KR102582690B1 - 3d 형태의 오가노이드 배양 장치 및 이를 이용한 오가노이드 배양 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치는, 3D 형태의 오가노이드를 제조하기 위한 배양 장치로서, 한 개 이상의 삽입홈이 마련되는 스테이지 및 상기 삽입홈에서 삽탈되며, 한 개 이상의 배양홈이 마련되는 배양 플레이트를 포함하고, 상기 배양 플레이트에 마련되는 배양홈은, 배양 플레이트의 표면에서 10 ㎛ 내지 1000 ㎛의 간격마다 50 ㎛ 내지 5000 ㎛의 직경을 가지는 패턴으로 형성되고, 본 발명을 이용한 3D 형태의 오가노이드를 제조하기 위한 배양 방법은, 배양 플레이트에 마련되는 배양홈에 세포를 주입하는 주입 단계; 배양 플레이트를 스테이지에 마련되는 삽입홈에 삽입시켜, 세포를 배양하는 배양 단계 및 배양이 완료되어 제조된 오가노이드를 배양홈의 외부로 배출하는 완료 단계를 통해 수행되어, 종래 이용되는 오가노이드 제조 장치에 비해 사용이 용이하며, 균일한 형태의 오가노이드를 배양할 수 있는 장점을 가진다.

Description

3D 형태의 오가노이드 배양 장치 및 이를 이용한 오가노이드 배양 방법 {3D -organoid culture device and organoid culture method using the same}

본 발명은 3D 형태의 오가노이드 배양 장치 및 이를 이용한 오가노이드 배양 방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 종래의 오가노이드 제조 장치보다 사용이 용이하며, 균일한 형태의 오가노이드를 배양할 수 있는 오가노이드 배양 장치 및 이를 이용한 오가노이드 배양 방법에 관한 것이다.

세포 배양이란 개체로부터 분리된 세포를 개체 밖에서 배양시키는 기술로서, 이와 같은 세포 배양은 개체의 체내와 유사하게 조성된 배양 환경을 일관되게 유지하는 것이 핵심적인 사항이다.

이러한 핵심적인 사항에 대하여, 오늘날 기술이 발전함에 따라 다양한 세포 배양 방식들이 제시되고 있다.

이 중 전통적으로 사용되는 세포 배양 방식의 경우, 2차원 방향으로 얇게 퍼진 단층세포를 배양하는 방식을 가지고 있으나, 이는 세포가 본래 체내에서 갖는 특이적인 기능을 장시간 유지할 수 없게 되는 문제가 있다.

따라서, 최근에는 생체 내와 동등한 기능을 갖는 3차원 조직인 오가노이드의 배양이 주목을 받고 있으며, 현재 다양한 3차원 오가노이드 배양 기술이 개발되고 있다.

그러나, 이와 같은 다양한 3차원 오가노이드 배양 기술에 있어서도, 오가노이드 배양물은 매우 작기 때문에, 소정의 플레이트에 담은 상태로 배지를 교체하게 될 경우, 높은 확률로 유실될 가능성이 많다는 문제가 있다.

이는 일반적으로 배지를 진공펌프(Vacuum Pump)를 이용하여 제거하기 때문으로, 매우 작은 오가노이드를 눈으로 확인하며 배지만을 교체한다는 것은 매우 불편하고 어려운 것임은 물론, 작업자가 높은 피로도를 느끼기 때문에, 연구 일정이 지연되거나 작업자의 건강이 악화되는 추가적인 문제도 있다.

이에 따라, 전술한 바와 같은 문제를 해결하기 위한 3D 형태의 오가노이드 배양 장치 및 이를 이용한 오가노이드 배양 방법에 관한 기술개발이 절실한 실정이었다.

본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치 및 이를 이용한 오가노이드 배양 방법은, 종래의 오가노이드 제조 장치보다 사용이 용이하며, 균일한 형태의 오가노이드를 배양할 수 있는 오가노이드 배양 장치 및 이를 이용한 오가노이드 배양 방법을 제공하는데 목적을 가진다.

상기 과제를 해결하기 위해 고안된 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치는, 3D 형태의 오가노이드를 제조하기 위한 배양 장치로서, 한 개 이상의 삽입홈이 마련되는 스테이지 및 상기 삽입홈에서 삽탈되며, 한 개 이상의 배양홈이 마련되는 배양 플레이트를 포함하고, 상기 배양 플레이트에 마련되는 배양홈은, 배양 플레이트의 표면에서 10 ㎛ 내지 1000 ㎛의 간격마다 50 ㎛ 내지 5000 ㎛의 직경을 가지는 패턴으로 형성될 수 있다.

또한, 상기 삽입홈의 하방에는, 삽입된 배양 플레이트의 방향으로 에어를 공급함으로써 배양 플레이트를 삽입홈의 외부로 배출시키는 제 1 에어분사구가 마련될 수 있다.

또한, 상기 배양홈의 하방에는, 상기 제 1 에어분사구로부터 에어를 공급받은 이후, 오가노이드의 방향으로 에어를 전달함으로써 오가노이드를 배양홈에서 배출시키는 제 2 에어분사구가 마련될 수 있다.

또한, 상기 스테이지의 내부에는, 상기 삽입홈의 외부 둘레를 따라 마련되며, 열을 발생시키는 가열 수단이 마련될 수 있다.

또한, 본 발명의 실시 예에 따른 상기 오가노이드 배양 장치는, 상기 배양홈에 안착되어 배양되는 오가노이드를 외부의 충격 또는 이물질로부터 보호하는 보호 커버를 더 포함하고, 상기 보호 커버는, 상기 스테이지의 상부에서 탈부착되거나 상기 스테이지의 일점 또는 일축을 기준으로 회동하도록 구비되어, 스테이지의 상부를 선택적으로 개방 또는 밀폐시키도록 동작할 수 있다.

여기서, 상기 보호 커버는, 상기 보호 커버의 내벽에서 수직하게 마련되며, 내부로는 냉각 수단 또는 가열 수단이 유동하도록 마련된 제 1 공조 유로 및 상기 보호 커버의 내부 천장에 마련되며, 내부로는 냉각 수단 또는 가열 수단이 유동하도록 마련된 제 2 공조 유로를 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치는, 상기 보호 커버 내부의 임계적 상태를 측정하는 측정부 및 상기 측정부를 통해 측정된 임계적 상태를 전달받아 사용자에게 표시하며, 사용자의 입력값을 입력받는 입출력장치를 더 포함할 수 있다.

한편, 본 발명의 실시 예에 따른 배양 장치를 이용하여 3D 형태의 오가노이드를 제조하기 위한 배양 방법에 있어서, 배양 플레이트에 마련되는 배양홈에 세포를 주입하는 주입 단계; 배양 플레이트를 스테이지에 마련되는 삽입홈에 삽입시켜, 세포를 배양하는 배양 단계 및 배양이 완료되어 제조된 오가노이드를 배양홈의 외부로 배출하는 완료 단계를 포함할 수 있다.

본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치 및 이를 이용한 오가노이드 배양 방법은, 종래의 오가노이드 제조 장치보다 사용이 용이하며, 균일한 형태의 오가노이드를 배양할 수 있다.

또한, 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치는, 배양을 완료한 오가노이드를 추출하기 위한 별도의 수집 장치 없이도, 오가노이드를 배양홈에서 손쉽게 배출시켜 수집하거나, 배양 플레이트 자체를 삽입홈에서 쉽게 뽑아낼 수 있는 장점을 가진다.

또한, 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치는, 배양 플레이트의 상부를 커버함으로써, 배양 플레이트에서 배양중인 오가노이드를 외부의 충격 또는 이물질로부터 보호할 수 있는 장점을 가진다.

여기서, 상기 보호 커버의 내부와 외부에는, 사용자가 오가노이드를 배양함에 있어 소요되는 장치들이 구비됨으로써, 별도의 오가노이드 관리 장치가 필요하지 않은 장점을 가진다.

도 1 은 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치의 예시도이다.
도 2 는 배양 플레이트에 마련되는 배양홈간의 간격과 배양홈의 직경을 보여주기 위한 평면예시도이다.
도 3 은 제 1 에어분사구가 마련되는 삽입홈의 모습을 보여주는 스테이지의 측단면도이다.
도 4 는 제 2 에어분사구가 마련된 배양플레이트의 모습을 보여주는 평면예시도이다.
도 5 는 제 1 에어분사구와 함께 제 2 에어분사구가 마련된 스테이지의 측단면도이다.
도 6 은 배양홈의 내부 모서리가 완만하게 형성되는 모습을 보여주기 위한 예시도이다.
도 7 은 공압 전달 수단을 이용하여 오가노이드를 배출하는 모습을 보여주는 예시도이다.
도 8 은 가열 수단이 마련되는 스테이지의 투영예시도이다.
도 9 는 보호 커버가 마련된 오가노이드 배양 장치의 예시도이다.
도 10 의 (a) 는 일점을 기준으로 회동하는 보호 커버의 작동예시도이고, (b) 는 일축을 기준으로 회동하는 보호 커버의 작동예시도이다.
도 11 은 공조 유로가 형성된 보호 커버의 예시도이다.
도 12 의 (a) 및 (b) 는 본 발명의 실시 예에 따른 측정부, 입출력장치 및 공조장치가 마련된 보호 커버의 예시도이다.
도 13 은 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치를 이용한 오가노이드 배양 방법의 흐름도이다.
도 14 는 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치 및 이를 이용한 오가노이드 배양 방법을 통해 배양되는 3D 형태의 오가노이드의 모습을 보여주는 예시도이다.

이하, 도면을 참조한 본 발명의 설명은 특정한 실시 형태에 대해 한정되지 않으며, 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시 예를 가질 수 있다. 또한, 이하에서 설명하는 내용은 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

이하의 설명에서 제 1, 제 2 등의 용어는 다양한 구성요소들을 설명하는데 사용되는 용어로서, 그 자체에 의미가 한정되지 아니하며, 하나의 구성요소를 다른 구성요소로부터 구별하는 목적으로만 사용된다.

본 명세서 전체에 걸쳐 사용되는 동일한 참조 번호는 동일한 구성요소를 나타낸다.

본 발명에서 사용되는 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 또한, 이하에서 기재되는 "포함하다", "구비하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서 상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것으로 해석되어야 하며, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.

다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥 상 갖는 의미와 일치하는 의미를 갖는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.

또한, 첨부 도면을 참조하여 설명함에 있어, 도면 부호에 관계없이 동일한 구성 요소는 동일한 참조 부호를 부여하고 이에 대한 중복되는 설명은 생략하기로 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.

이하, 본 발명의 실시 예를 첨부한 도 1 내지 도 14 를 참조하여 본 발명의 실시 예에 따른 3D 형태의 오가노이드 배양 장치(1) 및 이를 이용한 오가노이드 배양 방법에 관하여 자세히 설명하기로 한다.

도 1 은 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치의 예시도이고, 도 2 는 배양 플레이트에 마련되는 배양홈간의 간격과 배양홈의 직경을 보여주기 위한 평면예시도이며, 도 14 는 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치를 통해 배양되는 3D 형태의 오가노이드의 모습을 보여주는 예시도이다.

도 1 내지 도 2 및 도 14 를 참조하면, 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치(1)는, 3D 형태의 오가노이드(S)를 제조하기 위한 목적을 가지는 오가노이드 배양 장치로서, 스테이지(100) 및 배양 플레이트(200)의 구성을 포함할 수 있다.

먼저, 상기 스테이지(100)는, 도 1 에 도시된 바와 같이 직사각형의 단면을 가진 상태에서 소정 높이를 가지도록 형성됨으로써, 궁극적으로는 사각 박스의 형상을 가지도록 마련될 수 있다.

이때, 상기 스테이지(100)의 형상은, 바람직하게는 사각 박스의 형상일 수 있으나, 이는 하나의 형상적 예시일 뿐, 원의 단면을 가지도록 형성되며 소정의 높이를 이루는 원통형, 또는 삼각형, 오각형과 같은 다각형의 단면을 가지며 소정의 높이를 이루는 다각 기둥의 형상으로 마련될 수도 있다.

또한, 상기 스테이지(100)의 하방에는, 미끄럼을 방지하기 위한 미끄럼 방지 부재가 마련될 수 있으며, 상기 미끄럼 방지 부재는, 고무 또는 우레탄과 같이 고마찰 계수를 가지는 합성 수지가 이용될 수 있다.

이에 따라, 본 발명의 실시 예에 따른 스테이지(100)는, 본 발명이 설치되는 실험실의 테이블 혹은 설치대의 고정면에서 고정력을 형성할 수 있다.

또한, 상기 스테이지(100)의 상부에는, 한 개 이상의 삽입홈(110)이 마련될 수 있으며, 이때, 상기 삽입홈(110)의 형상은, 단면이 원형의 형상을 이루도록 마련될 수 있다.

또한, 상기 삽입홈(110)은, 스테이지(100)의 상부로부터 스테이지(100) 하부의 방향으로 소정 깊이를 이루는, 뚫린 상태로 마련될 수 있으며, 가장 바람직하게는, 상기 스테이지(100) 중단의 높이까지 뚫려있는 상태로 마련될 수 있다.

이때, 상기 삽입홈(110)의 깊이가 너무 앝을 경우, 이후 구체적으로 서술될 배양 플레이트(200)가 스테이지(100)의 삽입홈(110)에서 너무 쉽게 이탈되는 문제가 발생할 수 있고, 삽입홈(110)의 깊이가 너무 깊을 경우, 사용자가 배양 플레이트(200)를 삽입홈(110)에서 꺼내기 쉽지 않은 문제가 발생할 수 있으므로, 삽입홈(110)의 깊이는 이와 같은 문제를 해소할 수 있도록, 스테이지(100) 중단까지의 깊이를 가지도록 마련될 수 있다.

또한, 상기 삽입홈(110) 외주면의 테두리에는, 일정한 반지름을 형성하도록 완만한 곡선의 단면을 가지는 삽입 가이드(111)가 마련될 수 있다.

이와 같이, 삽입홈(110)의 외주면 테두리가 소정 반지름을 형성할 경우, 이후 서술될 배양 플레이트(200)의 삽입을 원활히 가이드할 수 있어, 사용자가 보다 쉽게 삽입홈(110)에서 배양 플레이트(200)를 삽탈시킬 수 있는 장점을 가진다.

또한, 상기 스테이지(100)에 마련되는 삽입홈(110)은, 스테이지(100)에서 사각형의 배열, 가장 바람직하게는 정사각의 배열을 가지도록 형성될 수 있다.

또한, 상기 스테이지(100)의 외곽 테두리에는, 삽입홈(110)의 위치를 사용자에게 표시해주기 위하여, 스테이지(100)의 테두리 가로의 방향으로는 글자(A, B, C), 스테이지(100)의 테두리 세로의 방향으로는 아라비아 숫자(1, 2, 3)가 표시되는 행렬표가 일정한 간격으로 마련될 수 있으며, 이를 통해, 본 발명을 사용하는 사용자는, 스테이지(100)의 삽입홈(110)에 삽입된 배양 플레이트(200)의 위치를 정확하게 파악할 수 있는 장점을 가진다.

또한, 상기 배양 플레이트(200)는, 상기 원형의 단면을 갖도록 형성된 삽입홈(110)에 대응되어 끼워 맞춰질 수 있도록, 전체적인 형상이 소정 두께를 가지는 원판의 형상으로 마련될 수 있다.

여기서, 상기 배양 플레이트(200)는, Soft bake, Exposure, PEB(Post Exposure Bake), Development 단계를 포함하는 반도체 공정 단계를 통해 형성될 수 있으며, 여기서 말하는 반도체 공정이란, 웨이퍼 공정, 산화 공정, 포토리소그래피 공정, 식각 공정, 박막 공정, 금속 배선 공정 및 EDS 공정 단계를 통해 수행되는 반도체 공정을 지칭하는 것으로서, 이하, 상기 반도체 공정 단계에 대해 설명하도록 한다.

먼저, Soft bake 과정에서는 배양 플레이트(200)를 형성하기 위한 웨이퍼 원자재를 1차적으로 약 30 °C 내지 200 °C 의 온도에서 약 2시간 내지 48시간 Bake 해준다.

다음으로, 노광(Exposure) 단계는 2W 내지 200W 범위의 파워를 가지는 자외선(UV)을 약 15분 내지 25분 이내로 웨이퍼에 쬐어주어 웨이퍼 위에 패턴을 형성해주는 단계이다.

다음으로, PEB(Post Exposure Bake) 공정 단계에서는 노광 단계가 끝나고 진행되는 단계로서, 패턴이 형성된 웨이퍼를 50 °C 내지 120 °C 에서 약 7시간 이내로 Bake 해준다.

이후, SU-8 Developer 용액에 노광된 웨이퍼를 투입시키고, 약 30분 내지 90분 동안 천천히 흔들어 준다.

다음으로, 완성된 웨이퍼 위에 6시간 내지 24시간 동안 특수 코팅을 하여 추후 PDMS 몰드가 잘 떨어질 수 있는 상태로 만들어준다.

그 이후, 1:10 비율로 만들어진 PDMS 를 웨이퍼에 부어서 약 5분 내지 60분 동안 진공 처리를 한 후, 약 1시간 내지 12시간 동안 오븐에서 방치 후 커팅용 펀치를 이용해서 Device를 하나씩 만들어 주는 단계를 통해 수행될 수 있다.

또한, 상기 배양 플레이트(200)의 표면에는, 세포 배양액을 투입하여 오가노이드(S)를 제조하기 위한 한 개 이상의 배양홈(210)이 마련될 수 있다.

여기서, 상기 배양 플레이트(200)에 투입되는 세포 배양액은, 단일 세포계 (primary cell line), 무한 증식 세포계(continuous cell line), 줄기 세포(Stem cell), 종양 세포(Tumor cell), 면역 세포(Immunocyte), 박테리아(Bacteria) 및 미생물(Microorganism)과 같이, 오가노이드(S)를 제조하기 위해 이용되는 세포가 모두 이용될 수 있다.

또한, 상기 배양 플레이트(200)는, 상기 스테이지(100)에 마련되는 삽입홈(110)에서 삽탈되도록 구비될 수 있다.

구체적으로, 상기 배양 플레이트(200)에 마련되는 배양홈(210)은, 원판의 형상으로 형성되는 배양 플레이트(200)의 표면에서, 10 ㎛ 내지 1000 ㎛의 간격(D1)마다 50 ㎛ 내지 5000 ㎛의 직경(D2)을 가지는 원형의 패턴으로 형성될 수 있으며, 가장 바람직하게는, 200㎛의 직경(D2)을 가진 상태로, 200 ㎛의 이격 거리(D1)를 형성하도록 마련될 수 있다.

여기서, 상기 배양홈(210)의 간격(D2)이 10 ㎛ 미만일 경우, 지나치게 가까운 거리로 형성되는 배양홈(210)으로 인하여, 각각의 배양홈(210)에 삽입된 오가노이드(S) 객체의 개별 추출이 어려움과 동시에, 배양 플레이트(200)를 삽입홈(110)에서 탈거시킨 이후, 각각의 오가노이드(S)를 수월하게 컨트롤 하기 어려우며, 또한, 1000 ㎛의 간격을 초과할 경우, 지나치게 넓은 간격으로 형성됨에 따라, 배양 플레이트(200)의 효율적인 운용이 불가능한 문제점이 발생할 수 있으므로, 상기 배양홈(210)의 간격은 10 ㎛ 내지 1000 ㎛의 간격을 유지하도록 마련되는 것이 바람직하다.

또한, 상기 배양홈(210)의 직경(D2)이 50 ㎛ 미만으로 형성될 경우, 배양홈(210)에서 배양되는 오가노이드(S)가 지나치게 작은 상태로 배양되어, 사용자가 본 발명을 이용하여 배양된 오가노이드(S)를 이용함에 있어 용이하지 않은 문제점이 발생할 수 있으며, 5000 ㎛의 직경을 초과할 경우, 지나치게 넓은 직경으로 인하여 본 발명을 통해 배양되는 오가노이드(S)가 3D의 형상을 유지하기 위한 영양분 공급이 원활하지 않을 수 있기 때문에, 상기 배양홈(210)의 직경(D2)은, 효과적으로 3D 형태의 오가노이드(S)를 제조하기 위하여 50 ㎛ 내지 5000 ㎛의 직경을 유지하도록 형성되는 것이 바람직할 수 있으며, 이와 더불어 도 14 를 예로 들어 설명하자면, 배양홈(210)이 형성하는 반지름(D3)의 길이가 25㎛ 내지 2500㎛의 길이를 가지도록 형성될 수 있는 것이다.

한편, 상기 배양 플레이트(200)는, 폴리디메틸실록산(PDMS)의 소재로 형성될 수 있으며, 상기 폴리디메틸실록산(PDMS)은, 열적 안정성과, 자외선에 대한 저항력이 높으며, 절연 성능이 뛰어난 장점을 가진다.

그러나, 상기 배양 플레이트(200)를 이루기 위한 폴리디메틸실록산(PDMS)의 소재는 가장 바람직한 소재일 뿐, 배양 플레이트(200)를 이루기 위해 보다 다양한 중합체가 이용될 수 있으며, 왁스, 테플론, 포토레지스트, 폴리테트라 플루오로에틸렌(Polytetrafluoroethylene), 왁스 (wax), 실리콘(silicone), 금속 나노입자, 금속 산화물 나노입자, 실리카 나노입자, 중합체 나노 입자 또는 이들의 조합으로 형성될 수도 있다.

상기 배양 플레이트(200)를 형성하기 위한 방법을 보다 구체적으로 설명하자면, 상기 배양 플레이트(20)는, 가열 단계를 통해 수행될 수 있다.

먼저, 상기 가열 단계는, 상기 배양 플레이트(200)를 형성하기 위한 원자재, 즉, 폴리디메틸실록산(PDMS)를 50 내지 90 °C의 온도에서 2 내지 24 시간 동안 가열시키는 과정을 통해 수행될 수 있다.

이때, 상기 가열 단계가 50 °C 미만의 온도와, 2 시간 미만의 시간 동안 수행될 경우, 배양 플레이트(200)를 제작하기 위해 이용되는 폴리디메틸실록산(PDMS) 원자재가 적절한 온도와 시간 동안 가열되지 못함으로 인해, 폴리디메틸실록산(PDMS) 원자재의 표면에 배양홈(210)의 패턴이 명확하게 형성되기 어렵고, 가열 단계가 90 °C 의 온도와 24 시간을 초과하는 시간 동안 수행될 경우, 지나치게 높은 온도와 긴 시간 동안 열에 노출됨으로 인하여 폴리디메틸실록산(PDMS) 원자재에 변형이 일어날 수 있으므로, 상기 가열 단계는 50 내지 90 °C 의 온도에서 2 시간 내지 24 시간 동안 수행되는 것이 바람직할 수 있다.

한편, 상기 가열 단계를 설명하는 과정에서 기재된 임계적인 수치(온도, 시간, 와트)는, 폴리디메틸실록산(PDMS)의 소재로 형성되는 배양 플레이트(200)를 제작하기 위한 가장 바람직한 임계적 수치일 뿐, 배양 플레이트(200)를 형성하는 소재에 따라 다양한 임계적 수치값을 통해 수행될 수도 있다.

이에 따라, 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치(1)는, 종래의 오가노이드 제조 장치보다 사용이 용이하며, 균일한 3D 형태의 오가노이드(S)를 배양할 수 있는 장점을 가진다.

또한, 도 3 은 제 1 에어분사구가 마련되는 삽입홈의 모습을 보여주는 스테이지의 측단면도이다.

도 3 을 참조하면, 본 발명의 실시 예에 따른 배양 플레이트(200)는, 앞서 서술된 바와 같이, 삽입홈(110)이 이루는 원형의 형상과 상응하는 형상을 이루도록 형성됨으로써, 삽입홈(110)에 끼워 맞춤이 가능한 형상으로 마련될 수 있다.

예를 들어, 본 발명의 실시 예에 따른 삽입홈(110)이 원의 형상으로 형성되며, 직경이 최대 길이 1CM을 가지도록 형성될 경우, 배양 플레이트(200)역시 원의 형상으로 형성되며, 직경의 최대 길이가 0.95CM 내지 1CM 미만의 직경을 가지도록 형성될 수 있는 것이다.

이때, 상기 삽입홈(110)의 직경과 배양 플레이트(200)의 직경이 완전히 동일한 직경을 가지도록 형성될 경우, 사용자가 배양 플레이트(200)를 삽입홈(110)에 끼워넣거나 빼내는데 있어 어려움을 겪을 수 있으므로, 상기 삽입홈(110)과 배양 플레이트(200) 간에는, 끼워 맞춤이 용이하게 수행될 수 있는 최소한의 공차를 가지도록 마련될 수 있다.

또한, 본 발명의 실시 예에 따른 삽입홈(110)의 내측 하방에는, 삽입된 배양 플레이트(200)의 방향으로 에어를 분사함으로써 배양 플레이트(200)를 삽입홈(110)에서 배출시키는 제 1 에어분사구(120)가 마련될 수 있다.

이때, 상기 스테이지(100)의 내부에는, 도 3 에 도시된 바와 같이, 배양 플레이트(200)의 하방에서 공기를 전달받기 위해 소정 공간을 형성하는 중공부가 마련될 수 있다.

또한, 상기 스테이지(100)의 하단에는, 스테이지(100)의 내부에 마련되는 중공부로 공기를 공급함으로써, 제 1 에어분사구(120)의 방향으로 에어를 공급하는 에어 공급 수단(AC)이 마련될 수 있다.

이에 따라, 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치(1)는, 삽입홈(110)에 삽입되어 있던 배양 플레이트(200)를, 제 1 에어분사구(120)를 통해 공급되는 에어의 공압을 이용하여 손쉽게 스테이지(100)의 외부로 탈거시킬 수 있으므로, 보다 손쉬운 운용이 가능한 장점을 가진다.

또한, 도 4 는 제 2 에어분사구가 마련된 배양플레이트의 모습을 보여주는 평면예시도이며, 도 5 는 제 1 에어분사구와 함께 제 2 에어분사구가 마련된 스테이지의 측단면도이며, 도 6 은, 배양홈의 내부 모서리가 완만하게 형성된 모습을 보여주기 위한 예시도이며, 도 7 은 공압 전달 수단을 이용하여 오가노이드를 배출하는 모습을 보여주는 예시도이다.

도 4 내지 도 7 을 참조하면, 본 발명의 실시 예에 따른 배양홈(210)의 내측 하방에는, 배양홈(210)에서 배양중인 오가노이드(S)의 방향으로 에어를 공급함으로써 오가노이드(S)를 배양홈(210)에서 배출시키는 제 2 에어분사구(220)가 마련될 수 있다.

보다 구체적으로, 상기 제 2 에어분사구(220)는, 앞서 서술되었던 에어 공급 수단(AC)으로부터 공급되는 공기를 전달받는 제 1 에어분사구(120)를 통해 공급되는 공기를 이어받은 이후, 배양홈(210)에서 배양중인 오가노이드(S)의 방향으로 에어를 공급함으로써, 배양중인 또는 배양을 완료한 오가노이드(S)를 외부로 배출시키도록 운용될 수 있다.

또한, 도 6 을 참조하면, 상기 배양홈(210)에 형성되는 하방의 모서리에는, 그의 모서리가 완만한 형상을 이루도록 형성되는 굴곡부(211)가 마련될 수 있으며, 이처럼, 내측이 완만한 모서리를 가지도록 마련되는 배양홈(210)은, 배양홈(210)의 중심 반경에 오가노이드(S)를 위치시켜 배양시킴에 있어 보다 용이한 장점을 가짐과 동시에, 오가노이드(S)의 배출시에도, 보다 손쉽게 배출시킬 수 있는 장점을 가진다.

이에 따라, 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치(1)는, 배양을 완료한 오가노이드(S)를 추출하기 위한 별도의 수집 장치 없이도, 오가노이드(S)를 배양홈(210)에서 손쉽게 수집할 수 있는 장점을 가진다.

또한, 도 7 은 공압 전달 수단을 이용하여 오가노이드를 배출하는 모습을 보여주는 예시도이다.

도 7 을 참조하면, 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치(1)는, 앞서 설명되었던 제 2 에어분사구(220)에 에어를 공급함으로써, 배양을 완료한 오가노이드(S)를 배출시킬 수 있는 공압 전달 수단(230)을 더 포함할 수 있다.

구체적으로, 상기 공압 전달 수단(230)은, 앞서 상술된 제 2 에어분사구(220)에 직접 삽입될 수 있는 에어 호스(231)와, 상기 에어 호스(231)에 에어를 공급해주는 에어 컴프레셔(232)의 구성의 조합을 통해 형성될 수 있다.

사용 예를 들어, 본 발명의 실시 예를 설명하자면, 먼저, 배양홈(210)에서 오가노이드(S)의 배양이 완료된 이후, 사용자가 배양 플레이트(200)를 스테이지(100)에서 빼내고, 외부로 빼내어진 배양 플레이트(200)를 뒤집은 상태에서, 제 2 에어분사구(220)에 에어 호스(231)를 꽂아 넣은 이후 에어 컴프레셔(232)를 이용하여 제 2 에어분사구(220)에 공기를 주입시킴으로써, 공압으로 하여금 오가노이드(S)를 하방으로 배출, 즉, 오가노이드(S)를 수집하기 위한 별도의 수집장치 또는 미디어(M)의 방향으로 배출시킬 수 있는 것이다.

이를 통해, 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치(1)는, 배양을 완료한 오가노이드(S)에 직접적으로 압력을 부여함으로써, 보다 확실하게 오가노이드(S)를 배양홈(210)에서 배출시킬 수 있는 장점을 가진다.

또한, 도 8 은 가열 수단이 마련되는 스테이지의 투영예시도이다.

도 8 을 참조하면, 본 발명의 실시 예에 따른 스테이지(100)의 내부에는, 전기를 인가 받아 열을 발생시키는 가열 수단(130)이 마련될 수 있다.

구체적으로, 상기 가열 수단(130)은, 앞서 서술된 삽입홈(110)의 외측 둘레의 테두리를 감싸도록 구비됨과 동시에, 다른 삽입홈(110)을 감싸도록 반복되는 패턴을 가지도록 형성됨으로써, 전체적인 형상이 파형의 형상을 가지도록 마련될 수 있다.

이때, 상기 가열 수단(130)은, 배양 플레이트(200)의 내부에 구비될 수도 있으나, 폴리디메틸실록산(PDMS)의 소재로 형성되는 배양 플레이트(200)의 내부에 가열 수단(130)이 직접 구비될 경우, 열 전도가 용이하지 않을 뿐만 아니라, 폴리디메틸실록산(PDMS)의 소재가 열에 의해 성질이 변형될 수도 있으며, 배양홈(210)에서 배양되는 오가노이드(S)에 직접적으로 열이 가해지게 될 경우, 오가노이드(S)를 배양함에 있어 장애가 발생할 수 있으므로, 오가노이드(S)에 간접열 만을 부여할 수 있도록 스테이지(100)에서 운용됨이 바람직하다.

이에 따라, 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치(1)는, 배양 플레이트(200)의 배양홈(210)에서 배양중인 오가노이드(S)에 간접적으로 열을 부여함으로써, 보다 효과적으로 오가노이드(S)의 배양을 수행할 수 있는 장점을 가진다.

또한, 도 9 는 보호 커버가 마련된 오가노이드 배양 장치의 예시도이며, 도 10 의 (a) 는 일점을 기준으로 회동하는 보호 커버의 작동예시도이고, (b) 는 일축을 기준으로 회동하는 보호 커버의 작동예시도이다.

도 9 및 도 10 을 참조하면, 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치(1)는, 배양홈(210)에 삽입되어 배양 중인 오가노이드(S)를 외부의 충격 또는 먼지와 같은 이물질로부터 보호할 수 있는 보호 커버(300)를 더 포함할 수 있다.

구체적으로, 상기 보호 커버(300)는, 상기 배양 플레이트(200)의 상부를 덮는 하우징 또는 케이스의 형상으로 형성될 수 있다.

이때, 상기 보호 커버(300)는, 상기 스테이지(100)의 높이와 상응하는 높이를 가지도록 형성되어, 스테이지(100)의 상면과 측면 테두리를 빈틈없이 감쌀 수 있는 형태로도 마련될 수 있으나, 스테이지(100)의 상면으로부터 소정 높이를 가지도록 형성됨으로써, 보호 커버(300) 내측으로 소정의 공간을 형성하도록 마련될 수 있다.

한편, 상기 보호 커버(300)가 도시된 사각 박스의 형태는 바람직한 일 형태일 뿐, 스테이지(100)의 상부를 가릴 수 있는 다양한 커버의 형상을 모두 포함할 수 있다.

이에 따라, 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치(1)는, 보호 커버(300)로 하여, 상기 배양홈(210)에 안착되어 배양되는 오가노이드(S)를 외부의 충격 또는 이물질로부터 보호할 수 있는 장점을 가진다.

여기서, 상기 보호 커버(300)는, 도 10 의 (a) 에 도시된 바와 같이, 상기 스테이지(100)의 일점을 기준으로 회동하거나, 도 10 의 (b) 에 도시된 바와 같이, 상기 스테이지(100)의 일축을 기준으로 회동하는 방식으로 마련될 수 있다.

이에 따라, 본 발명의 실시 예에 따른 보호 커버(300)는, 배양 플레이트(200)를 사용자의 요구에 따라 선택적으로 개방 또는 밀폐시키도록 운용될 수 있다.

또한, 상기 보호 커버(300)에는, 스테이지(100)를 밀폐시킨 이후, 보호 커버(300)를 스테이지(100)의 상부에서 고정시키는 시건장치(施鍵裝置)가 구비될 수 있다.

이에 따라, 본 발명의 실시 예에 따른 보호 커버(300)는, 오가노이드 배양 장치(1)를 이동시킴에 있어, 이를 임시 밀폐 시킨 이후 이동시킬 수 있어, 보다 안정적인 운용이 가능한 장점을 가진다.

또한, 도 11 은 공조 유로가 형성된 보호 커버의 예시도이다.

도 11 을 참조하면, 본 발명의 실시 예에 따른 보호 커버(300)는, 제 1 공조 유로(310) 및 제 2 공조 유로(320)를 포함할 수 있다.

여기서, 상기 제 1 공조 유로(310)와 제 2 공조 유로(320)는, 소정 길이를 이루며, 내부로는 기체 또는 액체의 유동이 가능한 호스의 형상으로 마련되어, 냉각 또는 발열을 위한 기체 또는 액체 상태의 냉각, 발열 수단이 유동할 수 있으며, 냉각, 발열 수단을 공급하기 위한 별도의 공급장치와 연결될 수 있다.

구체적으로, 상기 제 1 공조 유로(310)는, 상기 보호 커버(300)의 내벽을 따라 수직하게 마련될 수 있으며, 상기 제 2 공조 유로(320)는, 상기 보호 커버(300)의 내부의 천장에서 수평하게 마련될 수 있다.

이때, 상기 제 1 공조 유로(310)와 제 2 공조 유로(320)는, 도 11 에 도시된 바와 같이, 각각의 공조 유로(310, 320)의 길이 방향을 따라 물결무늬, 즉, 파형을 이루는 형상으로 마련되거나, 지그재그의 패턴을 가지도록 마련될 수 있다.

그러나, 상기 파형의 형상으로 마련되는 공조 유로(310, 320)는, 보호 커버(300)의 내부 공간에서 최대의 면적을 가지도록 하여, 열적 효율성을 높이기 위한 형태와 배열일 뿐, 반드시 절곡되는 형태가 아닌, 일자형의 길이를 갖도록 형성될 수 있다.

여기서, 본 발명의 실시 예에 따른 공조 유로(310, 320)는, 보호 커버(300)의 내부 온도를, 오가노이드(S)가 성장하기 가장 좋은 체온의 온도 범위인 35°C 내지 37°C 의 온도로 유지시키도록 운용됨이 가장 바람직할 수 있다.

사용 예를 들어, 본 발명의 실시 예에 따른 공조 유로(310, 320)가 마련된 보호 커버(300)의 동작을 일 예로 들어 설명하자면, 먼저, 수직으로 형성되는 제 1 공조 유로(310)에서는, 발열 수단이 유동하고, 제 2 공조 유로(320)에서는 냉각 수단이 유동함으로써, 보호 커버(300)의 측면에서는 공기가 상승하고, 보호 커버(300)의 중심, 상부로는 공기가 하강함으로써, 보호 커버(300)의 내부에서 공기의 대류 효과를 도출하여, 1% ~ 5% 범위 내의 이산화탄소 농도를 유지할 수 있으며, 이에 따라, 보호 커버(300) 내부의 온도를 유동적으로 조절할 수 있는 장점을 가진다.

정리하자면, 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치(1)는, 외부로부터 밀폐된 보호 커버(300) 내부의 환경, 보다 구체적으로는 보호 커버(300) 내부의 온도를 보다 유동적으로 조절함으로써, 보다 효율적으로 오가노이드(S)의 배양을 촉진시킬 수 있는 장점을 가진다.

또한, 도 12 의 (a) 및 (b) 는 본 발명의 실시 예에 따른 측정부, 입출력장치 및 공조장치가 마련된 보호 커버의 예시도이다.

도 12 를 참조하면, 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치(1)는, 측정부(330) 및 입출력장치(340)를 더 포함할 수 있다.

먼저 상기 측정부(330)는, 상기 보호 커버(300) 내부의 임계적 상태를 측정할 수 있다.

구체적으로, 상기 측정부(330)는, 보호 커버(300)의 내부에 구비되어, 보호 커버(300) 내부의 습도를 측정하는 습도 측정 센서(331), 보호 커버(300) 내부의 온도를 측정하는 온도 측정 센서(332) 및 보호 커버(300) 내부의 이산화탄소 농도를 측정하는 이산화탄소 농도 측정 센서(333)를 포함할 수 있다.

또한, 상기 입출력장치(340)는, 상기 측정부(330)를 통해 측정된 임계적 상태값을 전달받아 사용자에게 표시할 수 있으며, 도 12 에 도시된 바와 같이 보호 커버(300)의 상단에 구비되는 디스플레이(D) 및 스위치(S) 장치의 구성으로 구비될 수 있다.

또한, 앞서 서술되었던 제 1 공조 유로(310)와 제 2 공조 유로(320)는, 상기 입출력장치(340)를 통해 사용자의 입력값을 입력받음으로써, 그의 동작이 제어될 수 있다.

또한, 상기 입출력장치(340)에는, 사용자의 설정값을 입력받아, 온도 또는 습도 또는 자외선량 중, 어느 하나의 임계적 수치가 사용자가 설정한 기설정값을 초과할 경우, 이를 소리 또는 빛으로 사용자에게 알리는 알림수단이 마련될 수도 있다.

이를 통해, 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치(1)는, 오가노이드(S)를 배양함에 있어 중요한 임계적 수치인 온도와 습도 및 자외선에 관한 정보를 실시간으로 파악할 수 있으므로, 오가노이드(S)를 배양함에 있어 보다 효과적인 운용이 가능한 장점을 가진다.

또한, 도 12 를 참조하면, 본 발명의 실시 예에 따른 보호 커버(300)에는, 앞서 서술되었던 제 1 공조 유로(310) 및 제 2 공조 유로(320)와 더불어, 보호 커버(300)의 내부에서 배양중인 오가노이드(S)의 배양 환경, 보다 구체적으로는 보호 커버(300)의 내부 환경을 35°C 내지 37°C 의 온도 및 1% ~ 5% 의 이산화탄소 농도를 조절하기 위한 공조 장치(350)가 마련될 수 있다.

구체적으로, 상기 공조 장치(350)는, 도 12 에 도시된 바와 같이, 보호 커버(300) 측방의 상단에 마련되는 블레이드 회전 방식의 팬(FAN)으로 마련될 수 있다.

또한, 상기 보호 커버(300)에 마련되는 공조 장치(350)는, 상기 스테이지(100)에 동일하게 마련될 수 있다.

구체적으로, 상기 공조 장치(350)가 스테이지(100)에 구비될 경우, 앞서 서술되었던 제 1 에어분사구(120)를 통해서 배양 플레이트(200)의 방향으로 에어가 공급되었을 경우, 배양 플레이트(200)에 마련된 제 2 에어분사구(220)의 안으로 에어가 공급되게 됨으로써, 과잉 발생되는 버블을 순간적으로 빠르게 제거할 수 있는 장점을 가진다.

한편, 도면에 도시된 회전하는 방식의 팬(FAN)은, 본 발명의 이해를 돕기 위해 공조 장치의 개략화된 구성을 나타내기 위한 표현으로써, 보호 커버(300) 내부의 공기를 외부 또는 내부로 유동시키기 위한 공조 수단 및 장치가 모두 이용될 수 있다.

또한, 도 13 은 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치를 이용한 오가노이드 배양 방법의 흐름도이며, 도 14 는 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 방법을 통해 배양되는 3D 형태의 오가노이드의 모습을 보여주는 예시도이다.

도 13 을 참조하면, 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 장치를 이용하여 3D 형태의 오가노이드를 제조하기 위한 배양 방법은, 주입 단계(S10), 배양 단계(S20) 및 완료 단계(S30)를 통해 오가노이드의 배양이 수행될 수 있다.

여기서, 상기 오가노이드는, 단일 세포계 (primary cell line), 무한 증식 세포계(continuous cell line), 줄기 세포(Stem cell), 종양 세포(Tumor cell), 면역 세포(Immunocyte), 박테리아(Bacteria) 및 미생물(Microorganism)과 같이, 오가노이드(S)를 제조하기 위해 이용되는 세포를 모두 포함할 수 있다.

먼저, 상기 주입 단계(S10)에서는, 배양 플레이트에 마련되는 배양홈에 세포가 주입될 수 있다.

다음으로, 상기 배양 단계(S20)에서는, 배양 플레이트를 스테이지에 마련되는 삽입홈에 삽입시켜, 세포를 배양하는 배양할 수 있다.

또한, 상기 완료 단계(S30)에서는, 배양이 완료되어 제조된 오가노이드를 배양홈의 외부로 배출할 수 있다.

이에 따라, 본 발명의 실시 예에 따른 오가노이드 배양 방법은, 종래의 오가노이드 제조 장치보다 수월한 방식으로 운용 가능한 장점을 가진다.

이상에서 도 1 내지 도 14 를 참조하여 본 발명의 실시 예에 따른 3D 형태의 오가노이드 배양 장치(1) 및 이를 이용한 오가노이드 배양 방법에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리범위에 속하는 것이다.

1 : 오가노이드 배양 장치
100 : 스테이지 110 : 삽입홈
111 : 삽입 가이드 120 : 제 1 에어분사구
130 : 가열 수단 200 : 배양 플레이트
210 : 배양홈 211 : 굴곡부
220 : 제 2 에어분사구 230 : 공압 전달 수단
231 : 에어 호스 232 : 에어 컴프레셔
300 : 보호 커버 310 : 제 1 공조 유로
320 : 제 2 공조 유로 330 : 측정부
331 : 습도 측정 센서 332 : 온도 측정 센서
333 : 이산화탄소 농도 측정 센서 340 : 입출력장치
350 : 공조 장치 AC : 에어 공급 수단
D : 디스플레이 S : 스위치
S : 오가노이드

Claims (8)

1. 3D 형태의 오가노이드를 제조하기 위한 배양 장치로서,
   한 개 이상의 삽입홈이 마련되는 스테이지 및
   상기 삽입홈에서 삽탈되며, 한 개 이상의 배양홈이 마련되는 배양 플레이트를 포함하고,
   상기 배양 플레이트에 마련되는 배양홈은,
   배양 플레이트의 표면에서 10 ㎛ 내지 1000 ㎛의 간격마다 50 ㎛ 내지 5000 ㎛의 직경을 가지는 패턴으로 형성되고,
   상기 오가노이드 배양 장치는,
   상기 배양홈에 안착되어 배양되는 오가노이드를 외부의 충격 또는 이물질로부터 보호하는 보호 커버를 더 포함하고,
   상기 보호 커버는,
   상기 스테이지의 상부에서 탈부착되거나 상기 스테이지의 일점 또는 일축을 기준으로 회동하도록 구비되어, 스테이지의 상부를 선택적으로 개방 또는 밀폐시키도록 동작하고,
   상기 보호 커버는,
   상기 보호 커버의 내벽에서 수직하게 마련되며, 내부로는 가열 수단이 유동하도록 마련된 제 1 공조 유로 및
   상기 보호 커버의 내부 천장에 마련되며, 내부로는 냉각 수단이 유동하도록 마련된 제 2 공조 유로를 포함하고,
   상기 보호커버는,
   측면에서는 공기가 상승하고, 중심과 상부로는 공기가 하강하게 되어 내부에서 공기의 대류 효과를 도출하여 이산화탄소 농도를 유지하게 하는 것을 특징으로 하는 오가노이드 배양 장치
   
2. 제 1 항에 있어서,
   상기 삽입홈의 하방에는,
   삽입된 배양 플레이트의 방향으로 에어를 공급함으로써 배양 플레이트를 삽입홈의 외부로 배출시키는 제 1 에어분사구가 마련되는 것을 특징으로 하는 오가노이드 배양 장치
   
3. 제 2 항에 있어서,
   상기 배양홈의 하방에는,
   상기 제 1 에어분사구로부터 에어를 공급받은 이후, 오가노이드의 방향으로 에어를 전달함으로써 오가노이드를 배양홈에서 배출시키는 제 2 에어분사구가 마련되는 것을 특징으로 하는 오가노이드 배양 장치
   
4. 제 1 항에 있어서,
   상기 스테이지의 내부에는,
   상기 삽입홈의 외부 둘레를 따라 마련되며, 열을 발생시키는 가열 수단이 마련되는 것을 특징으로 하는 오가노이드 배양 장치
   
5. 삭제
6. 삭제
7. 제 1 항에 있어서,
   상기 오가노이드 배양 장치는,
   상기 보호 커버 내부의 임계적 상태를 측정하는 측정부 및 상기 측정부를 통해 측정된 임계적 상태를 전달받아 사용자에게 표시하며, 사용자의 입력값을 입력받는 입출력장치를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 오가노이드 배양 장치
   
8. 3D 형태의 오가노이드를 제조하기 위한 배양 방법에 있어서,
   제 1 항에 따른, 배양 장치를 이용하여,
   배양 플레이트에 마련되는 배양홈에 세포를 주입하는 주입 단계;
   배양 플레이트를 스테이지에 마련되는 삽입홈에 삽입시켜, 세포를 배양하는 배양 단계 및
   배양이 완료되어 제조된 오가노이드를 배양홈의 외부로 배출하는 완료 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 오가노이드 배양 방법