KR102390843B1 - 창이자를 이용한 항염증 및 항알레르기용 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 창이자를 이용한 항염증 및 항알레르기용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 세포 독성이 없고, NO 생성능을 감소시키며, β-hexosaminidase 억제능이 우수한 항염증 및 항알레르기용 조성물에 대한 것이다.
본 발명의 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 하는 항염증 및 항알레르기용 조성물은 생체 내에서 강력한 염증 매개물인 산화질소(NO)의 생성을 효과적으로 억제하고, 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase)의 분비를 억제하는 효과가 있다. 또한, 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물을 각각 독립적으로 사용하는 경우에 비해 훨씬 우수한 상승적 항염증 효능 및 항알레르기 효능을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 항염증 및 항알레르기용 조성물은 항염증 및 항알레르기 효능이 있는 화장품, 의약품 또는 건강기능식품의 제조에 유용하게 이용될 수 있다.
본 발명의 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 하는 항염증 및 항알레르기용 조성물은 생체 내에서 강력한 염증 매개물인 산화질소(NO)의 생성을 효과적으로 억제하고, 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase)의 분비를 억제하는 효과가 있다. 또한, 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물을 각각 독립적으로 사용하는 경우에 비해 훨씬 우수한 상승적 항염증 효능 및 항알레르기 효능을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 항염증 및 항알레르기용 조성물은 항염증 및 항알레르기 효능이 있는 화장품, 의약품 또는 건강기능식품의 제조에 유용하게 이용될 수 있다.
Description
본 발명은 창이자를 이용한 항염증 및 항알레르기용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 세포 독성이 없고, NO 생성능을 감소시키며, β-hexosaminidase 억제능이 우수한 항염증 및 항알레르기용 조성물에 대한 것이다.
염증반응은 인체가 항상성 유지하기 위해 외부 자극원에 대한 인체의 방어 기작으로 미생물 유래의 LPS(lipopolysaccharide)와 같은 외부 자극원과 아라키돈산(arachidonic acid)과 같은 내부 자극원들을 매개로 하여 발생한다.
LPS는 그람 음성박테리아의 세포벽 최외각층에 존재하는 물질로서 병원성 세균과 진핵생물간의 상호작용에 다양한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 특히LPS는 인체에서 외래물질로 인식되어 세포 방어시스템을 활성화시키고, 이로 인해 면역 방어시스템 중 하나인, 염증유발경로가 활성화된다.
세포가 LPS 등의 외부 자극원에 의해 자극을 받게 되면, iNOS(유도형NO synthas) 및 COX-2(cyclooxygenase-2)의 발현이 유도되고, 이로 인해 염증반응을 매개하는 세포 내 신호 전달 물질인 일산화질소(nitric oxide, NO)와 프로스타글란딘(prostaglandin E2, PGE2)을 방출하게 된다. 이렇게 과다 방출된 NO 및 PGE2로 인해 인체 및 조직에 염증반응이 일어나게 된다.
일반적으로 NO는 생리적인 현상인 혈압조절과 신경전달 매개체로 작용하는 등 정상적인 생리활성의 조절작용을 하는 조절물질이며, 면역반응에 있어서도 중추적인 조절물질 역할을 하고 있다. 하지만, iNOS에 의해 과발현된 NO는 염증반응을 일으키고 면역체계의 이상을 유발한다.
대부분의 염증 질환의 치료제로서 널리 사용되고 있는 제제인 비스테로이드성 소염제(non-steroidal antiinflammatory drugs, NSAIDS)는 시클로옥시게나제(cyclooxygenase, COX)라고 하는 아라키돈산(arachidonicacid)로부터 프로스타글란딘(prostaglandin)의 생합성에 관여하는 효소 활성을 억제함으로써, 항염증 작용을 나타내는데, 주 치료작용 외에 위장관 장애, 간장애, 신장애 등의 심각한 부작용을 야기하기므로 장기간의 사용에 있어서 제약이 따르는 실정이다(Rajakariar R et al. 2006).
따라서 부작용이 거의 없어 장기간 사용하는데 무리가 없으면서 항염증 효능에 탁월한 새로운 소염 진통제의 개발이 널리 요구되고 있으며, 이는 최근 천연 자원으로부터의 효능 검증을 통한 소재 개발 연구가 활성화되고 있는 이유이기도 하며, 최근에 천연자원을 이용한 항염 효과가 있는 피부 외용제, 화장품에 대한 인기가 증가하고 있으며, 이러한 부작용 없는 천연 화장품 소재 및 제품에 대한 연구가 증대하고 있다. 특히, 천연 한약재로 알려진 창이자를 이용한 응용제품이 미비한 실정이다.
이러한 배경 하에서, 본 발명자는 항염증 및 항알레르기 효능이 있는 천연물을 찾기 위해 예의 노력하였고, 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물이 항염증 및 항알레르기 효능이 우수함을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 해결하고자 하는 과제는 창이자(Xanthii fructus) 추출물 및 창이자(Xanthii fructus) 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하여 항염증 및 항알레르기 효능이 우수한 조성물을 제공하는 것이다.
상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명은 창이자(Xanthii fructus) 추출물 및 창이자(Xanthii fructus) 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 (1) 창이자(Xanthii fructus) 추출물을 제조하는 단계; (2) 창이자(Xanthii fructus) 추출물에 유산균을 접종한 후 발효시켜 창이자 발효 추출물을 제조하는 단계; 및 (3) (1) 단계의 창이자 추출물 및 (2) 단계의 창이자 발효 추출물을 혼합하는 단계;를 포함하는 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물의 제조방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 창이자(Xanthii fructus) 추출물 및 창이자(Xanthii fructus) 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 약학 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 창이자(Xanthii fructus) 추출물 및 창이자(Xanthii fructus) 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 하는 항염증 및 항알레르기용 조성물은 생체 내에서 강력한 염증 매개물인 산화질소(NO)의 생성을 효과적으로 억제하고, 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase)의 분비를 억제하는 효과가 있다. 또한, 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물을 각각 독립적으로 사용하는 경우에 비해 훨씬 우수한 상승적 항염증 효능 및 항알레르기 효능을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 항염증 및 항알레르기용 조성물은 항염증 및 항알레르기 효능이 있는 화장품, 의약품 또는 건강기능식품의 제조에 유용하게 이용될 수 있다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 일 측면에 따르면, 본 발명은 창이자(Xanthii fructus) 추출물 및 창이자(Xanthii fructus) 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물에 관한 것이다.
창이자(Xanthii fructus)는 국화과에 속하는 일년생인 도꼬마리(Xanthium strumarium)의 열매이며, 열매가 귀고리처럼 생겼기 때문에 이당초(耳-草)로 불렸으며 옛 중국의 낙수(洛水) 지방에서 양을 몰고 촉나라(蜀)로 들어가는 사람들이 많았는데 이 씨앗이 양털에 달라붙어서 옮겨갔기 때문에 양부래(羊負來)라고 부르기도 했다. 창이자는 풍한을 없애는 약재로 축농증, 비염, 두통, 발열, 기침, 사지동통마비, 굴신이 자유스럽지 못할 때, 피부가려움증, 중이염에 쓴다. 약리작용은 정유와 알칼로이드에 독성반응, 혈당강하, 백혈구감소방지, 진해, 심장억제작용 등이 보고되었다.
본 발명의 조성물은 피부 염증, 습진, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 지루성 피부염, 만선단순태선, 간찰진, 박탈 피부염, 구진상 두드러기, 건선, 건선관절염, 일광 피부염, 일광화상 또는 여드름 등을 완화, 억제 또는 개선하는 효과가 있고, 특히 접촉성 피부염, 알레르기성 피부염, 아토피성 피부염, 지루성 피부염, 두드러기 또는 건선을 완화, 억제 또는 개선하는 효과가 있다.
본 발명의 조성물은 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물을 1 : 0.25 내지 2의 중량비, 바람직하게는 1 : 0.5 내지 1.5 중량비, 더욱 바람직하게는 1 : 0.8 내지 1.2의 중량비로 포함할 수 있다.
조성물에 포함되는 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 중량비가 상기 범위를 벗어나는 경우 항염증 및 항알레르기 효능이 기대에 미치지 못하게 된다.
상기 창이자 추출물은 창이자를 추출용매와 1 : 10 내지 30, 바람직하게는 1 : 15 내지 25, 더욱 바람직하게는 1 : 18 내지 22의 중량비로 혼합하여 45 내지 75 ℃, 바람직하게는 50 내지 70 ℃, 더욱 바람직하게는 55 내지 65 ℃에서 12 내지 48시간, 바람직하게는 18 내지 36시간, 더욱 바람직하게는 20 내지 28 시간 동안 추출한 후 감압농축을 수행하여 제조할 수 있다. 상기 창이자와 추출용매의 중량비가 상기 범위를 벗어나는 경우에는 추출물에 창이자의 유효성분이 적은 양으로 추출될 수 있다.
상기 각 추출물을 추출하는 추출용매는 알코올일 수 있고, 바람직하게는 탄소수 1 내지 4의 저급알코올이다. 상기 저급알코올로는 20 내지 80%(v/v)의 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 프로판올을 들 수 있다.
상기 추출용매로는 특별히 한정하는 것은 아니지만 50 내지 70%(v/v), 바람직하게는 55 내지 65%(v/v)의 에탄올로 추출된 추출물이 염증 및 알레르기의 예방, 개선 또는 치료에 바람직하게 작용한다.
상기 창이자 추출물은 창이자를 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이의 수용액으로 추출한 추출물을 제2의 유기용매로 재분획한 분획물일 수 있다. 바람직하게는, 창이자 추출물은 창이자의 에탄올 추출물을 헥산, 에틸아세테이트, 부탄올 또는 물로 재분획한 분획물일 수 있다.
본 명세서에서 창이자를 언급하면서 사용되는 용어 "추출물"은 추출용매를 처리하여 얻은 조추출물뿐만 아니라 창이자 추출물의 가공물도 포함한다. 예를 들어, 창이자 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
일 구체예에서, 창이자 추출물은 창이자를 세척하고 건조하는 단계; 건조한 창이자를 분쇄한 후 용매 추출하는 단계; 및 상기 창이자 추출물을 농축 및 여과하는 단계;를 거쳐 수득할 수 있다.
또한, 상기 추출은 침지 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 임의의 추출 방법을 사용하여 이루어질 수 있다.
한편, 상기 창이자 발효 추출물은 창이자 열수 추출물에 유산균을 접종하고 24 내지 36 ℃, 바람직하게는 26 내지 34 ℃, 더욱 바람직하게는 28 내지 32 ℃에서 2 내지 6일, 바람직하게는 3 내지 5일 동안 발효시켜 제조할 수 있다. 상기 창이자 발효 추출물을 제조하기 위한 기질로는 창이자 추출물을 이용하면 되고 특별한 제한이 없으나, 기질로서 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 그들의 혼합 용매에 의한 창이자 수성 추출물, 바람직하게는 창이자 열수 추출물를 이용하여 제조한 창이자 발효 추출물이 상기 창이자 수성 추출물을 헥산, 에틸아세테이트 등으로 분획한 창이자 지용성 추출물을 이용하여 제조한 창이자 발효 추출물에 비해 창이자 추출물과 병용시 항염증 및 항알레르기 효능에 미치는 상승효과가 더욱 뛰어나다.
상기 창이자 열수 추출물은 창이자에 10 내지 30배 중량, 바람직하게는 15 내지 25 중량의 물을 가한 후, 100 ℃ 이상의 온도, 바람직하게는 110 ℃ 이상의 온도, 더욱 바람직하게는 115 내지 125 ℃에서 5 내지 60분, 바람직하게는 10 내지 30분 동안 가열하여 제조될 수 있다.
상기 유산균은 락토바실러스 애시도필러스, 락토바실러스 파라카세이, 락토바실러스 람노서스, 락토바실러스 플랜타룸, 류코노스톡 김치아이, 류코노스톡 시트레움, 류코노스톡 메센테로이드스, 류코노스톡 가시코미타툼, 류코노스톡 락티스, 락토바실러스 사케이 및 락토바실러스 브레비스 중에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 또한, 락토바실러스 애시도필러스, 락토바실러스 파라카세이 및 락토바실러스 람노서스 중에서 선택된 1종 이상인 것이 항염증 및 항알레르기 효능 면에서 더욱 바람직하다.
상기 유산균은 유산균 자체로 첨가되거나 배양액으로 접종될 수 있다. 상기 배양액은 균주를 액체 배지에서 배양한 배양액 자체, 상기 배양액을 농축한 농축액 등을 포함할 수 있다.
일 구체예에서, 유산균이 1×106 내지 1×109 cfu/mL, 바람직하게는 1×106 내지 1×108 cfu/mL, 더욱 바람직하게는 1×107 내지 1×108 cfu/mL 농도로 함유된 배양액을 상기 창이자 열수 추출물에 0.5 내지 3.0 %(v/v), 바람직하게는 1.0 내지 2.5 %(v/v), 더욱 바람직하게는 1.5 내지 2.5 %(v/v) 농도로 접종하는 것일 수 있다.
상기의 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물은 광의로는 동물에게 투여할 수 있도록 제형화된 가공물, 예컨대, 분말도 포함하는 의미를 갖는다.
본 발명의 일 실시예에서, 염증 반응 유도 인자인 지질다당류(LPS:lipopolysaccharides) 및 본 발명의 조성물을 세포에 처리하여 NO의 발생을 유도한 후, LPS만 처리한 음성대조군과 비교하였다. 그 결과, 본 발명의 조성물을 처리한 경우 세포독성 없이 농도 의존적으로 NO 발생이 줄어들어, 항염 효과가 우수한 것을 확인할 수 있었다.
본 발명의 다른 실시예에서, 알레르기 반응 유도 인자인 IgE(Immunoglubulin E)를 세포에 처리하여 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase)의 분비를 유도하고, 본 발명의 조성물을 처리한 후, IgE만 처리한 음성대조군과 비교하였다. 그 결과, 본 발명의 조성물은 세포로부터 분비되는 베타-헥소사미니다아제를 감소시켜 항알러지 효과가 뛰어남을 확인할 수 있었다.
한편, 본 발명의 발명자들은 구체적인 실험을 통해 상기 조성물에 대한 피부누적 자극을 시험한 결과 인체에 무해한 물질임을 확인하였다. 또한, 본 발명의 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 장기간 사용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.
본 발명에 있어서, "유효성분으로 함유하는"의 의미는, 화장료 조성물로써 피부에 항염증 및 항알레르기 활성을 나타낼 수 있는 정도의 유효량을 함유하는 것을 의미한다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물은 효과적인 항염증 및 항알레르기 효능을 제공하기에 바람직한 임의의 함량으로 조성물에 존재할 수 있다. 일 양태에 따르면, 상기 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물은 0.0001 내지 99.9 중량%일 수 있고, 0.001 내지 30 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 10 중량%, 더욱 바람직하게는 0.1 내지 10 중량%, 더욱 바람직하게는 0.1 내지 5 중량%로 포함될 수 있다. 상기 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물의 함량이 상기 범위의 미만인 경우에는 상기 혼합물에 의한 효과를 기대하기 어려우며, 상기 범위를 초과하는 경우에는 함량의 증가에 따른 효과의 증가가 미미할 뿐만 아니라, 제형의 안정성이 저하되는 문제가 있다. 즉, 본 발명의 혼합물이 조성물 내에 상기 범위로 포함됨으로써, 우수한 항염 및 항알레르기 효과를 구현할 수 있고 제형 및 제품 안정성을 가지며 경제성 면에서도 최적의 함량으로 우수한 효과를 발휘할 수 있다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 광노화 방지 및 피부주름 개선용 화장료 조성물의 제형은 화장수, 유액, 크림, 에센스, 화장 연고, 스프레이, 젤, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 파운데이션, 파우더 및 메이크업 제거제로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물은 상기 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물 이외에 피부학적으로 허용가능한 부형제를 추가적으로 포함할 수 있다.
상기 부형제로는 이에 한정되지는 않으나 예를 들어, 피부연화제, 피부 침투 증강제, 착색제, 방향제, 유화제, 농화제 및 용매를 포함할 수 있다. 또한, 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제 및 보습제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 물성개선을 목적으로 점증제, 무기염류, 합성 고분자 물질 등을 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 보습제는 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 솔비톨, 헥실렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 디글리세린, 1,2-헥산디올, 판테놀, 베타인, 스쿠알란, 바셀린, 유동파라핀 및 하이드롤라이즈드 밀 글루텐 중 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 본 발명은 (1) 창이자(Xanthii fructus) 추출물을 제조하는 단계; (2) 창이자(Xanthii fructus) 열수 추출물에 유산균을 접종한 후 발효시켜 창이자 발효 추출물을 제조하는 단계; 및 (3) (1) 단계의 창이자 추출물 및 (2) 단계의 창이자 발효 추출물을 혼합하는 단계;를 포함하는 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에서의 용어, "창이자 추출물", "창이자 발효 추출물", "유산균", "항염증 및 항알레르기"는 상술한 바와 같다.
본 발명의 제조방법에서, 상기 (1) 단계의 창이자 추출물의 용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합물일 수 있다.
또한, 상기 (2) 단계의 유산균은 락토바실러스 애시도필러스, 락토바실러스 파라카세이, 락토바실러스 람노서스, 락토바실러스 플랜타룸, 류코노스톡 김치아이, 류코노스톡 시트레움, 류코노스톡 메센테로이드스, 류코노스톡 가시코미타툼, 류코노스톡 락티스, 락토바실러스 사케이 및 락토바실러스 브레비스 중에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 또한, 락토바실러스 애시도필러스, 락토바실러스 파라카세이 및 락토바실러스 람노서스 중에서 선택된 1종 이상인 것이 항염증 및 항알레르기 효능 면에서 더욱 바람직하다.
또한, 상기 (3) 단계의 혼합은 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물을 1 : 0.25 내지 2의 중량비, 바람직하게는 1 : 0.5 내지 1.5 중량비, 더욱 바람직하게는 1 : 0.8 내지 1.2의 중량비로 혼합하는 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에 따르면, 본 발명은 창이자(Xanthii fructus) 추출물 및 창이자(Xanthii fructus) 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 항염증 및 항알레르기용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다. 본 발명에서의 용어, "창이자 추출물", "창이자 발효 추출물", "항염증 및 항알레르기"는 상술한 바와 같다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 외용제는 연고, 패치, 겔, 크림 또는 분무제의 제형일 수 있다.
본 발명의 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물을 피부 외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에 따르면, 본 발명은 창이자(Xanthii fructus) 추출물 및 창이자(Xanthii fructus) 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 약학 조성물에 관한 것이다. 본 발명에서의 용어, "창이자 추출물", "창이자 발효 추출물", "항염증 및 항알레르기"는 상술한 바와 같다.
본 발명의 약학 조성물은 염증 질환, 또는 알레르기 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 이용될 수 있다.
상기 염증 질환은 NO 과다 생성에 의한 것으로, 예를 들어 기관지염, 천식, 비염, 염증성 장 질환 및 관절염 중에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
상기 알레르기 질환은 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase) 과다 분비에 의한 것으로, 예를 들어 접촉성 피부염, 알레르기성 피부염, 아토피성 피부염, 지루성 피부염, 두드러기, 건선, 비염, 천식 및 알레르기성 결막염 중에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
본 발명의 용어 "예방"이란, 상기 염증 질환 또는 알레르기 질환을 억제시키거나 또는 지연시키는 모든 것을 의미한다.
본 발명의 용어 "치료"란, 달리 언급되지 않는 한, 상기 염증 질환 또는 알레르기 질환의 증상을 역전시키거나, 완화시키거나, 그 진행을 억제하거나, 또는 예방하는 것을 의미한다.
본 발명의 약학 조성물은 상기 유효 성분 이외에 약학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.
상기 약학 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약학 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.
상기 약학 조성물의 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피복정, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 등이 될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함한다.
액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.
더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있으며, 바람직하게는 경구 투여이다.
본 발명의 약학 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 약학 조성물의 1일 투여량은 0.001-10 g/㎏일 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에 따르면, 본 발명은 창이자(Xanthii fructus) 추출물 및 창이자(Xanthii fructus) 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다. 본 발명에서의 용어, "창이자 추출물", "창이자 발효 추출물", "항염증 및 항알레르기"는 상술한 바와 같다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 염증 질환, 또는 알레르기 질환의 예방 또는 개선에 유용하게 이용될 수 있다.
상기 염증 질환은 NO 과다 생성에 의한 것으로, 예를 들어 기관지염, 천식, 비염, 염증성 장 질환 및 관절염 중에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
상기 알레르기 질환은 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase) 과다 분비에 의한 것으로, 예를 들어 접촉성 피부염, 알레르기성 피부염, 아토피성 피부염, 지루성 피부염, 두드러기, 건선, 비염, 천식 및 알레르기성 결막염 중에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
본 발명의 용어 "예방"이란, 상기 염증 질환 또는 알레르기 질환을 억제시키거나 또는 지연시키는 모든 것을 의미한다.
본 발명의 용어 "개선"이란, 본 발명의 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물을 포함하는 조성물의 투여로 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 것을 의미한다.
상기 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽 또는 음료의 형태로 제공될 수 있으며, 상기 건강기능식품 조성물은 상기 유효성분 이외에 다른 식품 또는 식품 첨가물과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 그의 사용 목적 예를 들어 예방, 개선 또는 치료적 처치에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일 양태에 따르면, 상기 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물은 0.001 내지 30 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 10 중량%, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 5 중량%로 포함될 수 있다.
상기 건강식품 조성물에 함유된 상기 유효성분의 유효용량은 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 종류 및 함량, 제형의 종류, 섭취자의 연령, 체중, 일반 건강상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로, 섭취 기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 항염증 및 항알레르기 효능을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 상기 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있음은 확실하다.
또한, 본 발명은 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 항염증 및 항알레르기용 식품 첨가제를 제공한다. 본 발명에서의 용어, "창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물"은 상술한 바와 같다.
상기 식품 첨가제는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 등에 첨가하여 섭취할 수 있다.
이하, 실시예에 의하여 본 발명을 상세히 설명하겠으나, 다음 실시예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
<실시예 및 비교예>
실시예 1: 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물 제조
(1) 창이자 추출물의 제조
창이자 분말 150g에 60%(v/v) 에탄올 3000g을 혼합하고 60 ℃에서 24 시간 동안 침지 추출하였다. 이후, 상기 추출액을 0.2 ㎛ 여과지로 여과한 후, 감압 농축(45 ℃, 70 rpm, 50 bar)한 다음 동결 건조하여 창이자 추출물 분말 2.4g(수율: 1.6 %)을 얻었다.
(2) 창이자 발효 추출물의 제조
1) 락토바실러스 애시도필러스 균주를 MRS broth 배지(BD DIFCO)에 접종한 후 30 ℃, 150 rpm 조건에서 24 시간 동안 진탕 배양하여 유산균 배양액을 제조하였다.
2) 정제수에 창이자 분말 5 중량%를 혼합하고, 121 ℃에서 15분 동안 멸균하여 발효를 위한 창이자 열수 추출물을 준비하였다.
3) 상기 창이자 열수 추출물에 유산균 배양액(1×108 cfu/ml) 2 %(v/v)를 접종하고, 30 ℃, 150 rpm 조건에서 4일 동안 진탕 배양하여 창이자 발효 추출물을 제조하였다. 이후, 상기 발효 추출물을 121 ℃에서 15분 동안 멸균하였고, 0.2 ㎛ 여과지로 여과한 후, 감압 농축(45 ℃, 70 rpm, 50 bar)한 다음 동결 건조하여 창이자 발효 추출물 분말을 얻었다.
(3) 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물 제조
(1) 단계의 창이자 추출물 및 (2) 단계의 창이자 발효 추출물 분말을 1 : 1의 중량비로 혼합하여, 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물을 제조하였다.
실시예 2: 락토바실러스 파라카세이 이용
실시예 1과 동일하게 실시하되, 락토바실러스 애시도필러스 대신 락토바실러스 파라카세이를 이용하여 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물을 제조하였다.
실시예 3: 락토바실러스 람노서스 이용
실시예 1과 동일하게 실시하되, 락토바실러스 애시도필러스 대신 락토바실러스 람노서스를 이용하여 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물을 제조하였다.
실시예 4: 창이자 발효 추출물 제조시 창이자 에탄올 추출물 이용
실시예 1과 동일하게 실시하되, (2) 창이자 발효 추출물 제조시 창이자 열수 추출물 대신 (1) 단계에서 얻은 창이자 에탄올 추출물을 이용하여 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물을 제조하였다.
비교예 1: 창이자 추출물 단독
실시예 1의 (1) 단계에서 얻은 창이자 에탄올 추출물을 단독으로 이용하였다.
비교예 2 : 창이자 발효 추출물 단독 - 락토바실러스 애시도필러스
실시예 1의 (2) 단계에서 얻은 창이자 발효 추출물을 단독으로 이용하였다.
비교예 3: 창이자 발효 추출물 단독 - 락토바실러스 파라카세이
비교예 2와 동일하게 실시하되, 락토바실러스 애시도필러스 대신 락토바실러스 파라카세이를 이용하여 창이자 발효 추출물을 얻었다.
비교예 4: 창이자 발효 추출물 단독 - 락토바실러스 람노서스
비교예 2와 동일하게 실시하되, 락토바실러스 애시도필러스 대신 락토바실러스 람노서스를 이용하여 창이자 발효 추출물을 얻었다.
비교예 5: 창이자 물 추출물 이용
실시예 1과 동일하게 실시하되, (1) 단계의 창이자 에탄올 추출물 대신 창이자 물 추출물을 이용하여 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물을 제조하였다. 상기 창이자 물 추출물은, 에탄올 대신 정제수를 이용하여 추출물을 제조한 것이다.
비교예 6: 창이자 부틸렌글리콜 추출물 이용
실시예 1과 동일하게 실시하되, (1) 단계의 창이자 에탄올 추출물 대신 창이자 부틸렌글리콜 추출물을 이용하여 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물을 제조하였다. 상기 창이자 부틸렌글리콜 추출물은, 에탄올 대신 40%(v/v) 부틸렌글리콜 수용액을 이용하여 추출물을 제조한 것이다.
비교예 7: 바실러스 서브틸리스 이용
실시예 1과 동일하게 실시하되, (2) 단계의 락토바실러스 애시도필러스 대신 바실러스 서브틸리스를 이용하여 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물을 제조하였다.
<시험예>
예비시험예: 성분 분석
창이자 추출물과 상기 창이자 추출물을 발효시킨 발효 추출물의 성분을 분석하여, 창이자 추출물을 발효시키는 경우 생물전환에 의해 조성에 어떤 변화가 발생하는지 확인하고자 하였다.
이에 따라, 비교예 1의 창이자 에탄올 추출물, 비교예 2의 창이자 발효 추출물(락토바실러스 애시도필러스), 비교예 3의 창이자 발효 추출물(락토바실러스 파라카세이), 비교예 4의 창이자 발효 추출물(락토바실러스 람노서스)에 대하여 성분 분석을 실시하였다. 성분 분석을 실시한 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
상기 추출물들로부터 검출된 주요 성분으로는 Chlorogenic acid, protocatechuic acid, isoquercitrin, caffeic acid가 있었으며, 소량 검출된 성분으로는 salicylic acid, ferulic acid, galic acid, p-coumaric acid, quercetin, syringic acid, catechin 등이 있었다.
구분 | 성분 함량 (ppm) | 비고 | |||
비교예 1 | 비교예 2 | 비교예 3 | 비교예 4 | ||
Caffeic acid | 195.00 | 315.07 | 368.95 | 344.03 | 증가 |
Catechin | 2.00 | - | - | - | 사라짐 |
Chlorogenic acid | 1057.00 | 4229.41 | 4475.96 | 4221.09 | 증가 |
Ferulic acid | 20.00 | - | - | - | 사라짐 |
Gallic acid | 27.00 | 69.07 | 70.72 | 52.66 | 증가 |
Isoquercitrin | 233.00 | 42.86 | 44.97 | 54.28 | 감소 |
p-Coumaric acid | 38.00 | 46.66 | 52.01 | 43.37 | 증가 |
Protocatechuic acid | 291.00 | 1087.72 | 1155.86 | 743.90 | 증가 |
Quercetin | 4.00 | - | - | - | 사라짐 |
Salicylic acid | 24.00 | 108.51 | 125.97 | 115.21 | 증가 |
Syringic acid | 17.00 | 25.21 | 29.99 | 31.60 | 증가 |
상기 표 1을 살펴보면, 창이자 추출물을 발효시키는 경우 Caffeic acid, Chlorogenic acid, Gallic acid, p-Coumaric acid, Protocatechuic acid, Salycylic acid, Syringic acid 등의 성분은 증가하고, Catechin, Ferulic acid 및 Quercetin은 사라지는 것을 확인할 수 있다.
시험예 1: 독성 시험
상기 실시예 1에서 얻은 시료의 MTS 어세이법에 의한 세포 생존율에 대한 효과를 알아보기 위해 기존 문헌에 기재된 방법을 이용하여 하기와 같이 실험을 수행하였다(Choi JH et al., Flowers of Inula japonica attenuate inflammatory responses, Immune Network 2010, 10(5), 145-152).
먼저, 24 well plate에 Raw 264.7 세포를 5× 104cell/mL의 밀도로 분주하고 5% CO2, 37℃ 조건에서 배양하였다. 24시간 후 실시예에 따른 시료를 각각 농도별(0.1, 0.5, 1.0, 5.0 mg/㎖)로 처리하여 24시간 동안 더 배양하였다. 이후 상층액을 제거하고 1 μg/mL의 MTT 용액을 첨가하여 2 시간 방치 후 DMSO를 well당 100 μL을 가하여 20 분 동안 formazan crystal을 용해시켜 ELISA plate reader로 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포생존율을 하기 수학식 1로 계산하였으며, 그 결과를 대조군에 대한 상대 비율로 하기 표 2에 나타내었다.
[수학식 1]
세포 생존율(%) = (시료처리군의 흡광도 / 대조군의 흡광도) × 100
시료 (mg/mL) | 세포 생존율(%) | |
대조군 (무처리군) | 100 | |
실시예 1 | 0.1 | 113.1 |
0.5 | 108.6 | |
1.0 | 98.7 | |
10.0 | 95.5 | |
실시예 2 | 0.1 | 105.7 |
0.5 | 102.1 | |
1.0 | 99.4 | |
10.0 | 92.6 | |
실시예 3 | 0.1 | 115.2 |
0.5 | 109.8 | |
1.0 | 103.7 | |
10.0 | 96.1 | |
실시예 4 | 0.1 | 109.8 |
0.5 | 101.5 | |
1.0 | 97.4 | |
10.0 | 93.6 |
상기 표 2를 살펴보면, 본 발명의 실시예에 따른 조성물은 10.0 mg/mL 농도까지는 유의적인 독성을 나타내지 않는 것을 확인할 수 있다.
시험예 2: 항염 효능 시험 - NO 생성 억제능 측정
Mouse macrophage cell인 RAW 264.7 cell에 염증 유발 물질인 LPS (Lipopolysaccharide)를 인위적으로 처리하여 유도된 NO(Nitric oxide)의 양을 측정함으로써 항염 효능을 평가하였다.
96-well plate에 well 당 2×105 cells/well 이 되도록 분주한 다음, 24시간 동안 37℃, 5% CO2 incubator에서 배양하였다. Overnight 한 다음 새로운 배지로 교환해주고 LPS (1 μg/mL)와 실시예 및 비교예의 시료를 각각 농도별로 투여하여 24시간 동안 배양하였다. 배양 후, 배지 상층액을 취해 13,000 rpm에서 3분 동안 원심 분리하여 상등액만 모은 후, Griess 시약과 1:1로 반응시키고 570 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 그 결과를 대조군에 대한 상대 비율로 하기 표 3에 나타내었다. 각 시험 물질에 대한 농도별 실험은 3개의 well에 걸쳐 수행되었으며, 그 결과를 3개 측정값의 평균 ㅁ 표준편차로 나타내었다. 통계적 유의성을 검토하기 위해 대조값에서의 변동을 one-way ANOVA test에 의해 판정하였으며, P 값이 5% 미만인 경우 (p < 0.05) 통계적으로 유의성이 있는 것으로 간주하였다.
구분 | NO 생성량 (% of control) | |||
대조군 | 0.1 mg/mL | 0.5 mg/mL | 1.0 mg/mL | |
실시예 1 | 100 | 72.5±1.1 | 14.3±0.7 | 2.6±2.0 |
실시예 2 | 100 | 83.2±2.4 | 17.8±3.5 | 5.3±3.3 |
실시예 3 | 100 | 88.5±4.7 | 18.6±3.4 | 6.5±1.6 |
실시예 4 | 100 | 77.3±2.5 | 15.2±1.2 | 3.4±3.2 |
비교예 1 | 100 | 90.3±3.2 | 20.2±5.3 | 7.2±7.8 |
비교예 2 | 100 | 97.2±2.4 | 57.5±4.2 | 17.9±2.5 |
비교예 3 | 100 | 98.1±1.3 | 61.4±6.3 | 20.3±1.1 |
비교예 4 | 100 | 98.4±2.1 | 60.1±4.7 | 18.7±2.0 |
비교예 5 | 100 | 99.6±0.5 | 98.9±1.2 | 97.6±1.6 |
비교예 6 | 100 | 98.6±2.1 | 98.8±1.5 | 94.7±3.1 |
비교예 7 | 100 | 99.3±4.3 | 96.4±2.8 | 92.3±2.2 |
상기 표 3을 살펴보면, 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물을 병용하는 경우 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물을 각각 단독으로 처리하는 경우에 비해 NO의 생성을 더욱 억제하는 것을 확인할 수 있다.
시험예 3: 항알레르기 효능 시험 - β-hexosaminidase 분비 억제능 측정
Mouse mast cell인 RBL-2H3 cell에 IgE(Immunoglobulin E)를 인위적으로 처리하여 유도된 β-hexosaminidase의 양을 측정함으로 항알레르기 효능을 평가하였다.
96-well plate에 well 당 1×105 cells/well이 되도록 분주한 다음 16시간 동안 37℃, 5% CO2 incubator에서 배양하였다. 이후 상기 배지에 Monoclonal DNP-specific IgE (1 μg/mL)를 처리하여 1시간 동안 반응시킨 후 배지를 제거하였고, Tyrode's buffer를 이용하여 세척하였다. 그리고 각 well에 Tyrode's buffe (pH 7.3)를 다시 분주한 후 37℃, 5% CO2 incubator 10분간 배양한 뒤 buffer를 제거하였다. 상기 well에 실시예 및 비교예의 시료를 Tyrode's buffer를 이용하여 각각 농도별로 희석하여 처리한 후 37℃, 5% CO2 incubator에서 20분간 배양하였다. 이후, DNP-BSA를 (1 μg/mL) 처리한 후 37℃, 5% CO2 incubator에서 2시간 배양하였다. 배양 후, 배지 상등액만 모아 p-nitrophenyl N-acetyl-ㅯ-D-glucosamide과 1:1로 혼합하고 37℃, 5% CO2 incubator에서 1시간 동안 반응시켰다. 이후, 각 well 당 Sodium bicarbonate (pH 10.2)를 처리하여 발색을 확인하고, 405 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 그 결과를 대조군에 대한 상대 비율로 하기 표 4에 나타내었다. 각 시험 물질에 대한 농도별 실험은 3개의 well에 걸쳐 수행되었으며, 그 결과를 3개 측정값의 평균 ㅁ 표준편차로 나타내었다. 통계적 유의성을 검토하기 위해 대조값에서의 변동을 one-way ANOVA test에 의해 판정하였으며, P 값이 5% 미만인 경우 (p < 0.05) 통계적으로 유의성이 있는 것으로 간주하였다.
구분 | β-hexosaminidase 분비량 (% of control) | |||
0 mg/mL | 0.1 mg/mL | 0.5 mg/mL | 1.0 mg/mL | |
실시예 1 | 100 | 64.3±4.2 | 39.7±5.5 | 25.6±3.4 |
실시예 2 | 100 | 75.3±1.9 | 59.2±4.7 | 42.1±8.8 |
실시예 3 | 100 | 69.1±6.2 | 51.8±6.3 | 34.7±4.6 |
실시예 4 | 100 | 72.2±4.5 | 48.9±3.6 | 37.6±5.3 |
비교예 1 | 100 | 96.2±6.9 | 84.3±3.6 | 67.5±2.5 |
비교예 2 | 100 | 99.7±1.4 | 99.4±2.0 | 98.7±1.1 |
비교예 3 | 100 | 99.9±2.2 | 99.1±1.1 | 97.3±2.8 |
비교예 4 | 100 | 100.1±3.0 | 99.5±1.7 | 95.8±4.3 |
비교예 5 | 100 | 99.2±2.8 | 98.6±0.6 | 96.5±3.9 |
비교예 6 | 100 | 99.5±4.6 | 98.7±1.2 | 95.6±6.7 |
비교예 7 | 100 | 98.7±5.1 | 97.5±4.4 | 92.1±2.1 |
상기 표 4를 살펴보면, 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물을 병용하는 경우 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물을 각각 단독으로 처리하는 경우에 비해 β-hexosaminidase의 분비를 현저히 억제하는 것을 확인할 수 있다. 특히, 락토바실러스 애시도필러스를 이용하여 발효시킨 경우에 β-hexosaminidase의 분비가 더욱 억제된 것을 확인할 수 있다.
이러한 결과로부터, 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 병용이 β-hexosaminidase의 분비 억제에 미치는 상승효과가 있음을 확인할 수 있다.
시험예 5: 인체 첩포 시험
인체 첩포시험은 헬싱키 선언에 근거한 윤리규정 및 식품의약품안전처 화장품 인체적용시험가이드라인에 따라 실시되었으며, Frosch & Kligman이 고안한 방법(J. Am. Acad. Dermatol, 1(1) 35 (1979))을 응용하여 특정 피부질환 및 알레르기가 없는 20세 ~ 60세의 건강한 여성 피험자 32명(평균연령 41.34ㅁ8.06세)을 대상으로 실시하였다. 먼저, 첩포 부위를 70% ethanol로 소독한 후 실시예의 시료 20μL가 적용된 Van der Bend (Van der Bend, Netherlands)를 첩포하였다. 48 h 후 첩포를 제거하고 skin marker (Chemotechnique Diagnostics AB, Sweden)로 시험 부위를 표시하였으며, 20 min, 24 h 후에 각 시험 부위의 반응도를 평가하였다. 일차 피부자극 시험(Skin Primary irritation Test)의 평가 기준은 하기 표 5에 제시한 PCPC Guidelines의 판정 기준에 따랐으며, 2회에 걸쳐 평가한 피부 반응의 정도(평균 반응도)를 하기 수학식 2에 따라 점수화하였다.
반응도 | 임상 증상(반응) |
0 | 무반응 |
1 | 희미한 또는 가벼운 홍반 |
2 | 보통의 홍반; 및 첩포 경계에서 가까스로 감지할 수 있는 부종 및/또는 구진 형성 |
3 | 보통의 홍반; 및 첩포 부위 전반에 퍼진 부종 |
4 | 심한 홍반; 및 심한 부종; 또는 수포 발생 |
5 | 첩포 부위를 넘어서서 심각한 반응이 퍼짐 |
[수학식 2]
평균반응도 = [{(반응도 × 반응이 나타난 피검자수)/(총피검자수 × 최고점수(5점))} × 100] × 1/2
인체 피부에서의 피부 자극 정도를 평가하기 위하여 액상 상태의 실시예 1 내지 4의 시료 20 μL를 각각 32명의 피험자에 첩포하여 인체 첩포 시험을 실시하고, 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다.
구분 | 반응이 나타난 피검자수(명) | 반응도 | ||
24 시간 | 48 시간 | 평균 | ||
음성 대조군 | 0 | 0.0 | 0.0 | 0.0 |
실시예 1 | 0 | 0.0 | 0.0 | 0.0 |
실시예 2 | 0 | 0.0 | 0.0 | 0.0 |
실시예 3 | 0 | 0.0 | 0.0 | 0.0 |
실시예 4 | 0 | 0.0 | 0.0 | 0.0 |
상기 표 6을 살펴보면, 본 발명의 실시예에 따른 조성물을 첩포하여 피부 자극 정도를 평가한 결과 32명의 피험자가 모두 반응 등급이 0.0으로서 음성 반응을 나타냈으므로, 본 발명의 조성물은 인체 피부 일차 자극 측면에서 무자극 물질로 판단된다.
<제조예>
하기 본 발명의 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물을 위한 제조예를 예시한다.
<제조예 1> 화장품의 제조
<1-1> 유연화장수(스킨)
본 발명의 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물을 포함하는 항염 및 항알레르기용 유연화장수를 제조하기 위해 하기 표 7에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.
성분 | 함량(중량%) |
실시예의 혼합물 | 0.1 |
글리세린 | 6.0 |
1,3-부틸렌글라이콜 | 3.0 |
피이지1500 | 1.0 |
알란토인 | 0.1 |
DL-판테놀 | 0.3 |
EDTA-2Na | 0.02 |
벤조페논-9 | 0.04 |
소듐하이알루로네이트 | 5.0 |
에탄올 | 10.0 |
폴리소르베이트20 | 0.2 |
방부제, 향, 색소 | 미량 |
증류수 | 잔량 |
합계 | 100 |
<1-2> 영양화장수(로션)
본 발명의 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물을 포함하는 항염 및 항알레르기용 영양화장수를 제조하기 위해 하기 표 8에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.
성분 | 함량(중량%) |
실시예의 혼합물 | 0.1 |
프로필렌글리콜 | 6.0 |
글리세린 | 4.0 |
트리에탄올아민 | 1.2 |
토코페릴아세테이트 | 3.0 |
유동 파라핀 | 5.0 |
스쿠알란 | 3.0 |
마카다미너트오일 | 2.0 |
폴리소르베이트 60 | 1.5 |
소르비탄세스퀴올레이트 | 1.0 |
카르복시비닐폴리머 | 1.0 |
방부제, 향, 색소 | 미량 |
증류수 | 잔량 |
합계 | 100 |
<1-3> 영양크림
본 발명의 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물을 포함하는 항염 및 항알레르기용 영양크림을 제조하기 위해 하기 표 9에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.
성분 | 함량(중량%) |
실시예의 혼합물 | 0.1 |
친유형 모노스테아린산글리세린 | 1.5 |
세테아릴 알코올 | 1.5 |
스테아린산 | 1.0 |
폴리소르베이트 60 | 1.5 |
소르비탄 스테아레이트 | 0.6 |
이소스테아릴이소스테아레이트 | 5.0 |
스쿠알란 | 5.0 |
광물유 | 35.0 |
디메치콘 | 0.5 |
하이드록시에칠셀룰로오스 | 0.12 |
글리세린 | 6.0 |
트리에탄올아민 | 0.7 |
방부제, 향, 색소 | 미량 |
증류수 | 잔량 |
합계 | 100 |
<1-4> 마스크 팩용 유액
본 발명의 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물을 포함하는 항염 및 항알레르기용 유액을 제조하기 위해 하기 표 10에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.
성분 | 함량(중량%) |
실시예의 혼합물 | 0.1 |
폴리비닐알코올 | 15.0 |
셀룰로오스 검 | 0.15 |
글리세린 | 3.0 |
PEG 1500 | 2.0 |
사이클로덱스트린 | 0.15 |
DL-판테놀 | 0.4 |
알란토인 | 0.1 |
글리시리진산모노암모늄 | 0.3 |
니코틴아마이드 | 0.5 |
에탄올 | 6.0 |
PEG 40 경화 피마자유 | 0.3 |
방부제, 향, 색소 | 미량 |
증류수 | 잔량 |
합계 | 100 |
<제조예 2> 약학적 제제의 제조
<2-1> 산제의 제조
본 발명의 혼합물 10mg
유당 20mg
상기의 성분을 혼합한 후, 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<2-2> 정제의 제조
본 발명의 혼합물 10mg
옥수수전분 100mg
유당 100mg
스테아린산 마그네슘 2mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<2-3> 캡슐제의 제조
본 발명의 혼합물 10mg
결정성 셀룰로오스 3mg
락토오스 14.8mg
스테아린산 마그네슘 0.2mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<2-4> 액제의 제조
본 발명의 혼합물 100mg
이성화당 10g
만니톨 5g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 후 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조하였다.
<2-5> 주사제의 제조
본 발명의 혼합물 100 mg/㎖
묽은 염산 BP pH7.6이 될 때까지
주이용 염화나트륨 BP 최대 1㎖
적당한 용적의 주이용 염화나트륨 BP중에 본 발명의 혼합물을 용해시키고, 생성된 용액의 pH를 묽은 염산 BP를 이용하여 pH7.6으로 조절하고, 주이용 염화나트륨 BP를 이용하여 용적을 조절하고 충분히 혼합하였다. 용액을 투명 유리로 된 5㎖ 타입- 앰플 중에 충전시키고, 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부 격자 하에 봉입시키고, 120℃에서 15분 이상 오토클레이브 살균하여 주사액제를 제조하였다.
<제조예 3> 건강기능식품의 제조
<3-1> 건강 음료의 제조
본 발명의 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물의 혼합물을 하기 표 11의 성분 및 함량으로 포함하는 건강 음료를 통상적인 방법에 따라 제조하였다.
통상의 건강 음료 제조방법에 따라 표 11의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 기능성 음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
성분 | 함량 |
실시예의 혼합물 | 100 mg |
구연산 | 1000 mg |
올리고당 | 10 g |
매실 농축액 | 2.0 g |
타우린 | 1.0 g |
정제수 | 잔량 |
합계 | 100g |
비록 본 발명이 상기에 언급된 바람직한 실시예로서 설명되었으나, 발명의 요지와 범위로부터 벗어남이 없이 다양한 수정이나 변형을 하는 것이 가능하다. 또한, 첨부된 특허청구범위는 본 발명의 요지에 속하는 이러한 수정이나 변형을 포함한다.
Claims (13)
- 창이자(Xanthii fructus) 추출물 및 창이자(Xanthii fructus) 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 접촉성 피부염, 알레르기성 피부염, 아토피성 피부염, 지루성 피부염, 두드러기 또는 건선을 완화, 억제 또는 개선하는 것을 특징으로 하는 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 조성물은 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물을 1 : 0.25 내지 2의 중량비로 포함하는 것을 특징으로 하는 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 창이자 추출물의 용매는 탄소수 1 내지 4의 저급알코올인 것을 특징으로 하는 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 창이자 발효 추출물은 창이자 열수 추출물에 유산균을 접종하고 24 내지 36 ℃에서 2 내지 6일 동안 발효시킨 것임을 특징으로 하는 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물. - 제5항에 있어서,
상기 유산균은 락토바실러스 애시도필러스, 락토바실러스 파라카세이, 락토바실러스 람노서스, 락토바실러스 플랜타룸, 류코노스톡 김치아이, 류코노스톡 시트레움, 류코노스톡 메센테로이드스, 류코노스톡 가시코미타툼, 류코노스톡 락티스, 락토바실러스 사케이 및 락토바실러스 브레비스 중에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 조성물은 산화질소(NO)의 생성을 억제하고, 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase)의 분비를 억제하는 것을 특징으로 하는 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물. - (1) 창이자(Xanthii fructus)를 탄소수 1 내지 4의 저급알코올과 1 : 10 내지 30의 중량비로 혼합한 후 45 내지 75 ℃에서 추출하여 창이자 추출물을 제조하는 단계;
(2) 창이자(Xanthii fructus) 열수 추출물에 유산균을 접종한 후 발효시켜 창이자 발효 추출물을 제조하는 단계; 및
(3) (1) 단계의 창이자 추출물 및 (2) 단계의 창이자 발효 추출물을 혼합하는 단계;를 포함하는 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물의 제조방법. - 삭제
- 제8항에 있어서,
(2) 단계의 유산균은 락토바실러스 애시도필러스, 락토바실러스 파라카세이, 락토바실러스 람노서스, 락토바실러스 플랜타룸, 류코노스톡 김치아이, 류코노스톡 시트레움, 류코노스톡 메센테로이드스, 류코노스톡 가시코미타툼, 류코노스톡 락티스, 락토바실러스 사케이 및 락토바실러스 브레비스 중에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물의 제조방법. - 제8항에 있어서,
(3) 단계의 혼합은 창이자 추출물 및 창이자 발효 추출물을 1 : 0.25 내지 2의 중량비로 혼합하는 것임을 특징으로 하는 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물의 제조방법. - 창이자(Xanthii fructus) 추출물 및 창이자(Xanthii fructus) 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 약학 조성물.
- 창이자(Xanthii fructus) 추출물 및 창이자(Xanthii fructus) 발효 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 건강기능식품 조성물.
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