KR102442037B1 - 시클로텔라 메네지니아나를 유효성분으로 하는 안질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents
시클로텔라 메네지니아나를 유효성분으로 하는 안질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
시클로텔라 메네지니아나 (Cyclotella meneghiniana)를 유효성분으로 하는 안질환 예방 또는 치료용 조성물 및 건강기능식품에 관한 것으로, 이에 의하면, 눈물 분비량을 증가시키거나 각막 손상을 회복시켜 안질환의 예방, 치료 또는 개선에 유용하게 사용될 수 있다.
Description
시클로텔라 메네지니아나를 유효성분으로 하는 안질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
현대 사회는 가히 멀티미디어 시대이고 비주얼 시대라고 일컬어지듯이, 현대 사회에 있어서 시각에 의존성은 날로 높아지고 있으며 스마트폰, TV, 컴퓨터, 전자게임 및 작업장에서 눈 사용이 많아지고 있다. 아울러 수험생의 경우 과도한 공부 및 컴퓨터 사용으로 인한 눈의 피로는 더욱 가중되고 있는 실정이다. 특히 스마트폰의 사용, 컴퓨터의 발전 및 수험생 피로과다로 인한 장기간의 눈 사용은 눈이 쉽게 피로해지는 원인이 되고 있으며 전체 몸에서 피로를 쉽게 느끼는 일차적 장소로 분류된다. 눈 피로의 가장 큼 원인 중 하나는 스트레스이며, 모든 건강 상식에서 항상 언급되는 스트레스는 우리 눈의 피로를 더욱 가중시키게 된다. 젊은 층의 사람들은 대부분 이와 비슷한 케이스로, 컴퓨터 및 스마트폰의 과다 사용으로 눈이 혹사당해 안구건조증과 함께 눈의 피로감, 두통을 호소하는 층이 기하급수적으로 증가하는 추세이다.
안구 건조증은 눈물이 부족하거나 눈물이 지나치게 증발하여 눈물 구성성분의 균형이 맞지 않아 안구 표면이 손상되고 이물감, 건조감과 같은 눈의 자극 및 시력저하와 같은 증상을 수반하는 질환이다. 이러한 안구 건조증은 기능적 시력을 감소시키고 운전, 독서 및 텔레비전 시청 등과 같은 일상적인 작업 수행에 어려움을 주어 삶의 질에 영향을 미친다.
안구 건조증의 경우 대부분, 눈물 막을 보완하는 층인 유층, 수층 및 점막층 중 하나에 이상이 생겨 각막/결막 장애가 야기된다. 그 중에서도 점막층의 이상은 심각한 각막 장애의 원인이 되는데 안구 건조증은 각막 상피 세포의 플루오레세인 투과성, 결막 변형 및 배상세포의 손실을 증가시켜 각막 표면의 상피세포에 병리학적인 변화를 일으킴으로써 각막 상피 장애 또는 각막 상피 진무름 뿐만 아니라 각막 궤양 및 안 감염까지 일으킬 수 있으며 일부의 경우, 각막 이식이 필요하게 되기도 한다.
그러나 컴퓨터, 스마트폰과 같은 전자기기 사용 뿐만 아니라 콘택트 렌즈 사용의 증가, 미세먼지 증가 등으로 인해 안구건조증 환자가 지속적으로 증가하고 있으나, 특별한 치료제 또는 기능성 식품이 없는 상황이다.
일 양상은 시클로텔라 메네지니아나 (Cyclotella meneghinian)를 유효성분으로 포함하는 안질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
다른 양상은 상기 약학적 조성물을 안질환 예방 또는 치료하기에 유효한 양으로 개체에 투여하는 단계를 포함하는 개체에서 안질환을 치료하는 방법을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 시클로텔라 메네지니아나 (Cyclotella meneghinian)를 유효성분으로 포함하는 안질환 예방 또는 개선용, 또는 눈 기능 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
일 양상은 시클로텔라 메네지니아나 (Cyclotella meneghinian)를 유효성분으로 포함하는 안질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 시클로텔라 메네지니아나는 주로 해양 환경에서 서식하는 무척추 동물이다. 또한, 호흡 및 배설에 사용되는 구멍을 가지는 맨틀 및 석회질 껍질을 가지고 있다.
상기 시클로텔라 메네지니아나는 조성물의 총 중량에 대하여 약 0.001 중량% 내지 약 90.0 중량%으로 포함되는 것일 수 있다. 예를 들면, 약 0.01 중량% 내지 약 60 중량%, 약 0.01 중량% 내지 약 40 중량%, 약 0.01 중량% 내지 약 30 중량%, 약 0.01 중량% 내지 약 20 중량%, 약 0.01 중량% 내지 약 10 중량%, 약 0.01 중량% 내지 약 5 중량%, 약 0.05 중량% 내지 약 60 중량%, 약 0.05 중량% 내지 약 40 중량%, 약 0.05 중량% 내지 약 30 중량%, 약 0.05 중량% 내지 약 20 중량%, 약 0.05 중량% 내지 약 10 중량%, 약 0.05 중량% 내지 약 5 중량%, 약0.1 중량% 내지 약 60 중량%, 약 0.1 중량% 내지 약 40 중량%, 약 0.1 중량% 내지 약 30 중량%, 약 0.1 중량% 내지 약 20 중량%, 약 0.1 중량% 내지 약 10 중량%, 또는 약 0.1 중량% 내지 약 5 중량%로 포함될 수 있다.
본 명세서에서 용어 "안질환"은 눈 또는 눈의 일부분 또는 한 영역에 영향을 주거나 관련된 질병, 병 또는 질환이며, 넓은 의미로, 눈은 안구 및 안구를 구성하는 조직과 체액, 눈주위 근육 (사근 및 직근), 및 안구 내의 또는 안구에 인접한 시신경 부분을 포함한다.
상기 안질환은 안구 건조증, 안검염, 각막염, 포도막염, 망막염, 시신경염 마이봄샘 기능장애 (meibomian gland dysfunction), 아토피성 각결막염 및 황반 변성으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것일 수 있다. 여기서, 상기 안구 건조증은 무루증, 각막건조증, 쇼그렌 증후군, 건조 각막결막염, 스티븐-존슨 증후군, 눈 유사물집증, 안과 수술 후 안구건조증, 알레르기성 결막염 수반 안구건조증, 영상 단말기 (Visual Display Terminal: VDT) 노동자의 눈물 감소 및 건조한 환경 및 콘택트 렌즈 착용으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상에 의해 야기된 것일 수 있다. 상기 안구건조증은 눈물 결핍 또는 과다 증발로 인한 눈물막의 장애를 포함하며 안검 사이(interpalpebral)의 눈 표면의 훼손을 야기하는 눈의 불편감의 증상도 포함할 수 있다. 또한 안구건조증은 불편감, 시력 장애 및 눈물막 불안정성의 증상과 함께 눈 표면에 잠재적인 훼손을 야기하는 눈물 및 눈 표면의 다인자 질병을 의미할 수 있으며, 이러한 질병은 눈물막의 증가된 삼투압 및 눈 표면의 염증을 동반할 수 있다. 또한, 안구건조증은 수성 눈물-결핍성 안구건조증 및 증발성 안구건조증을 포함하며, 수성 눈물-결핍성 안구건조증은 눈물샘 눈물 분비의 부족으로 인해 야기된 질병을 포함할 수 있다. 또한, 증발성 안구건조증은 정상적 눈물샘 분비 기능의 존재 하에서의 노출된 눈 표면으로부터의 과다한 수분 상실로 인하여 야기된 질병을 포함할 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 조성물은 눈물 분비량을 증가시키거나 각막 손상을 회복시키는 것일 수 있다. 상기 각막의 손상은 눈물의 과다 건조로 인해 정상 대조군에 비해 각막의 표면의 두께가 얇아지는데 본 발명의 조성물은 이를 개선시키는 것일 수 있다.
상기 조성물은 통상의 방법에 따라 다양한 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 예를 들면, 상기 조성물은 경구 또는 점안 제형일 수 있다. 상기 경구 제형은 정제, 과립제, 환제, 캡슐제, 액상형, 젤리, 및 껌으로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 제형일 수 있다.
상기 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함하는 것일 수 있다. 상기 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 또는 희석제는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 마그네슘스테아레이트, 및 광물유 등으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상이 포함될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
약학적 조성물의 약학적 유효량 및 유효 투여량은 약학적 조성물의 제제화 방법, 투여 방식, 투여시간 및/또는 투여 경로 등에 의해 다양할 수 있다. 또한, 상기 약학 조성물의 투여로 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 투여 대상이 되는 개체의 종류, 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 질병의 증세나 정도, 성별, 식이, 배설, 해당 개체에 동시 또는 이시에 함께 사용되는 약물 기타 조성물의 성분 등을 비롯한 여러 인자 및 의약 분야에서 잘 알려진 유사 인자에 따라 다양해질 수 있다. 투여는 당업계에 알려진 방법에 의하여 수행될 수 있다. 예를 들면, 정맥내, 근육내, 경구, 경피 (transdermal), 점막, 코안 (intranasal), 기관내 (intratracheal) 또는 피하 투여와 같은 경로로, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다. 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다. 본 발명에 따른 약학 조성물의 투여는 하루에 1회 투여될 수 있고, 수회에 나누어 투여될 수 있다. 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 약학적 조성물의 투여량은 1 mg/kg/일 내지 1,OOO mg/kg/일일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "유효성분" 또는 "유효량"은 질환, 장애 또는 병태, 또는 그의 하나 이상의 증상의 경감, 진행 억제 또는 예방에 충분한 조성물의 임의의 양을 의미할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "예방"이란, 본 발명에 따른 시클로텔라 메네지니아나를 포함하는 조성물의 투여로 안질환의 증상을 억제 또는 지연시켜 정상 대조군과 가까워지는 모든 행위를 말한다.
본 명세서에서 용어 "치료"란, 본 발명에 따른 시클로텔라 메네지니아나 를 포함하는 조성물의 투여로 안질환의 증상이 정상 대조군과 같거나 비슷하게 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 말한다.
본 명세서에서 용어 "약학적 조성물"이란, 질병의 예방 또는 치료를 목적으로 제조된 것을 의미한다.
다른 양상은 상기 약학적 조성물을 안질환 예방 또는 치료하기에 유효한 양으로 개체에 투여하는 단계를 포함하는 개체에서 안질환을 치료하는 방법을 제공한다.
본 명세서에서 용어, "투여하는"은 "도입하는", 및 "이식하는"과 상호교환적으로 사용되고 일 구체예에 따른 조성물의 원하는 부위로의 적어도 부분적 국소화를 초래하는 방법 또는 경로에 의한 개체 내로의 일 구체예에 따른 조성물의 배치를 의미할 수 있다. 일 구체예에 따른 조성물 또는 조성물 성분의 적어도 일부는 생존하는 개체 내에서 원하는 위치로 전달하는 임의의 적절한 경로로 의해 투여될 수 있다.
투여는 당업계에 알려진 방법에 의하여 수행될 수 있다. 예를 들면, 정맥내, 근육내, 경구, 경피 (transdermal), 점막, 코안 (intranasal), 기관내 (intratracheal) 또는 피하 투여와 같은 경로로, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다.
상기 개체는 포유동물일 수 있다. 상기 포유동물은 사람, 개, 고양이, 소, 염소, 또는 돼지일 수 있다.
상기 투여는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여도 투여될 수 있다. 예를 들어 점안 투여, 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경피 패치투여, 경구 투여 등의 경로를 통해 투여될 수 있고, 구체적으로 점안 투여의 경로 등을 통해 목적하는 바에 따라 투여될 수 있다.
상기 치료하는 방법에서 언급된 용어 또는 요소 중 상기 조성물에 대한 설명에서 언급된 것과 같은 것은, 앞에서 상기 조성물에 대한 설명에서 언급된 바와 같은 것으로 이해된다.
또 다른 양상은 시클로텔라 메네지니아나 (Cyclotella meneghinian)를 유효성분으로 포함하는 안질환 예방 또는 개선용, 또는 눈 기능 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
시클로텔라 메네지니아나, 유효성분, 안질환 및 예방은 전술한 바와 같다.
본 명세서에서 용어 "안질환 개선"은 이미 생긴 안질환의 증상을 완화시키는 것을 의미할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "눈 기능 개선"은 눈이 물체의 존재나 형상을 인식할 때 불편함이 있는 경우 등, 부정적인 증상의 정도를 감소시키거나 완화시키는 것을 의미할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물은 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 비스켓, 떡, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등의 형태일 수 있으며, 상기 건강기능식품은 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명의 유효성분은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합 양은 그의 사용 목적 (예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 중의 상기 유효성분의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 그 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수성분으로써 상기 유효성분을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 (타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖ 당 약 1 내지 약 20 g, 또는 약 5 내지 약 12 g일 수 있다.
상기 외에 본 발명의 유효성분은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 유효성분은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 예를 들면 본 발명의 유효성분 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택된다.
일 양상에 따른 약학적 조성물 및 건강기능식품 조성물에 의하면, 눈물 분비량을 증가시키거나 각막 손상을 회복시켜 안질환의 예방, 치료 또는 개선에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 쉬르머 시험법을 이용하여 시간 (주)에 따른 마우스의 눈물량을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다 (NTC는 아무 처리를 하지 않은 정상 대조군, DE는 스코폴라민으로 인한 안구 건조증을 유발시킨 질환군, M은 스코폴라민으로 인한 안구 건조증을 유발시킨 마우스에 시클로텔라 메네지니아나를 투여시킨 군이다).
도 2는 형광 염색법을 이용하여 마우스의 각막 손상 정도를 확인한 사진이다.
도 3은 형광 염색법을 이용하여 마우스의 각막 손상 정도를 확인한 결과 그래프이다 (NTC는 아무 처리를 하지 않은 정상 대조군, DE는 스코폴라민으로 인한 안구 건조증을 유발시킨 질환군, M은 스코폴라민으로 인한 안구 건조증을 유발시킨 마우스에 시클로텔라 메네지니아나를 투여시킨 군이다. 또한, *** 은 p<0.001를 의미하고, ## 은 P<0.01을 의미한다.).
도 4는 H&E 염색법을 이용하여 마우스의 각막 두께를 확인한 사진이다.
도 5는 마우스의 각막 두께를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다 (NTC는 아무 처리를 하지 않은 정상 대조군, DE는 스코폴라민으로 인한 안구 건조증을 유발시킨 질환군, M은 스코폴라민으로 인한 안구 건조증을 유발시킨 마우스에 시클로텔라 메네지니아나를 투여시킨 군이다. 또한, *** 은 p<0.001를 의미한다.).
도 2는 형광 염색법을 이용하여 마우스의 각막 손상 정도를 확인한 사진이다.
도 3은 형광 염색법을 이용하여 마우스의 각막 손상 정도를 확인한 결과 그래프이다 (NTC는 아무 처리를 하지 않은 정상 대조군, DE는 스코폴라민으로 인한 안구 건조증을 유발시킨 질환군, M은 스코폴라민으로 인한 안구 건조증을 유발시킨 마우스에 시클로텔라 메네지니아나를 투여시킨 군이다. 또한, *** 은 p<0.001를 의미하고, ## 은 P<0.01을 의미한다.).
도 4는 H&E 염색법을 이용하여 마우스의 각막 두께를 확인한 사진이다.
도 5는 마우스의 각막 두께를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다 (NTC는 아무 처리를 하지 않은 정상 대조군, DE는 스코폴라민으로 인한 안구 건조증을 유발시킨 질환군, M은 스코폴라민으로 인한 안구 건조증을 유발시킨 마우스에 시클로텔라 메네지니아나를 투여시킨 군이다. 또한, *** 은 p<0.001를 의미한다.).
이하 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 시클로텔라 메네지니아나의 안질환 치료 효과
1.1 시클로텔라 메네지니아나 (Cyclotella meneghinian)
본 발명의 조성물에 포함되는 시클로텔라 메네지니아나는 이노웨이브(INNOWAVE)에서 구입하여 사용하였다.
1.2 스코폴라민 유도 안구 건조증 동물 모델 제작
7주령의 암컷 BALB/c 마우스를 구입하여 공기가 조절되며 24±2℃의 온도 및 50±10%의 습도, 12 시간의 빛/12 시간의 암 주기를 지닌 동물실에서 순응시켰다. 사료와 물은 자유롭게 공급했다. 일주일간 순치시킨 후, 2주간 2.5 mg/mL의 스코폴라민을 200 ㎕씩 하루 2번 피하주사하였다.
1.2.1 동물 실험 디자인
스코폴라민으로 인해 유발된 안구 건조증에 대한 시클로텔라 메네지니아나의 효과를 확인하기 위하여, 상기 1.2절의 실험동물을 이용하였다. 무작위로 배정된 군당 5 마리의 개체를 각 실험군별로 다음과 같이 구성하였다: 아무 처리를 하지 않은 정상 대조군 (NTC), 1.2절의 방법으로 스코폴라민으로 인한 안구 건조증을 유발시킨 질환군 (DE), 스코폴라민으로 인한 안구 건조증을 유발시킨 마우스에 시클로텔라 메네지니아나 투여군 (M) 즉, 정상대조군 1개 군, 질환군 1개 군, 및 시클로텔라 메네지니아나 투여군 3개 군으로 구성하였다. 시클로텔라 메네지니아나는 300 mg/kg 농도로 하루 한번 마우스에 경구 투여하였다.
1.2.2 눈물 분비량 측정 및 각막의 손상 정도 측정
스코폴라민으로 인해 유발된 안구 건조증의 눈물 분비량과 각막의 손상 부위에 대한 시클로텔라 메네지니아나의 효과를 확인하였다. 약물 투여 후 각각 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 주차에 상기 1.2.1절의 동물 실험 디자인을 이용하여 쉬르머 시험 (shirmer test)법으로 눈물 양을 측정한 후, 희생시키기 전에 마우스의 눈에 형광 염색법 (Fluorescence staining)을 이용하여 마우스의 각막 손상 정도를 확인하였다.
구체적으로, 눈물량은 7회에 걸쳐 군당 5마리의 마우스에 쉬르머 시험법을 시행하여 Sterile standardized phenol red thread (ZONE-QUICK, Japan)을 마우스의 눈 양끝 (안각, canthus)에 대고 15초 경과 후에 눈물로 젖은 부분을 측정하였다. 도 1은 쉬르머 시험법을 이용하여 시간 (주)에 따른 마우스의 눈물량을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다 (NTC는 아무 처리를 하지 않은 정상 대조군, DE는 스코폴라민으로 인한 안구 건조증을 유발시킨 질환군, M은 스코폴라민으로 인한 안구 건조증을 유발시킨 마우스에 시클로텔라 메네지니아나를 투여시킨 군이다).
각막 손상 정도는 군당 5마리의 마우스의 눈에 형광 염색법을 진행하여 마우스 각막의 손상 정도를 파악했다. 플루오르세인 (Fluorescein)을 마우스 각막 표면에 1방울 (약 15~20 ㎕) 떨어뜨려, 눈물 막을 코팅하고, 이어서 청색광으로 각막을 비추었다. 손상된 각막 표면은 플루오르세인으로 염색되고 청색광에 비추면 녹색을 나타낸다. 각막 표면을 사진 촬영하여 Image J를 활용하여 각막 전체 면적대비 녹색으로 나타나는 손상된 각막 면적의 비율을 계산하여 손상 정도를 파악하였다. 도 2는 형광 염색법을 이용하여 마우스의 각막 손상 정도를 확인한 사진이다. 도 3은 형광 염색법을 이용하여 마우스의 각막 손상 정도를 확인한 결과 그래프이다 (NTC는 아무 처리를 하지 않은 정상 대조군, DE는 스코폴라민으로 인한 안구 건조증을 유발시킨 질환군, M은 스코폴라민으로 인한 안구 건조증을 유발시킨 마우스에 시클로텔라 메네지니아나를 투여시킨 군이다. 또한, *** 은 p<0.001를 의미하고, ## 은 P<0.01을 의미한다.).
그 결과, 시클로텔라 메네지니아나를 투여한 군(M)에서 눈물 분비량이 DE 군에 비하여 약 50% 증가하였고(도 1), DE 군에 비하여 각막 손상 정도가 훨씬 낮은 것을 확인하였다(도 2 및 3).
이러한 결과는 시클로텔라 메네지니아나가 눈물 분비량을 증가시키고 각막 손상을 막아, 안구 건조증의 예방 또는 치료에 효과가 있음을 나타낸다.
1.2.3 각막의 두께 측정
스코플라민으로 인해 유발된 안구 건조증의 각막의 두께 변화에 대한 시클로텔라 메네지니아나의 효과를 확인하였다. 구체적으로, 상기 1.2.1절의 동물 실험 디자인을 이용하여 H&E 염색법을 통해 안구 및 눈물샘 조직을 염색하여 관찰하였다.
구체적으로, 각막의 상피 조직과 눈물샘의 변화를 측정하기 위해, 희생시킨 마우스의 한쪽 안구와 눈물샘을 파라핀 블록으로 만든 후, 파라핀 블록을 3 ㎛로 자르고 자일렌 용액을 이용하여 파라핀을 3분간 3회 제거하였다. 10 (v/v)% 암모늄 용액에 에탄올과 아세트산, 글리세롤을 넣고 헤마톡실린 용액을 만든 뒤, 파라핀 제거가 끝난 조직 슬라이드를 10분간 염색하였다. 염색이 끝난 슬라이드를 증류수에 1분 세척한 뒤, 1 (v/v)% HCl-70 (v/v)% 에탄올에 5초 담근 후 증류수에 5분 동안 담가 두었다. 그 후 0.3 % 암모니아수에 2분 처리하고 증류수로 세척하였다. 세척한 조직은 1 (v/v)% 에오신과 에탄올, 그리고 아세트산을 이용하여 에오신 염색 용액을 만들어 2분간 에오신 염색한 후 50%, 70%, 90%, 95%, 100% 에탄올, 자일렌 용액에 각 1회씩 (2분/회) 세척하였다. 세척이 끝난 슬라이드 위에 Canada balsam을 떨어뜨리고 커버 슬라이드로 덮어 굳힌 뒤, 도립현미경 (TE-2000U, Nikon, Tokyo, Japan)을 이용하여 각막과 눈물샘의 변화를 측정하였다. 각막은 임의로 선정한 5곳의 사진을 찍어 Image J 프로그램을 활용하여 평균 값으로 상피층의 두께를 측정하였다. 도 4는 H&E 염색법을 이용하여 마우스의 각막 두께를 확인한 사진이다. 도 5는 마우스의 각막 두께를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다 (NTC는 아무 처리를 하지 않은 정상 대조군, DE는 스코폴라민으로 인한 안구 건조증을 유발시킨 질환군, M은 스코폴라민으로 인한 안구 건조증을 유발시킨 마우스에 시클로텔라 메네지니아나를 투여시킨 군이다. 또한, *** 은 p<0.001를 의미한다.).
그 결과, 시클로텔라 메네지니아나를 투여한 군 (M)에서 각막의 두께가 DE 군에 비하여 증가한 것을 확인하였다 (도 4 및 5).
이러한 결과는 시클로텔라 메네지니아나가 각막의 두께를 회복시켜, 안구 건조증의 예방 또는 치료에 효과가 있음을 나타낸다.
Claims (9)
- 시클로텔라 메네지니아나 (Cyclotella meneghiniana)를 유효성분으로 포함하는 안질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서, 상기 안질환은 안구 건조증이고, 경구 제형인 것인 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 시클로텔라 메네지니아나는 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 90.0 중량%로 포함되는 것인 안질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 삭제
- 청구항 1에 있어서, 상기 안구 건조증은 무루증, 각막건조증, 쇼그렌 증후군, 건조 각막결막염, 스티븐-존슨 증후군, 눈 유사물집증, 안과 수술 후 안구건조증, 알레르기성 결막염 수반 안구건조증, VDT (영상 단말기 (Visual Display Terminal)) 노동자의 눈물 감소 및 건조한 환경 및 콘택트 렌즈 착용으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상에 의해 야기된 것인 안질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 조성물은 눈물 분비량을 증가시키거나 각막 손상을 회복시키는 것인 안질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 청구항 1, 2, 4, 및 5 중 어느 하나의 약학적 조성물을 안질환 예방 또는 치료하기에 유효한 양으로 개체에 투여하는 단계를 포함하는 개체에서 안질환을 치료하는 방법으로서, 상기 개체는 사람이 아닌 포유동물이고, 상기 안질환은 안구 건조증이고, 상기 투여는 경구 투여인 것인 방법.
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Non-Patent Citations (1)
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| Li, H. Y., et al., Marine Drugs, 2014, vol. 12, pp. 153-166 (2014. 01.07) 1부.* |
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| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant |