KR102479490B1 - 신경세포 특이적 프로모터 및 이를 포함하는 dna 변형 유도용 재조합 벡터 - Google Patents
신경세포 특이적 프로모터 및 이를 포함하는 dna 변형 유도용 재조합 벡터 Download PDFInfo
- Publication number
- KR102479490B1 KR102479490B1 KR1020190145123A KR20190145123A KR102479490B1 KR 102479490 B1 KR102479490 B1 KR 102479490B1 KR 1020190145123 A KR1020190145123 A KR 1020190145123A KR 20190145123 A KR20190145123 A KR 20190145123A KR 102479490 B1 KR102479490 B1 KR 102479490B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- vector
- promoter
- recombinant vector
- protein
- inducing
- Prior art date
Links
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims abstract description 112
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 title claims abstract description 56
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims abstract description 36
- 230000008836 DNA modification Effects 0.000 title claims abstract description 32
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 52
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 34
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 34
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 25
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 21
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 claims description 20
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 claims description 18
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 claims description 18
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 claims description 15
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims description 15
- 108010051219 Cre recombinase Proteins 0.000 claims description 9
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 claims description 9
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 9
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 7
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 5
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 claims description 5
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 claims description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 claims description 3
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 claims description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 claims description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 3
- 241000700198 Cavia Species 0.000 claims description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 claims description 2
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 abstract description 3
- 210000003061 neural cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 21
- 101150036876 cre gene Proteins 0.000 description 9
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 6
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 6
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 5
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 5
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 5
- 108020005004 Guide RNA Proteins 0.000 description 4
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 108010048367 enhanced green fluorescent protein Proteins 0.000 description 3
- 238000010457 gene scissor Methods 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 2
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 2
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 2
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 2
- 102100026707 Sulfotransferase 4A1 Human genes 0.000 description 2
- 101710083705 Sulfotransferase 4A1 Proteins 0.000 description 2
- 238000010459 TALEN Methods 0.000 description 2
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 2
- 108010043645 Transcription Activator-Like Effector Nucleases Proteins 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 101150024821 tetO gene Proteins 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 208000027109 Headache disease Diseases 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 101150102092 ccdB gene Proteins 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000012224 gene deletion Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000004112 neuroprotection Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000011820 transgenic animal model Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/102—Mutagenizing nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/65—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression using markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
- C12N2015/8527—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic for producing animal models, e.g. for tests or diseases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/20—Type of nucleic acid involving clustered regularly interspaced short palindromic repeats [CRISPRs]
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
본 발명은 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터 및 이를 이용하여 제조된 형질전환 모델 등에 관한 것으로, 보다 자세하게는 Sul4ta1 프로모터를 사용함으로써 신경세포 특이적으로 유전자 돌연변이를 유도할 수 있는 시스템 등에 관한 것이다.
Description
본 발명은 신경세포 특이적 프로모터, 및 이를 포함하는 DNA 변형 유도용 재조합 벡터, 그리고 상기 벡터를 이용한 동물 모델 등에 관한 것이다.
신경세포의 유전자 이상으로 인해 유도되는 다양한 질환들, 예를 들어, 파킨슨병, 다발성 경화증, 루게릭병, 치매, 암, 간질, 두통, 탈수초성 질환 등은 아직까지도 그 발생 기작에 대한 연구나, 이러한 질환들의 치료를 위한 치료제의 개발이 미비한 실정이다. 따라서, 최근에는 신경세포에서 유전자들의 기능 상실 시 나타나는 변화들을 통해 신경보호를 위한 치료제, 바이오마커 등을 개발하고자 하는 많은 시도들이 진행되고 있으나, 신경세포 특이적으로 유전자 변형 모델을 만드는 것을 용이하지 않기 때문에 반복적이고 대규모 분자수준 분석이 필요한 병리학적 연구, 진단 및 치료제 개발 등에 사용될 수 있는 방법이 부족하다. 따라서, 신경세포 특이적으로 특정 유전자의 돌연변이를 용이하게 유도할 수 있는 방법이 개발될 수 있다면 다양한 신경세포의 유전자 이상으로 유도되는 다양한 질환들의 기작을 연구하는데, 또는 상기 질환들의 치료, 예방, 병의 진행 완화 등을 위한 효과적인 치료약물 탐색과 임상 진단 등에 폭넓게 사용될 수 있을 것으로 기대된다.
이에 본 발명자들은 신경세포 특이적으로 목적하는 시점에 용이하게 표적 유전자의 변형을 유도할 수 있는 재조합 벡터를 제조하고자 노력한 결과 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 상기와 같은 종래 기술상의 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 Sul4ta1 프로모터, 및 이와 작동가능하게 연결된 유전자 변형용 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하는, 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터, 이의 제조 방법, 상기 재조합 벡터를 이용하여 제조된 형질전환체 또는 형질전환동물 등을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본 발명은 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 Sul4ta1 프로모터, 및 이와 작동가능하게 연결된 유전자 변형용 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하는, 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터로 형질전환된 형질전환체를 제공한다. 상기 형질전환체는 바람직하게는 신경세포이나, 본 발명의 재조합 벡터로 형질전환될 수 있는 세포의 종류라면 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명은 상기 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터가 미세주입된 배아를 대리모 동물에 착상시켜 제조한 형질전환 동물을 제공한다. 본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기 대리모 동물은 바람직하게는 마우스, 래트, 햄스터, 토끼, 말, 소, 개, 고양이, 원숭이, 기니피그 등일 수 있으나, 신경세포를 가지고 있는 동물이라면 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명은 상기 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터를 배아에 미세주입하는 단계; 및 상기 배아를 대리모 동물에 착상시키는 단계를 포함하는, 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 형질전환 동물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기 유전자 변형용 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드란, 유전자를 조작하는데 사용되는 단백질들을 암호화하는 뉴클레오티드로서, 바람직하게는 Cre 재조합 효소, 유전자 가위(Cas9 효소, Cpf1 효소, Cas12 효소, 또는 이의 유도체) 등을 암호화하는 뉴클레오티드로서, 염색체 내의 유전자를 조작하는데 사용되는 유전자 변형용 단백질이라면 제한이 없다. 상기 Cre 재조합 효소를 암호화하는 뉴클레오티드는 바람직하게는 서열번호 5이나, 일반적으로 사용되고 있는 Cre 재조합 효소를 암호화하는 뉴클레오티드라면 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 다른 구체예에 있어서, 상기 재조합 벡터는 벡터의 발현 여부 및 발현 위치를 확인하기 위한 형광 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드를 추가로 포함할 수 있다. 상기 형광 단백질은 GFP, RFP, BFP, YFP 등이 있으나, 발현 여부를 확인할 수 있는 형광 단백질이라면 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 또 다른 구체예에 있어서, 상기 재조합 벡터는 단백질 발현을 촉진시킬 수 있는 IRES(internal ribosome entry site)를 추가로 포함할 수 있다. 상기 IRES 서열은 바람직하게는 서열번호 6을 포함하는 서열일 수 있으나, 일반적으로 사용되고 있는 IRES 서열이라면 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 또 다른 구체예에 있어서, 상기 재조합 벡터는 게이트웨이 벡터 시스템으로 사용될 수 있도록 attR1, attR2, attL1, attL2, attB1, attB2 등을 추가로 포함할 수 있다. 추가된 attR1, attR2 등을 이용하여 attL1 및 attL2를 가진 벡터에 삽입된 다양한 promoter 등을 게이트웨이 클로닝 시스템을 이용하여 제작할 수 있다.
또한, 본 발명은 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 게이트웨이 클로닝 시스템으로서, 상기 시스템은 (a) 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 Sul4ta1 프로모터, 상기 프로모터의 양 말단에 결합된 att 사이트 서열, 및 선별 마커를 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하는 제1벡터; 및 (b) 프로모터, 상기 프로모터의 양 말단에 결합된 att 사이트 서열, 유전자 변형용 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드; 및 선별 마커를 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하는 제2벡터를 포함하고, 상기 제1벡터의 선별 마커와 제2벡터의 선별 마커는 서로 상이한 유전자이며, 상기 제2벡터의 프로모터는 제1벡터의 프로모터와는 상이한 프로모터인 것을 특징으로 하는 게이트웨이 클로닝 시스템을 제공한다.
본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기 att 사이트는 일반적으로 게이트웨이 클로닝 시스템에서 알려져 있는 att 사이트라면 제한이 없으나, 바람직하게는 상기 제1벡터의 att 사이트는 attL1 및 attL2이고, 상기 제2벡터의 att 사이트는 attR1 및 attR2이거나, 상기 제1벡터의 att 사이트는 attR1 및 attR2이고, 상기 제2벡터의 att 사이트는 attL1 및 attL2일 수 있다.
본 발명의 다른 구체예에 있어서, 상기 선별 마커는 형질전환 여부를 확인할 수 있는 마커라면 제한이 없으나, 바람직하게는 항생제 저항성 유전자일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 암피실린 저항성 유전자, 카나마이신 저항성 유전자, 젠타마이신 저항성 유전자 등일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 또 다른 구체예에 있어서, 상기 유전자 변형용 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드란, 유전자를 조작하는데 사용되는 단백질들을 암호화하는 뉴클레오티드로서, 바람직하게는 Cre 재조합 효소, 유전자 가위(Cas9 효소, Cpf1 효소, Cas12 효소, 또는 이의 유도체) 등을 암호화하는 뉴클레오티드로서, 염색체 내의 유전자를 조작하는데 사용되는 유전자 변형용 단백질이라면 제한이 없다. 상기 Cre 재조합 효소를 암호화하는 뉴클레오티드는 바람직하게는 서열번호 5이나, 일반적으로 사용되고 있는 Cre 재조합 효소를 암호화하는 뉴클레오티드라면 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터는 신경세포 특이적으로 DNA 유전자 변형용 단백질의 발현을 유도할 수 있기 때문에, 상기 재조합 벡터를 이용하여 세포, 동물 등에 형질전환시킴으로써 신경세포 특이적으로 다양한 유전자 돌연변이를 제조하는데 용이하게 사용할 수 있다. 또한, 상기 벡터에 게이트웨이 벡터 시스템을 조합함으로써 단시간에 다양한 유전자 돌연변이를 용이하게 제조할 수 있다. 따라서, 이를 이용함으로써 신경세포의 유전자 이상으로 인해 발생되는 다양한 질환들, 즉, 파킨슨병, 다발성 경화증, 루게릭병, 치매, 암, 간질, 두통, 탈수초성 질환 등의 기작을 새롭게 연구할 수 있을 뿐만 아니라, 이를 이용하여 상기 질환들의 치료법 개발에 폭넓게 사용될 수 있을 것으로 기대된다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 게이트웨이 벡터 시스템을 간략하게 나타낸 개념도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 pDonr207 벡터에 Sul4ta1 프로모터가 삽입되어 있는 pDonr207 엔트리 벡터맵을 나타낸 도면이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 CRE-IRES-EGFP를 발현하고 게이트웨이 벡터 시스템에 의하여 프로모터를 삽입할 수 있는 GW_CRE-IRES-EGFP 목적 벡터맵을 나타낸 도면이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 pDonr207 엔트리 벡터와 GW_CRE-IRES-EGFP 목적 벡터를 재조합하여 제조한 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터맵을 나타낸 도면이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터가 정상적으로 제작되었는지를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터로 형질전환된 동물 모델을 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터로 형질전환된 형질전환 동물에서 Cre 단백질이 신경세포 특이적으로 발현되는지 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 pDonr207 벡터에 Sul4ta1 프로모터가 삽입되어 있는 pDonr207 엔트리 벡터맵을 나타낸 도면이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 CRE-IRES-EGFP를 발현하고 게이트웨이 벡터 시스템에 의하여 프로모터를 삽입할 수 있는 GW_CRE-IRES-EGFP 목적 벡터맵을 나타낸 도면이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 pDonr207 엔트리 벡터와 GW_CRE-IRES-EGFP 목적 벡터를 재조합하여 제조한 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터맵을 나타낸 도면이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터가 정상적으로 제작되었는지를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터로 형질전환된 동물 모델을 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터로 형질전환된 형질전환 동물에서 Cre 단백질이 신경세포 특이적으로 발현되는지 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
본 발명자들은 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 Sul4ta1 프로모터를 이용하여 재조합 벡터를 제조함으로써, 신경세포 특이적으로 높은 발현 효율로 Cre, Crispr 등 다양한 종류의 유전자 변형용 단백질을 발현시킬 수 있을 뿐만 아니라, 이에 게이트웨이 클로닝 시스템을 조합함으로써 신경세포 특이적으로 다양한 유전자 돌연변이를 높은 정확성을 가지고 용이하게 형질전환 모델을 제조할 수 있다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다. 따라서, 본 발명의 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터를 이용함으로써, 신경세포의 유전자 이상으로 인한 다양한 질환들의 연구에 폭넓게 사용될 수 있을 것으로 기대된다.
본 명세서에 있어서, “정상동물(normal animal)”이란 정상적인 유전자 발현이 일어나는 신경세포를 포함하고 있는 정상적인 동물을 의미하며, 예를 들어, 본 발명의 벡터로 형질전환된 동물과 같은 종이며, 동일 또는 유사한 환경에서 사육된 동물일 수 있다. 상기 동물은 인간을 제외한 포유류, 예를 들어, 마우스, 래트, 햄스터 등의 설치류, 토끼, 말, 소, 개, 고양이, 원숭이, 기니피그 등일 수 있으나, 신경세포를 가지고 있는 동물이라면 이에 제한되지 않는다.
본 명세서에 있어서, “Sul4ta1 프로모터(Sulfotransferase 4A1 promoter)”란 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 서열로서, 신경세포에서 특이적으로 발현을 조절할 수 있는 폴리뉴클레오티드 서열을 의미한다. 본 발명의 Sul4ta1 프로모터는 서열번호 1의 변이체가 본 발명의 범위에 포함된다. 구체적으로 상기 유전자는 서열번호 1의 염기서열과 90 % 이상, 더욱 바람직하게는 95 % 이상, 가장 바람직하게는 98 % 이상의 서열 상동성을 가지는 염기서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드에 대한 “서열 상동성의 %”는 최적으로 배열된 서열과 비교 영역을 비교함으로써 확인되며, 비교 영역에서 폴리뉴클레오티드 서열의 일부는 더 서열의 최적 배열에 대한 참고 서열(추가 또는 삭제를 포함하지 않음)에 비해 추가 또는 삭제(즉, 갭)를 포함할 수 있다.
본 명세서에 있어서, 유전자 변형용 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드란 유전자 변형을 유도할 수 있는 유전자 가위, 유전자 변형용 효소 등을 의미하며, 바람직하게는 Cre 단백질, CRISPR/Cas9 등을 의미한다. 상기 “Cre”는 염색체 내에 포함되어 있는 유전자를 선택적으로 제거하는 유전자 조작 시스템 중의 하나로서, Cre 재조합 효소가 loxP 부위를 인식 함으로써, loxP 사이에 삽입되어 있는 목적 유전자의 조각이 제거되는 유전자 조작용 단백질이다. 상기 “CRISPR/Cas9”는 미생물에서 파지 DNA와 같은 외부 DNA가 침입했을 때 일어나는 방어 기작에 착안한 3세대 유전자 가위로서, ZFN, TALEN과 달리 표적 DNA에 결합할 수 있는 역할을 하는 부위가 단백질이 아닌 sgRNA이며, 상기 sgRNA는 Cas9(CRISPR-associated protein 9)이라는 단백질과 결합하여 DNA를 절단할 수 있는 제한효소를 형성하게 된다. 즉, CRISPR/Cas9은 ZFN, TALEN과 달리 DNA인식 부위가 RNA로 이루어져 있어 단백질을 제조하는 것과 비교하였을 때, 제조가 용이하며 제조비용도 저렴하다. 또한 표적 DNA 인식하는 특이성이 매우 높으며, 표적 세포에 주입하기도 쉽기 때문에 최근에 가장 활발히 이용되고 있는 유전자 가위이다. 상기 “작은 가이드 RNA(small guide RNA; sgRNA)”란 Cas9 단백질과 복합체를 형성할 수 있고, Cas9 단백질을 표적 DNA로 가져오는 RNA로써, 서열번호 1 또는 2의 염기서열로 표시되는 염기서열을 포함할 수 있다.
본 명세서에 있어서, “재조합 벡터(recombinant vector)”란 벡터 내에 삽입된 이종의 핵산에 의해 코딩되는 펩타이드 또는 단백질을 발현할 수 있는 벡터를 지칭하는 것으로, 바람직하게는 Sul4ta1 프로모터와 유전자 변형용 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드가 작동가능하게 연결되어 신경세포 특이적으로 유전자 변형용 단백질의 발현을 조절할 수 있도록 제조된 벡터를 의미한다. 상기 "벡터"는 시험관 내, 생체 왜 또는 생체 내에서 숙주 세포로 염기의 도입 및/또는 전이를 위한 임의의 매개물을 말하며, 다른 DNA 단편이 결합하여 결합된 단편의 복제를 가져올 수 있는 복제단위(replicon)일 수 있으며, "복제 단위"란 생체 내에서 DNA 복제의 자가 유닛으로서 기능하는, 즉, 스스로의 조절에 의해 복제가능한, 임의의 유전적 단위(예를 들면, 플라스미드, 파지, 코스미드, 염색체, 바이러스 등)를 말한다. 본 발명의 재조합 발현 벡터는 바람직하게는 상기 Sul4ta1 프로모터 서열과 유전자 변형용 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열 외에, 게이트웨이 벡터 시스템으로 사용될 수 있는 attL1, attL2, attR1, attR2 등을 추가로 포함할 수 있으며, 또한, 유전자 변형이 유도된 조직 및 발현 정도를 확인하기 위하여 형광 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 추가로 포함할 수 있다. 또한, 이외에도 전사를 조절하기 위한 임의의 오퍼레이터 서열, 적합한 mRNA 리보좀 결합 부위를 코딩하는 서열과 전사 및 해독의 종결을 조절하는 서열, 터미네이터 등을 포함할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 형질전환 여부를 확인하기 위한 항생제 저항성 유전자를 코딩하는 서열 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, “게이트웨이 클로닝 시스템(gateway cloning system)”이란 목적하는 DNA 단편을 site-specific recombination을 이용하여 벡터간 이동을 가능하게 만든 클로닝 시스템으로서, 일반적으로 엔트리 벡터(entry vector)의 att site와 목적 벡터(destination vector)의 att site가 재조합되어 발현 벡터(expression vector)가 제조될 수 있다. 일반적으로 상기 엔트리 벡터는 목적 유전자의 양 말단에 attL1, attL2을 갖는 벡터이며, 목적 벡터는 attR1, attR2를 포함하는 벡터이다. 상기 엔트리 벡터와 상기 목적 벡터는 재조합효소에 의해 LR 반응을 일으키며, 목적 벡터의 attR1과 attR2를 엔트리 벡터의 attL1과 attL2로 재조합이 유도되게 된다. 이 과정에서 엔트리 벡터에 포함되어 있던 목적유전자가 목적 벡터로 전달되게 된다. 게이트웨이 발현 벡터 제조용 카세트에 의해 목적유전자를 엔트리 벡터로부터 손쉽게 클로닝할 수 있어 다양한 형태의 클로닝이 가능하고 다량의 유전자를 클로닝할 때도 유리하다. 상기 "게이트웨이 발현 벡터 제조용 카세트"는 게이트웨이 발현벡터를 제조할 수 있는 카세트를 의미하며, 제조하거나 시판되는 것을 이용할 수 있다. 일례로, 시판되는 "attR1-CmR-ccdB-attR2" 카세트는 'attR1 및 attR2' 재조합 서열, 클로람페니콜 저항 유전자(CmR), 독소유전자(ccdB; clever gene) 등으로 이루어질 수 있다.
본 명세서에 있어서, “조건적 제거(conditional knockout; cKO)”란 특정 조직에서, 또는 특정 시간에, 또는 타목시펜, 독소루비신 등 특정 화합물의 처리 등에 의하여 유전자 제거 시점을 조절할 수 있는 방법 등을 의미한다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1: 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터의 제작
신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터를 제조하기 위하여, 게이트웨이 클로닝 시스템을 이용하였다. 게이트웨이 클로닝 시스템에 대한 개념도는 도 1에 간략하게 나타내었다. 보다 자세하게는, Sul4ta1 프로모터(Sulfotransferase 4A1 promoter)를 중합효소연쇄반응(polymerase chain reaction; PCR)을 이용하여 증폭시켰다. 본 발명의 Sul4ta1 프로모터 서열은 신경세포 이외에서의 발현(leaking)을 최소화하고, 신경세포 특이적으로 발현되면서, 재조합 단백질의 발현 효율을 유지할 수 있는 서열을 고려하여 선정하였다. 중합효소연쇄반응에 사용한 프라이머 서열은 하기 표 1에 나타내었다. 중합효소연쇄반응 결과 1003bp의 Sul4ta1 프로모터 서열(서열번호 1)이 증폭된 것을 확인하였다. 이후 증폭된 Sul4ta1 프로모터는 pDonr207 벡터(Invitrogen)의 attL1 및 attL2 사이에 Sul4ta1 프로모터 서열(서열번호 1)을 삽입하여 엔트리 벡터를 제작하였다. 제작된 엔트리 벡터 맵은 도 2에 나타내었다.
| 서열 (5' -> 3') | 서열번호 | |
| Sul4ta1-F | GGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTGGTACCACGCGTCTCCACTC | 2 |
| Sul4ta1-R | GGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTAGATCTGAATTCCATGCCGC | 3 |
이후, 목적 벡터를 제작하기 위하여, attR1 서열 및 attR2 서열 사이에 CMV 프로모터 서열 및 tetO 프로모터 서열을 삽입하였다(서열번호 4). 그리고 Cre(서열번호 5), IRES(서열번호 6), 및 EGFP(서열번호 7)가 작동가능하도록 연결시켜 GW_CMV_tetO_CRE-IRES-EGFP 목적 벡터(서열번호 8)를 제작하였다. 제작된 목적 벡터 맵은 도 3에 나타내었다.
그리고 제작된 엔트리 벡터와 목적 벡터를 LR recombinase를 이용하여 재조합시켜, 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터(서열번호 9)를 제작하였다. 최종적으로 제작된 벡터 맵은 도 4에 나타내었다.
신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터가 정상적으로 제작되었는지 확인하기 위하여, 제한효소 AfeI 및 SteI를 처리하고, 전기영동을 통하여 잘려진 재조합 벡터의 크기를 확인하였다. 그 결과는 도 5에 나타내었다.
도 5에 나타난 바와 같이, 5.0 kB, 2.2 kB로 잘려진 것을 확인하였고, 이를 통하여 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터가 정상적으로 제작되었다는 것을 확인할 수 있었다.
실시예 2: 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터로 형질전환된 동물 모델의 제작
실시예 1과 동일한 방법으로 제조한 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터로 형질전환된 동물 모델을 제조하기 위하여, 재조된 벡터를 미세주입법(microinjection)으로 마우스의 배아에 주입하였다. 그리고 F0 세대가 태어난 후에, 꼬리로부터 획득된 시료를 이용하여 중합효소연쇄반응을 실시하여 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터로 형질전환되었는지 확인하였다. 중합효소연쇄반응에 사용한 프라이머 서열은 하기 표 2에 나타내었으며, 그 결과는 도 6에 나타내었다.
| 유전자명 | 서열 (5' -> 3') | 서열번호 |
| Genotyping-F | GATTGCAGGCTCTCTAAACGC | 10 |
| Genotyping-R | CATTGCTGTCACTTGGTCGTG | 11 |
도 6에 나타난 바와 같이, 16, 17, 18, 20 및 21번의 마우스에서 형질전환되어, Cre, IRES, 및 EGFP가 마우스에 삽입된 것을 확인하였다.
또한, 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터가 정상적으로 형질전환되어 신경세포 특이적으로 Cre를 발현하는지 확인하기 위하여 GFP 형광을 이용하여 확인하였다. 보다 자세하게는 형질전환된 것으로 확인된 마우스를 안락사시킨 후 뇌 조직을 획득하였다. 그리고 획득된 뇌조직을 형광현미경으로 관찰하였다. 그 결과는 도 7에 나타내었다.
도 7에 나타난 바와 같이, 본 발명의 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터가 정상적으로 형질전환 되었으며, 신경세포 특이적으로 Cre를 발현시키는 것을 확인할 수 있었다. 상기 결과를 통하여, 본 발명의 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터를 이용하여 신경세포 특이적으로 Cre를 발현시키는 형질전환 동물모델을 제작할 수 있다는 것을 확인할 수 있었다.
상기 결과들을 통하여, 본 발명의 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터를 이용하여 동물에 형질전환시키면, 신경세포 특이적으로 다양한 유전자의 돌연변이를 제조하는데 사용할 수 있기 때문에 다양한 유전자 돌연변이 동물모델을 제조하는데 용이하게 사용할 수 있을 뿐만 아니라, 게이트웨이 벡터를 이용함으로써 불필요한 단계 없이 단시간에 다양한 유전자 돌연변이를 제조할 수 있다. 따라서, 다양한 연구에 폭넓게 사용될 수 있을 것으로 기대된다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.
<110> Macrogen, Inc.
KOREA INSTITUTE OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
<120> Neuron-specific promoter and recombinant vector comprising the
same for inducing DNA modification
<130> MP19-217
<160> 11
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 1003
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Sul4ta1 promoter
<400> 1
gtctccactc tccagttgct gggatcacaa gtgtgccgca agcccaactt ttgtttgtct 60
gtttcccttt tctccagtgc tggggaactg accccagggc ttcccgagag ggaggagctc 120
tactcctaag gggtttccca gacccttggg ttcttgttag ctgctttccc cagatgtggc 180
tcctggaaat aggattccca ttgtcaagga tgggacctgg acaggtggcg ggcgccacct 240
ggagggtcct ctctggggga tttcctgagg gcgcatctct gctggggtcc cctctacctg 300
aggtcctttt tgcctggggg cggggatgtc cactcttggg ttcctctctg ccgagggtct 360
tctcggcatg ggagtttcct ctctggagga ggggggatcg cctctgtttg gggtgtcctc 420
ggggaggggg cctcttctca gcctggagat ttctctgcca agcgtctggt ctctgcctgg 480
aagggcccac tctggggttt ctatctgcaa ggggaatcct ctgctgatgg tcttctctgc 540
ttgtggggtg ggggtgggag tcctctctgc ctggaggttt tctgtcttgg gtttcttttc 600
ttggggcctc tctgccgggg ttcttcctgg ggggagttct ctctggcact tgattgcagg 660
ctctctaaac gctgcctttg tcagccgcgc tctgatgcgg gctcttccat ctctggcatc 720
agaagcttct ggaggtgcgg cttcccggac cccgaggctc gccctgggtc tgcgcagacg 780
cctccttttt tgctctaggg tgtggggacc ctgacctgcc acgcatgact gacaggcagt 840
gatacggacc cgacgcacct ttgcggcagg cgcggggcct cggcaaccga cgtcaggggc 900
gcggcgtgcg tgggtgcggc catgacgtca tgcccgcgga gccccgcgcc ggcgccgtga 960
cgtcacgccc tggagctgcg ggccgggccg ggcggcggca tgg 1003
<210> 2
<211> 47
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Sul4ta1-F
<400> 2
ggacaagttt gtacaaaaaa gcaggctggt accacgcgtc tccactc 47
<210> 3
<211> 47
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Sul4ta1-R
<400> 3
ggaccacttt gtacaagaaa gctgggtaga tctgaattcc atgccgc 47
<210> 4
<211> 854
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> attR1_CMV_ tetO promoter_attR2
<400> 4
acaagtttgt acaaaaaagc tgaacgagaa acgtaaaatg atataaatat caatatatta 60
aattagattt tgcataaaaa acagactaca taatactgta aaacacaaca tatccagtca 120
ctatgacagt atggacgtta cataacttac ggtaaatggc ccgcctggct gaccgcccaa 180
cgacccccgc ccattgacgt caataatgac gtatgttccc atagtaacgc caatagggac 240
tttccattga cgtcaatggg tggagtattt acggtaaact gcccacttgg cagtacatca 300
agtgtatcat atgccaagta cgccccctat tgacgtcaat gacggtaaat ggcccgcctg 360
gcattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca tctacgtatt 420
agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc gtggatagcg 480
gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga gtttgttttg 540
gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat tgacgcaaat 600
gggcggtagg cgtgtacggt gggaggtcta tataagcaga gcttccctat cagtgataga 660
gatccctatc agtgatagag atccctatca gtgatagaga tccctatcag tgatagagaa 720
cttatgacgc atagtgactg gatatgttgt gttttacagt attatgtagt ctgtttttta 780
tgcaaaatct aatttaatat attgatattt atatcatttt acgtttctcg ttcagctttc 840
ttgtacaaag tggt 854
<210> 5
<211> 1056
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CRE sequence
<400> 5
atggccccaa agaagaagcg gaaggtctcc aatttactga ccgtacacca aaatttgcct 60
gcattaccgg tcgatgcaac gagtgatgag gttcgcaaga acctgatgga catgttcagg 120
gatcgccagg cgttttctga gcatacctgg aaaatgcttc tgtccgtttg ccggtcgtgg 180
gcggcatggt gcaagttgaa taaccggaaa tggtttcccg cagaacctga agatgttcgc 240
gattatcttc tatatcttca ggcgcgcggt ctggcagtaa aaactatcca gcaacatttg 300
ggccagctaa acatgcttca tcgtcggtcc gggctgccac gaccaagtga cagcaatgct 360
gtttcactgg ttatgcggcg gatccgaaaa gaaaacgttg atgccggtga acgtgcaaaa 420
caggctctag cgttcgaacg cactgatttc gaccaggttc gttcactcat ggaaaatagc 480
gatcgctgcc aggatatacg taatctggca tttctgggga ttgcttataa caccctgtta 540
cgtatagccg aaattgccag gatcagggtt aaagatatct cacgtactga cggtgggaga 600
atgttaatcc atattggcag aacgaaaacg ctggttagca ccgcaggtgt agagaaggca 660
cttagcctgg gggtaactaa actggtcgag cgatggattt ccgtctctgg tgtagctgat 720
gatccgaata actacctgtt ttgccgggtc agaaaaaatg gtgttgccgc gccatctgcc 780
accagccagc tatcaactcg cgccctggaa gggatttttg aagcaactca tcgattgatt 840
tacggcgcta aggatgactc tggtcagaga tacctggcct ggtctggaca cagtgcccgt 900
gtcggagccg cgcgagatat ggcccgcgct ggagtttcaa taccggagat catgcaagct 960
ggtggctgga ccaatgtaaa tattgtcatg aactatatcc gtaacctgga tagtgaaaca 1020
ggggcaatgg tgcgcctgct ggaagatggc gattag 1056
<210> 6
<211> 573
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IRES sequence
<400> 6
cccctctccc tccccccccc ctaacgttac tggccgaagc cgcttggaat aaggccggtg 60
tgcgtttgtc tatatgttat tttccaccat attgccgtct tttggcaatg tgagggcccg 120
gaaacctggc cctgtcttct tgacgagcat tcctaggggt ctttcccctc tcgccaaagg 180
aatgcaaggt ctgttgaatg tcgtgaagga agcagttcct ctggaagctt cttgaagaca 240
aacaacgtct gtagcgaccc tttgcaggca gcggaacccc ccacctggcg acaggtgcct 300
ctgcggccaa aagccacgtg tataagatac acctgcaaag gcggcacaac cccagtgcca 360
cgttgtgagt tggatagttg tggaaagagt caaatggctc acctcaagcg tattcaacaa 420
ggggctgaag gatgcccaga aggtacccca ttgtatggga tctgatctgg ggcctcggtg 480
cacatgcttt acatgtgttt agtcgaggtt aaaaaacgtc taggcccccc gaaccacggg 540
gacgtggttt tcctttgaaa aacacgatga taa 573
<210> 7
<211> 720
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> EGFP sequence
<400> 7
atggtgagca agggcgagga gctgttcacc ggggtggtgc ccatcctggt cgagctggac 60
ggcgacgtaa acggccacaa gttcagcgtg tccggcgagg gcgagggcga tgccacctac 120
ggcaagctga ccctgaagtt catctgcacc accggcaagc tgcccgtgcc ctggcccacc 180
ctcgtgacca ccctgaccta cggcgtgcag tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag 240
cagcacgact tcttcaagtc cgccatgccc gaaggctacg tccaggagcg caccatcttc 300
ttcaaggacg acggcaacta caagacccgc gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg 360
gtgaaccgca tcgagctgaa gggcatcgac ttcaaggagg acggcaacat cctggggcac 420
aagctggagt acaactacaa cagccacaac gtctatatca tggccgacaa gcagaagaac 480
ggcatcaagg tgaacttcaa gatccgccac aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc 540
gaccactacc agcagaacac ccccatcggc gacggccccg tgctgctgcc cgacaaccac 600
tacctgagca cccagtccgc cctgagcaaa gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc 660
ctgctggagt tcgtgaccgc cgccgggatc actctcggca tggacgagct gtacaagtaa 720
720
<210> 8
<211> 6692
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GW_CMV_tetO_CRE-IRES-EGFP vector sequences
<400> 8
tagttattac tagcgctacc ggactcagat cttctgcctt gattaataga tctacaagtt 60
tgtacaaaaa agctgaacga gaaacgtaaa atgatataaa tatcaatata ttaaattaga 120
ttttgcataa aaaacagact acataatact gtaaaacaca acatatccag tcactatgac 180
agtatggacg ttacataact tacggtaaat ggcccgcctg gctgaccgcc caacgacccc 240
cgcccattga cgtcaataat gacgtatgtt cccatagtaa cgccaatagg gactttccat 300
tgacgtcaat gggtggagta tttacggtaa actgcccact tggcagtaca tcaagtgtat 360
catatgccaa gtacgccccc tattgacgtc aatgacggta aatggcccgc ctggcattat 420
gcccagtaca tgaccttatg ggactttcct acttggcagt acatctacgt attagtcatc 480
gctattacca tggtgatgcg gttttggcag tacatcaatg ggcgtggata gcggtttgac 540
tcacggggat ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg ggagtttgtt ttggcaccaa 600
aatcaacggg actttccaaa atgtcgtaac aactccgccc cattgacgca aatgggcggt 660
aggcgtgtac ggtgggaggt ctatataagc agagcttccc tatcagtgat agagatccct 720
atcagtgata gagatcccta tcagtgatag agatccctat cagtgataga gaacttatga 780
cgcatagtga ctggatatgt tgtgttttac agtattatgt agtctgtttt ttatgcaaaa 840
tctaatttaa tatattgata tttatatcat tttacgtttc tcgttcagct ttcttgtaca 900
aagtggtacg cgtaacgtca tatgaacgtg ctagcaacgt aactagtatg gccccaaaga 960
agaagcggaa ggtctccaat ttactgaccg tacaccaaaa tttgcctgca ttaccggtcg 1020
atgcaacgag tgatgaggtt cgcaagaacc tgatggacat gttcagggat cgccaggcgt 1080
tttctgagca tacctggaaa atgcttctgt ccgtttgccg gtcgtgggcg gcatggtgca 1140
agttgaataa ccggaaatgg tttcccgcag aacctgaaga tgttcgcgat tatcttctat 1200
atcttcaggc gcgcggtctg gcagtaaaaa ctatccagca acatttgggc cagctaaaca 1260
tgcttcatcg tcggtccggg ctgccacgac caagtgacag caatgctgtt tcactggtta 1320
tgcggcggat ccgaaaagaa aacgttgatg ccggtgaacg tgcaaaacag gctctagcgt 1380
tcgaacgcac tgatttcgac caggttcgtt cactcatgga aaatagcgat cgctgccagg 1440
atatacgtaa tctggcattt ctggggattg cttataacac cctgttacgt atagccgaaa 1500
ttgccaggat cagggttaaa gatatctcac gtactgacgg tgggagaatg ttaatccata 1560
ttggcagaac gaaaacgctg gttagcaccg caggtgtaga gaaggcactt agcctggggg 1620
taactaaact ggtcgagcga tggatttccg tctctggtgt agctgatgat ccgaataact 1680
acctgttttg ccgggtcaga aaaaatggtg ttgccgcgcc atctgccacc agccagctat 1740
caactcgcgc cctggaaggg atttttgaag caactcatcg attgatttac ggcgctaagg 1800
atgactctgg tcagagatac ctggcctggt ctggacacag tgcccgtgtc ggagccgcgc 1860
gagatatggc ccgcgctgga gtttcaatac cggagatcat gcaagctggt ggctggacca 1920
atgtaaatat tgtcatgaac tatatccgta acctggatag tgaaacaggg gcaatggtgc 1980
gcctgctgga agatggcgat taggagctcc ccctctccct cccccccccc taacgttact 2040
ggccgaagcc gcttggaata aggccggtgt gcgtttgtct atatgttatt ttccaccata 2100
ttgccgtctt ttggcaatgt gagggcccgg aaacctggcc ctgtcttctt gacgagcatt 2160
cctaggggtc tttcccctct cgccaaagga atgcaaggtc tgttgaatgt cgtgaaggaa 2220
gcagttcctc tggaagcttc ttgaagacaa acaacgtctg tagcgaccct ttgcaggcag 2280
cggaaccccc cacctggcga caggtgcctc tgcggccaaa agccacgtgt ataagataca 2340
cctgcaaagg cggcacaacc ccagtgccac gttgtgagtt ggatagttgt ggaaagagtc 2400
aaatggctca cctcaagcgt attcaacaag gggctgaagg atgcccagaa ggtaccccat 2460
tgtatgggat ctgatctggg gcctcggtgc acatgcttta catgtgttta gtcgaggtta 2520
aaaaacgtct aggccccccg aaccacgggg acgtggtttt cctttgaaaa acacgatgat 2580
aagtcgacct cgaggggggg cccggtaccg cgggcccggg atccaccggt cgccaccatg 2640
gtgagcaagg gcgaggagct gttcaccggg gtggtgccca tcctggtcga gctggacggc 2700
gacgtaaacg gccacaagtt cagcgtgtcc ggcgagggcg agggcgatgc cacctacggc 2760
aagctgaccc tgaagttcat ctgcaccacc ggcaagctgc ccgtgccctg gcccaccctc 2820
gtgaccaccc tgacctacgg cgtgcagtgc ttcagccgct accccgacca catgaagcag 2880
cacgacttct tcaagtccgc catgcccgaa ggctacgtcc aggagcgcac catcttcttc 2940
aaggacgacg gcaactacaa gacccgcgcc gaggtgaagt tcgagggcga caccctggtg 3000
aaccgcatcg agctgaaggg catcgacttc aaggaggacg gcaacatcct ggggcacaag 3060
ctggagtaca actacaacag ccacaacgtc tatatcatgg ccgacaagca gaagaacggc 3120
atcaaggtga acttcaagat ccgccacaac atcgaggacg gcagcgtgca gctcgccgac 3180
cactaccagc agaacacccc catcggcgac ggccccgtgc tgctgcccga caaccactac 3240
ctgagcaccc agtccgccct gagcaaagac cccaacgaga agcgcgatca catggtcctg 3300
ctggagttcg tgaccgccgc cgggatcact ctcggcatgg acgagctgta caagtaaagc 3360
ggccgcgact ctagatcata atcagccata ccacatttgt agaggtttta cttgctttaa 3420
aaaacctccc acacctcccc ctgaacctga aacataaaat gaatgcaatt gttgttgtta 3480
acttgtttat tgcagcttat aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa 3540
ataaagcatt tttttcactg cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt 3600
aaggcgtaaa ttgtaagcgt taatattttg ttaaaattcg cgttaaattt ttgttaaatc 3660
agctcatttt ttaaccaata ggccgaaatc ggcaaaatcc cttataaatc aaaagaatag 3720
accgagatag ggttgagtgt tgttccagtt tggaacaaga gtccactatt aaagaacgtg 3780
gactccaacg tcaaagggcg aaaaaccgtc tatcagggcg atggcccact acgtgaacca 3840
tcaccctaat caagtttttt ggggtcgagg tgccgtaaag cactaaatcg gaaccctaaa 3900
gggagccccc gatttagagc ttgacgggga aagccggcga acgtggcgag aaaggaaggg 3960
aagaaagcga aaggagcggg cgctagggcg ctggcaagtg tagcggtcac gctgcgcgta 4020
accaccacac ccgccgcgct taatgcgccg ctacagggcg cgtcaggtgg cacttttcgg 4080
ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg 4140
ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtcctgag 4200
gcggaaagaa ccagctgtgg aatgtgtgtc agttagggtg tggaaagtcc ccaggctccc 4260
cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt 4320
ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca 4380
tagtcccgcc cctaactccg cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc 4440
cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tcggcctctg 4500
agctattcca gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc aaagatcgat 4560
caagagacag gatgaggatc gtttcgcatg attgaacaag atggattgca cgcaggttct 4620
ccggccgctt gggtggagag gctattcggc tatgactggg cacaacagac aatcggctgc 4680
tctgatgccg ccgtgttccg gctgtcagcg caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc 4740
gacctgtccg gtgccctgaa tgaactgcaa gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc 4800
acgacgggcg ttccttgcgc agctgtgctc gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg 4860
ctgctattgg gcgaagtgcc ggggcaggat ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag 4920
aaagtatcca tcatggctga tgcaatgcgg cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc 4980
ccattcgacc accaagcgaa acatcgcatc gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt 5040
cttgtcgatc aggatgatct ggacgaagag catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc 5100
gccaggctca aggcgagcat gcccgacggc gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc 5160
tgcttgccga atatcatggt ggaaaatggc cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg 5220
ctgggtgtgg cggaccgcta tcaggacata gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag 5280
cttggcggcg aatgggctga ccgcttcctc gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg 5340
cagcgcatcg ccttctatcg ccttcttgac gagttcttct gagcgggact ctggggttcg 5400
aaatgaccga ccaagcgacg cccaacctgc catcacgaga tttcgattcc accgccgcct 5460
tctatgaaag gttgggcttc ggaatcgttt tccgggacgc cggctggatg atcctccagc 5520
gcggggatct catgctggag ttcttcgccc accctagggg gaggctaact gaaacacgga 5580
aggagacaat accggaagga acccgcgcta tgacggcaat aaaaagacag aataaaacgc 5640
acggtgttgg gtcgtttgtt cataaacgcg gggttcggtc ccagggctgg cactctgtcg 5700
ataccccacc gagaccccat tggggccaat acgcccgcgt ttcttccttt tccccacccc 5760
accccccaag ttcgggtgaa ggcccagggc tcgcagccaa cgtcggggcg gcaggccctg 5820
ccatagcctc aggttactca tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta 5880
aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt 5940
tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt 6000
tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt 6060
gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc 6120
agataccaaa tactgtcctt ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg 6180
tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg 6240
ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt 6300
cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac 6360
tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg 6420
acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg 6480
gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat 6540
ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt 6600
tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg 6660
attctgtgga taaccgtatt accgccatgc at 6692
<210> 9
<211> 6912
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Sult4a1_CRE_IRES_EGFP Gateway vector sequences
<400> 9
tagttattac tagcgctacc ggactcagat cttctgcctt gattaataga tctacaagtt 60
tgtacaaaaa agcaggctgg taccacgcgt ctccactctc cagttgctgg gatcacaagt 120
gtgccgcaag cccaactttt gtttgtctgt ttcccttttc tccagtgctg gggaactgac 180
cccagggctt cccgagaggg aggagctcta ctcctaaggg gtttcccaga cccttgggtt 240
cttgttagct gctttcccca gatgtggctc ctggaaatag gattcccatt gtcaaggatg 300
ggacctggac aggtggcggg cgccacctgg agggtcctct ctgggggatt tcctgagggc 360
gcatctctgc tggggtcccc tctacctgag gtcctttttg cctgggggcg gggatgtcca 420
ctcttgggtt cctctctgcc gagggtcttc tcggcatggg agtttcctct ctggaggagg 480
ggggatcgcc tctgtttggg gtgtcctcgg ggagggggcc tcttctcagc ctggagattt 540
ctctgccaag cgtctggtct ctgcctggaa gggcccactc tggggtttct atctgcaagg 600
ggaatcctct gctgatggtc ttctctgctt gtggggtggg ggtgggagtc ctctctgcct 660
ggaggttttc tgtcttgggt ttcttttctt ggggcctctc tgccggggtt cttcctgggg 720
ggagttctct ctggcacttg attgcaggct ctctaaacgc tgcctttgtc agccgcgctc 780
tgatgcgggc tcttccatct ctggcatcag aagcttctgg aggtgcggct tcccggaccc 840
cgaggctcgc cctgggtctg cgcagacgcc tccttttttg ctctagggtg tggggaccct 900
gacctgccac gcatgactga caggcagtga tacggacccg acgcaccttt gcggcaggcg 960
cggggcctcg gcaaccgacg tcaggggcgc ggcgtgcgtg ggtgcggcca tgacgtcatg 1020
cccgcggagc cccgcgccgg cgccgtgacg tcacgccctg gagctgcggg ccgggccggg 1080
cggcggcatg gaattcagat ctacccagct ttcttgtaca aagtggtacg cgtaacgtca 1140
tatgaacgtg ctagcaacgt aactagtatg gccccaaaga agaagcggaa ggtctccaat 1200
ttactgaccg tacaccaaaa tttgcctgca ttaccggtcg atgcaacgag tgatgaggtt 1260
cgcaagaacc tgatggacat gttcagggat cgccaggcgt tttctgagca tacctggaaa 1320
atgcttctgt ccgtttgccg gtcgtgggcg gcatggtgca agttgaataa ccggaaatgg 1380
tttcccgcag aacctgaaga tgttcgcgat tatcttctat atcttcaggc gcgcggtctg 1440
gcagtaaaaa ctatccagca acatttgggc cagctaaaca tgcttcatcg tcggtccggg 1500
ctgccacgac caagtgacag caatgctgtt tcactggtta tgcggcggat ccgaaaagaa 1560
aacgttgatg ccggtgaacg tgcaaaacag gctctagcgt tcgaacgcac tgatttcgac 1620
caggttcgtt cactcatgga aaatagcgat cgctgccagg atatacgtaa tctggcattt 1680
ctggggattg cttataacac cctgttacgt atagccgaaa ttgccaggat cagggttaaa 1740
gatatctcac gtactgacgg tgggagaatg ttaatccata ttggcagaac gaaaacgctg 1800
gttagcaccg caggtgtaga gaaggcactt agcctggggg taactaaact ggtcgagcga 1860
tggatttccg tctctggtgt agctgatgat ccgaataact acctgttttg ccgggtcaga 1920
aaaaatggtg ttgccgcgcc atctgccacc agccagctat caactcgcgc cctggaaggg 1980
atttttgaag caactcatcg attgatttac ggcgctaagg atgactctgg tcagagatac 2040
ctggcctggt ctggacacag tgcccgtgtc ggagccgcgc gagatatggc ccgcgctgga 2100
gtttcaatac cggagatcat gcaagctggt ggctggacca atgtaaatat tgtcatgaac 2160
tatatccgta acctggatag tgaaacaggg gcaatggtgc gcctgctgga agatggcgat 2220
taggagctcc ccctctccct cccccccccc taacgttact ggccgaagcc gcttggaata 2280
aggccggtgt gcgtttgtct atatgttatt ttccaccata ttgccgtctt ttggcaatgt 2340
gagggcccgg aaacctggcc ctgtcttctt gacgagcatt cctaggggtc tttcccctct 2400
cgccaaagga atgcaaggtc tgttgaatgt cgtgaaggaa gcagttcctc tggaagcttc 2460
ttgaagacaa acaacgtctg tagcgaccct ttgcaggcag cggaaccccc cacctggcga 2520
caggtgcctc tgcggccaaa agccacgtgt ataagataca cctgcaaagg cggcacaacc 2580
ccagtgccac gttgtgagtt ggatagttgt ggaaagagtc aaatggctca cctcaagcgt 2640
attcaacaag gggctgaagg atgcccagaa ggtaccccat tgtatgggat ctgatctggg 2700
gcctcggtgc acatgcttta catgtgttta gtcgaggtta aaaaacgtct aggccccccg 2760
aaccacgggg acgtggtttt cctttgaaaa acacgatgat aagtcgacct cgaggggggg 2820
cccggtaccg cgggcccggg atccaccggt cgccaccatg gtgagcaagg gcgaggagct 2880
gttcaccggg gtggtgccca tcctggtcga gctggacggc gacgtaaacg gccacaagtt 2940
cagcgtgtcc ggcgagggcg agggcgatgc cacctacggc aagctgaccc tgaagttcat 3000
ctgcaccacc ggcaagctgc ccgtgccctg gcccaccctc gtgaccaccc tgacctacgg 3060
cgtgcagtgc ttcagccgct accccgacca catgaagcag cacgacttct tcaagtccgc 3120
catgcccgaa ggctacgtcc aggagcgcac catcttcttc aaggacgacg gcaactacaa 3180
gacccgcgcc gaggtgaagt tcgagggcga caccctggtg aaccgcatcg agctgaaggg 3240
catcgacttc aaggaggacg gcaacatcct ggggcacaag ctggagtaca actacaacag 3300
ccacaacgtc tatatcatgg ccgacaagca gaagaacggc atcaaggtga acttcaagat 3360
ccgccacaac atcgaggacg gcagcgtgca gctcgccgac cactaccagc agaacacccc 3420
catcggcgac ggccccgtgc tgctgcccga caaccactac ctgagcaccc agtccgccct 3480
gagcaaagac cccaacgaga agcgcgatca catggtcctg ctggagttcg tgaccgccgc 3540
cgggatcact ctcggcatgg acgagctgta caagtaaagc ggccgcgact ctagatcata 3600
atcagccata ccacatttgt agaggtttta cttgctttaa aaaacctccc acacctcccc 3660
ctgaacctga aacataaaat gaatgcaatt gttgttgtta acttgtttat tgcagcttat 3720
aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa ataaagcatt tttttcactg 3780
cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt aaggcgtaaa ttgtaagcgt 3840
taatattttg ttaaaattcg cgttaaattt ttgttaaatc agctcatttt ttaaccaata 3900
ggccgaaatc ggcaaaatcc cttataaatc aaaagaatag accgagatag ggttgagtgt 3960
tgttccagtt tggaacaaga gtccactatt aaagaacgtg gactccaacg tcaaagggcg 4020
aaaaaccgtc tatcagggcg atggcccact acgtgaacca tcaccctaat caagtttttt 4080
ggggtcgagg tgccgtaaag cactaaatcg gaaccctaaa gggagccccc gatttagagc 4140
ttgacgggga aagccggcga acgtggcgag aaaggaaggg aagaaagcga aaggagcggg 4200
cgctagggcg ctggcaagtg tagcggtcac gctgcgcgta accaccacac ccgccgcgct 4260
taatgcgccg ctacagggcg cgtcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc 4320
tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg 4380
ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtcctgag gcggaaagaa ccagctgtgg 4440
aatgtgtgtc agttagggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa 4500
agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc 4560
agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca tagtcccgcc cctaactccg 4620
cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt 4680
ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca gaagtagtga 4740
ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc aaagatcgat caagagacag gatgaggatc 4800
gtttcgcatg attgaacaag atggattgca cgcaggttct ccggccgctt gggtggagag 4860
gctattcggc tatgactggg cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg ccgtgttccg 4920
gctgtcagcg caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg gtgccctgaa 4980
tgaactgcaa gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg ttccttgcgc 5040
agctgtgctc gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg gcgaagtgcc 5100
ggggcaggat ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca tcatggctga 5160
tgcaatgcgg cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc ccattcgacc accaagcgaa 5220
acatcgcatc gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc aggatgatct 5280
ggacgaagag catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca aggcgagcat 5340
gcccgacggc gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga atatcatggt 5400
ggaaaatggc cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg cggaccgcta 5460
tcaggacata gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg aatgggctga 5520
ccgcttcctc gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg ccttctatcg 5580
ccttcttgac gagttcttct gagcgggact ctggggttcg aaatgaccga ccaagcgacg 5640
cccaacctgc catcacgaga tttcgattcc accgccgcct tctatgaaag gttgggcttc 5700
ggaatcgttt tccgggacgc cggctggatg atcctccagc gcggggatct catgctggag 5760
ttcttcgccc accctagggg gaggctaact gaaacacgga aggagacaat accggaagga 5820
acccgcgcta tgacggcaat aaaaagacag aataaaacgc acggtgttgg gtcgtttgtt 5880
cataaacgcg gggttcggtc ccagggctgg cactctgtcg ataccccacc gagaccccat 5940
tggggccaat acgcccgcgt ttcttccttt tccccacccc accccccaag ttcgggtgaa 6000
ggcccagggc tcgcagccaa cgtcggggcg gcaggccctg ccatagcctc aggttactca 6060
tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc 6120
ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca 6180
gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc 6240
tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta 6300
ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa tactgtcctt 6360
ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc 6420
gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg 6480
ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg 6540
tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag 6600
ctatgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc 6660
agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat 6720
agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg 6780
gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc 6840
tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt 6900
accgccatgc at 6912
<210> 10
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Genotyping-F
<400> 10
gattgcaggc tctctaaacg c 21
<210> 11
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Genotyping-R
<400> 11
cattgctgtc acttggtcgt g 21
Claims (13)
- 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 Sul4ta1 프로모터, 및 이와 작동가능하게 연결된 유전자 변형용 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하는, 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 재조합 벡터.
- 제 1 항에 있어서,
상기 유전자 변형용 단백질은 Cre 재조합 효소 또는 Cas9 효소인 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터. - 제 1 항에 있어서,
상기 재조합 벡터는 IRES(internal ribosome entry site)를 암호화하는 뉴클레오티드를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터. - 제 1 항에 있어서,
상기 재조합 벡터는 형광 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터. - 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항의 재조합 벡터로 형질전환된, 형질전환체.
- 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항의 재조합 벡터가 미세주입된 배아를 대리모 동물에 착상시켜 제조한, 형질전환 동물.
- 제 6 항에 있어서,
상기 대리모 동물은 마우스, 래트, 햄스터, 토끼, 말, 소, 개, 고양이, 원숭이, 및 기니피그로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인, 형질전환 동물. - (a) 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항의 재조합 벡터를 배아에 미세주입하는 단계; 및
(b) 상기 미세주입된 배아를 대리모 동물에 착상시키는 단계를 포함하는, 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 형질전환 동물의 제조 방법. - 신경세포 특이적 DNA 변형 유도용 게이트웨이 클로닝 시스템으로서,
상기 시스템은 (a) 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 Sul4ta1 프로모터, 상기 프로모터의 양 말단에 결합된 att 사이트 서열, 및 선별 마커를 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하는 제1벡터; 및 (b) 프로모터, 상기 프로모터의 양 말단에 결합된 att 사이트 서열, 유전자 변형용 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드; 및 선별 마커를 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하는 제2벡터를 포함하고,
상기 제1벡터의 선별 마커와 제2벡터의 선별 마커는 서로 상이한 유전자이며,
상기 제2벡터의 프로모터는 제1벡터의 프로모터와는 상이한 프로모터인 것을 특징으로 하는, 게이트웨이 클로닝 시스템. - 제 9 항에 있어서,
상기 제1벡터의 att 사이트는 attL1 및 attL2이고, 상기 제2벡터의 att 사이트는 attR1 및 attR2인 것을 특징으로 하는, 게이트웨이 클로닝 시스템. - 제 9 항에 있어서,
상기 제1벡터의 att 사이트는 attR1 및 attR2이고, 상기 제2벡터의 att 사이트는 attL1 및 attL2인 것을 특징으로 하는, 게이트웨이 클로닝 시스템. - 제 9 항에 있어서,
상기 선별 마커는 항생제 저항성 유전자인 것을 특징으로 하는, 게이트웨이 클로닝 시스템. - 제 9 항에 있어서,
상기 유전자 변형용 단백질은 Cre 재조합 효소 또는 Cas9 효소인 것을 특징으로 하는, 게이트웨이 클로닝 시스템.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020190145123A KR102479490B1 (ko) | 2019-11-13 | 2019-11-13 | 신경세포 특이적 프로모터 및 이를 포함하는 dna 변형 유도용 재조합 벡터 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020190145123A KR102479490B1 (ko) | 2019-11-13 | 2019-11-13 | 신경세포 특이적 프로모터 및 이를 포함하는 dna 변형 유도용 재조합 벡터 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20210058098A KR20210058098A (ko) | 2021-05-24 |
| KR102479490B1 true KR102479490B1 (ko) | 2022-12-21 |
Family
ID=76152726
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020190145123A KR102479490B1 (ko) | 2019-11-13 | 2019-11-13 | 신경세포 특이적 프로모터 및 이를 포함하는 dna 변형 유도용 재조합 벡터 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR102479490B1 (ko) |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100997129B1 (ko) * | 2007-10-25 | 2010-11-29 | 경상대학교산학협력단 | 유전자의 고속 기능분석을 위한 붉은형광단백질 융합단백질 생산용 벡터 |
| KR20120131268A (ko) | 2011-05-25 | 2012-12-05 | 한밭대학교 산학협력단 | 감각 신경세포 특이적으로 형광단백질을 발현하는 형질전환 동물 |
| KR101703506B1 (ko) * | 2014-12-23 | 2017-02-07 | 연세대학교 산학협력단 | 형질전환동물 제작을 위한 형질주입 시스템 |
-
2019
- 2019-11-13 KR KR1020190145123A patent/KR102479490B1/ko active IP Right Grant
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Drug Metab Dispos.,42(5):947-953(2014.2.19.) |
| Mol Pharmacol.,78(3):503-510(2010.6.22.) |
| NCBI REFERENCE SEQUENCE: XM_031351304.1 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20210058098A (ko) | 2021-05-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6410220B1 (en) | Self-assembling genes, vectors and uses thereof | |
| AU750025B2 (en) | Expression of endogenous genes by non-homologous recombination of a vector construct with cellular DNA | |
| US6361972B1 (en) | Compositions and methods for non-targeted activation of endogenous genes | |
| AU2015335921B2 (en) | Novel CHO integration sites and uses thereof | |
| ES2403087T3 (es) | Modelos de animales y moléculas terapéuticas | |
| CA2441937A1 (en) | Chromosome-based platforms | |
| KR20200064129A (ko) | 트랜스제닉 선택 방법 및 조성물 | |
| JP2019083823A (ja) | トランスジェニック動物および使用方法 | |
| US20040005564A1 (en) | Methods of identifying synthetic transcriptonal and translational regulatory elements, and compositions relating to same | |
| US20220184230A1 (en) | Methods and compositions for genomic integration | |
| KR102479490B1 (ko) | 신경세포 특이적 프로모터 및 이를 포함하는 dna 변형 유도용 재조합 벡터 | |
| CN112824529B (zh) | 一种条件性基因敲除或者拯救方法 | |
| Dehdilani et al. | Genetically engineered birds; pre-CRISPR and CRISPR era | |
| CN112852871A (zh) | 高效编辑家蚕基因组的Cas9系统及其应用 | |
| KR20220115943A (ko) | 재조합 활성화 유전자 1 (rag1) 중증 복합 면역결핍증 (scid) 을 치료하기 위한 조혈 줄기 세포에서의 렌티바이러스 벡터 | |
| CN110272914A (zh) | 一种双荧光GLUTs示踪质粒、其制备方法及其应用 | |
| CN112852855B (zh) | 一种简便的基因缺失突变体的载体构建方法及试剂盒 | |
| CN107217074B (zh) | 一种利用zfn在哺乳动物细胞中实现多个大片段dna定点整合的方法 | |
| NL2027815B1 (en) | Genomic integration | |
| AU2020363795A1 (en) | High frequency targeted animal transgenesis | |
| CN111705079A (zh) | 一种基于Vcre-Vloxp重组酶体系的基因编辑方法及其应用 | |
| US6740503B1 (en) | Compositions and methods for non-targeted activation of endogenous genes | |
| US20210147870A1 (en) | Compositions and methods for the treatment of stargardt disease | |
| CN114829614A (zh) | 治疗x连锁慢性肉芽肿病的造血干细胞中的慢病毒载体 | |
| CN116103284A (zh) | 环形gRNA及其相关生物材料与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right |