KR102419709B1 - 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질에 흑미를 함유하는 항산화 및 항염증 기능성 식품 조성물 - Google Patents
그릭요거트에서 분리된 유청 단백질에 흑미를 함유하는 항산화 및 항염증 기능성 식품 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질 및 흑미 추출물을 함유하는 항산화 및 항염증 기능성 식품 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질 및 흑미 추출물을 함유하는 조성물은 유청 단백질 또는 흑미 추출물을 단독으로 사용하는 경우 대비 뛰어난 ABTS 라디칼 소거 활성 및 DNA 손상을 억제하여 항산화 효능을 가질 뿐만 아니라, 산화질소(NO) 생성을 감소시켜 항염증 효과가 있다.
Description
본 발명은 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질 및 흑미 추출물을 함유하는 항산화 및 항염증 기능성 식품 조성물에 관한 것이다.
일반적으로 체내의 호기성 대사과정에 의해 생성된 활성산소의 약 5%는 유리기의 전자를 가지는 원자나 분자의 자유라디칼 형태로 변형되어 인체 내로 침입한 병원균을 사멸시킨다. 그러나, 자유라디칼은 상태가 매우 불안정하고 반응성이 강해 단백질, 지질분자, DNA 등을 포함하는 세포에 산화적 손상을 입히게 되고 이에 따라 암, 빈혈, 심근경색, 뇌성마비, 동맥경화증 등의 이차적인 질병을 발현시킨다.
또한, 활성산소에 의한 세포의 산화적 손상과 외부로부터의 자극에 의해 다양한 형태의 염증반응이 발현될 수 있다. 염증반응은 신체 조직의 손상에 대한 생체조직의 국소적인 방어보호반응으로서 대식세포가 분비하는 종양괴사인자-α(TNF-α), 인터루킨-6(IL-6), 인터루킨-1β(IL-1β) 등을 포함하는 사이토카인(Cytokine), 활성산소종, 활성질소종, 염증매개체 등을 포함하는 다양한 물질이 관여한다.
한편, 사이토카인 및 활성질소종에 의해 염증반응이 진행되나 사이토카인 및 활성질소종이 과발현되면 각종 장기 및 신체 기관에 첨착되어 조직손상을 유발하고 유전자변이, 신경손상, 부종, 가려움 등을 더욱 악화시키는 문제가 있었다. 특히, 사이토카인은 면역물질로서, 과발현되는 경우 정상세포를 공격하는 면역 과잉반응을 일으켜 신체 면역력을 약화시키고 조직 내 염증 및 출혈, 40 ℃ 이상의 고열 등을 일으키는 문제가 있었다.
이러한 문제를 해결하기 위해, 세포의 산화적 손상을 방지하는 합성 항산화제 및 천연 항산화제에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다. BHA(Butylated hydroxy anisole), BHT(Butylated hydroxy toluene), NDGA(Nordihydroguaiaretic acid) 등과 같은 합성 항산화제의 경우 알러지 및 종양을 유발하고 열에 약한 문제가 있어 천연 항산화제에 대한 관심이 높아지고 있다.
그릭요거트(Greek yogurt)는 그리스 가정에서 일반적으로 만들어 먹는 그리스 스타일의 유산균 발효유로 대단히 뻑뻑하고 크림이 풍부한 것이 특징이다. 일반적으로 요거트를 되직하게 만들기 위해서 플레인 요거트에서 유청을 두세번에 걸쳐 짜낸 것을 말한다. 집에서 손쉽게 만드는 방법으로 우유를 불에서 데워 졸인 뒤 플레인 요거트를 넣고 담요로 덮어 두었다가 하루 지나 묵 형태가 되면 먹는다. 그리스에서는 완성된 요거트에 오이와 마늘 등을 갈아 넣어 매끼마다 먹기도 한다. 면역성을 강화하고 뼈를 튼튼하게 해준다 하여 세계적인 건강식품으로 알려져 있다.
한편, 유청(乳淸)은 우유가 엉겨서 응고된 뒤 남은 액체이며, 훼이(Whey) 또는 유장(乳漿)이라고도 한다. 우유에는 수분, 단백질, 지방, 탄수화물, 무기질, 비타민, 효소 등이 포함되어 있다. 지방은 가장 중요한 성분이며 이것을 제외한 것을 탈지유라고 한다. 탈지유에 산 또는 응유효소를 첨가하면 응고물이 생기는데 이것을 응유(Curd)라 하며 우유의 주단백질인 카세인이 주성분이다. 응유를 제외한 수용액을 유청(Whey)이라 하고 전 단백질의 20%를 포함한다. 유청에는 유당, 락토알부민, 락토글로불린, 무기질 등이 포함되어 있다. 락토글로불린에는 면역글로불린이 포함되어 있으며 특히 초유에 함량비가 높다. 유청은 보통 치즈 생산물의 부산물로만 여겨져왔으나, 차츰 그 영양학적 중요성과 건강증진 기능성의 우수함이 밝혀지고 있다. 치즈 제조 중 우유 성분의 상당 부분이 유청으로 흘러나오므로 유청은 단백질, 유당, 무기질 및 비타민의 함량이 상당히 높다. 한편 근래에는 치즈 부산물 뿐만 아니라 요거트 발효물을 응축시킨 후 남은 부산물을 같은 의미에서의 유청이라고도 한다.
또한, 흑미(Oryza sativa L.)는 안토시아닌계(anthocyanins) 화합물이 풍부하게 함유되어 있는 쌀로서, 백미보다 칼슘, 비타민, 니아신 등이 다량 함유되어 있는 건강식품이다. 흑미는 인체의 조절기능을 개선하고 면역기능을 강화시키는 효과가 있다고 알려져 있다. 또한, 각종 질병을 예방하고, 항산화 및 발암 억제효과가 있으며, 특히, 콜레스테롤 억제 효과가 있다고 알려져 있다.
본 발명의 목적은 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질 및 흑미 추출물을 함유하는 항산화용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질 및 흑미 추출물을 함유하는 항염증용 약학적 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질 및 흑미 추출물을 함유하는 항산화 및 항염증용 건강기능식품 조성물을 제공하는 데 있다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질 및 흑미 추출물을 함유하는 항산화용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질 및 흑미 추출물을 함유하는 항염증용 약학적 조성물을 제공한다.
나아가, 본 발명은 그릭요거트로부터 분리된 유청 단백질 및 흑미 추출물을 함유하는 항산화 및 항염증용 건강기능성 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질 및 흑미 추출물을 함유하는 조성물은 유청 단백질 또는 흑미 추출물을 단독으로 사용하는 경우 대비 뛰어난 ABTS 라디칼 소거 활성 및 DNA 손상을 억제하여 항산화 효능을 가질 뿐만 아니라, 산화질소(NO) 생성을 감소시켜 항염증 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 조성물에 대한 ABTS 라디칼 소거 활성을 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 조성물에 대한 DNA 손상 억제 효과를 나타낸 도이다. OC: open-circular, SC: supercoil
도 3은 본 발명의 조성물에 대한 산화질소(NO) 생성 억제능을 측정한 그래프이다.
도 2는 본 발명의 조성물에 대한 DNA 손상 억제 효과를 나타낸 도이다. OC: open-circular, SC: supercoil
도 3은 본 발명의 조성물에 대한 산화질소(NO) 생성 억제능을 측정한 그래프이다.
이하, 본 발명에 대하여 보다 상세하게 설명하도록 한다.
항산화용 조성물
본 발명은 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질 및 흑미 추출물을 함유하는 항산화용 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "그릭요거트"는 발효유(FERMENTATED MILK)를 농축하여 제조하는 것으로서, 일반 요거트에서 농축방식 또는 여과방식으로 유청을 제거하여 일반 요거트에 비해 수분이 제거되어 질감이 단단하고 맛이 진한 것을 의미한다.
본 발명의 조성물에 있어서, 상기 그릭요거트는 우유에 유산균을 혼합하여 배양시킨 발효물에서 유청 단백질을 제거한 것이며, 상기 발효는 30 내지 50℃에서 6 내지 17 시간 동안 발효할 수 있으며, 바람직하게는 35 내지 45℃에서 11 내지 13 시간 동안 발효할 수 있다.
또한, 상기 유산균은 락토바실루스, 락토코커스, 엔테로코커스, 스트렙토코커스 및 비피도박테리움 등 5가지 속에 포함되는 19종 중 1종 이상으로 이루어 질 수 있으며, 락토바실루스 속에는 아시도필루스, 카세이, 가쎄리, 불가리쿠스, 헬베티쿠스, 퍼멘텀, 파라카세이, 플란타럼, 루테리, 람노서스, 살리바리우스 등의 11종이 포함되고, 락토코커스 속에는 락티스 1종이 포함되고, 엔테로코커스 속에는 페시움, 페칼리스 등의 2종이 포함되고, 스트렙토코커스 속에는 써모필루스 1종이 포함되고, 비피도박테리움 속에는 비피덤, 브레베, 롱검, 락티스 등의 4종이 포함된다.
본 발명의 조성물에 있어서, 상기 유청 단백질은 요거트에서 카세인(casein)을 제거한 나머지 용액에 함유된 단백질 α-lactalbumin, β-lactoglobulin, 혈청 알부민 등을 말한다.
또한, 상기 유청 단백질은 우유를 유산균과 혼합하는 단계; 상기 혼합유를 35 내지 45℃에서 6 내지 17 시간 동안 배양하여 발효시키는 단계; 상기 발효유를 10 내지 14 시간 동안 저온 숙성시키는 단계; 및, 20 내지 40 시간 동안 감압농축법을 이용하여 유청을 분리하는 단계; 를 포함하여 제조할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "추출물(extract)"은 추출 대상을 적절한 침출액으로 짜내고 침출액을 증발시켜 농축한 제제를 의미하는 것으로, 이에 제한되지는 않으나, 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물 또는 정제물일 수 있다. 상기 흑미 추출물은 통상의 기술분야에 공지된 일반적인 추출방법, 분리 및 정제방법을 이용하여 제조할 수 있다. 상기 추출방법으로는, 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게 열탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 방법을 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물에 있어서, 상기 흑미 추출물은 탄소수 1 내지 5의 알코올, 헥산, 클로로포름, 주정, 물 및 이들의 혼합용매로 추출할 수 있으며, 바람직하게는 70% 에탄올로 추출할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
또한, 상기 유청 단백질 및 흑미 추출물은 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)을 제거하여 항산화 효능을 가지는 것일 수 있다.
또한, 상기 유청 단백질 및 흑미 추출물은 DNA 손상을 억제하는 것일 수 있다.
항염증용 약학적 조성물
본 발명은 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질 및 흑미 추출물을 함유하는 항염증용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명의 항염증용 약학적 조성물은 염증성 질환의 예방 또는 치료하는 것일 수 있다.
또한, 상기 염증성 질환은 당뇨병, 천식, 대장염, 알레르기성 및 비-알레르기성 비염, 만성 및 급성 비염, 만성 및 급성 위염 또는 장염, 궤양성 위염, 급성 및 만성 신장염, 급성 및 만성 간염, 만성 폐쇄성 폐질환, 폐섬유증, 과민성 대장 증후군, 염증성 통증, 편두통, 두통, 허리 통증, 섬유 근육통, 근막 질환, 바이러스 감염(예컨대, C형 감염), 박테리아 감염, 곰팡이 감염, 화상, 외과적또는 치과적 수술에 의한 상처, 프로스타글라딘 E 과다 증후군, 아테롬성 동맥 경화증, 통풍, 관절염, 류머티즘성 관절염, 강직성 척추염, 호지킨병, 췌장염, 결막염, 홍채염, 공막염, 포도막염, 피부염, 습진 및 다발성 경화증으로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "치료"란 유청 단백질 및 흑미 추출물 또는 이를 포함하는 조성물의 투여로 염증성 질환 또는 이의 합병증의 증세를 호전시키거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다. 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진자라면, 대한의학협회 등에서 제시된 자료를 참조하여 본원의 조성물이 효과가 있는 질환의 정확한 기준을 알고, 개선, 향상 및 치료된 정도를 판단할 수 있을 것이다.
본 발명에서 사용되는 용어 "예방"이란 본 발명의 약학적 조성물의 투여에 의해 염증의 발생, 확산 및 재발을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
또한, 상기 유청 단백질은 염증에서 유발되는 산화질소(NO)의 생성을 감소시키는 것일 수 있다.
또한, 상기 약학적 조성물은 경구형 제형, 외용제, 좌제, 멸균 주사 용액 및 분무제를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 제형일 수 있다.
본 발명의 조성물의 치료적으로 유효한 양은 여러 요소, 예를 들면 투여방법, 목적부위, 환자의 상태 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 인체에 사용 시 투여량은 안전성 및 효율성을 함께 고려하여 적정량으로 결정되어야 한다. 동물실험을 통해 결정한 유효량으로부터 인간에 사용되는 양을 추정하는 것도 가능하다. 유효한 양의 결정시 고려할 이러한 사항은, 예를 들면 Hardman and Limbird, eds., Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th ed.(2001), Pergamon Press; 및 E.W. Martin ed., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed.(1990), Mack Publishing Co.에 기술되어있다.
본 발명의 약학조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서 사용되는 용어, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 건강상태, 암의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제 와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여, 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 조성물은 또한 생물학적 제제에 통상적으로 사용되는 담체, 희석제, 부형제 또는 둘 이상의 이들의 조합을 포함할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 조성물을 생체 내 전달에 적합한 것이면 특별히 제한되지 않으며, 예를 들면, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로스 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 이용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한, 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주이용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 유효성분으로서 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질 및 흑미 추출물 이외에 공지된 염증 질환 치료제를 추가로 포함할 수 있고, 이들 질환의 치료를 위해 공지된 다른 치료와 병용될 수 있다.
항산화 및 항염증용 건강기능성 식품 조성물
본 발명은 그릭요거트로부터 분리된 유청 단백질 및 흑미 추출물을 함유하는 항산화 및 항염증용 건강기능성 식품 조성물을 제공한다.
또한, 상기 건강기능성 식품 조성물이란 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 가공식품, 건강기능식품, 식품첨가제, 기능성 식품, 기능성 음료 및 음료첨가제를 모두 포함한다.
또한, 상기 건강기능식품이란 인체에 유용한 기능을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조한 식품으로 건강을 유지하는데 도움을 주는 식품을 의미하며, 본 발명의 유청 단백질 및 흑미 추출물을 첨가할 수 있는 건강기능식품의 예로는 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 형태일 수 있으며, 건강식품의 예로는 각종 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 캔디류, 스넥류, 면류, 아이스크림, 유제품, 스프, 이온음료, 음료수, 알코올 음료, 껌, 차 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품 및 건강식품 조성물을 모두 포함한다.
또한, 항산화에 도움을 주는 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 항산화에 도움을 준다는 의미는 활성산소종의 생성을 억제하거나 생성된 활성산소종을 신속하게 제거하는 역할을 수행하거나, 기타 산화적 스트레스에 의한 손상을 예방하거나 억제하는 역할을 수행하는 것을 의미한다. 이러한 항산화 활성은 궁극적으로 산화적 스트레스에 의해 발생하는 질환, 예컨대 노화, 당뇨병, 고지혈증, 비만을 예방하거나 억제하는데 효과적일 수 있다.
또한, 염증성 질환, 통증성 질환 및 관절염 예방과 증상 개선을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이때, 식품 또는 음료 중의 상기 조성물의 양은, 일반적으로 본 발명의 건강기능식품 조성물의 경우는 전체 식품 중량의 10 내지 80 중량％, 바람직하게는 20 내지 70 중량％로 가할 수 있다.
본 발명에 따른 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질 및 흑미 추출물을 함유하는 건강기능식품 및 건강식품 조성물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 항산화 또는 항염증 효과가 있다고 알려진 공지의 활성 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 본 발명의 유청 단백질과 흑미 추출물의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 및 건강식품 조성물 중의 상기 조성물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 유지를 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질과 흑미 추출물은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 외에 본 발명의 유청 단백질 및 흑미 추출물을 함유하는 건강기능식품 및 건강식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강기능식품 및 건강식품 조성물은 천연 과일쥬스 및 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
이하, 본 발명의 실시예를 첨부된 도면을 참고하여 보다 상세하게 설명하도록 한다. 그러나, 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐, 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아닐 것이다
<제조예 1> 그릭요거트 제조 및 유청 단백질의 분리
그릭요거트로부터 유청 단백질을 분리하기 위해, 먼저 1등급의 우유와 유산균주를 혼합하여 35~45 ℃에서 12시간 동안 발효시킨 후 발효유를 다시 저온에서 12시간 동안 숙성하여 요거트를 제조하였다. 그 후, 30시간 동안 감압농축 공정을 통해 요거트로부터 유청 단백질을 제거하여 그릭요거트를 제조하였다. 여기서, 분리된 유청 단백질을 동결건조 과정을 거쳐 시료로 사용하였다.
<제조예 2> 흑미 추출물의 제조
흑미를 잘게 가루로 만든 후 상온에서 흑미 분말 1kg 당 50 L의 70% 에탄올에 넣어 3회 침지추출 하였다. 추출액을 필터페이퍼로 여과한 후 여과액을 40 ℃에서 농축한 후 동결건조 과정을 거쳐 시료로 사용하였다.
<실시예 1-3 및 비교예 1-2> 흑미 추출물과 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질의 혼합용액의
제조
제조예 1의 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질과 제조예 2의 흑미 추출물 혼합용액을 다양한 비율로 제조하였다. 먼저 제조예 1의 유청 단백질을 증류수로 희석하여 1 mg/ml의 농도의 유청 단백질을 제조하였다. 마찬가지로 제조예 2의 흑미 추출물을 증류수로 희석하여 1 mg/ml 농도의 흑미 추출물을 제조하였다.
상기에서 준비한 유청 단백질과 흑미 추출물을 하기 표 1의 부피비로 혼합하여 실시예 1 내지 3과 비교예 1 내지 2를 제조하였다.
| 실시예 1 (4W:1B) |
실시예 2 (2.5W:2.5B) |
실시예 3 (1W:4B) |
비교예 1 (5W:0B) |
비교예 2 (0W:5B) |
|
| 비율 | 4:1 | 2.5:2.5 | 1:4 | 5:0 | 0:5 |
W: 유청 단백질 1 mg/mL
B: 흑미 추출물 1 mg/mL
<실험예 1> ABTS 라디칼 소거 활성 측정
본 발명의 유청 단백질 및 흑미 추출물의 활성산소종 제거 효과를 확인하기 위해 다음과 같이 실험하였다.
흑미 추출물과 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질의 혼합용액의 항산화 활성 중 하나인 ABTS 라디칼 소거 활성을 확인하기 위하여 다음과 같이 측정하였다. 사용된 반응 시약은 7 mM ABTS와 2.45 mM 포타슘 포설페이트(potassium persulfate)를 혼합한 후 상온 암소에서 12시간 이상 반응시킨 후 사용하였다. 실시예 1-3 및 비교예 1-2에서 제조된 샘플(5W:0B, 4W:1B, 2.5W:2.5B, 1W:4B, 0W:5B)에 ABTS 100 μL를 상온에서 15분간 반응시킨 후 415 nm에서 흡광도를 측정하여 ABTS 라디칼 소거능을 계산하여 산출하였고, 그 결과를 도 1에 나타내었다.
도 1은 본 발명의 조성물에 대한 ABTS 라디칼 소거 활성을 나타낸 그래프이다.
도 1에 나타난 바와 같이, 유청 단백질(5W:0B) 단독(비교예 1) 및 흑미 추출물(0W:5B) 단독(비교예 2)과 비교하여 혼합했을 경우(실시예 1 내지 3, 4W:1B, 2.5W:2.5B, 1W:4B) 더 높은 라디칼 소거 활성을 나타내는 것을 확인하였다. 특히 1:1로 혼합한 경우(2.5W:2.5B) 95%의 높은 라디칼 소거 활성을 보였다. 이러한 결과는 본 발명의 흑미 추출물과 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질을 단일로 사용한 경우보다 혼합하였을 때 더 많은 활성산소종(reactive oxygen species, ROS) 제거하여 뛰어난 항산화 효능을 가진다는 것을 의미한다.
<실험예 2> DNA 손상 억제
실시예 1-3 및 비교예 1-2의 산화에 의한 DNA 손상 억제 효과를 확인하기 위해 다음과 같이 실험하였다.
구체적으로, 1 μL의 0.5μg pBR322 DNA와 3 μL의 2 mM FeSO4, 4 μL의 30% H2O2를 시료와 함께 혼합한 후 37 ℃에서 30분간 반응시켰다. 그런 다음 반응 용액을 DNA loading dye와 혼합한 후 0.8% agarose gel electrophoresis를 통하여 DNA를 전기영동하였다. Ethidium Bromide(EtBr)를 이용하여 전기이동 된 DNA를 염색한 후, UV illuminator를 통하여 DNA band를 확인하였다. 정상적인 plasmid DNA는 supercoiled(SC) 형태로 존재하나 산화적 손상을 받으면 open-circular(OC) 형태로 전환되었다. 그 결과는 도 2에 나타내었다.
도 2는 본 발명의 조성물에 대한 DNA 손상 억제 효과를 나타낸 도이다(OC: open-circular, SC: supercoiled).
도 2에 나타난 바와 같이, 대조군(CON)은 H2O2를 처리하지 않아 산화적 손상을 받지 않은 DNA, 음성대조군(NC)은 H2O2를 처리했으나 혼합용액을 처리하지 않아 산화적 손상을 회복하지 못한 DNA이다. 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질과 흑미 추출물 모두 DNA 손상을 일부만 회복시킨 것을 알 수 있다(도 2A, B). 그러나 실시예 1의 혼합용액(4WP:1BR, 2.5WP:2.5BR, 1WP:4BR)은 단일로 처리하였을 때와 비교하여 DNA의 손상을 대조군과 가깝게 회복시켰음을 확인하였다(도 2C). 이러한 결과는 본 발명의 흑미 추출물과 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질을 단일로 사용한 경우보다 혼합하였을 때 더욱 현저한 항산화 효능을 가진다는 것을 의미한다.
<실험예 3> LPS 유도 산화 질소(NO) 생성량 억제
마우스 대식세포인 RAW264.7 세포를 사용하여 실시예 1-3 및 비교예 1-2의 항염증 효과를 확인하였다.
구체적으로, FBS와 항생제가 함유된 DMEM 배지를 이용하여 96 웰 컬쳐 플레이트(well culture plate)에 1×10４ cells/well의 마우스 대식세포 유래의 RAW 264.7 세포를 분주 후 37℃, 5% CO2 항온기에서 24시간동안 배양하였다. 24시간 후, 이전 배양에 사용된 배지를 제거하고 FBS와 항생제가 함유되지 않은 새로운 DMEM 배지를 분주한 후 실시예 1-3 및 비교예 1-2의 조성물을 각각 처리하였다. 1시간 후 1mg/mL의 LPS를 처리하여 24시간 배양하였다. 세포 배양 상층액 50μL와 Griess시약 50μL를 혼합하여 96 웰플레이트(well plate)에서 10분 동안 반응시킨 후 ELISA reader를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하여 산화질소(NO) 생성량을 정량하였고, 그 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3은 본 발명의 조성물에 대한 산화질소(NO) 생성 억제능을 측정한 그래프이다.
도 3에 나타난 바와 같이, 본 발명의 실시예 1-3의 혼합용액은 LPS에 의해 자극된 산화질소(NO) 생성을 감소시키는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 1:1로 혼합하였을 때 산화질소(NO) 생성을 가장 많이 감소시켰다. 이러한 결과는 본 발명의 흑미 추출물과 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질을 단일로 사용한 경우보다 혼합하였을 때 더욱 현저한 항염증 효능을 가진다는 것을 의미한다.
Claims (8)
- 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질 및 흑미 추출물을 함유하는, 항산화용 조성물에서,
상기 유청 단백질 및 흑미 추출물은 1:1의 부피비로 혼합되는 것을 특징으로 하고,
상기 흑미 추출물은 70% 에탄올로 추출되는 것을 특징으로 하는, 항산화용 조성물. - 삭제
- 제1항에 있어서, 상기 유청 단백질 및 흑미 추출물은 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)을 제거하는 것을 특징으로 하는, 항산화용 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 유청 단백질 및 흑미 추출물은 DNA 손상을 억제하는 것을 특징으로 하는, 항산화용 조성물.
- 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질 및 흑미 추출물을 함유하는, 항염증용 약학적 조성물에서,
상기 유청 단백질 및 흑미 추출물은 1:1의 부피비로 혼합되는 것을 특징으로 하고,
상기 흑미 추출물은 70% 에탄올로 추출되는 것을 특징으로 하는, 항염증용 약학적 조성물. - 제5항에 있어서, 상기 유청 단백질 및 흑미추출물은 산화질소(NO)의 생성을 감소시키는 것을 특징으로 하는, 항염증용 약학적 조성물.
- 그릭요거트로부터 분리된 유청 단백질 및 흑미 추출물을 함유하는, 항산화 및 항염증용 건강기능성 식품 조성물에서,
상기 유청 단백질 및 흑미 추출물은 1:1의 부피비로 혼합되는 것을 특징으로 하고,
상기 흑미 추출물은 70% 에탄올로 추출되는 것을 특징으로 하는, 항산화 및 항염증용 건강기능성 식품 조성물. - 제7항에 있어서, 상기 조성물이 가공식품, 기능성 식품, 식품첨가제, 기능성 음료, 또는 음료첨가제인, 항산화 또는 항염증용 건강기능성 식품 조성물.
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| KR1020200027889A KR102419709B1 (ko) | 2020-03-05 | 2020-03-05 | 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질에 흑미를 함유하는 항산화 및 항염증 기능성 식품 조성물 |
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| KR1020200027889A KR102419709B1 (ko) | 2020-03-05 | 2020-03-05 | 그릭요거트에서 분리된 유청 단백질에 흑미를 함유하는 항산화 및 항염증 기능성 식품 조성물 |
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| KR101532207B1 (ko) | 2014-10-02 | 2015-06-30 | 컴퍼니맨 주식회사 | 저온에서의 숙성 및 유청분리를 통한 식감이 향상된 농후 발효유의 제조방법 |
| KR102396152B1 (ko) * | 2019-10-30 | 2022-05-11 | 라이프 샐러드 주식회사 | 간편식 영양균형 건강식품 |
| KR102395172B1 (ko) * | 2019-12-23 | 2022-05-10 | (주) 건우에프피 | 항혈압 및 항산화 효능을 갖는 쌀펩타이드 복합물, 및 이를 포함하는 식품 조성물 |
-
2020
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Non-Patent Citations (5)
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| FOOD TECHNOLOGY AND BIOTECHNOLOGY 제48권 제4호, 505_511쪽, 2010년. |
| FOOD TECHNOLOGY AND BIOTECHNOLOGY 제48권 제4호, 505_511쪽, 2010년. 사본 1부.* |
| JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY 제51권 제18호, 5271_5277쪽, 2003년 07월 29일. 사본 1부.* |
| JOURNAL OF APPLIED MICROBIOLOGY 제102권 제1호, 106_115쪽, 2006년 07월 31일. |
| JOURNAL OF INTERNATIONAL RESEARCH IN MEDICAL AND PHARMACEUTICAL SCIENCES 제9권 제2호, 2016년 03월 31일. |
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