KR102438419B1 - Cd47 과발현 중간엽 줄기세포를 포함하는 폐 질환 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents
Cd47 과발현 중간엽 줄기세포를 포함하는 폐 질환 예방 또는 치료용 조성물 Download PDFInfo
- Publication number
- KR102438419B1 KR102438419B1 KR1020210170214A KR20210170214A KR102438419B1 KR 102438419 B1 KR102438419 B1 KR 102438419B1 KR 1020210170214 A KR1020210170214 A KR 1020210170214A KR 20210170214 A KR20210170214 A KR 20210170214A KR 102438419 B1 KR102438419 B1 KR 102438419B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- mesenchymal stem
- stem cells
- preventing
- pharmaceutical composition
- cells
- Prior art date
Links
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 155
- 102100032913 Leukocyte surface antigen CD47 Human genes 0.000 title claims abstract description 12
- 101000868279 Homo sapiens Leukocyte surface antigen CD47 Proteins 0.000 title claims abstract 10
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 title abstract description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title abstract description 9
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims abstract description 45
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 claims abstract description 8
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 69
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims description 40
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 40
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 38
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 27
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 27
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 20
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 claims description 15
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 claims description 11
- 108010076503 Matrix Metalloproteinase 13 Proteins 0.000 claims description 9
- 210000004322 M2 macrophage Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000003690 classically activated macrophage Anatomy 0.000 claims description 8
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000800116 Homo sapiens Thy-1 membrane glycoprotein Proteins 0.000 claims description 7
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 claims description 7
- 102100033523 Thy-1 membrane glycoprotein Human genes 0.000 claims description 7
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 6
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 claims description 5
- 102100024210 CD166 antigen Human genes 0.000 claims description 5
- 102100037241 Endoglin Human genes 0.000 claims description 5
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 claims description 5
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 claims description 5
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 claims description 5
- 101000980840 Homo sapiens CD166 antigen Proteins 0.000 claims description 5
- 101000881679 Homo sapiens Endoglin Proteins 0.000 claims description 5
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 claims description 5
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 claims description 3
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 claims description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims description 2
- 102000011722 Matrix Metalloproteinase 13 Human genes 0.000 claims 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 15
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 abstract description 15
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 abstract description 14
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 abstract description 8
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 abstract description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 14
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 14
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 12
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 12
- 230000008859 change Effects 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 9
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 8
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 8
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 8
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 8
- 102100027995 Collagenase 3 Human genes 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 6
- 102100025831 Scavenger receptor cysteine-rich type 1 protein M130 Human genes 0.000 description 6
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 6
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 6
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 6
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 6
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 5
- 238000012760 immunocytochemical staining Methods 0.000 description 5
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 5
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 4
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 3
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 3
- 230000003510 anti-fibrotic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 3
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 3
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 208000036065 Airway Remodeling Diseases 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 2
- 101000863873 Homo sapiens Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type substrate 1 Proteins 0.000 description 2
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 2
- 101710098610 Leukocyte surface antigen CD47 Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 208000002200 Respiratory Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 108010046722 Thrombospondin 1 Proteins 0.000 description 2
- 102100036034 Thrombospondin-1 Human genes 0.000 description 2
- 102100029948 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type substrate 1 Human genes 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000010085 airway hyperresponsiveness Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 208000002815 pulmonary hypertension Diseases 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- -1 3T3 Proteins 0.000 description 1
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000000884 Airway Obstruction Diseases 0.000 description 1
- 102100035248 Alpha-(1,3)-fucosyltransferase 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100022749 Aminopeptidase N Human genes 0.000 description 1
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 238000009020 BCA Protein Assay Kit Methods 0.000 description 1
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 1
- 206010006448 Bronchiolitis Diseases 0.000 description 1
- 108010017009 CD11b Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 1
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 1
- 108010045374 CD36 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000053028 CD36 Antigens Human genes 0.000 description 1
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100037904 CD9 antigen Human genes 0.000 description 1
- 101100506090 Caenorhabditis elegans hil-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010007522 Cardiac asthma Diseases 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 208000034423 Delivery Diseases 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 102100023471 E-selectin Human genes 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241001522878 Escherichia coli B Species 0.000 description 1
- 241001302584 Escherichia coli str. K-12 substr. W3110 Species 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001022185 Homo sapiens Alpha-(1,3)-fucosyltransferase 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000757160 Homo sapiens Aminopeptidase N Proteins 0.000 description 1
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000738354 Homo sapiens CD9 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000622123 Homo sapiens E-selectin Proteins 0.000 description 1
- 101000935043 Homo sapiens Integrin beta-1 Proteins 0.000 description 1
- 101001015004 Homo sapiens Integrin beta-3 Proteins 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 1
- 101000610551 Homo sapiens Prominin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000600434 Homo sapiens Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Proteins 0.000 description 1
- 101000914496 Homo sapiens T-cell antigen CD7 Proteins 0.000 description 1
- 101000934346 Homo sapiens T-cell surface antigen CD2 Proteins 0.000 description 1
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 1
- 101000934341 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD5 Proteins 0.000 description 1
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 1
- 101100321817 Human parvovirus B19 (strain HV) 7.5K gene Proteins 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 108020005350 Initiator Codon Proteins 0.000 description 1
- 102100025304 Integrin beta-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100032999 Integrin beta-3 Human genes 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 206010029888 Obliterative bronchiolitis Diseases 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 208000004327 Paroxysmal Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 102100040120 Prominin-1 Human genes 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 102100037401 Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Human genes 0.000 description 1
- 108020005091 Replication Origin Proteins 0.000 description 1
- 208000004756 Respiratory Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 101710102649 Scavenger receptor cysteine-rich type 1 protein M130 Proteins 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100027208 T-cell antigen CD7 Human genes 0.000 description 1
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 description 1
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 1
- 102100025244 T-cell surface glycoprotein CD5 Human genes 0.000 description 1
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 102000046299 Transforming Growth Factor beta1 Human genes 0.000 description 1
- 101800002279 Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 1
- 239000013602 bacteriophage vector Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 1
- 201000003848 bronchiolitis obliterans Diseases 0.000 description 1
- 208000023367 bronchiolitis obliterans with obstructive pulmonary disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000009702 cancer cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 102000055277 human IL2 Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 239000008274 jelly Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000651 myofibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 210000001147 pulmonary artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000004088 pulmonary circulation Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 230000009325 pulmonary function Effects 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 201000004193 respiratory failure Diseases 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 210000005241 right ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001258 synovial membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 1
- 210000001644 umbilical artery Anatomy 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 230000009677 vaginal delivery Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000002689 xenotransplantation Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
CD47을 과발현하는 중간엽 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 폐 질환 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, CD47을 과발현하는 중간엽 줄기세포는 자가 유래가 아닌 경우에도 생체 내에서 높은 생존률 및 폐 조직으로의 이동능을 나타내고, 폐 조직의 염증 반응을 감소시키며, 섬유화를 억제하는 효과를 나타내므로 폐의 염증 또는 섬유화와 관련된 다양한 폐 질환의 예방 또는 치료 용도로 널리 활용될 것이다.
Description
CD47을 과발현하는 중간엽 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 폐 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
폐(lung)는 인체에서 호흡을 담당하는 필수적인 기관으로, 공기의 들숨과 날숨을 통해 산소를 얻고 이산화탄소를 배출하는 기관이다. 이러한 폐는 생명 현상의 유지를 위해 기능하고, 폐에서 체액 성분이 활발하게 상피 세포를 통해 흡수 또는 배출되며, 경우에 따라서는 흡입형 약물의 전달 통로가 될 수 있다.
이러한 폐에 나타나는 폐 질환 중에서 대표적인 질환인 천식(Asthma)은 지난 20년 동안 발병률이 두 배로 증가하고 오늘날 8~10%의 세계 인구에 영향을 미치고 있는 질환이며, 주로 기도의 만성 염증에 의해 일어난다. 천식은 비 특이적 자극에 대한 기도 과민성(Airway HyperResponsiveness, AHR) 및 기도 개형(Airway Remodeling)을 특징으로 하며, 후자는 섬유아세포(Fibroblast) 및 근섬유아세포(Myofibroblasts)의 세포성 변화와 기도의 구조적 변화를 일으키는 동적 과정을 수반한다. 천식의 종류에는 기관지 천식 및 심장성 천식 등이 있는데, 단순히 천식은 보통의 경우 기관지 천식을 의미한다. 천식이 반복되면 섬유화 및 기도 개형이 발생하면서 영구적인 폐 기능 저하를 초래하기도 한다.
천식과 함께 대표적인 폐 질환의 하나로 꼽히는 만성 폐쇄성 폐 질환(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)은 비가역적인 기도 폐색을 동반한다는 점에서 천식과 차이가 있다. 기도 및 폐 실질 염증에 의한 세기관지 및 폐 실질의 병리학적 변화에 의해 발생하는 질환으로 폐쇄성 세기관지염 및 폐기종을 특징으로 한다. 만성 폐쇄성 폐 질환의 종류에는 만성 폐쇄성 기관지염(Chronic obstructive bronchitis), 만성 세기관지염(Chronic bronchiolitis) 및 폐기종(Emphysema)이 있으며, 호흡 곤란, 기침, 가래 등의 증상이 나타나고, 만성 기관지염 환자 중의 대다수에서 나타난다고 알려져 있다.
또한, 폐 섬유증(pulmonary fibrosis)은 일종의 만성 간질성 폐 질환으로서, 림프구, 대식세포 등 염증 세포의 폐 간질 침윤, 섬유아세포 증식 및 섬유성 결합 조직의 폐 간질 침적을 통하여 심각한 호흡 장애를 일으키는 폐 질환이다. 폐의 섬유화가 진행됨에 따라 여러가지 합병증이 나타나는데, 폐활량 감소와 산소 확산 장애로 발생하는 전신성 저산소증, 섬유 조직이 수축함에 따라 폐 동맥 및 모세혈관이 눌려 발생하는 폐 고혈압, 폐 순환 장애로 우심실에 혈액이 고여 유발되는 심부전, 그 외에도 혈전증, 폐렴 등이 있다. 또한 염증과 섬유화로 인해 폐암 발병률이 증가할 수 있다.
이와 같이 다양한 폐 질환은 대부분 염증 또는 섬유화와 관련되어 있으며, 현재까지 이를 동시에 개선할 수 있는 폐 질환 치료제는 알려져 있지 않은 상황이다.
이에, 본 발명자들은 염증 또는 섬유화와 관련된 다양한 폐 질환을 부작용 없이 효과적으로 치료하기 위하여 예의 노력한 결과, CD47을 과발현하는 제대혈 유래 중간엽 줄기세포가 항염증 및 항섬유화 효과를 나타내는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은, 항염증 및 항섬유화 효과를 나타내는 폐 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 일 양상은 CD47을 발현하는 중간엽 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 폐 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
용어, "CD47(Cluster of Differentiation 47)"은 인테그린 관련 단백질(integrin associated protein, IAP)라고도 불리우며, 리간드 트롬보스폰딘-1(thrombospondin-1, TSP-1) 및 신호 조절 단백질 알파(signal-regulatory protein alpha, SIRPα)에 결합하고, 인간 세포에서 발현되는 세포 표면 당단백질을 의미한다. 종양 조직에서 CD47의 발현을 억제하는 경우에 CTLA 및 PD-1을 표적으로 하여 T 세포 매개 적응 면역의 식세포 작용을 유도함으로써 일부 암 치료 효과를 나타내는 것으로 알려져 있다. CD47의 활성화는 P13K/Akt 경로를 통한 향상된 암 세포의 증식과 상관관계가 있는 것으로 밝혀졌다. 면역 반응 외에도 CD47은 세포 사멸, 증식, 부착 및 이동을 포함한 다양한 세포 과정에 관여한다.
용어, "중간엽 줄기세포(Mesenchymal Stem cells, MSCs)"는 수정란이 분열하여 생긴 중배엽에서 분화된 연골, 골조직, 지방조직, 골수의 기질(stroma) 등에 존재하는 줄기세포를 의미할 수 있고, 포유류, 예를 들면 인간을 포함한 동물의 중간엽 줄기세포를 포함할 수 있다. 중간엽 줄기세포는 줄기세포능(stemness)과 자기재생능(self-renewal)을 유지하고 연골세포, 조골세포, 근육세포, 지방세포를 포함한 다양한 세포로 분화할 수 있는 능력을 가지며, 골수(bone marrow), 지방조직(adipose tissue), 재대혈(umbilical cord blood), 활막(synovial membrane), 골조직(trabecular bone), 근육, 슬개건하 지방(infrapatellar fat pad) 등에서 추출할 수 있다. 중간엽 줄기세포는 T 림프구, B 림프구의 활성, 증식을 억제하며, 자연 살해 세포(natural killer cell, NK cell)의 활성을 억제하고, 수지상세포(dendritic cell)와 대식세포(macrophage)의 기능을 조절하는 면역조절 능력을 가지고 있으므로 동종이식(allotransplantation)과 이종이식(xenotransplantation)이 가능한 세포이다.
상기 중간엽 줄기세포는 CD47의 발현이 증가되도록 유전적으로 조작된 것일 수 있다.
용어 "유전적 조작(genetic engineering)" 또는 "유전적으로 조작된(genetically engineered)"은 세포에 대하여 하나 이상의 유전적 변형(genetic modification)을 도입하는 행위를 의미할 수 있다.
상기 발현(expression) 증가 또는 과발현(overexpression)은 주어진 유전적으로 조작되지 않은 모세포(예를 들어, 야생형)가 갖는 내재적 단백질의 발현과 비교하여, 동일한 타입의 단백질의 발현이 보다 더 높은 수준을 갖는 것을 의미할 수 있다.
상기 유전적으로 조작된 중간엽 줄기세포는 CD47을 암호화하는 외인성 유전자(exogenous gene)가 도입된 재조합 벡터를 포함하는 것일 수 있다.
일 구현예에서, CD47을 암호화하는 외인성 유전자가 도입된 바이러스 벡터를 이용하여 CD47을 과발현하는 중간엽 줄기세포를 제조할 수 있다.
상기 외인성 유전자는, 상기 중간엽 줄기세포 또는 숙주 세포에서 그 모세포에 비하여 CD47의 활성이 증가되기에 충분한 양으로 발현된 것일 수 있다. 상기 외인성 유전자는 발현 벡터를 통하여 모세포 내로 도입된 것일 수 있다. 또한, 상기 외인성 유전자는 선형 폴리뉴클레오티드 형태로 모세포 내로 도입된 것일 수 있다. 또한, 상기 외인성 유전자는 세포 내에서 발현 벡터(예를 들어, 플라스미드)로부터 발현되는 것일 수 있다. 또한, 상기 외인성 유전자는 안정적인 발현을 위하여 세포 내의 유전물질(예를 들어, 염색체)에 삽입되어 발현되는 것일 수 있다. 또한, 상기 외인성 유전자는 유전자에 작동 가능하게 연결된 외인성 프로모터에 의해 적절히 조절되는 것일 수 있다. 상기 폴리뉴클레오티드의 발현량 강화는 발현 조절 서열의 치환 또는 돌연변이에 의한 변형, 폴리뉴클레오티드 서열 자체의 변이 도입, 개시 코돈의 교체, 염색체에 삽입하는 것 또는 벡터를 통해 도입하는 것에 의한 카피수 증가, 또는 이의 조합에 의한 것일 수 있다.
용어, "작동가능하게 연결된"은 조절 서열(예, 프로모터)과 상기 폴리뉴클레오티드 서열 사이의 기능적인 결합을 의미하며, 이에 의해 상기 조절 서열은 상기 폴리뉴클레오티드 서열의 전사 및/또는 번역을 조절하게 된다. 상기 조절 서열은 상기 폴리뉴클레오티드의 발현량을 증가시킬 수 있는 강력한 프로모터일 수 있다. 상기 조절 서열은 코리네박테리움 속 또는 다른 미생물에서 유래한 프로모터일 수 있다. 상기 프로모터는 예를 들면, trc 프로모터, gap 프로모터, tac 프로모터, T7 프로모터, lac 프로모터, trp 프로모터, araBAD 프로모터 또는 cj 1 내지 7 프로모터일 수 있다. 상기 조절 서열은 예를 들면, 코리네박테리움 속 미생물에서 라이신 생합성 경로 상의 주요 유전자의 프로모터 서열을 더 높은 프로모터 활성을 갖도록 변형시킨 것일 수 있다.
용어, "벡터"는 적합한 숙주 세포 내에서 목적 유전자를 발현시킬 수 있도록 유전자의 조절 서열과 염기서열을 함유하는 폴리뉴클레오티드 제조물을 의미할 수 있다. 혹은 숙주 세포 내로 도입시켜 숙주의 게놈상의 내생적(endogenous) 유전자의 조절 서열을 바꾸거나, 게놈상의 특정 부위에 발현 가능한 목적 유전자를 삽입할 수 있도록 상동 재조합이 가능한 염기서열을 함유하는 폴리뉴클레오티드 제조물을 의미할 수 있다. 그러므로, 상기 벡터는 숙주 내로의 도입 혹은 염색체 삽입 여부를 확인하기 위한 선별 마커(selection marker)를 추가로 포함할 수 있는데, 선별 마커는 약물 내성, 영양 요구성, 세포 독성제에 의한 내성 또는 표면 단백질의 발현과 같은 선택 가능한 표현형을 부여하는 마커들이 사용될 수 있다. 선택제가 처리된 환경에서는 선별 마커를 발현하는 세포만 생존하거나, 다른 표현 형질을 나타내므로, 형질전환된 세포를 선별할 수 있다. 상기 벡터는 플라스미드 벡터, 렌티바이러스 벡터, 코즈미드 벡터 및 박테리오파아지 벡터, 아데노바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터 및 아데노-연관 바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터를 포함할 수 있다. 또한, 상기 재조합 벡터로 사용될 수 있는 벡터는 당업계에서 종종 사용되는 플라스미드(예를 들면, pSC101, pGV1106, pACYC177, ColE1, pKT230, pME290, pBR322, pUC8/9, pUC6, pBD9, pHC79, pIJ61, pLAFR1, pHV14, pGEX 시리즈, pET 시리즈 및 pUC19 등), 파지(예를 들면, λgt4λB, λ-Charon, λ△z1 및 M13 등) 또는 바이러스(예를 들면, SV40 등)를 조작하여 제작될 수 있다.
상기 재조합 벡터는, 전형적으로 클로닝을 위한 벡터 또는 발현을 위한 벡터로서 구축될 수 있다. 상기 발현용 벡터는 당업계에서 식물, 동물 또는 미생물에서 외래의 단백질을 발현하는 데 사용되는 통상의 것을 사용할 수 있다. 상기 재조합 벡터는 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 구축될 수 있다.
상기 재조합 벡터는 원핵 세포 또는 진핵 세포를 숙주로 하여 구축될 수 있다. 예를 들어, 사용되는 벡터가 발현 벡터이고, 원핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 전사를 진행시킬 수 있는 강력한 프로모터(예를 들어, pLλ 프로모터, CMV 프로모터, trp 프로모터, lac 프로모터, tac 프로모터, T7 프로모터 등), 해독의 개시를 위한 라이보좀 결합 자리 및 전사/해독 종결 서열을 포함하는 것이 일반적이다. 진핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 벡터에 포함되는 진핵 세포에서 작동하는 복제원점은 f1 복제원점, SV40 복제원점, pMB1 복제원점, 아데노 복제원점, AAV 복제원점 및 BBV 복제원점 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 포유동물 세포의 게놈으로부터 유래된 프로모터(예를 들어, 메탈로티오닌 프로모터) 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터(예를 들어, 아데노바이러스 후기 프로모터, 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터, SV40 프로모터, 사이토메갈로바이러스 프로모터 및 HSV의 tk프로모터)가 이용될 수 있으며, 전사 종결 서열로서 폴리아데닐화 서열을 일반적으로 갖는다.
상기 재조합 세포는 상기 재조합 벡터를 적절한 숙주 세포에 도입시킴으로써 얻어진 것일 수 있다. 상기 숙주세포는 상기 재조합 벡터를 안정되면서 연속적으로 클로닝 또는 발현시킬 수 있는 세포로서 당업계에 공지된 어떠한 숙주 세포도 이용할 수 있으며, 원핵 세포로는, 예를 들어, E. coliJM109, E. coliBL21, E. coli RR1, E. coli LE392, E. coli B, E. coli X 1776, E. coli W3110, 바실러스 서브틸리스, 바실러스 츄린겐시스와 같은 바실러스 속 균주, 그리고 살모넬라 티피무리움, 세라티아 마르세슨스 및 다양한 슈도모나스 종과 같은 장내균과 균주 등이 있으며, 진핵 세포에 형질 전환시키는 경우에는 숙주 세포로서, 효모(Saccharomyce cerevisiae), 곤충 세포, 식물 세포 및 동물 세포, 예를 들어, Sp2/0, CHO(Chinese hamster ovary) K1, CHO DG44, PER.C6, W138, BHK, COS-7, 293, HepG2, Huh7, 3T3, RIN, MDCK 세포주 등이 이용될 수 있다.
상기 중간엽 줄기세포는 탯줄, 제대혈, 태반, 골수, 지방조직, 근육, 양수, 양막 및 치수로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나에서 유래된 것일 수 있다.
용어 "분리된 세포", 예를 들어, "분리된 중간엽 줄기세포" 또는 "유래된 세포", 예를 들어, "유래된 중간엽 줄기세포"등은 세포가 기원하는 조직, 예를 들어, 제대혈로부터 실질적으로 분리된 세포를 의미한다.
상기 탯줄(umbilical cord)은 포유류의 태아가 태반에서 성장할 수 있도록 모체와 배를 연결해주는 줄을 의미할 수 있으며, 일반적으로 와튼 젤리(Wharton's jelly)로 둘러싸인 3개의 혈관, 즉, 2개의 배꼽 동맥과 1개의 배꼽 정맥으로 구성된 조직을 의미할 수 있으며, 제대로 불리기도 한다.
상기 제대혈은 포유 동물의 태반과 태아를 연결하는 탯줄정맥으로부터 채취된 혈액을 의미할 수 있다. 상기 제대혈은 출산시 공여자의 탯줄정맥으로부터 용이하게 채취할 수 있다. 구체적으로, 정상 질식 분만의 경우에는 출산 후 자궁 내에 아직 태반이 남아있는 상태에서 밖으로 만출된 제대정맥으로부터 채취할 수 있으며, 제왕 절개의 경우에는 출산 후 태반 역시 자궁 밖으로 만출된 상태에서 제대정맥으로부터 채취할 수 있다.
일 구현예에서, 상기 중간엽 줄기세포는 제대혈 유래일 수 있다.
상기 중간엽 줄기세포는 세포 집단의 20% 내지 99%가 CD47을 발현하는 것일 수 있다.
상기 중간엽 줄기세포는 세포 집단의 적어도 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 약 99%, 또는 30% 내지 100%, 30% 내지 99%, 30% 내지 98%, 30% 내지 97%, 40% 내지 99%, 50% 내지 99%, 60% 내지 99%, 70% 내지 99%, 80% 내지 99% 또는 90% 내지 99%가 CD47을 발현하는 것일 수 있다.
일 구현예에서, 대조군 중간엽 줄기세포 집단의 약 29%가 CD47을 발현하였으며, CD47을 암호화하는 외인성 유전자가 도입된 재조합 벡터를 포함하는 중간엽 줄기세포 집단의 약 96%가 CD47을 발현하는 것을 확인할 수 있다.
구체적으로, 상기 유전적으로 조작되지 않은 중간엽 줄기세포 집단의 20% 내지 85%, 20% 내지 70%, 20% 내지 60%, 25% 내지 50%가 CD47을 발현할 수 있다. 상기 유전적으로 조작된 중간엽 줄기세포 집단의 80% 내지 100%, 85% 내지 99%, 90% 내지 99%는 CD47을 발현할 수 있다.
상기 중간엽 줄기세포는 i) CD90, CD105, CD73 및 CD166로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 마커에 대하여 양성이고, ii) CD14 또는 HLA-DR 마커에 대하여 음성일 수 있다.
용어, "양성 또는 +"은 중간엽 줄기세포 특이적 마커와 관련하여, 그 마커가 기준이 되는 다른 세포와 비교하였을 때 더 많은 양, 또는 더 높은 농도로 존재하는 것을 의미할 수 있다. 즉, 세포는 어느 마커가 세포 내부 또는 표면에 존재하기 때문에 그 마커를 이용하여 그 세포를 하나 이상의 다른 세포 유형과 구별할 수 있으면 그 마커에 대하여 양성이 된다. 또한 세포가 배경 값보다 더 큰 값으로 신호, 예를 들어 세포 측정 장치의 신호를 낼 수 있는 만큼의 양으로 그 마커를 발현하고 있다는 것을 의미할 수 있다. 예를 들어 세포를 CD90 특이적인 항체로 검출 가능하게 표지할 수 있고, 이 항체로부터의 신호가 대조군(예를 들어, 배경 값)보다 검출 가능하게 더 크면 그 세포는 "CD90+"이다.
용어, "음성 또는 -"은 특정 세포 마커에 특이적인 항체를 사용하여도 배경 값에 비교하여 그 표지를 검출할 수 없음을 의미할 수 있다. 예를 들어 CD14에 특이적인 항체로 세포를 검출 가능하게 표지할 수 없으면 그 세포는 "CD14-"이다.
일 구현예에서, 유전적으로 조작된 CD47 과발현 중간엽 줄기세포 집단과 유전적으로 조작되지 않은 중간엽 줄기세포 집단에서 동일하게 98% 이상이 CD90, CD105, CD73 및 CD166 마커를 발현하고, 1% 이하가 CD14 및 HLA-DR 마커를 발현하는 것을 확인할 수 있다. 따라서, 유전적으로 조작된 CD47 과발현 중간엽 줄기세포도 중간엽 줄기세포 특이적 특성을 유지하는 것을 확인할 수 있다.
상기 중간엽 줄기세포는 CD9, CD13, CD29, CD44, CD73, CD90, CD105, CD166, 및 HLA-abc로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 마커에 대하여 양성일 수 있다.
상기 중간엽 줄기세포는 CD2, CD3, CD4, CD5, CD7, CD8, CD14, CD15, CD16, CD19, CD20, CD22, CD33, CD36, CD38, CD61, CD62E, CD133 및 HLA-DR로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 마커에 대하여 음성일 수 있다.
상기 중간엽 줄기세포는 감소된 면역원성을 나타내는 것일 수 있다.
일 구현예에서, CD47 과발현 중간엽 줄기세포를 PBMC 또는 NK 세포와 공배양한 경우에, 활성화된 PBMC와 NK 세포에 의한 세포 사멸 효과가 감소하는 것을 확인할 수 있다. 따라서, 상기 CD47 과발현 중간엽 줄기세포를 투여한 경우에 자가 유래가 아니여도 활성화된 PBMC 또는 NK 세포에 의한 면역 반응을 회피할 수 있으므로, 투여한 세포의 생체 내 생존률이 증가할 수 있다.
상기 폐 질환은 천식, 폐렴, 만성 폐쇄성 폐 질환, 기관지염, 폐기종, 폐 고혈압 또는 폐 섬유증일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 중간엽 줄기세포는 폐 조직의 염증 반응을 감소시킬 수 있다.
상기 중간엽 줄기세포는 M1 대식세포를 감소시키고, M2 대식세포를 증가시킬 수 있다.
M1 대식세포는 염증 반응을 유발하고, M2 대식세포는 염증 반응을 감소시키고 손상된 조직을 복구시키는 역할을 한다.
일 구현예에서, 천식 마우스 모델에 CD47 과발현 중간엽 줄기세포를 정맥 투여한 결과, CD47 과발현 중간엽 줄기세포가 폐 조직까지 잘 이동했으며, 폐 조직의 염증 반응을 유발하는 M1 대식세포 특이적 마커의 발현을 감소시키고, 손상된 조직을 복구시키는 M2 대식세포 특이적 마커의 발현을 증가시키는 것을 확인할 수 있다. 또한, 천식 마우스 모델의 기관지 폐포 세척액(BALF)의 염증성 사이토카인의 발현 및 호중구 세포수를 감소시키는 것을 확인할 수 있다.
따라서, 상기 CD47 과발현 중간엽 줄기세포는 천식을 비롯한 폐 조직의 염증 반응과 관련된 질환의 예방 또는 치료 용도로 사용될 수 있다.
상기 CD47을 과발현하는 중간엽 줄기세포는 α-SMA(α-smooth muscle actin) 및 MMP-13(matrix metalloproteinase-13)의 발현을 감소시킬 수 있다.
일 구현예에서, CD47 과발현 중간엽 줄기세포와 인간 폐 섬유아세포(Human Pulmonary Fibroblasts, HPF)를 공배양한 결과, 섬유화 특이적 마커의 발현이 감소하는 것을 확인할 수 있다.
따라서, 상기 CD47 과발현 중간엽 줄기세포는 섬유증을 비롯한 폐 조직의 섬유화와 관련된 질환이 예방 또는 치료 용도로 사용될 수 있다.
다른 양상은 상기 CD47 과발현 중간엽 줄기세포 배양액을 유효성분으로 포함하는 폐 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 CD47 과발현 중간엽 줄기세포 배양액은 상기 CD47 과발현 중간엽 줄기세포를 적합한 배지에서 계대배양하는 과정에서 배양액을 수득한 후 여과하는 단계를 통하여 수득할 수 있다.
다른 양상은 상기 CD47 과발현 중간엽 줄기세포 또는 이의 세포 집단을 유효성분으로 포함하는 세포치료제 또는 약학적 조성물을 제공한다.
상기 세포치료제 또는 약학적 조성물은 폐 질환의 예방 또는 치료용인 것일 수 있다.
또 다른 양상은 CD47 과발현 중간엽 줄기세포 또는 이의 세포 집단을 의약의 제조에 사용하기 위한 용도를 제공한다.
또 다른 양상은 상기 CD47 과발현 중간엽 줄기세포 또는 이의 세포 집단을 치료학적으로 유효한 양 또는 약학적으로 유효한 양으로 개체에 투여하는 단계를 포함하는 질환 치료 방법을 제공한다.
상기 세포치료제 또는 약학적 조성물은 치료학적으로 유효한 양 또는 약학적으로 유효한 양으로 환자에 투여될 수 있다.
용어, "치료"는 질환, 장애 또는 병태, 또는 그의 하나 이상의 증상의 경감, 진행 억제 또는 예방을 지칭하거나, 그를 포함하며, "유효성분"은 질환, 장애 또는 병태, 또는 그의 하나 이상의 증상의 경감, 진행 억제 또는 예방에 유효한 세포 집단 또는 조성물을 의미할 수 있다.
용어, "투여하는," "도입하는" 및 "이식하는"은 상호교환적으로 사용되고 일 구현예에 따른 조성물의 원하는 부위로의 적어도 부분적 국소화를 초래하는 방법 또는 경로에 의한 개체내로의 일 구현예에 따른 조성물의 배치를 의미할 수 있다. 일 구현예에 따른 조성물의 세포 또는 세포 성분의 적어도 일부를 생존하는 개체 내에서 원하는 위치로 전달하는 임의의 적절한 경로에 의해 투여될 수 있다. 개체 투여 후 세포의 생존 기간은 짧으면 수 시간, 예를 들면 24시간 내지 수일 내지 길면 수년일 수 있다. 상기 약학적 조성물은 치료학적으로 유효한 양 또는 약학적으로 유효한 양으로 환자에 투여될 수 있다.
용어 "치료학적으로 유효한 양" 또는 "약학적으로 유효한 양"이란 폐 질환을 예방 또는 치료하는데 유효한 세포 집단 또는 조성물의 양으로서, 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미한다. 상기 유효량의 수준은 환자의 건강 상태, 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
구체적으로, 상기 약학적 조성물에서 상기 CD47 과발현 중간엽 줄기세포의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중(kg) 당 약 1X106 ~ 1X107 cells의 세포를 단회 혹은 반복하여 투여할 수 있다. 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로, 범위는 이에 한정되지 않는다.
중복되는 내용은 본 명세서의 복잡성을 고려하여 생략하며, 본 명세서에서 달리 정의되지 않은 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것이다.
일 양상에 따른 CD47을 과발현하는 중간엽 줄기세포는 자가 유래가 아닌 경우에도 생체 내에서 높은 생존률 및 폐 조직으로의 이동능을 나타내고, 폐 조직의 염증 반응을 감소시키며, 섬유화를 억제하는 효과를 나타내므로 폐의 염증 또는 섬유화와 관련된 다양한 폐 질환의 예방 또는 치료 용도로 널리 활용될 것이다.
도 1은 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C.)의 CD47 발현율을 확인한 결과이다.
도 2는 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C.)의 중간엽 줄기세포 특이적 마커의 발현 정도를 비교한 결과이다.
도 3는 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 천식 마우스 모델에 투여한 후, 폐 조직에서의 염증 개선 효과를 비교한 결과이다.
도 4는 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 천식 마우스 모델에 투여한 후, 폐 조직에서 M1 대식세포 특이적 마커인 CD11b의 발현 변화를 면역세포화학염색을 통하여 확인한 결과이다.
도 5는 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 천식 마우스 모델에 투여한 후, 폐 조직에서 M1 대식세포 특이적 마커인 CD11b를 발현하는 세포의 개수를 측정한 결과이다.
도 6은 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 천식 마우스 모델에 투여한 후, 폐 조직에서 M2 대식세포 특이적 마커인 CD163의 발현 변화를 면역세포화학염색을 통하여 확인한 결과이다.
도 7은 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 천식 마우스 모델에 투여한 후, 폐 조직에서 M2 대식세포 특이적 마커인 CD163을 발현하는 세포의 개수를 측정한 결과이다.
도 8은 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 천식 마우스 모델에 정맥 투여한 후, 폐 조직으로 이동 여부를 면역세포화학염색을 통하여 확인한 결과이다.
도 9는 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 천식 마우스 모델에 정맥 투여한 후, 폐 조직으로 이동한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포의 개수를 측정한 결과이다.
도 10은 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 천식 모델에 투여한 후, 기관지 폐포 세척액(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)에서 염증성 사이토카인의 발현 변화를 확인한 결과이다.
도 11은 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 천식 모델에 투여한 후, BALF에서 호중구 세포수의 변화를 확인한 결과이다.
도 12는 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 각각 활성화된 말초 혈액 단핵세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)와 공배양한 후, 중간엽 줄기세포의 생존변화를 면역세포화학염색을 통하여 확인한 결과이다.
도 13은 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 각각 PBMC와 공배양한 후, 중간엽 줄기세포의 생존률을 측정한 결과이다.
도 14는 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 각각 활성화된 자연 살해 세포(natural killer cell, NK cell)와 공배양한 후, 중간엽 줄기세포의 생존 변화를 면역세포화학염색을 통하여 확인한 결과이다.
도 15는 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 활성화된 NK 세포를 공배양한 후, 중간엽 줄기세포의 생존률을 측정한 결과이다.
도 16은 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 인간 폐 섬유아세포(Human Pulmonary Fibroblasts, HPF)와 공배양한 후, 섬유화 특이적 마커의 발현량 변화를 확인한 결과이다.
도 2는 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C.)의 중간엽 줄기세포 특이적 마커의 발현 정도를 비교한 결과이다.
도 3는 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 천식 마우스 모델에 투여한 후, 폐 조직에서의 염증 개선 효과를 비교한 결과이다.
도 4는 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 천식 마우스 모델에 투여한 후, 폐 조직에서 M1 대식세포 특이적 마커인 CD11b의 발현 변화를 면역세포화학염색을 통하여 확인한 결과이다.
도 5는 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 천식 마우스 모델에 투여한 후, 폐 조직에서 M1 대식세포 특이적 마커인 CD11b를 발현하는 세포의 개수를 측정한 결과이다.
도 6은 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 천식 마우스 모델에 투여한 후, 폐 조직에서 M2 대식세포 특이적 마커인 CD163의 발현 변화를 면역세포화학염색을 통하여 확인한 결과이다.
도 7은 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 천식 마우스 모델에 투여한 후, 폐 조직에서 M2 대식세포 특이적 마커인 CD163을 발현하는 세포의 개수를 측정한 결과이다.
도 8은 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 천식 마우스 모델에 정맥 투여한 후, 폐 조직으로 이동 여부를 면역세포화학염색을 통하여 확인한 결과이다.
도 9는 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 천식 마우스 모델에 정맥 투여한 후, 폐 조직으로 이동한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포의 개수를 측정한 결과이다.
도 10은 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 천식 모델에 투여한 후, 기관지 폐포 세척액(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)에서 염증성 사이토카인의 발현 변화를 확인한 결과이다.
도 11은 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 천식 모델에 투여한 후, BALF에서 호중구 세포수의 변화를 확인한 결과이다.
도 12는 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 각각 활성화된 말초 혈액 단핵세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)와 공배양한 후, 중간엽 줄기세포의 생존변화를 면역세포화학염색을 통하여 확인한 결과이다.
도 13은 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 각각 PBMC와 공배양한 후, 중간엽 줄기세포의 생존률을 측정한 결과이다.
도 14는 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 각각 활성화된 자연 살해 세포(natural killer cell, NK cell)와 공배양한 후, 중간엽 줄기세포의 생존 변화를 면역세포화학염색을 통하여 확인한 결과이다.
도 15는 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 활성화된 NK 세포를 공배양한 후, 중간엽 줄기세포의 생존률을 측정한 결과이다.
도 16은 일 양상에 의한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C)를 인간 폐 섬유아세포(Human Pulmonary Fibroblasts, HPF)와 공배양한 후, 섬유화 특이적 마커의 발현량 변화를 확인한 결과이다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
제조예 1. 제대혈로부터 중간엽 줄기세포의 분리
건강한 산모의 동의를 얻어 분만 과정에서 공여되는 제대정맥으로부터 수득한 기증 제대혈을 피콜 하이팩 그라디언트(Ficoll-Hypaque gradient)로 원심분리하여 단핵구 세포를 수득한 후, 중간엽 줄기세포 배양 배지에서 배양하여 제대혈 유래 중간엽 줄기세포를 수득하였다.
제조예 2. CD47 과발현 중간엽 줄기세포의 제조
CD47 과발현 렌티바이러스를 생산하기 위하여, plenti-suCMV-RSV-GFP 벡터에 CD47 ORF(Open reading frame) 서열을 EZ-Fusion HT Cloning Kit(#EZ015, Enzynomics)를 이용하여 클로닝하였다. plenti-suCMV-RSV-GFP-CD47, pMD2.G 및 psPAX2 벡터를 293T 세포에 트랜스펙션하여 렌티바이러스를 패키징하였다. 바이러스 입자를 함유하는 배지를 수집하고 중간엽 줄기세포에 처리하여 형질도입하였다. 항생제인 퓨로마이신(#ant-pr-1, Invivogen)을 2일 동안 처리하여 형질도입된 줄기세포만을 선별 및 배양하여 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(Overexpression, O.E)를 제조하였다. CD47 발현량 및 기능 분석을 위한 대조군 중간엽 줄기세포(Vector control, V.C)는 backbone vector인 plenti-suCMV-RSV-GFP를 이용하여 상기 CD47 과발현 중간엽 줄기세포 제조와 동일한 방법으로 렌티바이러스 패키징, 형질도입, 항생제 선별을 통하여 제조하였다.
실시예 1. CD47 과발현 중간엽 줄기세포의 특성 분석
제조예 2에서 제조한 CD47 과발현 중간엽 줄기세포의 특성을 분석하기 위하여, 다음과 같이 웨스턴 블랏(Western blot)과 유세포 분석(Flow cytometry)을 수행하였다.
웨스턴 블랏 방법을 보다 구체적으로 설명하면, 대조군 중간엽 줄기세포, CD47 과발현 중간엽 줄기세포 각각에 RIPA lysis buffer(#78440, Thermo Scientific)를 처리한 후 얼음에서 30분 동안 반응시켜 세포를 파쇄하였다. 이 세포 파쇄액을 원심분리한 후 상등액만을 모아 BCA Protein Assay Kit(#23225, Thermo Scientific)를 이용하여 정량화하였다. 단백질 추출액 10 ㎍을 10% SDS-PAGE를 이용하여 분리한 후 멤브레인에 트랜스퍼하였다. blocking buffer(0.1% Tween 20, 5% BSA in tris buffered saline)로 1시간 동안 실온(room temperature)에서 반응시킨 후 1차 항체를 처리하여 4℃에서 밤새도록 반응시켰다. 사용한 1차 항체로는 CD47(#MA5-11895, Thermo Scientific), b-actin(#A5441, Sigma)이다. TBST로 3회 세척 후 2차 항체를 실온에서 1시간 동안 반응시키고, 세척 후 ChemiDoc MP System(Bio-rad)을 이용하여 단백질 밴드를 분석하였다.
세포 표면에서의 CD47 과발현 확인을 위하여 유세포 분석을 시행하였다. 보다 구체적으로 설명하면, CD47 단백질 발현의 유세포 분석을 위해 실온에서 15분 동안 PE Mouse Anti-human CD47(#556046, BD Biosciences)로 세포를 염색하였다. 상응하는 PE Mouse IgG1, k Isotype(#555749, BD Biosciences)를 대조군으로 사용하였다. PBS로 1회 세척 후 1% PFA로 고정하고 MACS Quant기기(MACS Quantify)에서 단백질 발현량을 분석하였다.
그 결과, 대조군 중간엽 줄기세포 집단(MSC V.C.)과 비교하여 CD47 과발현 줄기세포 집단(O.E.)에서 CD47 단백질 발현량이 현저하게 증가한 것을 확인하였다(도 1 왼쪽). 구체적으로, CD47를 발현하는 세포수가 대조군 l 중간엽 줄기세포에서는 29.42%였으나, CD47 과발현 중간엽 줄기세포에서는 96.02%로 증가하였다(도 1 오른쪽).
또한, 대조군 중간엽 줄기세포 집단(MSC V.C.)과 CD47 과발현 줄기세포 집단(MSC O.E.)에서 중간엽 줄기세포 특이적 마커의 발현량을 상기 기재된 방법으로 유세포 분석을 통하여 비교하였다.
그 결과, 대조군 중간엽 줄기세포 집단(MSC V.C.)과 CD47 과발현 줄기세포 집단(MSC O.E.)에서 동일하게 중간엽 줄기세포 특이적 마커인 CD90, CD105, CD73 및 CD166을 발현하는 세포 수가 98% 이상이였으며, CD14 및 HLA-DR을 발현하는 세포 수는 1% 이하인 것을 확인하였다(도 2). 이를 통하여, CD47 과발현 유도로 인해 중간엽 줄기세포의 특이적 표현형이 변화되지 않는다는 것을 알 수 있었다.
실시예 2. 천식 동물 모델에 CD47 과발현 중간엽 줄기세포 투여에 따른 폐 조직에서의 효과 확인(in-vivo)
C57BL/6J 암컷 마우스(6주령)를 Orient Bio Inc.에서 구입하여 1주일 동안 순화시켰다. 천식을 유도하기 위해, 마우스에 Ovalbumin(OVA; Sigma-Aldrich) 100 μg과 Alum(Sigma-Aldrich) 2 mg을 0일차 및 7일차(총 2회)에 복강투여하였다. 이후, 제조예 2에서 제조한 CD47을 과발현하는 중간엽 줄기세포는 20일차에 복강 투여하였다(5 x 105 cells/100 μL/마우스). 21~23일차에 마우스를 마취한 후 OVA(30 μL/마우스) 50 μg를 비강으로 투여하였다. 24일차에 모든 마우스를 희생시키고 정맥 카테터를 사용하여 식염수 2 ㎖로 기관지 폐포 세척액(Bronchoalveolar lavage fluid, BALF)을 수득하였다.
실시예 2.1 폐 조직의 염증 변화 확인
수득한 폐 조직 절편을 Hematoxyling and Eosin(H&E) 염색하여 조직 분석을 수행한 결과, 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C.) 투여군에서도 폐 조직의 염증이 개선되었으나, CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.) 투여군에서 대조군 중간엽 줄기세포 투여군과 비교하여 염증 개선의 정도가 현저하게 증가한 것을 확인하였다(도 3).
실시예 2.2 폐 조직에서 M1 대식세포 특이적 마커의 발현 변화 확인
폐조직 절편을 Integrin Alpha M(CD11b; Abbexa)로 1:40 농도로 면역세포화학염색하고, 이차 항체로 Cy3 Rabbit anti-mouse IgG1(Jackson ImmunoResearch Europe Ltd.)를 붙여서 CD11b의 발현 정도를 확인하였다. 폐 조직 내 세포의 핵은 4',6-diamidino-2-phenylindole(DAPI)로 염색하였다.
그 결과, 천식 마우스 모델에 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)를 투여한 경우에, 대조군중간엽 줄기세포(MSC V.C.) 투여군과 비교하여 M1 대식세포 특이적 마커인 CD11b의 발현량이 감소한 것을 확인하였다(도 4 및 도 5).
실시예 2.3 폐 조직에서 M2 대식세포 특이적 마커의 발현 변화 확인
폐조직 절편을 Scavenger Receptor Cysteine-Rich Type 1 Protein M130(CD163; Abbexa)로 1:30 농도로 면역세포화학염색하고, 이차항체로 Alexa 488 Rabbit anti-mouse IgG1(Jackson ImmunoResearch Europe Ltd.)를 붙여서 CD163의 발현정도를 확인하였다. 폐 조직 내 세포의 핵은 DAPI로 염색하였다.
그 결과, 천식 마우스 모델에 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)를 투여한 경우에, 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C.) 투여군과 비교하여 M2 대식세포 특이적 마커인 CD163의 발현량이 증가한 것을 확인하였다(도 6 및 도 7).
실시예 2.4 정맥 투여 후 폐 조직으로 이동한 세포 수의 확인
폐조직 절편을 Anti-beta 2 Microglobulin antibody(β-2MG; Abcam)로 1:300 농도로 면역세포화학염색하고, 이차 항체로 Alexa 488 Rabbit anti-mouse IgG1(Jackson ImmunoResearch Europe Ltd.)를 붙여서 β-2MG의 발현 정도를 확인하였다. 폐 조직 내 세포의 핵은 DAPI로 염색하였다.
그 결과, 천식 마우스 모델에 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)를 투여한 경우에, 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C.) 투여군과 비교하여 폐 조직에서 β-2MG의 발현 정도가 높은 것을 확인하였다(도 8 및 도 9). 이를 통하여, 정맥 투여 후 폐 조직으로 이동한 중간엽 줄기세포 수가 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)이 더 많은 것을 알 수 있었다.
실시예 3. 천식 동물 모델에 CD47 과발현 중간엽 줄기세포 투여에 따른 BALF에서의 효과 확인(in-vivo)
실시예 3.1 BALF에서 염증성 사이토카인의 발현 변화 확인
실시예 2에서 수득한 BALF를 4℃, 1000 rpm 조건에서 10분 동안 원심분리한 후 분리한 상층액에서 mouse tumor necrosis factor-α(mTNF-α; R&D systems)를 효소면역측정법(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)으로 정량하였다.
그 결과, 천식 마우스 모델에 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)를 투여한 경우에, 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C.) 투여군과 비교하여 염증성 사이토카인인 mTNF-α의 분비량이 가장 적은 것을 확인하였다(도 10).
실시예 3.2 BALF에서 호중구 세포수의 감소 효과 확인
실시예 2에서 수득한 BALF를 원심분리하여 가라앉힌 세포를 Diff-Quik 염색하고, 호중구(neutrophil) 세포 수를 측정하였다.
그 결과, 천식 유도 마우스 모델에서 증가한 호중구의 수는 중간엽 줄기세포 투여군에서 감소하였으며, 특히 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.) 투여군에서 가장 많이 감소한 것을 확인하였다(도 11).
실시예 4. CD47 과발현 중간엽 줄기세포의 면역조절 효과 확인(in-vitro)
실시예 4.1 PBMC와의 공배양을 통한 면역조절 효과 확인
조건별 중간엽 줄기세포를 Recombinant human interleukin 2(hIL-2; miltenyi Biotec) 10 ng/mL과 Phytohemagglutinin-L(PHA; Roche) 5 μg/mL로 활성화시킨 Human peripheral blood mononuclear cells(PBMC; AllCells)와 공동배양 하였다. 24시간 후, 중간엽 줄기세포에서 발현되고 있는 GFP 형광을 형광현미경으로 관찰 및 계수하였다.
그 결과, CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)의 경우에 70.3%의 세포가 생존하였으며, 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C.)는 44.5%의 세포가 생존한 것을 확인하였다(도 12 및 도 13). 이를 통하여, CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)가 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C.)와 비교하여 활성화된 PBMC로 인한 세포 사멸에 더 강하다는 것을 알 수 있었다.
실시예 4.2 NK 세포와의 공배양을 통한 면역조절 효과 확인
조건별 중간엽 줄기세포를 2주 동안 IL-2 50 IU와 5% Human serum(HS; Sigma-aldrich)으로 활성화시킨 Human natural killer cells(NK cell; Lonza)와 공동배양 하였다. 3시간 후, 중간엽 줄기세포에서 발현되고 있는 GFP 형광을 형광현미경으로 관찰 및 계수하였다.
그 결과, CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)의 경우에 63.8%의 세포가 생존하였으며, 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C.)는 26.1%의 세포가 생존한 것을 확인하였다(도 14 및 도 15). 이를 통하여, CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)가 대조군 중간엽 줄기세포(MSC V.C.)와 비교하여 활성화된 NK cell로 인한 세포 사멸에 더 강하다는 것을 알 수 있었다.
실시예 5. CD47 과발현 중간엽 줄기세포의 항섬유화 효과 확인(in-vitro)
인간 일차 폐 섬유아세포(Human primary lung fibroblast, HLF; ATCC)에 섬유화 유도 물질인 TGF-β1(R&D systems) 5 ng/mL을 24시간 동안 처리한 후, 1 μm pore size의 transwell(BD Falcon)을 사용하여 동량의 중간엽 줄기세포와 공동배양 하였다. 공배양 완료 후, trizol(Invitrogen)을 이용하여 HLF의 RNA를 얻고 amfirivert cDNA systhesis platinum master mix(GenDEPOT)를 이용하여 cDNA를 합성하였다. 합성한 cDNA로부터 대표적인 섬유화 마커인 alpha-smooth muscle actin(α-SMA)와 Matrix Metalloproteinase-13(MMP-13)의 발현량을 확인하기 위하여, 중합효소연쇄반응(quantitative real time polymerase chain reaction, qPCR)을 LightCycler 480(Roche)로 수행하였다. PCR에서 사용한 프라이머 서열은 하기 표 1에 기재된 바와 같다.
| 유전자명 | 염기서열 | 서열번호 |
| α-SMA (FORWARD) | 5'TTG CCT GAT GGG CAA GTG AT 3' | 1 |
| α-SMA (REVERSE) | 5'TAC ATA GTG GTG CCC CCT GA 3' | 2 |
| MMP-13 (FORWARD) | 5'TCC TCT TCT TGA GCT GGA CTC ATT 3' | 3 |
| MMP-13 (REVERSE) | 5'CGC TCT GCA AAC TGG AGG TC 3' | 4 |
그 결과, 대조군 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)에 비해 CD47 과발현 중간엽 줄기세포(MSC O.E.)와 공배양한 HLF 조건에서 대표적인 섬유화 마커인 α-SMA과 MMP-13의 발현이 가장 감소한 것을 확인하였다(도 16).
<110> MEDIPOST CO., LTD.
<120> Composition for preventing or treating lung disease comprising
mesenchymal stem cells overexpressing CD47
<130> PN210622KR
<160> 4
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> alpha-SMA_Forward
<400> 1
ttgcctgatg ggcaagtgat 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> alpha-SMA_Reverse
<400> 2
tacatagtgg tgccccctga 20
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMP-13_Forward
<400> 3
tcctcttctt gagctggact catt 24
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMP-13_Reverse
<400> 4
cgctctgcaa actggaggtc 20
Claims (11)
- CD47을 발현하는 중간엽 줄기세포를 유효성분으로 포함하고, 상기 중간엽 줄기세포는 세포 집단의 적어도 30% 이상이 CD47을 발현하는 것인, 천식 또는 폐 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 청구항 1에 있어서,
상기 중간엽 줄기세포는 CD47의 발현이 증가되도록 유전적으로 조작된 것인, 천식 또는 폐 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 청구항 2에 있어서,
상기 유전적으로 조작된 중간엽 줄기세포는 CD47을 암호화하는 유전자가 도입된 재조합 벡터를 포함하는 것인, 천식 또는 폐 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 청구항 1에 있어서,
상기 중간엽 줄기세포는 세포 집단의 30% 내지 99%가 CD47을 발현하는 것인, 천식 또는 폐 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 청구항 1에 있어서,
상기 중간엽 줄기세포는
i) CD90, CD105, CD73 및 CD166로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 마커에 대하여 양성이고,
ii) CD14 또는 HLA-DR 마커에 대하여 음성인, 천식 또는 폐 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 청구항 1에 있어서,
상기 중간엽 줄기세포는 탯줄, 제대혈, 태반, 골수, 지방조직, 근육, 양수, 양막 및 치수로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나에서 유래된 것인, 천식 또는 폐 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 청구항 1에 있어서,
상기 중간엽 줄기세포는 감소된 면역원성을 나타내는 것인, 천식 또는 폐 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 청구항 1에 있어서,
상기 중간엽 줄기세포는 폐 조직의 염증 반응을 감소시키는 것인, 천식 또는 폐 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 청구항 1에 있어서,
상기 CD47을 발현하는 중간엽 줄기세포는 M1 대식세포를 감소시키고, M2 대식세포를 증가시키는 것인, 천식 또는 폐 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 청구항 1에 있어서,
상기 CD47을 발현하는 중간엽 줄기세포는 α-SMA(α-smooth muscle actin) 및 MMP-13(matrix metalloproteinase-13)의 발현을 감소시키는 것인, 천식 또는 폐 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 삭제
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020210170214A KR102438419B1 (ko) | 2021-12-01 | 2021-12-01 | Cd47 과발현 중간엽 줄기세포를 포함하는 폐 질환 예방 또는 치료용 조성물 |
| CA3239499A CA3239499A1 (en) | 2021-12-01 | 2022-09-21 | Composition for preventing or treating lung diseases containing cd47-overexpressing mesenchymal stem cells |
| CN202280080065.4A CN118369106A (zh) | 2021-12-01 | 2022-09-21 | 包括过表达cd47的间充质干细胞的用于预防或治疗肺部疾病的组合物 |
| AU2022403380A AU2022403380A1 (en) | 2021-12-01 | 2022-09-21 | Composition for preventing or treating lung diseases containing cd47-overexpressing mesenchymal stem cells |
| PCT/KR2022/014100 WO2023101166A1 (ko) | 2021-12-01 | 2022-09-21 | Cd47 과발현 중간엽 줄기세포를 포함하는 폐 질환 예방 또는 치료용 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020210170214A KR102438419B1 (ko) | 2021-12-01 | 2021-12-01 | Cd47 과발현 중간엽 줄기세포를 포함하는 폐 질환 예방 또는 치료용 조성물 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR102438419B1 true KR102438419B1 (ko) | 2022-09-01 |
Family
ID=83282107
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020210170214A KR102438419B1 (ko) | 2021-12-01 | 2021-12-01 | Cd47 과발현 중간엽 줄기세포를 포함하는 폐 질환 예방 또는 치료용 조성물 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR102438419B1 (ko) |
| CN (1) | CN118369106A (ko) |
| AU (1) | AU2022403380A1 (ko) |
| CA (1) | CA3239499A1 (ko) |
| WO (1) | WO2023101166A1 (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2023101166A1 (ko) * | 2021-12-01 | 2023-06-08 | 메디포스트(주) | Cd47 과발현 중간엽 줄기세포를 포함하는 폐 질환 예방 또는 치료용 조성물 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20140003631A (ko) * | 2005-09-23 | 2014-01-09 | 셀레릭스, 에스.엘. | 면역조절활성을 갖는 세포 개체군, 분리 방법 및 용도 |
| KR20180006369A (ko) * | 2015-03-04 | 2018-01-17 | 소렌토 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 | Cd47에 결합하는 항체 치료제 |
| KR20190109389A (ko) | 2016-11-03 | 2019-09-25 | 엑소스템 바이오텍 리미티드 | 간엽 줄기 세포 집단, 이들의 산물 및 이들의 용도 |
| KR20190141234A (ko) * | 2017-04-25 | 2019-12-23 | 훗카이도 코리츠 다이가쿠 호진 삿포르 이카 다이가쿠 | 간엽계 줄기세포의 제조 방법, 간엽계 줄기세포의 치료 효과 마커, 치료 효과 판정 방법, 및 간엽계 줄기세포를 포함하는 세포 제제 |
| KR20200030027A (ko) * | 2017-11-10 | 2020-03-19 | 아이-맵 바이오파마 유에스 리미티드 | Cd47 항체 및 사이토카인을 포함하는 융합 단백질 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102438419B1 (ko) * | 2021-12-01 | 2022-09-01 | 메디포스트(주) | Cd47 과발현 중간엽 줄기세포를 포함하는 폐 질환 예방 또는 치료용 조성물 |
-
2021
- 2021-12-01 KR KR1020210170214A patent/KR102438419B1/ko active IP Right Grant
-
2022
- 2022-09-21 AU AU2022403380A patent/AU2022403380A1/en active Pending
- 2022-09-21 WO PCT/KR2022/014100 patent/WO2023101166A1/ko active Application Filing
- 2022-09-21 CN CN202280080065.4A patent/CN118369106A/zh active Pending
- 2022-09-21 CA CA3239499A patent/CA3239499A1/en active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20140003631A (ko) * | 2005-09-23 | 2014-01-09 | 셀레릭스, 에스.엘. | 면역조절활성을 갖는 세포 개체군, 분리 방법 및 용도 |
| KR20180006369A (ko) * | 2015-03-04 | 2018-01-17 | 소렌토 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 | Cd47에 결합하는 항체 치료제 |
| KR20190109389A (ko) | 2016-11-03 | 2019-09-25 | 엑소스템 바이오텍 리미티드 | 간엽 줄기 세포 집단, 이들의 산물 및 이들의 용도 |
| KR20190141234A (ko) * | 2017-04-25 | 2019-12-23 | 훗카이도 코리츠 다이가쿠 호진 삿포르 이카 다이가쿠 | 간엽계 줄기세포의 제조 방법, 간엽계 줄기세포의 치료 효과 마커, 치료 효과 판정 방법, 및 간엽계 줄기세포를 포함하는 세포 제제 |
| KR20200030027A (ko) * | 2017-11-10 | 2020-03-19 | 아이-맵 바이오파마 유에스 리미티드 | Cd47 항체 및 사이토카인을 포함하는 융합 단백질 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2023101166A1 (ko) * | 2021-12-01 | 2023-06-08 | 메디포스트(주) | Cd47 과발현 중간엽 줄기세포를 포함하는 폐 질환 예방 또는 치료용 조성물 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA3239499A1 (en) | 2023-06-08 |
| CN118369106A (zh) | 2024-07-19 |
| AU2022403380A1 (en) | 2024-06-13 |
| WO2023101166A1 (ko) | 2023-06-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109810947B (zh) | 一种抑制Th17细胞活化的间充质干细胞及其制备方法和应用 | |
| US20180200301A1 (en) | Low-Oxygen-Treated Mesenchymal Stem Cell and Use Thereof | |
| US20230220350A1 (en) | Gene-engineered mesenchymal stem cells and applications thereof | |
| KR102438419B1 (ko) | Cd47 과발현 중간엽 줄기세포를 포함하는 폐 질환 예방 또는 치료용 조성물 | |
| US9339518B2 (en) | Genetically modified mesenchymal stem cells expressing sST2 for the treatment of airway immune inflammatory and lung disease | |
| Chen et al. | Therapeutic potential of bone marrow-derived mesenchymal stem cells producing pigment epithelium-derived factor in lung carcinoma | |
| KR101596214B1 (ko) | 줄기세포의 세포 활성과 연관된 ｔｓｐ-1, ｔｓｐ-2, ｉｌ-17ｂｒ 및 ｈｂ-ｅｇｆ 및 이들의 용도 | |
| JP2021526135A (ja) | 有効成分として間葉系幹細胞を含む炎症性疾患の予防又は治療のための医薬組成物 | |
| Roy et al. | Lactate produced by alveolar type II cells suppresses inflammatory alveolar macrophages in acute lung injury | |
| JP2022534586A (ja) | 胸腺再生およびｔ細胞再構成のための組成物および方法 | |
| EP1235485A2 (en) | Lung stem cells and lung regeneration | |
| US9610325B2 (en) | Method for inhibiting euPTX3 to treat nasopharyngeal carcinoma by amino acid sequence | |
| WO2023030489A1 (zh) | 经基因改造的少突胶质祖细胞在多发性硬化症中的应用 | |
| AU2005282384B2 (en) | Conditioned medium of autologous or allogenic progenitor cells for angiogenesis treatment | |
| JP2021512164A (ja) | トランスフォーミング増殖因子ベータ抵抗性ナチュラルキラー細胞 | |
| JP2022542247A (ja) | 不死化幹細胞株の製造方法およびその用途 | |
| JP2011201813A (ja) | サービビンプロモーターを含む増殖制御型ウイルスベクターによる造血器腫瘍の遺伝子治療 | |
| KR102314158B1 (ko) | 중간엽 줄기세포를 포함하는 지방 생성을 억제하기 위한 조성물 | |
| NL2031110B1 (en) | Recombinant adeno-associated virus vector, recombinant adeno-associated virus aav8-pd1 and use thereof | |
| KR20200061243A (ko) | 중간엽 줄기세포를 포함하는 지방 생성을 억제하기 위한 조성물 | |
| WO2024155791A1 (en) | Use of umbilical vein endothelial cells for the treatment of lung injury | |
| US20240197787A1 (en) | Method for treating acute respiratory distress syndrome (ards) in specific patients using mesenchymal lineage precursor or stem cells | |
| US20230398152A1 (en) | Mesenchymal stem cells co-expressing cxcr4 and il-10 and uses thereof | |
| TW202242099A (zh) | 基因工程間充質幹細胞及其應用 | |
| KR20230100878A (ko) | 비알콜성 지방간염 치료를 위한 간세포성장인자 과발현 중간엽줄기세포 및 이의 용도 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| AMND | Amendment | ||
| AMND | Amendment | ||
| AMND | Amendment | ||
| X701 | Decision to grant (after re-examination) | ||
| GRNT | Written decision to grant |