KR102395725B1

KR102395725B1 - 울릉국화 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화용 피부 외용제 조성물

Info

Publication number: KR102395725B1
Application number: KR1020160039152A
Authority: KR
Inventors: 황경환; 박녹현; 박준성
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2016-03-31
Filing date: 2016-03-31
Publication date: 2022-05-10
Also published as: TW201737896A; TWI719186B; WO2017171480A1; KR20170112294A

Abstract

본 발명은 울릉국화 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

Description

울릉국화 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화용 피부 외용제 조성물 {SKIN EXTERNAL COMPOSITION FOR ANTI-AGING COMPRISING CHRYSANTHEMUM ZAWADSKII HERB. VAR. LUCIDUM (NAKAI) T.LEE}

본 발명은 항노화용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

국화속 (菊花屬, Chrysanthemum)은 국화과에 속하는 다년생 식물군으로서, 다양한 품종이 존재한다. 국화 품종에 대한 구체적인 연구가 광범위하게 진행되고 있음에도, 품종의 다양성으로 인하여, 개개의 국화 품종 전부에 대하여 구체적인 성분 및 그에 따른 효능이 규명되지 않은 실정이다.

구절초 (Chrysanthemum zawadskii)는 국화속에 속하는 여러해살이풀로서, 높이는 50센티미터 정도이며, 9~11월에 붉은 색이나 흰색의 꽃이 줄기 끝에 피고 열매는 수과를 맺는다.

한편, 울릉국화 (Chrysanthemum zawadskii HERB. var. lucidum (NAKAI) T. LEE)는 다년생 초본으로 원산지는 한국이고 한국특산식물로 울릉도의 바닷가에서 서식하는 희귀식물 중 하나이다. 구절초(Chrysanthemum zawadskii)와 비슷하게 생겼으나 섬에서 자라온 탓인지 잎에 윤채가 있고 잎의 갈래가 더 많이 갈라진 특징을 가지고 있어 학명에서도 이의 특색을 택하였다.

울릉국화는 구절초와 구별이 어려우며, 서식지가 울릉도에 제한되어 있어, 구절초와 달리 울릉국화의 성분 및 그 활성에 대한 연구는 국내·외에서 거의 진행되고 있지 않는 실정이며, 특히 피부에 대한 활성은 구체적으로 알려진 바가 없는 실정이다.

한국 공개특허공보 제10-2007-0072359호 (2007.07.04)

본 발명은 종래에 그 활성이 구체적으로 알려진 바가 없는 울릉국화 추출물의 함유함으로써, 피부에 대한 우수한 효과를 나타내는 피부 외용제를 제공하고 한다.

본 발명은 울릉국화 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화용 피부 외용제 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 울릉국화 추출물을 유효성분으로 함유함으로써, 우수한 항노화 효과를 제공하며, 구체적으로, 우수한 피부 주름 개선 효과, 피부 탄력 개선 효과 및 피부 세포 재생 효과를 제공한다.

도 1은 제조예 1에서 수득한 울릉국화 추출물, 비교제조예 1에서 수득한 구절초 추출물 및 비교제조예 2에서 수득한 감국 추출물에 대하여, HPLC (High-performance liquid chromatography)의 시간에 따른 분석 결과 나타낸 것으로, 가로축은 시간, 세로축은 검출 시간에 따른 검출 상대량으로 단위는 AU (arbitrary unit)이다.

이하, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물에 대하여 자세하게 설명한다.

본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 울릉국화 추출물을 유효성분으로 함유한다.

본 명세서에 있어서, 울릉국화는 국화과의 다년생 초본으로 원산지는 한국의 울릉도에 서식하는 고유종으로서, 그 학명이 Chrysanthemum zawadskii HERB. var. lucidum (NAKAI) T. LEE인 식물을 의미한다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 울릉국화 추출물은 건조된 울릉국화를 물, 유기용매 또는 물과 유기용매의 혼합용매로 추출한다. 상기 유기 용매는 극성 용매, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올 등의 저급 알코올, 에틸 아세테이트, 디에틸 에테르, 아세톤 또는 에틸메틸케톤일 수 있다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 울릉국화 추출물의 제조 시 울릉국화 에 여과 및 감압 농축을 사용하여 추출할 수 있으며, 또한, 본 발명 기술분야에 통상적으로 알려져 있는 방법을 적의 선정 및 응용하여 추출할 수 있다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 울릉국화 추출물은 울릉국화를 침출, 전출하여 수득하는 것이거나, 수득된 추출물의 일부 또는 전부를 농축하여 수득하는 것이거나, 농축된 추출물을 다시 건조시켜 수득한 것이거나, 침제법, 전제법, 정기법, 유동엑스법 또는 이들 방법의 조합으로 수득한 것이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 울릉국화 추출물은 울릉국화의 전 성분을 포함하거나 유효 성분인 화합물을 포함하는 것이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 울릉국화 추출물의 함량은 조성물 총 중량에 대하여, 0.001 중량% 내지 20.0 중량%이며, 바람직하게는 0.01 중량% 내지 10.0중량%이다. 상기 울릉국화 추출물의 함량이 0.001 중량% 미만이면 항노화 효과가 미약하며, 20.0 중량% 초과이면 조성물의 안정성 및 제형의 제조 용이성이 저하된다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 조성물은 피부 주름 개선용이다. 구체적으로 상기 조성물은 신체 내의 콜라게나제의 발현을 더욱 효과적으로 억제함으로써, 피부 내의 콜라겐 분해를 감소시키는 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 조성물은 피부 탄력 개선용이다. 구체적으로 상기 조성물은 신체 내의 콜라게나제의 발현을 더욱 효과적으로 억제함으로써, 피부 내의 콜라겐 분해를 감소시키는 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 조성물은 피부 세포 재생용이다. 구체적으로 상기 조성물은 진피섬유아세포성장인자 발현 촉진용이다.

본 발명의 조성물은 피부 외용제 조성물, 특히 화장료 조성물로서 제형화될 수 있으며, 화장품학 또는 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유하여 제형화될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 국소 적용에 적합한 모든 제형으로 제공될 수 있으며, 예를 들어 용액, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 유상에 수상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 고체, 겔, 분말, 페이스트, 포말(foam) 또는 에어로졸 조성물의 제형으로 제공될 수 있다. 이러한 제형의 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 조성물은 상기한 물질 이외에 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분들을 포함할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 조성물은 보습제, 에몰리언트제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및 무기 안료, 향료, 냉감제 또는 제한제를 더 포함할 수 있다. 상기 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 20.0 중량%, 구체적으로 0.01 중량% 내지 10.0 중량%일 수 있다.

이하, 실시예를 들어 본 발명을 보다 자세하게 설명한다. 그러나 이러한 실시예들은 본 발명을 구체적으로 설명하려는 것일 뿐, 이러한 실시예에 의하여 본 발명의 권리범위가 제한되는 것은 아니다.

<제조예 1> 울릉국화 추출물의 제조

울릉국화의 전초를 정제수로 세척한 후 일광 건조를 실시하였다. 건조된 울릉국화를 분쇄한 울릉국화의 분쇄물 100g에 1L의 70% 에탄올을 첨가한 후, 이를 환류 추출하고 여과하였으며, 이후 이를 40～45℃에서 감압 농축하여 건조 상태의 울릉국화 추출물 18.4g을 수득하였다.

<비교제조예 1> 구절초 추출물의 제조

상기 제조예 1에서 울릉국화 대신에 구절초를 사용한 것을 제외하고는 상기 제조예 1과 동일한 방법으로 제조하여 건조 상태의 구절초 추출물 17.7g을 수득하였다.

<비교제조예 2> 감국 추출물의 제조

상기 제조예 1에서 울릉국화 대신에 감국을 사용한 것을 제외하고는 상기 제조예 1과 동일한 방법으로 제조하여 건조 상태의 감국 추출물 17.1g을 수득하였다.

<시험예 1> 진피섬유아세포성장인자 발현 활성 측정

상기 제조예 1에서 수득한 울릉국화 추출물, 비교제조예 1에서 제조한 구절초 추출물 및 비교제조예 2에서 제조한 감국 추출물 각각을 5중량%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Media) 배지에 첨가하고 (단, 비처리군은 첨가하지 않음.), 각각의 배지에서 진피섬유아세포를 배양한 후, 진피섬유아세포성장인자 발현량을 측정하여 비교하였다.

2.5중량%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM 배지가 들어 있는 96-웰 플레이트 배양기(96-well microtiter plate)에 인간의 섬유아세포를 (Cascade Biologics사)(Portland, OR, U.S.A.) 5,000 세포/웰(well)이 되도록 넣고, 90% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그 후 무혈청 DMEM 배지에서 24시간 배양한 다음, 무혈청 DMEM 배지에 녹여진 상기 제조예 1에서 수득한 울릉국화 추출물과 비교제조예 1의 구절초 추출물 및 비교제조예 2의 감국 추출물 50 ppm을 24시간 동안 처리하였다. 양성대조군은 무혈청 DMEM 배지를 2.5중량%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM 배지로 교체 후 24시간 동안 배양 후, 세포배양액을 채취하였다.

진피섬유아세포성장인자 측정기구 (미국 알엔디시스템 사)를 이용하여 채취한 세포배양액의 진피섬유아세포성장인자 발현 정도를 측정하였다. 먼저 1차 진피섬유아세포성장인자 항체가 균일하게 도포된 96-웰 플레이트에 채취된 세포 배양액을 넣고 3시간 동안 항원-항체 반응을 항온조(36℃)에서 실시하였다.

4시간 후 발색단이 결합된 2차 콜라겐 항체를 96-웰 플레이트에 넣고 다시 15분간 반응시켰다. 15분 후, 발색 유발물질을 넣어 실온에서 15분간 발색시키고, 다시 1M 황산을 넣어 반응 (발색)을 중지시키면 반응액의 색깔은 파란색을 띠게 되는데, 반응의 진행 정도에 따라 파란색의 정도가 다르게 나타남을 확인하였다.

파란색을 띠는 96-웰 플레이트의 흡광도를 흡광계를 이용하여 450nm에서 측정하였고, 하기 수학식 1에 의해 진피섬유아세포성장인자 발현 정도를 계산하였다. 이때 조성물을 처리하지 않은 군의 채취된 세포배양액의 반응 흡광도를 대조군으로 하였다. 즉, 비처리군에서의 진피섬유아세포성장인자의 발현 정도를 100으로 하고, 이에 대비하여 시험물질을 처리한 군에서의 진피섬유아세포성장인자의 발현 정도를 구하였으며, 그 결과는 하기 표 1에 나타내었다.

[수학식 1]

시험물질	진피섬유아세포성장인자 발현 정도(%)
비처리군	100
2.5중량%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM 배지	193
울릉국화 추출물 (제조예 1)	186
구절초 추출물 (비교제조예 1)	127
감국 추출물 (비교제조예 2)	121

상기 표 1에서 확인할 수 있는 바와 같이 제조예 1의 울릉국화 추출물은 비교제조예 1의 구절초 추출물 및 비교제조예 2의 감국 추출물과 비교하였을 때 시험관 내(in vitro)에서 진피섬유아세포성장인자 발현을 효과적으로 증가시켰다. 따라서, 본 발명에 따른 울릉국화 추출물 또는 이를 함유하는 조성물은 피부 세포 재생 효과가 우수함을 확인할 수 있다.

<시험예 2> 콜라게나제의 발현 활성의 측정

상기 제조예 1에서 수득한 울릉국화 추출물, 비교제조예 1에서 수득한 구절초 추출물 및 비교제조예 2에서 수득한 감국 추출물 각각의 콜라게나제 생성 억제능을 토코페롤 (Tocopherol) 및 EGCG (Epigallocatechin gallate, 갈산염-3-에피갈로카테킨)와 비교하여 측정하였다. 토코페롤 및 EGCG는 항산화물질로서 피부의 표피 세포를 재생시켜 피부의 노화를 방지하는 기능이 있는 것으로 알려진 물질이다.

시험은 2.5%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM 배지가 들어 있는 96-웰 플레이트 배양기에 인간의 섬유아세포를 5,000 세포/웰(well)이 되도록 넣고, 90% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그 후 무혈청 DMEM 배지에서 24시간 배양한 다음, 무혈청 DMEM 배지에 녹여진 상기 제조예 1의 수득한 울릉국화 추출물과 비교제조예 1의 구절초 추출물 및 비교제조예 2의 감국 추출물 50ppm 농도, 토코페롤 및 EGCG 각각을 10^-4 몰농도로 24시간 동안 처리한 후, 세포배양액을 채취하였다.

채취한 세포배양액을 상업적으로 이용 가능한 콜라게나제 측정기구(미국 아머샴파마샤 사)를 이용하여 콜라게나제 생성 정도를 측정하였다. 먼저 1차 콜라게나제 항체가 균일하게 도포된 96-웰 플레이트에 채취된 세포 배양액을 넣고 3시간 동안 항원-항체 반응을 항온조에서 실시하였다.

3시간 후 발색단이 결합된 2차 콜라겐 항체를 96-웰 플레이트에 넣고 다시 15분간 반응시켰다. 15분 후 발색유발물질을 넣어 실온에서 15분간 발색을 유발시키고, 다시 1M 황산을 넣어 반응(발색)을 중지시키면 반응액의 색깔은 노란색을 띄며 반응 진행의 정도에 따라 노란색의 정도가 다르게 나타났다.

노란색을 띠는 96-웰 플레이트의 흡광도를 흡광계를 이용하여 405nm에서 측정하였고, 하기 수학식 2에 의해 콜라게나제의 합성 정도를 계산하였다. 이때 조성물을 처리하지 않은 군의 채취된 세포배양액의 반응 흡광도를 대조군으로 하였다. 즉, 비 처리군에서의 콜라게나제의 발현 정도를 100으로 하고, 이에 대비하여 시험물질을 처리한 군에서의 콜라게나제의 발현 정도를 하기 수학식 2과 같이 구하였으며, 그 결과는 하기 표 2에 나타내었다.

시험물질	콜라게나제 발현 정도(%)
비처리군	100
토코페롤	76
EGCG	64
울릉국화 추출물 (제조예 1)	61
구절초 추출물 (비교제조예 1)	82
감국 추출물 (비교제조예 2)	79

콜라게나제의 발현 정도가 낮을수록 콜라게나제의 발현 억제능이 높고 피부내의 콜라겐의 분해가 적게 일어나 피부 탄력 감소가 저해되며, 생성되는 주름의 양은 적어진다. 상기 표에서 나타나는 바와 같이, 본 발명의 울릉국화 추출물은 시험관내(in vitro)에서 콜라게나제의 발현을 효과적으로 억제하였으며, 토코페롤 및 EGCG보다도 콜라게나제의 발현 억제능이 우수함을 확인할 수 있었다. 특히, 울릉국화 추출물의 경우 구절초 및 감국 추출물에 비하여 콜라게나제의 발현을 더욱 효과적으로 억제함으로써 피부 내의 콜라겐 분해를 감소시켜 피부 탄력 증진 효과 및 주름 감소 효과가 우수함을 확인하였다.

<시험예 4> 추출물의 성분 비교 분석

상기 제조예 1에서 수득한 울릉국화 추출물, 비교제조예 1에서 수득한 구절초 추출물 및 비교제조예 2에서 수득한 감국 추출물 각각의 성분을 분석하였다. 상기 추출물 각각을 70% 에탄올에 녹여 10,000 ppm 용액으로 만든 후, HPLC (Waters사, 2695 model)를 이용하여 성분 분석 (Waters사, 2996 PDA 검출기)을 진행하였다. 고정상은 Kanto Chemical의 Mightysil RP-18 GP 250*4.6 (5μm) 칼럼을 이용하였고, 이동상은 시간의 진행에 따라 하기 표 3과 같이 조성비를 가지는 것을 사용하였다.

시간 (분)	물 (질량%)	아세토나이트릴 (질량%)
0	95	5
35	65	35
45	5	95
50	95	5
55	95	5

상기 제조예 1에서 수득한 울릉국화 추출물, 비교제조예 1에서 수득한 구절초 추출물 및 비교제조예 2에서 수득한 감국 추출물에 대하여, HPLC (High-performance liquid chromatography)를 이용한 분석 결과를 도 1에 나타내었다.

도 1을 살펴보면, 30분 내지 31분 부근에서 구절초 추출물 및 감국 추출물와 상이한 검출 피크가 울릉국화 추출물에 대하여 검출된 것으로부터, 울릉국화 추출물은 구절초 추출물 및 감국 추출물에 존재하지 않는 성분을 함유하며, 이로 인하여, 구절초 추출물 및 감국 추출물보다 항노화 효과가 우수하며, 구체적으로, 항산화 효과, 피부 주름 개선 효과, 피부 탄력 개선 효과 및 피부 세포 재생 효과가 우수함을 확인할 수 있었다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 하기의 제형예와 같이 제조될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

[제제예 1] 화장수

하기 표 4에 기재된 조성으로 통상의 방법에 따라 화장수를 제조한다.

	함량(중량%)
울릉국화 추출물	2.0
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	2.0
프로필렌글리콜	2.0
카르복시비닐폴리머	0.1
PEG 12 노닐페닐에테르	0.2
폴리솔베이트 80	0.4
에탄올	10.0
트리에탄올아민	0.1
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

[제제예 2] 영양 크림

하기 표 5에 기재된 조성으로 통상의 방법에 따라 영양 크림을 제조한다.

	함량(중량%)
울릉국화 추출물	2.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄세스퀴올리에이트	0.5
PEG 60 경화피마자유	2.0
유동파라핀	10.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프락트리글리세라이드	5.0
글리세린	5.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

[제제예 3] 마사지 크림

하기 표 6에 기재된 조성으로 통상의 방법에 따라 마사지 크림을 제조한다.

	함량(중량%)
울릉국화 추출물	1.0
밀납	10.0
폴리솔베이트 60	1.5
PEG 60 경화피마자유	2.0
솔비탄세스퀴올레이트	0.8
유동파라핀	40.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	4.0
글리세린	5.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

[제제예 4] 팩

하기 표 7에 기재된 조성으로 통상의 방법에 따라 팩을 제조한다.

	함량(중량%)
울릉국화 추출물	1.0
폴리비닐알콜	13.0
소듐카르복시메틸셀룰로오스	0.2
글리세린	5.0
알란토인	0.1
에탄올	6.0
PEG 12 노닐페닐에테르	0.3
폴리솔베이트 60	0.3
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

[제제예 5] 젤

하기 표 8에 기재된 조성으로 통상의 방법에 따라 젤을 제조한다.

	함량(중량%)
울릉국화 추출물	0.5
에틸렌디아민초산나트륨	0.05
글리세린	5.0
카르복시비닐폴리머	0.3
에탄올	5.0
PEG 60 경화피마자유	0.5
트리에탄올아민	0.3
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

[제제예 6] 연고

하기 표 9에 기재된 조성으로 통상적인 방법으로 연고를 제조하였다.

	함량(중량%)
울릉국화 추출물	0.1
글리세린	8.0
부틸렌글리콜	4.0
유동파라핀	15.0
베타글루칸	7.0
카보머	0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	3.0
스쿠알란	1.0
세테아릴 글루코사이드	1.5
소르비탄 스테아레이트	0.4
세테아릴 알코올	1.0
밀납	4.0
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

Claims

울릉국화 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화용 피부 외용제 조성물.
제1항에 있어서,
상기 울릉국화 추출물의 함량은 조성물 전체 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 20.0 중량%인 피부 외용제 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 피부 주름 개선용인 피부 외용제 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 피부 탄력 개선용인 피부 외용제 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 피부 세포 재생용인 피부 외용제 조성물.