KR102398017B1 - Fermented red teatree, manufacturing method thereof, and use thereof - Google Patents

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김윤기
김상진
조한섭
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Abstract

The present invention relates to a red teatree fermented product, a method for preparing the same, and a use thereof and, more specifically, to a red teatree fermented product prepared by fermenting a red teatree extract with one or more microorganisms, a method for preparing the same, and a cosmetic composition, a quasi-drug composition, and a skin external application composition for soothing the skin or alleviating skin inflammation comprising the same. The red teatree fermented product has excellent anti-inflammatory activity, is safe by being prepared with natural ingredients and useful microorganisms and thus reducing toxicity or side effects, and can maximize the beneficial effects on the skin.

Description

레드티트리 발효물, 이의 제조방법 및 이의 용도{FERMENTED RED TEATREE, MANUFACTURING METHOD THEREOF, AND USE THEREOF}Fermented red tea tree, manufacturing method thereof, and use thereof

본 발명은 레드티트리 발효물, 이의 제조방법 및 이의 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 레드티트리 추출물을 하나 이상의 미생물로 발효시켜 제조한 레드티트리 발효물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 항염증용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a fermented red tea tree, a method for preparing the same, and a use thereof, and more particularly, to a fermented red tea tree prepared by fermenting a red tea tree extract with one or more microorganisms, a method for preparing the same, and claims comprising the same It relates to a composition for inflammation.

케피어(kefir)는 원래 카프카스(Kavkaz)의 산악지대에서 자주 먹던 발포성 발효유로, 명칭은 터키어의 케프(kef)에서 유래되었으며 젖당(Lactose)을 발효시키는 효모와 젖산균으로 발효되는 발효물이다. 보통 염소젖, 양젖, 등으로 만드는데 유사한 것으로 동유럽의 우르다(Urda), 칠레의 스쿠타(Skuta) 등이 있다. 발효 균총으로는 보통 티벳버섯(Tibetan mushroom) 이라고 불리는 종균을 사용하며 12종의 박테리아와 효모를 지니고 있으며 최근 연구 결과들에 의하면 케피어 발효물의 경우, 장내 유익균의 활성을 증가 및 콜레스테롤 감소에 효과가 있을 뿐만 아니라 상처 치유 및 항박테리아 효능이 보고되고 있다.Kefir is originally fermented effervescent milk often eaten in the mountainous regions of the Caucasus, and its name comes from the Turkish word kef. Commonly made from goat's milk, sheep's milk, etc. Similar to Eastern Europe's Urda (Urda) and Chile's Skuta (Skuta). As the fermenting flora, a spawn called Tibetan mushroom is usually used and contains 12 kinds of bacteria and yeast. In addition, wound healing and antibacterial effects have been reported.

발효(fermentation)란, 넓은 의미로는 미생물이나 균류 등을 이용해 육종하는 과정을 말하고, 좁은 의미로는 산소 없이 당을 분해해서 에너지를 얻는 대사과정을 말한다. 발효의 생성물은 유기산이나 알코올이며, 주로 화장품업계에서 사용하는 균주는 유산균, 효모, 바실러스(Bacillus), 아스퍼길러스(Aspergillus) 등으로, 그 기준은 대한화장품성분사전에 제시하는 대로 정할 수 있다. Fermentation, in a broad sense, refers to the process of breeding using microorganisms or fungi, and in a narrow sense, refers to a metabolic process in which energy is obtained by decomposing sugar without oxygen. The product of fermentation is an organic acid or alcohol, and the strains mainly used in the cosmetic industry are lactic acid bacteria, yeast, Bacillus , Aspergillus , etc. The standards can be determined as presented in the Korean Cosmetic Ingredients Dictionary.

최근 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물로부터 얻어진 항산화, 항염, 주름 완화, 등의 기능을 가진 기능성 화장품에 많은 관심이 집중되고 있다. 또한, 유기 용매를 사용하지 않고, 인체에 유익한 미생물을 사용하여 제조된 천연 발효물들은 천연물 고유의 독성을 낮추어 피부 자극이 없어 안전하며 피부의 유효한 효능을 극대화할 수 있는 장점이 있다. 이러한 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라, 천연 재료와 유익 미생물을 이용하여 제조한 천연 발효물들은 화장품 원료로서의 개발 가치가 한층 높아져 더욱 주목받고 있는 실정이다.Recently, in order to reduce skin irritation caused by various chemical substances, a lot of attention has been paid to functional cosmetics having functions such as antioxidant, anti-inflammatory, and wrinkle relief obtained from natural products. In addition, natural fermented products prepared by using microorganisms beneficial to the human body without using organic solvents are safe without skin irritation by lowering the intrinsic toxicity of natural products, and have the advantage of maximizing the effective efficacy of the skin. As consumers' response to cosmetics using these natural materials increases, natural fermented products manufactured using natural materials and beneficial microorganisms are receiving more attention as their development value as cosmetic raw materials increases.

레드티트리(Red teatree; Leptospermum scoparium)는 호주매화 또는 마누카라고 불리는 식물로, 호주의 초기 이주자가 이 식물의 잎을 차의 대용으로 사용한 데서 유래하였다. 높이 6m 정도 자라는 상관목이며 가지가 많이 생기는 반 내한성의 식물이다. 보통 이용 부위는 꽃, 잎, 줄기를 사용하며 에센셜 오일로 많이 사용되고 있다. 하지만, 아직까지 이의 발효물에 대한 연구는 미비한 실정이다. Red teatree ( Leptospermum ) scoparium ) is a plant called the Australian plum or manuka, derived from the plant's leaves being used as a tea substitute by early settlers in Australia. It is a semi-cold-resistant plant that grows up to 6m in height and has many branches. Flowers, leaves, and stems are usually used as essential oils. However, research on its fermented product is still insufficient.

대한민국 공개특허 제10-2017-0065187호 (2017.06.13. 공개)Republic of Korea Patent Publication No. 10-2017-0065187 (published on June 13, 2017)

본 발명의 목적은 우수한 항염 활성을 가진 레드티트리 발효물의 제조방법을 제공하는 데에 있다.An object of the present invention is to provide a method for producing a fermented red tea tree having excellent anti-inflammatory activity.

본 발명의 다른 목적은 상기의 제조방법으로 제조된 레드티트리 발효물을 제공하는 데에 있다.Another object of the present invention is to provide a fermented red tea tree prepared by the above production method.

본 발명의 또 다른 목적은 상기의 레드티트리 발효물을 포함하는 항염증용 조성물을 제공하는 데에 있다.Another object of the present invention is to provide an anti-inflammatory composition comprising the fermented red tea tree.

상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 레드티트리(Leptospermum scoparium) 추출물을 제조하는 단계; 및 상기 제조된 추출물을 유산균 및 효모로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 미생물로 발효시키는 단계;를 포함하는 레드티트리 발효물의 제조방법을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention comprises the steps of preparing a red tea tree (Leptospermum scoparium) extract; and fermenting the prepared extract with one or more microorganisms selected from the group consisting of lactic acid bacteria and yeast.

본 발명은 상기 제조방법에 따라 제조된 레드티트리 발효물을 제공한다.The present invention provides a fermented red tea tree prepared according to the above production method.

또한, 본 발명은 상기의 레드티트리 발효물을 유효성분으로 함유하는 피부 염증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물, 의약외품 조성물 및 피부 외용제 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a cosmetic composition for preventing or improving skin inflammation, a quasi-drug composition, and a composition for external application for skin containing the fermented red tea tree as an active ingredient.

본 발명에 따라 유산균 및 효모에 의해 발효된 레드티트리 발효물은 우수한 항염증 활성을 가져, 피부 진정 또는 피부 염증 개선을 위한 화장료 조성물, 의약외품 조성물 및 피부 외용제 조성물로 활용할 수 있다.The red tea tree fermented product fermented by lactic acid bacteria and yeast according to the present invention has excellent anti-inflammatory activity, and can be used as a cosmetic composition, a quasi-drug composition, and a composition for external application for skin for skin soothing or skin inflammation improvement.

상기 조성물은 천연 재료와 유용 미생물을 이용하여 제조됨으로써, 독성 또는 부작용을 낮춰 안전하고, 피부에 유용한 효능들을 극대화할 수 있다. The composition is prepared by using natural materials and useful microorganisms, so that it is safe to reduce toxicity or side effects, and it is possible to maximize useful effects on the skin.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따라 유산균 및 효모를 분리한 사진이다.
도 2는 도 1에 따라 분리된 균주의 염기서열로, 유산균인 락토바실러스 사케이 NCK01(기탁번호: KFCC11856P)의 염기서열 및 효모인 클루이베로미세스 마르시아누스 NCK02(기탁번호: KFCC11857P)의 염기서열을 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 일 실험예에 따른 레드티트리 발효물의 세포독성을 확인한 실험 결과이다.
도 4는 본 발명의 다른 실험예에 따른 레드티트리 발효물의 NO 생성 저해능을 확인한 결과이다.
도 5는 본 발명의 다른 실험예에 따른 레드티트리 발효물의 사이토카인(IL-1β 및 IL-4) 생성 억제능을 확인한 결과이다.
1 is a photograph in which lactic acid bacteria and yeast are separated according to an embodiment of the present invention.
2 is a nucleotide sequence of the strain isolated according to FIG. 1, the nucleotide sequence of Lactobacillus sacai NCK01 (Accession No.: KFCC11856P) and the nucleotide sequence of the yeast Kluyveromyces marcianus NCK02 (Accession number: KFCC11857P) it has been shown
3 is an experimental result confirming the cytotoxicity of the fermented red tea tree according to an experimental example of the present invention.
4 is a result of confirming the NO production inhibitory ability of the fermented red tea tree according to another experimental example of the present invention.
5 is a result of confirming the ability to inhibit the production of cytokines (IL-1β and IL-4) of the fermented red tea tree according to another experimental example of the present invention.

이하, 본 발명을 상세하게 설명하기로 한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명자들은 자사분리한 유산균 및 효모를 이용하여 레드티트리 발효물을 제조하였고, 이의 항염증 활성을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.The present inventors have prepared a red tea tree fermented product using self-isolated lactic acid bacteria and yeast, and completed the present invention by confirming its anti-inflammatory activity.

본 발명은 레드티트리 발효물의 제조방법을 제공한다.The present invention provides a method for producing a fermented red tea tree.

상기 제조방법은 레드티트리(Leptospermum scoparium) 추출물을 제조하는 단계; 및 상기 제조된 추출물을 유산균 및 효모로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 미생물로 발효시키는 단계;를 포함할 수 있다.The manufacturing method is a red tea tree ( Leptospermum scoparium ) preparing an extract; and fermenting the prepared extract with one or more microorganisms selected from the group consisting of lactic acid bacteria and yeast.

본 명세서에서, "추출물"이란, 추출 방법, 추출 용매, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고 천연물의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질을 의미하는 것으로, 천연물의 성분을 뽑아내어 얻어진 물질을 추출 후 다른 방법으로 가공 또는 처리하여 얻어질 수 있는 물질을 모두 포함할 수 있다.As used herein, the term "extract" refers to a substance obtained by extracting a component of a natural product regardless of an extraction method, an extraction solvent, an extracted component, or the form of an extract. It may include any material obtainable by processing or processing by the method.

상기 추출물은 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출될 수 있고, 예를 들어, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등이 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.The extract may be extracted according to a method commonly used in the art, for example, hot water extraction method, ultrasonic extraction method, filtration method, reflux extraction method, etc., these are performed alone or in combination of two or more methods. can be

본 발명에 따른 레드티트리 발효물 제조방법에 있어서, 상기 레드티트리 추출물을 제조하는 단계는 레드티트리를 물, C1 내지 C4 알콜 또는 이의 혼합용액에서 선택된 추출용매로 추출하여 레드티트리 추출물을 제조하는 단계; 상기 추출용매로 추출된 레드티트리 추출물과 에틸아세테이트(EA)를 1:(0.5 내지 2)의 중량비로 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 및 상기 제조된 혼합물에서 에틸아세테이트 층을 분리하는 단계;를 포함할 수 있다.In the method for producing a fermented red tea tree according to the present invention, the step of preparing the red tea tree extract comprises extracting the red tea tree with an extraction solvent selected from water, C1 to C4 alcohol, or a mixed solution thereof to obtain a red tea tree extract. manufacturing; preparing a mixture by mixing the red tea tree extract extracted with the extraction solvent and ethyl acetate (EA) in a weight ratio of 1: (0.5 to 2); and separating the ethyl acetate layer from the prepared mixture.

바람직하게는, 상기 추출용매로 추출된 레드티트리 추출물은 에탄올 또는 에탄올 수용액으로 추출한 레드티트리 에탄올 추출물일 수 있으며, 보다 바람직하게는 상기 레드티트리를 30 내지 70 중량% 에탄올 수용액, 가장 바람직하게는 50 중량% 에탄올 수용액으로 추출한 추출물일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.Preferably, the red tea tree extract extracted with the extraction solvent may be an ethanol extract of red tea tree extracted with ethanol or an aqueous ethanol solution, more preferably the red tea tree is 30 to 70% by weight of an aqueous ethanol solution, most preferably may be an extract extracted with a 50% by weight aqueous ethanol solution, but is not limited thereto.

상기 혼합물은 상기 제조된 레드티트리 에탄올 추출물과 에틸아세테이트(EA)를 1:(0.5 내지 2), 바람직하게는 1:1의 중량비로 혼합한 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The mixture may be a mixture of the prepared red tea tree ethanol extract and ethyl acetate (EA) in a weight ratio of 1: (0.5 to 2), preferably 1:1, but is not limited thereto.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 세척한 레드티트리 원물을 50 중량% 에탄올 수용액으로 추출한 후, 이를 에틸아세테이트와 1:1의 비율로 분별깔때기에 넣어 섞은 다음, 상기 두 용액이 충분히 분리될 때까지 기다려서 에틸아세테이트 층만을 분리한 후, 이를 농축 및 동결건조하여 레드티트리 추출물을 수득하였다. According to an embodiment of the present invention, after extracting the washed red tea tree raw material with a 50% by weight aqueous ethanol solution, it is mixed with ethyl acetate in a ratio of 1:1 in a separatory funnel, and then when the two solutions are sufficiently separated After waiting until the ethyl acetate layer was separated, it was concentrated and lyophilized to obtain a red tea tree extract.

본 발명에 따른 레드티트리 발효물 제조방법에 있어서, 상기 발효시키는 단계는 단일 미생물을 이용한 단일 발효로 수행될 수 있고, 둘 이상의 다른 미생물을 동시에, 또는 순차적으로 이용한 2단 이상의 복합 발효로 수행될 수 있다.In the method for producing a fermented red tea tree according to the present invention, the fermenting step may be performed as a single fermentation using a single microorganism, and may be performed as two or more stages of complex fermentation using two or more different microorganisms simultaneously or sequentially. can

바람직하게는, 상기 제조된 추출물에 유산균으로 1차 발효 후, 효모로 2차 발효하여 수행될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.Preferably, after primary fermentation with lactic acid bacteria to the prepared extract, secondary fermentation with yeast may be performed, but is not limited thereto.

상기 유산균은 락토바실러스속 (Lactobacillus sp .) 또는 류코노스톡속(Leuconostoc sp .) 균주에서 선택될 수 있고, 상기 효모는 클루이베로미세스속(Kluyveromyces sp .) 또는 사카로미세스속(Saccharomyces sp .) 균주에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The lactic acid bacteria are Lactobacillus genus ( Lactobacillus sp . ) or Leuconostoc sp . It may be selected from strains, and the yeast is Kluyveromyces sp . ) or Saccharomyces genus ( Saccharomyces ). sp . ) may be selected from the strain, but is not limited thereto.

바람직하게는, 상기 유산균은 락토바실러스 사케이 NCK01(Lactobacillus sakei NCK01)(기탁번호: KFCC11856P)이고, 상기 효모는 클루이베로미세스 마르시아누스 NCK02(Kluyveromyces marxianus NCK02)(기탁번호: KFCC11857P)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.Preferably, the lactic acid bacterium is Lactobacillus sakei NCK01 (Accession number: KFCC11856P), and the yeast is Kluyveromyces NCK02 ( Kluyveromyces marxianus NCK02) (Accession No.: KFCC11857P), but is not limited thereto.

상기 균주는 직접 분리하거나 또는 분양받아 사용할 수 있다.The strain may be directly isolated or may be used after being sold.

본 발명은 상기의 제조방법에 따라 제조된 레드티트리 발효물을 제공한다.The present invention provides a fermented red tea tree prepared according to the above production method.

상기 발효물은 우수한 항염 활성을 가지는 바, 이를 항염증 조성물로 활용할 수 있다. 구체적으로는, 피부 진정 또는 피부 염증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물, 의약외품 조성물 및 피부 외용제 조성물로 활용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.Since the fermented product has excellent anti-inflammatory activity, it can be utilized as an anti-inflammatory composition. Specifically, it may be used as a cosmetic composition for skin soothing or prevention or improvement of skin inflammation, a quasi-drug composition, and a composition for external application to the skin, but is not limited thereto.

본 발명은 레드티트리 발효물을 유효성분으로 함유하는 피부 염증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.The present invention provides a cosmetic composition for preventing or improving skin inflammation containing a fermented red tea tree as an active ingredient.

상기 레드티트리 발효물은 우수한 항염증 활성을 가지는 바, 이는 피부 진정 또는 피부 염증 개선에 도움을 줄 수 있다.The red tea tree fermented product has excellent anti-inflammatory activity, which can help to soothe the skin or improve skin inflammation.

본 명세서에서, "염증 개선 또는 항염"은 염증을 억제하는 것을 의미하며, 상기 염증은 어떤 자극에 대한 생체 조직의 방어 반응의 하나로, 아토피 피부염, 여드름, 습진 등의 피부 질환과 관련이 있다. 염증 개선 효과를 통해 이러한 피부 질환의 개선 효과를 가질 수 있다.As used herein, "inflammation improvement or anti-inflammation" means suppressing inflammation, and the inflammation is one of the body's defense responses to certain stimuli, and is related to skin diseases such as atopic dermatitis, acne, and eczema. It may have an improving effect of such skin diseases through an inflammatory improving effect.

상기 레드티트리 발효물은 전체 화장료 조성물 100 중량부에 대하여 0.01 내지 10 중량부 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The red tea tree fermented product may be included in an amount of 0.01 to 10 parts by weight based on 100 parts by weight of the total cosmetic composition, but is not limited thereto.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 식품의약품안전처에 등록된 화장품 원료 리스트 및 ICID(국제화장품 원료집)에 등재되어 있는 성분 중에서 1종 이상을 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 화장료 조성물은 유기 용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 방향제, 계면활성제, 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제, 방부제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 염료 및 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 하나 이상 더 포함할 수 있다.The cosmetic composition according to the present invention may further include one or more of the ingredients listed in the list of cosmetic raw materials registered with the Ministry of Food and Drug Safety and ICID (International Cosmetic Ingredients). For example, the cosmetic composition may include an organic solvent, a solubilizer, a thickener, a gelling agent, an emollient, an antioxidant, a suspending agent, a stabilizer, a fragrance, a surfactant, an emulsifier, a filler, a sequestering agent, a preservative, a vitamin, a blocking agent, It may further comprise one or more adjuvants commonly used in the cosmetic field, such as wetting agents, dyes and pigments, hydrophilic or lipophilic actives, or any other ingredients commonly used in cosmetics.

상기 비타민은 수용성 또는 유용성 비타민을 포함할 수 있고, 상기 수용성 비타민은 수용성 비타민으로서 화장품에 배합 가능한 것으로, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 보다 바람직하게는 콜라겐 합성이 도움을 주는 비타민 C를 포함할 수 있다. 또한, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체(아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 포함될 수 있고, 상기 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득될 수 있다.The vitamin may include a water-soluble or oil-soluble vitamin, and the water-soluble vitamin is a water-soluble vitamin that can be formulated in cosmetics, preferably vitamin B1, vitamin B2, vitamin B6, pyridoxine, pyridoxine hydrochloride, vitamin B12, pantothenic acid, nicotinic acid, and nicotinic acid amide, folic acid, vitamin C, vitamin H, and the like, and more preferably vitamin C, which helps collagen synthesis. In addition, salts thereof (thiamine hydrochloride, sodium ascorbate salt, etc.) or derivatives (ascorbic acid-2-phosphate sodium salt, ascorbic acid-2-phosphate magnesium salt, etc.) may be included, and the water-soluble vitamin is a microorganism transformation method , can be obtained by a conventional method such as a purification method from a culture of a microorganism, an enzymatic method or a chemical synthesis method.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 화장수, 유액, 로션, 크림, 페이스트, 젤, 용액, 현탁액, 오일, 왁스, 팩, 파우더, 파운데이션, 스프레이, 계면활성제-함유 클렌징 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. The cosmetic composition according to the present invention may be prepared in any formulation conventionally prepared in the technical field to which the present invention pertains. For example, it may be formulated as a lotion, emulsion, lotion, cream, paste, gel, solution, suspension, oil, wax, pack, powder, foundation, spray, surfactant-containing cleansing, etc., but is not limited thereto. .

더욱 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 수렴 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 밀크 로션, 파우더, 에센스, 아이 크림, 선로션, 선크림, 메이크업 프라이머, 메이크업 베이스, 비비크림, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징 워터, 비누, 팩, 스틱상 제품, 밤(Balm) 타입 제품, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.More specifically, flexible lotion, nourishing lotion, astringent lotion, nourishing cream, massage cream, milk lotion, powder, essence, eye cream, sun lotion, sun cream, makeup primer, makeup base, BB cream, powder foundation, emulsion foundation , cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, soap, pack, stick product, balm type product, spray or powder formulation.

본 발명에 따른 화장료 조성물이 크림 또는 젤 제형인 경우에는 담체 성분으로 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등을 더 포함할 수 있다.When the cosmetic composition according to the present invention is a cream or gel formulation, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide may be further included as a carrier component. can

상기 화장료 조성물이 용액 또는 유탁액 제형인 경우에는 용매, 용매화제 또는 유탁화제로, 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸아세테이트, 벤질알코올, 프로필렌글리콜, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등을 더 포함할 수 있다.When the cosmetic composition is a solution or emulsion formulation, a solvent, solvating agent or emulsifying agent, water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, propylene glycol, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan fatty acid It may further include esters and the like.

상기 화장료 조성물이 현탁액 제형인 경우에는 담체 성분으로 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등을 더 포함할 수 있다.When the cosmetic composition is a suspension formulation, as a carrier component, a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystalline Cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracanth may be further included.

상기 화장료 조성물이 파우더 또는 스프레이 제형인 경우에는 담체 성분으로 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더를 더 포함할 수 있고, 특히 스프레이 제형인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 더 포함할 수 있다.When the cosmetic composition is in a powder or spray formulation, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be further included as a carrier component, and in particular, in the case of a spray formulation, additional chlorofluorohydrocarbon , may further include a propellant such as propane/butane or dimethyl ether.

상기 화장료 조성물이 계면활성제-함유 클렌징 제형인 경우에는 담체 성분으로 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등을 더 포함할 수 있다.When the cosmetic composition is a surfactant-containing cleansing formulation, aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyl taurate, sarcosinate, fatty acid amide as carrier components Ether sulfate, alkylamidobetaine, fatty alcohol, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, linoline derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters may be further included.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 단독 또는 중복으로 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.The cosmetic composition according to the present invention may be applied alone or in overlapping use, or may be used by overlapping application with other cosmetic compositions other than the present invention. In addition, the cosmetic composition according to the present invention can be used according to a conventional method of use, and the number of times of use can be changed according to the skin condition or taste of the user.

본 발명은 레드티트리 발효물을 유효성분으로 함유하는 피부 염증의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.The present invention provides a quasi-drug composition for preventing or improving skin inflammation containing a fermented red tea tree as an active ingredient.

본 명세서에서, "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미하는 것으로, 예를 들어 약사법에 따르면 의약외품이란 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람ㆍ동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 섬유ㆍ고무 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않으며, 기구 또는 기계가 아닌 것과 이와 유사한 것, 감염병을 막기 위한 살균ㆍ살충제 등이 이에 포함된다. 본 발명의 의약외품 조성물의 종류나 제형은 특별히 제한되지 아니하나, 예를 들면, 소독 청결제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제 비누, 핸드 워시, 가습기 충진제, 마스크, 연고제 또는 필터 충진제 등일 수 있다.As used herein, the term "quasi-drugs" refers to items with a milder action than pharmaceuticals among items used for the purpose of diagnosing, treating, improving, alleviating, treating or preventing diseases of humans or animals. For example, according to the Pharmaceutical Affairs Act, quasi-drugs Textiles and rubber products used for the treatment or prevention of diseases in humans and animals, which do not act directly on the human body, are not instruments or machines, and are similar to those that are not used for pharmaceutical purposes. This includes disinfectants and pesticides to prevent The type or formulation of the quasi-drug composition of the present invention is not particularly limited, but may be, for example, disinfectant cleaner, shower foam, gargrin, wet tissue, detergent soap, hand wash, humidifier filler, mask, ointment or filter filler.

본 발명의 조성물을 의약외품 조성물로 사용하는 경우, 상기 레드티트리 발효물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 성분과 함께 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.When the composition of the present invention is used as a quasi-drug composition, the red tea tree fermented product may be added as it is or may be appropriately used in combination with other quasi-drug ingredients according to a conventional method. The mixing amount of the active ingredient may be appropriately determined according to the purpose of use.

본 발명의 의약외품 조성물에 대하여 상기 화장료 조성물의 내용이 준용될 수 있다.The contents of the cosmetic composition may be applied mutatis mutandis to the quasi-drug composition of the present invention.

또한, 본 발명은 레드티트리 발효물을 유효성분으로 함유하는 피부 염증의 예방 또는 개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a composition for external application for skin for preventing or improving skin inflammation, comprising a fermented red tea tree as an active ingredient.

상기 피부 외용제 조성물은, 예를 들어, 연고, 로션, 가용화상, 현탁액, 에멀젼, 크림, 젤, 스프레이, 파프제, 경고제, 패치제 또는 물파스 등을 들 수 있지만, 이에 제한되지 않고 당업계에 주지된 어떠한 기제에도 배합될 수 있다. The composition for external application for skin may include, for example, ointment, lotion, solubilization, suspension, emulsion, cream, gel, spray, patch, warning agent, patch or water paste, but is not limited thereto. It may be formulated in any known base.

본 발명의 피부 외용제 조성물에 대하여 상기 화장료 조성물 또는 의약외품 조성물의 내용이 준용될 수 있다.With respect to the composition for external application for skin of the present invention, the contents of the cosmetic composition or quasi-drug composition may be applied mutatis mutandis.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.Hereinafter, examples will be described in detail to help the understanding of the present invention. However, the following examples are merely illustrative of the content of the present invention, and the scope of the present invention is not limited to the following examples. The embodiments of the present invention are provided to more completely explain the present invention to those of ordinary skill in the art.

<< 실시예Example 1> 1> 레드티트리red tea tree 발효물fermented product 제조 Produce

1. 원물의 준비1. Preparation of raw materials

레드티트리(Red teatree; Leptospermum scoparium)는 국내에서 따로 잎을 판매하는 곳이 없기에 네이버 쇼핑을 통한 호주매화 분재를 구매하여 사용하였다.Red teatree ( Leptospermum ) scoparium ) was used by purchasing Australian plum bonsai through Naver shopping since there is no place that sells leaves separately in Korea.

2. 균주의 준비2. Preparation of strains

유용한 기능을 하는 유산균을 분리하기 위해, 먼저 케피어 요구르트 시료를 10진 희석법으로 10-2, 10-3, 10-4, 10-5 및 10-6으로 희석한 다음, BL 배지 [프로테오스 펩톤(Proteose peptone) No.3 10g/L, 육 추출물(Beef extract) 10g/L, 효모 추출물(Yeast extract) 5g/L, 덱스트로스(Dextrose) 20g/L, 폴리소르베이트(Polysorbate) 80 1g/L, 시트르산 암모늄(Ammonium citrate) 2g/L, 아세트산나트륨(Sodium acetate) 5g/L, 황산마그네슘(Magnesium sulfate) 0.1g/L, 황산망간(Manganese sulfate) 0.05g/L, 이인산칼륨(Dipotassium phosphate) 2g/L, agar 15.0g/L, Difco, USA]에서 유산균을 분리하였고, SDB 배지 (Peptic Digest of Animal Tissue 5g/L, Pancreatic Digest of Casein 5g/L, Dextrose 20g/L, Difco, USA)에 도말하여 효모를 분리하였으며, 주변에 환을 형성하는 콜로니(colony)를 유산균 속 후보군으로 분리시켰다. To isolate lactic acid bacteria with useful functions, first, kefir yogurt samples were diluted to 10 -2 , 10 -3 , 10 -4 , 10 -5 and 10 -6 by decimal dilution, and then BL medium [proteose Proteose peptone No.3 10g/L, Beef extract 10g/L, Yeast extract 5g/L, Dextrose 20g/L, Polysorbate 80 1g/L L, Ammonium citrate 2g/L, Sodium acetate 5g/L, Magnesium sulfate 0.1g/L, Manganese sulfate 0.05g/L, Dipotassium phosphate ) 2g/L, agar 15.0g/L, Difco, USA], and SDB medium (Peptic Digest of Animal Tissue 5g/L, Pancreatic Digest of Casein 5g/L, Dextrose 20g/L, Difco, USA) The yeast was isolated by smearing, and colonies forming a ring around were isolated as candidate groups of the lactic acid bacteria genus.

3. 선발된 균주의 16s 3. 16s of the selected strain rRNArRNA 염기서열 분석 sequencing

MRS 배지로 키워진 유산균주는 16s rRNA sequence 분석을 수행하여 염기서열을 분석하였다. Chromosomal DNA extraction을 실시하여 획득한 gDNA로부터 Universal primer인 27F (5' AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG 3')와 1492R(5' TAC GGY TAC CTT GTT ACG ACTT 3')을 이용하여 PCR을 수행하여 염기서열을 분석하였다. The lactic acid strains grown in MRS medium were analyzed for nucleotide sequences by performing 16s rRNA sequence analysis. From the gDNA obtained by chromosomal DNA extraction, PCR was performed using the universal primers 27F (5' AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG 3') and 1492R (5' TAC GGY TAC CTT GTT ACG ACTT 3'). The sequence was analyzed.

SDA 배지로 키워진 효모는 ITS sequence 분석을 수행하여 염기서열을 분석하였다. Chromosomal DNA extraction을 실시하여 획득한 gDNA로부터 Universal primer인 ITS1 (5’TCC GTA GGT GAA CCT GCG G 3’)와 ITS4 (5’TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC 3’) 을 이용하여 얻어진 결과를 바탕으로 상동성 검사는 NCBI에서 제공하는 BLAST search를 통하여 수행하였다. Yeast grown in SDA medium was subjected to ITS sequence analysis to analyze the nucleotide sequence. Based on the results obtained using the universal primers ITS1 (5'TCC GTA GGT GAA CCT GCG G 3') and ITS4 (5'TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC 3') from gDNA obtained through chromosomal DNA extraction, The homology test was performed through BLAST search provided by NCBI.

하기 표 1은 본 실시예에서 사용된 프라이머 목록이다.Table 1 below is a list of primers used in this Example.

프라이머primer 서열order 27F27F 5' AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG 3'5' AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG 3' 1492R1492R 5' TAC GGY TAC CTT GTT ACG ACTT 3'5' TAC GGY TAC CTT GTT ACG ACTT 3' ITS1ITS1 5’TCC GTA GGT GAA CCT GCG G 3’5’TCC GTA GGT GAA CCT GCG G 3’ ITS4ITS4 5’TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC 3’5’TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC 3’

그 결과, 락토바실러스(Lactobacillus) 속(genus)에 속하는 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei)와 99.96%의 유사성을 나타내었으며 클루이베로미세스 마르시아누스 (Kluyveromyces marxianus)와 99.69%의 유사성을 나타내었다.As a result, Lactobacillus ( Lactobacillus ) belonging to the genus Lactobacillus sakei ( Lactobacillus sakei ) and showed 99.96% similarity and Kluyveromyces marxianus ( Kluyveromyces marxianus ) and 99.69% similarity.

- [기탁번호 KFCC11856P] 락토바실러스 사케이 NCK01 (Lactobacillus sakei NCK01)- [Accession No. KFCC11856P] Lactobacillus sakei NCK01 ( Lactobacillus sakei NCK01)

- [기탁번호 KFCC11857P] 클루이베로미세스 마르시아누스 NCK02 (Kluyveromyces marxianus NCK02)- [Accession No. KFCC11857P] Kluyveromyces marxianus NCK02

4. 추출물 제조4. Extraction Preparation

흐르는 물에 흙과 먼지를 제거한 후, 50% 에탄올에서 4 ~ 8℃에서 1 ~ 5일 사이로 추출하며 에틸아세테이트(ethylacetate, EA)를 50% 에탄올 추출물과 1:1로 분별깔때기를 이용하여 섞어준 뒤, 오버나잇하여 충분히 분리될 때까지 기다렸다. 분리된 EA층만 분리, 농축하여 동결건조를 진행하였다.After removing soil and dust in running water, extract in 50% ethanol at 4 to 8℃ for 1 to 5 days, and mix ethylacetate (EA) with 50% ethanol extract 1:1 using a separatory funnel. Afterwards, I waited overnight until they were sufficiently separated. Only the separated EA layer was separated, concentrated, and freeze-dried.

5. 균주 발효를 통한 5. Through strain fermentation 발효물fermented product 제조 Produce

1) 단일 균주 발효1) Single-Strain Fermentation

유산균은 락토바실러스 사케이 NCK01 (기탁번호: KFCC11856P)를 사용하였고, 먼저 혐기 조건하에 30 ~ 37℃에서 MRS broth(DB)를 사용하여 2 ~ 3일 동안 전 배양을 진행하였다. 효모추출물 5g/L, 가수분해된 소이 펩톤(hydrolyzed soy peptone, HSP) 10g/L, 덱스트로스 20/L, 아세트산나트륨 1g/L 및 염화나트륨 5g/L을 넣고 배지를 제조하고, 레드티트리 동결건조 파우더를 1 ~ 3% 내외로 접종하여 멸균 후 상기 전 배양한 균주를 넣고 30 ~ 37℃에서 3 ~ 7일간 배양하였다. As the lactic acid bacteria, Lactobacillus Sakei NCK01 (Accession No.: KFCC11856P) was used, and first, pre-culture was performed for 2-3 days using MRS broth (DB) at 30-37°C under anaerobic conditions. Yeast extract 5g/L, hydrolyzed soy peptone (HSP) 10g/L, dextrose 20/L, sodium acetate 1g/L and sodium chloride 5g/L to prepare a medium, and freeze-dried red tea tree After sterilization by inoculating the powder at about 1 to 3%, the pre-cultured strain was added and cultured at 30 to 37° C. for 3 to 7 days.

효모는 클루이베로미세스 마르시아누스 NCK02 (기탁번호: KFCC11857P)를 사용하였고, 먼저 20 ~ 27℃에서 YM broth(DB)를 사용하여 3 ~ 7일 동안 전 배양을 진행하였다. 효모추출물 20g/L, 가수분해된 소이 펩톤 (HSP) 5g/L, 및 덱스트로스 10/L을 넣고 배지를 제조하고, 레드티트리 동결건조 파우더를 1 ~ 3% 내외로 접종하여 멸균 후 전배양한 균주를 넣고 20 ~ 27℃에서 7 ~ 10일 배양하였다. The yeast Kluyveromyces marcianus NCK02 (Accession No.: KFCC11857P) was used, and the pre-culture was performed for 3-7 days using YM broth (DB) at 20-27°C first. Prepare a medium by adding yeast extract 20g/L, hydrolyzed soy peptone (HSP) 5g/L, and dextrose 10/L, and inoculate 1-3% freeze-dried powder of red tea tree to sterilize and then pre-culture One strain was added and cultured at 20 to 27°C for 7 to 10 days.

2) 복합 균주 발효 (2단 발효)2) Complex strain fermentation (two-stage fermentation)

상기 두 균주로 복합 발효하는 경우, 단일 균주 배양 시 사용한 배지의 조성 및 온도는 동일한 조건으로 진행하였다.In the case of complex fermentation with the two strains, the composition and temperature of the medium used for culturing a single strain were conducted under the same conditions.

(1) 1차 락토바실러스 발효 후 2차 클루이베로미세스 발효하는 경우, (2) 1차 클루이베로미세스 발효 후 2차 락토바실러스 발효하는 경우에 대해 온도 20 ~ 40℃ 등의 배양 조건 및 효능테스트 결과, (1)의 복합 발효 조건을 선택하였으며, 상세 발효조건은 단일 균주 발효조건과 동일하게 진행하였다.(1) In the case of secondary Kluyveromyces fermentation after primary Lactobacillus fermentation, (2) In case of secondary Lactobacillus fermentation after primary Kluyveromyces fermentation, culture conditions and efficacy test results such as temperature 20 ~ 40℃ , the complex fermentation conditions of (1) were selected, and the detailed fermentation conditions were the same as the single strain fermentation conditions.

<< 실험예Experimental example 1> 세포 독성 확인 : 1> Check for cytotoxicity: WSTWST assay assay

상기 실시예 1에 따라 제조된 레드티트리 발효물(단일 균주 발효 및 2단 발효)이 염증 악화 등과 같은 자극 없이 면역 활성 효과를 나타낼 수 있는지를 확인하기 위해, 대식세포(RAW 264.7, ATCC)에 대한 독성을 측정하였다.In order to confirm that the red tea tree fermented product (single strain fermentation and two-stage fermentation) prepared according to Example 1 can exhibit an immune activation effect without stimulation such as exacerbation of inflammation, macrophages (RAW 264.7, ATCC) Toxicity was measured.

상기 발효물을 농도별로 처리하고 48시간 이후에 DMEM 배지에 10% EZ-Cytox (대일, 99-EZ3000)를 혼합하여 시료 처리한 배지를 suction 후 1 well당 100μL씩 분주하였다. 2시간 배양 후 마이크로플레이트 리더기(Microplate reader; Biotek, Synergy HT)로 450nm 파장에서 흡광도를 측정하였다 세포 생존율은 시료를 처리하지 않은 처리군(무처리군)과 비교하여 계산하였으며 계산식은 하기 식 1과 같다. The fermented product was treated by concentration and after 48 hours, 10% EZ-Cytox (Dail, 99-EZ3000) was mixed in DMEM medium, and the sample-treated medium was dispensed by 100 μL per well after suction. After incubation for 2 hours, absorbance was measured at a wavelength of 450 nm with a microplate reader (Biotek, Synergy HT). Cell viability was calculated by comparing the sample with the untreated group (untreated group). same.

<식 1><Equation 1>

세포 생존율 (%) = (시료 처리군의 흡광도 / 무처리군의 흡광도) * 100Cell viability (%) = (absorbance in the sample treated group / absorbance in the untreated group) * 100

그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 레드티트리 2단 발효물, 레드티트리 락토바실러스 단일 균주 발효물 및 레드티트리 클루이베로미세스 단일 균주 발효물의 경우, 모든 세포에서 세포 독성이 나타나지 않았으며 화장품에 안전한 소재로 사용할 수 있음을 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 3, in the case of a two-stage fermented product of Red Tea Tree, a single-strain fermented product of Red Tea Tree Lactobacillus, and a single-strain fermented product of Red Tea Tree Kluyveromyces, cytotoxicity was not observed in all cells, and cosmetics It was confirmed that it can be used as a safe material for

<< 실험예Experimental example 2> 항염 활성 확인 2> Check anti-inflammatory activity

1. NO 분석1. NO Analysis

마우스의 대식세포인 RAW 264.7을 5×105 cells/mL 농도로 96 well plate에 분주하고, 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양시켰다. 이후 세포 RAW 264.7에 LPS (Sigma, St. Louis, MOLogan, UT, USA) 1.5μg/mL을 처리하고, 다시 레드티트리 2단 발효물 또는 단일 균주 발효물을 농도별로 처리하여 24시간 동안 배양하였다. RAW 264.7, a mouse macrophage, was dispensed in a 96-well plate at a concentration of 5×10 5 cells/mL, and cultured in a 5% CO 2 incubator for 24 hours. After that, the cells RAW 264.7 were treated with 1.5 μg/mL of LPS (Sigma, St. Louis, MOLogan, UT, USA), and the red tea tree two-stage fermented product or single strain fermented product was treated by concentration and cultured for 24 hours. .

다음으로 배양액의 상층액과 그리스 시약(Griess reagent, Sigma)을 동량으로 반응시킨 후, ELISA reader로 540nm에서 흡광도를 측정하고, 산화질소 생성률을 백분율로 환산하였다. 질산이온(NO2 -)은 아질산염(Nitrite)을 표준용액으로 하여 측정하였다. 항염 효과가 있는 것으로 알려진 L-NMMA 50μM을 양성 대조군으로 사용하여 처리한 후 NO2 - 생성 농도를 비교하였다. Next, the supernatant of the culture medium and a grease reagent (Griess reagent, Sigma) were reacted in the same amount, absorbance was measured at 540 nm with an ELISA reader, and the nitric oxide production rate was converted into a percentage. Nitrate ions (NO 2 ) were measured using nitrite as a standard solution. After treatment with 50 μM of L-NMMA, which is known to have anti-inflammatory effects, as a positive control, NO 2 production concentrations were compared.

그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 레드티트리 단일 균주 발효물은 NO 생성이 4% 처리 시 26.00%, 18.64%였던 것에 반해, 레드티트리 2단 발효물의 경우 4% 처리 시 NO 생성이 15.03%를 나타내었다. 따라서, 단일 균주 발효물 대비 2단 발효물이 항염 효과가 증진된 것을 확인할 수 있다.As a result, as shown in FIG. 4 , in the case of the red tea tree single strain fermented product, NO production was 26.00% and 18.64% when 4% treatment was performed, whereas in the case of the red tea tree double-stage fermented product, NO production was 15.03 when treated with 4%. % was shown. Therefore, it can be confirmed that the anti-inflammatory effect of the two-stage fermented product compared to the single strain fermented product is enhanced.

2. IL-2. IL- & IL-4 분석 & IL-4 Assay

대식세포 RAW264.7는 혈구계(hemacytometer)를 이용하여 계수한 후, 24 웰 플레이트에 2×105 세포/웰 농도로 분주하였다. Macrophages RAW264.7 were counted using a hemocytometer, and then aliquoted at a concentration of 2×10 5 cells/well in a 24-well plate.

24시간 동안 DMEM 배지 (10% 우태아혈청, 5% 페니실린/스트렙토마이신)를 넣고 배양한 후, LPS (L2630, sigma) 1μg/mL과 레드티트리 2단 발효물, 레드티트리 단일 균주 발효물 및 L-NMMA (M7033, sigma)을 각각 DMEM 배지 혼합하여 동시에 처리하였다. 레드티트리 2단발효물 또는 단일 균주 발효물을 0 ~ 4% 처리하였고 L-NMMA은 양성대조군으로 100nM 처리하였다. 시료처리 20시간 후 배양액을 회수한 후 IL-1b ELISA (MLB00C, R&D systems), IL-4 ELISA (M4000B, R&D systems)를 진행하였다. IL-1b ELISA, IL-4 ELISA는 제조사에서 제공한 프로토콜을 이용하였다. After culturing in DMEM medium (10% fetal bovine serum, 5% penicillin/streptomycin) for 24 hours, LPS (L2630, sigma) 1μg/mL and red tea tree double fermented product, red tea tree single strain fermented product and L-NMMA (M7033, sigma) were mixed with DMEM medium and treated simultaneously. Red tea tree two-stage fermented product or single strain fermented product was treated with 0 to 4%, and L-NMMA was treated with 100 nM as a positive control. After 20 hours of sample treatment, the culture medium was recovered and IL-1b ELISA (MLB00C, R&D systems) and IL-4 ELISA (M4000B, R&D systems) were performed. For IL-1b ELISA and IL-4 ELISA, protocols provided by the manufacturer were used.

그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이, 레드티트리/락토바실러스 단일 발효물의 경우 최대 4% 처리 시 대조군(CTL) 대비 71.11%(IL-1β), 76.54%(IL-4)로 감소되었으며, 레드티트리/클루이베로미세스 단일 발효물의 경우 최대 4% 처리 시 CTL 대비 68.11%(IL-1β), 72.22%(IL-4)로 감소되었다. 또한, 레드티트리/2단발효물의 경우 63.49%(IL-1β), 71.24%(IL-4)로 IL-1β는 단일발효 대비 최대 8%가량 감소되었으나, IL-4는 약 1%가량 감소된 효능을 보인 것으로 나타났다. As a result, as shown in Figure 5, in the case of a single fermentation of Red Tea Tree / Lactobacillus, it was reduced to 71.11% (IL-1β), 76.54% (IL-4) compared to the control (CTL) when treated with up to 4%, red Tea tree / Kluyveromyces single ferment was reduced to 68.11% (IL-1β) and 72.22% (IL-4) compared to CTL when treated with up to 4%. In addition, in the case of red tea tree/2-stage fermented product, IL-1β was reduced by up to 8% compared to single fermentation, with 63.49% (IL-1β) and 71.24% (IL-4), while IL-4 decreased by about 1% was shown to be effective.

<< 제조예production example 1> 1> 락토바실로스Lactobacillus 사케이sake (기탁번호: (Accession number: KFCC11856PKFCC11856P ) 및 ) and 클루이베로미세스Kluyveromyces 마르시아누스Marcianus (기탁번호: (Accession number: KFCC11857PKFCC11857P ) 균을 이용한 ) using bacteria 레드티트리red tea tree 발효물을fermented 함유contain 하는 화장료의 제조manufacture of cosmetics

(1) 화장수 제조(1) manufacture of lotion

하기 표 2에 기재된 함량의 성분을 사용하여 통상의 방법에 의하여 화장수를 제조하였다.A lotion was prepared by a conventional method using the ingredients in the content shown in Table 2 below.

성분ingredient 함량(중량%)content (wt%) 레드티트리 발효물Red Tea Tree Fermented Product 3.003.00 히드록시에틸렌셀룰로오스(2% 수용액)Hydroxyethylene cellulose (2% aqueous solution) 12.0012.00 잔탄검(2% 수용액)Xanthan Gum (2% aqueous solution) 2.002.00 1,3-부틸렌글라이콜1,3-butylene glycol 6.006.00 글리세린glycerin 4.004.00 히알루론산나트륨(1% 수용액)Sodium hyaluronate (1% aqueous solution) 5.005.00 정제수Purified water 68.0068.00 합계Sum 100.00100.00

(2) 로션 제조(2) lotion manufacturing

하기 표 3에 기재된 함량의 성분을 적용하여 통상의 방법에 의하여 로션을 제조하였다.A lotion was prepared by a conventional method by applying the ingredients in the content shown in Table 3 below.

성분ingredient 함량(중량%)content (wt%) 레드티트리 발효물Red Tea Tree Fermented Product 3.003.00 아스코르빈산-2-인산마그네슘염Ascorbic acid-2-phosphate magnesium salt 1.001.00 수용성 콜라겐 (1% 수용액)Water-soluble collagen (1% aqueous solution) 1.001.00 시트르산나트륨sodium citrate 0.010.01 시트르산citric acid 0.050.05 1,3-부틸렌글리콜1,3-butylene glycol 3.003.00 정제수Purified water 91.9491.94 합계Sum 100100

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 즉, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다.As the specific parts of the present invention have been described in detail above, for those of ordinary skill in the art, it is clear that these specific descriptions are only preferred embodiments, and the scope of the present invention is not limited thereby. Do. That is, the substantial scope of the present invention is defined by the appended claims and their equivalents.

한국미생물보존센터(국내)Korea Microorganism Conservation Center (domestic) KFCC11856PKFCC11856P 2020040920200409 한국미생물보존센터(국내)Korea Microorganism Conservation Center (domestic) KFCC11857PKFCC11857P 2020040920200409

Claims (10)

레드티트리(Leptospermum scoparium) 추출물을 제조하는 단계; 및
상기 제조된 추출물을 유산균 및 효모로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 미생물로 발효시키는 단계;를 포함하고,
상기 발효시키는 단계는,
상기 제조된 레드티트리 추출물에 유산균으로 1차 발효 후, 효모로 2차 발효하여 수행되는 것이고,
상기 유산균은 락토바실러스 사케이 NCK01(Lactobacillus sakei NCK01)이고, 상기 효모는 클루이베로미세스 마르시아누스 NCK02(Kluyveromyces marxianus NCK02)인 것을 특징으로 하는, 레드티트리 발효물의 제조방법.
Red tea tree ( Leptospermum scoparium ) Preparing an extract; and
Including; fermenting the prepared extract with one or more microorganisms selected from the group consisting of lactic acid bacteria and yeast;
The fermenting step is
It is performed by primary fermentation with lactic acid bacteria on the red tea tree extract prepared above, and secondary fermentation with yeast,
The lactic acid bacteria is Lactobacillus sakei NCK01 ( Lactobacillus sakei NCK01), and the yeast is Kluyveromyces marxianus NCK02 ( Kluyveromyces marxianus NCK02), characterized in that the red tea tree fermented product manufacturing method.
제 1 항에 있어서,
상기 레드티트리 추출물을 제조하는 단계는,
레드티트리를 에탄올 또는 에탄올 수용액으로 추출하여 레드티트리 에탄올 추출물을 제조하는 단계;
상기 제조된 레드티트리 에탄올 추출물과 에틸아세테이트(EA)를 1:(0.5 내지 2)의 중량비로 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 및
상기 제조된 혼합물에서 에틸아세테이트 층을 분리하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는, 제조방법.
The method of claim 1,
The step of preparing the red tea tree extract,
Preparing an ethanol extract of red tea tree by extracting the red tea tree with ethanol or an aqueous ethanol solution;
preparing a mixture by mixing the prepared red tea tree ethanol extract and ethyl acetate (EA) in a weight ratio of 1: (0.5 to 2); and
Separating the ethyl acetate layer from the prepared mixture; characterized in that it comprises a, manufacturing method.
제 2 항에 있어서,
상기 레드티트리 에탄올 추출물은,
상기 레드티트리를 30 내지 70 중량% 에탄올 수용액으로 추출한 것을 특징으로 하는, 제조방법.
3. The method of claim 2,
The red tea tree ethanol extract,
A manufacturing method, characterized in that the red tea tree is extracted with 30 to 70% by weight of an aqueous ethanol solution.
삭제delete 삭제delete 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 따라 제조된 레드티트리 발효물.A fermented red tea tree prepared according to any one of claims 1 to 3. 제 6 항에 있어서,
상기 레드티트리 발효물은,
항염 활성을 가지는 것을 특징으로 하는, 레드티트리 발효물.
7. The method of claim 6,
The red tea tree fermented product,
Red tea tree fermented product, characterized in that it has anti-inflammatory activity.
제 6 항에 따른 레드티트리 발효물을 유효성분으로 함유하는 피부 염증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.A cosmetic composition for preventing or improving skin inflammation comprising the red tea tree fermented product according to claim 6 as an active ingredient. 제 6 항에 따른 레드티트리 발효물을 유효성분으로 함유하는 피부 염증의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물.A quasi-drug composition for preventing or improving skin inflammation, comprising the red tea tree fermented product according to claim 6 as an active ingredient. 제 6 항에 따른 레드티트리 발효물을 유효성분으로 함유하는 피부 염증의 예방 또는 개선용 피부 외용제 조성물.An external composition for skin application for preventing or improving skin inflammation, comprising the red tea tree fermented product according to claim 6 as an active ingredient.
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