 캐플릿, 젤캡, 경구 붕해 필름, 과립, 펠렛, 페이스트, 및 분말 사쉐로부터 선택된다. 몇몇의 구체예에서, 액체 제형은 액체 용액, 액체 현탁액, 시럽, 및 경구 분무로부터 선택된다.
몇몇의 구체예에서, 치료적인 양의 Zn(II) 염 및 γ-폴리글루탐산 담체는 경구 투여 또는 주사 투여에 의해 함께 투여된다.
본 발명의 하나의 구체예는 (i) 약제학적으로 허용가능한 Zn(II) 염, (ii) 종양-표적화 모이어티 및/또는 전하-개질 모이어티를 함유하는 γ-폴리글루탐산, 및 (iii) γ-폴리글루탐산을 임의로 추가로 포함하는 것을 포함하는 약제학적 조성물이다.
몇몇의 구체예에서 상기 종양-표적화 모이어티는 엽산, 디메틸 테트라하이드로폴레이트 (DMTHF), 및 RGD 펩티드로부터 선택되고, 상기 모이어티의 임의의 조합은 γ-폴리글루탐산에 공유 결합된다. 몇몇의 구체예에서 상기 전하-개질 모이어티는 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산, 1,4,7,10-테트라시클로도데칸-N,N',N'',N'''-테트라아세트산, 및 디에틸렌트리아민 펜타아세트산으로부터 선택되고, 상기 모이어티의 임의의 조합은 γ-폴리글루탐산에 공유 결합된다.
또 다른 구체예에서, 약제학적 조성물은 γ-폴리글루탐산을 추가로 포함한다. 또 다른 구체예에서, 약제학적 조성물 내에서 상기 Zn(II) 염의 실질적인 부분은 Zn(II) 이온의 γ-폴리글루탐산 및/또는 상기 종양-표적화 모이어티 및/또는 상기 전하-개질 모이어티와의 결합 복합체이다. 또 다른 구체예에서, 약제학적 조성물 내에서 Zn(II) 염 및 (ii) 상기 γ-폴리글루탐산 중합체는 고체 혼합물 내에 함께 혼합된다.
또 다른 구체예에서, 약제학적 조성물은 NF-kB 억제제 및/또는 NF-kB 신호전달 캐스케이드 억제제를 추가로 포함한다.
다른 구체예에서, 임의의 상기 약제학적 조성물은 고체 제형으로서 제제화된다. 몇몇의 추가적 구체예에서, 고체 제형은 위장-내성 결합제 및/또는 위장-내성 외부 코팅을 추가로 포함한다. 다른 구체예에서, 임의의 상기 약제학적 조성물은 액체 제형으로서 제제화된다. 몇몇 구체예에서, 액체 제형은 주사로 제제화된다. 추가적인 구체예에서, 액체 제형은 위장-내성 물질을 추가로 포함하는 약제학적 조성물의 현탁액이다. 추가적인 구체예에서, 액체 제형은 임의의 상기 약제학적 조성물 및, 임의로, 위장-내성 물질을 포함하는 왁스-코팅된 미세입자의 현탁액이다.
환자 내 종양을 치료하기 위한 방법의 하나의 구체예는 종양을 갖는 환자에게 약제학적 조성물의 앞서 말한 구체예 중 임의의 하나에 따른 약제학적 조성물의 치료적으로 효과적인 양을 투여하는 것을 포함한다. 방법의 추가의 구체예에서, 앞서 말한 약제학적 조성물의 치료적으로 효과적인 양은 약물-내성 표현형을 갖는 종양을 갖는 환자에게 투여된다.
본 발명의 이들 및 다른 목적 및 특징은 다음의 본 발명의 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용 및 청구범위로부터 본 업계의 숙련가에게 분명해질 것이다.
도면 1은 PARP1-매개 괴사의 개요이다.
도면 2는 ZnPGA 조성물의 하나의 구체예로 처리된 사람 암 세포주의 시험관 내 유세포 분석의 결과를 보여준다.
도면 3은 ZnPGA 조성물의 구체예를 이용하여 LL2 쥐 폐 암 동종이식편을 처리한 결과를 보여준다.
도면 4는 ZnPGA 조성물의 구체예를 이용하여 마우스 내 H460 사람 폐 암의 피하 이종이식을 처리한 결과를 보여준다.
도면 5A 및 5B는 HeLa 세포 및 MCF7 세포를, 각각, Zn(II)/γ-PGA 조성물을 이용하여 처리한 결과를 보여준다.
도면 6은 Zn(II)/γ-PGA 조성물을 이용하여 HEK-293 세포, HeLa 세포, MCF7 세포, 및 A549 세포를 처리한 결과를 보여준다.
본 명세서에서 기술된 조성물, 제제, 및 방법에서 사용되는 성분은 약제학적 용도를 위한, 또는 식품에서의 사용을 위한, 또는 사람 섭취를 위한 제품에서의 사용을 위한 규제 당국에 의해 승인된 등급이다. 몇몇 사례에서 성분은 약제학적 등급 또는 의학 등급 화합물 또는 물질이다.
본 명세서에서 사용되는 약어의 의미는 다음과 같다: "kDa"는 킬로달톤을 의미한다; "wt%"는 중량 퍼센트를 의미한다.
아연은 아연(II) 염 (동등하게는, Zn2+ 염)으로서 제공되고, 여기서 반대 이온 (음이온)은 임의의 적합한 무기 또는 유기 음이온일 수 있다. 적합한 음이온은, 독성이 없는 것을 포함하는, 신체가 용인하는 것들이다. 일반적으로, X 및 Y가 적합한 음이온인 경우, 아연 염은 화학식 Zn2+X2- 또는 Zn2+(X-)2 또는 심지어 Zn2+(X-)(Y-)에 의해 나타낼 수 있다. 음이온은 승인된 약제학적 성분인 음이온의 그룹으로부터 선택될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 아연(II) 염은 약제학적으로 허용가능한 아연 염이고, 여기서 상기 아연(II) 염은 약제학적 조성물에서의 사용을 위해 승인되어진 아연(II) 염의 그룹으로부터 선택된다. 음이온은 FDA-승인된 약제학적 생성물의 성분인 음이온의 그룹으로부터 선택될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 아연(II) 염은 약제학적으로 허용가능한 아연 염이다. 다른 구체예에서, 음이온은, 승인된 식품 첨가물 또는 영양 보충제의 성분인 음이온의 그룹으로부터 선택될 수 있다. 아연 염의 예시는 아연 클로라이드, 아연 설페이트, 아연 시트레이트, 아연 아세테이트, 아연 피콜리네이트, 아연 글루코네이트, 아미노산-아연 킬레이트, 가령 아연 글리시네이트, 또는 본 업계에서 알려진 및 사용되는 다른 아미노산을 포함한다. 둘 또는 그 이상의 상이한 아연 염은 임의의 조성물 또는 제제 내 Zn(II)을 제공하기 위한 임의의 비율로 함께 사용될 수 있다.
몇몇 구체예에서, Zn(II)은 조성물 또는 제제 내 γ-폴리글루탐산 화합물에 대해 복합체화되어 제공된다. 전형적으로, Zn(II) 및 γ-PGA ("ZnPGA")의 복합체화된 형태가 제공될 때, ZnPGA는 정제되고 유리(free) Zn(II) 이온 뿐만 아니라 Zn 양이온에 대한 원래의 반대 이온은 공정 내에서 실질적으로 제거된다.
단일 고체 제형 내에 포함되는 아연의 양은 일반적으로 약 1 내지 약 100 mg의 아연 (아연(II) 이온)의 범위이다. 따라서, 제제화된 조성물에서 사용되는 아연 염(들)의 특정한 양은 염의 양은 반대 이온의 중량을 고려해야 하기 때문에 더 높을 것이다. 아연(II)만을 고려하면, 제형 내 제공되는 양은 약 100 mg 까지, 약 75 mg 까지, 약 50 mg 까지, 약 25 mg 까지, 약 10 mg 까지의 아연 , 또는 약 5 mg 까지일 수 있다. 고체 제형으로 제공되는 아연(II)의 양은 일반적으로 적어도 약 1 mg이다. 비교로서, 흔히 이용 가능한 보충제는, 예를 들어, 20, 25, 30, 50, 75, 및 심지어 100 mg의 아연을 제공한다. 이 범위 내, 또는 심지어 더 높은 임의의 아연의 양은, 제공되는 양이 흡수될 아연의 생리적으로 과도한 수준을 초래하지 않는 한 허용가능하다. 하지만, 과도한 수준 및 이로부터의 위험으로 간주될 수 있는 것은, 종양을 치료하는 것에 의해 얻어진 치료적인 이점에 대항하여 균형을 이루는 것이다. 대부분의 성인에서 아연의 상한 섭취량은 약 40 mg/일 (및 아이들을 위해서는 더 낮다)이지만, 경구적으로 섭취된 고체 제형 내 모든 아연은 흡수되지 않고; 아연의 일부는 흡수되지 않고 신체를 통과한다는 것이 인식되어야 한다. 흡수된 아연의 양은 제제에 따라 또한 달라질 것이기 때문에, 특정한 제제 내 아연 함량에 대한 상한은, 제제에 의해 제공되는 흡수율의 수준을 알아내고, 그 다음 제제를 투여하는 것에 의해 얻어진 치료 내 임의의 치료적인 이점을 고려하여, 그에 따른 제제 또는 주어진 제형에 대한 투여량을 조절할 수 있다, 본 업계에서 알려진 방법에 의해 테스트될 수 있다.
액체 제형의 조성물 또는 제제 내 제공되는 아연의 농도는 일반적으로 약 1 mg/L 내지 약 100 g/L 의 아연 (아연(II) 이온)의 범위이다. 이것은 약 0.0001 wt% 내지 약 10 wt%의 아연의 범위에 부합한다. Zn(II)의 농도는 적어도 약 10 mg/L, 또는 적어도 약 100 mg/L, 또는 적어도 약 1 g/L, 또는 적어도 약 10 g/L 일 수 있거나, Zn(II)의 농도에 대한 범위는 임의의 2 개의 이들 예시적 농도 이내에 속할 수 있다. 하나의 구체예에서, 농도는 약 100 mg/L 약 500 mg/L의 범위일 수 있다. 제형 내 제공되는 액체의 양은 총 투여량을 결정할 것이다. 예를 들어, 100 mL 양의 액체는 예시적 범위에 대해 약 10 mg 내지 약 50 mg의 Zn(II)을 제공할 것이다. 또 다른 구체예에서, 농도는 약 1000 mg/L (1 mg/mL)일 수 있고, 따라서 밀리리터 당 약 1 mg을 제공한다. 고체 제형 내 아연의 투여량에 관한 본 개시는 액체 투여량으로서 제공하기 위한 Zn(II) 용액의 양에 대한 지침으로서 사용될 수 있다. 실시예 4에서 공개된 것과 같이, 마우스를 Zn(II) (160 mg/L과 동등한)의 160 mg/mL 용액으로 처리했고 16 mg/일/몸무게kg 의 Zn(II)의 생리적으로 관련있는 투여량을 투여했다.
아연은 현탁된 액체 내 고체의 일부로서 또한 제공될 수 있다. 제공되는 아연(II)의 양 및 현탁액의 부피는 고체 및 액체 제형에 대해 상기 설명된 지침을 따른다.
감마-폴리글루탐산 (그렇지 않으면 γ-폴리글루탐산 또는 γ-PGA)은 글루탐산, 아미노산의 중합체이고, 여기서 중합체 골격이 아미노산 측쇄 (γ-탄소에서) 내 아미노 그룹 및 카르복실 그룹이 결합하는 펩티드 결합에 의해 형성된다. γ-PGA는 글루탐산의 L 이성질체, D 이성질체, 또는 DL 라세미체로부터 형성될 수 있다. 임의의 이들 형태가 사용될 수 있고, 둘 또는 그 이상의 상이한 형태는 임의의 비율로 함께 사용될 수 있다. γ-PGA의 다양한 이성질체 형태는 천연 공급원으로부터 합성 또는 유도될 수 있다. γ-PGA는, 예를 들어, 일본 낫토에서 및 해초에서 발견된다. 미생물은 대개 L 이성질체로부터 폴리(아미노산)만을 제조하는 반면, γ-PGA를 제조하는 특정 박테리아 효소는 성질체 또는 둘 모두 이성질체로부터 중합체를 제조할 수 있다.
다양한 크기 및 다양한 중합체 분산의 γ-PGA가 사용될 수 있다. γ-PGA의 중합체 분자량은 일반적으로 적어도 약 1 kDa 및 최대 1000 kDa이다. 몇몇 구체예에서, γ-PGA의 중합체 분자량은 적어도 약 1 kDa, 또는 적어도 약 5 kDa, 또는 적어도 약 10 kDa, 또는 적어도 약 20 kDa, 또는 적어도 약 30 kDa, 또는 적어도 약 35 kDa, 또는 적어도 약 40 kDa, 또는 적어도 약 50 kDa이다. 몇몇 구체예에서, γ-PGA의 중합체 분자량은 최대 700 kDa, 또는 최대 500 kDa, 또는 최대 300 kDa, 또는 최대 200 kDa, 또는 최대 100 kDa이다. 허용가능한 중합체 분자량 범위는 임의의 상기 명시된 중합체 분자량 값으로부터 선택될 수 있다. 구체예에서, 중합체 분자량은 약 5 kDa 내지 약 500 kDa의 범위이다. 또 다른 구체예에서, 중합체 분자량은 약 5 kDa 내지 약 300 kDa의 범위이다. 구체예에서, 중합체 분자량은 약 50 kDa 내지 약 100 kDa의 범위이다. 하나의 구체예에서, 중합체 분자량은 약 100 kDa이다. 하나의 구체예에서, 중합체 분자량은 약 50 kDA이다. 조성물 또는 제제는 γ-PGA 의 하나 또는 그 이상의 중합체 분자량 형태를 포함할 수 있다.
중합체 분자량은 전형적으로, 예를 들어, 겔 투과 크로마토그래피 (GPC)에 의한 측정을 기초로 하여 수 평균 분자량 (Mn)으로서 주어진다. 상기 중합체 질량은 Mn로서 언급되고; 다른 측정 기술은, 예를 들어, 질량 (중량) 평균 분자량 (Mw)을 결정하기 위해 사용될 수 있고, 임의의 주어진 중합체에 대한 설명은 다양한 중합체 질량 표현 중 전환될 수 있다.
고체 제형 내에 포함되는 γ-PGA의 양은 일반적으로 약 10 wt% 내지 약 40 wt%의 범위이다. 몇몇 구체예에서 양은 약 20 wt% 또는 약 30 wt%이다. 사용되는 양은 일반적으로 아연 및 폴리글루탐산 단량체 단위, 아연 염의 질량 (반대 이온의 중량을 고려함), 및 허용가능한 제제화된 제형을 제공하기 위해 필요한 부형제의 양 사이의 요망되는 몰 비율을 기반으로 한다. 예를 들어, 사용되는 γ-PGA 및 아연 염의 양이 더 많을수록, 주어진 전체 제형 크기에 대해 부가될 수 있는 부형제의 양이 더 적다. 본 업계의 숙련가는 안정한 제형을 얻기 위해 필요한 활성 성분의 양 대 부형제의 양 및 유형의 균형을 용이하게 맞출 수 있다. 아연 및 γ-PGA 사이의 요망되는 비율은 아연의 밀리그램 대 제형 당 γ-PGA의 wt%의 비율로서 또한 표현될 수 있다. 예시적 비율은 5 mg:10 wt%; 5 mg: 20 wt%; 5 mg: 40 wt%; 30 mg:10 wt%; 30 mg: 20 wt%; 30 mg: 40 wt%; 또는 심지어 100 mg:10 wt%; 100 mg: 20 wt%; 100 mg: 40 wt%; 또는 이들 예시적 비율에 의해 설명되는 범위 이내 값의 또는 본 명세서 내 각각의 성분에 대해 언급된 값으로부터 분명한 임의의 다른 설정을 포함한다.
액체 제형 내 포함되는 γ-PGA의 양은 일반적으로 약 0.01 wt% 내지 약 10 wt%의 범위이다. 몇몇 구체예에서 양은 약 0.1 wt% 내지 약 1 wt%이다.
사용되는 양은 일반적으로 아연 및 폴리글루탐산 단량체 단위 사이의 요망되는 몰 비율, γ-PGA 담체의 성질 (종양-표적화 모이어티 및/또는 전하-개질 모이어티로 개질되거나 개질되지 않았는지), 및 γ-PGA 담체와 Zn(II) 복합체의 형성의 정도를 기초로 한다. 예를 들어, 실시예 1 및 2 에서 보여진 것과 같이, ZnPGA 복합체는, 대략 400 mg/mL (mg/L)의 복합체화된 아연과 대략 1 wt% γ-PGA를 포함하는 용액으로서 얻어졌다. 이론에 구속되지 않고, 액체 제형을 제조할 때, 아연 염을 γ-PGA 담체와 용액 내 조합하는 것은 일반적으로 아연 이온 및 γ-PGA 담체의 복합체의 형성을 야기하고, 형성된 복합체를 분리하는 것 또는 정제하는 것의 별도의 단계는 필요하지 않을 수 있다는 것이 이해되어야 한다. 다른 예시적 비율은 액체 제형 내 포함되는 γ-PG의 양과 조합하여 액체 제형 내 조성물 또는 제제 내 제공되는 아연의 농도에 관한 상기 개시를 기초로 하는 범위를 포함한다.
효과적인 양의 Zn(II) 염 및 γ-폴리글루탐산 담체를 갖는 적합한 고체 또는 액체 조성물 및 제제에 도달하기 위해, γ-PGA 담체 및 아연의 상대적인 양 및 각각의 농도는 본 개시에 따라서 본 업계의 숙련가에 의해 용이하게 조절될 수 있다. 본 명세서에서 공개된 조성물에 있어서, γ-PGA 성분은 γ-PGA로서 또는 γ-PGA 담체로서 나타내어질 수 있다. 언급한 바와 같이, γ-PGA의 유도체는 또한 고려되고, 개질된 γ-PGA 또는 γ-PGA 접합체 등으로서 다양하게 나타내어질 수 있다.
γ-PGA은 종양-표적화 모이어티를 포함할 수 있다. 그러한 모이어티는 엽산, N5, N10-디메틸 테트라하이드로폴레이트 (DMTHF), 및 RGD 펩티드로부터 선택될 수 있다. 임의의 또는 모든 상기 모이어티는 γ-폴리글루탐산에 공유 결합되어 폴레이트 접합체 및/또는 DMTHF 접합체 및/또는 γ-PGA의 RGD 펩티드 접합체를 형성할 수 있다. 폴레이트 허용체 단백질은 많은 사람 종양 내 종종 발현된다.
폴레이트 자연적으로 폴레이트 허용체에 대해 높은 친화성을 갖고, 추가로, 결합 시, 폴레이트 및 부착된 접합체는 내포작용에 의해 세포 내로 수송될 수 있다. 이 방식으로, 엽산으로 개질된 ZnPGA는 종양 세포를 표적으로 하고 축적될 수 있고 종양 세포의 내부에 아연(II)을 전달한다. DMTHF는 폴레이트 허용체에 대해 높은 친화성을 갖는다고 또한 알려져있다. DMTHF의 제조는 NPL13 내에 기술된다. 게다가, 폴레이트 허용체 (FR), FR-α 및 FR-b의 2 개의 주요 이소폼이 있고, DMTHF는 FR-b (NPL12)보다 FR-α에 대해 더 높은 친화성을 갖는 것으로 나타났다. 이는, FR-α는 많은 악성 세포 유형에서 과발현되는 반면, FR-b는 염증성 질환에 관련된 대식세포 상에서 과발현되기 때문에 종양 세포 표적화에 유익하고, 따라서, γ-PGA에 접합된 DMTHF는 종양 세포에 의해 표현된 폴레이트 허용체에 선택적으로 결합할 수 있는 접합체를 제공한다. 유사하게, RGD 펩티드는, 종양 내피 세포 상에서 뿐만 아니라 몇몇 종양 세포 상에서 표현된 α(V)b(3) 인테그린에 강력하게 결합하는 것으로 알려져 있다. 따라서 RGD 접합체는 부위로의 항종양 물질의 표적화 및 전달에 대한 전략이다. 본 발명에서 고려된 것과 같이, γ-PGA는 임의의 하나 또는 둘, 또는 모든 이들 종양 표적화 물질과 접합 (즉, 개질)될 수 있고, 둘 또는 그 이상이 존재할 때, 이들 물질의 상대적인 비율은 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, γ-PGA 담체는 γ-PGA와 (a) 엽산, (b) DMTHF, (c) RGD, (d) 엽산 및 DMTHF, (e) 엽산 및 RGD, (f) DMTHF 및 RGD, 또는 (g) 엽산, DMTHF, 및 RGD의 접합체를 포함할 수 있다. 다른 유사한 종양 표적화 모이어티는 또한 본 발명의 범위 이내이다.
γ-PGA는, 엽산과의, DMTHF와의, 및 RGD 펩티드와의 접합체를 형성하기 위해 사용될 수 있는, 각각의 글루탐산 단위의 α-탄소에서 유리(free) 카르복실산 그룹을 갖는다. 엽산은 글루탐산의 α-탄소 카르복실산 그룹과 커플링되어 둘을 결합하는 아미드 결합을 형성할 수 있는 환외 아민 그룹을 갖는다. 엽산 내와 같은 동일한 환외 아민 그룹은 아미드 결합 형성을 위해 DMTHF에서 이용 가능하다. RGD 접합체는 또한 본 업계에서 잘 알려져 있고, 예를 들어, RGD 내 유리(free) α-아미노 그룹을 통해, α-탄소 카르복실산 그룹에 또한 유사하게 공유 결합될 수 있다. 그렇지 않으면, 각각의 모이어티는 간격제 그룹, 가령, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 아민을 통해 γ-PGA에 접합될 수 있다. 엽산 및 시트르산을 포함하는, γ-PGA에 대한 접합 반응의 예시는 WO 2014/155142 (2014년 10월 2일 간행됨)에서 발견될 수 있다.
γ-PGA은 전하-개질 모이어티를 포함할 수 있다. 그러한 모이어티는 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA), 1,4,7,10-테트라시클로도데칸-N,N',N'',N'''-테트라아세트산 (DOTA), 및 디에틸렌트리아민 펜타아세트산 (DTPA)으로부터 선택될 수 있다. 임의의 조합의 상기 모이어티는, 다시, α-탄소 카르복실산에서, γ-폴리글루탐산에 공유 결합될 수 있다. 시트르산은 에스테르 결합을 형성하는 것에 의해 γ-PGA의 α-탄소 카르복실산 그룹에 접합될 수 있다. (예를 들어, WO 2014/155142 참조.) EDTA, DOTA, 및 DTPA는, 예를 들어, 간격제 그룹을 사용하여 γ-PGA에 결합되어 γ-PGA의 α-탄소 카르복실산 그룹에 이들 모이어티의 아민을 결합시킬 수 있다. 많은 선택지는 본 업계의 숙련가에게 이용 가능하다. 전하-개질 모이어티는 Zn(II) 이온을 킬레이트화하기 위한 부위로서 사용될 수 있고, 전하-개질은 ZnPGA 복합체의 수송 및 가용성에 또한 영향을 미칠 것이고 따라서 담체 및 ZnPGA 복합체의 약제학적 효과를 조정하기 위해 사용될 수 있다.
γ-PGA은 종양-표적화 및 전하-개질 모이어티 둘 모두를 포함할 수 있고, 두 유형의 모이어티의 이점 및 기능성은 γ-PGA 담체에 전해질 수 있다. 임의의 조합의 종양-표적화 및 전하-개질 모이어티는 γ-PGA에 접합될 수 있고, 모이어티의 상대적인 비율은 특히 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 조성물 및 제제는 NF-kB 억제제를 또한 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 것과 같은, NF-kB 억제제는, 직접 억제제 뿐만 아니라 신호전달 캐스케이드를 억제할 수 있는 화합물, 또는 NF-kB의 효과를 억제하고 그렇게 함으로써 종양 세포의 증식 또는 생존을 제한하는 임의의 화합물을 포함한다. 본 명세서에서 정의된 것과 같이 NF-kB 억제제로서 사용될 수 있는 예시적 화합물은 피롤리딘 티오카르바메이트 (PDTC) (NPL4), 텔미사르탄 (NPL9), 올메사탄 (NPL1), 발사르탄 (NPL8), 디설피람 (NPL4), 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다. 이들 억제제는, 그들이 종양 세포의 생존력을 제한하고 그렇게 함으로써 그들을 다른 종양파괴성 물질, 가령 대상 발명의 조성물 및 제제의 효과에 민감하게 하기 때문에, 민감화제로서 또한 나타내어질 수 있다. 실시예 4는 본 발명의 하나의 구체예에 따른 PDTC 및 제제를 함께-투여하는 것의 종양파괴성 효과를 보여준다.
액체 제제
아연(II) 및 γ-PGA 담체 성분은 액체로서 제제화될 수 있다. 적합한 액체 제제는 액체 용액, 액체 현탁액, 시럽, 및 경구 분무를 포함한다. 액체 용액은 경구적으로 섭취되거나, 그러한 정맥 내, 피 내, 근 내, 척추강 내, 또는 피하, 또는 직접 종양으로 또는 종양의 인접으로의 주사에 의해 투여될 수 있는 반면, 액체 현탁액, 시럽 및 분무는 일반적으로 경구 투여에 적절하다.
액체 제형을 제조하기 위한 방법
액체 제형을 제조하기 위한 방법은, 적합한 부형제와 함께, 요망되는 양의 (i) 아연 염(들) 및 γ-PGA 담체 및/또는 (ii) ZnPGA 복합체를 함께 혼합시키는 것을 포함한다. 몇몇 구체예는 제제 내 위장-내성 결합제 및/또는 코팅을 추가로 포함한다.
액체 용액 제제는 적합한 담체, 희석제, 완충제, 보존제, 또는 투여의 형태에 관해 적합하게 선택된 다른 부형제와 함께 제조될 수 있다. 예를 들어, 정맥 내 제제는 적합한 pH로 완충되어 및 등장화제와 함께 제조될 수 있다.
주사 또는 경구 전달에 적합한 액체 제제의 구체예는 아연(II) 염, γ-PGA 담체 (상기 기술된 것과 같이 비개질된 γ-PGA 및/또는 임의의 형태 의 개질된 γ-PGA), 및 물을 포함한다. 추가적인 구체예에서, 액체 제제는 완충제 및/또는 염, 가령 소듐 클로라이드를 추가로 포함할 수 있다. 완충제가 포함될 때, 바람직한 완충 pH는 약 pH 4 내지 약 pH 9의 범위이다. 주사될 때, 바람직하게는 용액은 주사될 용액과 등장성이고 적합한 pH이다. 하나의 구체예에서, 아연 설페이트 7수화물, γ-PGA, 및 소듐 클로라이드를 물 내에서 조합하고, 여기서 아연(II)의 농도는 1 mg/mL이고 γ-PGA는 10 mg/mL이다. γ-PGA의 중합체 분자량은 상기 기술된 임의의 범위로부터 선택될 수 있다. 하나의 구체예에서, 상기 분자량은 약 5 kDa 내지 약 100 kDa의 범위이고, 다른 구체예에서 상기 분자량은 약 1 kDa 내지 약 100 kDa의 범위이다. 임의의 구체예에서, γ-PGA의 하나 또는 그 이상의 중합체 분자량 형태는 포함될 수 있다.
몇몇 구체예에서, 아연 염(들) 및 γ-PGA 담체는 ZnPGA 복합체로서 제조될 수 있다. 일반적으로, ZnPGA 복합체를 형성하기 위해 아연 염(들) 및 γ-PGA 담체는, 예를 들어, 실시예 1 및 2 에서 기술된 것과 같이 조합되고 정제된다. 얻어진 ZnPGA 복합체의 용액은 희석되거나 실질적으로 건조되고 액체 제형을 제조하기 위한 절차에서의 사용을 위한 더욱 농축된 형태로 재구성될 수 있다. ZnPGA 복합체는 주사 용액으로서, 또는 액체 현탁액, 시럽, 또는 분무로서 제제화될 수 있다.
아연 염 및 γ-PGA 조성물은 본 발명의 방법에서의 사용을 위한 액체 현탁액으로서 제제화될 수 있다. 예를 들어, 첫째로, Zn(II) 염 및 γ-PGA 담체 (γ-PGA의 비개질된 및/또는 임의의 개질된 형태를 포함하는)의 혼합물을 포함하는 과립화된 조성물은 과립화된 고체 내에 포함되는 위장-내성 결합제와 함께 제조된다. (고체 제제를 제조하기 위한 방법에 관하여 아래의 논의 참조.) γ-PGA 담체는 약 5 kDa 내지 약 500 kDa, 또는 약 1 kDa 내지 약 500 kDa, 또는 약 5 kDa 내지 약 100 kDa, 또는 약 1 kDa 내지 약 100 kDa의 범위인 평균 분자량을 갖는로부터 γ-PGA 제조될 수 있다. 과립화된 고체는 그 다음 섭취에 적합한 산성 액체 내에 현탁된다. pH 의 용액은 약 pH 6 미만일 수 있고 그래서 과립화된 고체가 위장-내성 결합제의 결과로서 안정하게 남아 있다. 하나의 구체예에서, 과립화된 고체가 충분하게 현탁된 채 남아 있을 수 있고 용기로부터 유효하게 섭취될 수 있도록, 액체 현탁액 제제는 증점제 또는 점도 증진제를 또한 함유한다.
액체 현탁액의 또 다른 구체예에서, 과립화된 고체는, Zn(II)은 γ-PGA 담체와 복합체화되는 ZnPGA 복합체를 제1 제조하는 것에 의해 제조된다. 그러한 제조의 예시가, 예를 들어 실시예 1 및 2 에서 제공된다. 그 후에 ZnPGA는 위장-내성 결합제, 및 다른 적합한 부형제로 과립화될 수 있다. 그 다음, 이 과립화된 혼합물은 바로 위에 기술된 것과 같이 액체 현탁액으로서 제조될 수 있다.
액체 제제의 또 다른 구체예는 입자, 가령 마이크로스피어, 미세입자, 과립, 또는 아연 염 및 γ-PGA 복합체의 다른 적합한 고체 형태를 형성하는 것, 및 왁스의 얇은 층으로 입자를 코팅하는 것을 포함한다. 바람직한 구체예에서 입자는 위장-내성 결합제를 추가로 포함한다. 코팅된 입자는 액체 현탁액 제제로서 제제화된다. 입자 상의 왁스 코팅은 입자의 물리 완전성을 촉진시키고 투과성을 감소시키지만, 그렇더라도 코팅은 장으로 아연 및 γ-PGA 복합체의 전달을 허용한다.
코팅에 적합한 과립은 임의의 전술된 방법에 따라 제조될 수 있다. 마이크로스피어 또는 미세입자 의 아연 염, γ-PGA, 및 위장-내성 결합제는, 단일 유화 방법, 이중 유화 방법, 중합, 계면 중합, 상 분리 및 코아세르베이션, 분무 건조, 분무 응고, 용매 추출(extraction), 분산된 상의 동결 건조를 포함하는, 본 업계에서 알려진 임의의 많은 방법에 의해 제조될 수 있다. 그러한 마이크로스피어 또는 미세입자의 치수는 0.1 미크론 내지 수천 미크론 범위일 수 있다. 예시로서, 미세구형 입자를 제조하기 위한 하나의 방법은 현탁액 매질 가령 파라핀 오일 내 아연 염 및 γ-PGA를 포함하는 잘게 나뉜 (예를 들어, 분말화된) 고체 혼합물을 교반하는 것, 및 교반된 현탁액에 고분자 위장-내성 결합제의 용액을 부가하는 것을 포함한다. 마이크로스피어는 비-용매, 가령 클로로포름를 형성할 때, 마이크로스피어를 침전시키기 위해 부가되고, 이는 수집, 건조, 및 이어서 왁스로 코팅된다.
왁스 코팅은 생체 적합 및 비-면역원성으로 인식되고, 약물의 포집 및 장관으로의 전달에 적합하다. 입자 (마이크로스피어, 미세입자, 과립 등)는, 본 업계에서 알려진 것과 같은 방법에 따라, 왁스, 가령 카나우바 왁스, 밀랍, 세토스테아릴 알코올, 경랍, 및 다른 왁스로 코팅될 수 있다. 예를 들어, 입자는 백색 파라핀 오일 내 왁스를 용해시키는 것, 45°C 미만까지 용액을 냉각시키는 것, 및 그 다음 입자가 코팅될 때까지 기계적으로-교반된 왁스/파라핀 오일 용액에 입자를 부가하는 것에 의해 카나우바 왁스로 코팅될 수 있다. 교반하는 속도 및 시간, 및 왁스 용액의 온도는 왁스 코팅의 두께를 조정하도록 조절될 수 있다.
왁스-코팅된 아연 염 및 γ-PGA 입자는 투여를 위한 액체 현탁액으로서 제제화된다. 코팅된 아연/ γ-PGA 입자는 최종 제제화된 현탁액 내 약 5 wt% 내지 30 wt%로 존재한다. 전형적으로, 액체 현탁액 제제는 현탁된 중합체, 점도 물질, 및 완충제를 포함한다. 제제는 하나 또는 그 이상의 감미료, 향료제, 및/또는 보존제를 또한 추가로 포함할 수 있다.
현탁된 중합체는, 단독으로 또는 임의의 조합으로 사용될 수 있는, 잔탄 검, 카르보머, 미세결정질 셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 및 소듐 카르복시메틸셀룰로오스로부터 선택될 수 있다. 본 업계에서 알려진 것과 같은 다른 유사한 물질이 또한 사용될 수 있다. 전체적으로, 현탁된 중합체 성분은 최종 제제 내 약 0.02 wt% 내지 약 5 wt%로 존재한다.
점도 물질은, 단독으로 또는 임의의 조합으로 사용될 수 있는, 글리세린, 히드록시프로필 셀룰로오스, 하이드로옥시프로필 메틸셀룰로오스, 포비돈, 구아 검, 및 로커스트 콩 검으로부터 선택될 수 있다. 본 업계에서 알려진 것과 같은 다른 유사한 물질이 또한 사용될 수 있다. 전체적으로, 점도 물질 성분은 최종 제제 내 약 0.05 wt% 내지 약 50 wt%로 존재한다.
완충제는 포스페이트 완충제, 아세테이트 완충제, 락테이트 완충제, 및 시트레이트 완충제, 또는 지정된 범위 내 완충 능력을 갖는 다른 약제학적으로 허용가능한 완충제로부터 선택될 수 있다. 완충제는 약 6 또는 더 낮은 pH를 갖도록 조절된다. 몇몇 구체예에서, pH는 약 3 및 약 6 사이이다. 몇몇 구체예에서, pH는 4.5 및 5 사이이고, 다른 구체예에서 pH는 4 및 5 사이이고, 여전히 다른 구체예에서 pH는 3 및 5 사이이다.
감미료는, 단독으로 또는 임의의 조합으로 사용될 수 있는, 수크로오스, 전화(invert) 수크로오스, 자일리톨, 소르비톨, 말티톨, 아스파탐, 사카린, 및 수크랄로스로부터 선택될 수 있다. 본 업계에서 알려진 것과 같은 다른 유사한 물질이 또한 사용될 수 있다. 전체적으로, 감미료 성분은 최종 제제 내 약 5 wt% 내지 40 wt% 존재할 수 있다.
향료제는 임의의 약제학적으로 허용가능한 향료제, 또는 본 업계에서 알려진 것과 같은 식품 또는 보충제에서 사용되는 임의의 물질로부터 선택될 수 있고, 산업 실행과 일치하는 최종 제제 내 양으로 부가될 수 있다.
보존제는, 단독으로 또는 임의의 조합으로 사용될 수 있는, 소듐 벤조에이트, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 벤질 알코올, 포타슘 소르베이트, 및 시트르산으로부터 선택될 수 있고, 산업 실행과 일치하는 최종 제제 내 양으로 부가될 수 있다. 본 업계에서 알려진 것과 같은 다른 유사한 물질이 또한 사용될 수 있다.
몇몇 구체예에 따른 제제 및 액체 제형을 제조하기 위한 방법은 아래의 실시예 10에서 각각 제공된다.
액체 현탁액 제제에 대한 임의의 이들 구체예에서, γ-PGA 담체는 일반적으로 약 0.01 wt% 내지 약 10 wt%의 농도로 존재하고, 몇몇 구체예에서 양은 약 0.1 wt% 또는 약 1 wt%이다. Zn(II)은 일반적으로 약 0.001 wt% 내지 약 10 wt%의 농도로 존재한다.
액체 제제는 NF-kB 억제제를 포함하도록 또한 제조될 수 있다. 제제 내 그러한 NF-kB 억제제 포함하지 않는 구체예에서, NF-kB 억제제는 임의의 다른 적합한 제제 및 투여의 형태를 사용하여 함께-투여될 수 있다.
고체 제제
아연 염 및 γ-PGA 담체는 경구 투여를 위한 경구 고체 제형 가령 정제, 경질 캡슐, 연질 캡슐 또는 관련된 형태 가령 미니정제, 캐플릿, 젤캡, 경구 붕해 필름 등으로 제제화될 수 있다. 제형은 위장-내성 결합제 및/또는 위장-내성 코팅을 포함하도록 추가로 제제화된다.
아연 염 및 γ-PGA 담체는 약제학적 생성물로의 사용에 적합한 및 특정한 제형, 가령 정제 또는 캡슐 등을 제조하기에 적합한 부형제와 조합된다. 전형적인 부형제는 충전제, 결합제, 붕해제, 활제, 윤활제 뿐만 아니라 완충제, 보존제, 항-산화제, 향료제, 감미료, 착색제 등을 포함한다. 부가될 부형제의 양 및 유형은 다양한 목적, 가령 개선된 제형의 완전성, 개선된 생체 이용률, 안정성, 제조, 코팅, 외형, 및/또는 순응도를 위해 선택될 수 있다. 몇몇 부형제는 하나 이상의 목적의 역할을 할 수 있고 및/또는 하나 이상의 개선된 특성을 제공할 수 있다.
충전제는 허용성 또는 수불용성일 수 있고, 하나 또는 그 이상의 각각의 유형은 조합될 수 있다. 허용성 충전제의 예시는, 제한 없이, 본 업계에서 알려진 것과 같은, 당 가령 글루코오스, 프룩토오스, 수크로오스, 만노오스, 덱스트로스, 갈락토오스 등, 및 당 알코올, 가령 만니톨, 소르비톨, 자일리톨 등을 포함한다. 수불용성 충전제의 예시는, 제한 없이, 본 업계에서 알려진 것과 같은, 왁스, 장쇄 지방산, 탤크, 카올린, 실리콘 디옥사이드, 티타늄 디옥사이드, 알루미나, 전분, 분말화된 셀룰로오스, 미세결정질 셀룰로오스 등을 포함한다.
결합제는, 제한 없이, 본 업계에서 알려진 것과 같은, 셀룰로오스 유도체 가령 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 카르복시메틸셀룰로오스 소듐, 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트, 에틸 셀룰로오스, 하이드로옥시에틸 셀룰로오스, 하이드로옥시에틸메틸 셀룰로오스, 하이드로옥시프로필 셀룰로오스, 하이드로옥시프로필 메틸 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미세결정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 뿐만 아니라 전분, 개질된 전분, 가령 부분적으로 가수분해된 전분, 예를 들어, 말토덱스트린, 당류, 젤라틴, 천연 또는 합성 검 등을 포함한다.
상기 기술된 것과 같이, 몇몇 구체예에서, 위장-내성 물질은 위장-내성 결합제로서 및/또는 위장-내성 외부 코팅으로서 포함된다. 위장-내성 결합제 또는 외부 코팅을 구성하는 물질은, 위를 통과하고 장으로 진입할 때까지 제형으로부터 아연 염 및 γ-PGA의 지연되는 방출의 기능 역할을 한다. 위장-내성 결합제 또는 코팅이 사용될 때, 이는 다른 (비-위장-내성) 결합제 또는 코팅과 조합하여 사용될 수 있다.
일반적으로, 위장-내성 물질은 매트릭스 또는 중합체 또는 다른 장벽 위의 산성 환경 (pH ~3) 내 눈에 띄게 용해되거나 팽창되지 않지만, 내용물은 장의 중성 내지 약 알칼리성 환경 (pH 7-9)으로 방출되도록 충분히 용해되거나 팽창될 것이다. 장용성 코팅 및 장용성 결합제는 위장-내성 물질의 예시이다.
위장-내성 물질의 예시는 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트, 셀룰로오스 아세테이트 숙시네이트, 셀룰로오스 아세테이트 트리멜리테이트, 하이드로옥시프로필메틸셀룰로오스-프탈레이트, (i) 아크릴레이트 에스테르, (ii) 메틸아크릴레이트 에스테르, 및 (iii) 메타크릴산, 폴리비닐 아세테이트 프탈레이트, 하이프로멜로스 아세테이트 숙시네이트, 하이프로멜로스 프탈레이트, 소듐 알지네이트, 셀락, 및 제인으로부터 선택된 둘 또는 그 이상의 단량체의 공중합체를 포함한다.
많은 등급 및 약전 표준은 위장-내성 물질에 대해 존재하고, 그들은 장으로 아연 및 γ-PGA를 전달하는 기능을 제공하기 위해 적합한 물질을 선택하기 위한 유용한 지침을 제공한다. 코팅 두께 및 외부 코팅 내 중합체 조성물, 또는 결합제 및 중합체 조성물의 양을 제어하는 것에 의해, 방출 포인트는 더 빨리 또는 더 늦게, 또는 장의 특정 근처 이내에 발생하도록 조절될 수 있다. 달성될 수 있는 제어의 정도의 예시는, 다음의 다양한 약전 표준을 충족시키는 상표명 Acrycoat® 하에서 Corel Pharma Chem (India)로부터 이용 가능한 메타크릴산 공중합체의 라인에서 발견될 수 있다: USP/NF 메타크릴산 공중합체, 유형 A-NF는, 4-5%로 사용되고 공장에 제형 내용물을 전형적으로 전달하고; USP/NF 메타크릴산 공중합체, 유형 C-NF는, 4-5%로 사용되고 십이지장에 제형 내용물을 전형적으로 전달하고; 및 USP/NF 메타크릴산 공중합체, 유형 B-NF는, 10-20%로 사용되고 결장에 제형 내용물을 전형적으로 전달한다. 후자 (유형 B-NF)는 pH-의존성 중합체로의 전달을 달성하지만, pH-독립성 중합체가 또한 결장 또는 장으로의 전달을 위해 또한 사용될 수 있다.
붕해제는, 제한 없이, 본 업계에서 알려진 것과 같은, 카멜로오스, 카멜로오스 소듐, 크로스카멜로오스 소듐, 크로스포비돈, 알지네이트, 저치환된 하이드로옥시프로필 셀룰로오스, 하이드로옥시프로필 전분, 부분적으로 예비젤라틴화된 전분 등을 포함한다.
활제는, 제한 없이, 본 업계에서 알려진 것과 같은, 실리카, 실리케이트, 탤크, 칼슘 포스페이트 등을 포함한다.
윤활제는, 제한 없이, 본 업계에서 알려진 것과 같은, 알칼리 금속 또는 알칼리성 토금속 스테아레이트, 올리에이트, 벤조에이트, 아세테이트, 클로라이드 등을 포함한다.
다른 유형의 부형제, 가령 완충제, 보존제, 항-산화제, 향료제, 감미료, 착색제는 잘 알려져 있고, 본 업계의 숙련가는 제제화에 대한 그러한 성분을 용이하게 선택하고 적용할 수 있다.
고체 제제는 NF-kB 억제제를 포함하도록 또한 제조될 수 있다. 고체 제제 내 그러한 NF-kB 억제제 포함하지 않는 구체예에서, NF-kB 억제제는 임의의 다른 적합한 제제 및 투여의 형태를 사용하여 함께-투여될 수 있다.
다른 유형의 활성 성분, 가령 비타민, 미네랄, 영양소, 및 장 내 잘 흡수될 수 있는 다른 영양 또는 식이 요법 보충제는, 달리 명시되지 않는 한, 본 발명의 범위로부터 벗어나지 않고 본 명세서에서 기술된 액체 또는 고체 조성물 및 제제에 또한 부가될 수 있다.
그렇지 않으면 본 명세서에서 기술된 조성물 및 제제는, 명세서와 일치하는 한, 아연 염(들) 및 γ-PGA 담체 및 위장-내성 외부 코팅 및/또는 위장-내성 결합제 포함하거나, 이로 이루어지거나, 이를 필수로 하여 이루어질 수 있다. 조성물 및 제제는, 선행 기술 조성물에서 발견되는 또는 공개된 본 발명에 달리 필요하지 않은 임의의 성분(들), 예를 들어 활성 성분 및/또는 부형제가 또한 결여되거나 실질적으로 없을 수 있다.
고체 제형을 제조하기 위한 방법
아연 염 및 γ-PGA, 및 선택된 부형제는 개별적으로 또는 조합으로 크기를 정하거나, 추출되거나 분말화될 수 있다. 다양한 성분은 건조 혼합에 의해 조합, 또는 습윤 또는 건조 과립화에 의해 과립화, 분무, 압출, 롤링, 또는 유동층 과립화될 수 있고, 그 후에 임의로 밀링될 수 있거나, 본 업계에서 알려진 것과 같은 다른 그러한 기술을 사용할 수 있다.
몇몇 구체예에서, 아연 염(들) 및 γ-PGA 담체 (상기 기술된 것과 같이, 비개질된 γ-PGA 및/또는 임의의 형태의 개질된 γ-PGA)는 ZnPGA 복합체로서 제조될 수 있다. 일반적으로, 아연 염(들) 및 γ-PGA 담체는, 예를 들어, 실시예 1 및 2 에서 기술된 것과 같이 조합되고 정제된다. 편의상, 얻어진 ZnPGA 복합체의 용액은 실질적으로 건조되고 건조 또는 실질적으로 분말로서 고체 제형을 제조하기 위한 절차 내에서 사용될 수 있다.
고체 제형을 제조하기 위한 방법은 요망되는 양의 (i) 아연 염(들) 및 γ-PGA 담체 및/또는 (ii) ZnPGA 복합체, 및 하나 또는 그 이상의 충전제 및/또는 하나 또는 그 이상의 결합제 및/또는 하나 또는 그 이상의 붕해제 및/또는 하나 또는 그 이상의 윤활제 및/또는 하나 또는 그 이상의 활제를 포함하는 부형제를 함께 혼합시키는 것을 포함한다. 상기 기술된 것과 같이, 몇몇 구체예에서, 상기 하나 또는 그 이상의 결합제는 위장-내성 결합제일 수 있고, 다른 (비-위장-내성) 결합제와 조합하여 사용될 수 있다. 과립화시키는 단계가 포함될 때, 그 다음 임의의 부형제는, 전부 또는 부분적으로, 과립화시키는 단계 이전, 동안, 또는 이후 부가될 수 있다. 몇몇 구체예에서 윤활제의 일부 또는 전체는 과립화시키는 단계 이후에 혼합된다. 몇몇의 이들 구체예에서, 활제는 과립화시키는 단계 이후에 또한 혼합된다.
과립화 단계는 과립화될 때 성분의 블렌드를 습윤시키는 용매, 가령 물, 또는 유기 용매, 또는 허용성 유기 용액을 사용하는 것을 포함하는 경우, 결과로 얻은 생성물은 대개 건조되어 잔류 용매를 제거한다. 유기 용매의 예시는, 본 업계에서 알려진 것과 같은 에탄올 및 이소프로판올 등을 포함한다. 바람직하게는, 실질적으로 모든 유기 용매는 건조시키는 단계에서 제거된다. 물은 과립화 단계에서 사용되는 용매의 일부일 때, 건조시킨 이후 바람직하게는 10 wt% 이하, 또는 5 wt% 이하, 또는 2 wt% 이하의 물이 남고 다음 단계로 진행된다.
혼합된 또는 과립화된 고체는 고체 압축, 압밀, 또는 성형을 사용하여 정제화하는 것에 의해 정제로 형성될 수 있다. 그 후에, 몇몇 구체예에서, 상기 기술된 것과 같이, 정제는 위장-내성 코팅으로 코팅된다. 일반적으로, 위장-내성 물질 및, 임의로, 다른 부형제 (예를 들어, 가소제, 유화제는 허용성 또는 유기 용매 내로 용해되거나 분산되고 그 다음, 분무 코팅, 유동층 코팅, 팬 코팅 등을 포함하는 본 업계에서 알려진 임의의 많은 방법을 사용하여 적용된다. 몇몇 구체예에서, 정제는 외형, 기계적 안정성, 화학적 안정성 등의 목적을 위해, 하지만 코팅 내에 포함되는 위장-내성 물질 없이 코팅된다.
그렇지 않으면, 혼합된 또는 과립화된 고체는 캡슐 또는 캐플릿 내로 충전되거나, 내부에 밀봉될 수 있다. 용어 캡슐은 연질 캡슐, 경질 캡슐, 젤캡, 식물성 캡슐을 포함하고, 단일-피스 또는 2-피스 캡슐일 수 있다. 장용성-코팅된 캡슐은 이용 가능하거나 (예를 들어, 장용성 캡슐 약물 전달 기술), 또는 캡슐은 충전, 밀봉될 수 있고, 그 다음 임의로 다른 부형제를 갖는 물질의 용액 또는 분산액을 사용하는 상기 언급된 방법에 의해 위장-내성 코팅으로 코팅될 수 있다. 다른 구체예에서, 혼합된 또는 과립화된 고체는 위장-내성 결합제 물질을 포함하고, 그러한 고체는 장용성 코팅 유무에 관계없이 캡슐 내에 로딩될 수 있다.
정제 또는 캡슐의 크기 및 형상은 특별히 제한되지 않는다. 요망되는 투여량의 아연 염 및 γ-PGA는 지나치게 크지 않은 정제 또는 캡슐로 제제화될 수 있다는 것이 예상된다.
본 발명의 구체예에 따른 정제 제형을 제조하기 위한 예시적인 방법은 아래의 실시예 11 및 12에서 제공된다.
투여량 및 투여
본 명세서에서 기술된 제형은 대상에서 요망되는 생물학적 반응을 달성하기 위해 치료적으로 효과적인 아연의 양을 제공하기 위해 투여될 수 있다. 치료적으로 효과적인 양은, Zn, γ-PGA, 및 γ-PGA에 대한 임의의 개질의 조합된 효과, 임의의 ZnPGA 복합체의 형태, NF-kB 억제제의 존재 또는 부재, 및/또는 제형의 전달 효율성 등을 통해, 치료를 필요로 하는 환자에 전달되는 아연의 양을 의미하고, 이는 요망되는 생물학적 반응을 달성할 것이다.
요망되는 생물학적 반응은, 대상에서, 가령 포유동물, 가령 사람에서 (또한 환자로서 나타내어질 수 있는) 종양 또는 암의 시작 또는 발달의 예방, 종양 또는 암의 진행의 부분적인 또는 전체적인 예방, 지연, 또는 억제, 또는 종양 또는 암의 재발의 예방, 지연, 또는 억제를 포함한다.
PARP1-매개 괴사에 감수성인 모든 종양 유형은, 본 명세서에서 공개된 치료의 방법에 따라 처리될 수 있는 징후로 고려된다. 실시예 4, 5 및 6은 공개된 조성물 및 약제학적 제제의 구체예를 사용하는 공개된 방법의 구체예에 따른 치료의 효능을 입증한다. 결과는 생체 내, 및 사람 대상에서 마우스 암 세포 및 사람 암 세포에서의 효과적인 치료를 입증한다.
치료적으로 효과적인 양을 달성하는 것은 제제의 특성에 의존할 것이고, 각 개인의 성별, 연령, 상태, 및 유전적 구성에 의해 달라질 것이다. 예를 들어, 유전적 원인 또는 흡수 장애 또는 심각한 식이 요법 제한의 다른 원인으로 인해 불충분한 아연을 갖는 개인은, 일반적으로 적합한 수준의 아연을 갖는 것과 비교하여 치료적인 효과를 위해 상이한 양을 요구할 수 있다.
대상은 하루에 약 1 mg부터 약 300 mg 까지의 아연의 양으로 일반적으로 투여된다. 예를 들어 하루에 약 25 mg, 또는 50 mg, 또는 75 mg, 또는 100 mg, 또는 150 mg, 또는 200 mg 아연. 다수의 제형은 하루에 함께 또는 개별적으로 섭취될 수 있다. 경구 제형은 식사 시간에 관계없이 일반적으로 투여될 수 있다. 치료는 요망되는 치료적인 효과가 달성될 때까지 일반적으로 계속된다. 본 명세서에서 기술된 조성물 및 제제의 낮은 투여량 수준은 종양이 퇴행하거나 억제된다면, 그의 재발을 예방, 지연, 또는 억제하기 위한 목적을 위하여, 또는 예방 치료로서 사용되는 본 발명의 구체예에 따른 치료로서 또한 계속될 수 있다.
실시예
실시예 1: 비-결합된 과잉 아연을 제거하기 위해 포스페이트-침전 방법을 사용하는 pH 7.0에서 ZnPGA의 제조 및 특성화.
ZnPGA를 제조하기 위해, 55 mg γ-PGA (50,000 Da 분자량)를, 실온에서 10 mM ZnSO4를 함유하는 5 mL 10 mM MES 완충제, pH 7.0 내에 용해시켰고, 그 다음 10 분 동안 얼음에 두면서 초음파 처리했다. 그 다음, 0.5 mL 200 mM 포스페이트 완충제, pH 7.0를 용액에 부가하여 유리(free) 아연 이온을 침전시켰고, 0.2 μm 주사기 살균 필터를 통해 혼합물을 여과했다. ICP-MS를 사용하여 및 4-(2-피리딜아조)-레조르시놀 분석에 의해 아연 함량을 측정했다. 최종 저장 ZnPGA는 1% (wt/vol) PGA 및 400 μg/mL 결합 아연 이온을 함유했다. 저장 ZnPGA 용액을 매일 투여할 때마다 새로 제조했다.
실시예 2: 비-결합된 과잉 아연을 제거하기 위해 투석 방법을 사용하는 pH 7.0에서 ZnPGA의 제조 및 특성화.
ZnPGA를 제조하기 위해, 55 mg γ-PGA (50,000 Da 분자량)를, 실온에서 10 mM ZnSO4를 함유하는 5 mL 10 mM MES 완충제, pH 7.0 내에 용해시켰고, 그 다음 10 분 동안 얼음에 두면서 초음파 처리했다. 그 다음, 1L 10 mM MES, pH 7.0에 대항하여, 2 시간 동안, 연속적으로 3 번, 6 시간에 걸쳐 총 3 부피로 얼음 상에서 용액을 투석했다. 0.2 μm 주사기 살균 필터를 통해 회수된 용액을 여과했다. ICP-MS를 사용하여 및 4-(2-피리딜아조)-레조르시놀 분석에 의해 아연 함량을 측정했다. 최종 저장 ZnPGA는 0.9% (wt/vol) PGA 및 380 μg/mL 결합 아연 이온을 함유했다. 저장 ZnPGA 용액을 매일 투여할 때마다 새로 제조했다.
실시예 3: 상이한 약물 내성 유전형을 갖는 사람 암세포에서 ZnPGA-유도 세포 사멸의 시험관 내 유세포 분석 (FACS).
세포 자멸사 또는 괴사에 관계 없이, ZnPGA에 의해 유발되는 세포 사멸의 방식을 상이한 약물 내성 유전형을 갖는 다음의 3 개의 사람 암 세포주에서 조사했다: H460 폐 암 (약물 내성이 보고되지 않은 WT p53 세포자멸사 유전자), T98G 신경아세포종 (돌연변이 p53 및 다제 내성 단백질 1 "MRP1" 발현), 및 MES-SA Dx5 육종 (WT p53 및 P-당단백질 "PgP" 다제 내성 단백질 발현). 간단히, 각각의 세포주를 ATCC-제안 방법 및 배지 (RPMI-1640, F-12K, McCoy's 5A, EMEM, DMEM 등) 당 후기 지수 성장 단계에서 10,000 단층 부착 상태로 제조했고, 웰 당 200 μL의 매질 부피를 갖는 96-웰 플레이트를 사용하는 37 °C 및 5% CO2에서 CO2 배양기 내 10% 태아 소 혈청 (FBS) 및 1% 페니실린/스트렙토마이신을 보충했다. 96-웰 플레이트 상에서 제조된 세포를 24 시간 동안 상이한 농도의 ZnPGA로 처리했고, 뒤이어 세포 상태의 FACS 특성화를 했다.
간단히, 96-웰 플레이트의 각각의 웰 내 세포를 마이크로 원심분리기 튜브 내에서 수득했고 100 μL 저온 포스페이트-완충 식염수 (PBS), pH 7.4 내에서 세척했다. 그 다음, 각각의 샘플을 원심분리했고 저온 100 μL 결합 완충제 (pH 7.4에서의 10 mM HEPES, 140 mM NaCl, 2 mM CaCl2) 내에 재현탁했다. 염색을 위해, 결합 완충제 내 5 μL AlexaFlour 488® annexin V (Annexin V: Cat#A13200, Invitrogen) 및 5 μL 의 100 μg/mL 프로피디움 아이오다이드 (PI)를 각각에 부가하여 15 분 동안 실온에서 염색했다. 배양 종료 시, 각각의 샘플에 400 μL 결합 완충제를 부가한 이후 즉각적인 FACS 판독까지 샘플을 얼음 상에서 배치했다. 488 nm에서 여기 파장 및 530 nm 및 575 nm에서 판독 흡광도 신호을 이용하여, 100 μL/min 유속에서 FACS를 수행했다.
결과를 도면 2에서 나타내었고, 이는 처리된 세포에 결합하는 Annexin V 및 PI에 대한 시험관 내 세포-상태 사분면 분석을 보여준다. 데이터는, ZnPGA는 24 시간 노출 이후, 3 개의 상이한 약물 내성 유전형을 갖는 모든 3 개의 세포주 내 세포 괴사를 투여량-의존적으로 및 지속적으로 유도했다는 것을 보여주었다. 도면 2에서, 상부 패널은 비-내성 H460 사람 폐 암 세포 (WT p53 및 약물 내성 단백질 발현이 없는)의 처리로부터의 결과를 보여주고, 중앙 패널은 다제 내성 MES-SA Dx5 사람 육종 (WT p53 및 PgP 다제 내성 단백질 발현)을 보여주고, 하부 패널은 다제 내성 T98G 사람 신경아세포종 (돌연변이 p53 및 MRP1 다제 내성 단백질 발현)을 보여준다. ZnPGA의 투여량은 도면 내 각각의 행 전반에 걸쳐 증가한다.
실시예 4: 면역적격 C57BL 동종이식편 모델의 폐 내 LL2 쥐 폐 암에 대항하여 경구적으로 보충된 ZnPGA의 생체 내 성장-억제 효과.
쥐 루이스 폐 암종 (LL2) 세포의 단분산 현탁액을 그의 시험관 내 배양의 트립신처리에 의해 얻었고 PBS 2 x 105 세포/mL로 저온에서 제조했다. C57BL/6 암컷 마우스의 꼬리 정맥을 통해 LL2 세포의 0.5 mL 현탁액을 주사했다, 및 주사된 마우스를 폐 종양 성장의 관찰을 위해 16 일 뒤에 희생시켰다. 종양 주사 하루 뒤 경구 약물 처리를, 명시된 투여량으로 식수 내로의 희석을 통해 시작했다. 암 주사 16일 뒤 동물을 희생시켰고, LL2 종양의 성장에 대해 그들의 폐를 관찰했다.
도면 3은, 처리의 15 일 동안 ZnPGA를 통한 식수 내 160 μg/mL 아연의 투여량 눈에 띄게 단단한 LL2 종양 성장의 현저한 감소로 이어졌다는 것을 보여준다. 게다가, NF-kB 억제제 PDTC로 ZnPGA 용액을 보충하는 것은 쥐 폐 암의 동소 동종이식편 모델에서의 LL2 종양 성장을 사실상 제거했고, 이는 그들의 항종양 효과에서 NF-kB 억제제 PDTC 및 ZnPGA 사이의 특정한 상승 효과를 암시한다.
실시예 5: 면역-부전 무흉선 Nu/Nu 암컷 마우스 피하 이종이식 모델 내 H460 사람 폐 암에 대항하여 경구적으로 보충된 ZnPGA의 생체 내 성장-억제 효과.
H460 단일-세포 현탁액을 대수 성장 단계에서 그의 시험관 내 배양의 트립신처리에 의해 제조했고 107 세포/mL로 혈청-유리(free) 저온 RPMI-16040 배지 내에서 제조했다. 면역-부전 무흉선 Nu/Nu 암컷 마우스 상에서 사람 종양의 피하 이종이식을, 오른쪽 측면 마우스의 근처 피부에 0.1 mL의 H460 세포 현탁액을 피하로 주사하는 것에 의해 생성했다. 종양 주사 다음날에 경구 약물 처리를 시작했다. 식수 내 식염수를 받는 3 개의 대상의 제1 그룹, 일주일에 한 번 복강 내 시스플라틴 (5 mg/kg)을 받는 3 개의 대상의 제2 그룹, 및 식수를 통해 ZnPGA (160 μg/mL 아연)를 받는 3 개의 대상의 제3 그룹. 주사 후 14일 뒤, 촉지 가능한 종양 질량의 긴 및 짧은 치수 (각각, 길이 및 너비)를 디지털 캘리퍼스를 사용하여 2 일 마다 측정했다. 실험을 28 일 동안 계속했다. 종양 부피를 공식, V = 길이 x 너비2 x 1/2에 의해 얻었다.
도면 4는 실험의 결과를 보여준다. C57BL 마우스에서의 실시예 3 및 4, 각각의시험관 내 및 동종이식편 동소 LL2 폐 암 모델 연구 결과와 일치하는, ZnPGA를 통해 식수 내 160 μg/mL 아연을 투여하는 것은 이종이식된 H460 사람 폐 암의 피하로 성장에 현저한 억제 효과로 이어졌다. 중요하게는, 경구적으로 보충된 ZnPGA의 종양-억제 효과는 복강 내 주사될 시스플라틴의 효과와 유사하거나 보다 더 낫다.
앞서 말한 발명은 상세히 및 예시(example) 및 예시(illustration)로서 기술되었고, 본 업계의 숙련가는 본 명세서에서 공개된 및 청구범위에 의해 포괄된 조성물 및 방법의 범위를 인식할 것이다.
실시예 6: 아연(II) 염 및 γ-폴리글루탐산의 과립화된 혼합물을 받는 환자의 임상적 관찰.
과립화된 아연 설페이트 및 γ-폴리글루탐산 혼합물로부터 제조된 보충제-등급 장용성-방출 코팅된 정제 제제의 경구 투여는 (1) 2 개의 암의 병력을 갖는 여성 환자에서의 제3 약물-난치성 조기 위암의 임상적 퇴행, 및 (2) 이전의 치료 또는 병력 없이 남성 환자에서 제1 원발성 조기 위암의 임상적 퇴행으로 이어진다.
실시예 7: 액체 제제.
액체 제제의 예시적 구체예의 조성물은 주사에 적합하고, 예를 들어,, 주사는 아연(II) 염, γ-PGA, 소듐 클로라이드, 및 물을 포함한다. 아연 설페이트 7수화물, γ-PGA (포타슘 염, ≤100 kDa), 소듐 클로라이드를 조합하는 것 및 부피로 물을 부가하는 것에 의해 조성물을 제조하고, 여기서 각각의 성분의 농도는 1 mg/mL 아연(II), 10 mg/mL γ-PGA, 및 6.5 mg/mL 소듐 클로라이드이다. 결과로 얻은 대략 276 mOsm/kg 삼투질 농도 및 pH 5.68의 조성물은 사람 환자에서의 주사에 적합하다.
실시예 8: Zn(II)/γ-PGA 용액, 달라지는 Zn(II) 농도 및 γ-PGA 중합체 크기를 이용한 처리 시 시험관 내 세포 생존 분석.
A. Zn/γ-PGA 용액의 제조. γ-PGA, 포타슘 염 (Xi'an Lyphar Biotech Co., Ltd., Xi'an, China), 분자량 ≤100 kDa,을 입수했고 1, 2, 6, 12, 및 96 시간 동안 pH 3 완충 허용성 용액 내에서 353 K로 가열하는 것에 의해 다양한 크기로 샘플을 단편화하여 γ-PGA의 점점 더 작은 단편을 제조했다. 단편화된 중합체에 대한 평균 분자는, 각각 50.1 kDa, 28.2 kDa, 15.9 kDa, 7.9 kDa, 및 2.5 kDa 로 보고되었다. Peng, M., Liu, W., Chen, Q., and Hansen. E.W. (2010). γ-폴리글루탐산의 분해율을 1H-NMR 스펙트럼 분석에 의해 및 PFGSTE NMR - 내적 일관성에 의해 검출했다. Int'l J. Research and Reviews in Applied Sciences 3, 233-241. 각각의 단편화되지 않은 중합체 및 다음의 5 개의 단편화된 중합체로 Zn(II)의 3 개의 농도에서 Zn/γ-PGA 용액을 제조했다. γ-PGA를 물 내에 용해시켰고, 트리스·HCl을 부가했고 용액을 pH 7.0에서 완충했고, 및 그 다음 ZnSO4·7H2O을 부가하여 1 mg/mL, 10 mg/mL, 및 100 mg/mL의 아연(ii) 농도를 갖는 용액을 제조했고, 여기서 아연:글루타메이트 단량체 비율은 1:8였다. 이들 용액을 다음에 기술된 MTT 세포 생존 분석에서 사용했다.
B. MTT 분석. MTT [3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸리움 브로마이드] 분석을 사용하여 HeLa 및 MCF7 세포에 대한 세포 생존력에 대한 Zn/γ-PGA의 효과를 결정했다. 간단히, 4 Х 104 세포/웰의 밀도에서 배양된 세포 (아래를 참조)를 96-웰 플레이트 내에 분배했다. 다양한 농도의 Zn/γ-PGA (6 γ-PGA 중합체 크기, 각각 Zn(II)의 3 개의 농도)를 부가했고 (각각의 조건을 4 번 (N=4) 작동시켰다), 24 시간 동안 배양 이후 웰 내용물을 원심분리해서 세포를 수집했고 매질을 제거했다. MTT 용액 (1 mg/mL 작업 용액 150 μL)를 각각의 웰에 부가했다, 3 시간 동안 배양하여 결정 포르마잔 발달을 허용했고, 원심분리하여 세포 및 결정 포르마잔을 수집했다. 형성된 결정 포르마잔을 200 μL DMSO 내에 용해시키는 것 및 540 nm에서 흡광도를 측정하는 것에 의해 세포 생존력을 결정했다.
C. 세포 배양. HeLa 및 MCF7 세포를, 10% 태아 소 혈청 (FBS) 및 1% 항생제를 함유하는 200 mL 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM) 및 (RPMI) 내 96-웰 세포 배양 플레이트에서 37°C로 95% 공기 및 5.0% CO2의 습윤 대기 하에서 24 시간 동안 배양했다.
D. 분석 결과. 각각, HeLa 세포 및 MCF7 세포에 대한 분석 결과를 도면 5A 및 5B에서 나타내었다. 결과로부터, Zn/γ-PGA는 세포독성이고 Zn(II) 농도가 증가함에 따라 및 γ-PGA 중합체의 크기가 감소함에 따라 효과가 증가한다는 것이 명백하다.실시예 9: 4 개의 세포 유형에 대해, Zn(II)/γ-PGA 용액, 달라지는 Zn(II) 농도, 100 kDa γ-PGA 중합체를 이용한 처리 시 시험관 내 세포 생존 분석.
A. Zn/γ-PGA 용액의 제조. γ-PGA, 포타슘 염 (Xi'an Lyphar Biotech Co., Ltd., Xi'an, China), 다분산, 분자량 45 kDa을 사용하여, 실시예 8에서 기술된 것과 같이 Zn/γ-PGA 용액을 제조하여, 1.5625, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 및 100 mg/mL의 아연(ii) 농도를 갖는 용액을 제조했고, 여기서 아연:글루타메이트 단량체 비율은 1:8이었다.
B. MTT 분석. HEK-293, HeLa, MCF7, 및 A549 세포의 세포 생존력에 대한 Zn/γ-PGA의 효과를 실시예 8에서 기술된 것과 같이 MTT 분석을 사용하여 결정했다.
C. 세포 배양. 세포 배양 상태는 실시예 8 내에 기술된 것과 동일했다.
D. 분석 결과. 분석 결과를 도면 6에서 나타내었다. 결과로부터, Zn/γ-PGA는 세포독성이고 45 kDa γ-PGA 중합체에 대한 Zn(II) 농도가 증가함에 따라 효과가 증가한다는 것이 명백하다.
실시예 10: γ-폴리글루탐산-아연 액체 조성물.
구체예에 따라 본 발명을 수행하기에 유용한 조성물은 표 1 내에 보여진다. 조성물은 왁스-코팅된 입자를 포함하는 액체 현탁액 제제로서 100 g 당 0.68 mg의 Zn (Zn2 + 이온)을 제공한다. 제제를 제조하기 위한 방법은 표를 따른다. 이 조성물은 그저 대상 발명에 유용한 많은 조성물 중 하나의 예시이다.
A. 코팅된 ZnPGA 마이크로스피어 (cZPM)의 제조. 10 g 수크로오스 (5% w/v), 45 mg γ-PGA, 및 19.79 mg 아연 설페이트 7수화물 (원소 Zn으로서 4.5 mg)을 함유하는 200 mL 물을 제조했고 동결-건조시켰다. 그 다음 결과로 얻은 분말을 1:4 비율로 5% 까지의 옥수수전분을 함유하는 잘게 나뉜 수크로오스로 연마했고 50 번 미국 표준 스테인리스 강 체 (48 메쉬)를 통해 가압했다. 그 다음 이 분말을 400 mL 비커에서 200 mL의 백색 파라핀 오일 내에 현탁했다. 혼합물을, 높은-토크 교반기 (유형 RXR1, Caframo, Wiarton, Ontario)에 장착된 44 mm 폴리에틸렌 3 개의-블레이드 패들을 이용하여 260 rpm에서 교반하는 것에 의해 분산시켰다. 현탁액에 20 mL의, 아세톤-95% 에탄올 (9:1) 내 10% (w/v) 하이드로옥시프로필메틸셀룰로오스-프탈레이트 (HPMC-P)를 부가했다. 교반을 5분 동안 계속하여 마이크로스피어를 형성했고, 그 다음 75 mL의 클로로포름을 부가했다. 현탁된 매질을 따라냈고, 마이크로스피어를 75 mL의 클로로포름 내에서 간단히 재현탁했고, 상온에서 공기-건조시켰다. 건조 시, 마이크로스피어를 카나우바 왁스로 코팅했다. 구체적으로, 1 g의 카나우바 왁스를 70°C에서 200 mL의 백색 파라핀 오일 내에 용해시켰고, 45°C 미만까지 냉칵시켰다. 이 냉각된 왁스-파라핀 용액에, 제조된 마이크로스피어를 부가했고 일정하게 교반하면서 15 분 동안 현탁시켰다. 왁스 용액을 그 다음 따라내었다, 및 마이크로스피어를 필터 종이 상에서 수집하여 과잉 왁스 용액을 흡수했고 코팅된 ZnPGA 마이크로스피어 (cZPM)를 얻었다.
B. 코팅된 ZnPGA 마이크로스피어 (cZPM)의 액체 현탁액 용액의 제조. 다음의 성분: 0.3 g 잔탄 검 (예를 들어, 현탁된 중합체로서); 0.3 g 구아 검 (예를 들어, 점도 물질로서); 10 g 자일리톨 (예를 들어, 감미료로서); 0.5 g 시트르 완충제 (예를 들어, 완충제로서); 0.1 g 리모넨 (예를 들어, 향료제로서); 0.025 g 포타슘 소르베이트 (예를 들어, 보존제로서)를 78.7 mL 물 내에 용해시켰다. 허용성 용액의 pH를 pH 4.5로 조절했고, 그 다음 10 g cZPM을 허용성 용액 내 현탁시켜 cZPM 액체 현탁액을 얻었다.
실시예 11: γ-폴리글루탐산-아연 조성물.
구체예에 따라 본 발명을 수행하기에 유용한 조성물은 표 2 내에 보여진다. 조성물은 정제 당 25 mg의 Zn (Zn2 + 이온)을 제공한다. 정제를 제조하기 위한 방법은 표를 따른다. 이 조성물은 그저 대상 발명에 유용한 많은 조성물 중 하나의 예시이다.
표 2에서 보여진 조성물로 코팅된 정제는 습윤 과립화 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 첫째로, 아연 설페이트 및 γ-폴리글루탐산을 함께 혼합하고 건조시킨다. 미세결정질 셀룰로오스, 전분, 및 실리콘 디옥사이드를 추가로 부가하고, 건조 성분을 모두 추가로 함께 혼합한다. 혼합된 성분을 과립기로 옮기고 적절한 양의 허용성 에탄올을 부가하고 과립화를 수행한다. 얻어진 과립화된 혼합물을 50-70°C에서 건조시켜 약 5% 미만의 물 함량을 갖는 과립화된 조성물을 수득한다. 마그네슘 스테아레이트를 과립화된 조성물에 부가하고 혼합한다. 얻어진 혼합물을 정제로 압축한다. 최종적으로, 본 업계의 숙련가에게 알려진 것과 같은, 표준 기술을 사용하여 정제를 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트로 코팅된다.
실시예 12: γ-폴리글루탐산-아연 조성물.
구체예에 따라 본 발명을 수행하기에 유용한 조성물은 표 3 내에 보여진다. 조성물은 정제 당 30 mg의 Zn (Zn2 + 이온)을 제공한다. 정제를 제조하기 위한 방법은 표를 따른다. 이 조성물은 그저 대상 발명에 유용한 많은 조성물 중 하나의 예시이다.
* 용매 (에탄올, 이소프로필 알코올, 및 물)는 제제화된 정제 내 미미한 양으로 존재한다는 것으로 여기서 가정된다.
표 3에서 보여진 조성물로 코팅된 정제는 다음과 같이 제조될 수 있다. 첫째로, 아연 설페이트, γ-폴리글루탐산, 미세결정질 셀룰로오스, HPMC-P (하이드로옥시프로필메틸셀룰로오스 프탈레이트), 말토덱스트린, 및 카르복시메틸셀룰로오스-칼슘을 함께 혼합했고 건조시켰다. 혼합된 성분을 과립기로 옮겼다 및 적절한 양의 70% 허용성 에탄올을 부가했고 습윤 과립화를 수행했다. 얻어진 과립화된 혼합물을 약 60°C까지로 건조시켰다 약 3% 미만의 LOD (건조 손실)를 갖는 과립화된 조성물을 수득했다. 실리카 (예를 들어, Aerosil®) 및 마그네슘 스테아레이트를 에 부가했고 과립화된 조성물과 혼합했다. 얻어진 혼합물을 정제로 압축했다. HPMC-P의 이소프로필 알코올 용액을 사용하여 정제를 제1 코팅했고, 그 다음, 본 업계의 숙련가에게 알려진 것과 같은, 표준 기술을 사용하여, HPMC의 허용성 용액을 사용하여 제2 단계에서 코팅했다.

Claims (24)

  1. 환자 내 종양 치료에서의 사용을 위한, PARP1-매개 종양 괴사를 유도하는 약제학적 조성물;
    여기서 종양은 폐 암종, 신경아세포종, 육종, 자궁경부 암종, 및 유방 암종으로부터 선택되고,
    상기 약제학적 조성물은 제형 내 Zn(II) 염 및 γ-폴리글루탐산 담체의 치료적으로 효과적인 양을 포함하고,
    상기 γ-폴리글루탐산 담체는 γ-폴리글루탐산, 종양-표적화 γ-폴리글루탐산, 전하-개질된 γ-폴리글루탐산 및 종양-표적화 전하-개질된 γ-폴리글루탐산으로부터 선택되는 하나 이상의 담체를 포함함.
  2. 제1항에 있어서, 상기 종양은 약물-내성 표현형을 갖는 약제학적 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 약물-내성 표현형은 기능 장애 p53인 약제학적 조성물.
  4. 제2항에 있어서, 상기 약물-내성 표현형은 MDR1 과발현인 약제학적 조성물.
  5. 제2항에 있어서, 상기 약물-내성 표현형은 MRP1 과발현인 약제학적 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Zn(II) 염 및 상기 γ-폴리글루탐산 담체는 치료적인 양의 NF-kB 억제제와 조합된 치료적인 양의 제형으로서 제제화되는 약제학적 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 고체 제형 또는 액체 제형으로서 제제화되는 약제학적 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 상기 제형은 고체 제형이고, 정제, 미니탭, 경질 캡슐, 연질 캡슐, 캐플릿, 젤캡, 경구 붕해 필름, 과립, 펠렛, 페이스트, 및 분말 사쉐로부터 선택되는 약제학적 조성물.
  9. 제7항에 있어서, 상기 제형은 액체 제형이고, 액체 용액, 액체 현탁액, 시럽, 및 경구 분무로부터 선택되는 약제학적 조성물.
  10. 제7항에 있어서, 상기 액체 제형은 경구 투여 및 주사 투여로서 환자에게 투여되도록 제제화되는 약제학적 조성물.
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 삭제
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 삭제
  17. 삭제
  18. 삭제
  19. 삭제
  20. 삭제
  21. 삭제
  22. 삭제
  23. 삭제
  24. 삭제
KR1020197015744A 2016-11-01 2017-10-31 아연-γ-PGA 조성물 및 암을 치료하기 위한 방법 KR102616690B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SG10201609131Y 2016-11-01
SG10201609131YA SG10201609131YA (en) 2016-11-01 2016-11-01 Zinc-pga compositions and methods for treating cancer
PCT/SG2017/050545 WO2018084806A1 (en) 2016-11-01 2017-10-31 ZINC-γ-PGA COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING CANCER

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20190120159A KR20190120159A (ko) 2019-10-23
KR102616690B1 true KR102616690B1 (ko) 2023-12-21

Family

ID=60327362

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020197015744A KR102616690B1 (ko) 2016-11-01 2017-10-31 아연-γ-PGA 조성물 및 암을 치료하기 위한 방법

Country Status (10)

Country Link
US (1) US11944640B2 (ko)
EP (1) EP3534914A1 (ko)
JP (2) JP7083835B2 (ko)
KR (1) KR102616690B1 (ko)
CN (2) CN108014131B (ko)
AU (2) AU2017354787B2 (ko)
CA (1) CA3042383A1 (ko)
MX (2) MX2019005104A (ko)
SG (3) SG10201609131YA (ko)
WO (1) WO2018084806A1 (ko)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG10201609131YA (en) 2016-11-01 2018-06-28 Xylonix Ip Holdings Pte Ltd Zinc-pga compositions and methods for treating cancer
SG10201708886RA (en) * 2017-10-30 2019-05-30 Xylonix Ip Holdings Pte Ltd α-PGA-ZINC COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING CANCER
SG11202012373YA (en) * 2018-06-22 2021-01-28 Xylonix Ip Holdings Pte Ltd Oncology treatments using zinc agents
KR102094182B1 (ko) * 2018-06-28 2020-03-30 주식회사 알랙스탠드 아연 함유 수용성 폴리글루타믹산 복합체 조성물
WO2022197246A1 (en) 2021-03-18 2022-09-22 Xylonix Pte. Ltd Pharmaceutical polymer conjugates

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007043606A1 (ja) * 2005-10-12 2007-04-19 Genolac Bl Corporation アニオン性ポリアミノ酸／金属複合体からなる抗糖尿病薬剤
WO2014155142A1 (en) * 2013-03-28 2014-10-02 Bbs Nanotechnology Ltd. Stable nanocomposition comprising doxorubicin, process for the preparation thereof, its use and pharmaceutical compositions containing it
US20160030454A1 (en) * 2013-04-12 2016-02-04 Rebecca Lambert BENT Cancer therapy

Family Cites Families (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2897122A (en) 1956-10-04 1959-07-28 Frosst & Co Charles E Enteric coated product
JP2712583B2 (ja) 1989-06-28 1998-02-16 味の素株式会社 易吸収性ミネラル含有飲食物
JP3551149B2 (ja) 1992-03-24 2004-08-04 味の素株式会社 易吸収性ミネラル含有組成物及びそれを含有する飲食品
US5447732A (en) 1992-11-25 1995-09-05 Ajinomoto Co., Inc. High-absorption mineral-containing composition and foods
DE69330595T2 (de) 1992-11-25 2002-05-23 Ajinomoto Kk Zubereitungen und Nahrungsmittel enthaltend Mineralien und Poly-gamma-Glutaminsäure
IL115156A (en) 1994-09-06 2000-07-16 Univ Georgia Pharmaceutical compositions for the treatment of cancer comprising 1-(2-hydroxymethyl-1,3-dioxolan-4-yl) cytosines
IT1275923B1 (it) 1995-03-16 1997-10-24 Valpharma Sa Formulazioni gastroresistenti contenenti zinco
US6441025B2 (en) 1996-03-12 2002-08-27 Pg-Txl Company, L.P. Water soluble paclitaxel derivatives
JPH11313618A (ja) 1998-05-06 1999-11-16 Yoshio Inoue 胃にやさしい家畜用ミネラル（亜鉛）製剤及びその製造法
EP1242352A2 (en) 1999-12-23 2002-09-25 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Chalcone and its analogs as agents for the inhibition of angiogenesis and related disease states
US20020061599A1 (en) 1999-12-30 2002-05-23 Elling Christian E. Method of identifying ligands of biological target molecules
US8168657B2 (en) 2002-01-25 2012-05-01 Bowen J Phillip Solenopsin A, B and analogs and as novel angiogenesis inhibitors
WO2004080210A1 (en) 2003-03-14 2004-09-23 Boehringer Ingelheim Danmark A/S Compositions of dietary metals for support of the physiological intestinal development and prevention of diarrhoea
KR100498812B1 (ko) 2003-07-10 2005-07-01 주식회사 바이오리더스 초고분자량의 폴리감마글루탐산을 함유하는 미네랄의 체내흡수 촉진용 조성물
JP4457641B2 (ja) 2003-11-10 2010-04-28 味の素株式会社 ゼラチンカプセル
JP5162812B2 (ja) 2004-07-08 2013-03-13 大正製薬株式会社 亜鉛含有経口投与用組成物
KR101298631B1 (ko) 2005-06-07 2013-08-30 예일 유니버시티 엘에프엠에이유 및 엘디티를 사용하여 암 및 다른 증상또는 질환을 치료하는 방법
MX2007015479A (es) * 2005-06-10 2008-04-09 Bipar Sciences Inc Moduladores de (poli-adp ribosa polimerasa) y tratamiento contra el cancer.
WO2007109290A2 (en) 2006-03-20 2007-09-27 Pharmacyclics, Inc. Water-soluble zinc ionophores, zinc chelators, and/or zinc complexes and use for treating cancer
US20080253969A1 (en) 2007-04-10 2008-10-16 Nitto Denko Corporation Multi-functional polyglutamate drug carriers
WO2008140781A1 (en) 2007-05-09 2008-11-20 Atherogenics, Inc. Spiro compounds for treatment of inflammatory disorders
WO2008141110A2 (en) 2007-05-09 2008-11-20 Nitto Denko Corporation Polyglutamate conjugates and polyglutamate-amino acid conjugates having a plurality of drugs
EP2416786A1 (en) 2009-04-10 2012-02-15 Cypress Pharmaceutical, Inc. Phosphate-binding magnesium salts and uses thereof
JO3635B1 (ar) 2009-05-18 2020-08-27 Millennium Pharm Inc مركبات صيدلانية صلبة وطرق لانتاجها
CN101716180B (zh) 2009-11-06 2013-04-24 广西强寿药业集团有限公司 一种组合补充锌、钙药物及其制备方法
US20110117210A1 (en) 2009-11-17 2011-05-19 Andrey Ugolkov Therapeutic treatment of human cancers using simple salts of zinc
EP2544660B1 (en) 2010-03-10 2018-06-13 Lupin Limited Rifaximin ready-to-use suspension
CA2845806C (en) 2011-09-13 2019-06-11 Pharmacyclics, Inc. Formulations of histone deacetylase inhibitor in combination with bendamustine and uses thereof
US9248158B2 (en) 2012-11-21 2016-02-02 KBS Research, LLC Herbal supplements and methods of use thereof
TWI660748B (zh) 2013-03-01 2019-06-01 日商大塚製藥股份有限公司 用於口服投藥之包含非晶型托伐普坦（Ｔｏｌｖａｐｔａｎ）的懸浮液
WO2014175898A1 (en) 2013-04-26 2014-10-30 Nitto Denko Corporation A large scale process for preparing poly (glutamyl-glutamate) conjugates
US10398682B2 (en) 2013-07-15 2019-09-03 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Methods and compositions to prevent or treat bacterial infections
JP2016069303A (ja) 2014-09-29 2016-05-09 タカラバイオ株式会社 フコイダンを有効成分とする脱毛抑制用組成物
DK3006045T3 (en) 2014-10-07 2017-07-17 Cyprumed Gmbh Pharmaceutical formulations for oral administration of peptide or protein drugs
AU2015330937B2 (en) 2014-10-08 2021-07-15 Theriva Biologics, Inc. Beta-lactamase formulations and uses thereof
US20160122739A1 (en) 2014-10-31 2016-05-05 Wisconsin Alumni Research Foundation Factor ix variants and methods of use therefor
WO2016088816A1 (ja) 2014-12-03 2016-06-09 ノーベルファーマ株式会社 酢酸亜鉛水和物錠及びその製造方法
AU2017312121A1 (en) 2016-08-19 2019-03-21 Brooklyn Immunotherapeutics Llc Uses of PD-1/PD-L1 inhibitors and/or CTLA-4 inhibitors with a biologic containing multiple cytokine components to treat cancer
SG10201609131YA (en) 2016-11-01 2018-06-28 Xylonix Ip Holdings Pte Ltd Zinc-pga compositions and methods for treating cancer
SG10201708886RA (en) 2017-10-30 2019-05-30 Xylonix Ip Holdings Pte Ltd α-PGA-ZINC COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING CANCER
SG11202012373YA (en) 2018-06-22 2021-01-28 Xylonix Ip Holdings Pte Ltd Oncology treatments using zinc agents

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007043606A1 (ja) * 2005-10-12 2007-04-19 Genolac Bl Corporation アニオン性ポリアミノ酸／金属複合体からなる抗糖尿病薬剤
WO2014155142A1 (en) * 2013-03-28 2014-10-02 Bbs Nanotechnology Ltd. Stable nanocomposition comprising doxorubicin, process for the preparation thereof, its use and pharmaceutical compositions containing it
US20160030454A1 (en) * 2013-04-12 2016-02-04 Rebecca Lambert BENT Cancer therapy

Also Published As

Publication number Publication date
SG10201609131YA (en) 2018-06-28
JP2022116255A (ja) 2022-08-09
SG11201903753QA (en) 2019-05-30
AU2023203220A1 (en) 2023-06-22
EP3534914A1 (en) 2019-09-11
SG10202013112YA (en) 2021-02-25
US11944640B2 (en) 2024-04-02
AU2017354787A1 (en) 2019-05-16
MX2019005104A (es) 2019-10-30
MX2022011372A (es) 2022-10-10
AU2017354787B2 (en) 2023-02-23
JP7466822B2 (ja) 2024-04-15
JP7083835B2 (ja) 2022-06-13
KR20190120159A (ko) 2019-10-23
JP2019534330A (ja) 2019-11-28
WO2018084806A1 (en) 2018-05-11
CN116350658A (zh) 2023-06-30
CN108014131A (zh) 2018-05-11
US20190255104A1 (en) 2019-08-22
CA3042383A1 (en) 2018-05-11
CN108014131B (zh) 2023-04-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102616690B1 (ko) 아연-γ-PGA 조성물 및 암을 치료하기 위한 방법
US11471422B2 (en) Stealth, targeted nanoparticles (STN) for oral drug delivery
CN110087632B (zh) 乳酸钙组合物和使用方法
Kumar et al. Effect of co-administration of probiotics with guar gum, pectin and eudragit S100 based colon targeted mini tablets containing 5-Fluorouracil for site specific release
US10905661B2 (en) Disulfiram and metal salt staggered oral dosing regimen and staggered-release oral unit dosage forms
JP2021509661A (ja) コレステロール、グルコースおよびマイクロバイオームを制御するための組成物および方法
JP7352541B2 (ja) がんを処置するためのアルファ－ポリグルタミン酸－亜鉛を含む組成物
Li et al. Preparation, physical characterization, pharmacokinetics and anti-hyperglycemic activity of esculetin-loaded mixed micelles
AU2018348892B2 (en) Formulation containing A-decarbonized-5a androstane compound for increasing white blood cell and use thereof
CA3013795A1 (en) Time release vitamins and minerals in edible oils
EP3534915B1 (en) Gamma-polyglutamic acid and zinc compositions
WO2015044961A2 (en) Pharmaceutical composition comprising capecitabine and cyclophosphamide

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant