KR102469143B1 - Microbial agents for promoting the decomposition of livestock carcasses including the Bacillus pseudomycoides KS2 strain - Google Patents
Microbial agents for promoting the decomposition of livestock carcasses including the Bacillus pseudomycoides KS2 strain Download PDFInfo
- Publication number
- KR102469143B1 KR102469143B1 KR1020200083171A KR20200083171A KR102469143B1 KR 102469143 B1 KR102469143 B1 KR 102469143B1 KR 1020200083171 A KR1020200083171 A KR 1020200083171A KR 20200083171 A KR20200083171 A KR 20200083171A KR 102469143 B1 KR102469143 B1 KR 102469143B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- livestock
- carcass
- strain
- carcasses
- decomposition
- Prior art date
Links
- 244000144972 livestock Species 0.000 title claims abstract description 88
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 title claims abstract description 57
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 title claims abstract description 50
- 241000906059 Bacillus pseudomycoides Species 0.000 title claims abstract description 46
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 title claims abstract description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 28
- 238000009933 burial Methods 0.000 claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 21
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 8
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 59
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 14
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 claims description 6
- 239000010868 animal carcass Substances 0.000 claims description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 3
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 claims description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 claims 1
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 claims 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 abstract description 3
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 82
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 56
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 36
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 30
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 18
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 12
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N Methanethiol Chemical compound SC LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 8
- 239000006150 trypticase soy agar Substances 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N ammonia nh3 Chemical compound N.N XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 4
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 4
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- QGZKDVFQNNGYKY-OUBTZVSYSA-N Ammonia-15N Chemical compound [15NH3] QGZKDVFQNNGYKY-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 3
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 230000007023 DNA restriction-modification system Effects 0.000 description 2
- 208000034454 F12-related hereditary angioedema with normal C1Inh Diseases 0.000 description 2
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 description 2
- 108020001027 Ribosomal DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 2
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 2
- -1 etc.) Substances 0.000 description 2
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 2
- 208000016861 hereditary angioedema type 3 Diseases 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 2
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]propan-1-one Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CCC(=O)N1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 239000004606 Fillers/Extenders Substances 0.000 description 1
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- MKYBYDHXWVHEJW-UHFFFAOYSA-N N-[1-oxo-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propan-2-yl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(C(C)NC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 MKYBYDHXWVHEJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N N-[2-oxo-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- MMDJDBSEMBIJBB-UHFFFAOYSA-N [O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O.[NH6+3] Chemical compound [O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O.[NH6+3] MMDJDBSEMBIJBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000012165 high-throughput sequencing Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 235000019645 odor Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B09—DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
- B09B—DISPOSAL OF SOLID WASTE NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- B09B3/00—Destroying solid waste or transforming solid waste into something useful or harmless
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
Landscapes
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Environmental & Geological Engineering (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
본 발명은 바실러스 슈도마이코이데스(Bacillus pseudomycoides) KS2 균주를 포함하는 가축 사체 분해 촉진용 미생물 제제에 관한 것이다. 상세하게는, 수탁번호 KCTC14192BP로 기탁된 바실러스 슈도마이코이데스 KS2 균주, 상기 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 가축 사체 분해 촉진용 미생물 제제, 및 상기 미생물 제제를 가축 사체 매몰지에 처리하는 단계를 포함하는 가축 사체 분해 촉진 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 바실러스 슈도마이코이데스 KS2 균주를 포함하는 가축 사체 분해 촉진용 미생물 제제는 매몰지에서 가축 사체를 효과적이고 신속하게 분해할 수 있으며, 매몰지 및 매몰지 주위의 2차 오염 문제 발생을 방지할 수 있다.The present invention relates to a microbial preparation for promoting decomposition of livestock carcasses, including Bacillus pseudomycoides KS2 strain. Specifically, the Bacillus pseudomycoides KS2 strain deposited with accession number KCTC14192BP, a microbial agent for promoting decomposition of livestock carcasses containing the strain or its culture medium as an active ingredient, and the step of treating the microbial agent on a livestock carcass burial site It relates to a method for accelerating decomposition of livestock carcasses, including The microbial preparation for promoting decomposition of livestock carcasses, including the Bacillus pseudomycoides KS2 strain according to the present invention, can effectively and quickly decompose livestock carcasses at the burial site, and prevents the occurrence of secondary contamination problems around the burial site and the burial site. It can be prevented.
Description
본 발명은 바실러스 슈도마이코이데스(Bacillus pseudomycoides) KS2 균주를 포함하는 가축 사체 분해 촉진용 미생물 제제에 관한 것이다. 상세하게는, 수탁번호 KCTC14192BP로 기탁된 바실러스 슈도마이코이데스 KS2 균주, 상기 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 가축 사체 분해 촉진용 미생물 제제, 및 상기 미생물 제제를 가축 사체 매몰지에 처리하는 단계를 포함하는 가축 사체 분해 촉진 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a microbial preparation for promoting decomposition of livestock carcasses, including Bacillus pseudomycoides KS2 strain. Specifically, the Bacillus pseudomycoides KS2 strain deposited with accession number KCTC14192BP, a microbial agent for promoting decomposition of livestock carcasses containing the strain or its culture medium as an active ingredient, and the step of treating the microbial agent on a livestock carcass burial site It relates to a method for accelerating decomposition of livestock carcasses, including
구제역, 조류 인플루엔자(AI)와 같은 가축전염병에 감염되어 죽은 가축 사체나, 감염되었거나 감염이 의심되어 살처분된 가축 사체는 매몰 등과 같은 방법에 의하여 처리될 수 있다. 가축 사체를 매몰하여 처리하는 방법은 단기간에 발생한 대량의 가축 사체를 처리하는데 유리하여, 우리나라의 여건상 주류를 이루고 있다.Livestock carcasses that died after being infected with livestock infectious diseases such as foot-and-mouth disease and avian influenza (AI), or livestock carcasses that were infected or suspected of being infected and were killed can be treated by a method such as burial. The method of burying and treating livestock carcasses is advantageous for processing a large amount of livestock carcasses generated in a short period of time, and is the mainstream in Korea.
현재까지 사용되고 있는 가축 사체 처리 방법은 기술적 문제와 함께 운영, 관리 상의 문제를 모두 가지고 있으며, 어떠한 방법을 사용하더라도 가축 사체를 완전히 분해하기까지 10년 이상이 소요된다. 대부분의 가축 매몰지가 농지 또는 하천 인근에 설치되어 매몰된 가축으로부터 유출되는 침출수는 이들에 대한 오염원이 되고 있을 뿐만 아니라, 매몰지에서 나오는 악취로 인해 2차적인 환경 오염 문제를 일으키고 있다.Livestock carcass disposal methods that have been used to date have both operational and management problems as well as technical problems, and it takes more than 10 years to completely decompose livestock carcasses no matter which method is used. Most of the livestock burial sites are installed near farmland or rivers, and leachate from the buried livestock not only becomes a source of pollution for them, but also causes secondary environmental pollution problems due to odors from the burial sites.
한편, 가축 사체의 분해가 느리게 진행되면, 토지의 재사용 효율이 저하될 수 있다. 또한, 가축 사체의 분해시에는 인체에 유해한 질산성 질소 등이 발생하여 침출수에 섞여서 매몰지의 외측으로 배출되어 심각한 문제가 발생할 수 있다. 이에, 가축 사체를 신속하게 분해하여 처리할 수 있는 기술이 필요한 실정이다.On the other hand, if the decomposition of livestock carcasses proceeds slowly, the efficiency of land reuse may decrease. In addition, when livestock carcasses are decomposed, nitrate nitrogen, etc., which is harmful to the human body, is mixed with leachate and discharged to the outside of the burial site, which can cause serious problems. Accordingly, there is a need for a technology capable of quickly disassembling and treating livestock carcasses.
따라서, 상기와 같은 환경 오염 문제를 해결할 수 있는 방안으로, 매몰지에 함께 투여되는 미생물 제제에 대한 연구가 진행되고 있다. 일례로, 한국등록특허 제10-1782130호에 동물 사체 소멸용 미생물 제제가 개시되어 있고, 한국공개특허 제10-2015-0136624호에 매립된 사체를 처리하기 위한 매립 사체 분해용 조성물이 개시되어 있다. 그러나, 사체 분해용 미생물 제제에 대한 이해가 부족하고, 용도에 부합되지 않는 미생물 제제가 남용되고 있어, 이에 대한 해결 방안의 마련이 절실한 상황이다.Therefore, as a way to solve the above environmental pollution problem, research on microbial preparations to be administered together with the burial site is being conducted. For example, Korean Patent Registration No. 10-1782130 discloses a microbial agent for extinction of animal carcasses, and Korean Patent Publication No. 10-2015-0136624 discloses a composition for disassembling landfill carcasses for treating buried carcasses. . However, there is a lack of understanding of microbial preparations for decomposition of corpses, and microbial preparations that do not fit the purpose are being abused, and a solution to this is urgently needed.
이러한 배경하에서, 본 발명자들은 가축 사체를 효과적으로 빠르게 부패시킬 수 있는 신균주를 확보하기 위해 예의 연구한 결과, 가축 사체 매몰지로부터 사체 분해를 촉진하는 바실러스 슈도마이코이데스(Bacillus pseudomycoides) KS2 균주를 분리 및 동정하였으며, 이 균주에 의해 닭 사체 및 돼지 사체의 분해, 특히 닭 사체에 대한 분해 촉진능이 우수함을 확인함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.Under this background, the present inventors have conducted extensive research to secure a new strain that can effectively and quickly decay livestock carcasses, and as a result, Bacillus pseudomycoides, which promotes carcass decomposition from livestock carcass burial sites, isolates the Bacillus pseudomycoides KS2 strain And identified, and the present invention was completed by confirming that this strain is excellent in decomposition of chicken carcasses and pig carcasses, especially in promoting decomposition of chicken carcasses.
본 발명의 하나의 목적은 가축 사체의 분해를 촉진하는, 수탁번호 KCTC14192BP로 기탁된 바실러스 슈도마이코이데스(Bacillus pseudomycoides) KS2 균주를 제공하는 것이다.One object of the present invention is to provide a Bacillus pseudomycoides KS2 strain deposited with accession number KCTC14192BP, which promotes the decomposition of livestock carcasses.
본 발명의 다른 하나의 목적은 상기 바실러스 슈도마이코이데스 KS2 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 가축 사체 분해 촉진용 미생물 제제를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a microbial preparation for promoting decomposition of livestock carcasses comprising the Bacillus pseudomycoides KS2 strain or its culture medium as an active ingredient.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 상기 미생물 제제를 가축 사체 매몰지에 처리하는 단계를 포함하는, 가축 사체 분해 촉진 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for accelerating decomposition of livestock carcasses, comprising the step of treating the microbial agent in a livestock carcass burial site.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 가축 사체의 분해를 촉진하는, 수탁번호 KCTC14192BP로 기탁된 바실러스 슈도마이코이데스(Bacillus pseudomycoides) KS2 균주를 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a Bacillus pseudomycoides KS2 strain deposited with accession number KCTC14192BP, which promotes the decomposition of livestock carcasses.
또한, 본 발명은 상기 바실러스 슈도마이코이데스 KS2 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 가축 사체 분해 촉진용 미생물 제제를 제공한다.In addition, the present invention provides a microbial preparation for promoting decomposition of livestock carcasses, comprising the Bacillus pseudomycoides KS2 strain or its culture medium as an active ingredient.
또한, 본 발명은 상기 미생물 제제를 가축 사체 매몰지에 처리하는 단계를 포함하는, 가축 사체 분해 촉진 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for accelerating decomposition of livestock carcasses, comprising the step of treating the microbial preparation on a livestock carcass burial site.
본 발명에 따른 바실러스 슈도마이코이데스(Bacillus pseudomycoides) KS2 균주를 포함하는 가축 사체 분해 촉진용 미생물 제제는 매몰지에서 가축 사체를 효과적이고 신속하게 분해할 수 있으므로, 토지의 재사용 효율을 향상시킬 수 있다.Bacillus pseudomycoides according to the present invention ( Bacillus pseudomycoides ) Since the microbial agent for promoting decomposition of livestock carcasses including the KS2 strain can effectively and quickly decompose livestock carcasses in a burial site, it is possible to improve the efficiency of land reuse. .
또한, 본 발명의 가축 사체 분해 촉진용 미생물 제제는 가축 사체를 분해하여 가축 사체의 중량을 현저히 감소시키고, 많은 양의 가축 사체를 무기물로 분해시키므로, 매몰지 및 매몰지 주위의 2차 오염 문제 역시 방지할 수 있는 효과가 있다.In addition, the microbial preparation for promoting decomposition of livestock carcasses of the present invention decomposes livestock carcasses, significantly reduces the weight of livestock carcasses, and decomposes a large amount of livestock carcasses into inorganic substances, so the problem of secondary contamination of the burial site and the burial site is also There is a preventive effect.
도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 가축 사체의 부패 촉진을 위한 미생물을 분리 동정 및 선발하기 위한 실험 설계를 개략적으로 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 가축 사체 분해 실험에 대한 방법론적 흐름을 개략적으로 나타낸 도이다.
도 3a는 돼지 사체의 부패 기간별 무게 변화를 나타낸 도이다. 여기에서, Sw_S_A는 멸균 토양, 호기성 조건에서의 돼지 사체이고, Sw_U_A는 비멸균 토양, 호기성 조건에서의 돼지 사체이며, Sw_S_An은 멸균 토양, 혐기성 조건에서의 돼지 사체이고, Sw_U_An은 비멸균 토양, 혐기성 조건에서의 돼지 사체이다.
도 3b는 닭 사체의 부패 기간별 무게 변화를 나타낸 도이다. 여기에서, Po_S_A는 멸균 토양, 호기성 조건에서의 닭 사체이고, Po_U_A는 비멸균 토양, 호기성 조건에서의 닭 사체이며, Po_S_An은 멸균 토양, 혐기성 조건에서의 닭 사체이고, Po_U_An은 비멸균 토양, 혐기성 조건에서의 닭 사체이다.
도 4a는 돼지 사체의 부패 기간별 수분 함량 변화를 나타낸 도이다. 여기에서, Sw_S_A는 멸균 토양, 호기성 조건에서의 돼지 사체이고, Sw_U_A는 비멸균 토양, 호기성 조건에서의 돼지 사체이며, Sw_S_An은 멸균 토양, 혐기성 조건에서의 돼지 사체이고, Sw_U_An은 비멸균 토양, 혐기성 조건에서의 돼지 사체이다.
도 4b는 닭 사체의 부패 기간별 수분 함량 변화를 나타낸 도이다. 여기에서, Po_S_A는 멸균 토양, 호기성 조건에서의 닭 사체이고, Po_U_A는 비멸균 토양, 호기성 조건에서의 닭 사체이며, Po_S_An은 멸균 토양, 혐기성 조건에서의 닭 사체이고, Po_U_An은 비멸균 토양, 혐기성 조건에서의 닭 사체이다.
도 5a는 돼지 사체의 부패 기간별 pH 변화를 나타낸 도이다. 여기에서, Sw_S_A는 멸균 토양, 호기성 조건에서의 돼지 사체이고, Sw_U_A는 비멸균 토양, 호기성 조건에서의 돼지 사체이며, Sw_S_An은 멸균 토양, 혐기성 조건에서의 돼지 사체이고, Sw_U_An은 비멸균 토양, 혐기성 조건에서의 돼지 사체이다.
도 5b는 닭 사체의 부패 기간별 pH 변화를 나타낸 도이다. 여기에서, Po_S_A는 멸균 토양, 호기성 조건에서의 닭 사체이고, Po_U_A는 비멸균 토양, 호기성 조건에서의 닭 사체이며, Po_S_An은 멸균 토양, 혐기성 조건에서의 닭 사체이고, Po_U_An은 비멸균 토양, 혐기성 조건에서의 닭 사체이다.
도 6은 본 발명의 일실시예에 따른 가축 사체 부패 토양으로부터 수득한 미생물 분리 결과를 나타낸 도이다. 구체적으로, TSA(trypticase soy agar) 플레이트 상에서 배양한 미생물 균주 중 총 81개의 단일 콜로니를 선택 분리한 결과를 나타낸 도이다.
도 7은 본 발명의 일실시예에 따른 신규 분리 균주로부터 수득한 PCR 증폭 산물에 대해 HaeⅢ 및 HhaI 제한효소를 사용한 ARDRA(Amplified Ribosomal DNA Restriction Analysis) 수행 후, 시각화한 아가로즈 겔 전기영동 사진을 나타낸 도이다.
도 8은 본 발명의 일실시예에 따른 가축 사체 분해 촉진능을 갖는 신규 분리 균주 바실러스 슈도마이코이데스(Bacillus pseudomycoides) KS2의 계통 분석 결과를 나타낸 도이다.1 is a diagram schematically illustrating an experimental design for isolating, identifying, and selecting microorganisms for promoting decay of livestock carcasses according to an embodiment of the present invention.
Figure 2 is a diagram schematically showing the methodological flow for a livestock carcass decomposition experiment according to an embodiment of the present invention.
Figure 3a is a diagram showing the weight change for each decay period of the pig carcass. Here, Sw_S_A is a pig carcass in sterile soil and aerobic conditions, Sw_U_A is a pig carcass in non-sterile soil and aerobic conditions, Sw_S_An is a pig carcass in sterile soil and anaerobic conditions, and Sw_U_An is non-sterile soil, anaerobic It is a pig carcass under the condition.
Figure 3b is a diagram showing the weight change by decay period of chicken carcasses. Here, Po_S_A is a chicken carcass in sterile soil and aerobic conditions, Po_U_A is a chicken carcass in non-sterile soil and aerobic conditions, Po_S_An is a chicken carcass in sterile soil and anaerobic conditions, and Po_U_An is a chicken carcass in non-sterile soil and anaerobic conditions. It is a chicken carcass under the condition.
Figure 4a is a diagram showing the change in moisture content of pig carcasses for each decay period. Here, Sw_S_A is a pig carcass in sterile soil and aerobic conditions, Sw_U_A is a pig carcass in non-sterile soil and aerobic conditions, Sw_S_An is a pig carcass in sterile soil and anaerobic conditions, and Sw_U_An is non-sterile soil, anaerobic It is a pig carcass under the condition.
Figure 4b is a diagram showing the change in moisture content of chicken carcasses for each decay period. Here, Po_S_A is a chicken carcass in sterile soil and aerobic conditions, Po_U_A is a chicken carcass in non-sterile soil and aerobic conditions, Po_S_An is a chicken carcass in sterile soil and anaerobic conditions, and Po_U_An is a chicken carcass in non-sterile soil and anaerobic conditions. It is a chicken carcass under the condition.
Figure 5a is a diagram showing the pH change for each decay period of pig carcasses. Here, Sw_S_A is a pig carcass in sterile soil and aerobic conditions, Sw_U_A is a pig carcass in non-sterile soil and aerobic conditions, Sw_S_An is a pig carcass in sterile soil and anaerobic conditions, and Sw_U_An is non-sterile soil, anaerobic It is a pig carcass under the condition.
Figure 5b is a diagram showing the change in pH for each decay period of chicken carcasses. Here, Po_S_A is a chicken carcass in sterile soil and aerobic conditions, Po_U_A is a chicken carcass in non-sterile soil and aerobic conditions, Po_S_An is a chicken carcass in sterile soil and anaerobic conditions, and Po_U_An is a chicken carcass in non-sterile soil and anaerobic conditions. It is a chicken carcass under the condition.
Figure 6 is a diagram showing the result of separating microorganisms obtained from livestock carcass decaying soil according to an embodiment of the present invention. Specifically, it is a diagram showing the results of selective isolation of a total of 81 single colonies among microbial strains cultured on a trypticase soy agar (TSA) plate.
7 is an agarose gel electrophoresis image visualized after performing ARDRA (Amplified Ribosomal DNA Restriction Analysis) using HaeIII and HhaI restriction enzymes on the PCR amplification product obtained from the novel isolated strain according to an embodiment of the present invention. It is also
Figure 8 is a view showing the results of phylogenetic analysis of a novel isolated strain Bacillus pseudomycoides KS2 having the ability to promote decomposition of livestock carcasses according to an embodiment of the present invention.
본 발명은 바실러스 슈도마이코이데스(Bacillus pseudomycoides) KS2 균주를 포함하는 가축 사체 분해 촉진용 미생물 제제에 관한 것으로, 상세하게는, 수탁번호 KCTC 14192BP로 기탁된 바실러스 슈도마이코이데스 KS2 균주, 상기 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 가축 사체 분해 촉진용 미생물 제제, 및 상기 미생물 제제를 가축 사체 매몰지에 처리하는 단계를 포함하는 가축 사체 분해 촉진 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a microbial preparation for promoting decomposition of livestock carcasses, including Bacillus pseudomycoides KS2 strain, and in detail, Bacillus pseudomycoides KS2 strain deposited under accession number KCTC 14192BP, the strain or It relates to a microbial preparation for promoting decomposition of livestock carcasses containing the culture broth as an active ingredient, and a method for promoting decomposition of livestock carcasses comprising the step of treating the microbial preparation in a livestock carcass burial site.
하나의 양태로서, 본 발명은 가축 사체의 분해를 촉진하는, 수탁번호 KCTC 14192BP로 기탁된 바실러스 슈도마이코이데스(Bacillus pseudomycoides) KS2 균주를 제공한다.As one aspect, the present invention provides a Bacillus pseudomycoides KS2 strain deposited with accession number KCTC 14192BP, which promotes the decomposition of livestock carcasses.
본 발명의 가축 사체의 분해를 촉진하는 활성을 갖는 신규한 바실러스 슈도마이코이데스(Bacillus pseudomycoides) KS2 균주는 가축 사체 매몰지의 토양으로부터 분리될 수 있다.The novel Bacillus pseudomycoides KS2 strain having an activity to promote the decomposition of livestock carcasses of the present invention can be isolated from the soil of a livestock carcass burial site.
본 발명에 따른 바실러스 슈도마이코이데스 KS2 균주는 서열번호 1의 16S rDNA 염기서열을 포함하며, 한국생명공학연구원 생물자원센터에 2020년 5월 22일자로 수탁번호 KCTC14192BP로 기탁되었다.The Bacillus pseudomycoides KS2 strain according to the present invention contains the 16S rDNA nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1, and was deposited with the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology Biological Resource Center on May 22, 2020 under accession number KCTC14192BP.
상기 바실러스 슈도마이코이데스 KS2 균주는 그람양성이며, 통성혐기성균(faculative anaerobe)이다.The Bacillus pseudomycoides KS2 strain is Gram-positive and is a facultative anaerobe.
또한, 상기 바실러스 슈도마이코이데스 KS2 균주는 25℃ 내지 35℃, pH 6 내지 pH 8에서 생장이 가능하고, 닭 사체 및 돼지 사체의 분해를 촉진할 수 있다. 특히, 닭 사체에 대한 분해 촉진능이 우수하다.In addition, the Bacillus pseudomycoides KS2 strain can grow at 25 ° C to 35 ° C, pH 6 to
한편, 상기 균주는 닭 이외의 꿩, 오리, 칠면조 등의 가금류 사체 분해를 촉진하는데 적용가능하다.On the other hand, the strain can be applied to promote decomposition of poultry carcasses such as pheasants, ducks, and turkeys other than chickens.
본 발명의 균주에 의해 가축 사체 부패 정도를 반영하는 측정 항목인 수분 함량, pH 및 암모니아성-질소(ammonia-N)가 모두 증가하는 양상을 보임을 확인하였다. 특히, 닭 사체에 대한 분해 활성이 우수함을 확인하였다.It was confirmed that all of the water content, pH, and ammonia-N, which are measurement items reflecting the degree of decomposition of livestock carcasses, increased by the strain of the present invention. In particular, it was confirmed that the decomposition activity for chicken carcasses was excellent.
다른 하나의 양태로서, 본 발명은 바실러스 슈도마이코이데스(Bacillus pseudomycoides) KS2 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 가축 사체 분해 촉진용 미생물 제제를 제공한다.As another aspect, the present invention provides a microbial preparation for promoting decomposition of livestock carcasses, comprising Bacillus pseudomycoides KS2 strain or a culture thereof as an active ingredient.
본 발명의 "미생물 제제"는 미생물 자체를 직접 이용하거나 미생물을 포함한 제제를 이용하여 가축 사체를 효과적으로 분해하는데 쓰이는 생물 제제이다.The "microbial preparation" of the present invention is a biological preparation used to effectively decompose livestock carcasses by directly using microorganisms themselves or by using preparations containing microorganisms.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 미생물 제제는 가축 사체 분해를 촉진하는 바실러스 슈도마이코이데스 KS2 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the microbial preparation may include a Bacillus pseudomycoides KS2 strain or a culture medium thereof that promotes decomposition of livestock carcasses as an active ingredient.
본 발명에 있어서 배양액이란, 균주를 배양한 배지 내에 포함되어 있는 모든 물질을 포함하는 물질을 의미할 수 있으며, 예컨대 균주 배양의 결과물인 대사물 또는 분비물을 포함하는 물질 또는 그 파쇄물을 의미할 수 있고 균주 자체도 배양액 내에 포함되어 있을 수 있다. 또한 상기 배양액은 당업계에 통상적으로 이용되는 방법에 따라 배양할 수 있으며, 바람직하게는 TSA(trypticase soy agar) 또는 브로스(broth)를 이용하는 것이나, 이에 제한되지 않는다.In the present invention, the culture medium may mean a substance containing all substances contained in the culture medium in which the strain is cultured, for example, a substance containing metabolites or secretions resulting from strain culture, or a lysate thereof, The strain itself may also be included in the culture medium. In addition, the culture medium may be cultured according to a method commonly used in the art, preferably using TSA (trypticase soy agar) or broth, but is not limited thereto.
본 발명의 미생물 제제에는 상기 균주 또는 이의 배양액 이외에도 필요에 따라 상기 균주의 활성을 유지하기 위한 물질(예를 들어, 완충제 등), 다른 미생물의 오염을 방지하기 위한 물질(예를 들어, 항생제 등), 보관을 위한 보존제(예를 들어, 동결보관을 위한 글리세롤 등) 등 미생물 제제화에 필요한 물질이 추가로 포함될 수 있으며, 가축 사체의 부패 촉진 용도로 사용하는데 필요한 다른 물질들이 추가로 포함될 수 있다.In addition to the strain or its culture medium, the microbial preparation of the present invention includes, if necessary, substances for maintaining the activity of the strain (eg, buffers, etc.), substances for preventing contamination of other microorganisms (eg, antibiotics, etc.) , preservatives for storage (eg, glycerol for cryopreservation, etc.) may be additionally included, and other substances necessary for use for promoting decay of livestock carcasses may be additionally included.
본 발명의 미생물 제제는 분말 또는 액상 제형일 수 있다. 분말 제형의 경우 본 발명 균주의 균체 자체 혹은 증량제(extender) 등의 첨가제를 첨가하여 분말화한 것일 수 있으며, 액상 제형의 경우 본 발명 균주의 배양액 자체, 배양액을 용매로 희석한 희석액 또는 배양액 중 균체를 분리하여 다른 용매에 현탁한 현탁액일 수 있다.The microbial preparation of the present invention may be a powder or liquid formulation. In the case of a powder formulation, the cell body of the strain of the present invention itself or by adding additives such as an extender may be powdered. may be separated and suspended in another solvent.
상기 미생물 제제에는 본 발명의 균주가 1×107 CFU/㎖ 내지 1×109 CFU/㎖의 농도로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 1×108 CFU/㎖ 농도로 포함될 수 있다.The microbial preparation may include the strain of the present invention at a concentration of 1×10 7 CFU/ml to 1×10 9 CFU/ml, preferably at a concentration of 1×10 8 CFU/ml.
상기 미생물 제제는 동물 사체의 무게 100 중량부를 기준으로 0.1 내지 10 중량부로 처리될 수 있으며, 닭 사체 및 돼지 사체의 분해를 촉진할 수 있다. 특히, 닭 사체에 대한 분해 촉진능이 우수하다.The microbial agent may be treated in an amount of 0.1 to 10 parts by weight based on 100 parts by weight of animal carcasses, and may promote decomposition of chicken carcasses and pig carcasses. In particular, it has excellent decomposition promoting ability for chicken carcasses.
또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 미생물 제제를 가축 사체 매몰지에 처리하는 단계를 포함하는 가축 사체 분해 촉진 방법을 제공한다.As another aspect, the present invention provides a livestock carcass decomposition acceleration method comprising the step of treating the microbial agent in a livestock carcass burial site.
상기 미생물 제제는 전술한 바와 같으며, 상기 미생물 제제는 가축 사체 매몰지에 처리시 가축 사체의 무게 100 중량부를 기준으로 0.1 내지 10 중량부로 처리될 수 있다.The microbial agent is as described above, and the microbial agent may be treated in an amount of 0.1 to 10 parts by weight based on 100 parts by weight of the livestock carcass when treated in the livestock carcass burial site.
상기 미생물 제제에 포함된 바실러스 슈도마이코이데스 KS2 균주가 1×107 CFU/㎖ 내지 1×109 CFU/㎖ 농도로 처리되는 것일 수 있으며, 바람직하게는 1×108 CFU/㎖ 농도로 처리되는 것일 수 있다.Bacillus pseudomycoides KS2 strain included in the microbial preparation may be treated at a concentration of 1 × 10 7 CFU / ㎖ to 1 × 10 9 CFU / ㎖, preferably treated at a concentration of 1 × 10 8 CFU / ㎖ it may be
상기 미생물 제제는 닭 사체 및 돼지 사체의 분해를 촉진할 수 있으며, 특히, 닭 사체에 대한 분해 촉진능이 우수하다. 한편, 상기 미생물 제제는 닭 이외의 꿩, 오리, 칠면조 등의 가금류 사체 분해를 촉진하는데 적용가능하다.The microbial preparation can promote decomposition of chicken carcasses and pig carcasses, and in particular, has excellent ability to promote decomposition of chicken carcasses. On the other hand, the microbial preparation is applicable to promote the decomposition of poultry carcasses other than chickens, such as pheasants, ducks, and turkeys.
이하, 실시예를 통하여 본 발명의 구성 및 효과를 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the configuration and effects of the present invention will be described in more detail through examples. These examples are only for illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not limited by these examples.
실시예Example 1: 가축 사체의 부패 촉진을 위한 미생물의 분리 동정 및 선발 1: Isolation, identification and selection of microorganisms to promote the decay of livestock carcasses
실시예 1-1: 가축 사체 준비Example 1-1: Cattle carcass preparation
순천 대학교의 동물 보호 및 사용 지침에 따라 연구를 수행하였다. 돼지와 가금류(닭)는 상업적으로 구입하였다. 각 동물의 사체에서 뼈를 제외한 장내 기관, 혈액, 근육 및 피부를 모두 이용하여 실험에 사용하였다.The study was conducted in accordance with the Animal Care and Use Guidelines of Sunchon National University. Pigs and poultry (chickens) were purchased commercially. All of the intestinal organs, blood, muscle, and skin except bones were used in the experiment.
실시예 1-2: 토양 준비Example 1-2: Soil preparation
순천 대학교 부속농장에서 국내 매몰지 규정과 동일한 방식으로 농장의 토양 표본을 채집하였다. 토양은 온전한 미생물 군집이 포함된 토양, 즉, 살균되지 않은 토양과 멸균된 토양으로 상기 두 가지 방법으로 나누어 이용하였다. 토양 샘플은 2 ㎜ 크기의 체로 이물질 등을 제거하였다.Soil samples from the farm attached to Sunchon University were collected in the same way as the domestic burial site regulations. Soil was used by dividing into soil containing intact microbial community, that is, unsterilized soil and sterilized soil in the above two methods. Soil samples were removed with a 2 mm size sieve.
멸균된 토양을 준비하기 위해 토양 시료는 121℃, 15 psi에서 3회 반복으로 고압멸균기에서 멸균하여 미생물, 균류 및 그 포자를 파괴하였다(Lauber et.al., 2014).To prepare sterilized soil, soil samples were sterilized in an autoclave at 121 ° C and 15 psi three times to destroy microorganisms, fungi and their spores (Lauber et.al. , 2014).
실시예 1-3: 실험 설계Example 1-3: Experimental design
가축 사체의 부패 촉진을 위한 미생물을 분리 동정 및 선발하고자, 비멸균 토양(unsterilized soil) 또는 멸균 토양(sterilized soil)에 돼지 사체(swine carcass) 또는 닭 사체(poultry carcass)를 매몰하고, 호기성(aerobic) 또는 혐기성(anaerobic) 조건 하에서 동물 사체를 분해하였다(도 1).In order to isolate, identify and select microorganisms for promoting decay of livestock carcasses, swine carcass or chicken carcass is buried in unsterilized soil or sterilized soil, and aerobic ) or anaerobic (anaerobic) conditions were decomposed animal carcasses (Fig. 1).
실시예 1-4: 인비트로(Example 1-4: In vitro ( in vitroin vitro ) 상에서의 사체 분해 실험) cadaver decomposition experiment
인비트로(in vitro) 상에서의 가축 사체 분해 실험은 비멸균 또는 멸균된 토양에 돼지와 닭 사체를 각각 매몰하고, 혐기성 또는 호기성 조건 하에서 인큐베이터를 이용하여 혐기 배양 또는 호기 배양을 수행하였다(도 2). 이때, 실험에 사용된 용기(반응기)의 부피 용량은 약 470 ㎖이었다(Han et. al., 2018). 각 용기에 대해 사체와 토양을 혼합한 혼합시료 약 150 g을 분배하였으며, 이때 혼합시료는 토양 대비 가축 사체를 3:1의 비율로 하였다. 모든 처리구는 철저하게 균질화하여 분배하였다. 한편, 혐기성 조건은 용기의 모든 부분을 밀폐하고 CO2 가스가 5% 농도로 일정하게 유지되도록 유동시켰으며, 호기성 조건은 용기의 뚜껑에 구멍을 내어 공기가 구멍을 통과하도록 하였다. 이때, 모든 처리구의 배양 온도는 25℃로 설정하였다. 실험 기간은 총 60일 동안 실시되었으며 0, 5, 10, 20, 30, 40 및 60일 동안 관찰되었다. 모든 처리구는 3회 반복 실시하였다.In the in vitro ( in vitro ) livestock carcass decomposition experiment, pig and chicken carcasses were buried in non-sterilized or sterilized soil, respectively, and anaerobic or aerobic culture was performed using an incubator under anaerobic or aerobic conditions (FIG. 2) . At this time, the volume capacity of the container (reactor) used in the experiment was about 470 ml (Han et. al. , 2018). For each container, about 150 g of a mixed sample mixed with carcasses and soil was distributed. All treatments were thoroughly homogenized and distributed. On the other hand, the anaerobic condition was to seal all parts of the container and flow so that the CO 2 gas was constantly maintained at a concentration of 5%, and the aerobic condition was to make a hole in the lid of the container to allow air to pass through the hole. At this time, the culture temperature of all treatments was set to 25 ℃. The experiment period was conducted for a total of 60 days and observed for 0, 5, 10, 20, 30, 40 and 60 days. All treatments were repeated 3 times.
한편, 토양 pH, 수분 및 가스 성분 변화를 확인하기 위한 화학적 분석 및 미생물 분리 동정을 위한 생물학적 분석에 사용하고자, 실험 기간별로 각 용기에서 토양 시료를 채취하였다. 상기 수집된 토양 시료는 각각 4℃ 또는 -20℃에서 저장하였으며, 시퀀싱 분석을 위한 토양 시료는 -80℃에서 보관하였다.On the other hand, soil samples were taken from each container for each experimental period to be used for chemical analysis to confirm changes in soil pH, moisture and gas components, and biological analysis to identify microbial isolation. The collected soil samples were stored at 4°C or -20°C, respectively, and soil samples for sequencing analysis were stored at -80°C.
실시예Example 1-5: 일반성분 분석 1-5: General component analysis
가축 사체 처리구의 설정된 부패 기간 동안 사체 무게의 변화, 수분 함량, 토양 pH 및 가스 함량을 분석하였다. 이때, 각 사체 처리구의 무게 변화는 초기 및 처리 기간 단위로 처리구별 무게를 측정하였다. 토양 수분 함량은 표준 방법 AS 1289 B1.1에 따라 측정하였다. 토양 pH는 토양 1 g을 멸균 증류수 5 ㎖와 혼합한 후 1분 동안 볼텍싱(vortexing)한 후 평가하였다. pH를 측정하기 전에 큰 입자를 침강시켰으며, 3회 반복 분석을 통한 평균값으로 각 토양의 pH 결과를 평가하였다(Lauber et.al., 2014). 저장 기간 중 황화수소(hydrogen sulfide), 메틸메르캅탄(methyl mercaptan), 디메틸 설파이드(dimethyl sulfide) 및 암모니아(ammonia)와 같은 악취 가스 함량은 센서 가스 크로마토그래프 장비를 사용하여 측정하였으며, 암모니아-질소 농도는 Chaney & Marbach (1962)가 개발한 비색법에 따라 분석하였다.Changes in carcass weight, moisture content, soil pH, and gas content were analyzed during the set decay period of the treated cattle carcasses. At this time, the weight change of each cadaveric treatment group was measured for each treatment group at the initial stage and during the treatment period. Soil moisture content was determined according to standard method AS 1289 B1.1. Soil pH was evaluated after mixing 1 g of soil with 5 ml of sterile distilled water and vortexing for 1 minute. Large particles were sedimented before measuring the pH, and the pH result of each soil was evaluated as the average value through repeated analysis three times (Lauber et.al. , 2014). During the storage period, the content of odorous gases such as hydrogen sulfide, methyl mercaptan, dimethyl sulfide and ammonia was measured using a sensor gas chromatograph, and the ammonia-nitrogen concentration was Analysis was performed according to the colorimetric method developed by Chaney & Marbach (1962).
축종별By livestock type 가축 부패 기간별 무게 변화 Change in weight by decay period of livestock
가축 사체 처리구별 무게 변화를 0, 5, 10, 20, 30, 40 및 60일 간격으로 분석하였다. 사체 처리 기간 동안, 돼지의 경우 모든 처리구가 60일에 동일하게 무게가 감소하였다(도 3a). 닭의 경우 60일 동안 모든 처리구에서 무게가 감소하였지만, 특히 비멸균 토양 및 호기성 처리구가 가장 크게 감소하였다(도 3b).Changes in weight by treatment group of livestock carcasses were analyzed at intervals of 0, 5, 10, 20, 30, 40, and 60 days. During the carcass treatment period, in the case of pigs, all treatment groups lost weight equally at 60 days (Fig. 3a). In the case of chickens, weight decreased in all treatment groups for 60 days, but in particular, non-sterilized soil and aerobic treatment showed the greatest decrease (FIG. 3b).
축종별By livestock type 가축 부패 기간별 수분 함량 변화 Moisture content change by livestock decay period
가축 사체 처리구별 수분 함량의 변화를 0, 5, 10, 20, 30, 40 및 60일 동안 분석하였다. 축종별 및 기간별 수분 함량의 차이가 있었지만, 60일 기간 동안 돼지 사체 및 닭 사체의 모든 처리구에서 수분 함량이 감소하였다. 특히, 닭 처리구에서 5일째 가장 적은 수분 함량을 보였고, 이후 증가하는 경향을 보였으나 40일 이후 수분 함량이 재감소하는 것으로 나타났다(도 4a 및 도 4b).Changes in water content for each treatment group of livestock carcasses were analyzed for 0, 5, 10, 20, 30, 40 and 60 days. Although there were differences in moisture content by livestock species and period, moisture content decreased in all treatment groups of pig carcasses and chicken carcasses over a period of 60 days. In particular, the chicken treatment group showed the lowest water content on the 5th day, and then showed a tendency to increase, but the water content decreased again after 40 days (FIGS. 4a and 4b).
축종별By livestock type 가축 부패 기간별 토양 pH 변화 Soil pH change by livestock decay period
가축 사체 처리구별 토양 pH 변화를 0, 5, 10, 20, 30, 40 및 60일 동안 분석하였다. 전반적으로 실험 개시후 60일 동안 토양 pH는 증가하였다. 0일에서 30일 동안 토양 pH는 돼지 사체 및 닭 사체의 모든 처리구에서 급격하게 증가하였으며, 이후 큰 변화는 없었다. 특히, 닭 처리구가 돼지 처리구보다 pH가 높게 변화함을 확인하였다(도 5a 및 도 5b).Changes in soil pH for each treatment area of livestock carcasses were analyzed for 0, 5, 10, 20, 30, 40 and 60 days. Overall, soil pH increased during the first 60 days of the experiment. From
축종별By livestock type 가축 부패 기간별 악취 가스 함량 분석 Analysis of odorous gas content by livestock decay period
가축 사체 처리구별 초기 악취 가스 함량 분석은 5, 10, 20 및 30일 동안 분석하였다. 모든 사체 처리구에서 메틸메르캅탄과 암모니아가 검출되었다.The initial malodorous gas content analysis for each livestock carcass treatment area was analyzed for 5, 10, 20, and 30 days. Methyl mercaptan and ammonia were detected in all cadaveric treatments.
구체적으로, 메틸메르캅탄은 10일까지 모든 사체 처리구에서 검출이 되었지만, 20일 이후에는 혐기성 조건에서의 돼지 사체 처리구, 닭 사체 처리구 모두에서 검출되었다. 반면, 30일 이후에는 모든 처리구에서 검출되지 않았다. Specifically, methyl mercaptan was detected in all carcass treatment groups until the 10th day, but was detected in both the pig carcass treatment group and the chicken carcass treatment group under anaerobic conditions after the 20th day. On the other hand, it was not detected in all treatment groups after 30 days.
암모니아는 30일까지 모든 처리구에서 검출이 되었으며 이중 멸균 토양, 호기성 조건에서의 닭 사체(Po_S_A) 처리구에서만 지속적으로 증가하였다. Ammonia was detected in all treatment groups up to 30 days, and increased continuously only in the chicken carcass (Po_S_A) treatment group under double sterilized soil and aerobic conditions.
디메틸 설파이드는 20일째에 멸균 토양, 혐기성 조건에서의 돼지 사체(Sw_S_An), 비멸균 토양, 혐기성 조건에서의 닭 사체(Po_U_An)에서만 검출되었으며, 30일째에는 비멸균 토양, 혐기성 조건에서의 돼지 사체(Sw_U_An)와 멸균 토양, 혐기성 조건에서의 닭 사체(Po_S_An) 처리구에서도 검출되었다. Dimethyl sulfide was only detected in pig carcasses under sterile soil and anaerobic conditions (Sw_S_An) and chicken carcasses under non-sterile soil and anaerobic conditions (Po_U_An) on
황화수소는 30일째 멸균 토양, 혐기성 조건에서의 닭 사체(Po_S_An) 처리구에서만 3280.25 ppm이 검출되었으며, 다른 처리구에서는 검출되지 않았다.On
하기 표 1에 사체 부패 기간 동안의 가스 생성량을 정리하여 나타내었다. 여기서, 단위(unit)는 ppm이다.Table 1 below summarizes the amount of gas produced during the decay period of the carcass. Here, the unit is ppm.
메르캅탄methyl
* Sw_S_A: 멸균 토양, 호기성 조건에서의 돼지 사체* Sw_S_A: Pig carcasses in sterile soil, aerobic conditions
* Sw_U_A: 비멸균 토양, 호기성 조건에서의 돼지 사체* Sw_U_A: Pig carcasses in non-sterile soil, aerobic conditions
* Sw_S_An: 멸균 토양, 혐기성 조건에서의 돼지 사체* Sw_S_An: Pig carcasses in sterile soil, anaerobic conditions
* Sw_U_An: 비멸균 토양, 혐기성 조건에서의 돼지 사체* Sw_U_An: Pig carcasses in non-sterile soil, anaerobic conditions
* Po_S_A: 멸균 토양, 호기성 조건에서의 닭 사체* Po_S_A: Chicken carcasses in sterile soil, aerobic conditions
* Po_U_A: 비멸균 토양, 호기성 조건에서의 닭 사체* Po_U_A: Chicken carcasses in non-sterile soil, aerobic conditions
* Po_S_An: 멸균 토양, 혐기성 조건에서의 닭 사체* Po_S_An: Chicken carcasses in sterile soil, anaerobic conditions
* Po_U_An: 비멸균 토양, 혐기성 조건에서의 닭 사체* Po_U_An: Chicken carcasses in non-sterile soil, anaerobic conditions
실시예Example 1-6: 미생물 군집 분석 1-6: Microbial community analysis
사체가 매몰된 토양 샘플의 미생물 군집을 탐구하는데 Miseq Illumina 시퀀싱 기술을 사용하였다. 이때, 부패 기간별 0, 5, 10, 30 및 60일째의 각 토양 샘플을 미생물 군집 탐구에 이용하였다. 토양 내의 미생물 분석을 위해 FastDNA SPIN 키트(MP Biomedicals, Santa Ana, CA, USA)를 사용하여 각 사체 처리구의 DNA를 추출하였다. 이때, DNA는 3 반복(triplicate) 추출하였으며, 추출된 DNA 생성물을 혼합한 후 Optizen ™ NanoQ 분광 광도계(Optizen, 대전, 한국)를 사용하여 각 시료의 DNA 농도를 측정하였다. 이후, 메타게놈 DNA 샘플을 MiSeq 고속대량 시퀀싱(MiSeq high-throughput sequencing) 분석을 위해 마크로젠(Macrogen)에 의뢰하여 분석하였다.Miseq Illumina sequencing technology was used to explore the microbial communities of the soil samples in which the carcasses were buried. At this time, each soil sample at 0, 5, 10, 30 and 60 days for each decay period was used for microbial community exploration. For microbial analysis in the soil, DNA was extracted from each carcass treatment group using the FastDNA SPIN kit (MP Biomedicals, Santa Ana, CA, USA). At this time, the DNA was extracted three times, and after mixing the extracted DNA products, the DNA concentration of each sample was measured using an Optizen ™ NanoQ spectrophotometer (Optizen, Daejeon, Korea). Thereafter, the metagenomic DNA samples were analyzed by requesting to Macrogen for MiSeq high-throughput sequencing analysis.
실시예Example 1-7: 가축 사체의 부패 촉진과 관련된 미생물의 분리 동정 및 선발 1-7: Isolation, identification and selection of microorganisms related to the promotion of decomposition of livestock carcasses
가축 사체의 부패 촉진과 관련된 미생물을 분리 동정 및 선발하고 이의 특성을 규명하고자, 토양 시료를 수집하고 토양 시료 1 g을 0.85% 살균 식염수 용액 9 ㎖과 함께 균질화시킨 후 1분 동안 수동으로 교반하여 혼합하였다. 이후, 고농도의 토양 내 미생물을 분리 및 동정하기 위해 상기 토양 시료와 살균 식염수 용액 혼합액 1 ㎖을 9 ㎖의 멸균 식염수가 들어있는 시험관에서 최대 10-6까지 10배 연속 희석하였다. 그런 다음 100 ㎕를 무균적으로 TSA(trypticase soy agar) 플레이트 상에 스크래핑(scraping)하여 호기성 또는 혐기성 조건하에서 1-3일 동안 30℃에서 배양하였다. 배양 후, 순수 배양을 위해 각 단일 콜로니(single colony) 총 81개를 추출하였다(도 6). 상기 단일 콜로니로 순수 분리된 미생물을 액상 배양 후 균주 분석을 위해 DNA를 추출하였다. 이때, DNA는 5% Chelex 용액 및 boiling 방법을 사용하여 추출하였다. DNA 추출 후, Optizen ™ NanoQ 분광 광도계(Optizen, Daejeon, Korea)를 이용하여 각 균주의 DNA 농도를 측정하였다. DNA 샘플은 16S rDNA 중합효소 연쇄 반응 분석 수행시까지 -20℃에서 보관하였다. 16S rDNA 유전자의 증폭은 27F(5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3'; 서열번호 2) 및 1492R(5'-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3'; 서열번호 3) 프라이머를 사용하여 수행하였다(Lane, 1991). 상기 PCR 증폭 산물은 HaeⅢ 및 HhaI 제한효소를 이용한 ARDRA(Amplified Ribosomal DNA Restriction Analysis)에 적용한 후, 아가로즈 겔에서 시각화하였다(도 7). 겔에서 다른 밴드 패턴을 보여주는 9종의 샘플을 선택하여 시퀀싱을 위해 마크로젠에 분석 의뢰하였다. 분리한 총 9종의 신규 균주에서 얻은 염기서열을 BLAST(Basic Local Alignment Search Tool) 또는 EzBioCloud 데이터베이스를 사용하여 GenBank에 개시되어 있는 미생물 균주의 16S rDNA 염기서열과 추가적으로 비교 분석하였다. 작성된 계통 분석 결과는 도 8에 나타내었다.To isolate, identify, select, and characterize microorganisms associated with accelerated decay of livestock carcasses, soil samples were collected, 1 g of the soil sample was homogenized with 9 ml of 0.85% sterile saline solution, and mixed by manual agitation for 1 minute. did Thereafter, in order to isolate and identify microorganisms in the high-concentration soil, 1 ml of a mixture of the soil sample and sterile saline solution was serially diluted 10-fold up to a maximum of 10-6 in a test tube containing 9 ml of sterile saline solution. Then, 100 μl was aseptically scraped onto a trypticase soy agar (TSA) plate and cultured at 30° C. for 1-3 days under aerobic or anaerobic conditions. After culturing, a total of 81 each single colony was extracted for pure culture (FIG. 6). DNA was extracted for strain analysis after liquid phase culture of the microorganism isolated as a single colony. At this time, DNA was extracted using a 5% Chelex solution and boiling method. After DNA extraction, the DNA concentration of each strain was measured using an Optizen ™ NanoQ spectrophotometer (Optizen, Daejeon, Korea). DNA samples were stored at -20°C until 16S rDNA polymerase chain reaction analysis was performed. Amplification of the 16S rDNA gene was performed using 27F (5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3'; SEQ ID NO: 2) and 1492R (5'-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3'; SEQ ID NO: 3) primers (Lane, 1991). The PCR amplified product was visualized on an agarose gel after applying ARDRA (Amplified Ribosomal DNA Restriction Analysis) using HaeIII and HhaI restriction enzymes (FIG. 7). Nine samples showing different band patterns in the gel were selected and submitted to Macrogen for sequencing. Sequences obtained from a total of 9 new strains isolated were further compared and analyzed with 16S rDNA sequences of microbial strains disclosed in GenBank using BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) or EzBioCloud database. The generated phylogenetic analysis results are shown in FIG. 8 .
상기 분석한 신규 균주 중 가축 사체 부패에 유용한 미생물 1종을 선정하였다. 상기 선정한 신규 균주를 바실러스 슈도마이코이데스(Bacillus pseudomycoides) KS2 균주로 명명하고, 2020년 5월 22일자로 한국생명공학연구원에 기탁번호 KCTC14192BP로 기탁하였다. 상기 균주의 16S rDNA 염기서열(1450 bp)은 서열번호 1과 같으며, 이는 Bacillus pseudomycoides DSM 12442와 99.93%의 상동성을 나타내었다.Among the new strains analyzed above, one microorganism useful for decomposing livestock carcasses was selected. The selected new strain was named Bacillus pseudomycoides KS2 strain, and deposited with the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology on May 22, 2020 under the accession number KCTC14192BP. The 16S rDNA base sequence (1450 bp) of the strain is the same as SEQ ID NO: 1, which is Bacillus pseudomycoides It showed 99.93% homology with DSM 12442.
실시예Example 2: 2: 바실러스bacillus 슈도마이코이데스Pseudomycoides (( Bacillus Bacillus pseudomycoidespseudomycoides ) KS2 신규 미생물 균주의 특성 규명) Characterization of KS2 novel microbial strains
선정된 바실러스 슈도마이코이데스(Bacillus pseudomycoides) KS2 균주는 호기성(aerobic) 조건하의 가금류 사체, 상세하게는 닭 사체가 부패된 토양으로부터 분리되었다. 상기 균주는 통성혐기성균(faculative anaerobe)이며, 그람 양성균(gram-positive)인 것으로 확인되었다. 상기 균주는 30℃ 내지 35℃에서 TSA(trypticase soy agar) 또는 브로스(broth)에서 배양 가능하다. The selected Bacillus pseudomycoides KS2 strain was isolated from soil in which poultry carcasses, specifically chicken carcasses, were decayed under aerobic conditions. The strain was confirmed to be a facultative anaerobe and gram-positive. The strain can be cultured in TSA (trypticase soy agar) or broth at 30°C to 35°C.
상기 선정한 바실러스 슈도마이코이데스 KS2 균주가 사체 분해에 미생물 제제 접종물로서 활용 가능한지 그 특성을 규명하고자, 사체의 부패 정도를 반영하는 측정 항목으로서 수분 함량, pH 및 암모니아성-질소(ammonia-N)에 대한 바실러스 슈도마이코이데스 KS2 균주의 영향을 사체 분해 동안 측정하였다.In order to characterize whether the selected Bacillus pseudomycoides KS2 strain can be used as a microbial inoculum for carcass decomposition, water content, pH and ammonia-N as measurement items reflecting the degree of decay of the carcass The effect of the Bacillus pseudomycoides KS2 strain on was measured during cadaveric decomposition.
실시예Example 2-1: 사체 분해를 위한 2-1: for carcass decomposition 실험실형laboratory type 사체 dead body 매몰지burial ground 셋업set up
닭 고기와 돼지 고기는 상업적으로 구입하였다. 사체를 매몰시키고 실험에 사용하였다. 사체의 분해는 혐기성 조건 하에서 수행되었다. 이때, 연구에 사용된 멸균 용기(반응기)의 부피 용량은 약 470 ㎖이었다. 각 용기에 대해, 약 100 g의 고기를 각 용기에 두었다. 1%의 바실러스 슈도마이코이데스 KS2 균주 접종물(1×108 CFU/㎖)을 고기 샘플과 혼합하였다. 혐기성 조건을 생성하기 위해, 용기의 모든 부분을 밀봉하고 5% 유동 CO2 및 25℃로 설정된 온도를 갖는 인큐베이터에 두었다. 실험은 총 30일 동안 수행되었고 0, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20 및 30일에 샘플을 채취하였다. 모든 실험은 3회 반복 수행하였으며, 각각의 용기로부터 수집된 샘플은 분석시까지 -20℃에 보관하였다.Chicken and pork were purchased commercially. The corpse was buried and used in the experiment. Decomposition of carcasses was performed under anaerobic conditions. At this time, the volume capacity of the sterile container (reactor) used in the study was about 470 ml. For each container, approximately 100 g of meat was placed in each container. A 1% Bacillus pseudomycoides KS2 strain inoculum (1×10 8 CFU/ml) was mixed with the meat samples. To create anaerobic conditions, all parts of the vessel were sealed and placed in an incubator with 5% flowing CO 2 and a temperature set at 25°C. The experiment was conducted for a total of 30 days and samples were taken on
실시예Example 2-2: 화학적 분석 2-2: Chemical analysis
수분 함량, 토양 pH 및 암모니아성-질소(ammonia-N)를 분석하였다. 토양 pH는 1 g의 토양을 5 ㎖의 멸균 증류수와 혼합한 다음 1분 동안 볼텍싱하여 측정하였다. pH를 측정하기 전에 큰 입자를 침강시켰다. 각 토양에 대한 pH를 측정하기 위해 3회 반복 실험의 평균이 사용되었다(Lauber et.al., 2014). 토양 수분 함량은 표준 방법 AS 1289 B1.1에 따라 추산되었다. 암모니아성 질소는 Chaney & Marbach (1962)의 방법에 따라 추산되었다.Moisture content, soil pH and ammonia-N were analyzed. Soil pH was measured by mixing 1 g of soil with 5 ml of sterile distilled water and then vortexing for 1 minute. Large particles were allowed to settle before measuring the pH. The average of three replicates was used to determine the pH for each soil (Lauber et.al. , 2014). Soil water content was estimated according to standard method AS 1289 B1.1. Ammonia nitrogen was estimated according to the method of Chaney & Marbach (1962).
결과result
하기 표 2 및 표 3에 나타낸 바와 같이, 셋업된 매몰지로부터 수집된 샘플의 수분 함량은 다양한 결과를 나타내었으나, 관찰 기간 말에는 샘플의 수분 함량이 증가하였다. 특히 닭 사체에 1% 바실러스 슈도마이코이데스 KS2를 처리하지 않은 대조군에 비해 1% 바실러스 슈도마이코이데스 KS2를 처리한 시험군의 수분 함량이 더 높은 것으로 확인되었다.As shown in Tables 2 and 3 below, the moisture content of the samples collected from the set-up burial sites showed various results, but at the end of the observation period, the moisture content of the samples increased. In particular, it was confirmed that the water content of the test group treated with 1% Bacillus pseudomycoides KS2 was higher than that of the control group in which chicken carcasses were not treated with 1% Bacillus pseudomycoides KS2.
pH는 30일까지 분해가 진행됨에 따라 그 값이 증가하였다. 바실러스 슈도마이코이데스 KS2가 처리된 닭 사체 및 돼지 사체 매몰지로부터의 토양 샘플 pH 값은 각각 6.09~7.80 및 6.07~6.91 범위였다. 이는 분해 중에 화학적 변화가 발생했음을 나타내었다.The pH value increased as degradation progressed until
암모니아성-질소(NH3-N)도 분해 과정이 진행됨에 따라 특히 닭 사체 매몰지로부터 수집된 샘플에서 증가하는 양상을 보였다.Ammonia-nitrogen (NH 3 -N) also increased as the decomposition process progressed, especially in samples collected from chicken carcass burial sites.
하기 표 2 및 표 3에 각각 돼지 사체 및 닭 사체 분해 동안 수분, pH 및 암모니아성-질소에 있어서 미생물 접종물, 즉 바실러스 슈도마이코이데스(Bacillus pseudomycoides) KS2의 영향을 정리하여 나타내었다.Table 2 and Table 3 summarize the effects of the microbial inoculum, that is, Bacillus pseudomycoides KS2, on moisture, pH and ammonia-nitrogen during decomposition of pig carcasses and chicken carcasses, respectively.
결과적으로, 수분, pH 및 암모니아성-질소와 같은 토양성분 변화 분석을 통해 바실러스 슈도마이코이데스(Bacillus pseudomycoides) KS2 균주가 닭 사체 및 돼지 사체 부패, 특히 닭 사체 부패 촉진에 영향을 미침을 알 수 있었다.As a result, through the analysis of changes in soil components such as moisture, pH and ammonia-nitrogen, Bacillus pseudomycoides KS2 strain has an effect on decomposition of chicken carcasses and pig carcasses, especially chicken carcasses. there was.
(㎎/dL)NH 3 -N
(mg/dL)
1% B. pseudomycoides
(1×108 CFU/㎖)Pig carcass +
1% B. pseudomycoides
(1×10 8 CFU/ml)
(㎎/dL)NH 3 -N
(mg/dL)
(㎎/dL)NH 3 -N
(mg/dL)
1% B. pseudomycoides
(1×108 CFU/㎖)Chicken carcass +
1% B. pseudomycoides
(1×10 8 CFU/ml)
(㎎/dL)NH 3 -N
(mg/dL)
<110> INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION OF SUNCHON NATIONAL UNIVERSITY <120> Microbial agents for promoting the decomposition of livestock carcasses including the Bacillus pseudomycoides KS2 strain <130> 20200630 <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1450 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Bacillus pseudomycoides KS2 <400> 1 ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgagc gaatggatta agagcttgct cttatgaagt 60 tagcggcgga cgggtgagta acacgtgggt aacctgccca taagactggg ataactccgg 120 gaaaccgggg ctaataccgg ataacatttt gcaccgcatg gtgcgaaatt caaaggcggc 180 ttcggctgtc acttatggat ggacccgcgt cgcattagct agttggtgag gtaacggctc 240 accaaggcaa cgatgcgtag ccgacctgag agggtgatcg gccacactgg gactgagaca 300 cggcccagac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc cgcaatggac gaaagtctga 360 cggagcaacg ccgcgtgagt gatgaaggct ttcgggtcgt aaaactctgt tgttagggaa 420 gaacaagtgc tagttgaata agctggcacc ttgacggtac ctaaccagaa agccacggct 480 aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt aggtggcaag cgttatccgg aattattggg 540 cgtaaagcgc gcgcaggtgg tttcttaagt ctgatgtgaa agcccacggc tcaaccgtgg 600 agggtcattg gaaactggga gacttgagtg cagaagagga aagtggaatt ccatgtgtag 660 cggtgaaatg cgtagagata tggaggaaca ccagtggcga aggcgacttt ctggtctgta 720 actgacactg aagcgcgaaa gcgtggggag caaacaggat tagataccct ggtagtccac 780 gccgtaaacg atgagtgcta agtgttagag ggtttccgcc ctttagtgct gaagttaacg 840 cattaagcac tccgcctggg gagtacggcc gcaaggctga aactcaaagg aattgacggg 900 ggcccgcaca agcggtggag catgtggttt aattcgaagc aacgcgaaga accttaccag 960 gtcttgacat cctctgacaa ccctagagat agggcttccc cttcgggggc agagtgacag 1020 gtggtgcatg gttgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc 1080 gcaacccttg atcttagttg ccatcattaa gttgggcact ctaaggtgac tgccggtgac 1140 aaaccggagg aaggtgggga tgacgtcaaa tcatcatgcc ccttatgacc tgggctacac 1200 acgtgctaca atggacggta caaagagctg caagaccgcg aggtggagct aatctcataa 1260 aaccgttctc agttcggatt gtaggctgca actcgcctac atgaagctgg aatcgctagt 1320 aatcgcggat cagcatgccg cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca 1380 caccacgaga gtttgtaaca cccgaagtcg gtggggtaac ctttttggag ccagccgcct 1440 aaggtgggac 1450 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 27F <400> 2 agagtttgat cmtggctcag 20 <210> 3 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 1492R <400> 3 tacggytacc ttgttacgac tt 22 <110> INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION OF SUNCHON NATIONAL UNIVERSITY <120> Microbial agents for promoting the decomposition of livestock carcasses including the Bacillus pseudomycoides KS2 strain <130> 20200630 <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1450 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> Bacillus pseudomycoides KS2 <400> 1 ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgagc gaatggatta agagcttgct cttatgaagt 60 tagcggcgga cgggtgagta acacgtgggt aacctgccca taagactggg ataactccgg 120 gaaaccgggg ctaataccgg ataacatttt gcaccgcatg gtgcgaaatt caaaggcggc 180 ttcggctgtc acttatggat ggacccgcgt cgcattagct agttggtgag gtaacggctc 240 accaaggcaa cgatgcgtag ccgacctgag agggtgatcg gccacactgg gactgagaca 300 cggcccagac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc cgcaatggac gaaagtctga 360 cggagcaacg ccgcgtgagt gatgaaggct ttcgggtcgt aaaactctgt tgttagggaa 420 gaacaagtgc tagttgaata agctggcacc ttgacggtac ctaaccagaa agccacggct 480 aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt aggtggcaag cgttatccgg aattattggg 540 cgtaaagcgc gcgcaggtgg tttcttaagt ctgatgtgaa agcccacggc tcaaccgtgg 600 agggtcattg gaaactggga gacttgagtg cagaagagga aagtggaatt ccatgtgtag 660 cggtgaaatg cgtagagata tggaggaaca ccagtggcga aggcgacttt ctggtctgta 720 actgacactg aagcgcgaaa gcgtggggag caaacaggat tagataccct ggtagtccac 780 gccgtaaacg atgagtgcta agtgttagag ggtttccgcc ctttagtgct gaagttaacg 840 cattaagcac tccgcctggg gagtacggcc gcaaggctga aactcaaagg aattgacggg 900 ggcccgcaca agcggtggag catgtggttt aattcgaagc aacgcgaaga accttaccag 960 gtcttgacat cctctgacaa ccctagagat agggcttccc cttcgggggc agagtgacag 1020 gtggtgcatg gttgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc 1080 gcaacccttg atcttagttg ccatcattaa gttgggcact ctaaggtgac tgccggtgac 1140 aaaccggagg aaggtgggga tgacgtcaaa tcatcatgcc ccttatgacc tgggctacac 1200 acgtgctaca atggacggta caaagagctg caagaccgcg aggtggagct aatctcataa 1260 aaccgttctc agttcggatt gtaggctgca actcgcctac atgaagctgg aatcgctagt 1320 aatcgcggat cagcatgccg cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca 1380 caccacgaga gtttgtaaca cccgaagtcg gtggggtaac ctttttggag ccagccgcct 1440 aaggtgggac 1450 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> 27F <400> 2 agagtttgat cmtggctcag 20 <210> 3 <211> 22 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> 1492R <400> 3 tacggytacc ttgttacgac tt 22
Claims (11)
Bacillus pseudomycoides KS2 strain deposited under the accession number KCTC14192BP, which promotes the decomposition of livestock carcasses.
The strain according to claim 1, wherein the livestock carcass is a chicken carcass or a pig carcass.
According to claim 1, wherein the strain is 25 ℃ to 35 ℃, and can grow in environmental conditions of pH 6 to pH 8, facultative anaerobic bacteria (faculative anaerobe), the strain.
The strain according to claim 1, wherein the strain comprises the 16S rDNA nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1.
Bacillus pseudomycoides ( Bacillus pseudomycoides ) KS2 strain (Accession No. KCTC14192BP) or a microorganism preparation for accelerating decomposition of livestock carcass containing its culture medium as an active ingredient.
The method of claim 5, wherein the livestock carcass is a chicken carcass or a pig carcass, a microbial agent for promoting decomposition of livestock carcasses.
The method of claim 5, wherein the microbial agent is a powder or liquid formulation, a microbial agent for promoting decomposition of livestock carcasses.
A method for accelerating decomposition of livestock carcasses, comprising the step of treating the microbial agent according to any one of claims 5 to 7 on a livestock carcass burial site.
The method of claim 8, wherein the livestock carcass is a chicken carcass or a pig carcass.
The method of claim 8, wherein the microbial agent is treated in an amount of 0.1 to 10 parts by weight based on 100 parts by weight of the animal carcass.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020200083171A KR102469143B1 (en) | 2020-07-07 | 2020-07-07 | Microbial agents for promoting the decomposition of livestock carcasses including the Bacillus pseudomycoides KS2 strain |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020200083171A KR102469143B1 (en) | 2020-07-07 | 2020-07-07 | Microbial agents for promoting the decomposition of livestock carcasses including the Bacillus pseudomycoides KS2 strain |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20220005690A KR20220005690A (en) | 2022-01-14 |
| KR102469143B1 true KR102469143B1 (en) | 2022-11-22 |
Family
ID=79342769
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020200083171A KR102469143B1 (en) | 2020-07-07 | 2020-07-07 | Microbial agents for promoting the decomposition of livestock carcasses including the Bacillus pseudomycoides KS2 strain |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR102469143B1 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117431191B (en) * | 2023-12-19 | 2024-03-12 | 中国农业大学 | Bacillus pseudomycoides HDCP1 and application thereof |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102074233B1 (en) | 2018-12-14 | 2020-02-06 | (주) 동화미생물연구소 | Composition for livestock carcass degradation and microbial medicament comprising the same |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20150136624A (en) | 2014-03-19 | 2015-12-08 | 주식회사 다산컨설턴트 | A composition of soil treatment and a process for the decontamination of soil using the same |
| KR101640303B1 (en) * | 2014-04-24 | 2016-07-15 | 경성대학교 산학협력단 | Method for decomposing buried livestock carcasses using lactic acid bacteria |
| KR101782130B1 (en) | 2017-01-09 | 2017-09-26 | 농업회사법인(주)이지엠앤알 | Manufacturing Method of Microbial Agent for annihilation of Animal Corpse and Microbial Agent for annihilation of Annimal Corpse manufactured by the same |
| KR101963504B1 (en) * | 2017-06-08 | 2019-03-28 | 선 바이오 (주) | Novel thermophilic alkalitolerant facultative anaerobic strains, microbial agents for degradation of livestock carcass comprising the same |
| KR102069787B1 (en) * | 2018-04-09 | 2020-01-28 | 이성기 | Bacterial consortium for accelerating decomposition from stamped out animal |
-
2020
- 2020-07-07 KR KR1020200083171A patent/KR102469143B1/en active IP Right Grant
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102074233B1 (en) | 2018-12-14 | 2020-02-06 | (주) 동화미생물연구소 | Composition for livestock carcass degradation and microbial medicament comprising the same |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20220005690A (en) | 2022-01-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ezugworie et al. | Proliferation of antibiotic-resistant microorganisms and associated genes during composting: An overview of the potential impacts on public health, management and future | |
| US11192155B2 (en) | Phage and use thereof in soil remediation | |
| Almoneafy et al. | Characterization and evaluation of Bacillus isolates for their potential plant growth and biocontrol activities against tomato bacterial wilt | |
| CN106635933A (en) | Mixed bacterial agent capable of degrading antibiotics in soil and preparation method thereof | |
| KR101534891B1 (en) | Microorganism capable of reducing malodor and its uses | |
| Böhnel et al. | Clostridium botulinum and bio‐compost. A contribution to the analysis of potential health hazards caused by bio‐waste recycling | |
| CN113231462B (en) | Method for stimulating indigenous flora to rapidly degrade cypermethrin in soil | |
| KR102368580B1 (en) | Novel strains of high-temperature Bacillus genus having malodor reduction effect on high-temperature livestock manure and livestock manure malodor reduction composition comprising the same | |
| Zhu et al. | The endophytic bacterium Serratia sp. PW7 degrades pyrene in wheat | |
| CN108893419A (en) | Microbial strains and its screening technique and the application in processing heavy-metal contaminated soil | |
| John et al. | In situ bioremediation of chlorpyrifos by Klebsiella sp. isolated from pesticide contaminated agricultural soil | |
| KR20150136624A (en) | A composition of soil treatment and a process for the decontamination of soil using the same | |
| KR102469143B1 (en) | Microbial agents for promoting the decomposition of livestock carcasses including the Bacillus pseudomycoides KS2 strain | |
| Jiang et al. | Fate of Listeria monocytogenes in bovine manure–amended soil | |
| JP6975701B2 (en) | Bacillus subtilis isolation method, Bacillus subtilis, microbial preparation containing Bacillus subtilis, medium set for Bacillus subtilis isolation | |
| KR101465093B1 (en) | Material treating for reduction of malodor gas | |
| JP3064221B2 (en) | Aerobic bacteria and sludge treatment using the same | |
| Mingma et al. | Characterization, antifungal activity and plant growth promoting potential of endophytic actinomycetes isolated from rice (Oryza sativa L.) | |
| KR102469138B1 (en) | Microbial agents for promoting the decomposition of livestock carcasses including the Paraclostridium benzoelyticum KS3 strain | |
| KR20190118215A (en) | Bacterial consortium for accelerating decomposition from stamped out animal | |
| Idu et al. | Bacteriological Survey of Abattoir Wastewater in Aba, Abia State, Nigeria | |
| DE69733194T2 (en) | NEW MICROORGANISM AND ITS USE IN AN ENVIRONMENTAL CLEANING METHOD | |
| Garcia et al. | Evaluation of gamma radiation levels for reducing pathogenic bacteria and fungi in animal sewage and laboratory effluents. | |
| Escudero-López et al. | Bacterial selection of the Pseudomonas genus with the capacity to treat water and contaminated soils | |
| Chachina et al. | Recultivation of soils contaminated with oil (50 g/kg) by earthworms E. fetida, E. andrei, D. veneta and their probiotics |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant |