KR20190118215A - Bacterial consortium for accelerating decomposition from stamped out animal - Google Patents

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KR20190118215A
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Abstract

The present invention relates to a method of treating buried land of slaughtered livestock, in particular a method of treating buried land of livestock killed by foot-and-mouth disease virus, which, by administering a specific microbial cell, can effectively treat the decomposition of livestock that has been killed and purify the soil and leachate of the buried land.

Description

살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체{Bacterial consortium for accelerating decomposition from stamped out animal}Bacterial consortium for accelerating decomposition from stamped out animal}

본 발명은 살처분된 가축의 부숙을 촉진할 수 있는 세균공동체, 살처분된 가축의 매몰지에서 유래하는 침출수를 정화할 수 있는 세균공동체, 살처분된 가축의 매몰지의 토양을 정화할 수 있는 세균공동체 및 살처분된 가축의 사체를 액비화할 수 있는 세균공동체에 관한 것이다.The present invention is a bacterial community that can promote the maturation of slaughtered livestock, a bacterial community that can purify leachate derived from the burial place of the slaughtered livestock, and a bacterium that can purify the soil of the burial ground of the slaughtered livestock. The present invention relates to a bacterial community capable of liquefying carcasses of communities and killed animals.

구제역, 조류독감, 돼지콜레라 등의 가축전염병에 감염되어 죽거나 감염이 의심되어 살처분(Stamping Out)한 가축 사체에 대해서 각 국가는 자국 환경에 적합한 방법으로 처리하고 있는데, 주로 혐기성(호기성) 분해(anaerobic digestion), 고압정제(rendering), 퇴비화 (composting), 매몰(burial), 알칼리 가수분해(alkaline hydrolysis), 젖산 발효(lactic acid fermentation), 무처리 방식(nontraditional technologies), 소각 등에 의해 처리가 이루어지고 있다. 우리나라에서는 대부분의 사체를 소각 또는 매몰에 의한 방법으로 살처분된 가축을 처리하고 있다. 소각은 800℃? 이상의 소각로에서 소각 하여 부피와 중량을 감소시켜 매립 또는 퇴비로 재활용하는 방법이지만, 소각을 위하여 별도로 소각로를 설치하여야 하는데다 비용부담, 주기적인 검사, 민원 등으로 인해 그 설치를 꺼리고 있고 연료비 때문에 실제 가동률이 극히 저조한 상황이다. 또한, 소각 방법은 대상물의 종류와 그 수분의 함유상태에 따라서 완전 연소가 이루어지지 못하며, 연소과정에서 미연 물질과 분진, 병원균의 전파 및 심한 악취가 대기중으로 배출되어 제2환경 공해의 문제로 제시된다.Countries dealing with livestock carcasses infected with animal disease, such as foot-and-mouth disease, bird flu, and swine cholera, which are killed or suspected of being infected, are treated in a manner appropriate to their environment, mainly anaerobic (aerobic) decomposition ( Treatment is achieved by anaerobic digestion, rendering, composting, burial, alkaline hydrolysis, lactic acid fermentation, nontraditional technologies, incineration, etc. ought. In Korea, most carcasses are treated with livestock killed by incineration or burial. Incineration is 800 ℃? It is a method of incineration in the above incinerator to reduce the volume and weight and recycle it to landfill or compost, but it is necessary to install the incinerator separately for incineration, and is reluctant to install it due to the cost burden, periodic inspections, and complaints. This is an extremely poor situation. In addition, the incineration method is not completely burned according to the type of the object and its moisture content, and the combustion of unburned substances, dust, pathogens, and severe odors are released into the atmosphere, suggesting a second environmental pollution problem. do.

우리나라에서는 다량으로 발생된 가축 사체를 낮은 비용으로 신속하게 처리하기 위하여 대부분을 매몰에 의해 처리하고 있다. In Korea, most of the livestock carcasses are processed by burial to expedite treatment at low cost.

이러한 가축 사체들을 매몰시킨 지점을 가축매몰지라 한다. 가축매몰지는 가축전염병예방법 및 사후관리 지침에 따라 일정기간 동안 발굴과 이용이 금지되고 있으나, 그 기간이 경과하면 원래 목적의 토지로 사용이 가능하다. 이에 경과시점 이후부터는 대다수 가축매몰지 위에 작물을 재배하게 된다. The point of burial of these carcasses is called burial. Livestock burial sites are prohibited from being excavated and used for a certain period in accordance with the Livestock Infectious Diseases Prevention Act and the Follow-up Guidelines, but after that period, they can be used as land for their original purpose. From this point onwards, crops will be grown on most landfills.

하지만, 재배지 땅속을 굴착해보면 사축이 부패되지 않고 그대로 남아있는 경우가 다반사이며, 미부패된 매몰지 상부 또는 주변에서 생산된 농산물은 지역 농산품의 이미지를 실추시키게 된다. 또한, 가축매몰지는 잠재적인 오염원으로 갈수기에는 천층지하수가 유출되며, 국토의 지하수 전체가 심각하게 오염될 가능성이 크며, 강우 시에는 지속적으로 오염원을 하천으로 유출하기 때문에 인근 하천의 오염에 부하를 줄 수 있고, 악취 및 잔존 항생제로 인하여 토양에도 피해를 주고 있다. 일반적으로 가축 사체를 땅 속에 매몰할 경우, 지상 밖에서 방치할 경우보다 공기 순환의 부족으로 사체 분해속도가 훨씬 더딘 편인데, 분해가 천천히 진행될 경우, 분해가 완전히 이루어지기 전까지는 악취 및 가스가 계속 발생 되어 환경을 오염시키는 문제점이 있다. 또한, 살처분 가축의 매몰 시 사용하는 생석회의 경우, 주로 살균작용의 목적으로 사용하고 있으나, 동물 사체의 분해속도를 방해할 뿐 아니라 매몰지역의 토양을 강알칼리성으로 변화시키기에 토양에 존재하는 대부분의 미생물이 죽어 악취와 침출수가 대량 발생하는 문제점이 있다. However, excavation in the soil of the cultivated land is a common case in which the livestock remains uncorrupted, and the produce produced on or around the undamaged burial ground causes the image of local produce to be lost. In addition, livestock burial ground is a potential source of pollutants, and groundwater runs off during the dry season, and the entire groundwater of the land is likely to be seriously contaminated. It can also cause damage to the soil due to odors and residual antibiotics. In general, when carcass carcasses are buried in the ground, carcass carcasses are much slower to decompose due to lack of air circulation than when they are left on the ground. If the carcasses are slowly decomposed, odors and gases continue to occur until they are completely decomposed. There is a problem to pollute the environment. In addition, the quicklime used for the burial of livestock is mostly used for the purpose of sterilization, but it does not interfere with the decomposition rate of animal carcasses and also changes the burial area into strong alkali. There is a problem that a large number of odors and leachate occurs due to the death of microorganisms.

이러한 피해를 최소화하기 위하여 가축매몰지의 사후관리가 필요하며, 나아가 효과적으로 가축매몰지를 소멸시키기 위한 처리방법에 대한 연구 개발이 요구되는 실정이다.In order to minimize such damages, it is necessary to follow up management of livestock burial grounds, and furthermore, research and development of treatment methods for effectively destroying livestock burial grounds are required.

이에 본 발명의 발명자들은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위한 연구를 하여 본 발명에 이르게 되었다.The inventors of the present invention have led to the present invention by studying to solve the above problems.

대한민국 등록특허 10-1324274 호Republic of Korea Patent Registration 10-1324274 대한민국 공개특허 10-2015-0136624 호Republic of Korea Patent Publication No. 10-2015-0136624 대한민국 등록특허 10-1097742 호Republic of Korea Patent Registration 10-1097742 대한민국 등록특허 10-1503300 호Republic of Korea Patent Registration 10-1503300 대한민국 등록특허 10-1065274 호Republic of Korea Patent Registration 10-1065274 대한민국 등록특허 10-1787683 호Republic of Korea Patent Registration 10-1787683 대한민국 등록특허 10-1422764 호Republic of Korea Patent Registration 10-1422764

본 발명의 일측면은 상기와 같은 문제점을 해결한 새로운 매몰지의 현재 상태에서 미생물에 의한 구제역 매몰지가축 사체의 생분해, 액비화 및 토양개량 방법을 제공하고자 한다. One aspect of the present invention is to provide a method for biodegradation, liquefaction and soil improvement of foot-and-mouth buried livestock carcasses by microorganisms in the current state of new landfills that solve the above problems.

본 발명의 일측면은 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체 및 이를 이용한 매몰지 가축의 부숙 촉진 방법을 제공하고자 한다.One aspect of the present invention is to provide a bacterial community for the maturation of the slaughtered livestock and a method for promoting the maturity of the burial land cattle using the same.

또한, 본 발명의 일측면은 상기 세균공동체를 이용한 살처분된 가축의 매몰지에서 유래되는 침출수를 정화하는 방법, 살처분된 가축의 매몰지의 토양을 정화하는 방법, 또는 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 사체를 액비화하는 방법을 제공하고자 한다. In addition, one aspect of the present invention is a method of purifying the leachate derived from the buried land of the slaughtered livestock using the bacterial community, a method of purifying the soil of the buried land of the slaughtered livestock, or killed by the foot-and-mouth disease virus To provide a way to liquefy the carcasses of livestock.

상기 목적을 달성하기 위하여, In order to achieve the above object,

본 발명의 일측면은 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체에 있어서,One aspect of the present invention is a bacterial community for promoting maturation of slaughtered livestock,

상기 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체는 기탁번호가 KCTC 10623 BP인 NBC2000 세균공동체에서 선택된 바실러스 속(Bacillus sp.) Cy106 균주, 수도모나스 속(Pseudomonas sp.) Cy100 균주, 바실러스 스테아로써모필러스(Bacillus stearothermophilus) Cy104 균주, 바실러스 속(Bacillus sp.) Cy107 균주, 수도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) Tnh 균주, 바실러스 속(Bacillus sp.) Cy105 균주, 수도모나스 속 (Pseudomonas sp.) Djhc 균주, 수도모나스 속(Pseudomonas sp.) Ntar3 균주, 서레시아 속(Serratia sp.) Aeng18 균주, 서레시아 속(Serratia sp.) Ntar2 균주, 에어로모나스 하이드로필라(Aeromonas hydrophila ) Aeng17 균주, 크리저모나스 루테올라(Chryseomonas luteola) Gc300 균주, 크리저모나스 속(Chryseomonas sp.) Gc500 균주 중 어느 하나 이상을 포함하고; 기탁번호가 KCTC 0652 BP인 EBC1000 세균공동체에서 선택된 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) EBC106 균주 및 수도모나스 속(Pseudomonas sp.) EBC107 균주 중 어느 하나 이상;을 포함하는 것을 특징으로 하는, 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 제공한다.Bacillus sp. Cy106 strain, Pseudomonas sp. Cy100 strain selected from the NBC2000 bacterial community with an accession number of KCTC 10623 BP, Pseudomonas sp. (Bacillus stearothermophilus) Cy104 strain, Bacillus sp. Cy107 strain, Pseudomonas aeruginosa Tnh strain, Bacillus sp. Cy105 strain, Pseudomonas sp. Djhc strain, Pseudomonas sp.Ntar3 strain, Serratia sp.Aeng18 strain, Serratia sp.Ntar2 strain, Aeromonas hydrophila Aeng17 strain, Cremonamona luteola ( Chryseomonas luteola Gc300 strain, Chryseomonas sp. Gc500 strain; One or more of the Bacillus cereus EBC106 strain and Pseudomonas sp. EBC107 strain selected from EBC1000 bacterial community with an accession number of KCTC 0652 BP; To provide a bacterial community for promoting lodging.

본 발명의 일측면에 있어서, 상기 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체는 기탁번호가 KCTC 10623 BP인 NBC2000 세균공동체에서 선택된 바실러스 속(Bacillus sp.) Cy106 균주, 수도모나스 속(Pseudomonas sp.) Cy100 균주, 바실러스 스테아로써모필러스(Bacillus stearothermophilus) Cy104 균주, 바실러스 속(Bacillus sp.) Cy107 균주, 수도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) Tnh 균주, 바실러스 속(Bacillus sp.) Cy105 균주, 수도모나스 속 (Pseudomonas sp.) Djhc 균주, 수도모나스 속(Pseudomonas sp.) Ntar3 균주, 서레시아 속(Serratia sp.) Aeng18 균주, 서레시아 속(Serratia sp.) Ntar2 균주, 에어로모나스 하이드로필라(Aeromonas hydrophila) Aeng17 균주, 크리저모나스 루테올라(Chryseomonas luteola) Gc300 균주 및 크리저모나스 속(Chryseomonas sp.) Gc500 균주를 포함하고; 기탁번호가 KCTC 0652 BP인 EBC1000 세균공동체에서 선택된 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) EBC106 균주 및 수도모나스 속(Pseudomonas sp.) EBC107 균주를 포함하는 것을 특징으로 하는, 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 제공한다.In one aspect of the invention, the bacterial community for promoting the maturity of the slaughtered livestock is Bacillus sp. Cy106 strain, Pseudomonas sp. Selected from the NBC2000 bacterial community with a deposit number of KCTC 10623 BP. Cy100 strain, Bacillus stearothermophilus Cy104 strain, Bacillus sp. Cy107 strain, Pseudomonas aeruginosa Tnh strain, Bacillus sp. Cy105 strain, Pseudomonas genus (Pseudomonas sp.) Djhc strain, Pseudomonas sp.Ntar3 strain, Serratia sp.Aeng18 strain, Serratia sp.Ntar2 strain, Aeromonas hydrophila Aeng17 Strains, Chryseomonas luteola Gc300 strains and Chryseomonas sp. Gc500 strains; Bacillus cereus EBC106 strain and Pseudomonas sp. EBC107 strain selected from EBC1000 bacterial community with an accession number of KCTC 0652 BP. To provide.

본 발명의 일측면에 있어서, 살처분된 가축은 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축인 것을 특징으로 하는, 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 제공한다.In one aspect of the invention, the slaughtered livestock provides a bacterial community for promoting maturation of the slaughtered livestock, characterized in that the livestock killed by the foot-and-mouth virus.

본 발명의 다른 측면은, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 매몰지에 상기 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 투여하는 단계를 포함하는, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 부숙을 촉진하는 방법을 제공한다.Another aspect of the invention, comprising the step of administering the bacterial community for promoting the housing of the slaughtered livestock to the buried land of livestock killed by the foot-and-mouth virus, to promote the maturity of the livestock killed by the foot-and-mouth virus Provide a method.

본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 부숙 촉진용 세균공동체는 살처분된 가축 100 중량부에 대하여 5 내지 20 중량부로 투여하는 것을 특징으로 하는, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 부숙을 촉진하는 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, characterized in that the bacterial community for promoting maturity is administered in an amount of 5 to 20 parts by weight based on 100 parts by weight of the slaughtered livestock, a method for promoting the maturity of livestock killed by foot-and-mouth disease virus. To provide.

본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 매몰지를 개방하지 않은 상태에서 미생물 주입용 파이프를 매몰된 사체층에 도달하는 수준까지 삽입하는 단계;및 상기 삽입된 파이프를 통해 상기 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 투여하는 단계;를 포함하는, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 부숙을 촉진하는 방법을 제공한다.In another aspect of the invention, the step of inserting the microbial injection pipe to the level reaching the buried carcass layer without opening the buried land; and for promoting the maturation of the slaughtered livestock through the inserted pipe It provides a method for promoting the maturation of livestock killed by foot-and-mouth virus, including administering a bacterial community.

본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 방법은 봄 내지 가을에 실시하는 것을 특징으로 하는, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 부숙을 촉진하는 방법을 제공한다.In another aspect of the invention, the method provides a method for promoting maturation of livestock killed by foot-and-mouth disease virus, characterized in that carried out in the spring to autumn.

본 발명의 또 다른 측면은, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 매몰지에 상기 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 투여하는 단계를 포함하는, 살처분된 가축의 매몰지에서 유래되는 침출수를 정화하는 방법을 제공한다.Another aspect of the invention, the leachate derived from the buried land of slaughtered livestock, comprising the step of administering a bacterial community for promoting the housing of the slaughtered livestock to the buried land of livestock killed by foot-and-mouth virus Provide a way to purify.

본 발명의 또 다른 측면은, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 매몰지에 상기 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 투여하는 단계를 포함하는, 살처분된 가축의 매몰지의 토양을 정화하는 방법을 제공한다.Another aspect of the invention, the method of purifying the soil of the buried land of slaughtered livestock, comprising administering to the buried land of livestock killed by foot-and-mouth virus, the bacterial community for promoting the housing of the slaughtered livestock To provide.

본 발명의 또 다른 측면은, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 사체를 액비화 하는 방법에 있어서, 상기 방법은 상기 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 투여하는 단계를 포함하는, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 사체를 액비화하는 방법를 제공한다.Another aspect of the present invention, in a method for liquefying the carcasses of livestock killed by foot-and-mouth disease virus, the method comprising the step of administering a bacterial community for promoting the maturation of the slaughtered livestock, It provides a way to liquefy carcasses that have been killed.

본 발명의 일 측면에 따른 방법은 구제역 가축 매몰지를 개방하지 않는 상태에서, 토양복원을 하기 위한 최선의 방법을 제공할 수 있다.The method according to one aspect of the present invention may provide the best method for soil restoration without opening the foot-and-mouth disease burial site.

본 발명의 일 측면에 따른 방법은 구제역 가축사체를 친환경적으로 생분해할 수 있다.Method according to one aspect of the present invention can biodegradable foot-and-mouth livestock carcasses environmentally friendly.

본 발명의 일 측면에 따른 방법은 구제역 매몰지의 침출수를 효과적으로 정화할 수 있다.The method according to an aspect of the present invention can effectively purify the leachate of foot-and-mouth buried land.

본 발명의 일 측면에 따른 방법은 구제역 매몰지에 있어서, 유기질의 액비를 만들어내는 자연발효, 토질개량효과를 낼 수 있는 효과가 있다.The method according to an aspect of the present invention has the effect of producing natural fermentation, soil improvement effect in the foot-and-mouth disease burial site.

본 발명의 일 측면에 따른 방법은 구제역 매몰지에 있어서, 추가적인 지하수 오염을 예방할 수 있다.The method according to an aspect of the present invention can prevent further groundwater contamination in foot-and-mouth buried sites.

본 발명의 일 측면에 따른 방법은 이미 오염된 지하수까지도 연결하여 정화할 수 있다.The method according to one aspect of the present invention can also purify by connecting to the contaminated ground water.

도 1a 내지 도 1c는 시험구 매몰지에 미생물을 9차 투입하는 사진이다.1A to 1C are photographs of 9th microorganisms injected into a test instrument investment site.

본 명세서에 있어서, 범위가 변수에 대해 기재되는 경우, 상기 변수는 상기 범위의 기재된 종료점들을 포함하는 기재된 범위 내의 모든 값들을 포함하는 것으로 이해될 것이다. 예를 들면, "5 내지 10"의 범위는 5, 6, 7, 8, 9, 및 10의 값들뿐만 아니라 6 내지 10, 7 내지 10, 6 내지 9, 7 내지 9 등의 임의의 하위 범위를 포함하고, 5.5, 6.5, 7.5, 5.5 내지 8.5 및 6.5 내지 9 등과 같은 기재된 범위의 범주에 타당한 정수들 사이의 임의의 값도 포함하는 것으로 이해될 것이다. 또한 예를 들면, "10% 내지 30%"의 범위는 10%, 11%, 12%, 13% 등의 값들과 30%까지를 포함하는 모든 정수들뿐만 아니라 10% 내지 15%, 12% 내지 18%, 20% 내지 30% 등의 임의의 하위 범위를 포함하고, 10.5%, 15.5%, 25.5% 등과 같이 기재된 범위의 범주 내의 타당한 정수들 사이의 임의의 값도 포함하는 것으로 이해될 것이다.In the present specification, when a range is described for a variable, it will be understood that the variable includes all values within the described range including the listed endpoints of the range. For example, the range "5 to 10" includes any subrange such as 6 to 10, 7 to 10, 6 to 9, 7 to 9, as well as values of 5, 6, 7, 8, 9, and 10. And any value between integers that are within the scope of the described range, such as 5.5, 6.5, 7.5, 5.5-8.5, 6.5-9, and the like. Also for example, the range of “10% to 30%” ranges from 10% to 15%, 12% to 10%, 11%, 12%, 13%, etc. as well as all integers including up to 30%. It will be understood to include any subranges such as 18%, 20% to 30%, etc., and to include any value between valid integers within the range of the stated range, such as 10.5%, 15.5%, 25.5% and the like.

이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명의 일측면은 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체에 있어서,One aspect of the present invention is a bacterial community for promoting maturation of slaughtered livestock,

상기 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체는 기탁번호가 KCTC 10623 BP인 NBC2000 세균공동체에서 선택된 바실러스 속(Bacillus sp.) Cy106 균주, 수도모나스 속(Pseudomonas sp.) Cy100 균주, 바실러스 스테아로써모필러스(Bacillus stearothermophilus) Cy104 균주, 바실러스 속(Bacillus sp.) Cy107 균주, 수도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) Tnh 균주, 바실러스 속(Bacillus sp.) Cy105 균주, 수도모나스 속 (Pseudomonas sp.) Djhc 균주, 수도모나스 속(Pseudomonas sp.) Ntar3 균주, 서레시아 속(Serratia sp.) Aeng18 균주, 서레시아 속(Serratia sp.) Ntar2 균주, 에어로모나스 하이드로필라(Aeromonas hydrophila ) Aeng17 균주, 크리저모나스 루테올라(Chryseomonas luteola) Gc300 균주, 크리저모나스 속(Chryseomonas sp.) Gc500 균주 중 어느 하나 이상을 포함하고; 기탁번호가 KCTC 0652 BP인 EBC1000 세균공동체에서 선택된 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) EBC106 균주 및 수도모나스 속(Pseudomonas sp.) EBC107 균주 중 어느 하나 이상;을 포함하는 것을 특징으로 하는, 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 제공한다.Bacillus sp. Cy106 strain, Pseudomonas sp. Cy100 strain selected from the NBC2000 bacterial community with an accession number of KCTC 10623 BP, Pseudomonas sp. (Bacillus stearothermophilus) Cy104 strain, Bacillus sp. Cy107 strain, Pseudomonas aeruginosa Tnh strain, Bacillus sp. Cy105 strain, Pseudomonas sp. Djhc strain, Pseudomonas sp.Ntar3 strain, Serratia sp.Aeng18 strain, Serratia sp.Ntar2 strain, Aeromonas hydrophila Aeng17 strain, Cremonamona luteola ( Chryseomonas luteola Gc300 strain, Chryseomonas sp. Gc500 strain; One or more of the Bacillus cereus EBC106 strain and Pseudomonas sp. EBC107 strain selected from EBC1000 bacterial community with an accession number of KCTC 0652 BP; To provide a bacterial community for promoting lodging.

본 발명의 일측면에 있어서, 상기 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체는 기탁번호가 KCTC 10623 BP인 NBC2000 세균공동체에서 선택된 바실러스 속(Bacillus sp.) Cy106 균주, 수도모나스 속(Pseudomonas sp.) Cy100 균주, 바실러스 스테아로써모필러스(Bacillus stearothermophilus) Cy104 균주, 바실러스 속(Bacillus sp.) Cy107 균주, 수도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) Tnh 균주, 바실러스 속(Bacillus sp.) Cy105 균주, 수도모나스 속 (Pseudomonas sp.) Djhc 균주, 수도모나스 속(Pseudomonas sp.) Ntar3 균주, 서레시아 속(Serratia sp.) Aeng18 균주, 서레시아 속(Serratia sp.) Ntar2 균주, 에어로모나스 하이드로필라(Aeromonas hydrophila ) Aeng17 균주, 크리저모나스 루테올라(Chryseomonas luteola) Gc300 균주 및 크리저모나스 속(Chryseomonas sp.) Gc500 균주를 포함하고; 기탁번호가 KCTC 0652 BP인 EBC1000 세균공동체에서 선택된 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) EBC106 균주 및 수도모나스 속(Pseudomonas sp.) EBC107 균주를 포함하는 것을 특징으로 하는, 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 제공한다.In one aspect of the invention, the bacterial community for promoting the maturity of the slaughtered livestock is Bacillus sp. Cy106 strain, Pseudomonas sp. Selected from the NBC2000 bacterial community with a deposit number of KCTC 10623 BP. Cy100 strain, Bacillus stearothermophilus Cy104 strain, Bacillus sp. Cy107 strain, Pseudomonas aeruginosa Tnh strain, Bacillus sp. Cy105 strain, Pseudomonas genus (Pseudomonas sp.) Djhc strain, Pseudomonas sp.Ntar3 strain, Serratia sp.Aeng18 strain, Serratia sp.Ntar2 strain, Aeromonas hydrophila Aeng17 Strains, Chryseomonas luteola Gc300 strains and Chryseomonas sp. Gc500 strains; Bacillus cereus EBC106 strain and Pseudomonas sp. EBC107 strain selected from EBC1000 bacterial community with an accession number of KCTC 0652 BP. To provide.

본 발명의 일측면에 있어서, 살처분된 가축은 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축인 것을 특징으로 하는, 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 제공한다.In one aspect of the invention, the slaughtered livestock provides a bacterial community for promoting maturation of the slaughtered livestock, characterized in that the livestock killed by the foot-and-mouth virus.

본 발명의 다른 측면은, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 매몰지에 상기 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 투여하는 단계를 포함하는, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 부숙을 촉진하는 방법을 제공한다.Another aspect of the invention, comprising the step of administering the bacterial community for promoting the housing of the slaughtered livestock to the buried land of livestock killed by the foot-and-mouth virus, to promote the maturity of the livestock killed by the foot-and-mouth virus Provide a method.

본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 부숙 촉진용 세균공동체는 살처분된 가축 100 중량부에 대하여 5 내지 20 중량부로 투여하는 것을 특징으로 하는, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 부숙을 촉진하는 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, characterized in that the bacterial community for promoting maturity is administered in an amount of 5 to 20 parts by weight based on 100 parts by weight of the slaughtered livestock, a method for promoting the maturity of livestock killed by foot-and-mouth disease virus. To provide.

본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 매몰지를 개방하지 않은 상태에서 미생물 주입용 파이프를 매몰된 사체층에 도달하는 수준까지 삽입하는 단계;및 상기 삽입된 파이프를 통해 상기 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 투여하는 단계;를 포함하는, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 부숙을 촉진하는 방법을 제공한다.In another aspect of the invention, the step of inserting the microbial injection pipe to the level reaching the buried carcass layer without opening the buried land; and for promoting the maturation of the slaughtered livestock through the inserted pipe It provides a method for promoting the maturation of livestock killed by foot-and-mouth virus, including administering a bacterial community.

본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 방법은 봄 내지 가을에 실시하는 것을 특징으로 하는, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 부숙을 촉진하는 방법을 제공한다.In another aspect of the invention, the method provides a method for promoting maturation of livestock killed by foot-and-mouth disease virus, characterized in that carried out in the spring to autumn.

본 발명의 또 다른 측면은, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 매몰지에 상기 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 투여하는 단계를 포함하는, 살처분된 가축의 매몰지에서 유래되는 침출수를 정화하는 방법을 제공한다.Another aspect of the invention, the leachate derived from the buried land of slaughtered livestock, comprising the step of administering a bacterial community for promoting the housing of the slaughtered livestock to the buried land of livestock killed by foot-and-mouth virus Provide a way to purify.

본 발명의 또 다른 측면은, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 매몰지에 상기 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 투여하는 단계를 포함하는, 살처분된 가축의 매몰지의 토양을 정화하는 방법을 제공한다.Another aspect of the invention, the method of purifying the soil of the buried land of slaughtered livestock, comprising administering to the buried land of livestock killed by foot-and-mouth virus, the bacterial community for promoting the housing of the slaughtered livestock To provide.

본 발명의 또 다른 측면은, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 사체를 액비화 하는 방법에 있어서, 상기 방법은 상기 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 투여하는 단계를 포함하는, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 사체를 액비화하는 방법를 제공한다.Another aspect of the present invention, in a method for liquefying the carcasses of livestock killed by foot-and-mouth disease virus, the method comprising the step of administering a bacterial community for promoting the maturation of the slaughtered livestock, It provides a way to liquefy carcasses that have been killed.

이하, 본 발명에 사용된 구제역 가축 처리 세균공동체에 포함되는 NBC2000 세균공동체 및 EBC1000 세균공동체의 분리, 동정 및 활성을 상세히 설명한다. Hereinafter, the isolation, identification and activity of the NBC2000 bacterial community and the EBC1000 bacterial community included in the foot-and-mouth disease-treated bacterial community used in the present invention will be described in detail.

NBC2000NBC2000 세균공동체의 분리, 동정 및 활성 Isolation, Identification and Activity of Bacterial Communities

1.One. 환경호르몬을Environmental hormones 분해할 수 있는 신규의 세균 공동체의 분리 Isolation of Degradable New Bacterial Communities

(1) 한국, 남유럽, 오세아니아 등지에서 채집한 토양에서 PCBs, PCP, 다이옥신, PCE, 톨루엔, 타르산 등을 분해하는 세균을 분리 (One) Isolates bacteria that degrade PCBs, PCP, dioxin, PCE, toluene and taric acid from soils collected from Korea, Southern Europe, Oceania, etc.

채집한 토양 1 그람을 루리아-베르타니 액체배지 (박토-트립톤 10g, 박토효모추출물 5g, NaCl 10g + 탈염수 1 리터)에서 2 ~ 3일간 진탕 배양한 후 1ml을 취하여 루리아-베르타니 한천배지 (박토-트립톤 10g, 박토효모추출물 5g, NaCl 10g, 한천 1.5% + 탈염수 950ml )에서 각 콜로니를 분리하였다. 이때 나타난 각 콜로니를 선택하여 PCBs, PCP, PCE, 톨루엔, 타르산이 각각 포함된 최소액체배지 (K2HPO4 0.065g, KH2PO4 0.017g, MgSO4 0.1g, NaNO3 0.5g + 탈염수 1리터)에 순차적으로 접종하고 25 ~ 30o C에서 3일 이상 진탕 배양하였다. 각 유해물질의 감소확인과 더불어 진탕 배양액 1 ml를 취하여 루리아-베르타니 한천배지에 순차적으로 접종하고 25 ~ 30o C에서 3 ~ 5일간 배양하였다. 1 gram of collected soil was shaken for 2 to 3 days in Luria-Bertani liquid medium (10 g of Bacterium-Tryptone, 5 g of Bakto yeast extract, 10 g of NaCl + 1 liter of demineralized water), and then 1 ml was taken to take 1 ml of Luria-Bertani agar medium ( Each colony was isolated from 10 g of Bakto-Tryptone, 5 g of Bakto yeast extract, 10 g of NaCl, 1.5% of agar, and 950 ml of demineralized water. At this time, select each colony and select the minimum liquid medium containing PCBs, PCP, PCE, toluene and taric acid (K 2 HPO 4 0.065g, KH 2 PO 4 0.017g, MgSO 4 0.1g, NaNO 3 0.5g + Demineralized water 1) Liters) were sequentially inoculated and shaken at 25 to 30 o C for at least 3 days. In addition to confirming the reduction of each harmful substance, 1 ml of shaking culture solution was taken and sequentially inoculated into Luria-Bertani agar medium and incubated at 25 to 30 o C for 3 to 5 days.

순수 분리한 각 콜로니를 상기와 같은 최소액체배지에 재 접종하여 진탕 배양한 후 루리아-베르타니 고체배지에서 개별적으로 형성된 각기 다른 모양의 콜로니 형태를 가지며 그 콜로니의 계대 배양시 동일한 콜로니가 나타나는 유용세균 50 여종을 분리하였다. Each colony separated from pure water was reinoculated into the above-described minimal liquid medium, followed by shaking culture, followed by different cultures of colonies of different shapes formed in the Luria-Bertani solid medium, and the same colonies appearing in the passage of the colonies. About 50 species were separated.

(2) 위에서 분리한 세균들을 PCBs, PCP, PCE, 톨루엔, 타르산이 단계적으로 높은 농도로 포함된 최소 배지에 각각 순차적으로 접종하여 상기 (1)과 같은 방법으로 반복하여 보다 높은 농도에서 생존하는 균주 및 형태차이에 따라서 26종을 분리하였다.(2) Strains and morphological differences between the bacteria isolated from above were sequentially inoculated in a minimal medium containing PCBs, PCP, PCE, toluene, and taric acid in a stepwise manner, and then repeated in the same manner as in (1) above. According to the 26 species were separated.

여기서 얻은 26 종의 세균들을 공동체로 구성하여 NBC2000으로 명명하였으며, 상기 세균공동체를 이루는 각각의 세균을 각각 Cy100, Cy101, Cy102, Cy103, Cy104, Cy105, Cy106, Cy107, Ntar1, Ntar2, Ntar3, Gc300, Gc500, Gc501, Bs100, Aeng17, Aeng18, Sp300, Tnh, Djhc, Pcpts, EBC106, EBC107, Bs101, W24 및 Nz2001로 명명하였다. The 26 bacteria obtained here were composed of a community named NBC2000, and each of the bacteria constituting the bacterial community was Cy100, Cy101, Cy102, Cy103, Cy104, Cy105, Cy106, Cy107, Ntar1, Ntar2, Ntar3, Gc300, Gc500, Gc501, Bs100, Aeng17, Aeng18, Sp300, Tnh, Djhc, Pcpts, EBC106, EBC107, Bs101, W24 and Nz2001.

본 발명에 따른 세균공동체 NBC2000은 2004년 4월 16 일 한국생명공학연구원내 유전자원센터에 기탁번호 KCTC 10623 BP로 국제기탁을 하였다.The bacterial community NBC2000 according to the present invention was deposited on April 16, 2004 at the Genetic Resource Center of the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology under accession number KCTC 10623 BP.

2. 세균공동체  2. Bacterial Community NBC2000의NBC2000 성장을 위한 최적조건의 확립  Establishment of Optimum Conditions for Growth

루리아-베르타니(Luria-Bertani) 영양배지 [박토-트립톤 (bacto-tryptone) 10g, 박토-효모추출물(bacto-yeast extract) 5g, 소디움 클로라이드(NaCl) 10g/탈염수 1리터]에서 pH 6 ~ 8, 온도 25 ~ 30 oC, 진탕(shaking) 분당 회전수 80 ~ 120rpm으로 48 ~ 96시간 배양하면 최적성장을 나타내며, 계대 배양시에도 동일조건에서 잘 성장한다. Luria-Bertani nutritional medium [10 g of bacto-tryptone, 5 g of bacto-yeast extract, 10 g of sodium chloride (NaCl) / 1 liter of demineralized water] 8, temperature 25 ~ 30 o C, shaking (shaking) rotation at 80 ~ 120rpm 48 ~ 96 hours incubation for optimum growth, even in subcultures grow well under the same conditions.

3. 세균공동체 3. Bacterial Community NBC2000의NBC2000 생화학적인 동정 Biochemical Identification

토양으로부터 순수 분리한 각 세균에 대한 동정은 bioMerieux (bioMerieux sa 69280 Marcy I'Etoile/France)에서 구입한 API Kits인 API20E, API20NE, API50CH, API50CHB 등으로 실시하여 23종의 속명을 결정하였다(표1 내지 표 5 참조). 23 bacteria were identified by API Kits API20E, API20NE, API50CH and API50CHB purchased from bioMerieux (bioMerieux sa 69280 Marcy I'Etoile / France). To Table 5).

Figure pat00001
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4. 세균공동체 4. Bacterial Community NBC2000을NBC2000 구성하는 각 세균들의 분리  Isolation of each bacterium

1)균주 분리 및 방법1) Strain isolation and method

각 균주는 한국, 뉴질랜드, 스웨덴 및 사이프로스 등의 토양에서 순수 분리하여 NBC2000을 구성하였으며, 모두 운동성을 가지고 있는 특징이 있어서 광대하고 다양한 토양에 적용할 수 있다. 세균 공동체 NBC2000에서 개별 균주를 분리하는 형태적인 특징의 방법은 다음과 같다. Each strain consists of NBC2000 purely separated from soils such as Korea, New Zealand, Sweden, and Cyprus, all of which have mobility characteristics and can be applied to a wide variety of soils. The method of morphological characterization of individual strains in bacterial community NBC2000 is as follows.

(가) 루리아-베르타니 한천배지 (박토-트립톤 10g, 박토효모추출물 5g, NaCl 10g, 한천 1.5% + 탈염수 950ml )에서의 배양(A) Cultivation in Luria-Bertani agar medium (10 g of Bacterium-Tryptone, 5 g of Bacterial yeast extract, 10 g of NaCl, 1.5% agar, 950 ml of demineralized water)

Cy100: 48시간 배양 후 표면이 불 균일한 부정형의 노란빛 콜로니로 나타나며 4mm의 크기로 성장한다.Cy100: After 48 hours of incubation, the surface appears as an uneven irregular yellow colony and grows to a size of 4 mm.

Cy101: 48시간 배양 후 반투명 아이보리색의 볼록한 콜로니로 나타나며 2.5mm의 크기로 성장한다. Cy101: Appears as translucent ivory convex colonies after 48 hours of incubation and grows to a size of 2.5 mm.

Cy102: 48시간 배양 후 노란색의 둥근 콜로니로 나타나며 2mm의 크기로 성장한다.Cy102: Appears as yellow round colonies after 48 hours of incubation and grows to 2 mm in size.

Cy103: 48시간 배양 후 아이보리색에 둥글고 납작한 콜로니로 나타나며 4mm의 크기로 성장한다. Cy103: After 48 hours of incubation, it appears as an ivory round and flat colony, growing to a size of 4 mm.

Cy104: 48시간 배양 후 반투명한 아이보리색의 둥근 콜로니로 나타나며 4mm의 크기로 성장한다.Cy104: Appears as translucent ivory round colonies after 48 hours of incubation and grows to 4 mm in size.

Cy105: 48시간 배양 후 상아빛의 둥근 콜로니로 나타나며 2.5mm의 크기로 성장한다. Cy105: Appears as ivory round colonies after 48 hours of incubation and grows to a size of 2.5 mm.

Cy106: 48시간 배양 후 무광택 흰빛으로 가운데가 패인 둥근 콜로니로 나타나며, 1.5mm의 크기로 성장한다.Cy106: After 48 hours of incubation, it appears as a round colony with a matt white color and grows to a size of 1.5 mm.

Cy107: 48시간 배양 후 무광택 흰빛의 둥근 콜로니로 나타나며 1mm의 크기로 성장한다. Cy107: After 48 hours of incubation, it appears as a matt white round colony and grows to a size of 1 mm.

Ntar1: 24시간 배양 후 반투명한 노란 빛에 둥글고 광택이 나는 콜로니로 나타나며, 1mm의 크기로 성장한다.Ntar1: After 24 hours of incubation, it appears as a translucent yellowish, round, glossy colony, growing to a size of 1 mm.

Ntar2: 24시간 배양 후 베이지색과 아이보리색의 둥글고 광택이 나는 콜로니로 나타나며 2mm의 크기로 성장한다.Ntar2: After 24 hours of incubation, it appears as a round, glossy colony of beige and ivory, growing to a size of 2 mm.

Ntar3: 48시간 배양 후 아이보리색에 둥글고 광택이 나는 콜로니로 나타나며 1.5mm의 크기로 성장한다.Ntar3: After 48 hours of incubation, it appears as an ivory-colored round and glossy colony, growing to a size of 1.5 mm.

Gc300: 24시간 배양 후 아이보리색에 둥글고 광택이 나는 볼록한 콜로니로 나타나며 3mm의 크기로 성장한다.Gc300: After 24 hours of cultivation, it appears as an ivory round, glossy convex colony and grows to a size of 3 mm.

Gc500: 24시간 배양 후 아이보리색에 둥글고 광택이 나는 볼록한 콜로니로 나타나며 1.5mm의 크기로 성장한다.Gc500: After 24 hours of incubation, it appears as an ivory round, glossy convex colony, growing to a size of 1.5 mm.

Gc501: 24시간 배양 후 아이보리색에 둥글고 광택이 나는 볼록한 콜로니로 나타나며 2.5mm의 크기로 성장한다.Gc501: After 24 hours of cultivation, it appears as an ivory round, glossy convex colony and grows to a size of 2.5 mm.

Bs100: 24시간 배양 후 밝은 상아빛의 둥근 콜로니로 나타나며 2mm의 크기로 성장한다.Bs100: Appears as bright ivory round colonies after incubation for 24 hours and grows to 2 mm in size.

Aeng17: 24시간 배양 후 붉은빛 또는 아이보리색의 둥글거나 부정형의 콜로니로 나타나며 3mm의 크기로 성장한다.Aeng17: After 24 hours of incubation, it appears as round or irregular colonies of red or ivory color and grows up to 3mm in size.

Aeng18: 24시간 배양 후 붉은빛 또는 아이보리색의 둥글거나 부정형의 콜로니로 나타나며 3mm의 크기로 성장한다.Aeng18: After 24 hours of incubation, it appears as round or irregular colonies of red or ivory color and grows to 3mm in size.

Sp300: 24시간 배양 후 베이지색과 갈색빛의 둥글거나 부정형의 콜로니로 나타나며 3mm의 크기로 성장한다.Sp300: After 24 hours of incubation, it appears as round or irregular colonies of beige and brown color, growing to a size of 3 mm.

Tnh: 40시간 배양 후 반투명 아이보리색의 표면이 불균일한 금속빛의 콜로니로 나타나며 4mm의 크기로 성장한다. 시간이 경과되면서 배지의 색상이 남청색으로 변화된다.Tnh: After 40 hours of incubation, the translucent ivory surface appears as a non-uniform metallic colony and grows to a size of 4 mm. Over time, the medium changes color to indigo blue.

Djhc: 24시간 배양 후 아이보리색의 둥글고 표면이 매끄러운 형태로 점도가 강하며 광택이 나는 콜로니로 나타나며 3mm의 크기로 성장한다.Djhc: After 24 hours of cultivation, the ivory is a round, smooth surface with viscous, glossy colonies that grow to a size of 3 mm.

Pcpts: 24시간 배양 후 베이지색과 갈색빛의 둥근 또는 부정형의 콜로니로 나타나며 3mm의 크기로 성장한다.Pcpts: After 24 hours of incubation, they appear as beige or brown round or irregular colonies and grow to a size of 3 mm.

EBC106: 24시간 배양 후 아이보리색의 표면이 불균일한 상태로 퍼져자라는 납작한 무광택의 콜로니로 나타나며 7mm의 크기로 성장한다.EBC106: Appears as a flat matte colony that grows to an uneven surface after culturing for 24 hours and grows to a size of 7 mm.

EBC107: 40시간 배양 후 반 투명 아이보리색의 표면이 불균일한 부정형의 콜로니로 나타나며 4mm의 크기로 성장한다.EBC107: After 40 hours of incubation, the semi-transparent ivory-colored surface appears as uneven irregular colonies and grows to a size of 4 mm.

Bs101: 24시간 배양 후 노란빛 아이보리색에 둥글며 표면에 테가 둘러진 콜로니로서 5mm의 크기로 성장한다. 그람양성세균으로 운동성이 있다.Bs101: After culturing for 24 hours, it is yellowish ivory, rounded and surrounded by a rim, and grows to a size of 5 mm. It is a gram-positive bacterium that has motility.

W24: 48시간 배양 후 옅은 노란색에 둥글고 광택이 나며 볼록한 형태의 콜로니로서 1.5mm의 크기로 성장한다. 그람음성세균으로 운동성이 있다.W24: Pale yellow, round, glossy and convex colonies that grow to a size of 1.5 mm after 48 hours of incubation. Gram-negative bacteria are motility.

Nz2001: 48시간 배양 후 흰빛 무광택의 콜로니로 나타나며 2.5mm로 성장한다. 장시간 배양시는 콜로니 가장자리에 균사가 나타나며, 운동성이 있다.Nz2001: Appears as white matte colonies after 48 h of incubation and grows to 2.5 mm. During prolonged incubation, hyphae appear at the edges of the colony, and there is motility.

(나) 마콩키 고체배지 〔MacConkey agar: 펩톤 17g, 프로테즈 펩톤(Proteose peptone) 3g, 락토스 10g, 빌 소트(Bile Salts No.3) 1.5g, 염화나트륨 5g, 한천 13.5g, 뉴트럴 레드 0.03g, 크리스탈 비올렛트 0.001g, 탈염수 1 리터, pH7.3~7.5〕 에서 48시간 배양후의 콜로니 색상(B) Maconkey solid medium [MacConkey agar: 17g peptone, Proteose peptone 3g, 10g lactose, 1.5g Bil Salts No.3, 5g sodium chloride, 13.5g agar, 0.03g neutral red, 0.001 g of crystal violet, 1 liter of demineralized water, pH7.3 ~ 7.5]

Cy100은 연한 갈색의 작은 콜로니가 나타나며, Cy100 appears in light brown small colonies,

Ntar1은 투명한 연갈색이며 표면이 불균일하며, Ntar1 is transparent light brown with uneven surface,

Ntar2는 베이지색의 작은 콜로니이며, Ntar2 is a small beige colony,

Ntar3은 옅은 붉은빛이 나는 투명한 갈색의 콜로니이며, Ntar3 is a light brown transparent brown colony,

Gc300은 짙은 분홍색의 콜로니에 가장자리는 베이지색이며, Gc300 is a dark pink colony with beige edges,

Gc500은 대부분의 베이지색과 분홍색 콜로니이며, Gc500 is most of the beige and pink colonies,

Gc501은 짙은 분홍색의 콜로니로 가장자리는 베이지색이며, Gc501 is a dark pink colony with beige edges.

Aeng17과 Aeng18은 짙은 붉은색의 콜로니이며, Aeng17 and Aeng18 are dark red colonies,

Sp300은 베이지색의 콜로니이며, Sp300 is a beige colony

Tnh는 어두운 카키색의 콜로니이며, Tnh is a dark khaki colony,

Djhc는 콜로니 가운데는 연분홍색이며 가장자리는 베이지색이며, Djhc is pink in the center of the colony and beige at the edges,

Pcpts는 연한 카키색으로 나타나고, Pcpts appear in light khaki

EBC107은 아주 옅은 분홍색의 콜로니로 나타나며, EBC107 appears as a very pale pink colony,

Nz2001은 분홍빛의 베이지색 콜로니로 나타나며, Nz2001 appears as a pink beige colony,

Cy101, Cy102, Cy103, Cy104, Cy105, Cy106, Cy107, Bs100, EBC106, Bs101, W24 균주는 48시간 배양 후에도 콜로니가 나타나지 않는다.Cy101, Cy102, Cy103, Cy104, Cy105, Cy106, Cy107, Bs100, EBC106, Bs101, W24 strains do not show colonies even after 48 hours of incubation.

(다) 데스옥사콜레이트 고체배지〔Desoxycholate agar: 프로테즈 펩톤 10g, 락토스 10g, 데스옥시콜레이트 나트륨 0.5g, 염화나트륨 5g, 구연산나트륨 2g, 한천 15g, 뉴트럴 레드 0.03g, 탈염수 1 리터, pH7.3~7.5〕에서 48시간 배양 후의 콜로니 색상(C) Desoxycholate agar [Desoxycholate agar: Protez peptone 10g, lactose 10g, sodium desoxycholate 0.5g, sodium chloride 5g, sodium citrate 2g, agar 15g, neutral red 0.03g, deionized water 1 liter, pH7.3 ... 7.5] colony color after 48 h incubation

Cy101, Cy102, Cy103, Cy104, Cy105, Cy106, Cy107, Bs100, EBC106, Bs101, 24 균주는 48시간 배양 후에도 콜로니가 나타나지 않는다. Cy101, Cy102, Cy103, Cy104, Cy105, Cy106, Cy107, Bs100, EBC106, Bs101, 24 strains do not show colonies even after 48 hours of culture.

Cy100은 연분홍빛이 나는 노란색 콜로니로 꽃 처럼 주름진 모양, Cy100 is a pale pink colony that looks like a flower

Ntar1과 Ntar2, Ntar3은 투명한 주황빛의 콜로니, Ntar1, Ntar2, and Ntar3 are transparent orange colonies,

Gc300과 Gc501은 짙은 분홍색의 콜로니로 가장자리는 베이지색, Gc300 and Gc501 are dark pink colonies with beige edges,

Gc500은 약한 붉은 빛이 나는 베이지색 콜로니, Gc500 is a light reddish beige colony,

Aeng17과 Aeng18은 짙은 붉은색의 콜로니, Aeng17 and Aeng18 are dark red colonies,

Sp300은 투명한 연갈색의 콜로니, Sp300 is a transparent light brown colony,

Tnh는 연한 갈색의 콜로니로 금속빛, Tnh is a light brown colony metallic,

Djhc는 연분홍과 베이지색이 혼합된 모양, Djhc is a mix of pink and beige

Pcpts는 투명한 갈색빛 콜로니, Pcpts are transparent brown colonies,

EBC107은 노란빛의 콜로니로 나타났다. EBC107 appeared as a yellow colony.

Nz2001은 붉은빛의 베이지색 콜로니로 나타났다. Nz2001 appeared as a red beige colony.

타르를 분해하는 Bs101, 유황균주 Nz2001, 유류 분해균주 W24는 현재의 방법으로는 동정이 곤란하였으므로 미 동정 균주로 결정하였다. Bs101, sulfur strain Nz2001, and oil degradation strain W24, which decompose tar, were identified as unidentified strains because it was difficult to identify by the present method.

5. 5. NBC2000NBC2000 개별 균주들의 각  Each of the individual strains 환경호르몬Environmental hormone 분해범위  Resolution

1)각 분리 균주의 환경호르몬 분해 범위1) Range of environmental hormone degradation of each isolate

PCBs, 다이옥신, PCE, 톨루엔, 타르산은 실험실의 최적조건에서 세균 공동체의 구성세균으로 측정한 값이며, 황(Sulphur)과 PCP는 개별 균주 수준에서 측정한 평균값이다.PCBs, dioxins, PCE, toluene and taric acid are measured by the bacterial community constituent bacteria under optimal conditions in the laboratory, and sulfur and PCP are average values measured at individual strain levels.

수도모나스 속(Pseudomonas sp.) Cy100 : PCBs 700 ppm;Pseudomonas sp. Cy100: 700 ppm PCBs;

서레시아 속(Serratia sp.) Aeng18 : PCP 500 ppm, 타르산, 다이옥신 100 ng/kg;Serratia sp. Aeng18: PCP 500 ppm, taric acid, dioxin 100 ng / kg;

서레시아 속(Serratia sp.) Ntar2 : 타르산;Serratia sp. Ntar2: taric acid;

수도모나스 속(Pseudomonas sp.) Djhc : PCP 1000 ppm, 다이옥신 300 ng/kg;Pseudomonas sp. Djhc: 1000 ppm PCP, 300 ng / kg dioxin;

수도모나스 속(Pseudomonas sp.) Ntar3 : 타르산;Pseudomonas sp. Ntar 3: taric acid;

수도모나스 속(Pseudomonas sp.) EBC107 : PCBs 700 ppm, PCP 100 ppm, 다이옥신 100 ng/kg, PCE 50,000 mg/kg;Pseudomonas sp. EBC107: 700 ppm PCBs, 100 ppm PCP, dioxin 100 ng / kg, PCE 50,000 mg / kg;

수도모나스 속(Pseudomonas sp.) Tnh : PCBs 700 ppm, PCP 500 ppm, 다이옥신 300 ng/kg, PCE 50,000 mg/kg, 타르산;Pseudomonas sp. Tnh: 700 ppm PCBs, 500 ppm PCP, dioxin 300 ng / kg, PCE 50,000 mg / kg, taric acid;

에어로모나스 속(Aeromonas sp.) Aeng17 : 타르산, PCP 100 ppm, 다이옥신 50 ng/kg;Aeromonas sp. Aeng17: taric acid, PCP 100 ppm, dioxin 50 ng / kg;

수도모나스 속(Pseudomonas sp.) Pcpts : PCP 1,000 ppm, 다이옥신 500 ng/kg;Pseudomonas sp. Pcpts: PCP 1,000 ppm, dioxin 500 ng / kg;

스텐노트로포모나스 속(Stenotrophomonas sp.) Ntar1 : 타르산;Stenotrophomonas sp. Ntar1: Taric acid;

수도모나스 속(Pseudomonas sp.) Sp300 : 타르산, PCP 700 ppm, 다이옥신 100 ng/kg;Pseudomonas sp. Sp300: taric acid, PCP 700 ppm, dioxin 100 ng / kg;

크리저모나스 속(Chryseomonas sp.) Gc501 : PCP 500 ppm, 다이옥신 100 ng/kg;Chryseomonas sp. Gc501: PCP 500 ppm, dioxin 100 ng / kg;

크리저모나스 속(Chryseomonas sp.) Gc500 : PCP 500 ppm, 다이옥신 100 ng/kg;Chryseomonas sp. Gc500: PCP 500 ppm, dioxin 100 ng / kg;

크리저모나스 속(Chryseomonas sp.) Gc300 : PCP 300 ppm, 다이옥신 100 ng/kg;Chryseomonas sp. Gc300: PCP 300 ppm, dioxin 100 ng / kg;

브레분디모나스 속(Brevundimonas sp.) Cy101 : PCBs 150 ppm;Brevundimonas sp. Cy101: PCBs 150 ppm;

브레분디모나스 속(Brevundimonas sp. Cy102 : PCBs 150 ppm;Brebundimonas sp. Cy102: PCBs 150 ppm;

브레분디모나스 속(Brevundimonas sp.) Cy103 : PCBs 700 ppm;Brevundimonas sp. Cy103: 700 ppm PCBs;

바실러스 속(Bacillus sp.) Bs100 : 타르산;Bacillus sp. Bs100: Taric acid;

바실러스 속(Bacillus sp.) Cy104 : PCBs 800 ppm; Bacillus sp. Cy104: PCBs 800 ppm;

바실러스 속(Bacillus sp.) Cy105 : PCBs 700 ppm;Bacillus sp. Cy105: 700 ppm PCBs;

바실러스 속(Bacillus sp.) Cy106 : PCBs 1,000 ppm;Bacillus sp. Cy106: 1,000 ppm PCBs;

바실러스 속(Bacillus sp.) Cy107 : PCBs 150 ppm;Bacillus sp. Cy107: 150 ppm PCBs;

바실러스 속(Bacillus sp.) EBC106 : PCBs 700 ppm, PCP 1,000 ppm, 다이옥신 300 ng/kg, 타르산, PCE 50,000 mg/kg, 톨루엔 50,000 mg/kg;Bacillus sp. EBC106: 700 ppm PCBs, 1,000 ppm PCP, dioxin 300 ng / kg, taric acid, PCE 50,000 mg / kg, toluene 50,000 mg / kg;

그람 양성 세균 Bs101: 타르산;Gram positive bacterium Bs101: taric acid;

그람 음성 세균 W24: TPH 100 ppm, 톨루엔 100 ppm;Gram negative bacteria W24: 100 ppm TPH, 100 ppm toluene;

유황 균주 Nz2001: 황(Sulphur), 타르산, 다이옥신 50 ng/kgSulfur Strain Nz2001: Sulphur, Taric Acid, Dioxin 50 ng / kg

EBC1000EBC1000 세균공동체의 분리, 동정 및 활성 Isolation, Identification and Activity of Bacterial Communities

하기에서는 본 발명에 따른 EBC1000세균 공동체의 분리, 동정 및 활성을 자세히 설명하고자 한다.Hereinafter will be described in detail the isolation, identification and activity of the EBC1000 bacterial community according to the present invention.

1. 난분해1.Hydrolysis 독성  toxicity 폐액Waste 폐기물을 분해할 수 있는  Which can disassemble waste 신규한New 세균 공동체의 분리 Isolation of Bacterial Communities

(1) 울산공단 등의 토양, 폐수에서 채집한 시료를 해역배출용 난분해성 폐액이 혼합된 액체배지에서 진탕배양하여 40여종의 미생물을 분리하는 단계(1) separating 40 kinds of microorganisms by shaking culture of samples collected from the soil and wastewater, such as Ulsan Industrial Complex, in a liquid medium mixed with difficult-to-dissolve wastewater

울산공단 등지에서 채집한 토양 각 1g, 폐수 각 10㎖을, 폐산, 폐알카리 폐수 액체배지(K2HPO4 0.65g, KH2PO4 0.17g, MgSO4 0.1g, NaNO3 0.5g과 의약품 산업폐액 및 석유화학폐액의 난분해성 화학물질이 함유된 폐산폐알카리성폐액 10%를 탈염수(deionized water)1l에 희석하여 형성한 배지, pH 0~14)와 염소화합물액체배지(K2HPO4 0.65g, KH2PO4 0.17g, MgSO4 0.1g, NaNO3 0.5g과 오염소화 페놀화합물(pentachlorophenol:PCP) 50 ppm을 deionized water 1l에 녹여 형성한 배지, pH 7.2)에 순차적으로 접종하고 20~30℃에서 5일 이상 진탕배양하였다. 1 g of soil collected from Ulsan Industrial Complex and 10 ml of waste water were collected from waste acid and waste alkaline wastewater liquid media (K 2 HPO 4 0.65 g, KH 2 PO 4 0.17 g, MgSO 4 A medium formed by diluting 10% of waste acid alkaline wastes containing 0.1g, 0.5g NaNO 3 and the non-degradable chemicals of pharmaceutical wastes and petrochemical wastes in 1l of deionized water, pH 0 ~ 14) and chlorine Liquid medium (K 2 HPO 4 0.65 g, KH 2 PO 4 0.17 g, MgSO 4 0.1 g, 0.5 g NaNO 3 and 50 ppm contaminated phenolic compound (pentachlorophenol: PCP) were sequentially inoculated in a medium formed by dissolving 1 l of deionized water (pH 7.2) and shaken for 5 days at 20-30 ° C.

상기 진탕배양액 1㎖를 취하여 폐산, 폐알카리 고체배지(폐산, 폐알카리 액체배지에 한천(agar)만 1.5% 첨가하여 형성한 배지, pH 중화)와 염소화합물고체배지(염소화합물 액체배지에 BTB 20㎎, 한천 1.5%를 첨가하여 형성한 배지)에 순차적으로 접종하고 20~30℃에서 3~10일간 배양하였다. Taking 1 ml of the shake culture solution, waste acid, waste alkali solid medium (waste acid, waste alkaline liquid medium formed by adding only 1.5% of agar (agar), medium neutralization) and chlorine compound solid medium (BTB 20 in chlorine compound liquid medium) ㎎, medium formed by adding 1.5% agar) was sequentially inoculated and incubated at 20-30 ° C for 3-10 days.

순수분리한 각 콜로니를 상기와 같은 배지에 재접종하여 진탕배양한 후, 개별적으로 형성된 각기 다른 모양의 콜로니 형태를 가지며 그 콜로니의 계대배양시 동일한 콜로니가 나타나는 유용세균 40 여종을 분리하였다.Each colony was purified by re-inoculation on the same medium as above, and then shaken and cultured, and 40 kinds of useful bacteria having separate colonies of different shapes and the same colonies when subcultured were isolated.

(2) (1)단계에서 분리된 세균들을 난분해성 폐액의 농도를 점차 증가시킨 배지에서 배양하여 9종의 강력한 세균들을 분리하는 단계(2) Separating 9 strong bacteria by culturing the bacteria isolated in step (1) in a medium gradually increasing the concentration of the hardly degradable waste liquid

상기 (1)단계에서 분리한 세균들을 의약품 산업폐액 및 석유화학폐액의 난분해성 화학물질이 함유된 원액폐액 및 폐액을 50%, 80% 첨가한 최소배지와 오염소화 페놀화합물(PCP) 500 ppm을 첨가한 최소배지에 각각 순차적으로 접종하여 상기 (1)단계와 같은 방법으로 반복하여, 보다 높은 농도에서 생존가능한 균주위주로 콜로니 형태에 따라 9종을 분리하였다. Bacteria isolated in step (1) were used for pharmaceutical wastes and petrochemical wastes. Inoculated sequentially in each of the minimum medium was added and repeated in the same manner as in step (1), nine species were isolated according to colony type mainly viable strain at a higher concentration.

여기서 얻은 9종의 세균들을 하나의 공동체로 구성하여 EBC1000으로 명명하였으며, 상기 세균 공동체를 이루는 각각의 세균을 각각 EBC100, 101, 103, 104, 105, 106, 107, 108 및 109로 명명하였다.The nine bacteria obtained here were composed of one community and named EBC1000, and each bacteria constituting the bacterial community was named EBC100, 101, 103, 104, 105, 106, 107, 108 and 109, respectively.

본 발명에 따른 세균 공동체 EBC1000은 1999년 8월12일 한국생명공학연구소내 유전자원센터에 기탁번호 KCTC 0652 BP로 국제기탁을 하였다The bacterial community EBC1000 according to the present invention was deposited internationally with the accession number KCTC 0652 BP at the Genetic Resource Center in Korea Biotechnology Research Institute on August 12, 1999.

2. 세균 공동체 2. Bacterial Community EBC1000의Of EBC1000 성장을 위한 최적조건 확립 Establish optimal conditions for growth

루리아-베르타니(Luria-Bertani)영양배지[박토-트립톤(bacto-tryptone) 10g, 박토-효모 추출물(bacto-yeast extract) 5g, NaCl 10g/탈염수 1l]에서 pH5~8, 온도 25~35℃, 진탕(shaking) 분당회전수 50~100rpm으로 24~48시간 배양하면 최적성장을 나타내며, 계대배양시에도 동일조건에서 잘 성장한다.PH5-8 at Luria-Bertani nutritional medium (10 g of bacto-tryptone, 5 g of bacto-yeast extract, 10 g of NaCl / l of demineralized water), temperature 25-35 ℃, shaking (shaking) 50 ~ 100rpm per minute incubation for 24 to 48 hours shows the optimum growth, even in subcultures grow well under the same conditions.

3. 세균 공동체 3. Bacterial Community EBC1000의Of EBC1000 동정 Sympathy

세균 공동체 EBC1000을 구성하고 있는 EBC 100, 101, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109 균주는 그람음성세균과 그람양성세균의 혼합상태였으며, 형태 및 크기가 각각 특이하였다. LB고체배지에서 24시간 동안 배양시 EBC100은 직경 1㎜의 원형콜로니, EBC101은 2㎜ 정도의 큰 원형, EBC103은 2㎜의 두꺼운 원형, EBC104와 EBC105는 0.5㎜정도의 작은 원형, EBC106은 3㎜정도의 두꺼운 모양, EBC107은 1.2㎜정도의 갈색 콜로니, EBC108은 1㎜정도의 노란색 콜로니, EBC109는 2㎜정도의 이중원형의 모양을 나타내었다. 9종의 균주는 호기성 및 통기성 균주들로서 EBC100, 101, 103, 106, 107, 108은 강산(pH3~4), 강알카리(pH9~11) 조건에서도 생존력이 강하였으며, EBC104, 105, 109는 생장이 느렸다. 운동성은 EBC100, 104, 105, 109에서 나타내었다. EBC 100, 101, 103, 104, 105, 106, 107, 108, and 109 strains of the bacterial community EBC1000 were mixed with Gram-negative bacteria and Gram-positive bacteria. Incubated for 24 hours in LB solid medium, EBC100 is 1mm in diameter, EBC101 is 2mm in diameter, EBC103 is 2mm thick, EBC104 and EBC105 is small 0.5mm, EBC106 is 3mm EBC107 is about 1.2mm brown colony, EBC108 is about 1mm yellow colony, EBC109 is about 2mm double circle. Nine strains are aerobic and breathable strains, and EBC100, 101, 103, 106, 107, and 108 have strong viability even under strong acid (pH3 ~ 4) and strong alkali (pH9 ~ 11) conditions, and EBC104, 105, and 109 grow. This was slow. Motility is shown in EBC100, 104, 105, and 109.

세균 공동체 EBC1000을 구성하는 균주들의 속(屬)을 살펴보면, EBC100, 101, 103은 클레브시엘라 속이고, EBC105는 프로비덴시아 속, EBC104 및 EBC109는 에스체리치아 속, EBC106은 바실러스 속에 속하고, EBC107은 그람음성세균, EBC108은 그람양성세균이다.In the genus of the strains constituting the bacterial community EBC1000, EBC100, 101 and 103 belong to the genus Klebsiella, EBC105 belong to the genus Providencia, EBC104 and EBC109 belong to the genus Escherichia, EBC106 belong to the genus Bacillus, EBC107 is Gram-negative bacteria and EBC108 is Gram-positive bacteria.

상기와 같은 각 균주의 특성을 정리하면 아래 표 6 내지 표 8와 같다.To summarize the characteristics of each strain as described above are shown in Table 6 to Table 8.

시 료sample EBC 100EBC 100 EBC 101EBC 101 EBC 103EBC 103 그람 균주
카탈라제
옥시다제
우레아제
시트라제 이용(Citrase utilizat.)
글루코스 이용(Glucose utilizat.)
V-P 시험
라이신 데카르복실라제
오르니틴 데카르복실라제
Gram strain
Catalase
Oxidase
Urease
Citrase utilizat.
Glucose utilizat.
VP test
Lysine decarboxylase
Ornithine decarboxylase
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시 료sample EBC 100EBC 100 EBC 101EBC 101 EBC 103EBC 103 이노시톨
아라비노스
만니톨
람노스
글루코스
소르비톨
α-시클로덱스트린
덱스트린
글리코겐
아도니톨(adonitol)
D-아라비톨
셀로비오스
D-프럭토오스
L-푸코스
D-갈락토스
α-락토스
말토스
D-라피노오스
D-트레할로스
메틸-파이루베이트
시트르산
포름산
말론산
숙신산
D-알라닌
L-알라닌
L-글루타민산
L-세린
D,L-락트산
운동성
D-만노스
Inositol
Arabinos
Mannitol
Rhamnos
Glucose
Sorbitol
α-cyclodextrin
dextrin
Glycogen
Adonitol
D-Arabitol
Cellobiose
D-fructose
L-fucose
D-galactose
α-lactose
Maltose
D-rapinose
D-trehalose
Methyl-pyruvate
Citric acid
Formic acid
Malonic acid
Succinic acid
D-alanine
L-alanine
L-glutamic acid
L-serine
D, L-lactic acid
motility
D-Mannose
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시 료sample EBC 104EBC 104 EBC 105EBC 105 EBC 109EBC 109 그람 균주
ONPG
아르기닌
라이신
오르니틴
구연산 나트륨
티오황산 나트륨
우레아
트립토판
인돌
파이루베이트 크레아틴 나트륨
콘 목탄 젤라틴(Kohn Charcoal Gelatin)
글루코스, 질산칼륨
만티올(Mantiol)
이노시톨
람노스
수크로스
멜리바이오스
아미그달린
아라비노스
산화효소
질산염의 아질산염으로의 환원
질산염의 N2가스로의 환원
운동성(Mobility)
글루코스의 산화
글루코스의 발효
항생제 내성

Gram strain
ONPG
Arginine
Lysine
Ornithine
Sodium citrate
Sodium thiosulfate
Urea
Tryptophan
Indole
Pyruvate creatine sodium
Kohn Charcoal Gelatin
Glucose, potassium nitrate
Manantiol
Inositol
Rhamnos
Sucrose
Melibiose
Amigdalin
Arabinos
Oxidase
Reduction of Nitrate to Nitrite
Reduction of Nitrate to N 2 Gas
Mobility
Oxidation of glucose
Fermentation of glucose
Antibiotic resistance

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Tc R

한편, 가스 크로마토그래피를 통해 각 균주의 지방산 메틸에스테르(Fatty Acid Methyl Esters: FAMEs)분석을 하였다.Meanwhile, fatty acid methyl esters (FAMEs) of each strain were analyzed by gas chromatography.

FAMEs 분석에는 휴렛팩커드 시리즈 Ⅱ 가스 크로마토그래피 모델 5890A(Hewlett Packard series ⅡGas Chromatograph model 5890A; Microbial ID. Inc., Delaware, USA)가 이용되었으며, 분리 칼럼(sepation column)은 25m×0.22㎜×0.33㎛ 메틸페닐실리콘이 융합된 모세관 칼럼(HP 19091B-102)을 사용하였다. Hewlett Packard series II Gas Chromatograph model 5890A (Microbial ID. Inc., Delaware, USA) was used for the analysis of FAMEs, and the separation column was 25m × 0.22mm × 0.33㎛ methylphenylsilicone. This fused capillary column (HP 19091B-102) was used.

상기 가스 크로마토그래피의 조건은, 운반가스(carrier gas)는 수소이고, 칼럼상부압력(column Head Pressure)은 10psi이고, 분할비(split ratio)는 100:1이며, 분할 배기구멍(split vent)는 50㎖/분이고, 격막 퍼지(Septum Purge)는 5㎖/분이며, FID 수소는 30㎖/분이고, FID 질소는 30㎖/분이며, FID 공기는 400㎖/분이고, 초기 온도는 170℃이며, 프로그램 속도는 5℃/분이고, 최종온도는 270℃이며, FID 온도는 300℃이고, 주입포트는 250℃이며, 주입 부피는 2㎕이다.In the gas chromatography, the carrier gas is hydrogen, the column head pressure is 10 psi, the split ratio is 100: 1, and the split vent is 50 ml / min, Septum Purge is 5 ml / min, FID hydrogen is 30 ml / min, FID nitrogen is 30 ml / min, FID air is 400 ml / min, initial temperature is 170 ° C., The program rate is 5 ° C./min, the final temperature is 270 ° C., the FID temperature is 300 ° C., the injection port is 250 ° C. and the injection volume is 2 μl.

FAMEs 그래프는 미생물 동정 시스템 소프트웨어(Microbial Identification System Software; Microbial ID, Inc., Delaware, USA)를 이용하였으며 표준 혼합물(standard calibration mixture; Microbial ID, Inc., Delaware, USA)와 비교하여 피크 동정, 정체 시간, 피크 영역, 피크 퍼센트를 구하였다.The FAMEs graph used Microbial Identification System Software (Microbial ID, Inc., Delaware, USA) and peak identification and stagnation compared to a standard calibration mixture (Microbial ID, Inc., Delaware, USA). The time, peak area, and peak percentage were obtained.

EBC100, 101, 103 각 균주에 대한 FAMEs분석 결과, EBC100의 세포내 지방산 조성(cellular fatty acids composition)은 C12:0, C14:0, C16:0, C16:1, C17:0 cyclo, C14:0 3OH 이며, EBC101은 C12:0, C14:0, C15:0, C16:0, C17:0 cyclo, C14:0 3OH이다. EBC103은 C14:0, C15:0, C16:0, C17:0 cyclo, C14:0 3OH로 나타났다.As a result of analysis of FAMEs for each strain of EBC100, 101 and 103, the cellular fatty acids composition of EBC100 was C12: 0, C14: 0, C16: 0, C16: 1, C17: 0 cyclo, C14: 0 3OH, EBC101 is C12: 0, C14: 0, C15: 0, C16: 0, C17: 0 cyclo, C14: 0 3OH. EBC103 was found to be C14: 0, C15: 0, C16: 0, C17: 0 cyclo, C14: 0 3OH.

4. 세균 공동체 4. Bacterial Community EBC1000을EBC1000 구성하는 각 세균들의 분리 Isolation of each bacterium

세균 공동체 EBC1000에서 개별균주를 분리하는 방법은 다음과 같다.The method of separating individual strains from bacterial community EBC1000 is as follows.

EBC106(바실러스 속), EBC107(그람음성세균) 및 EBC108(그람양성세균)은, 루리아-베르타닌 한천(박토-트립톤 10g, 박토-효모 추출물 5g, NaCl 10g, 한천 1.5% + 950㎖ 탈염수)의 영양소 고체배지에서 배양하면, EBC106은 전형적인 바실러스 형태의 두꺼운 주름모양이고, EBC107은 갈색 콜로니, EBC108은 노란색 콜로니의 형태적 특징으로 구별될 수 있다.EBC106 (genus Bacillus), EBC107 (Gram-negative bacteria) and EBC108 (Gram-positive bacteria) were composed of Luria-Bertan agar (10 g of Bacterium-Tryptone, 5 g of Bacterium-Yeast Extract, 10 g of NaCl, 1.5% of agar, 950 ml demineralized water) When cultured in nutrient solid medium of EBC106, the typical Bacillus-shaped thick wrinkles, EBC107 can be distinguished by the morphological features of brown colony, EBC108 is yellow colony.

그외 균주들은 데스옥시콜레이트 아가[Desoxycholate agar; 박토 펩톤 10g, 박토 락토스 10g, 데스옥시콜레이트 나트륨 1g, 염화나트륨 5g, 이칼륨(dipotassium) 2g, 구연산 철(Fe citrate) 1g, 구연산 나트륨(sodium citrate) 1g, 박토 한천(bacto agar) 15g, 뉴트랄 레드(neutral red) 0.03g/탈염수(deionized water) 1l- Difco manual, 1984]에서 세균공동체 EBC1000을 희석도말하면 각 균주의 콜로니 형태를 확인할 수 있다. 24시간 데스옥시콜레이트 아가에 배양하고 나면 EBC100, 101, 103은 붉은색상에 흰색의 점성이 나타나며, 크기상 미세한 차이를 보인다. EBC104는 붉은색에 흰부분이 나타나며 무점성이며, EBC105는 갈색, EBC106, 107은 엷은 갈색, EBC108은 무색, EBC109는 붉은색에 점성을 나타낸다(Dictionary of Microbiology and Molecular Biology, 2nd, Paul Singleton Diana Sainsbury 1987).Other strains include Desoxycholate agar; 10 g of Bactobacillus peptone, 10 g of Bactobacillus lactose, 1 g of sodium desoxycholate, 5 g of sodium chloride, 2 g of dipotassium, 1 g of Fe citrate, 1 g of sodium citrate, 15 g of bacto agar, neutral The colony morphology of each strain can be confirmed by diluting the bacterial community EBC1000 in 0.03 g of red red / deionized water 1-Difco manual, 1984]. After incubation in desoxycholate agar for 24 hours, EBC100, 101, and 103 showed reddish white viscosities and slight differences in size. EBC104 is red and white and viscous, EBC105 is brown, EBC106, 107 is light brown, EBC108 is colorless, and EBC109 is red (Dictionary of Microbiology and Molecular Biology, 2nd, Paul Singleton Diana Sainsbury 1987).

5. 세균 공동체 5. Bacterial Community EBC1000의Of EBC1000 특성 characteristic

(1) 세균 공동체 EBC1000에 의한 알킬아릴나프탈렌 설폰산 나트륨(sodium alkylarylnaphthalene sulfonate: Tamol-SN)의 분해속도(1) Degradation rate of sodium alkylarylnaphthalene sulfonate (Tamol-SN) by bacterial community EBC1000

K2HPO4 0.065g, KH2PO4 0.017g, MgSO4 0.1g, NaNO3 0.5g을 탈염수 1ℓ에 용해시켜 만든 최소배지(pH 7.2)에 Tamol-SN을 500, 1000, 2000, 4000 ppm으로 점차 증가하여 투여하고 세균 공동체 EBC1000을 접종한 뒤 시간별로 흡광도와 Tamol의 농도를 측정하였다. K 2 HPO 4 0.065 g, KH 2 PO 4 0.017 g, MgSO 4 In a minimum medium (pH 7.2) made by dissolving 0.1 g and 0.5 g of NaNO 3 in 1 L of demineralized water, Tamol-SN was gradually increased to 500, 1000, 2000, and 4000 ppm, and the bacterial community EBC1000 was inoculated. The concentration of tamol was measured.

Tamol-SN(ppm)Tamol-SN (ppm) 분해속도(㎎/l/h)Degradation rate (mg / l / h) 500
1000
2000
4000
500
1000
2000
4000
1.3
3.8
5.2
4.0
1.3
3.8
5.2
4.0

표 9에 나타난 바와 같이, 시간당 Tamol의 분해속도는 500 ppm일 때 분해속도는 1.3(㎎/l/h)이고, 4000 ppm일 때는 4.0(㎎/l/h)이었다.As shown in Table 9, the decomposition rate of tamol per hour was 500 ppm, and the decomposition rate was 1.3 (mg / l / h) and 4.0 (mg / l / h) at 4000 ppm.

(2) 세균 공동체 EBC1000에 의한 오염소화 페놀화합물(PCP)의 분해속도(2) Degradation Rate of Digestive Phenol Compounds (PCP) by Bacterial Community EBC1000

상기 (1)과 같은 최소액체배지 조건에 BTB 20mg를 탈염수 1l에 용해시켜 만든 후 오염소화 페놀화합물(PCP)을 표 4와 같이 투여하고 세균 공동체 EBC1000을 접종한 뒤 시간별로 흡광도와 오염소화 페놀화합물(PCP)의 농도를 측정하였다. 그 결과는 표 10에 나타나 있다. After dissolving BTB 20mg in 1L of demineralized water under the minimum liquid medium conditions as shown in (1), the contaminated digestive phenolic compound (PCP) was administered as shown in Table 4, and the inoculation of bacterial community EBC1000 was inoculated with absorbance and contaminated digestive phenolic compound over time. The concentration of (PCP) was measured. The results are shown in Table 10.

오염소화 페놀화합물(PCP)(ppm)Digestive Phenolic Compounds (PCP) (ppm) 분해속도(㎎/l/h)Degradation rate (mg / l / h) 200
500
1000
2000
200
500
1000
2000
0.9
6.5
5.0
4.5
0.9
6.5
5.0
4.5

세균 공동체 Bacterial community NBC2000NBC2000  And EBC1000EBC1000 각 균주의 조합에 따른 구제역  Foot-and-mouth disease by combination of each strain 바이러스로인한Due to virus 사체의 분해 및 사체  Body disintegration and carcass 매몰지Investment 환경의 정화능력 Environmental purification

개별균주의 분해능은 제한적이지만 NBC2000 또는 EBC1000 전체 또는 그 구성 균주들의 각 조합별 세균 공동체를 구제역 사체 또는 사체 매몰지 오염 환경에 처리하면 더 광범하고 효율적인 분해효과가 나타난다. 이는 NBC2000 및 EBC1000을 구성하는 개별균주의 기능보다는 세균 공동체로서의 상호협력으로 인한 창발성의 상승효과는 매우 크다고 볼 수 있다. 어떤 균주도 단일 균주로서는 구제역 사체를 효과적으로 분해할 수 없으나, NBC2000 각 균주들과 EBC1000(KCTC0652 BP) 각 균주들의 조합에 따라서는 균주간의 상호보완 및 군집내의 유전자 전이 교환방식으로 인하여 효율적인 분해효과를 나타내게 된다. 이를 입증하기 위하여, 본 발명자는 다음과 같은 실험을 수행하였다.Although the resolution of individual strains is limited, the treatment of bacterial communities of NBC2000 or EBC1000 as a whole or each combination of constituent strains in foot-and-mouth or carcass burial contaminated environments results in more extensive and efficient degradation. This is a synergistic effect of emergence due to mutual cooperation as a bacterial community rather than the function of individual strains constituting NBC2000 and EBC1000. No single strain can effectively destroy foot-and-mouth carcasses in a single strain, but according to the combination of each strain of NBC2000 and each strain of EBC1000 (KCTC0652 BP), the strains can be effectively complemented by complementary strains and gene transfer exchange in the community. do. In order to prove this, the inventor performed the following experiment.

이하, 본 발명은 다음 실험예에 의거하여 구체적으로 설명하겠는 바, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail based on the following experimental examples, but the present invention is not limited thereto.

NBC2000세균공동체NBC2000 bacterial community  And EBC1000세균공동체에서EBC1000 bacteria community 선택된 혼합세균공동체의 구제역 바이러스를 제어할 수 있는 극한 환경의 적응 균주 선별 Selection of Adaptive Strains in Extreme Environments to Control Foot-and-mouth Viruses in Selected Mixed Bacterial Communities

상기의 미생물 분리과정에서 선택된 현장적용 균주들에서, 그람 양성 및 그람 음성세균들로서, 호기성, 혐기성 측면에서 두루 적용 가능한 통기성 균주들이며, 기존의 유해화합물 중 PCBs, PCP, TPH, 기타 난분해 독성물질의 분해능이 우수한 균주를 선택 조합하였다. In the field application strains selected in the above microbial separation process, gram positive and gram negative bacteria, aerobic, anaerobic and aerobic strains that can be applied throughout, and the existing harmful compounds of PCBs, PCP, TPH, other hardly toxic substances Strains with good resolution were selected and combined.

가축사체의 미생물 대사활동 및 구제역 바이러스를 제어할 수 있는 극한환경 적응 균주에 미생물 선택조합의 초점을 두었다. 이에 선별된 균주는 하기와 같았다.The microbial selection combination was focused on the microbial metabolism of livestock carcasses and the adaptation of extreme environmental strains to control foot-and-mouth disease viruses. The selected strains were as follows.

Bacillus stearothermophilus cy104, Bacillus stearothermophilus cy104,

Bacillus cerus ebc106,Bacillus cerus ebc106,

Bacillus sp. cy105,Bacillus sp. cy105,

Bacillus sp. cy106,Bacillus sp. cy106,

Bacillus sp. cy107, Bacillus sp. cy107,

Pseudomonas aeruginosa Tnh, Pseudomonas aeruginosa Tnh,

Pseudomonas sp. cy100, Pseudomonas sp. cy100,

Pseudomonas sp. Djhc, Pseudomonas sp. Djhc,

Pseudomonas sp. ebc107,Pseudomonas sp. ebc107,

Pseudomonas sp. Ntar3, Pseudomonas sp. Ntar3,

Aeromonas hydrophila Aeng17,Aeromonas hydrophila Aeng17,

Serratia sp. Aeng18, Serratia sp. Aeng18,

Serratia sp. Ntar2,Serratia sp. Ntar2,

Chryseomonas luteola GC300,Chryseomonas luteola GC300,

Chryseomonas sp. GC500Chryseomonas sp. GC500

상기와 같이 선별된 균주를 dailbiotech1200 균주로 하고, 하기와 같은 과정을 통해 구제역 매몰지의 실증조사를 통하여 실험하였다.The strain selected as described above was dailbiotech1200 strain, and was tested through empirical investigation of foot-and-mouth disease burial site as follows.

구제역 Foot and mouth disease 가축매몰지Cattle burial 및 침출수의 생물학적 정화 And biological purification of leachate

1. 개요1. Overview

구제역 가축매몰지에 대해 사체부숙 발효촉진과 침출수에 대한 생물학적인 친환경 처리로 매몰지를 정화하고 복원하기 위한 현장실증 실험을 실시하였다.On-site empirical experiments were conducted to purify and restore the burial site by promoting fermentation of dead bodies and biologically friendly treatment of leachate.

2. 처리 대상2. Processing target

처리 대상으로 대조구로 사용된 A-B 농가, 시험구로 사용된 C-E 농가를 하기표 11와 같이 선정하였다.The A-B farmhouse used as a control and the C-E farmhouse used as a test were selected as Table 11 below.

농가명Farm Name 위치location 살처분Killing 두수 Head
(돼지)(pig)
비 고Remarks
AA 백암면 석천리 396-1396-1, Seokcheon-ri, Baekam-myeon 4,1844,184 용인시 /대조구Yongin / Daejo-gu BB 백암면 용천리 348-1348-1, Yongcheon-ri, Baekam-myeon 1,4021,402 용인시 /대조구Yongin / Daejo-gu CC 백암면 용천리 378-5378-5, Yongcheon-ri, Baekam-myeon 2,154(150톤)2,154 (150 tons) dailbiotech1200dailbiotech1200 DD 백암면 용천리 617-11
617-11, Yongcheon-ri, Baekam-myeon
2,489(320톤)
2,489 (320 tons)
dailbiotech1200
dailbiotech1200
EE 백암면 박곡리 217217, Parkgokri, Baekam-myeon 5,627(170톤)5,627 (170 tons) dailbiotech1200dailbiotech1200

3. 처리 절차3. Processing Procedure

(1) 가축 매몰지 현장확인/ 사체부숙발효 촉진(사체용해)(1) On-site verification of livestock burial site / Promotion of carcass fermentation (carcass lysis)

(2) 침출수 유해성분 측정 및 정화-침출수 후속 처리(2) Determination of harmful components of leachate and subsequent treatment of leachate

(3) 매몰지 토양 정화(3) Burial Soil Purification

(4) 지하수 정화(4) groundwater purification

(5) 매몰지 토양의 현장 상태의 자연퇴비화 (5) Natural composting of field conditions of buried soil

4. 4. 대조구Control 매몰지의Buried 침출수 초기 분석 Leachate Initial Analysis

대조구로 사용된 A 농가 및 B 농가의 침출수의 초기 분석을 경기도보건환경연구원을 통해 시행하였고, 시험성적서 결과는 하기와 같았다.The initial analysis of leachate water from farms A and B used as a control was conducted by the Gyeonggi-do Institute of Health and Environment, and the test results were as follows.

백암면 용천리 348-1(B)348-1, Yongcheon-ri, Baekam-myeon 백암면 석천리 396-1(A)396-1, Seokcheon-ri, Baekam-myeon (A) BOD(mg/L)BOD (mg / L) 33.733.7 3688.03688.0 COD(mg/L)COD (mg / L) 575.3575.3 5945.45945.4 T-P(mg/L)T-P (mg / L) 0.1140.114 2.2522.252 Cu(mg/L)Cu (mg / L) 0.0130.013 NDND Cr(mg/L)Cr (mg / L) NDND 0.020.02 Cd(mg/L)Cd (mg / L) NDND 0.0060.006 Pb(mg/L)Pb (mg / L) NDND NDND Mn(mg/L)Mn (mg / L) 1.4831.483 1.2651.265 Fe(mg/L)Fe (mg / L) 0.360.36 25.2025.20 Zn(mg/L)Zn (mg / L) 0.1060.106 0.2670.267 무기성질소 (mg/L)Inorganic Nitrogen (mg / L) 00 22 총대장균군(개/ml)Total coliform group (dog / ml) 200200 <30<30 암모니아성질소(mg/L)Ammonia nitrogen (mg / L) 220.01220.01 1503.301503.30

5. 5. 시험구Test 매몰지Investment 침출수지 초기분석 Leach Resin Initial Analysis

시험구로 사용된 C 농가 내지 E 농가의 침출수의 초기 분석을 경기도보건환경연구원을 통해 시행하였고, 시험성적서 결과는 하기 표 13과 같았다.Initial analysis of leachate water from farms C to E used as test zones was conducted by the Gyeonggi-do Institute of Health and Environment, and the test report results are shown in Table 13 below.

CC DD EE BOD(mg/L)BOD (mg / L) 23.623.6 23.123.1 46.646.6 COD(mg/L)COD (mg / L) 423.5423.5 536.4536.4 257.6257.6 T-P(mg/L)T-P (mg / L) 0.1250.125 0.1530.153 0.0360.036 Cu(mg/L)Cu (mg / L) 0.0200.020 NDND NDND Cr(mg/L)Cr (mg / L) NDND NDND NDND Cd(mg/L)Cd (mg / L) NDND NDND NDND Pb(mg/L)Pb (mg / L) NDND NDND NDND Mn(mg/L)Mn (mg / L) 1.3301.330 0.4650.465 22.68022.680 Fe(mg/L)Fe (mg / L) 5.485.48 8.288.28 49.4349.43 Zn(mg/L)Zn (mg / L) 0.0680.068 0.0720.072 0.0380.038 무기성질소 (mg/L)Inorganic Nitrogen (mg / L) 29.229.2 27.227.2 29.329.3 총대장균군(개/ml)Total coliform group (dog / ml) <30<30 5555 100100 암모니아성질소(mg/L)Ammonia nitrogen (mg / L) 844.46844.46 1110.401110.40 28.9528.95

6. 6. 시험구Test C 농가  C farmhouse 매몰지Investment 침출수 토착 미생물 조사결과 Leachate Indigenous Microbial Survey Results

시험구 C 농가 매몰지 침출수, 미생물 투입전 토착 미생물의 바실러스 속, 수도모나스 속 및 전체 세균을 2.8. 경기도보건환경연구원을 통해 분석한 결과는 하기 표 14와 같았다.Test District C Farmhouse Landfill Leachate, Bacillus spp., Pseudomonas spp. The results analyzed by Gyeonggi-do Institute of Health and Environment were as shown in Table 14.

성분명Ingredient Name 분석결과(단위)Analysis result (unit) Baciilus sp.Baciilus sp. 2.0 X 104 CFU/mL2.0 X 10 4 CFU / mL Pseudomonas sp.Pseudomonas sp. 1.6 X 105 CFU/mL1.6 X 10 5 CFU / mL 총 세균 gun Germ 4.3 X 105 CFU/mL4.3 X 10 5 CFU / mL

상기와 같이 본원발명의 세균공동체 투입 전 각 농가 침출수의 성분 및 토착 미생물을 분석하였다. 분석이 완료된 후 하기와 같은 방법으로 본원발명의 세균공동체인 dailbiotech 1200을 투여하였다.As described above, the components and indigenous microorganisms of each farm leachate were analyzed before introduction of the bacterial community of the present invention. After the analysis was completed, dailbiotech 1200, a bacterial community of the present invention, was administered in the following manner.

7. 투입미생물 7. Input microorganisms dailbiotech1200dailbiotech1200 투입횟수 및 투입량 Input frequency and input amount

시험구에 해당하는 C, D 및 E 농가에 하기와 같은 방법으로 세균공동체를 투입하였다.Bacterial community was added to the C, D and E farms corresponding to the test zone as follows.

(1) 미생물 투입횟수(1) Microbial input frequency

2012. 2.8(1차), 2.16(2차), 2.23(3차), 3.2(4차), 3.12(5차), 3.19(6차), 3.26(7차), 4.2(8차), 4.9(9차)2012.2.8 (1st), 2.16 (2nd), 2.23 (3rd), 3.2 (4th), 3.12 (5th), 3.19 (6th), 3.26 (7th), 4.2 (8th), 4.9 (9th order)

(2) 미생물 총투입량 (2) Total microbial input

-C 농가 (매몰량 150톤) : 3,135 리터 -C Farmhouse (buying 150 tons): 3,135 liters

-D 농가 (매몰량 320톤) : 6,050 리터 -D Farmhouse (buying 320 tons): 6,050 liters

-E 농가 (매몰량 170톤) : 7,930 리터 -E Farmhouse (buying 170 tons): 7,930 liters

8. 8. 시험구의Test 매몰지Investment 침출수질Leachate 1차 분석결과 Primary analysis result

시험구의 매몰지에서 미생물을 2차 투입 후 2.17 에 매몰지 침출수질을 경기도보건환경연구원을 통해 1차 분석한 결과는 하기와 같았다.The results of the first analysis of the landfill leachate quality at 2.17 after the second injection of microorganisms from the investment site were as follows.

CC DD EE BOD(mg/L)BOD (mg / L) 157.2157.2 377.4377.4 102.9102.9 COD(mg/L)COD (mg / L) 313.6313.6 622.6622.6 226.8226.8 T-P(mg/L)T-P (mg / L) 1.5101.510 1.0901.090 0.2700.270 Cu(mg/L)Cu (mg / L) 0.0140.014 0.0240.024 0.0120.012 Cr(mg/L)Cr (mg / L) NDND NDND NDND Cd(mg/L)Cd (mg / L) NDND NDND NDND Pb(mg/L)Pb (mg / L) NDND NDND NDND Mn(mg/L)Mn (mg / L) 0.4940.494 1.2691.269 10.12010.120 Fe(mg/L)Fe (mg / L) 6.136.13 8.028.02 33.3633.36 Zn(mg/L)Zn (mg / L) 0.2760.276 0.1330.133 0.1450.145 무기성질소 (mg/L)Inorganic Nitrogen (mg / L) 76.676.6 138.3138.3 9.19.1 총대장균군(개/ml)Total coliform group (dog / ml) 7400074000 5400054000 3800038000 암모니아성질소(mg/L)Ammonia nitrogen (mg / L) 76.1676.16 137.95137.95 8.708.70

9. 시험구인 C 농가 9. Farm C, Test District 매몰지의Buried 침출수 미생물 분석 Leachate Microbial Analysis

시험구인 C 농가에 미생물을 3차 투입 후 2.29 에 매몰지 미생물을 경기도보건환경연구원을 통해 분석한 결과는 하기와 같았다.The microorganisms of the buried microorganism were analyzed by the Gyeonggi-do Institute of Health and Environment at 2.29 after the third injection of microorganisms into farm C, a test zone.

성분명Ingredient Name 분석결과(단위)Analysis result (unit) Baciilus sp.Baciilus sp. 미검출Not detected Pseudomonas sp.Pseudomonas sp. 6.5 X 106 CFU/mL6.5 X 10 6 CFU / mL 총 세균 gun Germ 1.6 X 107 CFU/mL1.6 X 10 7 CFU / mL

10. 10. 시험구의Test 매몰지Investment 침출수질Leachate 2차 분석결과 2nd analysis result

시험구의 매몰지에서 미생물을 4차 투입 후 3.2 에 매몰지 침출수질을 경기도보건환경연구원을 통해 2차 분석한 결과는 하기와 같았다.The secondary analysis of the leachate quality of the buried land at 3.2 after the 4th injection of microorganisms from the invested land was as follows.

CC DD EE BOD(mg/L)BOD (mg / L) 731.0731.0 664.0664.0 544.0544.0 COD(mg/L)COD (mg / L) 793.8793.8 800.8800.8 973.0973.0 T-P(mg/L)T-P (mg / L) 2.2962.296 7.1177.117 1.3871.387 Cu(mg/L)Cu (mg / L) 0.0300.030 0.0330.033 0.0210.021 Cr(mg/L)Cr (mg / L) 0.010.01 0.020.02 0.020.02 Cd(mg/L)Cd (mg / L) NDND NDND NDND Pb(mg/L)Pb (mg / L) NDND NDND NDND Mn(mg/L)Mn (mg / L) 0.0660.066 2.3262.326 4.0664.066 Fe(mg/L)Fe (mg / L) 25.4125.41 40.9340.93 43.5643.56 Zn(mg/L)Zn (mg / L) 0.4230.423 0.3670.367 4.8324.832 무기성질소 (mg/L)Inorganic Nitrogen (mg / L) 61.7661.76 78.4278.42 118.28118.28 총대장균군(개/ml)Total coliform group (dog / ml) 180000180000 220000220000 280000280000 암모니아성질소(mg/L)Ammonia nitrogen (mg / L) 61.7061.70 78.3578.35 118.20118.20

11. 11. 대조구Control  And 시험구의Test 매몰지Investment 침출수질Leachate 3차 분석결과 3rd analysis result

대조구 및 시험구의 매몰지에서 미생물을 8차 투입 후 4.3 에 매몰지 침출수질을 경기도보건환경연구원을 통해 3차 분석한 결과는 하기와 같았다.The results of the third analysis of the landfill leachate quality at 4.3 after 8 microorganisms were injected from control and test sites were as follows.

시험구
(C)
Test
(C)
대조구
(B)
Control
(B)
대조구
(A)
Control
(A)
시험구
(D)
Test
(D)
시험구
(E)
Test
(E)
BOD(mg/L)BOD (mg / L) 830.0830.0 36.836.8 9880.09880.0 3940.03940.0 580.5580.5 COD(mg/L)COD (mg / L) 1027.01027.0 349.0349.0 13843.313843.3 8681.38681.3 729.9729.9 Cu(mg/L)Cu (mg / L) 0.0410.041 NDND 0.0080.008 NDND NDND Cr(mg/L)Cr (mg / L) NDND NDND NDND NDND 0.050.05 Cd(mg/L)Cd (mg / L) NDND NDND NDND NDND 0.0170.017 Pb(mg/L)Pb (mg / L) NDND NDND NDND NDND NDND Mn(mg/L)Mn (mg / L) 0.0120.012 0.4550.455 1.1561.156 4.8704.870 39.40039.400 Fe(mg/L)Fe (mg / L) 0.690.69 4.144.14 8.338.33 68.4468.44 285.10285.10 Zn(mg/L)Zn (mg / L) 0.0800.080 0.0550.055 0.2440.244 0.2530.253 1.9571.957 무기성질소 (mg/L)Inorganic Nitrogen (mg / L) 89.9389.93 244.21244.21 1874.871874.87 473.90473.90 42.0742.07 총대장균군(개/ml)Total coliform group (dog / ml) 32003200 5656 37003700 70007000 15001500 암모니아성질소(mg/L)Ammonia nitrogen (mg / L) 89.7089.70 244.00244.00 1874.001874.00 473.50473.50 41.6541.65 총인(mg/L)Total phosphorus (mg / L) 12.83112.831 0.4020.402 1.2771.277 7.3727.372 1.5021.502

12. 시험구인 C 농가 12. Farm C, a test zone 매몰지의Buried 침출수 미생물 분석 Leachate Microbial Analysis

시험구인 C 농가에 미생물을 8차 투입 후 4.2 에 경기도보건환경연구원을 통해 매몰지 미생물을 분석한 결과는 하기와 같았다.After the 8th microorganism was injected into farm C, test area, the result of analysis of burial microorganism through 4.2 Gyeonggi-do Institute of Health and Environment was as follows.

성분명Ingredient Name 분석결과(단위)Analysis result (unit) Baciilus sp.Baciilus sp. 2.6 X 105 CFU/mL2.6 X 10 5 CFU / mL Pseudomonas sp.Pseudomonas sp. 1.8 X 106 CFU/mL1.8 X 10 6 CFU / mL 총 세균 gun Germ 8.0 X 106 CFU/mL8.0 X 10 6 CFU / mL

13. 13. 시험구Test 매몰지에Buried 미생물을 9차 투입 9th microorganism

시험구인 C 농가, D 농가 및 E 농가에 미생물을 9차 투입하였다. 투입사진은 하기 도 1a 내지 도 1c와 같았다. 도 1a는 C 농가에 미생물을 9차 투입하는 사진, 도 1b는 D 농가에 미생물을 9차 투입하는 사진이며, 도 1c는 E 농가에 미생물을 9차 투입하는 사진이다.Microorganisms were injected into the farms C, D and E, which were tested 9 times. The charged picture was as shown in Figures 1a to 1c. Figure 1a is a 9th photo of microorganisms in the C farm, Figure 1b is a 9th photo of microorganisms in the D farm, Figure 1c is a 9th microorganisms of the microorganisms in the E farmhouse.

14. 14. 대조구Control  And 시험구Test 매몰지의Buried 분석 결과 종합 Analysis result synthesis

대조구 매몰지에 대하여 분석한 침출수질 결과, 시험구 매몰지에 대하여 1차, 2차 및 3차로 분석한 침출수질 결과, 시험구 매몰지 중 C 농가의 미생물 종합분석 결과를 하기 표 20과 같은 판단 기준에 따라 종합하였다.The leachate quality results analyzed for the control site investment, the leachate quality results analyzed for the first, second and third analysis of the test site investment site, and the results of the comprehensive analysis of microorganisms of the C farmers in the test site investment site according to the criteria as shown in Table 20 below. Were synthesized accordingly.

항 목Item 판 단Judgment 방 법Way BOD BOD - 부숙발효에 의한 고농도 유기질 천연비료-High concentration organic natural fertilizer by ripening fermentation COD(Cr) COD (Cr) - 부숙발효에 의한 고농도 유기질 천연비료-High concentration organic natural fertilizer by ripening fermentation 용해성 Fe Soluble Fe - 사체에서 유출된 성분으로서 농도가 높을수록 부숙 발효과정이 많이 진행된 상태 - The higher the concentration, the more the fermentation process has progressed. 용해성 Mn Soluble Mn - 사체에서 유출된 성분으로서 농도가 높을수록 부숙 발효과정이 많이 진행된 상태 - The higher the concentration, the more the fermentation process has progressed. NH₃-N NH₃-N -사체부숙발효의 지표로서 증감을 나타내어 발효진행을 확인가능-It is possible to confirm the fermentation progress by showing the increase and decrease as an indicator of fermentation 무기성-N Inorganic-N - 암모니아와 같이 사체부숙발효의 지표 -Indicators of cadaveric fermentation, such as ammonia 대장균군수 (/mL)
총인
일반 미생물분석
Coliform count (/ mL)
A total person
General Microbial Analysis
-지표세균으로 대장균군수의 변화에 따라 유해성균주의 상태를 확인가능
-사체부숙에 의한 조직 세포에서 유리된 인의 확인
-토착 및 투입 미생물의 거동 확인
-As indicator bacteria, the status of harmful strains can be checked according to the change in the coliform count.
Identification of Free Phosphorus in Tissue Cells by Corporal Maturation
-Confirm the behavior of indigenous and input microorganisms

(1) 미생물 분석(1) microbial analysis

3개의 대상 시험구 매몰지에서 C 농가를 대표로 하여 바실러스, 수도모나스 등의 대표 미생물과 기타 미생물 분석을 한 결과 토착미생물은 104 ~105정도였으나, dailbiotech1200을 1차 투입한 이후에는 약 100배 이상 증가되었다. 8차 투입 이후는 다시 감소하는 경향을 나타내어, 투입한 미생물이 접근한 사체조직은 발효에 의한 생분해가 잘 진행되었음을 보여주었다. 이는 투입된 미생물의 현장적응력과 활성능력이 대단히 크다는 것을 의미한다.Analysis of representative microorganisms such as Bacillus and Pseudomonas and other microorganisms on the C investment site of three test plots showed that indigenous microorganisms were about 10 4 to 10 5 , but after the first injection of dailbiotech1200, 100 Increased more than twice. After the 8th dose, it showed a tendency to decrease again, indicating that the cadaveric tissues to which the injected microorganisms approached showed good progress of biodegradation by fermentation. This means that the on-site adaptation and activity capacity of the introduced microorganism is very large.

(2) (2) 대조구Control 매몰지의Buried 침출수질Leachate 분석 analysis

2개의 매몰지 대조구(A 및 B 농가)는 용인시에서 추천한 시험구와 가장 유사한 현장 사이트이다. 초기와 3차 분석 비교 시에 침출 수질의 주요 8항목에서, 무기성 질소와 대장균 군수에서만 일부 변화가 있었고 그외 항목은 정체된 상태로 있었다. 이는 외부의 정화 처리가 없이는 자연적인 자체정화가 안되거나 대단히 느린 속도로 진행될 수 있음을 보여주고 있다.The two burial plots (A and B farms) are the site sites most similar to the test plots recommended by Yongin. In comparison with the initial and tertiary analyzes, in the eight major categories of leachate water, there were some changes in the inorganic nitrogen and E. coli populations, and others remained stagnant. This shows that without external purification, natural self-purification can occur or can proceed at a very slow rate.

(3) (3) 시험구Test 매몰지의Buried 침출수질Leachate 분석 analysis

2012년 2월 8일 초기상태에서 4월 2일 3차 결과에 갈수록 침출수질의 주요평가지표 13개중 8개항목에서, BOD와 COD는 점증적인 증가현상을 보였으며 특히 D 농가에서 높은 증가를 보였다. From the initial stage of February 8, 2012 to the 2nd of April 2, 8 out of 13 major leachate quality indicators, BOD and COD increased gradually, especially in D farms.

일반(토착/투입) 미생물 지표와 대장균군수에서는 초기상태에 비하여 1차에서 증가와 2차 결과에서 현저한 증가를 나타내다가 3차 결과에서는 초기상태로 가까이 접근하는 현상을 나타내었다. 이는 투입미생물에 의한 병원성 유해균주 등의 미생물이 잘 제어되고, 투입미생물과 먹이(사체조직)의 함수관계를 나타내는 것으로서 투입미생물이 접근된 사체는 거의 다 분해되었음을 의미한다.  The general (indigenous / injected) microbial markers and E. coli populations showed a significant increase in the first and second results compared to the initial state, but closer to the initial state in the third result. This means that microorganisms such as pathogenic harmful strains by input microorganisms are well controlled and exhibit a functional relationship between the input microorganisms and food (carcass tissue), which means that almost all of the carcasses to which the input microorganisms are accessed are decomposed.

용해성 Fe 와 Mn은 증가되는 현상을 보여, 사체 세포에서 유리되는 과정이 점진적으로 높아지는 경향으로서 사체 생분해의 과정을 알 수 있다.   Soluble Fe and Mn show an increased phenomenon, and the process of cadaveric biodegradation can be known as a gradual increase in the release process from cadaveric cells.

암모니아성 질소는 초기상태의 높은 농도에서 3차에 갈수록 점차 감소하고, 무기성 질소는 초기에서 3차에 갈수록 점증하는 것으로 나타나 사체조직의 미생물 생분해를 잘 입증하고 있다.  Ammonia nitrogen gradually decreases from the initial high concentration to the third phase, and inorganic nitrogen increases gradually from the initial to the third stage, demonstrating the microbial biodegradation of the cadaveric tissue.

사체 세포의 주성분 중에 하나인 총인의 경우도 초기상태 보다 3차에 갈수록 높은 농도의 수치를 나타내어 투입미생물에 의한 사체의 생분해를 잘보여주고 있다. Total phosphorus, one of the main constituents of cadaveric cells, also showed higher concentration levels in the third stage than the initial state, showing the biodegradation of the cadaveric organisms by the injected microorganisms.

본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.Those skilled in the art will appreciate that the present invention can be implemented in a modified form without departing from the essential features of the present invention. Therefore, the disclosed embodiments should be considered in descriptive sense only and not for purposes of limitation. The scope of the present invention is shown in the claims rather than the foregoing description, and all differences within the scope will be construed as being included in the present invention.

한국생명공학연구원Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology KCTC10623BPKCTC10623BP 2004041620040416 한국생명공학연구원Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology KCTC0652BPKCTC0652BP 1999081119990811

Claims (10)

살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체에 있어서,
상기 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체는 기탁번호가 KCTC 10623 BP인 NBC2000 세균공동체에서 선택된 바실러스 속(Bacillus sp.) Cy106 균주, 수도모나스 속(Pseudomonas sp.) Cy100 균주, 바실러스 스테아로써모필러스(Bacillus stearothermophilus) Cy104 균주, 바실러스 속(Bacillus sp.) Cy107 균주, 수도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) Tnh 균주, 바실러스 속(Bacillus sp.) Cy105 균주, 수도모나스 속 (Pseudomonas sp.) Djhc 균주, 수도모나스 속(Pseudomonas sp.) Ntar3 균주, 서레시아 속(Serratia sp.) Aeng18 균주, 서레시아 속(Serratia sp.) Ntar2 균주, 에어로모나스 하이드로필라(Aeromonas hydrophila ) Aeng17 균주, 크리저모나스 루테올라(Chryseomonas luteola) Gc300 균주, 크리저모나스 속(Chryseomonas sp.) Gc500 균주 중 어느 하나 이상을 포함하고; 기탁번호가 KCTC 0652 BP인 EBC1000 세균공동체에서 선택된 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) EBC106 균주 및 수도모나스 속(Pseudomonas sp.) EBC107 균주 중 어느 하나 이상;을 포함하는 것을 특징으로 하는, 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체.
In the bacterial community for promoting the maturation of killed animals,
Bacillus sp. Cy106 strain, Pseudomonas sp. Cy100 strain selected from the NBC2000 bacterial community with an accession number of KCTC 10623 BP, Pseudomonas sp. (Bacillus stearothermophilus) Cy104 strain, Bacillus sp. Cy107 strain, Pseudomonas aeruginosa Tnh strain, Bacillus sp. Cy105 strain, Pseudomonas sp. Djhc strain, Pseudomonas sp.Ntar3 strain, Serratia sp.Aeng18 strain, Serratia sp.Ntar2 strain, Aeromonas hydrophila Aeng17 strain, Cremonamona luteola ( Chryseomonas luteola Gc300 strain, Chryseomonas sp. Gc500 strain; One or more of the Bacillus cereus EBC106 strain and Pseudomonas sp. EBC107 strain selected from EBC1000 bacterial community with an accession number of KCTC 0652 BP; Bacterial community for homeostasis.
제 1항에 있어서,
상기 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체는 기탁번호가 KCTC 10623 BP인 NBC2000 세균공동체에서 선택된 바실러스 속(Bacillus sp.) Cy106 균주, 수도모나스 속(Pseudomonas sp.) Cy100 균주, 바실러스 스테아로써모필러스(Bacillus stearothermophilus) Cy104 균주, 바실러스 속(Bacillus sp.) Cy107 균주, 수도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) Tnh 균주, 바실러스 속(Bacillus sp.) Cy105 균주, 수도모나스 속 (Pseudomonas sp.) Djhc 균주, 수도모나스 속(Pseudomonas sp.) Ntar3 균주, 서레시아 속(Serratia sp.) Aeng18 균주, 서레시아 속(Serratia sp.) Ntar2 균주, 에어로모나스 하이드로필라(Aeromonas hydrophila ) Aeng17 균주, 크리저모나스 루테올라(Chryseomonas luteola) Gc300 균주 및 크리저모나스 속(Chryseomonas sp.) Gc500 균주를 포함하고; 기탁번호가 KCTC 0652 BP인 EBC1000 세균공동체에서 선택된 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) EBC106 균주 및 수도모나스 속(Pseudomonas sp.) EBC107 균주를 포함하는 것을 특징으로 하는, 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체.
The method of claim 1,
Bacillus sp. Cy106 strain, Pseudomonas sp. Cy100 strain selected from the NBC2000 bacterial community with an accession number of KCTC 10623 BP, Pseudomonas sp. (Bacillus stearothermophilus) Cy104 strain, Bacillus sp. Cy107 strain, Pseudomonas aeruginosa Tnh strain, Bacillus sp. Cy105 strain, Pseudomonas sp. Djhc strain, Pseudomonas sp.Ntar3 strain, Serratia sp.Aeng18 strain, Serratia sp.Ntar2 strain, Aeromonas hydrophila Aeng17 strain, Cremonamona luteola ( Chryseomonas luteola Gc300 strain and Chryseomonas sp. Gc500 strain; Bacillus cereus EBC106 strain and Pseudomonas sp. EBC107 strain selected from the EBC1000 bacterial community with an accession number of KCTC 0652 BP. .
제 1항에 있어서,
살처분된 가축은 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축인 것을 특징으로 하는, 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체.
The method of claim 1,
The killing livestock is a livestock killed by the foot-and-mouth virus, the bacterial community for promoting the maturation of the killed livestock.
구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 매몰지에 상기 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항의 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 투여하는 단계를 포함하는, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 부숙을 촉진하는 방법.
A method of promoting livestock killing of livestock disposed of due to foot-and-mouth virus, the method comprising the step of administering a bacterial community for promoting the housing of the killed animal of any one of claims 1 to 3 How to promote lodging.
제 4 항에 있어서,
상기 부숙 촉진용 세균공동체는 살처분된 가축 100 중량부에 대하여 5 내지 20 중량부로 투여하는 것을 특징으로 하는, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 부숙을 촉진하는 방법.
The method of claim 4, wherein
Wherein the bacterial community for promoting maturity is characterized in that administered to 5 to 20 parts by weight based on 100 parts by weight of the slaughtered livestock, a method for promoting the maturity of livestock killed by foot-and-mouth disease virus.
제 4 항에 있어서,
상기 매몰지를 개방하지 않은 상태에서 미생물 주입용 파이프를 매몰된 사체층에 도달하는 수준까지 삽입하는 단계;및
상기 삽입된 파이프를 통해 상기 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 투여하는 단계;를 포함하는, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 부숙을 촉진하는 방법.
The method of claim 4, wherein
Inserting a pipe for injecting microorganisms to a level reaching a buried carcass layer without opening the investment site; and
And administering a bacterial community for promoting maturation of the killed animal, via the inserted pipe.
제 4 항에 있어서,
상기 방법은 봄 내지 가을에 실시하는 것을 특징으로 하는, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 부숙을 촉진하는 방법.
The method of claim 4, wherein
The method is characterized in that carried out in the spring to autumn, the method of promoting the maturation of livestock killed by foot-and-mouth disease virus.
구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 매몰지에 상기 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항의 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 투여하는 단계를 포함하는, 살처분된 가축의 매몰지에서 유래되는 침출수를 정화하는 방법.
Derived from the buried land of killed animals, comprising administering to the buried land of livestock killed by foot-and-mouth viruses, the bacterial community for promoting the lodging of the killed animals of any one of claims 1 to 3 To purify the leachate being purified.
구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 매몰지에 상기 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항의 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 투여하는 단계를 포함하는, 살처분된 가축의 매몰지의 토양을 정화하는 방법.
The soil of the buried land of the slaughtered livestock, comprising the step of administering to the buried land of livestock killed by the foot-and-mouth virus, the bacterial community for promoting the lodging of the slaughtered livestock of any one of claims 1 to 3 How to cleanse.
구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 사체를 액비화 하는 방법에 있어서,
상기 방법은 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항의 살처분된 가축의 부숙 촉진용 세균공동체를 투여하는 단계를 포함하는, 구제역 바이러스로 인해 살처분된 가축의 사체를 액비화하는 방법.


In the method of liquefying the carcasses of livestock killed by foot-and-mouth disease virus,
The method comprises the step of liquefying the carcasses of livestock killed by foot-and-mouth disease virus, comprising the step of administering a bacterial community for promoting the maturation of the killed livestock of any one of claims 1 to 3.


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