KR102561292B1 - 피부 투과성을 향상시킨 신경전달물질 펜타펩타이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents

피부 투과성을 향상시킨 신경전달물질 펜타펩타이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 피부 투과성을 향상시킨 신경전달물질 펜타펩타이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 특히 세포 내 신경 수용체에 신경전달물질과 유사하게 작용하여 근육의 수축을 억제함으로써 주름 감소효과를 갖는 신경전달물질 펜타펩타이드에 단백질 유입 도메인 (Protein transduction domain)을 결합시켜 피부 투과성을 높임으로써 펜타펩타이드의 효능을 개선한 피부 투과성을 향상시킨 신경전달물질 펜타펩타이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

Description

피부 투과성을 향상시킨 신경전달물질 펜타펩타이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법 {COSMETIC COMPOSITION FOR ANTI-WRINKLE CONTANING NEUROTRANSMITTER-AFFECTING PENTA PEPTIDE WITH IMPROVED SKIN PERMEABILITY}
본 발명은 피부 투과성을 향상시킨 신경전달물질 펜타펩타이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 특히 세포 내 신경 수용체에 신경전달물질과 유사하게 작용하여 근육의 수축을 억제함으로써 주름 감소효과를 갖는 신경전달물질 펜타펩타이드에 단백질 유입 도메인 (Protein transduction domain)을 결합시켜 피부 투과성을 높임으로써 펜타펩타이드의 효능을 개선한 피부 투과성을 향상시킨 신경전달물질 펜타펩타이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
인간의 피부 노화는 크게 생물학적 과정에 따라 누구에게나 시간이 지나면서 나타나는 내적 노화(Intrinsic aging)와 지속적인 빛 노출, 스트레스, 흡연 등과 같은 환경요인에 노출되어 나타나는 외인성 노화(Besides the aging of the human nature) 로 구분된다.
내인성 노화의 주원인은 신진대사과정에서 만들어진 반응성 활성 산소 라디칼에 의하여 우리 몸의 구성 성분에 생기는 손상이 누적되기 때문이다. 반면에 외인성 노화는 환경오염인자(환경호르몬, 중금속 등)에의 노출, 오존층 파괴에 의한 자외선, 흡연 등과 같은 외부적 스트레스들에 의한 산화적 손상의 결과로 인해 피부의 생리학적 기능이 변화된 것이 주요인이다.
즉, 피부세포의 세포막이 활성산소나 다른 라디칼에 의해 지속적으로 손상을 입게 되면 단백질이나 지질단백질의 가교(cross-linkage)가 증가하거나 또는 분해가 되며, 과산화 지질의 양도 증가하게 된다. 이처럼 세포와 세포막이 손상되면, 세포막의 투과성이 변화하여 세포 내의 이온 균형이 깨지게 되고, 이런 변화는 세포 내 대사물의 배출을 막고, 이 대사물을 제독하는 세포의 기능을 감퇴시킨다. 이와 같은 세포 수준의 변화가 지속되면, 피부 조직의 구조가 규칙성을 잃게 된다. 또한 진피(dermis)에 국소적인 상흔이 나타나며 콜라겐 섬유나 탄력섬유의 감소로 진피 두께가 줄어든다. 콜라겐 섬유끼리의 가교도 증가하며 탄력섬유의 미세한 구조도 손상되어 전체적으로 피부의 탄력 저하와 함께 피부주름이 발생하게 된다.
즉, 현재 유통되고 있는 피부주름 개선 화장 제품은 다양하고 많으나, 화학적 합성에 의한 합성물일 경우 화학변화에 의해 피부 자극을 유발할 수 있으며, 다양한 부작용, 장기안정성이 떨어지는 등의 문제가 있어 피부주름을 효과적으로 개선할 수 있는 천연소재를 찾는 것은 쉽지 않은 실정이다
이와 관련하여, 한국등록특허공보 제10-1736775호는 신경전달물질 방출을 저해하는 복분자 추출물을 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물에 대해 개시하고 있으며, 한국등록특허공보 제 10-2309300호는 아세틸 헥사펩타이드-1, 및 아세틸 옥타펩타이드-3을 포함하는 피부 미백, 보습 및 주름 개선용 화장료 조성물을 개시하고 있는 등 신경절달물질 저해 천연물 및/또는 펩타이드를 포함하는 화장료 조성물에 대한 많은 연구가 진행되고 있다.
그러나, 펩타이드는 화장료 조성물에 흔히 포함되는 첨가물과 혼합 시 안정성이 떨어져 분해될 수 있으며, 화장료 조성물로서 효능을 갖기 위해 피부에 침투가 용이해야 하는데 경피 투과성이 부족하여 피부에 충분한 효과를 보여주지 못하는 등 펩타이드를 화장료로 사용하기 위하여 더욱 많은 연구가 필요한 실정이다.
한국등록특허공보 제10-1736775호 한국등록특허공보 제10-2309300호
상기와 같은 문제를 해결하기 위해, 본 발명은 세포 내 신경 수용체에 신경전달물질과 유사하게 작용하여 근육의 수축을 억제함으로써 주름 감소효과를 갖는 신경전달물질 펜타펩타이드에 단백질 유입 도메인 (Protein transduction domain)을 결합시켜 피부 투과성을 높이고 펩타이드의 N-말단을 아세틸화 하여 펩타이드 자체의 안정성을 강화시킴으로써 펜타펩타이드의 효능을 개선한 피부 투과성을 향상시킨 신경전달물질 펜타펩타이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법을 제공한다.
상기 목적은 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 신경전달물질 펜타펩타이드의 C-말단에 서열번호 2의 아미노산 서열로 구성되는 단백질 유입 도메인 (Protein transduction domain)의 N-말단을 결합하는 투과성 향상 펩타이드 제조 단계; 상기 투과성 향상 펩타이드의 N-말단을 아세틸화하는 안정성 향상 펩타이드 제조 단계; 상기 안정성 향상 펩타이드 15~25중량%, 저분자 콜라겐 5~10중량%, 발효 성게껍질 추출물 5~10중량%, 코코넛 오일10~20중량% 및 정제수 35~65중량%를 혼합하는 혼합 조성물 제조 단계; 및 상기 혼합 조성물을 5~10℃에서 2~3일간 교반하며 숙성하는 최종 숙성 단계; 를 포함하는, 피부 투과성을 향상시킨 신경전달물질 펜타펩타이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물의 제조방법에 의해 달성될 수 있다.
구체적으로, 상기 투과성 향상 펩타이드 제조 단계는 상기 신경전달물질 펜타펩타이드와 단백질 유입 도메인 사이에 서열번호 3의 아미노산 서열로 구성되는 테트라펩타이드를 링커로 추가하여 펜타펩타이드의 C-말단에 테트라펩타이드의 N-말단이 결합하고 테트라펩타이드의 C-말단에 단백질 유입 도메인의 N-말단이 결합하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
구체적으로, 상기 발효 성게껍질 추출물은 성게껍질 분말에 락토바실러스 아시도필루스 (Lactobacillus acidophilus)를 접종하여 1~2일간 발효시킨 다음 추출한 것일 수 있다.
구체적으로, 상기 정제수는 증류수에 수소를 주입하여 제조한 수소수를 활성탄, 토르마린, 자운영 및 달맞이꽃이 5: 3: 1: 1 중량비로 혼합된 여과체에 2~3회 반복 여과시켜 제조한 것일 수 있다.
구체적으로, 상기 최종 숙성 단계는 숙성 전 혼합 조성물 100중량%에 대하여 아카시아 추출물 2~5중량%, 세라마이드 5~10중량% 및 홍가시나무 추출물 2~5중량%를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본 발명에 따른 피부 투과성을 향상시킨 신경전달물질 펜타펩타이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물은 세포 내 신경 수용체에 신경전달물질과 유사하게 작용하여 근육의 수축을 억제함으로써 주름 감소효과를 갖는 신경전달물질 펜타펩타이드에 단백질 유입 도메인 (Protein transduction domain)을 결합시켜 피부 투과성을 높이고 펩타이드의 N-말단을 아세틸화 하여 펩타이드 자체의 안정성을 강화시킴으로써 펜타펩타이드의 효능을 개선하였으므로 주름 개선용 화장료 조성물로 사용이 가능하다.
도 1은 일실시예에 따른 피부 투과성을 향상시킨 신경전달물질 펜타펩타이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물의 제조방법을 설명하기 위한 흐름도이다.
이하에서, 첨부된 도면을 참조하여 실시예들을 상세하게 설명한다. 그러나, 실시예들에는 다양한 변경이 가해질 수 있어서 특허출원의 권리 범위가 이러한 실시예들에 의해 제한되거나 한정되는 것은 아니다. 실시예들에 대한 모든 변경, 균등물 내지 대체물이 권리 범위에 포함되는 것으로 이해되어야 한다.
실시예들에 대한 특정한 구조적 또는 기능적 설명들은 단지 예시를 위한 목적으로 개시된 것으로서, 다양한 형태로 변경되어 실시될 수 있다. 따라서, 실시예들은 특정한 개시형태로 한정되는 것이 아니며, 본 명세서의 범위는 기술적 사상에 포함되는 변경, 균등물, 또는 대체물을 포함한다.
제1 또는 제2 등의 용어를 다양한 구성요소들을 설명하는데 사용될 수 있지만, 이런 용어들은 하나의 구성요소를 다른 구성요소로부터 구별하는 목적으로만 해석되어야 한다. 예를 들어, 제1 구성요소는 제2 구성요소로 명명될 수 있고, 유사하게 제2 구성요소는 제1 구성요소로도 명명될 수 있다.
어떤 구성요소가 다른 구성요소에 "연결되어" 있다고 언급된 때에는, 그 다른 구성요소에 직접적으로 연결되어 있거나 또는 접속되어 있을 수도 있지만, 중간에 다른 구성요소가 존재할 수도 있다고 이해되어야 할 것이다.
실시예에서 사용한 용어는 단지 설명을 목적으로 사용된 것으로, 한정하려는 의도로 해석되어서는 안된다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 명세서에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서 상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 실시예가 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥 상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.
본 발명의 실시예들에서, 별도로 다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥 상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 발명의 실시예에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.
본 발명의 실시예를 설명하기 위한 도면에 개시된 형상, 크기, 비율, 각도, 개수 등은 예시적인 것이므로 본 발명이 도시된 사항에 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명을 설명함에 있어서, 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명은 생략한다. 본 명세서 상에서 언급된 '포함한다', '갖는다', '이루어진다' 등이 사용되는 경우 '~만'이 사용되지 않는 이상 다른 부분이 추가될 수 있다. 구성 요소를 단수로 표현한 경우에 특별히 명시적인 기재 사항이 없는 한 복수를 포함하는 경우를 포함한다.
구성 요소를 해석함에 있어서, 별도의 명시적 기재가 없더라도 오차 범위를 포함하는 것으로 해석한다.
도면에서 나타난 각 구성의 크기 및 두께는 설명의 편의를 위해 도시된 것이며, 본 발명이 도시된 구성의 크기 및 두께에 반드시 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 여러 실시예들의 각각 특징들이 부분적으로 또는 전체적으로 서로 결합 또는 조합 가능하며, 당업자가 충분히 이해할 수 있듯이 기술적으로 다양한 연동 및 구동이 가능하며, 각 실시예들이 서로에 대하여 독립적으로 실시 가능할 수도 있고 연관 관계로 함께 실시 가능할 수도 있다.
본원의 일 측면은, 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 신경전달물질 펜타펩타이드의 C-말단에 서열번호 2의 아미노산 서열로 구성되는 단백질 유입 도메인 (Protein transduction domain)의 N-말단을 결합하는 투과성 향상 펩타이드 제조 단계; 상기 투과성 향상 펩타이드의 N-말단을 아세틸화하는 안정성 향상 펩타이드 제조 단계; 상기 안정성 향상 펩타이드 15~25중량%, 저분자 콜라겐 5~10중량%, 발효 성게껍질 추출물 5~10중량%, 코코넛 오일10~20중량% 및 정제수 40~70중량%를 혼합하는 혼합 조성물 제조 단계; 및 상기 혼합 조성물을 5~10℃에서 2~3일간 교반하며 숙성하는 최종 숙성 단계; 를 포함하는, 피부 투과성을 향상시킨 신경전달물질 펜타펩타이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.
이하, 도 1을 통해 본 발명의 일 실시예에 따른 피부 투과성을 향상시킨 신경전달물질 펜타펩타이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물의 제조방법을 설명할 수 있다.
먼저, 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 신경전달물질 펜타펩타이드의 C-말단에 서열번호 2의 아미노산 서열로 구성되는 단백질 유입 도메인 (Protein transduction domain)의 N-말단을 결합하여 투과성 향상 펩타이드를 제조한다.
상기 아미노산은 단백질을 구성하는 기본 성분들을 의미하며, 조직의 성상 및 유지에 관여하고 호르몬과 효소, 항체 등의 주요 구성성분이 된다.
상기 펩타이드는 아미노산이 2개 이상 펩티드 결합으로 연결된 구조물을 의미하며 상기한 호르몬, 효소 및 항체 등이 펩타이드로 구성될 수 있다. 주로 아미노산이 2~50개 정도 결합된 구조를 펩타이드라 하고, 50개 이상의 아미노산이 결합된 구조를 단백질이라 한다. 아미노산의 결합 개수에 따라 디(di-), 트리(tri-), 펜타(penta-) 등의 어미를 붙이며, 결합 아미노산 수가 2~10개인 것을 올리고펩타이드(oilgopeptide) 그리고 약 10~50개인 것을 폴리펩타이드(polypeptide)라 칭한다.
상기 단백질 유입 도메인 (Protein transduction domain)은 단백질 전달 도메인이라고도 하며, 단백질 혹은 유전자등의 큰 물질을 세포내로 이동시키는 역할을 한다.
본 발명에서 상기 단백질 유입 도메인은 세포 내 신경 수용체에 신경전달물질과 유사하게 작용하여 근육의 수축을 억제함으로써 주름 감소효과를 갖는 신경전달물질 펜타펩타이드에 결합되어 펜타펩타이드의 세포 투과성을 높이는 효과를 주는 것일 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 투과성 향상 펩타이드 제조 단계는 상기 신경전달물질 펜타펩타이드와 단백질 유입 도메인 사이에 서열번호 3의 아미노산 서열로 구성되는 테트라펩타이드를 링커로 추가하여 펜타펩타이드의 C-말단에 테트라펩타이드의 N-말단이 결합하고 테트라펩타이드의 C-말단에 단백질 유입 도메인의 N-말단이 결합하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본 발명에서 상기 테트라펩타이드는 펜타펩타이드와 단백질 유입 도메인의 사이에 결합하여 펜타펩타이드와 단백질 유입 도메인의 기능을 저해하지 않는 동시에 결합 안정성을 높이는 것일 수 있다.
다음으로, 상기 투과성 향상 펩타이드의 N-말단을 아세틸화하여 안정성 향상 펩타이드를 제조한다
상기 아세틸화는 펩타이드의 N-말단의 아미노기(H2N-)에 아세틸기(CH3CO-)가 결합하는 것을 의미하며, 단백질 분해효소에 의해 펩타이드가 분해되는 것을 방지할 수 있다.
다음으로, 상기 안정성 향상 펩타이드 15~25중량%, 저분자 콜라겐 5~10중량%, 발효 성게껍질 추출물 5~10중량%, 코코넛 오일10~20중량% 및 정제수 35~65중량%를 혼합하여 혼합 조성물을 제조한다.
상기 콜라겐은 대부분의 동물, 특히 포유동물에서 많이 발견되는 섬유 단백질로, 피부와 연골 등 체내의 모든 결합조직의 대부분을 차지한다. 콜라겐은 폴리펩타이드 세 분자가 서로 삼중나선으로 꼬인 밧줄과 같은 형태를 이루고 있다. 각각의 폴리펩타이드 사슬은 글라이신과 프롤린이 서로 번갈아가면서 배치되고 중간에 여러 다른 아미노산이 군데군데 삽입되어 있다. 대표적으로 라이신과 프롤린에서 각각 유도된 하이드록시라이신과 하이드록시프롤린이 있다. 이 둘은 수소결합을 통해 사슬끼리 서로 단단히 연결되는 4차 구조 형성에 중요한 역할을 한다. 이러한 구조 덕분에 콜라겐은 매우 강하여 장력에 잘 견디고 장기간 분해되지 않으나, 섭씨 약 37도 이상의 온도에서는 폴리펩타이드 간 연결이 약해지는 경향을 보인다. 특히, 저분자 콜라겐은 콜라겐 중에서도 분자량이 적은 콜라겐을 의미하며, 크기가 적어 세포 투과성이 높아 피부미용과 관련된 분야에서 주로 사용되고 있다.
상기 성게는 극피동물문 성게강을 이루는 동물들을 의미하며, 둥글고 몸 전체에 가시가 나 있어 밤송이와 비슷하게 생긴 것이 특징이다. 성게 껍질은 성게의 외피를 이루고 있는 가시 및 단단한 껍데기를 의미한다.
일 실시예에 있어서, 상기 발효 성게껍질 추출물은 성게껍질 분말에 락토바실러스 아시도필루스 (Lactobacillus acidophilus)를 접종하여 1~2일간 발효시킨 다음 추출한 것일 수 있다.
상기 코코넛 오일은 코코넛 야자수의 성숙한 코코넛 열매 과육 또는 알맹이(kernel)로부터 추출된 식용 오일을 의미하며, 포화지방 함량이 높기 때문에 천천히 산화되고 산패가 느리게 진행되어 실온에서 수개월 이상 보존이 가능하다. 주로 아로마테라피의 캐리어 오일로 사용되고, 보습효과가 뛰어나 화장료에도 사용되며, 살균 및 항박테리아 효과를 가져 의료용으로 사용되는 경우도 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 정제수는 증류수에 수소를 주입하여 제조한 수소수를 활성탄, 토르마린, 자운영 및 달맞이꽃이 5: 3: 1: 1 중량비로 혼합된 여과체에 2~3회 반복 여과시켜 제조한 것일 수 있다.
상기 토르마린은 전기석 혹은 전자석이라고도 하며 6각 주사형의 결정을 갖는 붕규산염으로 육방정계에 속하는 천연광물을 의미한다. 토르마린은 영구적으로 전기를 띠는 성질을 가지는데 이 미약 전류는 수분을 활용하면서 수분의 환원력을 더해주는 효능을 가지며 음이온을 생성할 수 있어 다양한 분야에서 활용되고 있다.
상기 자운영은 쌍떡잎식물 장미목 콩과에 속하는 두해살이풀을 의미하며, 연화초(蓮花草), 홍화채(紅花菜), 쇄미제(碎米濟), 야화생이라고도 불린다. 해열, 해독, 이뇨, 소종 등의 효능이 있는 것으로 알려져 있다.
상기 달맞이꽃은 도금양목 바늘꽃과 달맞이꽃속에 속하는 125종의 식물을 의미하며, 달맞이꽃의 종자유에는 감마리놀렌산과 리놀렌산이 풍부해서 여성들에게 발생하는 생리통과 생리전증후군(PMS)에 도움을 줄 수 있고, 혈관기능 개선, 염증 치료, 피부 미용 등에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
마지막으로, 상기 혼합 조성물을 5~10℃에서 2~3일간 교반하며 숙성하는 최종 숙성과정을 거쳐 피부 투과성을 향상시킨 신경전달물질 펜타펩타이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물을 제조한다.
일 실시예에 있어서, 상기 최종 숙성 단계는 숙성 전 혼합 조성물 100중량%에 대하여 아카시아 추출물 2~5중량%, 세라마이드 5~10중량% 및 홍가시나무 추출물 2~5중량%를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
상기 아카시아는 아카시아속에 속하는 970여종의 상록 교목을 의미하며, 아카시아 꽃에는 아카세틴이라는 성분이 함유되어 있어 소염작용과 이뇨작용, 이담작용을 하는 것으로 알려져 있으며, 뿌리껍질은 이뇨, 변비에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
상기 세라마이드는 스핑고지질 (sphingolipid)의 한 종류로서 스핑고신 (sphingosine)과 지방산으로 구성된 분자를 의미한다. 세라마이드는 인체 피부세포를 구성하는 굉장히 중요한 물질로 피부의 가장 밖, 표피에 있는 지질층의 약 50%를 차지하는 친유성 물질이다. 세포간지질의 주 성분인 세라마이드가 각질층의 각질세포들이 분리되지 않고 딱 달라붙게 만들어주는 역할을 한다.
상기 홍가시나무는 장미목 장미과 윤노리나무속 홍가시나무종을 의미하며, 홍가시나무의 잎은 진통제 효과를 가지며 피부노화에도 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
이하, 구체적인 실시예와 비교예를 통하여 본 발명의 구성 및 그에 따른 효과를 보다 상세히 설명하고자 한다. 그러나, 본 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1]
먼저, 서열번호 1 및 2의 아미노산 서열로 구성되는 펩타이드를 합성한 후, 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 신경전달물질 펜타펩타이드의 C-말단에 서열번호 2의 아미노산 서열로 구성되는 단백질 유입 도메인 (Protein transduction domain)의 N-말단을 결합하여 투과성 향상 펩타이드를 제조하였다.
다음으로, 상기 투과성 향상 펩타이드의 N-말단을 아세틸화하여 안정성 향상 펩타이드를 제조한 후 상기 안정성 향상 펩타이드 15중량%, 저분자 콜라겐 10중량%, 발효 성게껍질 추출물 5중량%, 코코넛 오일15중량% 및 정제수 55중량%를 혼합하여 혼합 조성물을 제조하였다. 상기 발효 성게껍질 추출물은 성게껍질 분말에 락토바실러스 아시도필루스 (Lactobacillus acidophilus)를 접종하여 2일간 발효시킨 다음 열수 추출을 통해 추출하였다. 또한, 상기 정제수는 증류수에 수소를 주입하여 제조한 수소수를 활성탄, 토르마린, 자운영 및 달맞이꽃이 5: 3: 1: 1 중량비로 혼합된 여과체에 3회 반복 여과시켜 제조하였다.
마지막으로, 상기 혼합 조성물을 9℃에서 3일간 교반하며 숙성시켜 피부 투과성을 향상시킨 신경전달물질 펜타펩타이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물을 제조하였다. 제조된 화장료 조성물을 실시예 1로 명명하였다.
[실시예 2]
실시예 1과 동일한 방법으로 제조하였으나, 투과성 향상 펩타이드 제조 단계에서 상기 펜타펩타이드와 단백질 유입 도메인 사이에 서열번호 3의 아미노산 서열로 구성되는 테트라펩타이드를 추가하여 펜타펩타이드의 C-말단에 테트라펩타이드의 N-말단이 결합하고 테트라펩타이드의 C-말단에 단백질 유입 도메인의 N-말단이 결합하는 단계를 추가로 포함하여 제조된 화장료 조성물을 실시예 2로 명명하였다.
[실시예 3]
실시예 1과 동일한 방법으로 제조하였으나, 최종 숙성 단계에서 숙성 전 혼합 조성물 100중량%에 대하여 아카시아 추출물 2~5중량%, 세라마이드 5~10중량% 및 홍가시나무 추출물 2~5중량%를 추가로 포함하여 제조한 화장료 조성물을 실시예 3으로 명명하였다.
[비교예 1]
실시예 1과 동일한 방법으로 제조하였으나, 상기 단백질 유입 도메인을 제외하고 제조한 화장료 조성물을 비교예 1로 명명하였다.
[비교예 2]
실시예 1과 동일한 방법으로 제조하였으나, 상기 발효 성게껍질 추출물을 제외하고 상기 정제수를 증류수로 대체하여 제조한 화장료 조성물을 비교예 2로 명명하였다.
[실험예 1: 피부 투과율 비교]
실시예 1~3 및 비교예 1~2의 경피 투과율을 확인하기 위해, 경피 흡수 실험을 진행하였다.
자세하게는, 피부투과도의 분석을 위해 가장 많이 사용되고 있는 프란츠 확산 셀(Franz Diffusing Cell)을 이용하여 피부투과량을 분석하였다. 시험에 사용되는 피부로는 기니피그(Hartley Guinea Pig)를 사용하였다. 항온수조를 이용하여 32℃를 유지하고, receptor의 medium은 PBS이고, 600 rpm으로 하였다. 2시간 후 샘플링(sampling)을 진행하여 피부투과량을 계산하였다.
실시예 1~3 및 비교예 1~2의 폴리펩타이드에 Cy5 Fast conjugation kit(ab188288)를 이용하여 Cy-5를 접합하여 사용하였고, Waters 2475 Fluorescence Detector(excitation 630nm, emission 660nm)를 이용하여 분석하였다. 단백질 전달체에 따른 프란츠 확산 셀(Franz Diffusion Cell)에서의 피부 투과 분석 결과를 표 1에 나타내었다.
실시예 1 실시예 2 실시예 3 비교예 1 비교예 2
피부투과량(㎍/cm2) 1.41 1.53 1.40 0.67 1.38
표 1에 나타낸 바와 같이, 단백질 유입 도메인이 결합되지 않은 비교예 1과 비교하여 실시예 1~3 및 비교예 2는 우수한 피부 투과량을 나타냈으며, 특히 펜타펩타이드와 단백질 유입도메인 사이에 링커를 결합한 실시예 2의 경우 가장 높은 피부투과량을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
[실험예 2: 주름 개선 효과 비교]
상기 실시예 1~3 및 비교예 1~2의 화장료 조성물에 의해 신경전달물질 효과를 나타내어 근육을 어느 정도 마비시킴으로써 기계적인 피부 주름의 형성의 방지하는 효과를 알아보기 위하여, 개구리 신경절의 막전위 변화를 통해 마비 정도를 확인해 보았다. 개구리의 신경절은 개구리의 척수에서 허벅지에 이르는 신경절을 적출하여 실험에 사용하였다.
개구리의 신경절을 절개하여 식염수 15 ml가 채워진 패트리디쉬에 전류 1 mA, 30초에서 0 mA, 10초로 변화를 주고, 실시예 1~3 및 비교예 1~2의 화장료 조성물을 첨가한 다음 신경절에서의 전위 변위를 Potential state(Wona Tech.)로 측정하고 개구리 신경절의 마비효과를 파악할 수 있는 그래프의 기울기를 표 2에 나타내었다.
실시예 1 실시예 2 실시예 3 비교예 1 비교예 2
기울기(Voltage/sec.) -0.0082 -0.0071 -0.0076 -0.0141 -0.0101
표 2에 나타낸 바와 같이, 비교예 1 및2와 비교하여 실시예 1~3의 기울기가 더 높은 것을 통해 실시예 1~3이 개구리 신경절에 대한 마비효과가 높은 것을 확인할 수 있었으며, 본 발명에 따른 화장료 조성물이 근육 수축 억제에 의한 주름 개선 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
[실험예 3: 주름 개선 임상 평가]
30대 내지 50대의 여성 20명을 5개의 실험군으로 나누어 실시예 1~3 및 비교예 1~2의 화장료 조성물을 각각의 실험군에게 하루 2회씩 28일간 사용하게 하였으며, 조성물 사용 전과 조성물 사용 28일 후의 피부 주름 측정치 간의 통계학적 유의성을 R (version 3.1.0, 2014, The R Foundation for Statistical Computing) 프로그램의 Wilcoxon 부호순위 검정을 이용해 분석 및 검증하여 그 결과를 표 3에 나타내었다. 통계적 유의성을 확보하기 위해 P-value가 0.05보다 작은 경우 유의한 차이로 인정하였다.
측정값 실시예 1 실시예 2 실시예 3 비교예 1 비교예 2
사용 전 주름지수 9.317 9.411 9.354 9.286 9.381
사용 후 주름지수 8.465 8.530 8.607 9.121 9.040
P-value <0.001 <0.001 <0.001 0.003 0.001
표 3에 나타낸 바와 같이, 실시예 1~3 및 비교예 1~2 모두 P-value가 0.05보다 작아 통계적 유의성은 확인되었으나, 특히 실시예 1~3은 사용 후 주름지수가 비교예 1~2와 비교하여 크게 감소한 것을 확인할 수 있었다. 따라서, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 주름 개선 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
<110> HAN, DOSOOK <120> COSMETIC COMPOSITION FOR ANTI-WRINKLE CONTANING NEUROTRANSMITTER-AFFECTING PENTA PEPTIDE WITH IMPROVED SKIN PERMEABILITY <130> P22198 <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Neurotransmitter-affecting Pentapeptide <400> 1 Met Gly Ile Gly Ala 1 5 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Protein transduction domain <400> 2 Gly Arg Lys Arg Lys Arg Asn Arg Arg Lys 1 5 10 <210> 3 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Tetrapeptide linker <400> 3 Gly Thr Ile Gly 1

Claims (3)

  1. 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 신경전달물질 펜타펩타이드의 C-말단에 서열번호 2의 아미노산 서열로 구성되는 단백질 유입 도메인 (Protein transduction domain)의 N-말단을 결합하는 투과성 향상 펩타이드 제조 단계;
    상기 투과성 향상 펩타이드의 N-말단을 아세틸화하는 안정성 향상 펩타이드 제조 단계;
    상기 안정성 향상 펩타이드 15~25중량%, 저분자 콜라겐 5~10중량%, 발효 성게껍질 추출물 5~10중량%, 코코넛 오일10~20중량% 및 정제수 35~65중량%를 혼합하는 혼합 조성물 제조 단계; 및
    상기 혼합 조성물을 5~10℃에서 2~3일간 교반하며 숙성하는 최종 숙성 단계; 를 포함하는, 피부 투과성을 향상시킨 신경전달물질 펜타펩타이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물의 제조방법.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 투과성 향상 펩타이드 제조 단계는 상기 신경전달물질 펜타펩타이드와 단백질 유입 도메인 사이에 서열번호 3의 아미노산 서열로 구성되는 테트라펩타이드를 링커로 추가하여 펜타펩타이드의 C-말단에 테트라펩타이드의 N-말단이 결합하고 테트라펩타이드의 C-말단에 단백질 유입 도메인의 N-말단이 결합하는 단계를 추가로 포함하는 것인, 피부 투과성을 향상시킨 신경전달물질 펜타펩타이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물의 제조방법.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 발효 성게껍질 추출물은 성게껍질 분말에 락토바실러스 아시도필루스 (Lactobacillus acidophilus)를 접종하여 1~2일간 발효시킨 다음 추출한 것인, 피부 투과성을 향상시킨 신경전달물질 펜타펩타이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물의 제조방법.
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