KR102428868B1 - 마이크로바이옴 병풀 발효물이 포함된 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 마이크로바이옴 병풀(Centella asiatica) 발효물을 포함하여 피부에 뛰어난 여러 효과를 발휘하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로는 병풀(Centella asiatica) 추출물에 새로운 균주 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei) NEW-001와의 발효를 통해 얻은 발효물을 포함하는 화장료 조성물을 제공함으로써, 단순 병풀 추출물보다 탁월하게 뛰어난 항산화, 항염, 피부 보습 및 피부장벽강화 효과를 발휘할 수 있다.

Description

마이크로바이옴 병풀 발효물이 포함된 화장료 조성물{Cosmetic composition containing microbiome Centella asiatica fermentation}

본 발명은 마이크로바이옴 병풀(Centella asiatica) 발효물을 포함하여 피부에 뛰어난 여러 효과를 발휘하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

현대 사회에서 젊음과 아름다움에 대한 관심이 높아짐에 따라 건강하고 아름다운 피부는 주요한 이슈가 된다. 피부를 관리하기 위해 좋은 성분의 화장품을 사용하는 것에 대해 관심이 높으며, 이를 위해서는 피부에 영향을 주는 주요 효능들을 높이는 소재를 개발하여야 한다..

한편, 피부는 섬세하여서 산화스트레스가 많아지면 피부 건강이 나빠지거나 노화가 빨리 진행되는 등의 문제가 발생하게 된다. 세포가 노화하는 것은 세포가 산화하는 것을 의미하는데, 이를 억제시키는 작용을 항산화(antioxidation)라고 한다. 이를 위해서는 체내 활성산소(free redical)를 제거하여야한다. 활성산소는 사람의 호흡을 통해 산소가 체내로 들어오는 과정에서 여분의 양이 생성되는데, 이는 체내의 정상 세포를 공격하여 노화나 각종 질병의 원인으로 작용한다. 따라서, 활성산소를 제거하여 피부의 항산화를 높이는 소재에 대한 개발이 필요하다.

한편, 염증(inflammation)이란 특정 조직의 손상 또는 감염에 대한 일종의 생체 내 반응을 의미하며, 피부에 나타나는 염증의 대표적인 형태로는 아토피와 여드름 등이 있다. 일반적으로 가려움증이나 습진, 붉은기 등의 현상이 동반되며 쉽게 치료되지 않아 만성으로 이어지기도 한다. 이러한 염증을 방어하기 위한 기전을 항염 작용이라고 한며, 이에 피부 항염에 효능이 있는 소재에 대한 개발이 필요하다.

한편, 피부는 수분이 부족하면 가려움증, 피부 보호막의 약화, 기능 저하 등의 문제가 발생하게 되는데 이에 따라 피부의 보습과, 촉촉함을 유지하고 외부의 자극으로부터 보호하는 피부장벽을 강화하기 위한 효과적인 방안이 필요하다. 따라서 천연 성분으로 안전하면서도 건강하고 아름다운 피부를 유지하기 위한 주요 효능인 항산화, 항염, 피부 보습 및 피부 장벽강화 등에 탁월한 소재에 대한 연구가 필요한 실정이다.

대한민국 공개특허 제10-2021-0086730호(공개일자: 2021.07.09)는 병풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 항아토피, 항산화 또는 항염증 활성을 갖는 조성물에 대한 것으로, 굿 타이거 케어(GOOD TIGER CARE) 품종의 병풀나물 추출물을 포함하는 항아토피, 항산화 또는 항염증 활성을 갖는 조성물에 대해 기재되어 있다. 대한민국 공개특허 제 10-2021-0020633호(공개일자: 2021.02.24)는 병풀 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 대한 것으로, 병풀 추출물, 황칠나무 잎 추출물, 셀레늄, 동충하초 추출물, 라즈베리 추출물, 꽃창포 추출물 및 옥파우더를 포함하는 화장료 조성물에 대해 기재되어 있다.

본 발명은 병풀(Centella asiatica) 추출물에 새로운 균주와의 발효를 통해 얻은 발효물을 포함하여 피부에 뛰어난 항산화, 항염, 피부 보습 및 피부장벽강화 효과를 발휘하는 천연 소재의 화장료 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은 병풀 추출물을 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei)로 발효한 발효물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물은, 바람직하게 노화방지용인 것일 수 있다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물은, 바람직하게 피부 보습용인 것일 수 있다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물은, 바람직하게 피부장벽강화용인 것일 수 있다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물은, 바람직하게 항염용인 것일 수 있다.

본 발명은 병풀(Centella asiatica) 추출물에 새로운 균주 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei) NEW-001 (KCTC14191BP)와의 발효를 통해 얻은 발효물을 포함하는 화장료 조성물을 제공함으로써, 단순 병풀 추출물보다 탁월하게 뛰어난 항산화, 항염, 피부 보습 및 피부장벽강화 효과를 발휘할 수 있다.

도 1은 본 발명의 병풀 발효물의 항산화 효능을 평가한 결과 그래프이다.
도 2는 본 발명의 병풀 발효물에 의한 피부 보습 및 피부장벽강화 관련 유전자의 발현 양상을 확인한 결과 그래프이다.
도 3은 본 발명의 병풀 발효물의 세포 독성을 평가한 결과 그래프이다.
도 4는 본 발명의 병풀 발효물의 산화질소(NO) 억제율을 측정한 결과 그래프이다.

본 발명은 병풀 추출물을 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei)로 발효한 발효물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

병풀(Centella asiatica)은 한반도 남부 섬의 산이나 들에 흔히 나는 여러해살이풀로, 다소 습기가 있는 곳에서 자란다. 주로 트리테르페노이드 사포닌, 트리테르펜 및 플라노이드 성분이 함유되어 있고, 위 점막을 보호하며, 항바이러스, 소염, 항우울 및 항종양 효능이 있는 것으로 알려져 있다. 최근에는 이러한 병풀을 이용한 화장료 조성물에 대한 연구가 이루어져오고 있다.

한편, 마이크로바이옴(microbiome)은 인체에 사는 세균, 바이러스 등 각종 미생물을 총칭하여 말하는데, 인간의 건강에 영향을 미칠 수 있기에 마이크로바이옴의 균형을 유지하는 것이 중요하다. 장내 마이크롬바이옴의 균형을 유지시키기 위해서는 대표적으로 장내 기능을 향상시키는 살아있는 미생물 집단인 프로바이오틱스(prebiotics)를 이용할 수 있다. 이에 본 발명에서는 단순 병풀 추출물을 이용하는 것에서 더 뛰어난 효능을 발휘하면서, 새로운 마이크로바이옴의 원료로 활용할 수 있도록 신규한 미생물을 선별하였고 이를 이용한 최적 추출조건 및 발효 조건을 확립하였다.

본 발명에서 "병풀 추출물"은 상기 병풀의 추출처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 본 발명의 상기 추출물은 상기 각각의 해당 식물의 천연, 잡종 또는 변종 식물로부터 추출될 수 있고, 식물 조직 배양물로부터도 추출이 가능하다.

본 발명의 상기 병풀의 추출에 있어서, 상기 추출물을 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출방법의 비제한적인 예로는, 일반 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.

한편, 본 발명에서 상기 병풀을 추출하는데 사용되는 추출용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 추출용매의 비제한적인 예로는 물, 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올 등의 C1 내지 C4의 저급 알코올; 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 등의 다가 알코올; 및 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 아세톤, 벤젠, 헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등의 탄화수소계 용매; 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있으며, 바람직하게 물, 저급알코올, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸아세테이트를 단독으로 사용하거나 2종 이상 혼합하여 사용할 수 있다. 본 발명에서는 병풀 추출물에 대해 3~4배 정제수를 가하여 추출에 사용하였다.

한편, 본 발명에서 열수 추출 또는 냉침 추출한 추출물은 부유하는 고체 입자를 제거하기 위하여 여과, 예를 들어 나일론 등을 이용해 입자를 걸러내거나 냉동여과법 등을 이용해 여과한 후, 그대로 사용하거나 이를 동결건조, 열풍건조, 분무건조 등을 이용해 건조시켜 사용할 수 있다. 본 발명에서는 바람직하게 열풍건조시키는 것이 좋다.

한편, 본 발명의 락토바실러스 발효물은 상기 병풀 추출물에 락토바실러스 파라카세이를 배양하여 발효를 진행하였다. 이때, 상기 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei)는 당업계에 공지된 것이라면 어느 것에든 제한되지 않으나, 일예로 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei) NEW-001 (KCTC14191BP)인 것이 좋다. 발효의 조건은 바람직하게 30 ~ 40℃, 100 ~ 200 rpm의 조건으로 16 ~ 20 시간을 진행하는 것이 좋으며, 방부의 목적으로 일반적인 화장품 방부원료를 사용하면 어느 것에든 제한되지 않으나 1,2-헥산다이올(hexandiol)을 사용하는 것이 좋다.

본 발명에서 '발효물'은 발효를 완료한 직후의 상태 또는 발효완료 후 균주를 걸러낸 상태 또는 균주 외에 기타 잔여물을 걸러낸 상태를 모두 포함하는 개념이다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물은, 바람직하게 노화방지용인 것일 수 있다. 한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물은, 바람직하게 피부 보습용인 것일 수 있다. 한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물은, 바람직하게 피부장벽강화용인 것일 수 있다. 한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물은, 바람직하게 항염용인 것일 수 있다.

하기 실험에 의하면, 본 발명의 병풀 발효물은 병풀 추출물에 비해 DPPH 라디칼 소거능이 높으면서, AQP-3 및 Filaggrin의 발현양이 높고, 산화질소(NO) 생성 억제율이 뛰어났다. 이에 따라 뛰어난 항산화에 따른 노화방지, 피부보습, 피부장벽강화 및 항염 효능을 발휘할 수 있는 마이크로바이옴 원료로써 사용가능성이 있음을 알 수 있었다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 일 예로, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형 중 선택되는 어느 하나의 기초 화장료 제형; 스킨; 로션; 아이크림; 수딩젤; 연고; 마스크팩용 제형; 바디워시용 제형; 필링젤; 수중유형 및 유중수형 메이크업베이스; 파운데이션; 스킨커버; 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이새도, 치크칼라 및 아이브로우 펜슬류 중 선택되는 어느 하나의 색조화장료 제형; 두피용 제형; 중에서 선택되는 어느 하나인 것일 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 화장 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제 예컨대 친수성 또는 친유성 활성제, 보존제, 항산화제, 용매, 방향제, 충전제, 차단제, 안료, 흡취제, 염료 등을 함유할 수 있다. 이들 다양한 보조제의 양은 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 양이며, 예컨대 조성물 총 중량에 대해 0.001 내지 30 중량% 이다. 다만, 어떠한 경우라도 보조제 및 그 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 악영향을 미치지 않도록 선택될 것이다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 일 예로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라가칸트 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로탄/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 계면활성제 함유 클렌저인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 계면활성제 함유 클렌저 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌저 제형 또는 비누일 경우에는, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 일례로, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 젤이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

이하, 본 발명의 내용을 하기 실시예를 통해 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 이와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.

[제조예 1: 병풀 추출물의 제조]

병풀 건조 중량 대비 3~6배의 정제수를 가하고 100℃에서 3시간 추출한 뒤, 농축 및 열풍건조하여 병풀 추출물을 제조하였다.

[실시예 1: 마이크로바이옴 병풀 발효물의 제조]

상기 제조예 1에서 제조한 병풀 추출물에 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei) NEW-001 (KCTC 14191BP)를 배양하여 발효를 진행하였다. 발효의 조건은 해당 위 추출물에 상기 락토바실러스 파라카세이 균종 (NEW-001 [뉴앤뉴 기탁 독자균주])을 배양하여 발효를 진행하였다. 발효의 조건은 35℃, 150 rpm의 조건으로 18시간을 진행하며 이후 필터를 진행하여 불순물을 제거하였고, 방부의 목적으로 1,2-hexanediol을 추가하여 혼합한 뒤 최종적으로 필터를 진행하여 균 및 균사체를 제거하였다. 이때, 방부의 목적으로 혼합된 1,2-hexanediol의 경우 일반적인 화장품 방부원료로 대체될 수 있다.

[실험예 1: 본 발명 병풀 발효물의 항산화 효능 평가]

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 제조한 병풀 발효물의 항산화 효능을 평가하고자 하였으며, 비교를 위해 병풀 추출물을 사용하였다.

항산화 효능 평가를 위해 DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) assasy를 수행하였으며, Blois MS.의 방법을 변형하여 시행하였다. 각 시료는 DMSO에 10 mg/ml로 녹여 희석하여 사용하였다. 96 well plate에 시료 20 ㎕와 0.2 mM DPPH 180 ㎕를 넣고 30분간 반응 후 분광광도계를 사용하여 517 nm에서 측정하였다. DPPH 라디칼(radical) 소거능은 아래의 식을 이용하여 나타내었다.

DPPH radical scavenging activity(%) = ((A-B)/A) X 100

A : 시료를 첨가하지 않았을 때의 흡광도

B : 시료를 첨가하였을 때의 흡광도

그 결과, 하기 표 1 및 도 1과 같이 병풀 추출물과 병풀 발효물의 항산화 효능이 농도 의존적으로 증가하였으며, 전반적으로 병풀 발효물의 항산화 효능이 가장 높게 나타났다.

		DPPH radical scavenging activity(%)	Stadnard error
병풀 추출물 (%)	1	20.11	0.60
	2.5	35.65	1.18
	5	60.16	5.55
	10	80.35	0.26
병풀 발효물 (%)	1	23.80	0.80
	2.5	34.11	1.20
	5	61.22	1.02
	10	80.55	0.78
EGCG (μM)	10	68.55	2.53

[실험예 2: 본 발명 병풀 발효물의 피부 보습 및 피부장벽강화 효능 평가]

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 제조한 병풀 발효물의 피부 보습 및 피부장벽강화 효능을 평가하고자 하였으며, 비교를 위해 병풀 추출물을 사용하였다.

피부 보습 및 피부장벽강화 효능 평가를 위해 보습관련 유전자인 아쿠아포린-3(Aquaporin-3)과 각질세포주에 구성되는 단백질인 필라그린(Filaggrin)의 유전자 발현 정도를 qPCR(Quantitative real time polymerase chain reaction)을 통해 확인하였다. HaCaT 세포 2.5 x 10⁵개를 60 nm culture dish에 분주하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 HaCaT 세포에 serum free DMEM 배지로 교체한 후 시료를 계열 희석하여 채취(harvest)하였다. 채취한 세포를 NucleoZOL lysis buffer(NM, 740404)를 처리하고, MN에서 제공하는 protocol을 이용하여 RNA 분리하였으며 분리된 RNA를 microplate reader를 이용하여 정량한 뒤 HiSenScript^TM RH(-) RT PreMix Kit(intron, 25087)을 이용하여 cDNA를 합성하였다. 2X Real-Time PCR Master mix (Biofact, DQ385-40h)을 이용하여 유전자를 증폭한 후 분석하였다. 프라이머의 핵산 서열(nucloetide sequence)는 하기 표 2와 같았다(각각의 사이즈: 92 bp, 103 bp).

프라이머명	핵산 서열(5'->3')
AQP-3 Forward	CCGTGACCTTTGCCATGTGCTT
AQP-3 Reverse	TTGTCGGCGAAGTGCCAGATTG
Filaggrin Forward	GCTGAAGGAACTTCTGGAAAAGG
Filaggrin Reverse	GTTGTGGTCTATATCCAAGTGATC

그 결과는 하기 표 3 및 도 2와 같이 병풀 추출물은 AQP-3 및 Filaggrin 발현에 효능이 나타나지 않았다. 반면, 병풀 발효물은 Filaggrin 발현이 농도의존적으로 증가하였으며, 최대 약 45.26% 증가하는 것으로 나타났다. 특히, 병풀 발효물은 더 낮은 농도를 처리하였음에도 효과가 탁월하였으며, 이는 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei) NEW-001을 이용한 발효에 기인한 것으로 확인되었다.

		AQP-3		Filaggrin
		Relative mRNA expression (% of control)	Stadnard error	Relative mRNA expression (% of control)	Stadnard error
Blank		100.00	2.90	100.00	6.50
병풀 추출물 (%)	2.5	98.59	4.14	100.58	4.14
	5	94.89	5.69	99.58	7.50
	10	99.45	1.98	103.59	2.69
병풀 발효물 (%)	1	100.69	5.98	89.90	5.40
	2.5	98.99	7.54	102.89	2.98
	5	99.83	5.98	145.26	5.89

[실험예 3: 본 발명 병풀 발효물의 항염 효능 평가]

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 제조한 병풀 발효물의 항염 효능을 평가하고자 하였으며, 비교를 위해 병풀 추출물을 사용하였다.

먼저 세포독성이 나타나는지를 확인하기 위해 세포 생존률(cell viability)을 측정하였다. 그 결과, 표 4 및 도 3과 같이 병풀 추출물과 병풀 발효물 모두 10% 농도까지 세포독성이 나타나지 않았다.

		cell viability (%)	Stadnard error
Blank		100.00	0.15
Control		99.82	2.54
병풀 추출물 (%)	1	100.48	6.42
	2.5	103.56	7.21
	5	98.54	4.30
	10	97.61	0.98
병풀 발효물 (%)	1	99.56	5.20
	2.5	100.21	5.22
	5	103.55	3.59
	10	100.52	5.22
Quercetin (μM)	5	100.59	5.22

다음으로 항염 효능 평가를 위해 RAW 264.7 세포로부터 생성된 NO(Nitric oxide)의 양은 Griess 시약을 이용하여 세포 배양액에 존재하는 NO₂ ^-를 측정하였다. RAW 264.7세포를 DMEM (10% FBS) 배지를 이용하여 1×10⁴ cells/well로 조절한 후 96 well plate에 접종하고 37℃, 5% CO₂의 습윤 배양기에서 안정화시켰다. 세포에 시료를 표 아래와 같은 농도로 처리한 후 1 μg/mL의 LPS를 처리하여 24 hr 배양하였다. 세포배양 상등액과 동량의 Griess 시약을 혼합하여 96 well plates에서 10 min 동안 반응시킨 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 표 5 및 도 4와 같이 병풀 추출물과 병풀 발효물 모두 농도의존적으로 NO 생성을 억제하였으며, 병풀 발효물에서 그 효능이 탁월하게 나타났다. 특히, 10%의 농도에서 병풀 발효물은 약 80.6%의 NO 생성 억제율로, 병풀 추출물이 약 69%인 것에 비해 탁월함을 확인하였다.

		Nitric oxide production (%)	Stadnard error
Blank		0.88	0.40
Control		100.00	2.55
병풀 추출물 (%)	1	100.03	2.68
	2.5	98.50	3.75
	5	65.55	1.78
	10	32.85	2.07
병풀 발효물 (%)	1	95.23	3.46
	2.5	80.59	2.45
	5	61.53	5.30
	10	19.53	1.85
Quercetin (μM)	5	25.68	2.59

이상 종합하면, 병풀 추출물을 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei) NEW-001을 이용하여 발효시킴으로써, 뛰어난 항산화, 피부 보습, 피부장벽강화 및 항염 효능이 발휘되며 이는 단순 병풀 추출물보다 훨씬 뛰어남을 알 수 있었다.

기탁기관명 : 한국생명공학연구원

수탁번호 : KCTC14191BP

수탁일자 : 20200521

Claims (5)

1. 병풀 추출물을 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei) NEW-001 (KCTC14191BP)로 발효한 발효물을 유효성분으로 포함하며, 상기 발효물은 필라그린(Filaggrin)의 발현 촉진 효과가 있고, 일산화질소(NO) 생성 억제 효과가 있으며, 항산화, 피부 보습, 피부 장벽 강화 및 항염 효과를 가지는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
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