KR102410486B1 - Health functional food composition for improving skin condition comprising fish collagen and complex extract, and manufacturing method thereof - Google Patents

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Abstract

본 발명은 피쉬 콜라겐; 및 병풀, 로즈마리, 루이보스 및 동백나무 잎의 복합추출물;을 포함하는 피부개선용 건강기능식품 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명의 피부개선용 건강기능식품 조성물은 콜라겐 합성 증진 효과 및 티로시나제 억제 효과가 우수하므로, 피부의 주름 및/또는 탄력 개선, 및 피부 미백 등 피부개선 용도로 유용하게 사용할 수 있다.The present invention is fish collagen; and a complex extract of Centella asiatica, rosemary, rooibos and camellia leaves; relates to a health functional food composition for skin improvement and a method for manufacturing the same, wherein the health functional food composition for skin improvement of the present invention promotes collagen synthesis and inhibits tyrosinase Since the effect is excellent, it can be usefully used for skin improvement purposes such as improvement of wrinkles and/or elasticity of the skin, and skin whitening.

Description

피쉬 콜라겐 및 복합추출물을 포함하는 피부개선용 건강기능식품 조성물 및 이의 제조방법{HEALTH FUNCTIONAL FOOD COMPOSITION FOR IMPROVING SKIN CONDITION COMPRISING FISH COLLAGEN AND COMPLEX EXTRACT, AND MANUFACTURING METHOD THEREOF}Health functional food composition for skin improvement comprising fish collagen and complex extract, and manufacturing method thereof

본 발명은 피쉬 콜라겐 및 복합추출물을 포함하는 피부개선용 건강기능식품 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a health functional food composition for skin improvement comprising fish collagen and a complex extract, and a method for preparing the same.

사람의 피부는 체중감량 또는 나이의 증가 등으로 인한 노화의 진행으로 내적으로는 신진대사에 관여하는 각종 호르몬의 분비 감소함과 동시에 면역세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 면역 및 생체 단백질의 생합성이 줄어들고, 외적으로는 자외선, 환경 오염 등에 따라 피부에 데미지가 생겨 피부탄력 감소, 피부의 윤기 감소, 주름 발생, 기미, 주근깨, 검버섯의 증가 등의 부작용이 발생하며, 상기 내·외적 요소로 인해 피부의 기능 저하 및 시각적인 아름다움이 감소하게 된다.In the human skin, due to aging due to weight loss or increase in age, the secretion of various hormones involved in metabolism internally decreases, and at the same time, the function and activity of immune cells are reduced, so that the immunity and living body necessary for the living body are reduced. Protein biosynthesis is reduced, and externally, damage is caused to the skin due to ultraviolet rays and environmental pollution, which causes side effects such as decreased skin elasticity, decreased skin gloss, wrinkles, spots, freckles, and increased age spots. Elements cause deterioration of skin function and loss of visual beauty.

상기 피부 주름 및 피부 탄력의 감소는 일반적으로 피부의 수분 함유량, 콜라겐 함유량 등 여러 요인들에 의해 발생하는 것으로 보고되어 있고, 이 중 가장 큰 영향을 미치는 것은 콜라겐이다.It has been reported that the reduction of skin wrinkles and skin elasticity is generally caused by several factors such as moisture content and collagen content of the skin, and collagen has the greatest influence among them.

콜라겐은 피부의 유연성을 주는 섬유 조직으로, 진피 조직의 약 70 % 를 차지하는 주요 구성 요소이다. 콜라겐 섬유의 폴리펩타이드 사슬은 섬유아세포의 과립형질세망 내에서 양 말단에 펩타이드(telopeptide)를 가지고 있는 상태로 합성된 뒤, 3중 나선 구조로 조합된 프로콜라겐 형태로 세포 밖으로 분비된다. 이렇게 분비된 프로콜라겐은 특정 효소에 의해 말단 펩타이드가 절단되어 트로포콜라겐이 생성되고 이들은 세포외 기질에서 서로 조합되어 콜라겐 섬유로 합성된다.Collagen is a fibrous tissue that gives the skin flexibility and is a major component that accounts for about 70% of the dermal tissue. Polypeptide chains of collagen fibers are synthesized with peptides (telopeptide) at both ends in the granular plasma reticulum of fibroblasts, and then secreted out of the cell in the form of procollagen combined in a triple helix structure. In the secreted procollagen, the terminal peptide is cleaved by a specific enzyme to produce tropocollagen, which is combined with each other in the extracellular matrix to be synthesized into collagen fibers.

이러한 콜라겐 섬유의 합성은 피부 노화가 진행되면서 급격히 저하되며, 또한 외부 환경에 의해 콜라겐 섬유가 변형되면서 피부에 주름 및 탄력 감소가 생기게 된다.The synthesis of these collagen fibers is rapidly reduced as skin aging progresses, and as the collagen fibers are deformed by the external environment, wrinkles and loss of elasticity occur in the skin.

한편, 의학기술의 발달과 생활수준의 향상으로 아름다움에 대한 욕구가 강해지고 외모 자체가 하나의 사회적 경쟁력이라는 인식도 증가하고 있어 피부 미백에 대한 관심도가 높아져 이와 관련된 화장품 또는 기능성 식품 시장이 확대되고 있다.On the other hand, with the development of medical technology and the improvement of living standards, the desire for beauty is getting stronger, and the perception that appearance itself is a social competitiveness is also increasing.

사람의 피부색은 계절, 인종, 성별 등 여러 복합적인 요인에 따라 결정되며, 주로 멜라닌, 카로틴, 및 헤모글로빈의 양에 의해서 결정되는 것으로 알려져 있는데, 이중 중요한 요소는 멜라닌(melanin)이다.A person's skin color is determined by several complex factors such as season, race, and sex, and it is known that it is mainly determined by the amounts of melanin, carotene, and hemoglobin, of which an important factor is melanin.

상기 멜라닌은 생물체에 널리 존재하는 페놀류 고분자 천연 색소로 인체에서는 표피 기저층에 있는 멜라노사이트(melanocyte) 내의 멜라노솜(melanosome)에서 합성되며 주변 각질 세포로 전이되어 사람의 피부색을 나타낸다.The melanin is a phenolic macromolecular natural pigment widely present in living organisms. In the human body, it is synthesized from melanosomes in melanocytes in the basal layer of the epidermis, and metastasized to surrounding keratinocytes to represent the color of human skin.

멜라닌의 생산이 과잉인 경우, 피부색이 어두워지거나, 나아가 흑피증(melasma), 염증후흑피증(postinflammatory melanoderma), 일광흑색점(solar lentigo) 등과 같은 후천성 과다색소침착을 포함하는 다양한 피부질환을 유발할 수 있다.Excessive production of melanin can cause darkening of the skin color and further various skin diseases including acquired hyperpigmentation such as melasma, postinflammatory melanoderma, and solar lentigo. can

종래 피부개선을 위한 제품은 주로 화장품 형태로 발달되어 왔으며, 여러 성분을 조합하여 기능성 식품으로 피부를 개선하려는 연구도 진행되고 있으나, 그 효과가 불분명하거나, 장기 복용에도 그 효과가 미미한 문제점이 있었다.Conventionally, products for skin improvement have been mainly developed in the form of cosmetics, and studies to improve the skin with functional foods by combining various ingredients are also in progress, but there is a problem that the effect is unclear or the effect is insignificant even when taken for a long time.

따라서, 안전하면서, 콜라겐 합성 및 미백 효과가 뛰어나 피부개선용으로 유용히 사용될 수 있는, 천연물을 이용한 기능성 식품의 개발이 필요하다.Therefore, there is a need to develop functional foods using natural products that are safe and have excellent collagen synthesis and whitening effects, which can be usefully used for skin improvement.

한국 공개특허공보 제10-2021-0075256호Korean Patent Publication No. 10-2021-0075256

본 발명자들은 상기 종래 기술의 문제점을 인지하고, 피쉬콜라겐 및 특정 추출물을 포함하는 건강기능식품 조성물이 우수한 콜라겐 합성 효과 및 티로시나제 활성 억제 효과를 나타내어 피부개선 용도로 유용하게 사용될 수 있다는 점을 입증하고 본 발명을 완성하기에 이르렀다.The present inventors have recognized the problems of the prior art, and have demonstrated that a health functional food composition comprising fish collagen and a specific extract exhibits an excellent collagen synthesis effect and a tyrosinase activity inhibitory effect, thereby demonstrating that it can be usefully used for skin improvement purposes. came to the conclusion of the invention.

본 발명은 피쉬콜라겐; 및 병풀, 로즈마리, 루이보스 및 동백나무 잎의 복합추출물;을 포함하는 피부개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.The present invention is fish collagen; and a complex extract of Centella asiatica, rosemary, rooibos and camellia leaves; relates to a health functional food composition for skin improvement comprising.

본 발명은 상기 피부개선용 건강기능식품 조성물을 제조하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for preparing the health functional food composition for skin improvement.

이하 이를 구체적으로 설명한다. 본 발명에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합은 본 발명의 범주에 속한다. 또한, 하기의 구체적인 서술에 의해 본 발명 범주가 제한된다고 볼 수 없다.Hereinafter, this will be described in detail. All combinations of the various elements disclosed herein are within the scope of the present invention. In addition, it cannot be considered that the scope of the present invention is limited by the following specific description.

본 발명은 피쉬 콜라겐; 및 병풀, 로즈마리, 루이보스 및 동백나무 잎의 복합추출물;을 포함하는 피부개선용 건강기능식품 조성물 을 제공한다.The present invention is fish collagen; and a complex extract of Centella asiatica, rosemary, rooibos and camellia leaves; provides a health functional food composition for skin improvement comprising.

본 발명에서 "피쉬 콜라겐"은 생선으로부터 얻은 콜라겐을 의미한다. 예를 들어, 생선 비늘, 생선 껍질 등에서 얻은 콜라겐일 수 있다.In the present invention, "fish collagen" means collagen obtained from fish. For example, it may be collagen obtained from fish scales, fish skins, etc.

본 발명에서 상기 피쉬 콜라겐 분말은 피쉬 비늘 콜라겐 분말일 수 있다. 피쉬 비늘 콜라겐 분말은 분자량이 300 내지 1,000 Da으로 매우 작아 인체에 흡수가 용이하며, 그에 따라 피부에 우수한 효과를 제공한다.In the present invention, the fish collagen powder may be a fish scale collagen powder. Fish scale collagen powder has a very small molecular weight of 300 to 1,000 Da and is easily absorbed by the human body, thereby providing excellent effects on the skin.

본 발명의 실시예들에 따르면, 상기 피쉬 콜라겐은 분자량이 300 내지 1,000 Da일 수 있으며, 바람직하게는 500 내지 1,000 Da일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to embodiments of the present invention, the fish collagen may have a molecular weight of 300 to 1,000 Da, preferably 500 to 1,000 Da, but is not limited thereto.

본 발명에서 "병풀(Centella asiatica)"은 호랑이풀, 조개풀 등으로도 지칭되며, 한반도의 남부 섬 등지의 다습한 지역에서 주로 서식하고 지름이 2 내지 5 cm인 비늘 같은 잎이 있는 미나리과 병풀속의 여러해살이풀이다. 한국에서는 병풀의 전초를 적설초라 하여 약용하며, 그 효과로 청열, 이습, 소종, 해독의 효능이 있다고 알려져 있다.In the present invention, "Centella asiatica" is also referred to as tiger grass, clam, etc., and mainly inhabits in humid areas such as southern islands of the Korean Peninsula and has scale-like leaves with a diameter of 2 to 5 cm. it is flesh In Korea, the outpost of Centella asiatica is used for medicinal purposes, and it is known that it has the effects of cooling heat, dampness, small bells and detoxification.

본 발명에서 "로즈마리(Rosmarinus officinalis L.)"는 강한 허브향을 가지고 있어 예부터 향수, 약으로 사용되어 왔으며, 소취제, 부향제로써 식품의 향신료로도 많이 이용되고 있다. 또한, 항균작용 및 강한 항산화작용 등을 가지고 있다. In the present invention, "Rosemary (Rosmarinus officinalis L.)" has a strong herbal scent and has been used as perfume and medicine since ancient times, and is also widely used as a spice for food as a deodorant and preservative. In addition, it has antibacterial action and strong antioxidant action.

로즈마리의 주요성분은 카르노식산(carnosic acid), 카로노졸(carnosol) 등이 있으며, 활성 자유라디컬에 수소원자를 제공하여 안정한 비라디컬을 만들어줌으로써 활성산소를 제거하는 항산화 효과를 나타낸다.The main components of rosemary include carnosic acid, carnosol, etc., and by providing hydrogen atoms to active free radicals to make stable non-radicals, it exhibits an antioxidant effect that removes active oxygen.

본 발명에서 "루이보스(Aspalathus linearis)"는 콩과 식물에 속하는, 남아프리카공화국 케이프타운 서쪽에 위치한 450m 이상 고산지대에서 자라는 칩엽수를 의미한다. 주로 잎을 건조하여 차로 이용하며, 단맛이 나며 카페인이 없고 타닌 농도도 극히 낮으며 항산화 작용이 있다고 알려져 있다.In the present invention, "rooibos (Aspalathus linearis)" refers to a coniferous tree belonging to the legume family, which grows in the alpine region of 450 m or more located west of Cape Town, South Africa. It is mainly used as tea by drying the leaves. It is sweet, has no caffeine, has an extremely low tannin concentration, and is known to have antioxidant properties.

본 발명에서 "동백나무(Camellia japonica)"는 우리나라를 비롯하여 중국과 일본에 자생하는 차나무과(Theaceae)에 속하는 약용식물로서 약 200여종이 알려져 있다. 이 중 약 70여종이 동백아속(亞屬), 즉 동백(Camellia japonica)과 애기동백(C.sasanqua)의 근연종이다. 한국에 자생하는 동백나무는 1종(Camellia japonica L.)으로 동백나무과(Theaceae), 동백속(Camelliae)의 교목이다. 동백나무의 잎은 건선, 인후통증, 화상에 효능이 있고, 가지와 열매는 머리비듬, 보혈, 비출혈(鼻出血), 어혈, 연골증, 월경이상, 이뇨, 인후통증, 장출혈, 종독(腫毒), 타박상, 토혈과 각혈, 행혈, 화상에 효과가 있다고 알려져 있다. 또한, 동백나무 잎과 꽃에는 항균, 항산화, 및 항염증 활성을 갖는 트리테르펜(triterpene), 플라보노이드, 탄닌 및 지방산이 함유되어 있는 것으로 보고되어 있다.In the present invention, "Camellia japonica" is a medicinal plant belonging to the family Theaceae, which is native to China and Japan, including Korea, and about 200 species are known. Among them, about 70 species are related to the subgenus Camellia, that is, Camellia japonica and C. sasanqua. The camellia tree native to Korea is one species (Camellia japonica L.) and is an arboreal tree of the family Theaceae and the genus Camellia. Camellia leaves are effective for psoriasis, sore throat, and burns, and branches and fruits are effective for dandruff, blood loss, epistaxis, eosinophilia, chondrosis, menstrual abnormalities, diuresis, sore throat, intestinal bleeding, and poisoning.毒), bruises, hematemesis and hemoptysis, haemostatic, and burns are known to be effective. In addition, it has been reported that camellia leaves and flowers contain triterpenes, flavonoids, tannins and fatty acids with antibacterial, antioxidant, and anti-inflammatory activities.

본 발명에서 동백나무 추출물은 동백나무의 잎, 줄기, 꽃, 뿌리, 열매, 종자, 및 이들의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상으로부터 추출한 추출물일 수 있으며, 바람직하게는 동백나무 잎의 추출물일 수 있다.In the present invention, the camellia extract may be an extract extracted from one or more selected from the group consisting of leaves, stems, flowers, roots, fruits, seeds, and mixtures of camellia leaves, preferably extracts of camellia leaves. can

본 발명에서 추출물의 원재료로 사용된 병풀, 로즈마리, 루이보스 및 동백나무 잎은 자연에서 채취하거나 직접 재배한 것 또는 시판 중인 것(가공된 것을 포함)을 제한없이 사용할 수 있다.Centella asiatica, rosemary, rooibos and camellia leaves used as raw materials for the extract in the present invention may be used without limitation, those collected from nature, directly grown, or commercially available (including processed ones).

본 발명에서 "추출물"은 적절한 추출용매 및 추출방법을 사용하여 추출한 결과물을 의미하며, 상기 추출물은 추출로 인해 수득되는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물 또는 정제물, 또는 분획물을 포함한다.In the present invention, "extract" means the result of extraction using an appropriate extraction solvent and extraction method, and the extract is an extract obtained by extraction, a diluted or concentrated solution of the extract, a dried product obtained by drying the extract, a prepared product thereof, or purified products, or fractions.

본 발명에서 "복합추출물"은 각각의 추출물의 원재료를 동시에 혼합한 혼합물 상태에서 일정한 제조공정을 통해 추출한 추출물을 의미한다.In the present invention, "complex extract" refers to an extract extracted through a predetermined manufacturing process in a mixture state in which the raw materials of each extract are mixed at the same time.

본 발명의 실시예들에 따르면, 상기 복합 추출물을 제조하기 위한 원재료는 병풀, 로즈마리, 루이보스 및 동백나무 잎이 분쇄되어 고르게 혼합되어 있는 상태일 수 있다.According to embodiments of the present invention, the raw material for preparing the complex extract may be in a state in which centella asiatica, rosemary, rooibos and camellia leaves are crushed and evenly mixed.

본 발명의 실시예들에 따르면, 상기 복합추출물은 병풀, 로즈마리, 루이보스 및 동백나무 잎을 2:2:1:1의 중량비로 혼합한 원재료 혼합물로부터 추출된 것일 수 있으며, 상기 중량비는 복합추출물의 활성성분에 의한 우수한 효과 및 피쉬 콜라겐과의 시너지 효과를 나타내기 위한 것일 수 있다.According to embodiments of the present invention, the complex extract may be extracted from a raw material mixture obtained by mixing Centella asiatica, rosemary, rooibos and camellia leaves in a weight ratio of 2:2:1:1, and the weight ratio is that of the complex extract. It may be for showing an excellent effect by the active ingredient and a synergistic effect with fish collagen.

본 발명의 실시예들에 따르면, 상기 건강기능식품 조성물은 상기 피쉬 콜라겐 및 복합추출물은 2:1의 중량비로 포함하는 것일 수 있으며, 상기 중량비는 건강기능식품 조성물의 활성성분에 의한 우수한 효과 및 피쉬 콜라겐과의 시너지 효과를 나타내기 위한 것일 수 있다.According to embodiments of the present invention, the health functional food composition may include the fish collagen and the complex extract in a weight ratio of 2: 1, and the weight ratio provides excellent effects and fish by the active ingredient of the health functional food composition. It may be for showing a synergistic effect with collagen.

본 발명에서 "활성성분"은 단독으로 목적하는 활성(효과)를 나타내거나 그 자체로서 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미하며, 본 명세서에서 유효성분과 상호교환적으로 사용될 수 있다.In the present invention, "active ingredient" means a component that can exhibit the desired activity (effect) alone or with a carrier that has no activity by itself, and can be used interchangeably with the active ingredient in the present specification. .

본 발명의 건강기능식품 조성물에 포함되는 병풀, 로즈마리, 루이보스 및 동백나무 잎의 복합추출물은 특정한 제조방법으로 추출되어 혼합됨으로써 피부개선 효과가 증진된 것일 수 있다.The complex extract of Centella asiatica, rosemary, rooibos, and camellia leaves contained in the health functional food composition of the present invention may be extracted and mixed by a specific manufacturing method, thereby enhancing the skin improvement effect.

본 발명에서 복합추출물은 하기 단계를 포함하는 방법으로 추출된 것일 수 있다:In the present invention, the complex extract may be extracted by a method comprising the following steps:

S1) 병풀, 로즈마리, 루이보스 및 동백나무 잎의 원재료 혼합물을 분쇄하고, 상기 분쇄된 원재료 혼합물에 80%(w/v) 에탄올을 투입한 후, 교반하여 균질화하는 단계;S1) pulverizing a raw material mixture of Centella asiatica, rosemary, rooibos and camellia leaves, and adding 80% (w/v) ethanol to the pulverized raw material mixture, followed by stirring to homogenize;

S2) 상기 균질화된 원재료 혼합물 용액을 60 내지 80℃에서 2 내지 4시간 동안 초음파 처리하여 초음파추출하는 단계;S2) ultrasonically extracting the homogenized raw material mixture solution by ultrasonication at 60 to 80° C. for 2 to 4 hours;

S3) 상기 초음파 처리된 용액을 여과하여 여과액 및 잔사물로 분리하는 단계;S3) separating the sonicated solution into a filtrate and a residue by filtering;

S4) 상기 분리된 잔사물에 정제수를 투입한 후, 교반하여 균질화하는 단계;S4) adding purified water to the separated residue, followed by stirring to homogenize;

S5) 상기 균질화된 용액을 130 내지 150℃에서 2 내지 4시간 동안 열처리하여 열수추출하는 단계;S5) heat-treating the homogenized solution at 130 to 150° C. for 2 to 4 hours to extract hot water;

S6) 상기 열처리된 용액을 여과하여 여과액 및 잔사물로 분리하는 단계; 및S6) filtering the heat-treated solution to separate it into a filtrate and a residue; and

S7) 상기 S3 및 S6 단계에서 분리된 여과액을 혼합하는 단계.S7) mixing the filtrate separated in steps S3 and S6.

이하 복합추출물 제조방법의 각 단계를 구체적으로 설명한다.Hereinafter, each step of the complex extract manufacturing method will be described in detail.

본 발명의 복합추출물 제조방법에서 상기 S1 단계는 원재료 혼합물을 분쇄하고, 용매를 투입한 후, 교반 및 균질화하여 원재료 혼합물 용액을 제조하는 단계이다.The step S1 in the complex extract manufacturing method of the present invention is a step of preparing a raw material mixture solution by grinding the raw material mixture, adding a solvent, and stirring and homogenizing.

상기 S1 단계에서, 용매는 S1 단계에 이어 수행될 초음파 추출을 위해 80%(w/v) 에탄올인 것이 바람직하며, 정제수를 사용하는 경우, 추출하고자 하는 활성성분의 수율이 낮아질 수 있다.In step S1, the solvent is preferably 80% (w/v) ethanol for ultrasonic extraction to be performed following step S1, and when purified water is used, the yield of the active ingredient to be extracted may be low.

상기 S1 단계에서 원재료 혼합물은 동결 상태일 수 있다. 즉, 본 발명의 S1 단계에서는 원재료 혼합물은 동결된 상태에서 준비되어 분쇄기를 통해 분쇄되는 것일 수 있다.In step S1, the raw material mixture may be in a frozen state. That is, in step S1 of the present invention, the raw material mixture may be prepared in a frozen state and pulverized through a grinder.

상기 S1 단계의 분쇄는 10 내지 500 ㎛ 크기가 되도록 수행되는 것일 수 있으며, 바람직하게는 400 내지 500 ㎛ 크기가 되도록 수행되는 것일 수 있다.The pulverization of step S1 may be performed to have a size of 10 to 500 μm, and preferably may be performed to have a size of 400 to 500 μm.

상기 범위보다 작은 크기로 분쇄될 경우, 동결된 상태의 원재료 혼합물을 분쇄하는 과정에서 시간 및 에너지 효율이 저하될 수 있고, 상기 범위보다 크게 분쇄되는 경우 추출물에 포함된 활성성분의 추출이 충분히 이루어지지 않아 본 발명에서 의도하고 있는 효과를 충분히 나타내지 못할 수 있다.When pulverized to a size smaller than the above range, time and energy efficiency may be reduced in the process of pulverizing the raw material mixture in a frozen state. Therefore, the intended effect of the present invention may not be sufficiently exhibited.

또한, 상기 S1 단계에서 원재료 혼합물은 분쇄 전 하기 단계를 포함하는 전처리 단계를 거치는 것일 수 있다:In addition, the raw material mixture in step S1 may be subjected to a pretreatment step including the following steps before pulverization:

a) 병풀, 로즈마리, 루이보스 및 동백나무 잎을 세철 후 혼합하고, 정제수를 투입하여 10 내지 20분간 방치한 후, 물기를 제거하는 단계;a) Washing and mixing Centella asiatica, rosemary, rooibos and camellia leaves, adding purified water and leaving it for 10 to 20 minutes, then removing the water;

b) 상기 물기가 제거된 혼합물을 -40 내지 -50℃로 동결시킨 후, 상온에서 3 내지 4시간 동안 방치하는 단계; 및b) freezing the water-removed mixture at -40 to -50°C and then leaving it at room temperature for 3 to 4 hours; and

c) 상기 방치된 혼합물을 건조 후 -40 내지 -50℃로 동결시키는 단계.c) Freezing the left mixture at -40 to -50°C after drying.

상기 a) 단계에서 세절은 원재료의 크기가 0.1 내지 1.0 cm가 되도록 수행되는 것일 수 있으며, 바람직하게는 0.3 내지 0.7 cm가 되도록 수행되는 것일 수 있다. 본 발명의 실시예들에 따르면, 세절은 약 0.5 cm가 되도록 수행되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.The shredding in step a) may be performed so that the size of the raw material is 0.1 to 1.0 cm, and preferably 0.3 to 0.7 cm. According to embodiments of the present invention, the slicing may be performed to be about 0.5 cm, but is not limited thereto.

상기 a) 단계는 정제수를 각 원재료에 침지(침투)시키기 위한 것으로, 정제수가 원재료 혼합물에 충분히 흡수될 수 있는 시간 동안 방치하는 것으로 충분하나, 제조효율상 10 내지 20분 동안 방치하는 것이 바람직할 수 있다.Step a) is to immerse (permeate) the purified water into each raw material, and it is sufficient to leave it for a time for the purified water to be sufficiently absorbed into the raw material mixture, but it may be preferable to leave it for 10 to 20 minutes for manufacturing efficiency. have.

상기 a) 단계에서 "물기를 제거"는 혼합물 외부에 존재하는 정제수를 제거함을 의미하는 것으로, 예를 들어, 필터를 통과시켜 혼합물 외부에 존재하는 정제수를 제거하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 혼합물 외부에 존재하는 정제수를 90% 내지 99.9%, 바람직하게는 95% 내지 99.9% 제거하는 것을 의미할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다."Remove water" in step a) means removing the purified water existing outside the mixture, for example, it may be to remove the purified water existing outside the mixture by passing through a filter, but is not limited thereto . In addition, it may mean to remove 90% to 99.9%, preferably 95% to 99.9% of purified water existing outside the mixture, but is not limited thereto.

상기 b) 단계는 정제수가 침지된 원재료 혼합물에 대해 동결 및 해동을 수행하는 단계로, 본 발명의 실시예들에 따르면, b) 단계는 3번 이상 반복적이며, 연속적으로 수행되는 것이 바람직할 수 있고, 더욱 바람직하게는 3 내지 5번, 더욱 바람직하게는 4번 또는 5번 반복적이며, 연속적으로 수행되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.Step b) is a step of performing freezing and thawing on the raw material mixture immersed in purified water, and according to embodiments of the present invention, step b) is repeated three or more times, and it may be preferable to be continuously performed, , more preferably 3 to 5 times, more preferably 4 or 5 times, and may be continuously performed, but is not limited thereto.

상기 범위보다 적은 횟수로 수행되는 경우, 전처리로 인한 활성성분의 추출증가 효과가 미미할 수 있으며, 상기 범위보다 많은 횟수로 수행되는 경우, 시간 및 에너지 소비 대비 활성성분의 추출증가 효과가 크지 않을 수 있어 제조효율상 적절하지 않다.When it is carried out a number of times less than the above range, the effect of increasing the extraction of the active ingredient due to the pretreatment may be insignificant, and when it is performed more times than the range, the effect of increasing the extraction of the active ingredient compared to time and energy consumption may not be large. It is not suitable for manufacturing efficiency.

후술하는 실험예에서는 b) 단계를 3번 이상 반복적으로 수행하는 경우, 조성물로 인한 피부개선 효과가 크게 향상될 수 있음을 구체적으로 입증하여, 복합추출물 제조에 있어 전처리 단계를 거치는 경우, 활성성분의 추출양을 증가시킬 수 있다는 점을 확인하였다.In the experimental example to be described later, when step b) is repeatedly performed three or more times, it is specifically demonstrated that the skin improvement effect due to the composition can be greatly improved. It was confirmed that the extraction amount could be increased.

본 발명의 복합추출물 제조방법에서 상기 S2 단계는 균질화된 원재료 혼합물 용액을 초음파 추출하는 단계이다.In the method for producing a complex extract of the present invention, step S2 is a step of ultrasonically extracting the homogenized raw material mixture solution.

상기 S2 단계는 60 내지 80℃에서 수행되며, 상기 온도 범위 미만에서는 원재료 혼합물에 포함된 성분의 추출이 충분히 일어나지 않을 수 있고, 상기 범위를 초과하는 경우, 추출 수율 증가 및 추출 시간 단축될 수는 있으나, 원재료 혼합물에 포함된 활성성분이 열에 의해 변성될 수 있다는 문제가 있다. 따라서, 활성성분의 추출수율 및 온전성 측면을 모두 고려하면 상기 범위의 온도가 매우 유리하다.The step S2 is carried out at 60 to 80 ℃, below the temperature range, extraction of the components included in the raw material mixture may not sufficiently occur, and if it exceeds the above range, the extraction yield may increase and the extraction time may be shortened. , there is a problem that the active ingredient contained in the raw material mixture may be denatured by heat. Therefore, in consideration of both the extraction yield and integrity of the active ingredient, the temperature in the above range is very advantageous.

상기 S2 단계는 2시간 내지 4시간 동안 수행될 수 있으며, 본 발명의 실시예들에 따르면, 약 3시간 동안 수행되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.Step S2 may be performed for 2 to 4 hours, and according to embodiments of the present invention, may be performed for about 3 hours, but is not limited thereto.

상기 시간 범위 미만으로 추출되는 경우, 원재료 혼합물에 포함된 활성성분의 추출이 충분히 일어나지 않을 수 있고, 상기 범위를 초과하는 경우, 시간 대비 활성성분의 추출수율이 낮아져 제조효율상 적절하지 않을 수 있다.If the extraction is less than the time range, the extraction of the active ingredient contained in the raw material mixture may not sufficiently occur, and if it exceeds the above range, the extraction yield of the active ingredient relative to the time may be lowered, which may not be appropriate in terms of manufacturing efficiency.

또한, 초음파 추출기가 특정 위치에 초점을 갖고 조사될 경우, 매질의 온도가 상승하여 원재료에 포함된 활성성분이 파괴되거나 변성될 수 있으므로 상기 S2 단계는 초음파 추출은 지속적으로 교반을 수반하며 수행되는 것일 수 있으며, 상기 교반은 초음파 조사 기기에 구비된 교반 장치에 의해 수행될 수 있고, 별도로 구비된 교반 장치를 통해 수행될 수 있다.In addition, when the ultrasonic extractor is irradiated with a focus on a specific position, the temperature of the medium may rise and the active ingredient contained in the raw material may be destroyed or denatured. In addition, the stirring may be performed by a stirring device provided in the ultrasonic irradiation device, or may be performed through a separately provided stirring device.

본 발명의 복합추출물 제조방법에서 상기 S3 및 S6 단계는 잔사물과 초음파 추출에 의해 활성물질이 포함되어 있는 여과액을 분리하는 단계이며, 상기 분리는 공지되어 있는 방법을 통해 수행될 수 있다.In the method for producing a complex extract of the present invention, steps S3 and S6 are steps of separating the residue and the filtrate containing the active material by ultrasonic extraction, and the separation may be performed by a known method.

본 발명의 복합추출물 제조방법에서 상기 S4 및 S5 단계는 S3 단계에서 분리되고 남은 잔사물을 열수추출하는 단계이다.In the method for manufacturing a complex extract of the present invention, steps S4 and S5 are steps of hot water extraction of the residue remaining after separation in step S3.

상기 S5 단계에서, 용매는 정제수인 것이 바람직하며, 유기용매 사용 시 잔사물에 남은 추출하고자 하는 활성성분의 추출수율이 낮아질 수 있다.In step S5, the solvent is preferably purified water, and when the organic solvent is used, the extraction yield of the active ingredient to be extracted remaining in the residue may be low.

상기 S5 단계는 130 내지 150℃에서 수행되는 것일 수 있으며, 2 내지 4시간 동안 수행되는 것일 수 있다.The step S5 may be performed at 130 to 150° C., and may be performed for 2 to 4 hours.

상기 온도 범위 미만에서는 잔사물에 포함된 성분의 추출이 충분히 일어나지 않을 수 있고, 상기 범위를 초과하는 경우, 추출 수율 증가 및 추출 시간 단축될 수는 있으나, 잔사물에 포함된 활성성분이 열에 의해 변성될 수 있다는 문제가 있다. 따라서, 활성성분의 추출수율 및 온전성 측면을 모두 고려하면 상기 범위의 온도가 매우 유리하다.Below the temperature range, extraction of the components contained in the residue may not sufficiently occur, and if it exceeds the above range, the extraction yield may be increased and the extraction time may be shortened, but the active ingredient contained in the residue may be denatured by heat The problem is that it could be. Therefore, in consideration of both the extraction yield and integrity of the active ingredient, the temperature in the above range is very advantageous.

또한, 상기 시간 범위 미만으로 추출되는 경우, 잔사물에 포함된 활성성분의 추출이 충분히 일어나지 않을 수 있고, 상기 범위를 초과하는 경우, 시간 대비 활성성분의 추출수율이 낮아져 제조효율상 적절하지 않을 수 있다.In addition, if the extraction is less than the time range, the extraction of the active ingredient contained in the residue may not sufficiently occur, and if it exceeds the above range, the extraction yield of the active ingredient relative to the time may be lowered, which may not be appropriate in terms of manufacturing efficiency. have.

본 발명의 복합추출물 제조방법에서 상기 S2 및 S3 단계 사이; 및 S5 및 S6 단계 사이에 수득된 추출물을 2 내지 6℃로 냉각시키고, 4 내지 6시간 동안 방치(숙성)시키는 단계를 더 포함할 수 있으며, 이로 인해 추출된 활성성분이 가진 피부개선 효과가 증대되는 효과를 나타낼 수 있다.Between the steps S2 and S3 in the complex extract manufacturing method of the present invention; and cooling the extract obtained between steps S5 and S6 to 2 to 6° C. and leaving (aging) for 4 to 6 hours, thereby increasing the skin improvement effect of the extracted active ingredient effect can be exhibited.

본 발명의 복합추출물 제조방법에서 S7 단계는 상기 S3 및 상기 S6 단계에서 분리된 여과액을 혼합하는 단계로, 각각의 다른 추출법을 연속적이고 순차적으로 수행한 제조방법에 의해 원재료로부터 최대로 추출된 성분을 혼합하는 단계이다.In the complex extract manufacturing method of the present invention, step S7 is a step of mixing the filtrate separated in steps S3 and S6, and the component maximally extracted from the raw material by a manufacturing method in which different extraction methods are continuously and sequentially performed. is a mixing step.

본 발명의 복합추출물 제조방법에서 상기 S1 내지 S7 단계는 연속적이고 순차적으로 수행하는 것이 원재료로부터 최대로 활성성분을 추출하는데 유리할 수 있으며, 후술하는 실험예에서는 S1 내지 S7 단계는 연속적이고 순차적으로 수행될 경우 콜라겐 생성 및 티로시나제 억제 활성으로 인해 피부개선 효과가 증대될 수 있음을 구체적으로 입증하였다.In the complex extract manufacturing method of the present invention, it may be advantageous to perform steps S1 to S7 continuously and sequentially in maximally extracting the active ingredient from the raw material. In this case, it was specifically demonstrated that the skin improvement effect can be increased due to collagen production and tyrosinase inhibitory activity.

본 발명에서 "피부개선"은 예를 들면, 피부의 탄력 향상, 주름 감소, 미백 등 일반적으로 피부의 질을 향상시키는 것으로 알려진 것을 의미한다.In the present invention, "skin improvement" means, for example, improving skin elasticity, reducing wrinkles, whitening, etc. generally known to improve the quality of the skin.

본 발명에서 "건강기능식품"은 일상 식사에서 결핍되기 쉬운 영양소나 인체에 유용한 기능을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조한 식품으로, 인체의 건강을 유지하는데 도움을 주는 식품을 의미하나, 이에 제한되는 것은 아니며 통상적인 의미의 건강식품을 모두 포함한다.In the present invention, "health functional food" refers to a food manufactured using raw materials or ingredients that are easily deficient in daily meals or have a useful function in the human body, and refers to food that helps maintain human health, but is limited thereto. This includes all health foods in the ordinary sense.

본 발명에서 상기 건강기능식품은 정제, 캡슐, 환, 과립, 액상, 분말, 편상, 시럽, 겔, 젤리, 바, 필름 등의 제형으로 식품 첨가물과 혼합되어 건강기능식품으로 제품화 될 수 있다.In the present invention, the health functional food may be mixed with food additives in the form of tablets, capsules, pills, granules, liquids, powders, flakes, syrups, gels, jellies, bars, films, etc. to be commercialized as health functional food.

상기 건강기능식품에 혼합될 수 있는 식품 첨가물은 예를 들어, 향미제, 감미제, 풍미제, 보전제, 천연 탄수화물, 영양제, 비타민, 전해질, 착색제, 펙스탄 및 그 의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 식품에 첨가할 수 있는 것으로 본 발명의 건강기능식품 조성물에 유리한 효과를 나타낼 수 있는 것이라면 제한없이 포함될 수 있다.Food additives that can be mixed in the health functional food include, for example, flavoring agents, sweeteners, flavoring agents, preservatives, natural carbohydrates, nutrients, vitamins, electrolytes, colorants, pextan and salts thereof, alginic acid and salts thereof, It may be an organic acid, a protective colloidal thickener, a pH adjuster, a stabilizer, a preservative, glycerin, alcohol, etc., but is not limited thereto, and if it can be added to food, it can exhibit a beneficial effect on the health functional food composition of the present invention may be included without limitation.

또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 유효성분 이외에, 피부개선 효과의 상승·보강을 위하여, 유사활성의 부가를 통한 복용이나 섭취의 편리성을 증진시키기 위하여, 당업계에서 이미 안전성이 검증되고 해당 활성을 갖는 것으로 공지된 임의의 화합물이나 천연 추출물을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 화합물 또는 추출물에는 각국 약전(한국에서는 "대한민국약전"), 각국 건강기능식품공전(한국에서는 식약처 고시인 "건강기능식품 기준 및 규격"임) 등의 공정서에 실려 있는 화합물 또는 추출물, 의약품의 제조·판매를 규율하는 각국의 법률(한국에서는 "약사법"임)에 따라 품목 허가를 받은 화합물 또는 추출물, 건강기능식품의 제조·판매를 규율하는 각국 법률(한국에서는 「건강기능식품에관한법률」임)에 따라 기능성이 인정된 화합물 또는 추출물이 포함된다.In addition, the health functional food composition of the present invention, in addition to the active ingredient, has already been verified in the art for safety and has been verified in the art to increase/reinforce the skin improvement effect, and to enhance the convenience of taking or ingestion through the addition of similar activity. It may further include any compound or natural extract known to have activity. Such compounds or extracts include compounds, extracts, and pharmaceuticals listed in compendial documents such as pharmacopeias of each country (“Korea Pharmacopoeia” in Korea) and health functional food regulations of each country (“health functional food standards and specifications” announced by the Ministry of Food and Drug Safety in Korea). Each country's laws governing the manufacture and sale of compounds or extracts and health functional foods that have been approved for items in accordance with the laws of each country (the "Pharmaceuticals Act" in Korea) governing the manufacture and sale of '), and compounds or extracts whose functionality is recognized are included.

본 발명의 다른 양태는, 피쉬콜라겐; 및 병풀, 로즈마리, 루이보스 및 동백나무 잎의 복합추출물;을 포함하는 피부개선용 건강기능식품을 제조하는 방법을 제공한다.Another aspect of the present invention, fish collagen; and Centella asiatica, rosemary, rooibos, and a complex extract of camellia leaves; provides a method for preparing a health functional food for skin improvement, including.

본 발명의 피부개선용 건강기능식품 제조방법에서 반대되는 언급이 없는 한 상기 피부개선용 건강기능식품에서 서술한 바와 동일하며, 명세서의 과도한 반복을 피하기 위해 설명은 생략한다.Unless otherwise stated in the manufacturing method of the health functional food for skin improvement of the present invention, it is the same as described in the health functional food for skin improvement, and the description is omitted to avoid excessive repetition of the specification.

본 발명의 피부개선용 건강기능식품 조성물은 콜라겐 합성 증진 효과 및 티로시나제 억제 효과가 우수하므로, 피부의 주름 및/또는 탄력 개선, 및 피부 미백 등 피부개선 용도로 유용하게 사용할 수 있다.Since the health functional food composition for skin improvement of the present invention has excellent collagen synthesis promoting effect and tyrosinase inhibitory effect, it can be usefully used for skin improvement purposes such as skin wrinkles and/or elasticity improvement, and skin whitening.

또한, 본 발명의 피부개선용 건강기능식품은 피부의 질을 향상시킬 수 있으므로, 생기있는 피부를 만드는데 유용하게 사용될 수 있다.In addition, since the health functional food for skin improvement of the present invention can improve the quality of the skin, it can be usefully used to make lively skin.

이하 본 발명을 실시예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다. 또한, 본 명세서에서 특별히 정의되지 않은 용어들에 대해서는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것으로 이해되어야 할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail by way of Examples. However, these examples are for illustrative purposes only, and the scope of the present invention is not limited by these examples. In addition, it will be understood that terms not specifically defined herein have meanings commonly used in the technical field to which the present invention pertains.

실시예Example

(1) 원재료 복합추출물의 제조(1) Preparation of raw material complex extract

1) 원재료 혼합물의 전처리 단계1) Pre-treatment step of raw material mixture

1-1) 병풀(잎), 로즈마리(잎), 루이보스(잎) 및 동백나무(잎)(동대문구 소재 한약재시장 또는 인터넷 오픈마켓에서 구매)를 깨끗하게 세척한 후, 약 0.5 cm로 세절하고 2:2:1:1의 중량비로 고르게 혼합하였다. 그 후, 상기 혼합물 300 g에 정제수를 넣고, 약 15분간 방치하여 원재료에 정제수가 흡수될 수 있게 하였으며, 원재료 혼합물을 거름망으로 걸러내어 물기를 제거하였다.1-1) After thoroughly washing Centella asiatica (leaf), rosemary (leaf), rooibos (leaf) and camellia (leaf) (purchased at the oriental medicine market in Dongdaemun-gu or online open market), cut into 0.5 cm pieces 2: It was mixed evenly in a weight ratio of 2:1:1. Thereafter, purified water was added to 300 g of the mixture, and left for about 15 minutes to allow the purified water to be absorbed into the raw material, and the raw material mixture was filtered through a sieve to remove moisture.

1-2) 상기 수득된 원재료 혼합물을 동결기(QF-700)를 사용하여 약 -40 내지 -50℃의 초저온으로 동결시키고, 상기 동결시킨 원재료 혼합물을 상온에 꺼내어 약 3 내지 4시간 동안 방치(해동)하였으며, 상기 과정(동결 및 해동)은 3회 추가(총 4회)로 반복하였다.1-2) The obtained raw material mixture is frozen at a very low temperature of about -40 to -50 ° C using a freezer (QF-700), and the frozen raw material mixture is taken out at room temperature and left for about 3 to 4 hours ( thaw), and the above process (freezing and thawing) was repeated 3 additional times (total 4 times).

1-3) 상기 동결 및 해동 단계를 거친 원재료 혼합물을 열풍건조로 건조시킨 다음, 약 -40 내지 -50℃의 초저온으로 동결시켜 원재료 혼합물 전처리 단계를 완료하였다.1-3) The raw material mixture subjected to the above freezing and thawing steps was dried by hot air drying, and then frozen at an ultra-low temperature of about -40 to -50°C to complete the raw material mixture pretreatment step.

2) 원재료 복합추출물의 제조2) Preparation of raw material complex extract

2-1) 상기 전처리된 원재료 혼합물 100 g을 동결상태에서 분쇄기를 통해 약 400 내지 500 ㎛ 크기로 분쇄하고, 약 10배 부피의 80%(w/v) 에탄올을 가한 후, 10분간 교반하여 균질화하였다.2-1) 100 g of the pre-treated raw material mixture is pulverized to a size of about 400 to 500 μm through a grinder in a frozen state, 80% (w/v) ethanol of about 10 times the volume is added, and then stirred for 10 minutes to homogenize did

2-2) 상기 균질화된 원재료 혼합물을 60 내지 80℃가 되도록 유지시키면서 초음파 추출기(Power sonica, 화신테크)를 이용하여 3시간 동안 지속적으로 교반하면서 추출하였다.2-2) The homogenized raw material mixture was extracted while maintaining the temperature at 60 to 80° C. while continuously stirring for 3 hours using an ultrasonic extractor (Power sonica, Hwasin Tech).

이후, 상기 수득된 추출물을 4℃로 냉각시키고, 약 5시간 동안 방치시킨 후, 필터(6 ㎛)로 여과하여 여과액 및 잔사물을 분리하고, 여과액(제1 추출물)은 따로 보관하였다.Thereafter, the obtained extract was cooled to 4° C., left for about 5 hours, and filtered through a filter (6 μm) to separate the filtrate and residues, and the filtrate (first extract) was stored separately.

2-3) 상기 분리된 잔사물에 약 10배 부피의 정제수를 가한 후, 10분간 교반하여 균질화하고, 약 130 내지 150℃에서 3시간 동안 열수추출하고, 수득된 추출물을 4℃로 냉각시키고, 약 5시간 동안 방치시킨 후, 필터(6 ㎛)로 여과하여 여과액 및 잔사물을 분리하고, 여과액(제2 추출물)은 따로 보관하였다.2-3) After adding about 10 times the volume of purified water to the separated residue, homogenization by stirring for 10 minutes, hot water extraction at about 130 to 150° C. for 3 hours, and cooling the obtained extract to 4° C., After leaving it for about 5 hours, it was filtered through a filter (6 μm) to separate the filtrate and the residue, and the filtrate (the second extract) was stored separately.

2-4) 이후, 상기 제1 및 제2 추출물을 혼합하고, 감압농축 및 동결건조(Eyela NE, Tokyo, Japan)하여 원재료 복합추출물을 제조하였다.2-4) Then, the first and second extracts were mixed, concentrated under reduced pressure and freeze-dried (Eyela NE, Tokyo, Japan) to prepare a raw material complex extract.

(3) (3) 피쉬fish 콜라겐 및 원재료 복합추출물의 혼합 Blend of collagen and raw material complex extract

시중에서 구입한 저분자 피쉬 콜라겐(젤텍, 500 내지 1,000 Da) 및 상기 제조된 원재료 복합추출물을 2:1의 중량비로 혼합하였으며, 이를 실시예의 시료로 하였다.Commercially purchased low-molecular-weight fish collagen (Geltech, 500 to 1,000 Da) and the prepared raw material complex extract were mixed in a weight ratio of 2:1, which was used as a sample in Examples.

비교예 1Comparative Example 1

실시예의 원재료 혼합물의 전처리 단계에 있어서, 1-2 단계의 동결 및 해동을 총 2회 반복한 것을 제외하고는 실시예와 실질적으로 동일한 방법을 통해 피쉬 콜라겐 및 원재료 복합추출물을 혼합한 시료를 제조하였다.In the pretreatment step of the raw material mixture of Example, a sample in which fish collagen and raw material complex extract were mixed was prepared in substantially the same manner as in Example, except that the freezing and thawing of steps 1-2 were repeated a total of two times. .

비교예 2Comparative Example 2

실시예의 원재료 복합추출물의 제조에 있어서, 하기의 방법으로 추출한 것을 제외하고는 실시예와 실질적으로 동일한 방법을 통해 피쉬 콜라겐 및 원재료 복합추출물을 혼합한 시료를 제조하였다.In the preparation of the raw material complex extract of Examples, a sample in which fish collagen and the raw material complex extract were mixed was prepared in substantially the same manner as in Examples, except for extracting in the following manner.

3-1) 상기 실시예의 1-1 내지 1-3 단계로 전처리된 원재료 혼합물 100 g을 동결상태에서 분쇄기를 통해 약 400 내지 500 ㎛ 크기로 분쇄하고, 약 10배 부피의 정제수를 투여한 후, 10분간 교반하여 균질화하였다.3-1) 100 g of the raw material mixture pretreated in steps 1-1 to 1-3 of the above example is pulverized to a size of about 400 to 500 μm through a grinder in a frozen state, and after administering about 10 times the volume of purified water, It was homogenized by stirring for 10 minutes.

3-2) 상기 균질화된 원재료 혼합물을 약 130 내지 150

Figure 112021116365931-pat00001
에서 3시간 동안 열수추출하고, 수득된 추출물을 4
Figure 112021116365931-pat00002
로 냉각시키고, 약 5시간 동안 방치시킨 후, 필터(6 ㎛)로 여과하여 여과액 및 잔사물을 분리하고, 여과액(제1' 추출물)은 따로 보관하였다.3-2) about 130 to 150 of the homogenized raw material mixture
Figure 112021116365931-pat00001
hot water extraction for 3 hours, and the obtained extract was
Figure 112021116365931-pat00002
After cooling with a furnace and leaving it for about 5 hours, it was filtered through a filter (6 μm) to separate the filtrate and the residue, and the filtrate (the first 'extract) was stored separately.

3-3) 상기 분리된 잔사물에 약 10배 부피의 80%(w/v) 에탄올을 가한 후, 10분간 교반하여 균질화하고, 상기 균질화된 원재료 혼합물을 60 내지 80℃가 되도록 유지시키면서 초음파 추출기(Power sonica, 화신테크)를 이용하여 3시간 동안 지속적으로 교반하면서 추출하였다.3-3) After adding about 10 times the volume of 80% (w/v) ethanol to the separated residue, homogenize by stirring for 10 minutes, and ultrasonic extractor while maintaining the homogenized raw material mixture to be 60 to 80 ℃ (Power sonica, Hwashin Tech) was used for extraction while continuously stirring for 3 hours.

이후, 상기 수득된 추출물을 4℃로 냉각시키고, 약 5시간 동안 방치시킨 후, 필터(6 ㎛)로 여과하여 여과액 및 잔사물을 분리하고, 여과액(제2' 복합추출물)은 따로 보관하였다.Thereafter, the obtained extract was cooled to 4° C., left for about 5 hours, filtered through a filter (6 μm) to separate the filtrate and residues, and the filtrate (2nd 'complex extract) was stored separately. did

3-4) 이후, 상기 제1' 및 제2' 추출물을 혼합하고, 감압농축 및 동결건조(Eyela NE, Tokyo, Japan)하여 원재료 복합추출물을 제조하였다.3-4) Thereafter, the 1' and 2' extracts were mixed, concentrated under reduced pressure and freeze-dried (Eyela NE, Tokyo, Japan) to prepare a raw material complex extract.

실험예 1. 콜라겐 합성 증진 효과 확인Experimental Example 1. Confirmation of collagen synthesis enhancing effect

피부의 진피층은 섬유아세포, 콜라겐, 엘라스틴이 유기적으로 구성되어 있으며, 노화, 자외선 등의 피부 손상에 의해 콜라겐, 엘라스틴 등의 유기구조가 붕괴되면서 주름이 생성된다. 프로콜라겐(procollagen)은 콜라겐으로 전환되어 진피층의 콜라겐 함량을 증가시켜 피부개선 또는 완화 효과를 발휘한다.The dermal layer of the skin is composed of fibroblasts, collagen, and elastin organically, and wrinkles are generated as the organic structures such as collagen and elastin are destroyed by skin damage such as aging and ultraviolet rays. Procollagen is converted to collagen and increases the collagen content in the dermal layer, thereby improving or alleviating the skin.

인간유래 섬유아세포인 WI-38 세포를 DMEM 배지가 들어 있는 24 웰 플레이트에 접종(2 x 105 세포/well)하고, 37℃, 5 % CO2 조건에서 24시간 배양하였다, 그 다음 각 웰에서 배지를 제거한 다음 실시예, 비교예 및 대조군(retinol) 시료를 각각 1 mg/ml 처리한 뒤, 다시 24시간 배양하였다. 이후, 세포배지를 수집하였다.Human-derived fibroblasts, WI-38 cells, were inoculated into a 24-well plate containing DMEM medium (2 x 10 5 cells/well), and cultured for 24 hours at 37°C, 5% CO 2 condition, and then in each well. After removing the medium, 1 mg/ml of each of Examples, Comparative Examples and Control (retinol) samples were treated, and then cultured again for 24 hours. Then, the cell medium was collected.

프로콜라겐 합성량은 ELISA 키트(Procollagen Type I C-peptide EIA kit MK101, Takara Korea Biomedical Inc.)를 이용하여 측정하였으며, 450 nm에서 흡광도를 측정하여 프로콜라겐 생성량을 계산하였다.The amount of procollagen synthesis was measured using an ELISA kit (Procollagen Type I C-peptide EIA kit MK101, Takara Korea Biomedical Inc.), and the amount of procollagen production was calculated by measuring the absorbance at 450 nm.

[계산식 1][Formula 1]

프로콜라겐 생성률(%) = (시료 처리 시 프로콜라겐 생성량 / 대조군의 프로콜라겐 생성량) x 100Procollagen production rate (%) = (Procollagen production amount during sample treatment / Procollagen production amount of control group) x 100

시료sample 프로콜라겐procollagen 생성률( generation rate ( %% )) 실시예Example 145145 비교예 1Comparative Example 1 121121 비교예 2Comparative Example 2 127127 대조군control 100100

상기 표 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 실시예는 프로콜라겐 합성을 촉진하는 것으로 알려진 대조군과 대비하여 매우 우수한 프로콜라겐 생성 촉진 효과를 나타내었다. As can be seen in Table 1, the Example exhibited a very excellent procollagen production promoting effect compared to the control known to promote procollagen synthesis.

또한, 제조방법상의 차이를 둔 비교예 1 및 2의 경우에도 프로콜라겐 생성 촉진 효과를 나타내었으나, 실시예의 경우, 비교예 1 및 2와 대비하여서도 유의미한 프로콜라겐 생성 촉진 효과를 나타내어, 제조방법의 차이에 의해서도 프로콜라겐 생성 효과를 상승시킬 수 있음을 확인하였다.In addition, in the case of Comparative Examples 1 and 2 with a difference in the production method, the procollagen production promoting effect was exhibited, but in the case of the Examples, a significant procollagen production promoting effect was also exhibited compared to Comparative Examples 1 and 2, so that the It was confirmed that the difference could also increase the effect of procollagen production.

상기 결과는 본 발명의 조성물이 콜라겐 생성을 효과적으로 촉진하여 피부 노화로 인한 피부의 주름, 탄력 등을 개선시킬 수 있다는 점을 확인한 것이다.The above results confirm that the composition of the present invention can effectively promote collagen production to improve wrinkles and elasticity of the skin caused by skin aging.

실험예 2. 티로시나제 활성 억제 확인Experimental Example 2. Confirmation of inhibition of tyrosinase activity

본 발명의 조성물이 티로시나제 억제 활성을 가지는지 여부를 확인하기 위하여 실시예 및 비교예의 조성물을 B16F10 멜라노마 세포주에 처리하고 티로시나제 활성 억제 정도를 측정하였다.In order to determine whether the composition of the present invention has tyrosinase inhibitory activity, the compositions of Examples and Comparative Examples were treated with B16F10 melanoma cell line, and the degree of inhibition of tyrosinase activity was measured.

구체적으로, 6 웰 플레이트에 B16F10 멜라노마 세포주를 분주(1Х105/well)하고, 24시간 후 배지를 제거하였다. 이후 실시예 및 비교예의 시료와 대조군으로 알부틴(albutin)을 각각 1 mg/ml 첨가한 후, 3일간 배양하였다. 이때 멜라닌 형성 자극제인 α-MSH를 함께 처리하였다. 그리고, PBS로 2번 세척하고 lysis buffer (100 mM sodium phosphate (pH 6.8), 0.1 mM PMSF, 1% Triton X-100)를 넣고 -80℃에서 30분 용해시켰다. 세포들을 배양용기로부터 수거한 후, 수산화나트륨 용액(1 N, 10 % DMSO)을 65℃에서 1시간 반응시켜 용해시키고, 400 nm에서 단위 세포수당 흡광도로 생성된 멜라닌의 양을 측정하고, 저해율은 하기 식에 의해 계산하여 표 2에 나타내었다.Specifically, the B16F10 melanoma cell line was dispensed in a 6-well plate (1Х10 5 /well), and the medium was removed after 24 hours. Thereafter, 1 mg/ml of arbutin was added to the samples of Examples and Comparative Examples and as a control, respectively, and cultured for 3 days. At this time, α-MSH, a melanin formation stimulator, was also treated. Then, washed twice with PBS, lysis buffer (100 mM sodium phosphate (pH 6.8), 0.1 mM PMSF, 1% Triton X-100) was added and dissolved at -80°C for 30 minutes. After the cells were collected from the culture vessel, the sodium hydroxide solution (1 N, 10% DMSO) was reacted at 65° C. for 1 hour to dissolve, and the amount of melanin produced by absorbance per unit cell number at 400 nm was measured, and the inhibition rate was It was calculated by the following formula and shown in Table 2.

[계산식 2][Formula 2]

티로시나제 활성 저해율(%) = {(무처리군의 멜라닌 생성량 - 실험 시료의 멜라닌 생성량) / 대조군의 멜라닌 생성량} X 100Tyrosinase activity inhibition rate (%) = {(Melanin production in untreated group - Melanin production in test sample) / Melanin production in control group} X 100

시료sample 티로시나제tyrosinase 활성 저해율( activity inhibition ( %% )) 실시예Example 8282 비교예 1Comparative Example 1 4040 비교예 2Comparative Example 2 6969 알부틴arbutin 4949 무처리군* untreated group * --

(* α-MSH만을 처리한 군을 의미함)( * means the group treated only with α-MSH)

표 1에 나타낸 바와 같이, 실시예를 처리한 세포주에서는 알부틴 처리군과 대비하여 매우 높은 티로시나제 활성 저해율을 나타내었다.As shown in Table 1, the cell line treated with Example showed a very high tyrosinase activity inhibition rate compared to the arbutin-treated group.

또한, 복합추출물에 있어서 제조방법상의 차이를 둔 비교예 1 및 2의 경우에도 티로시나제 활성을 저해하는 효과를 나타내었으나, 실시예를 처리한 군에서는 이와 대비해서도 유의미한 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내어 제조방법의 차이에 의해서도 티로시나제 활성 억제 효과를 상당부분 상승시킬 수 있음을 확인하였다.In addition, in the case of Comparative Examples 1 and 2 with a difference in the manufacturing method in the complex extract, the effect of inhibiting tyrosinase activity was shown, but the group treated with the Example showed a significant tyrosinase activity inhibitory effect in comparison with this. It was confirmed that the tyrosinase activity inhibitory effect can be significantly increased even by the difference of .

상기 결과는 본 발명의 조성물이 티로시나제 활성을 효과적으로 억제하여 멜라닌 등 색소들의 생성을 억제시킬 수 있어 피부 노화시 생성될 수 있는 반점 등의 생성을 억제시킬 수 있다는 점을 확인한 것이다.The above results confirm that the composition of the present invention can inhibit the production of pigments such as melanin by effectively inhibiting tyrosinase activity, thereby inhibiting the production of spots, etc. that may be generated during skin aging.

Claims (10)

피쉬 콜라겐; 및
병풀, 로즈마리, 루이보스 및 동백나무 잎의 복합추출물;을 포함하는 피부개선용 건강기능식품 조성물에 있어서,
상기 복합추출물은,
S1) 병풀, 로즈마리, 루이보스 및 동백나무 잎을 세절 후 혼합하고, 정제수를 투입하여 10 내지 20분간 방치한 후, 물기를 제거하는 단계;
S2) 상기 물기가 제거된 혼합물을 -40 내지 -50℃로 동결시킨 후, 상온에서 3 내지 4시간 동안 방치하는 단계;
S3) 상기 방치된 혼합물을 건조 후 -40 내지 -50℃로 동결시키는 단계;
S4) 상기 동결 상태의 원재료 혼합물을 분쇄하고, 상기 분쇄된 원재료 혼합물에 80%(w/v) 에탄올을 투입한 후, 교반하여 균질화하는 단계;
S5) 상기 균질화된 원재료 혼합물 용액을 60 내지 80℃에서 2 내지 4시간 동안 초음파 처리하여 초음파추출하는 단계;
S6) 상기 초음파 처리된 용액을 여과하여 여과액 및 잔사물로 분리하는 단계;
S7) 상기 분리된 잔사물에 정제수를 투입한 후, 교반하여 균질화하는 단계;
S8) 상기 균질화된 용액을 130 내지 150℃에서 2 내지 4시간 동안 열처리하여 열수추출하는 단계;
S9) 상기 열처리된 용액을 여과하여 여과액 및 잔사물로 분리하는 단계; 및
S10) 상기 S6 및 S9 단계에서 분리된 여과액을 혼합하는 단계;를 포함하는 방법에 의해 제조된 것이며,
상기 S2 단계는 3 내지 5회 반복되는 것인 피부개선용 건강기능식품 조성물.
fish collagen; and
In the health functional food composition for skin improvement comprising; Centella asiatica, rosemary, rooibos and a complex extract of camellia leaves,
The complex extract,
S1) Centella asiatica, rosemary, rooibos and camellia leaves are minced and mixed, purified water is added, left for 10 to 20 minutes, and then water is removed;
S2) freezing the water-removed mixture at -40 to -50°C, and then leaving it at room temperature for 3 to 4 hours;
S3) freezing the left mixture at -40 to -50°C after drying;
S4) pulverizing the raw material mixture in the frozen state, adding 80% (w/v) ethanol to the pulverized raw material mixture, and stirring to homogenize;
S5) sonicating the homogenized raw material mixture solution at 60 to 80° C. for 2 to 4 hours to perform ultrasonic extraction;
S6) separating the sonicated solution into a filtrate and a residue by filtering;
S7) adding purified water to the separated residue, followed by stirring to homogenize;
S8) heat-treating the homogenized solution at 130 to 150° C. for 2 to 4 hours to extract hot water;
S9) separating the heat-treated solution into a filtrate and a residue by filtering; and
S10) mixing the filtrate separated in steps S6 and S9;
The step S2 is a health functional food composition for skin improvement that is repeated 3 to 5 times.
제1항에 있어서,
상기 피쉬 콜라겐은 분자량이 500 내지 1,000 Da인 피부개선용 건강기능식품 조성물.
According to claim 1,
The fish collagen is a health functional food composition for skin improvement having a molecular weight of 500 to 1,000 Da.
제1항에 있어서,
상기 복합추출물은 병풀, 로즈마리, 루이보스 및 동백나무 잎을 2:2:1:1의 중량비로 혼합한 원재료 혼합물로부터 추출된 것인 피부개선용 건강기능식품 조성물.
According to claim 1,
The complex extract is a health functional food composition for skin improvement that is extracted from a raw material mixture obtained by mixing Centella asiatica, rosemary, rooibos and camellia leaves in a weight ratio of 2:2:1:1.
제1항에 있어서,
상기 피쉬 콜라겐 및 복합추출물은 2:1의 중량비로 포함되는 것인 피부개선용 건강기능식품 조성물.
According to claim 1,
The fish collagen and complex extract are included in a weight ratio of 2: 1 health functional food composition for skin improvement.
삭제delete 삭제delete 제1항에 있어서,
상기 S4 단계의 분쇄는 400 내지 500 ㎛ 크기가 되도록 수행되는 것인 피부개선용 건강기능식품 조성물.
According to claim 1,
The pulverization of the step S4 is a health functional food composition for skin improvement that is performed to have a size of 400 to 500 μm.
제1항에 있어서,
상기 S5 및 S6 단계 사이; 및 S8 및 S9 단계 사이에 수득된 추출물을 2 내지 6℃로 냉각시키고, 4 내지 6시간 동안 방치시키는 단계를 더 포함하는 피부개선용 건강기능식품 조성물.
According to claim 1,
between steps S5 and S6; and cooling the extract obtained between steps S8 and S9 to 2 to 6°C, and leaving it to stand for 4 to 6 hours.
삭제delete 삭제delete
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KR101671803B1 (en) * 2015-10-02 2016-11-03 주식회사 베스트솔루션 Cosmetic composition with the extract of Camellia japonica L. leaf
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피부 건강 영양제 니베올라 센텔라 모이스춰 바이탈라이징 크림 100ml. 네이버 카페. [online], 2021.05.02., [2021.11.18. 검색], 인터넷: <URL: https://cafe.naver.com/sohwansu/5838> 1부.* *

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