KR102448555B1 - 편백, 해당화, 및 레몬밤 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균 및 항진균 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 항균 및 항진균 활성을 갖는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 편백 잎 추출물, 해당화 추출물, 및 레몬밤 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균 및 항진균 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 조성물은 화장품 제형에 적용 시 변색 및 변취가 없어 제형 안정성을 유지하는 장점이 있다.
본 발명의 편백 잎 추출물, 해당화 추출물, 및 레몬밤 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균 및 항진균 조성물은 다양한 균들에 대해 폭넓은 항균 및 항진균 스펙트럼을 나타낸다.

Description

편백, 해당화, 및 레몬밤 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균 및 항진균 화장료 조성물{Antimicrobial and Antifungal Cosmetic Composition Containing Complex Extract of Chamaecyparis obtusa, Rosa rugosa, and Melissa officinalis as Active Ingredient}

본 발명은 항균 및 항진균 활성을 갖는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 편백 잎 추출물, 해당화 추출물 및 레몬밤 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균 및 항진균 화장료 조성물에 관한 것이다.

생물체의 항상성(homeostasis)을 유지하는 과정에서 중요한 역할을 담당하고 있는 물질들 중 일부가 각종 생물체 유래의 생리 활성 물질이다. 지금까지 수많은 생리활성물질에 많은 연구가 진행되고 있으며, 그 중, 미생물, 식물, 또는 동물체 등에서 분리된 항균물질에 관한 연구는 생명과학 및 의학 분야에서 매우 중요한 영역이다.

모든 생명체는 생존을 위하여 항균 및 항진균 물질을 생산하는 것으로 알려져 있는데, 항균 및 항진균 물질을 생산하는 미생물에 많은 연구가 이루어지고 있으며, 항균 및 항진균 물질을 생산하는 미생물 또는 이들에게서 분리된 물질을 이용해 항균제 또는 항진균제를 개발하려는 연구들이 오래전부터 시도되고 있다.

항균물질은 미생물을 죽이면서 인체 또는 동물에게는 독성이 낮고 체내의 효소 등에 의해 비활성화되지 않는 선택적 독성작용(selective toxicity)을 갖는 물질로, 이는 주로 DNA의 복제, 유전정보의 전사 및 해독, 전자에너지의 수송, 세포벽의 생합성 등을 저해함으로써 미생물의 증식을 억제하는 기전을 통해 효과를 나타낸다.

현재까지 개발된 주된 항균물질들은 미생물, 식물 등 천연에서 유래한 것과 화학적으로 합성된 것으로 나뉠 수 있는데, 천연에서 분리된 최초의 항균물질은 1928년 알렉산더 플레밍에 의해 발견된 페니실린이며, 이후 천연 유래 또는 화학적으로 합성된 많은 항균물질이 유해균에 의해 유발된 질병의 치료에 사용되고 있으나, 최근에는 화학적으로 합성된 항균물질에 대한 내성 증가로 인해 천연에서 유래한 항균물질을 이용한 항균제 개발에 관심이 증가하는 추세이다.

천연 유래 항균 또는 항진균제와 관련된 기술로, 고삼 추출물(특허출원 제10-1993-0006319호), 자몽 추출물(특허출원 제10-1993-0006320호), 회향, 대회향, 세신, 녹나무속 식물 및 정향의 혼합 추출물(특허출원 제10-2002-0054685호), 녹차 폴리페놀 및 티트리 오일(특허출원 제10-2002-0028517호), 세스바니아 그랜디프로라 추출물(특허출원 제10-2011-0015252호) 등 다양한 식물체의 추출물 또는 그 분획물이 항균 활성을 갖는 것으로 지금까지 보고되어 있다.

이러한 연구 결과에도 불구하고 단일 식물추출물 또는 복합 식물추출물을 항균 및 항진균 용도로 사용하고자 하는 시도가 있었으나, 아직 산업 현장에서 활용되기에 충분할 만큼의 항균 또는 항진균 효과를 나타내는 식물추출물들의 조합은 거의 없으며, 항균 및 항진균제와 관련된 연구 성과는 미미한 상태이다.

이러한 배경 아래에서, 본 발명자들은 우수한 항균 및 항진균 활성을 갖는 식물 추출물들의 조합을 찾기 위해 예의 노력한 결과, 편백 잎, 해당화, 및 레몬밤 잎의 혼합 추출물이 다양한 유해 미생물들을 효과적으로 억제하여 항균제 및 항진균제로 유용하게 활용될 수 있으며, 화장료 제형에 적용, 그리고 화장료 제형에 적용한 뒤의 장기간 보관시에도 변색 및 변취의 부작용없이 제형 안정성이 있음을 확인하고, 본　발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 주된 목적은 다양한 유해 미생물들을 효과적으로 억제하여 항균제 및 항진균제로 유용하게 활용될 수 있는 편백 잎, 해당화, 및 레몬밤 잎의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

또한, 본 발명은 편백 잎, 해당화, 및 레몬밤 잎의 혼합 추출물은 종래 식물 추출물을 화장료 조성물에 투입, 적용하거나 또는 적용 후 일정기간 보관 시에 발생하는 갈변 등과 같은 변색 및 변취의 문제가 없는 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 더욱 명확하게 된다.

본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 편백 잎 추출물, 해당화 추출물, 및 레몬밤 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균 및 항진균 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명자들은 수십 종의 식물 추출물들의 조합을 검색하여 우수한 항균 및 항진균 효능이 갖는 물질을 탐색한 결과, 편백 잎 추출물, 해당화 추출물, 및 레몬밤 잎 추출물의 조합이 항균 및 항진균 효과가 획기적으로 증가함을 발견하였고, 또한 피부에 적용 시에도 안전성에도 문제가 없음을 확인하였다.

본 발명에서 용어 "편백(Chamaecyparis obtusa (S. et Z.) ENDL.)"은 측백나무과 편백속 상록 침엽 교목을 의미하고, 용어 "해당화(Rosa rugosa THUNB.)"는 쌍떡잎식물 장미목 장미과의 낙엽관목을 의미하며, 용어 "레몬밤(Melissa officinalis)"은 쌍떡잎식물 통화식물목 꿀풀과의 여러해살이풀을 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "추출물"은 식물의 추출 처리에 따라 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 본 발명의 상기 추출물은 바람직하게 추출 후 액상의 추출액 형태로 제조되어 사용될 수 있다.

본 발명에서 상기 편백 잎, 해당화, 및 레몬밤 잎을 추출하는데 사용되는 추출 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 추출 용매의 비제한적인 예로는 물; 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올 등의 C1 내지 C4의 저급 알코올; 프로판다이올(1,3-Propanediol), 부틸렌글리콜(1,3-Butylene glycol), 메틸프로판다이올(Methylpropanediol), 프로필렌글리콜, 글리세린 등의 다가 알코올; 및 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 아세톤, 벤젠, 헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등의 탄화수소계 용매; 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있으며, 바람직하게, 물, 저급알코올, 1,3-프로판다이올, 에틸아세테이트를 단독으로 사용하거나 2종 이상 혼합하여 사용할 수 있다. 또한, 화장료 조성물로 사용되는 경우 일부 용매의 경우 식물체의 엽록소가 과도하게 추출되어 추출물의 색상이 갈색 또는 진갈색 계통을 띄게 되고, 식물 특유의 향이 진하게 나타나며, 직사광선에 노출되었을 때는 변색 및 변취를 유발하므로 화장품의 원료로 사용되기에 적당하지 않다. 이런 경우 바람직하게는 1,3-프로판다이올(1,3-Propanediol), 1,3-부틸렌글리콜(1,3-Butylene glycol), 메틸프로판다이올(Methylpropanediol)과 같은 다가 알코올을 사용하는 것이 바람직하다.

본 발명의 상기 편백, 해당화, 및 레몬밤 추출물은, 천연, 잡종 또는 변종 식물로부터 추출될 수 있고, 식물 조직 배양물에서도 추출할 수 있다. 또한, 상기 편백과 레몬밤은 잎 부위에서 추출한 추출물을 사용하는 것이 바람직하며, 상기 해당화는 줄기를 제외한 잎, 뿌리, 꽃, 열매 등의 부위에서 추출한 추출물을 사용하는 것이 바람직하다.

본 발명의 항균 및 항진균 화장료 조성물에서, 상기 편백 잎 추출물, 해당화 추출물, 및 레몬밤 잎 추출물은 60~70:20~25:10~15 중량부로 혼합되는 것이 가장 바람직하다.

본 발명의 실시예에서 상기 편백 잎 추출물, 해당화 추출물, 및 레몬밤 잎 추출물을 다양한 비율로 혼합하여 항균 및 항진균 화장료 조성물을 제조하였으며, 제조된 조성물의 항균력을 확인하기 위해 한천확산법(disc diffusion test) 및 미생물 생장 최소억제 농도 평가를 수행하였다. 그 결과, 편백 잎 추출물, 해당화 추출물, 및 레몬밤 잎 추출물의 조합이 전반적으로 우수한 항균 활성을 나타내는 것을 확인하였으며, 상기 편백 잎 추출물, 해당화 추출물, 및 레몬밤 잎 추출물은 60~70:20~25:10~15 중량부로 혼합된 조성물이 가장 우수한 시너지 효과가 있는 것을 확인할 수 있었다.

본 발명의 항균 및 항진균 화장료 조성물은 넓은 항균 스펙트럼을 갖는데, 구체적으로 그람양성균, 그람음성균, 효모, 및 진균에 항균 활성을 갖는다.

본 발명의 화장료 조성물은 구체적으로는 칸디다 속 진균과 아스퍼질러스 속 진균에 대해 항진균 활성을 갖고, 보다 구체적으로는 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 및 아스퍼질러스 니거(Aspergillus niger)에 대해 항진균 활성이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 구체적으로 에스체리치아(Escherichia) 속 균주, 및 슈도모나스(Pseudomonas) 속의 그람음성 균주에 대해 항균 활성을 갖고, 보다 구체적으로 에스체리치아 콜라이(Escherichia coli), 및 슈도모나스 에루지노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주에 대해 항균 활성이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 구체적으로 스타필로코커스(Staphylococcus) 속의 그람양성 균주에 대해 항균 활성을 갖고, 보다 구체적으로 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 등의 세균에 대하여 항균 활성이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 실시예에서는 편백 잎, 해당화, 및 레몬밤 잎의 혼합 추출물이 갖는 항균 효과를 검정한 결과, 이들의 조합이 각각의 단일 화합물과 비교해 매우 우수한 항균 활성을 갖는 것을 확인하였다.

본 발명의 편백 잎 추출물, 해당화 추출물, 및 레몬밤 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균 및 항진균용 화장료 조성물은 천연유래 식물 소재에서 추출되어 인체에 해가 없고, 화장품이 유해 미생물에 의해 부패하는 것을 효과적으로 막아주며, 그 첨가로 인해 화장품의 물질의 품질을 손상하지 않으므로 화장료 조성물에 포함되어 사용되는데 적합하다.

본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 항균 및 항진균용 화장료 조성물의 함량은 0.001 중량% 내지 30 중량%로 함유될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 유효성분으로 상기 편백 잎 추출물, 해당화 추출물, 및 레몬밤 잎 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들이 포함되며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수(스킨), 영양 화장수(밀크로션), 영양 크림, 맛사지 크림, 에센스, 아이크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸타, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라가칸타 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장품의 구체예로서는 여성청결제, 손세정제, 세안크림, 세안폼, 클렌징크림, 클렌징밀크, 클렌징로션, 마사지크림, 콜드크림, 모이스처크림, 유액, 화장수, 팩, 에프터세이빙크림, 썬텐방지크림, 썬텐용 오일, 비누, 보디샴푸, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 양모료, 육모료, 헤어크림, 헤어리퀴드, 세트로션, 헤어스프레이, 헤어브리지, 컬러린스, 컬러스프레이, 퍼머넌트웨이브액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도, 핸드크림, 및 립스틱 등을 들 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 그 자체적으로 항균 및 항진균 효과가 있으므로 항균 및 항진균 조성물로 바로 이용될 수 있고, 항균 및 항진균 효과가 있는 천연 추출물들을 함유하는 다른 성분과 혼합하여 사용하는 형태로도 이용이 가능하여 기존의 항균 또는 항진균 효과를 좀 더 높여줄 수 있을 것으로 기대된다.

본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:

(1) 본 발명은 편백 잎 추출물, 해당화 추출물, 및 레몬밤 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균 및 항진균 화장료 조성물을 제공한다.

(2) 본 발명의 편백 잎 추출물, 해당화 추출물, 및 레몬밤 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균 및 항진균 조성물은 다양한 균들에 대해 폭넓은 항균 및 항진균 스펙트럼을 나타낸다.

(3) 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 화장료 조성물 분야에서 항균, 항진균 및 방부 목적으로 유용하게 이용 가능하다.

(4) 본 발명의 조성물은 종래 식물 추출물의 화장료 제형에의 적용 시 발생하는 갈변 등과 같은 변색 및 변취의 문제가 없는 항균 및 항진균 화장료 조성물을 제공한다.

도 1은 실시예 1-4의 방법에 따라 1,3-Propanediol을 용매로 한 혼합 추출물을 이용하여 제조한 로션의 색상(아래)과, 실시예 1-5의 방법에 따라 에탄올을 용매로 한 혼합 추출물을 이용하여 제조한 로션의 색상(위)을 비교하여 나타낸 사진이다.
도 2는 편백 잎 추출물을 병원성 미생물 5종에 대해 0.5%(w/w) 농도로 처리한 후 7일, 14일, 21일 및 28일 간격으로 생존한 미생물의 수를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 3은 편백 잎 추출물을 병원성 미생물 5종에 대해 1.0%(w/w) 농도로 처리한 후 7일, 14일, 21일 및 28일 간격으로 생존한 미생물의 수를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 4는 해당화 추출물을 병원성 미생물 5종에 대해 0.5%(w/w) 농도로 처리한 후 7일, 14일, 21일 및 28일 간격으로 생존한 미생물의 수를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 5는 해당화 추출물을 병원성 미생물 5종에 대해 1.0%(w/w) 농도로 처리한 후 7일, 14일, 21일 및 28일 간격으로 생존한 미생물의 수를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 6은 레몬밤 잎 추출물을 병원성 미생물 5종에 대해 0.5%(w/w) 농도로 처리한 후 7일, 14일, 21일 및 28일 간격으로 생존한 미생물의 수를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 7은 레몬밤 잎 추출물을 병원성 미생물 5종에 대해 1.0%(w/w) 농도로 처리한 후 7일, 14일, 21일 및 28일 간격으로 생존한 미생물의 수를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 8은 편백 잎, 해당화, 및 레몬밤 잎의 3종 혼합 추출물을 병원성 미생물 5종에 대해 0.5%(w/w) 농도로 처리한 후 7일, 14일, 21일 및 28일 간격으로 생존한 미생물의 수를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 9는 편백 잎, 해당화, 및 레몬밤 잎의 3종 혼합 추출물을 병원성 미생물 5종에 대해 1.0%(w/w) 농도로 처리한 후 7일, 14일, 21일 및 28일 간격으로 생존한 미생물의 수를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 10은 편백 잎, 해당화, 및 레몬밤 잎의 3종 혼합 추출물로 제조된 패치를 이용하여 수행한 피부 자극 실험 결과를 촬영한 사진이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.

실시예 1. 식물 추출물의 제조

1-1. 편백잎 추출물의 제조

편백나무 잎을 추출하여 편백잎 추출물을 제조하였다.

구체적으로, 가지를 제거하여 편백 잎만 별도로 분리한 후, 편백 잎 8~10 중량부(w/w) 대비 1,3-Propanediol 90~92 중량부(w/w)를 첨가한 후, 상온에서 24시간 추출하였고, 1.2㎛ 투과 사이즈를 갖는 여과지로 여과하여 여과액을 수득하였다. 수득된 여과액을 1~3일 동안 숙성한 후, 편백잎 추출물을 제조하였다.

1-2. 해당화 추출물의 제조

해당화의 가지를 제거한 후 잎, 꽃, 뿌리만 별도로 분리하였다. 뿌리는 분말로 갈아서 사용하였고, 꽃은 가지를 제거한 후 사용하였다. 가지를 제거한 해당화의 잎, 꽃, 및 뿌리의 8~10 중량부(w/w) 대비 1,3-Propanediol 90~92 중량부(w/w)를 첨가한 후, 상온에서 24시간 추출하였고, 1.2㎛ 투과 사이즈를 갖는 여과지로 여과하여 여과액을 수득하였다. 수득된 여과액을 1~3일 동안 숙성한 후, 해당화 추출물을 제조하였다.

1-3. 레몬밤 잎 추출물의 제조

레몬밤 잎을 추출하여 레몬밤 잎 추출물을 제조하였다.

구체적으로, 건조한 레몬밤 잎을 별도로 준비한 후, 레몬밤 잎 8~10 중량부(w/w) 대비 1,3-Propanediol 90~92 중량부(w/w)를 첨가한 후, 상온에서 24시간 교반하여 추출하였고, 1.2㎛ 투과 사이즈를 갖는 여과지로 여과하여 여과액을 수득하였다. 수득된 여과액을 1~3일 동안 숙성한 후, 레몬밤 잎 추출물을 제조하였다.

1-4. 혼합 추출물의 제조

상기 실시예 1-1 내지 1-3에서 준비한 편백 잎, 해당화 및 레몬밤 잎 추출물을 60~70: 20~25: 10~15 중량부로 혼합하여 혼합 추출물을 제조하였다. 이렇게 제조된 혼합 추출물은 화장품 원료에서 매우 중요한 색상 항목에서 장기간 보관 시에도 전체 화장품 조성물의 색상에 영향을 주지 않는 수준으로 관찰되었고, 냄새 항목에서 전체 조성물의 향에 변취를 일으키지 않는 수준으로 조성이 가능한 것으로 평가되었다(도 1 아래).

1-5. 에탄올을 용매로 사용한 혼합 추출물의 제조(비교예, 대조군)

상기 실시예 1-1 내지 1-3의 방법을 사용하되, 에탄올을 용매로 사용한 것을 제외하고 동일한 방법으로 준비한 편백 잎, 해당화 및 레몬밤 잎 추출물을 60~70: 20~25: 10~15 중량부로 혼합하여 혼합 추출물을 제조하였다. 이렇게 제조된 혼합 추출물은 화장품 원료에서 매우 중요한 색상 항목에서 전체 화장품 조성물의 색상이 갈색으로 변화되는 수준으로 관찰되었고, 냄새 항목에서도 전체 조성물의 향에 영향을 미치는 수준으로 평가되었다(도 1 위).

실시예 2. 항균 실험

그람양성균 2종(Escherichia coli ATCC 8739, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027), 그람양성균 1종(Staphylococcus aureus ATCC 6538), 효모 1종(Candida albicans ATCC 10231), 곰팡이 1종(Aspergillus niger ATCC 16404)을 대상으로 항균조성물의 병원성 미생물에 대한 항균력 연구를 수행하였다.

상기 병원성 미생물 5종을 각각 배양 후 Escherichia coli 4.2x10⁶ CFU/mL, Pseudomonas aeruginosa 1.6x10⁶ CFU/mL, Staphylococcus aureus 1.6x10⁶ CFU/mL, Candida albicans 1.3x10⁵ CFU/mL, 및 Aspergillus niger 7.3x10⁵ CFU/mL 농도로 균질화액에 첨가하였다.

시험방법은 PCPC(Personal Care Products Council) Microbiology guidelines 2007 기준을 준수하여 진행되었으며, 실시예 1-1 내지 1-4에서 준비한 식물 추출물을 정제수에 용해하여 각각 0.5%(w/w), 1.0%(w/w) 농도로 사용하였다.

7일 간격으로 21일까지 각각의 배지에 Pour Plate Culture 방법으로 진행하여 플레이트에 자라난 콜로니(colony)를 log10 CFU/mL 단위로 측정하고, 그 결과를 하기 [표 1] 내지 [표 4]에 정리하여 나타내었다.

[표 1]

먼저, [표 1]을 참조하면, 편백 잎 추출물을 0.5%(w/w) 농도로 처리하였을 때, 세균 3종 및 효모는 7일 이내에 모두 사멸하였고, 곰팡이(Aspergillus niger ATCC 16404)는 계속적으로 항균력이 증가하여, 21일 기준으로 99.9% 이상의 항균 효과가 확인된다. 또한, 편백 잎 추출물은 농도 의존적으로 항균 효과가 증가하는 것으로 확인되었다.

[표 2]

또한, [표 2]를 참조하면, 해당화 추출물을 0.5%(w/w) 농도로 처리하였을 때, 세균 3종은 7일 이내에 모두 사멸하였고, 효모(Candida albicans ATCC 10231)는 14일 이내에 99.9% 이상 사멸하는 것으로 확인되었다. 또한, 곰팡이(Aspergillus niger ATCC 16404)는 계속적으로 항균력이 증가하여, 21일 기준으로 99.9% 이상의 항균 효과가 확인된다. 또한, 해당화 추출물은 농도 의존적으로 항균 효과가 증가하는 것으로 확인되었다.

[표 3]

또한, [표 3]을 참조하면, 레몬밤 잎 추출물을 0.5%(w/w) 처리하였을 때, 세균 3종 및 효모 1종은 7일 내에 모두 사멸하였다. 반면 곰팡이(Aspergillus niger ATCC 16404)는 28일 이내에 99.9% 사멸하였으며 28일째에도 방부력이 유지되는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 레몬밤 잎 추출물은 농도 의존적으로 항균 효과가 증가하는 것으로 확인되었다.

[표 4]

마지막으로, [표 4]를 참조하면, 편백 잎, 해당화 및 레몬밤 잎의 혼합 추출물 100 중량부 대비 60~70: 20~25: 10~15 중량부로 배합된 본 발명의 혼합 추출물을 0.5%(w/w) 처리하였을 때, 세균 3종 및 효모 1종은 7일 내에 모두 사멸하였다. 또한, 곰팡이(Aspergillus niger ATCC 16404)는 14일 이내에 99.99% 수준으로 사멸하였고, 28일 이내에 모두 사멸하여 방부력이 지속해서 유지되는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 본 발명의 혼합 추출물은 1.1%(w/w) 농도 이상에서 7일 경과 시 모든 병원성 세균을 사멸시키는 것으로 나타나, 편백 잎, 해당화 및 레몬밤 잎의 3종 성분의 혼합에 따른 시너지 효과가 있는 것을 확인할 수 있었다.

실시예 3. 최소억제농도 실험

편백 잎, 해당화, 및 레몬밤 잎의 단일 및 혼합 추출물에 대한 항균 활성을 측정하기 위하여 실시예 2에서 사용한 유해 미생물을 대상으로 미생물 생장 최소억제농도(MIC)를 평가하였다.

MIC 측정은 고형 한천 배지에서 각 세균과 진균을 배양한 후 1×10^5~6 CFU/mL에 준하여 5개의 집락을 얻고 배지에 희석하여 접종한 후 37℃에서 2~3시간 동안 유지하였다.

본 실험에 사용한 편백 잎, 해당화, 및 레몬밤 잎의 단일 및 혼합 추출물은 2.0mg/mL 농도로 적정하여 각각 2배 계열로 희석하였다. 각 세균과 단일 및 혼합 추출물이 함유된 배지를 96 well plate에 옮기고 37℃에서 16~24시간 동안 배양한 후, 600nm에서 Multilabel Counter(1420, Perkin Elmer)로 측정하여 단일 및 혼합추출물들의 최소저해농도를 구하고, 이를 하기 [표 5]에 나타내었다.

[표 5]

그 결과, 편백 잎, 해당화, 및 레몬밤 잎의 단일 추출물 모두가 이들의 3종 혼합 추출물(실시예 1-4)과 대비하여 비교 열위의 항균 활성을 갖는 것이 관찰되었다. 또한, 실시예 1-4의 3종 혼합 추출물은 단일 추출물 중 가장 항균 효과가 우수한 편백 잎 추출물 대비 50%-75% 감소된 유해 미생물 생장 최소억제농도가 측정되어, 가장 우수한 시너지 효과가 있는 것을 확인할 수 있었다.

실시예 4. 피부 자극 실험(Patch test)

편백 잎, 해당화, 및 레몬밤 잎의 3종 혼합 추출물이 피부에 미치는 자극에 대해 평가하였다.

실험은 20대에서 50대의 남여 17명 대상으로 진행되었고, 팔 안쪽에 3종 혼합 추출물이 담지된 패치를 부착시켜 24시간을 유지한 후, 패치를 제거하고, 피부 자극 발생 여부를 관찰하여 진행하였다. 비교 실험을 위해 정제수를 사용하여 제조된 패치를 대조군으로 실험하였다.

[표 6]

실험 결과, 본 발명의 편백 잎, 해당화, 및 레몬밤 잎으로 구성된 3종 혼합 추출물을 담지한 패치를 부착한 모든 피실험자에게서 피부 자극이 발생하지 않는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 정제수를 사용한 대조군과 비교하여 유사한 정도의 피부 자극 반응이 관찰되어 본 발명의 3종 혼합 추출물이 피부에 자극이 없고 안전함을 확인할 수 있었다(도 9 참조).

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (7)

1. 편백 잎 추출물, 해당화 추출물, 및 레몬밤 잎의 추출물을 유효성분으로 포함하되,
   상기 추출물은 1,3-프로판디올(Propanediol)을 용매로 하여 추출해 낸 추출물이고,
   상기 편백 잎 추출물, 해당화 추출물, 및 레몬밤 잎 추출물은 60~70:20~25:10~15 중량부로 혼합되며,
   화장료 조성물은 변색 및 변취가 없는 것을 특징으로 하는,
   항균 및 항진균 화장료 조성물.
2. 삭제
3. 삭제
4. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 칸디다 속 진균 및 아스퍼질러스 속 진균에 대해 항진균 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 항균 및 항진균 화장료 조성물.
5. 제4항에 있어서,
   상기 칸디다 속 진균은 칸디다 알비칸스(Candida albicans)이고, 상기 아스퍼질러스 속 진균은 아스퍼질러스 니거(Aspergillus niger)인 것을 특징으로 하는 항균 및 항진균 화장료 조성물.
6. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 에스체리치아(Escherichia) 속 균주, 슈도모나스(Pseudomonas) 속 균주, 및 스타필로코커스(Staphylococcus) 속 균주에 대해 항균 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 항균 및 항진균 화장료 조성물.
7. 제6항에 있어서,
   상기 에스체리치아(Escherichia) 속 균주는 에스체리치아 콜라이(Escherichia coli)이고, 상기 슈도모나스(Pseudomonas) 속 균주는 슈도모나스 에루지노사(Pseudomonas aeruginosa)이며, 상기 스타필로코커스 속 균주는 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)인 것을 특징으로 하는 항균 및 항진균 화장료 조성물.

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