KR102378572B1 - 프로테아제를 함유하는 세정제 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 특히 찌든 효소-감수성 얼룩에 대해 개선된 세정력을 갖는 세정제, 바람직하게는 기계 식기세척제에 관한 것이다. 세정제는 제1 및 제2 프로테아제를 포함하며, 여기서 a) 제1 프로테아제는, 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1에 명시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하고, 서열식별번호: 1에 따른 넘버링을 사용한 위치 9, 15, 66, 212 및 239 중 1개에서의 적어도 1개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, b) 제2 프로테아제는, 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 2에 명시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하고, 서열식별번호: 2에 따른 넘버링을 사용한 위치 32, 33, 48-54, 58-62, 94-107, 116, 123-133, 150, 152-156, 158-161, 164, 169, 175-186, 197, 198 및 203-216 중 1개에서의 적어도 1개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명은 또한 상기 세정제의 용도, 및 세정제를 사용하는 세정 방법, 특히 기계 식기세척 방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 적어도 2종의 프로테아제를 함유하는 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 바람직하게는 기계 식기세척제, 뿐만 아니라 이러한 세정제의 용도에 관한 것이다.
텍스타일, 경질 표면의 세척 시에, 예컨대 특히 식기 세척 시에, 특히 기계 식기 세척 동안 가장 중요한 기준은, 특히 음식 잔류물의 형태로 도입되는 매우 다양한 오염물에 관한 경우의 세정력이다. 오늘날 사용되는 식기세척제의 세정력은 일반적으로 높지만, 또한 점점 더 저온 프로그램을 사용하는 기계 식기세척에서의 일반적인 경향으로 인해 발생하는 문제는 통상의 기계 식기세척제 중 다수가 태워진 찌든 오염물에 대해 부절절한 세정력을 나타낸다는 점이다. 이러한 부적절한 세정력 및 그로 인해 생성된 식기의 부적절한 세정은 소비자 중 일부에 대한 불만족, 및 소비자가 찌든 오염물을 예비처리하는 것을 유발하며, 이는 또한 물 및 에너지의 소비를 증가시킨다. 따라서, 심지어 찌든 오염물, 특히 태워진 오염물에 대해서도 유리한 세정력을 가지면서, 그에 의해 다른 형태의 오염물에 대해 존재하는 유리한 세정력을 감소시키지 않는 기계 식기세척제가 일반적으로 필요하다.
본 발명은 이러한 오염물에 대해 증가된 세정력을 가지면서 다른 형태의 오염물에 대한 세정력을 감소시키지 않는 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 바람직하게는 기계 식기세척제를 제공하는 문제를 해결한다.
놀랍게도, 본 발명에 이르러, 상이한 프로테아제의 조합물의 사용은 프로테아제-감수성 얼룩, 특히 태워진 음식 오염물, 특히 태워진 당-함유 음식 오염물에 대한, 상응하는 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 바람직하게는 기계 식기세척제의 세정력을 상당히 개선시키는 것으로 확립되었다.
따라서, 한 측면에서, 본 발명은 제1 프로테아제 및 제2 프로테아제를 포함하며, 여기서
a) 제1 프로테아제는, 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1에 명시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하고, 서열식별번호: 1에 따른 넘버링을 사용한 위치 9, 15, 66, 212 및 239 중 1개에서의 적어도 1개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함하고,
b) 제2 프로테아제는, 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 2에 명시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하고, 서열식별번호: 2에 따른 넘버링을 사용한 위치 32, 33, 48-54, 58-62, 94-107, 116, 123-133, 150, 152-156, 158-161, 164, 169, 175-186, 197, 198 및 203-216 중 1개에서의 적어도 1개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것인,
경질 표면용 세정제, 특히 세정제, 바람직하게는 기계 식기세척제에 관한 것이다.
세정제가 사용되는 경우에, 복수의 프로테아제의 이러한 조합물은 찌든 오염물, 특히 태워진 오염물, 특히 태워진 우유 및/또는 태워진 당-함유 오염물-예컨대 크렘 브륄레-에 관한 경우에 상당히 증진된 세정력을 생성시킨다.
본 발명의 추가의 목적은 세정 방법, 바람직하게는 식기세척 방법, 특별히 기계 식기세척 방법에서의 본원에 기재된 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 특별히 기계 식기세척제의 용도, 바람직하게는 세정력, 특히 경질 표면, 특히 식기 상의, 이들을 바람직하게는 자동 식기세척기에서 세정할 때의 프로테아제-감수성 오염물, 특히 태워진 찌든 오염물에 대한, 특히 또한 통상적으로 사용되는 온도보다 더 낮은 온도에서의 세정력을 개선시키기 위한 용도이다.
본 발명의 추가의 목적은, 특히 태워진 프로테아제-감수성 오염물에 관한 경우의 세정력을 개선시키는 목적을 위해, 본원에 기재된 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 특별히 기계 식기세척제를 사용하는 세정 방법, 바람직하게는 식기세척 방법, 특별히 기계 식기세척 방법이다. 본 발명의 다양한 실시양태에서, 통상적으로 사용되는 온도보다 더 낮은 온도가 식기세척 방법에 사용된다.
식기세척 방법의 문맥에서 본원에 사용된 "저온" 또는 "통상적으로 사용되는 온도보다 더 낮은 온도"는 바람직하게는 60℃ 미만, 특히 55℃ 미만, 보다 더 바람직하게는 50℃ 이하, 특히 바람직하게는 45℃ 이하, 가장 바람직하게는 40℃ 이하의 온도를 지칭한다. 이러한 온도 정보는 세척 단계에서 사용되는 온도를 지칭한다.
본 발명의 이들 및 추가 측면, 특색 및 이점은 하기 상세한 설명 및 청구범위의 연구 시에 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백해진다. 본 발명의 한 측면으로부터의 모든 특색은 본 발명의 임의의 다른 측면에 사용될 수 있다. 더욱이, 본원에 포함된 예가 본 발명을 기재 및 예시하도록 의도되지만, 이를 제한하지는 않는 것으로 용이하게 이해될 것이며, 특히 본 발명은 이들 예에 제한되지 않는다. 모든 백분율 정보는 달리 나타내지 않는 한, 중량 퍼센트이다. 형식 "x 내지 y"로 제시된 수치 범위는 언급된 값을 포함한다. 여러 바람직한 수치 범위가 이러한 형식으로 제시되는 경우에, 상이한 종점의 조합으로부터 생성된 모든 범위가 마찬가지로 포괄되는 것으로 용이하게 이해될 것이다.
사용되는 프로테아제는 알칼리성 세린 프로테아제이다. 이들은 비-특이적 엔도펩티다제로서 작용하며, 즉 이들은 펩티드 또는 단백질의 내부에 있는 임의의 산 아미드 결합을 가수분해시켜, 세정될 상품의 단백질-함유 오염물의 분해를 일으킨다. 그의 최적 pH는 통상적으로 명백하게 알칼리성 범위이다.
덴마크 박스베어드 소재의 노보자임스 에이/에스(Novozymes A/S)에 의해 상표명 사비나제(Savinase)® 하에 판매되는 바실루스 렌투스(Bacillus lentus)로부터의 성숙 프로테아제 서브틸리신 309, 또는 바실루스 알칼로필루스(Bacillus alkalophilus) PB92 (야생형)으로부터의 성숙 프로테아제의 서열은 각각 서열식별번호: 1 및 서열식별번호: 2로 제시되어 있다.
프로테아제와 관련하여 본원에 사용된 "상이한"은 그의 아미노산 서열 관점에서 상이한 프로테아제를 지칭한다. 다양한 실시양태에서, 서로 상이한 프로테아제는 상이한 유형의 유기체로부터 유래하거나 또는 돌연변이에 의해 서로 상이해지며, 예를 들어 인공 생성된 것들이다.
프로테아제의 문맥에서 본원에 사용된 "변이체"는 참조 형태에 비해 변형된 아미노산 서열을 갖는 천연 프로테아제의 천연 또는 인공 생성된 변이를 지칭한다. 이러한 변이체는 단일 또는 다중 점 돌연변이, 즉 상응하는 위치에서 자연적으로 발생하는 1개의 아미노산의 또 다른 것에 의한 치환, 삽입 (1개 이상의 아미노산의 도입) 및/또는 결실 (1개 이상의 아미노산의 제거), 특히 1개 이상의 점 돌연변이를 가질 수 있다. 이러한 변이체는 바람직하게는 참조 형태의 효소 활성의 적어도 50%, 바람직하게는 60% 이상, 보다 더 바람직하게는 70%, 80%, 90%, 100%, 또는 그 초과를 갖는다. 다양한 실시양태에서, 이러한 변이체는 그의 전체 길이에 걸쳐 참조로서 기능하는 서열과 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 변이체는 바람직하게는 참조 서열과 동일한 길이를 갖는다. 변이체는 참조 형태에 비해 개선된 특성, 예컨대 보다 높은 효소 활성, 보다 높은 안정성, 변경된 기질 특이성 등을 가짐으로써 두드러질 수 있다. 단지 프로테아제 활성을 나타내는 변이체만이 사용된다.
핵산 또는 아미노산 서열의 동일성은 서열 비교에 의해 결정된다. 이러한 서열 비교는 선행 기술에서 확립되고 통상적으로 사용되는 BLAST 알고리즘에 기초하며 (예를 들어, 문헌 [Altschul, S.F., Gish, W., Miller, W., Myers, E.W. & Lipman, DJ. (1990) "Basic local alignment search tool." J. Mol. Biol. 215:403-410, 및 Altschul, Stephan F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Hheng Zhang, Webb Miller, and David J. Lipman (1997): "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs"; Nucleic Acids Res., 25, p. 3389-3402], 핵산 또는 아미노산 서열에서 유사한 순서의 뉴클레오티드 또는 아미노산을 함께 연관시킴으로써 주로 행해진다. 관련 위치의 표 형식 맵핑은 정렬로서 지칭된다. 선행 기술에서 이용가능한 또 다른 알고리즘은 FASTA 알고리즘이다.
이러한 비교는 또한 서로 비교되는 서열의 유사성에 대해 정보를 제공하는 것을 가능하게 한다. 유사성은 통상적으로 퍼센트 동일성, 즉 동일한 뉴클레오티드 또는 그 중의 아미노산 잔기, 또는 정렬 시에 서로 상응하는 위치의 비율로 제시된다. 상동성의 보다 넓은 개념은 아미노산 서열의 경우에, 보존된 아미노산 치환, 즉 유사한 화학적 활성을 갖는 아미노산을 지칭하며, 이는 상기 아미노산이 단백질 내에서 대부분 유사한 화학적 활성을 표출하기 때문이다. 따라서, 비교되는 서열의 유사성은 또한 퍼센트 상동성 또는 퍼센트 유사성에 의해 제시될 수 있다. 동일성 및/또는 상동성은 전체 폴리펩티드 또는 유전자에 걸쳐, 또는 단지 개별 영역에 걸쳐 제시될 수 있다. 상이한 핵산 또는 아미노산 서열의 상동 또는 동일한 영역은 따라서 서열에서의 매칭에 의해 정의된다. 이러한 영역은 종종 동일한 기능을 갖는다. 이러한 영역은 작으며, 단지 작은 개수의 뉴클레오티드 또는 아미노산만을 포함할 수 있다. 종종, 이러한 작은 영역은 단백질의 전체 활성에 필수적인 기능을 수행한다. 따라서, 단지 개별-임의로 작은- 영역에 걸친 서열 매칭을 나타내는 것이 실용적일 수 있다. 그러나, 달리 명시되지 않는 한, 본 특허 출원에서 주어진 동일성 또는 상동성은 각각 제시된 핵산 또는 아미노산 서열의 전체 길이를 지칭한다.
본 발명에서 제1 프로테아제로서 사용되는 프로테아제는, 그의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하고, 서열식별번호: 1에 따른 넘버링을 사용한 위치 9, 15, 66, 212 및 239 중 1개에서의 적어도 1개의 아미노산 치환을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 것들이다.
따라서, 사용되는 제1 프로테아제는, 그의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하고, 서열식별번호: 1에 따른 넘버링을 사용한 위치 9, 15, 66, 212 및 239 중 1개에서의 적어도 1개의 아미노산 치환을 포함하는, 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 바실루스 렌투스로부터의 서브틸리신 309의 변이체일 수 있다. 바람직하게는, 상기 언급된 위치 중 2개, 바람직하게는 3개, 특히 4개, 가장 특히 바람직하게는 5개에서의 아미노산 치환을 갖는 프로테아제가 사용된다.
사용될 수 있는 다른 변이체는, 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열과 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하고, 여기서 위치 9, 15, 66, 212 및 239가 불변적이며, 즉 이들 위치에서의 아미노산이 서열식별번호: 3에서의 상응하는 아미노산에 상응하는 것인 아미노산 서열을 포함하는 것들이다.
서열식별번호: 1에 따른 넘버링에 기초하여 S9R, A15T, V66A, N212D 및 Q239R로부터 선택된 아미노산 치환 중 적어도 1개, 바람직하게는 2개, 특히 3개, 특히 바람직하게는 4개, 가장 특히 바람직하게는 5개를 포함하는 변이체를 사용하는 것이 특히 바람직하다. 하기 조합물이 바람직하다:
S9R+V66A+N212D+Q239R, S9R+A15T+N212D+Q239R, S9R+A15T+V66A+Q239R, S9R+A15T+V66A+N212D, A15T+V66A+N212D+Q239R; S9R+A15T+V66A, S9R+A15T+N212D, S9R+A15T+Q239R, S9R+N212D+Q239R, S9R+V66A+N212D, S9R+V66A+Q239R, A15T+V66A+N212D, A15T+V66A+Q239R, A15T+N212D+Q239R, V66A+N212D+Q239R; S9R+A15T, S9R+V66A, S9R+N212D, S9R+Q239R, A15T+V66A, A15T+N212D, A15T+Q239R, V66A+N212D, V66A+Q239R, N212D+Q239R. 모든 상기 변화를 포함하는 변이체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열 (S9R+A15T+V66A+N212D+Q239R)을 갖는다.
제2 프로테아제는 제1 프로테아제와 상이하며, 즉 제1 프로테아제의 정의 및 제2 프로테아제의 정의 둘 다에 의해 포괄되는 프로테아제는 동시에 제1 프로테아제 및 제2 프로테아제로 고려될 수는 없다.
본 발명에 따르면, 제2 프로테아제는, 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 2에 명시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하고, 서열식별번호: 2에 따른 넘버링을 사용한 하기 위치 32, 33, 48-54, 58-62, 94-107, 116, 123-133, 150, 152-156, 158-161, 164, 169, 175-186, 197, 198 및 203-216 중 1개에서의 적어도 1개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
사용될 수 있는 추가의 변이체는, 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 점점 더 바람직하게는 적어도 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% 및 99% 동일하고, 서열식별번호: 2에 따른 넘버링을 사용한 하기 위치 32, 33, 48-54, 58-62, 94-107, 116, 123-133, 150, 152-156, 158-161, 164, 169, 175-186, 197, 198 및 203-216 중 적어도 1개에서의 아미노산 치환을 보유하는 아미노산 서열을 갖는 것들이다.
사용될 수 있는 바람직한 제2 프로테아제는, 그의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하고, 서열식별번호: 2에 따른 넘버링을 사용한 위치 116, 126, 127, 128 및 160 중 1개에서의 적어도 1개의 아미노산 치환을 포함하는, 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 프로테아제의 변이체이다. 상기 언급된 위치 중 2개, 바람직하게는 3개 이상, 특히 4개에서의 아미노산 치환을 갖는 프로테아제를 사용하는 것이 바람직하다.
사용될 수 있는 추가의 변이체는, 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열과 적어도 최대 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하고, 하기 위치 116, 126, 127, 128 및 160 중 적어도 1개에서의 적어도 1개의 아미노산 치환을 보유하는 아미노산 서열을 갖는 것들이다.
특히 바람직하게는, 제2 프로테아제는, 그의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하고, 서열식별번호: 2에 따른 넘버링을 사용한 하기 아미노산 치환 중 1개를 갖는 아미노산 서열을 갖는다:
(i) G116V + S126L + P127Q + S128A
(ii) G116V + S126N + P127S + S128A + S160D
(iii) G116V + S126L + P127Q + S128A + S160D
(iv) G116V + S126V + P127E + S128K
(v) G116V + S126V + P127M + A160D
(vi) S128T
(vii) G116V + S126F + P127L + S128T
(viii) G116V + S126L + P127N + S128V
(ix) G116V + S126F + P127Q
(x) G116V + S126V + P127E + S128K +S160D
(xi) G116V + S126R + P127S + S128P
(xii) S126R + P127Q + S128D
(xiii) S126C + P127R + S128D; 또는
(xiv) S126C + P127R + S128G.
제2 프로테아제는 바람직하게는, 서열식별번호: 2에 따른 넘버링을 사용한 하기 아미노산 치환 G116V, S126L, P127Q 및/또는 S128A 중 적어도 1개, 바람직하게는 그 초과, 특히 모두를 갖고, 모든 다른 위치에서 그의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% 및 99%, 특히 최대 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 서열식별번호: 2를 갖는 아미노산 서열로부터, 서열식별번호: 2에 따른 넘버링을 사용한 아미노산 치환 G116V, S126L, P127Q 및 S128A에 의해 수득될 수 있는 아미노산 서열을 갖는 프로테아제가 특히 바람직하다.
프로테아제의 바람직한 조합물은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 프로테아제와, 서열식별번호: 2에 따른 넘버링을 사용한 하기 아미노산 치환 G116V, S126L, P127Q 및/또는 S128A 중 적어도 1개, 바람직하게는 그 초과, 특히 모두를 갖는 아미노산 서열을 갖고, 그 외에는 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 프로테아제의 조합물이다.
다양한 실시양태에서, 프로테아제의 이들 조합물은 활성 단백질을 기준으로 하여 10:1 내지 1:10, 바람직하게는 5:1 내지 1:5, 특히 2:1 내지 1:2, 예를 들어 2:3 내지 3:2의 질량 비, 특히 바람직하게는 동등 부로 사용된다.
서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 프로테아제와, 상기 기재된 제2 프로테아제, 특히 서열식별번호: 2에 따른 넘버링을 사용한 하기 아미노산 치환 G116V, S126L, P127Q 및/또는 S128A 중 적어도 1개, 바람직하게는 그 초과, 특히 모두를 갖고, 모든 다른 위치에서 그의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열과 최대 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 것을 10:1 내지 1:10, 바람직하게는 5:1 내지 1:5, 특히 2:1 내지 1:2, 예를 들어 2:3 내지 3:2의 질량 비로, 특히 바람직하게는 동등 부로 사용하는 것이 특히 바람직하다. 놀랍게도, 본원에 기재된 상이한 프로테아제의 조합물은 찌든 태워진 오염물에 관한 경우에 개선된 세정력을 생성시킴으로써 세정제, 바람직하게는 식기세척제의 능력을 개선시키는 특성을 갖는다. 세정력의 증가가 또한 저온, 즉 상기 정의된 바와 같은 식기세척 방법에서 통상적으로 사용되는 온도보다 더 낮은 온도에서 관찰될 수 있다. 이는 더 낮은 온도에서 세정 방법, 바람직하게는 기계 식기세척 방법을 수행하며, 그럼에도 불구하고 우수한 세정력을 보존하는 것을 가능하게 한다.
세정력의 개선은 일반적으로 경질 표면, 특히 식기로부터의 오염물, 특히 태워진 오염물의 제거가, 이들을 바람직하게는 자동 식기세척기에서 세정하기 위해 본원에 기재된 세정제, 특히 식기세척제를 사용함으로써, 본원에 기재된 효소 조합물을 함유하지 않는 세정제, 바람직하게는 식기세척제의 사용에 비해 주목할만하게 개선되는 것을 의미하는 것으로 이해될 것이다.
사용되는 효소는 예컨대 발효로부터의 부산물, 또는 안정화제와 함께 추가로 배합될 수 있다.
세정제, 특히 식기세척제는 바람직하게는 각각의 프로테아제를 각각의 활성 단백질을 기준으로 하여 1x10-8 내지 5 wt%의 양으로 함유한다. 바람직하게는 0.001 내지 2 wt%, 보다 바람직하게는 0.005 내지 1.5 wt%, 보다 더 바람직하게는 0.01 내지 1 wt%, 특히 바람직하게는 0.01 내지 0.5 wt%의 각각의 효소가 이들 세정제에 존재한다.
특히 바람직한 실시양태에서, 제1 프로테아제는 활성 단백질을 기준으로 하여 0.01 내지 1 wt%, 바람직하게는 0.025 내지 0.5 wt%의 총량으로 본원에 기재된 세정제에 사용된다. 유사하게, 제2 프로테아제는 바람직하게는 활성 단백질을 기준으로 하여 0.005 내지 0.75 wt%, 바람직하게는 0.01 내지 0.5 wt%의 총량으로 사용된다. 바람직한 제1 프로테아제는 0.025 내지 0.5 wt%의, 서열식별번호: 3의 서열을 갖는 프로테아제이고, 바람직한 제2 프로테아제는 서열식별번호: 2에 따른 넘버링을 사용한 하기 아미노산 치환 G116V, S126L, P127Q 및/또는 S128A 중 적어도 1개, 바람직하게는 그 초과, 특히 모두를 갖고, 모든 다른 위치에서 그의 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열과 최대 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 0.01 내지 0.5 wt%의 프로테아제이다. 액체 배합물에서, 효소는 바람직하게는 액체 효소 배합물(들)의 형태로 사용된다.
단백질 농도는 공지된 방법, 예컨대 BCA 방법 (비신코닌산; 2,2-비키놀닐-4,4'-디탄산) 또는 뷰렛 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 이와 관련하여 활성 단백질 농도는 적합한 비가역적 억제제 (프로테아제에 대해, 예를 들어 페닐메틸술포닐 플루오라이드 (PMSF))를 사용하는 활성 중심의 적정 및 잔류 활성의 결정에 의해 결정된다 (문헌 [M. Bender et al., J. Am. Chem. Soc. 88, 24 (1966), pp. 5890-5913] 참조).
특히 저장 동안, 프로테아제는, 예를 들어 물리적 영향, 산화 또는 단백질분해적 절단으로 인한 손상, 예컨대 불활성화, 변성 또는 붕해에 대해 보호될 수 있다. 단백질분해를 억제하는 것은 미생물 생산의 경우에 특히 바람직하다. 기재된 세정제는 이러한 목적을 위해 안정화제를 함유할 수 있다.
세정 작용을 갖는 프로테아제는 일반적으로 순수한 단백질의 형태로 제공되기 보다는, 안정화되고 저장가능하고 수송가능한 제제의 형태로 제공된다. 이들 예비배합된 제제는, 예를 들어 과립화, 압출 또는 동결건조에 의해 수득된 고체 제제, 또는 특히 액체 또는 겔상 세정제의 경우에, 유리하게는 가능한 정도로 저-수화물로 농축되고/거나 안정화제 또는 다른 보조제와 혼합된 효소의 용액을 포함한다.
대안적으로, 효소는 고체 및 액체 포장 형식 둘 다를 위해, 예를 들어 효소 용액을 바람직하게는 천연 중합체와 함께 분무 건조 또는 압출시킴으로써, 또는 캡슐의 형태, 예를 들어 효소가 고체화된 겔로 둘러싸인 것들로, 또는 효소-함유 코어가 물, 공기 및/또는 화학물질에 불침투성인 보호 층으로 코팅된 코어-쉘 유형의 것들로 캡슐화될 수 있다. 추가의 활성제, 예컨대 안정화제, 유화제, 안료, 표백제 또는 염료가 중첩된 층에 추가적으로 적용될 수 있다. 이러한 캡슐은 그 자체로 공지된 방법, 예를 들어 교반 또는 롤 과립화를 사용하여 또는 유동층 공정으로 적용된다. 이러한 과립은 유리하게는, 예를 들어 중합체 필름 형성제를 적용함으로써 저-분진성이며, 코팅으로 인해 저장 안정성이다.
개별 과립이 다중 효소 활성을 갖도록 2종 이상의 효소를 함께 추가로 배합하는 것이 가능하다.
상기 코멘트로부터 명백한 바와 같이, 효소 단백질은 단지 통상의 효소 제제의 총 중량의 일부를 형성한다. 바람직하게 사용되는 프로테아제 제제는 0.1 내지 40 wt%, 바람직하게는 0.2 내지 30 wt%, 특히 바람직하게는 0.4 내지 20 wt%, 특히 0.8 내지 15 wt%의 효소 단백질을 함유한다. 따라서, 기재된 세정제는 바람직하게는 이러한 효소 제제를 각 경우에 전체 세정제를 기준으로 하여 0.1 내지 10 wt%, 바람직하게는 0.2 내지 5 wt%의 양으로 포함한다.
본원에 기재된 세정제, 특히 바람직한 기계 식기세척제는 고체 또는 액체 성질의 것일 수 있으며, 특히 분말상 고체로서, 압축후 입자 형태로, 균질 용액 또는 현탁액으로서 존재할 수 있다. 본 발명의 추가의 바람직한 실시양태에서, 기계 식기세척제는 사전배분된 형태로 존재한다. 본 발명의 추가의 바람직한 실시양태에서, 기계 식기세척제는 공간적으로 서로 분리된 복수의 조성물을 포함하고, 그에 의해 서로 비상용성인 성분을 분리하거나 또는 식기세척기에서 상이한 시점에서 사용되는 조합물로 조성물을 제공하는 것이 가능하다. 이는 기계 식기세척제가 사전배분된 형태로 존재하는 경우에 특히 유리하다. 조성물 중 적어도 1종은 고체 형태로 존재할 수 있고/거나 조성물 중 적어도 1종은 액체 형태로 존재할 수 있으며, 여기서 프로테아제는 조성물 중 적어도 1종에 존재하지만, 또한 복수의 조성물에 존재할 수 있다.
본원에 기재된 세정제는 바람직하게는, 빌더, 계면활성제, 중합체, 표백제, 표백 촉매, 표백 활성화제, 비-프로테아제 효소, 부식 억제제 및 유리 부식 억제제, 붕해 부형제, 부취제 및 퍼퓸 담체로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 추가의 성분, 특히 적어도 2종의 추가의 성분을 포함한다.
본원에 기재된 세정제, 특히 식기세척제, 바람직하게는 기계 식기세척제에 유리하게 사용될 수 있는 가능한 성분은 하기 기재되어 있다.
유리하게는, 빌더가 사용될 수 있다. 빌더는 특히 제올라이트, 실리케이트, 카르보네이트, 유기 코빌더 및 -이들의 사용에 대해 생태학적 편향이 없는 경우에- 또한 포스페이트를 포함한다.
결정질 층상 실리케이트가 본원에 기재된 세정제에 사용될 수 있다. 이러한 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 특히 기계 식기세척제는 각 경우에 이들 세정제의 총 중량을 기준으로 하여 0.1 내지 20 wt%, 바람직하게는 0.2 내지 15 wt%, 특히 0.4 내지 10 wt%의 중량 분율의 결정질 층상 실리케이트를 함유한다.
일반적으로 공지된 포스페이트를 빌더 물질로서 사용하는 것이 또한 가능하며, 단 이러한 사용이 생태학적 이유로 회피되지는 않아야 한다. 복수의 상업적으로 입수가능한 포스페이트 중에서, 알칼리 금속 포스페이트가 세탁 또는 세정제 산업에서 가장 큰 유의성을 가지며, 펜타소듐 및 펜타포타슘 트리포스페이트 (소듐 또는 포타슘 트리폴리포스페이트)가 특히 바람직하다.
알칼리 금속 포스페이트는 상이한 인산의 모든 알칼리 금속 (특히, 소듐 및 포타슘) 염을 포괄하는 용어이며, 여기서 보다 고분자량인 대표예 이외에도, 메타인산 (HPO3)n과 오르토인산 H3PO4 사이에 구별이 이루어질 수 있다. 포스페이트는 여러 이점을 조합한다: 이들은 알칼리 담체로서 작용하고, 기계 부품 상의 석회스케일 침착물 또는 직조 직물 상의 석회 스케일링을 방지하고, 추가적으로 세정력에 기여한다.
기술적으로 특히 중요한 포스페이트는 펜타소듐 트리포스페이트, Na5P3O10 (소듐 트리폴리포스페이트) 및 상응하는 포타슘 염 펜타포타슘 트리포스페이트, K5P3O10 (포타슘 트리폴리포스페이트)이다. 소듐 포타슘 트리폴리포스페이트가 바람직하게 사용된다.
본 출원의 범주 내에서, 포스페이트가 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 특히 기계 식기세척제에서 세척 또는 세정 작용을 갖는 물질로서 사용되는 경우에, 바람직한 세정제는 바람직하게는 이러한 (이들) 포스페이트(들), 바람직하게는 알칼리 금속 포스페이트(들), 특히 바람직하게는 펜타소듐 또는 펜타포타슘 트리포스페이트 (소듐 또는 포타슘 트리폴리포스페이트)를 각 경우에 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 특히 기계 식기세척제의 중량을 기준으로 하여 5 내지 80 wt%, 바람직하게는 15 내지 75 wt%, 특히 20 내지 70 wt%의 양으로 포함한다.
다른 빌더는 알칼리 담체이다. 알칼리 담체의 유효한 예는 알칼리 금속 히드록시드, 알칼리 금속 카르보네이트, 알칼리 금속 히드로겐 카르보네이트, 알칼리 금속 세스퀴카르보네이트, 기재된 알칼리 실리케이트, 알칼리 금속 실리케이트 및 상기 언급된 물질의 혼합물을 포함하며, 여기서 본 발명의 의미 내에서 바람직하게는 알칼리 카르보네이트, 특히 소듐 카르보네이트, 소듐 히드로겐 카르보네이트 또는 소듐 세스퀴카르보네이트가 사용될 수 있다. 트리폴리포스페이트 및 소듐 카르보네이트의 혼합물을 함유하는 빌더 시스템이 특히 바람직하다. 트리폴리포스페이트 및 소듐 카르보네이트 및 소듐 실리케이트의 혼합물을 함유하는 빌더 시스템이 마찬가지로 특히 바람직하다. 임의적인 알칼리 금속 히드록시드와 세정제, 특히 식기세척제, 바람직하게는 기계 식기세척제의 잔류 성분의, 다른 빌더 물질에 비해 낮은 화학적 상용성으로 인해, 이들은 단지 소량으로만 사용되거나, 또는 전혀 사용되지 않는다.
카르보네이트(들) 및/또는 히드로겐 카르보네이트(들), 바람직하게는 알칼리 카르보네이트(들), 특히 바람직하게는 소듐 카르보네이트의, 각 경우에 세정제, 바람직하게는 기계 식기세척제의 중량을 기준으로 하여 2 내지 50 wt%, 바람직하게는 5 내지 40 wt%, 특히 7.5 내지 30 wt%의 양으로의 사용이 특히 바람직하다. 기계 식기세척제의 중량을 기준으로 하여 20 wt% 미만, 특별히 17 wt% 미만, 바람직하게는 13 wt% 미만, 특히 9 wt% 미만의 카르보네이트(들) 및/또는 히드로겐 카르보네이트(들), 바람직하게는 알칼리 카르보네이트(들), 특히 바람직하게는 소듐 카르보네이트를 함유하는 세정제가 특히 바람직하다.
특히, 폴리카르복실레이트/폴리카르복실산, 중합체 폴리카르복실레이트, 아스파르트산, 폴리아세탈, 덱스트린, 추가의 유기 코빌더 및 포스포네이트는 유기 코빌더로서 언급될 것이다. 이들 물질 부류는 하기 기재되어 있다.
사용가능한 유기 빌더 물질은, 예를 들어 유리 산 및/또는 그의 소듐 염의 형태로 사용될 수 있는 폴리카르복실산이며, 여기서 폴리카르복실산은 1개 초과의 산 관능기를 보유하는 이들 카르복실산을 의미하는 것으로 이해될 것이다. 이들은, 예를 들어 시트르산, 아디프산, 숙신산, 글루타르산, 말산, 타르타르산, 말레산, 푸마르산, 당산, 니트릴로트리아세트산 (NTA) (단, 이러한 사용이 생태학적 이유로 허용되지 않는 것은 아님), 및 그의 혼합물을 포함할 수 있다. 빌더 효과 이외에도, 유리 산은 전형적으로 또한 산성화 성분인 특성을 가지며, 따라서 또한 보다 낮고 보다 온화한 pH 값을 설정하기 위한 작용제로서 사용된다. 특히, 시트르산, 숙신산, 글루타르산, 아디프산, 글루콘산 및 이들의 임의의 혼합물이 본원에 언급될 것이다.
이들 세정제에서의 시트르산 및/또는 시트레이트의 사용은 본원에 기재된 세정제의 세정력 및 헹굼력에 특히 유리한 것으로 입증되었다. 따라서, 세정제가 시트르산 또는 시트르산의 염을 함유하고, 시트르산 또는 시트르산의 염의 중량 분율이 특별히 10 wt% 초과, 바람직하게는 15 wt% 초과, 특히 20 내지 40 wt%인 것을 특징으로 하는 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 특히 바람직하게는 기계 식기세척제가 바람직하다.
아미노카르복실산 및/또는 그의 염은 포스페이트-무함유 빌더의 또 다른 유의한 부류이다. 이러한 부류의 특히 바람직한 대표예는 메틸글리신 디아세트산 (MGDA) 또는 그의 염, 및 글루타민 디아세트산 (GLDA) 또는 그의 염, 또는 에틸렌디아민 디아세트산 (EDDS) 또는 그의 염이다. 이들 아미노 카르복실산 또는 그의 염의 함량은, 예를 들어 0.1 내지 15 wt%, 바람직하게는 0.5 내지 10 wt%, 특히 0.5 내지 6 wt%의 양일 수 있다. 아미노카르복실산 및 그의 염은 상기 언급된 빌더, 특히 또한 포스페이트-무함유 빌더와 함께 사용될 수 있다.
더욱이, 적합한 빌더는 중합체 폴리카르복실레이트를 포함하며; 예를 들어, 이들은 폴리아크릴산 또는 폴리메타크릴산의 알칼리 금속 염, 예를 들어 500 내지 70,000 g/mol의 상대 몰 질량을 갖는 것들이다. 적합한 중합체는 특히, 바람직하게는 2000 내지 20,000 g/mol의 몰 질량을 갖는 폴리아크릴레이트이다. 그의 우월한 용해도로 인해, 2000 내지 10,000 g/mol, 특히 바람직하게는 3000 내지 5000 g/mol의 몰 질량을 갖는 단쇄 폴리아크릴레이트가 또한 이러한 군에서 바람직할 수 있다.
공중합체 폴리카르복실레이트, 아크릴산과 메타크릴산의 것들, 특히 아크릴산 또는 메타크릴산과 말레산의 것들이 또한 적합하다.
(공)중합체 폴리카르복실레이트는 분말로서 또는 수용액으로서 사용될 수 있다. 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 특히 기계 식기세척제 중 (공)중합체 폴리카르복실레이트의 함량은 바람직하게는 0.5 내지 20 wt%, 특히 3 내지 10 wt%이다.
수용해도를 개선시키기 위해, 중합체는 알릴 술폰산, 예컨대 알릴옥시벤젠 술폰산 및 메트알릴 술폰산을 단량체로서 또한 함유할 수 있다. 추가의 바람직한 공중합체는 아크롤레인 및 아크릴산/아크릴산 염 또는 아크롤레인 및 비닐아세테이트를 단량체로서 함유하는 것들이다.
더욱이, 알칼리 토류 이온과 착물을 형성할 수 있는 모든 화합물이 빌더로서 사용될 수 있다.
본원에 기재된 세정제는 계면활성제를 포함할 수 있으며, 여기서 비이온성, 음이온성, 양이온성 및 양쪽성 계면활성제가 계면활성제의 군에 포함된다.
관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 모든 비이온성 계면활성제는 비이온성 계면활성제로서 사용될 수 있다. 적합한 비이온성 계면활성제는, 예를 들어 화학식 RO(G)x의 알킬 글리코시드이며, 여기서 R은 8 내지 22개, 바람직하게는 12 내지 18개의 탄소 원자를 갖는 1급 직쇄 또는 메틸-분지형, 특히 2-위치에서 메틸-분지형인 지방족 기에 상응하고, G는 5 또는 6개의 탄소 원자를 갖는 글리코스 단위, 바람직하게는 글루코스를 나타내는 기호이다. 모노글리코시드 및 올리고글리코시드의 분포를 나타내는 올리고머화도 x는 1 내지 10의 임의의 수이고; x는 바람직하게는 1.2 내지 1.4이다.
단독 비이온성 계면활성제로서 또는 다른 비이온성 계면활성제와 조합되어 사용될 수 있는 바람직하게 사용될 수 있는 비이온성 계면활성제의 또 다른 부류는 알킬 쇄 내에 바람직하게는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 알콕실화, 바람직하게는 에톡실화 또는 에톡실화 및 프로폭실화 지방 알킬 에스테르이다.
아민 옥시드 유형, 예를 들어 N-코코알킬-N,N-디메틸아민 옥시드 및 N-탈로우알킬-N,N-디히드록시에틸아민 옥시드, 및 지방산 알칸올아미드 유형의 비이온성 계면활성제가 또한 적합할 수 있다. 이들 비이온성 계면활성제의 양은 바람직하게는 에톡실화 지방 알콜의 양 이하, 특히 그의 절반 이하이다.
추가의 적합한 계면활성제는 PHFA로도 공지된 폴리히드록시지방산 아미드이다.
저-발포성 비이온성 계면활성제는 바람직한 계면활성제로서 사용될 수 있다. 특히 바람직하게는, 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 특히 기계 식기세척제는 알콕실화 알콜의 군으로부터의 비이온성 계면활성제를 함유한다. 특히 바람직하게는 8 내지 18개의 탄소 원자 및 알콜 mol당 평균 1 내지 12 mol의 에틸렌 옥시드 (EO)를 갖는 알콕실화, 유리하게는 에톡실화 1급 알콜에서, 알콜 잔기가 선형 또는 바람직하게는 2-위치에서 메틸-분지형일 수 있거나, 또는 혼합물로의 선형 및 메틸-분지형 잔기, 예컨대 통상적으로 옥소 알콜 기에 존재하는 것들을 함유할 수 있는 것이, 비이온성 계면활성제로서 바람직하게 사용된다. 그러나, 12 내지 18개의 탄소 원자를 갖는 천연 기원의 알콜, 예를 들어 코코넛, 팜, 탈로우 지방 또는 올레일 알콜의 선형 기 및 알콜 mol당 평균 2 내지 8 mol EO를 갖는 알콜 에톡실레이트가 특히 바람직하다. 바람직한 에톡실화 알콜은, 예를 들어 3개의 EO 또는 4개의 EO를 갖는 C12-14 알콜, 7개의 EO를 갖는 C9-11 알콜, 3개의 EO, 5개의 EO, 7개의 EO 또는 8개의 EO를 갖는 C13-15 알콜, 3개의 EO, 5개의 EO 또는 7개의 EO를 갖는 C12-18 알콜, 및 그의 혼합물, 예컨대 3개의 EO를 갖는 C12-14 알콜 및 5개의 EO를 갖는 C12-18 알콜의 혼합물을 포함한다. 제시된 에톡실화도는 특정한 생성물에 대해 정수 또는 분수에 상응할 수 있는 통계적 평균을 나타낸다. 바람직한 알콜 에톡실레이트는 동족체의 한정된 분포 (좁은 범위 에톡실레이트, NRE)를 나타낸다. 이들 비이온성 계면활성제 이외에도, 12개 초과의 EO를 갖는 지방 알콜이 또한 사용될 수 있다. 이들의 예는 14개의 EO, 25개의 EO, 30개의 EO 또는 40개의 EO를 갖는 탈로우 지방 알콜이다.
실온 초과의 융점을 갖는 비이온성 계면활성제가 특히 바람직하다. 20℃ 초과, 바람직하게는 25℃ 초과, 특히 바람직하게는 25 내지 60℃, 특히 26.6 내지 43.3℃의 융점을 갖는 비이온성 계면활성제가 특히 바람직하다.
바람직하게 사용되는 계면활성제는 알콕실화 비이온성 계면활성제, 특히 에톡실화 1급 알콜의 군으로부터 유래한다.
음이온성 계면활성제가 마찬가지로 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 특히 기계 식기세척제의 성분으로서 사용된다. 이들은 특히 알킬벤젠 술포네이트, (지방) 알킬 술페이트, (지방) 알킬 에테르 술페이트 및 알칸술포네이트를 포함한다. 세정제의 음이온성 계면활성제 함량은 통상적으로 0 내지 10 wt%이다.
양이온성 및/또는 양쪽성 계면활성제는 또한 언급된 계면활성제 대신에 또는 그와 함께 사용될 수 있다. 세정제, 특히 식기세척제, 바람직하게는 기계 식기세척제에서, 양이온성 및/또는 양쪽성 계면활성제의 함량은 특별히 6 wt% 미만, 바람직하게는 4 wt% 미만, 특히 바람직하게는 2 wt% 미만, 특히 1 wt% 미만이다. 양이온성 또는 양쪽성 계면활성제를 함유하지 않는 세정제가 특히 바람직하다.
중합체의 군은 특히 세척 또는 세정 작용을 갖는 중합체, 예를 들어 린스 중합체 및/또는 연화제로서 작용하는 중합체를 포함한다. 비이온성 중합체 이외에도, 일반적으로 양이온성, 음이온성 및 양쪽성 중합체가 또한 기계 식기세척제에 사용될 수 있다.
본 발명의 의미 내에서 "양이온성 중합체"는 중합체 분자 내에 양전하를 보유하는 중합체이다. 이러한 전하는, 예를 들어 중합체 쇄에 존재하는 (알킬)암모늄 기화 또는 다른 양으로 하전된 기에 의해 구현될 수 있다. 특히 바람직한 양이온성 중합체는 4급화된 셀룰로스 유도체, 4급 기를 갖는 폴리실록산, 양이온성 구아 유도체, 중합체 디메틸디알릴암모늄 염, 및 그와 아크릴산 및 메타크릴산의 에스테르 및 아미드의 공중합체, 비닐피롤리돈과 디알킬아미노아크릴레이트 및 -메타크릴레이트의 4급화된 유도체의 공중합체, 비닐피롤리돈/메토이미다졸리늄 클로라이드 공중합체, 4급화된 폴리비닐 알콜, 또는 INCI 명칭 폴리쿼터늄 2, 폴리쿼터늄 17, 폴리쿼터늄 18 및 폴리쿼터늄 27에 의해 기재된 중합체의 군으로부터 유래한다.
본 발명의 의미 내에서 "양쪽성 중합체"는 중합체 쇄 내에 양으로 하전된 기 이외에도 음으로 하전된 기 또는 단량체 단위를 추가로 포함한다. 이들 기는, 예를 들어 카르복실산, 술폰산 또는 포스폰산일 수 있다.
바람직하게 사용되는 양쪽성 중합체는 알킬아크릴아미드/아크릴산 공중합체, 알킬아크릴아미드/메타크릴산 공중합체, 알킬아크릴아미드/메틸메타크릴산 공중합체, 알킬아크릴아미드/아크릴산/알킬 아미노알킬(메트)아크릴산 공중합체, 알킬아크릴아미드/메타크릴산/알킬아미노알킬(메트)아크릴산 공중합체, 알킬아크릴아미드/메틸메타크릴산/알킬아미노알킬(메트)아크릴산 공중합체, 알킬아크릴아미드/알킬 메타크릴레이트/알킬아미노 에틸 메타크릴레이트/알킬 메타크릴레이트 공중합체, 및 불포화 카르복실산, 양이온성으로 유도체화된 불포화 카르복실산 및 임의로 추가의 이온성 또는 비-이온생성 단량체의 공중합체의 군으로부터 유래한다.
바람직한 쯔비터이온성 중합체는 아크릴아미도알킬트리알킬암모늄 클로라이드/아크릴산 공중합체 및 그의 알칼리 및 암모늄 염, 아크릴아미도알킬트리알킬암모늄 클로라이드/메타크릴산 공중합체 및 그의 알칼리 및 암모늄 염, 및 메타크로일에틸베타인/메타크릴레이트 공중합체의 군으로부터 유래한다.
세정제, 특히 식기세척제, 바람직하게는 기계 식기세척제는 바람직하게는 양이온성 및/또는 양쪽성 중합체를 각 경우에 기계 식기세척제의 총 중량을 기준으로 하여 0.01 내지 10 wt%의 양으로 함유한다. 그러나, 양이온성 및/또는 양쪽성 중합체의 중량 분율이 각 경우에 기계 식기세척제의 총 중량을 기준으로 하여 0.01 내지 8 wt%, 특별히 0.01 내지 6 wt%, 바람직하게는 0.01 내지 4 wt%, 특히 바람직하게는 0.01 내지 2 wt%, 특히 0.01 내지 1 wt%인 기계 식기세척제가 본 출원의 범주 내에서 바람직하다.
표백제가 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 특히 기계 식기세척제에 추가로 사용될 수 있다. 표백제로서 기능하고 물 중에서 H2O2를 생성시키는 화합물 중에서, 소듐 퍼카르보네이트, 소듐 퍼보레이트 4수화물 및 소듐 퍼보레이트 1수화물이 특히 중요하다. 추가의 사용가능한 표백제는, 예를 들어 퍼옥시피로포스페이트, 시트레이트 퍼히드레이트, 및 H2O2를 생성시키는 과산 염 또는 과산, 예컨대 퍼벤조에이트, 퍼옥소프탈레이트, 디퍼아젤라산, 프탈로이미도 과산 또는 디퍼도데칸디오산이다. 선행 기술로부터 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 모든 추가의 무기 또는 유기 퍼옥시 표백제가 또한 사용될 수 있다.
염소 또는 브로민을 방출하는 물질이 또한 표백제로서 사용될 수 있다. 염소 또는 브로민을 방출하는 적합한 물질 중에서, 예를 들어 헤테로시클릭 N-브롬아미드 및 N-클로르아미드, 예컨대 트리클로로이소시아누르산, 트리브로모이소시아누르산, 디브로모이소시아누르산 및/또는 디클로로이소시아누르산 (DICA), 및/또는 그와 양이온 예컨대 포타슘 및 소듐의 염이 고려될 수 있다. 히단토인 화합물, 예컨대 1,3-디클로로-5,5-디메틸히단토인이 마찬가지로 적합하다.
1 내지 35 wt%, 바람직하게는 2.5 내지 30 wt%, 특히 바람직하게는 3.5 내지 20 wt%, 특히 5 내지 15 wt%의 표백제, 바람직하게는 소듐 퍼카르보네이트를 함유하는 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 특히 기계 식기세척제가 바람직하다.
세정제, 바람직하게는 식기세척제, 특히 기계 식기세척제는 표백 촉매를 추가로 함유할 수 있다. 사용가능한 표백 촉매는 표백-부스팅 전이 금속 염 및 전이 금속 착물, 바람직하게는 Mn, Fe, Co, Ru 또는 Mo 착물의 군, 특히 바람직하게는 망가니즈 및/또는 코발트 염 및/또는 착물, 특히 코발트 (암민) 착물, 코발트 (아세테이트) 착물, 코발트 (카르보닐) 착물, 코발트 또는 망가니즈의 클로라이드, 망가니즈 술페이트, 및 망가니즈와 1,4,7-트리메틸-1,4,7-트리아자시클로노난 (Mn3-TACN) 또는 1,2,4,7-테트라메틸-1,4,7-트리아자시클로노난 (Mn4-TACN)의 착물의 군을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
0.001 내지 1 wt%, 바람직하게는 0.01 내지 0.1 wt%의 표백 촉매, 바람직하게는 Mn 착물, 특히 망가니즈와 1,4,7-트리메틸-1,4,7-트리아자시클로노난 (Mn3-TACN) 또는 1,2,4,7-테트라메틸-1,4,7-트리아자시클로노난 (Mn4-TACN)의 착물을 함유하는 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 특히 기계 식기세척제가 바람직하다.
본 발명의 다양한 실시양태에서, 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 특히 기계 식기세척제는 적어도 1종의 표백 활성화제를 추가적으로 함유한다. 과가수분해 조건 하에 바람직하게는 1 내지 10개의 탄소 원자, 특히 2 내지 4개의 탄소 원자 및/또는 임의로 치환된 퍼벤조산을 갖는 지방족 퍼옥소카르복실산을 생성시키는 화합물이 표백 활성화제로서 사용될 수 있다. 선행 기술로부터 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 모든 표백 활성화제 중에서, 폴리아실화 알킬렌디아민, 특히 테트라 아세틸 에틸렌 디아민 (TAED), 아실화 트리아진 유도체, 특히 1,5-디아세틸-2,4-디옥소헥사히드로-1,3,5-트리아진 (DADHT), 아실화 글리콜우릴, 특히 테트라아세틸 글리콜우릴 (TAGU), N-아실이미드, 특히 N-노나노일 숙신이미드 (NOSI), 아실화 페놀술포네이트, 특히 n-노나노일 또는 이소-노나노일 옥시벤젠 술포네이트 (n- 또는 이소-NOBS)가 특히 바람직하다. 통상적인 표백 활성화제의 조합물을 사용하는 것이 또한 가능하다. 이들 표백 활성화제는 바람직하게는 각 경우에 표백제 활성화제-함유 세정제의 총 중량을 기준으로 하여 최대 10 wt%, 특히 0.1 wt% 내지 8 wt%, 특히 2 내지 8 wt%, 특히 바람직하게는 2 내지 6 wt%의 양으로 사용된다.
본 발명의 세정제는 바람직하게는, 1종 이상의 비-프로테아제 효소를 함유하는 적어도 1종의 추가의 효소 제제 또는 효소 조성물을 함유한다. 이러한 효소는 아밀라제, 리파제, 셀룰라제, 헤미셀룰라제, 만난아제, 펙틴-절단 효소, 탄난아제, 크실라나제, 크산타나제, β-글리코시다제, 카라기난아제, 퍼히드롤라제, 옥시다제, 옥시도리덕타제 및 그의 혼합물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직한 효소는 특히 아밀라제, 특히 α-아밀라제, 셀룰라제, 리파제, 헤미셀룰라제, 특히 펙티나제, 만난아제, β-글루카나제 및 그의 혼합물을 포함한다. 아밀라제 및/또는 리파제 및 그의 혼합물이 특히 바람직하다. 이들 효소는 원칙적으로 천연 기원의 것이며; 천연 분자로부터 진행하여, 개선된 변이체는 세척 또는 세정제에 사용하기 위해 이용가능하고, 상응하게 바람직한 방식으로 사용될 수 있다.
사용되는 프로테아제와 관련하여 양 및 배합물 형태에 대해 제공된 정보는 또한 모든 추가의 상기 기재된 효소에 필요한 변경을 가하여 적용한다.
유리 부식 억제제는 혼탁, 줄무늬 및 스크래치의 출현, 뿐만 아니라 기계-세정된 유리제품의 유리 표면의 훈색을 방지한다. 바람직한 유리 부식 억제제는 마그네슘 및 아연 염 및 마그네슘 및 아연 착물의 군으로부터 유래한다. 본 발명의 범주 내에서, 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 특히 기계 식기세척제 중 아연 염의 함량은 특별히 0.1 내지 5 wt%, 바람직하게는 0.2 내지 4 wt%, 특히 0.4 내지 3 wt%이거나, 또는 산화된 형태의 아연의 함량 (Zn2 +로서 계산됨)은 각 경우에 유리 부식 억제제-함유 세정제의 총 중량을 기준으로 하여 0.01 내지 1 wt%, 특별히 0.02 내지 0.5 wt%, 특히 0.04 내지 0.2 wt%이다.
예비제작된 성형체의 분해를 용이하게 하기 위해, 정제 붕해제로서 공지된 붕해 부형제를 이들 세정제에 혼입하여 분해 시간을 단축시키는 것이 가능하다. 정제 붕해제 또는 분해 촉진제는 물 또는 다른 매질 중에서의 정제의 급속한 분해, 및 활성제의 빠른 방출을 보장하는 부형제를 의미하는 것으로 이해된다. 붕해 부형제는 바람직하게는 각 경우에 붕해 부형제를 포함하는 세정제의 총 중량을 기준으로 하여 0.5 내지 10 wt%, 바람직하게는 3 내지 7 wt%, 특히 4 내지 6 wt%의 양으로 사용될 수 있다.
개별 냄새 물질 화합물, 예컨대 에스테르, 에테르, 알데히드, 케톤, 알콜 및 탄화수소 유형의 합성 생성물은 본 발명의 범주 내에서 퍼퓸 오일 또는 부취제로서 사용될 수 있다. 그러나, 바람직하게는 함께 매력적인 냄새 노트를 생성시키는 상이한 냄새 물질의 혼합물이 사용된다. 이러한 퍼퓸 오일은 천연 냄새 물질 혼합물 예컨대 식물 공급원, 예를 들어 소나무, 시트러스, 자스민, 파출리, 장미 또는 일랑일랑 오일로부터 접근가능한 것들을 또한 함유할 수 있다. 본원에 기재된 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 특히 기계 식기세척제는 다양한 방식으로 배합될 수 있다. 세정제는 고체 또는 액체 제시 형태로 또는 고체 및 액체 제시 형태의 조합물로서 존재할 수 있다. 적합한 고체 제시 형태는, 특히 분말, 과립, 압출물, 압축물, 특히 정제이다. 물 및/또는 유기 용매를 기재로 하는 액체 제시 형태는 농후한 형태로, 겔 형태로 존재할 수 있다. 본원에 기재된 세정제는 단일-상 또는 다중-상 생성물 형태로 배합될 수 있다.
본원에 기재된 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 특히 기계 식기세척제는 투여 단위로서 바람직하게는 예비배합된다. 이들 투여 단위는 바람직하게는 1회의 세척 사이클에 필요한 양의 세척 또는 세정 작용을 갖는 물질을 포함한다.
본원에 기재된 세정제, 바람직하게는 식기세척제, 특히 기계 식기세척제, 특히 예비제작된 투여 단위는 특히 바람직하게는 수용성 포장재를 포함한다.
수용성 포장재는 바람직하게는 중합체 또는 중합체 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 수용성 필름 물질로 형성된다. 포장재는 수용성 필름 물질의 1개의 층 또는 2개 이상의 층으로 형성될 수 있다. 제1 층의 수용성 필름 물질 및 존재하는 경우에 추가의 층의 수용성 필름 물질은 동일하거나 상이할 수 있다. 필름에 세정제를 충전한 후에 접합 및/또는 밀봉하여 포장물, 예컨대 튜브 또는 쿠션을 형성할 수 있는 필름이 특히 바람직하다.
수용성 포장재는 폴리비닐 알콜 또는 폴리비닐 알콜 공중합체를 포함하는 것이 바람직하다. 폴리비닐 알콜 또는 폴리비닐 알콜 공중합체를 포함하는 수용성 포장재는 우수한 안정성 및 충분히 높은 수용해도, 특히 냉수 용해도를 나타낸다.
수용성 포장재를 제조하기에 적합한 수용성 필름은 바람직하게는, 10,000 내지 1,000,000 gmol-1, 바람직하게는 20,000 내지 500,000 gmol-1, 특히 바람직하게는 30,000 내지 100,000 gmol-1, 특히 40,000 내지 80,000 gmol-1 범위의 분자량을 갖는 폴리비닐 알콜 또는 폴리비닐 알콜 공중합체를 기재로 한다.
폴리비닐 알콜은 직접적 합성 경로가 가능하지 않기 때문에, 전형적으로 폴리비닐 아세테이트의 가수분해에 의해 제조된다. 따라서 폴리비닐 아세테이트 공중합체로부터 제조된 폴리비닐 알콜 공중합체에도 동일한 것이 적용된다. 수용성 포장재의 적어도 1개의 층이 70 내지 100 mol%, 바람직하게는 80 내지 90 mol%, 특히 바람직하게는 81 내지 89 mol%, 특히 82 내지 88 mol%의 가수분해도를 갖는 폴리비닐 알콜을 포함하는 경우가 바람직하다.
추가적으로, (메트)아크릴산-함유 (공)중합체, 폴리아크릴아미드, 옥사졸린 중합체, 폴리스티렌 술포네이트, 폴리우레탄, 폴리에스테르, 폴리에테르, 폴리락트산 또는 상기 중합체의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 중합체는 수용성 포장재를 제조하기에 적합한 폴리비닐 알콜-함유 필름 물질에 첨가될 수 있다. 바람직한 추가의 중합체는 폴리락트산이다.
바람직한 폴리비닐 알콜 공중합체는 비닐 알콜 이외에도, 추가의 단량체로서 디카르복실산을 포함한다. 적합한 디카르복실산은 이타콘산, 말론산, 숙신산, 및 그의 혼합물이고, 이타콘산이 바람직하다.
마찬가지로, 바람직한 폴리비닐 알콜 공중합체는 비닐 알콜 이외에도, 에틸렌계 불포화 카르복실산, 그의 염 또는 그의 에스테르를 포함한다. 비닐 알콜 이외에도, 이러한 폴리비닐 알콜 공중합체는 특히 바람직하게는 아크릴산, 메타크릴산, 아크릴산 에스테르, 메타크릴산 에스테르 또는 그의 혼합물을 포함한다.
필름 물질이 추가의 첨가제를 함유하는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 필름 물질은 가소제 예컨대 디프로필렌 글리콜, 에틸렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 글리세롤, 소르비톨, 만니톨 또는 그의 혼합물을 함유할 수 있다. 추가의 첨가제의 예는 이형 보조제, 충전제, 가교제, 계면활성제, 산화방지제, UV 흡수제, 블로킹방지제, 비-점착제 또는 그의 혼합물을 포함한다.
본 발명에 따른 수용성 포장물의 수용성 포장재에 사용하기에 적합한 수용성 필름은 모노솔 엘엘씨(MonoSol LLC)에 의해, 예를 들어 명칭 M8630, C8400 또는 M8900에 의해 판매되는 필름이다. 다른 적합한 필름은 아이셀로 케미칼 유럽 게엠베하(Aicello Chemical Europe GmbH)로부터의 명칭 솔루블론(Solublon)® PT, 솔루블론® GA, 솔루블론® KC 또는 솔루블론® KL에 의한 필름, 또는 쿠라레이(Kuraray)로부터의 VF-HP 필름을 포함한다.
본 발명의 추가의 목적은 또한 본원에 기재된 세정제의 상응하는 용도이다. 본 발명은 또한 본 발명에 따른 세정제를 사용하는 식기세척 방법, 특히 기계 식기세척 방법에 관한 것이다. 따라서 더욱이, 본 출원의 추가의 목적은 세정제를, 식기세척 프로그램을 실행하면서, 주요 세척 사이클을 시작하기 전에, 또는 주요 세척 사이클의 과정 동안에 식기세척기의 내부에 분배하는, 식기세척기에서 식기를 세정하는 방법이다. 세정제는 수동으로 식기세척기의 내부에 분배 또는 도입될 수 있지만, 바람직하게는 세정제는 투여 챔버에 의해 식기세척기의 내부로 분배된다. 본 발명의 다양한 실시양태에서, 이러한 식기세척 방법에서의 (세척) 온도는 바람직하게는 50℃ 이하, 특히 바람직하게는 45℃ 이하, 보다 더 바람직하게는 40℃ 이하이다.
바람직하게 사용될 수 있는 기계 식기세척제를 위한, 예를 들어 정제 형태인 전형적 베이스 배합물은 하기 물질을 포함하며:
소듐 트리폴리포스페이트 20 내지 50 wt%
소듐 카르보네이트 10 내지 30 wt%
소듐 퍼카르보네이트 5 내지 18 wt%
표백 활성화제 0.5 내지 5 wt%
표백 촉매 0.01 내지 1 wt%
술포중합체 2.5 내지 15 wt%
폴리카르복실레이트 0.1 내지 10 wt%
비이온성 계면활성제 0.5 내지 10 wt%
포스포네이트 0.5 내지 5 wt%
프로테아제 0.1 내지 5 wt%
아밀라제 0.1 내지 5 wt%
여기서 각 경우에 wt%의 정보는 전체 세정제를 기준으로 한다. 트리폴리포스페이트 또는 트리폴리포스페이트의 일부 대신에, 10 내지 50 wt% 시트레이트 또는 MGDA 또는 GLDA 또는 EDDS 또는 이들 물질 중 2 또는 3종의 혼합물을 포뮬러에 또한 사용하는 것이 특히 가능하다.
실시예
실시예 1: 자동 식기세척 동안 프로테아제 성능의 개선
표 1: 기계 식기세척제의 조성
실시예 1: 크렘 브륄레에 대한 세정력
밀레(Miele) G698 식기세척기에서, 홍차, 난황, 다진 고기 및 크렘 브륄레의 오염물을 함유하는 차이나 플레이트를 다양한 개별 프로테아제 (비교 실험 V1 및 V2) 또는 프로테아제 조합물 (M1)을 포함하는 고체 식기세척 정제 (20 g; 조성에 대해, 표 1 참조)를 사용하여 50℃ ("노말(Normal)" 사이클) 및 21˚ dH에서 세척하였다. 크렘 브륄레 오염물은 완강한 오염물로서 기능하였다. 이러한 목적을 위해, 데빅(Debic)으로부터의 즉석 크렘 브륄레 혼합물은 포트에서 60℃로 가열하고, 브러시를 사용하여 3.5 g을 각 경우에 디저트 플레이트에 적용하고, 실온에서 2시간 동안 건조되도록 하였다. 이어서, 플레이트를 차가운 오븐 (바인더(Binder))에 넣고, 140℃로 1시간 내에 가열하였다. 이어서, 크렘 브륄레 오염물을 오븐에서 140℃에서 2시간 동안 태웠다.
세정력을 각각의 세척 사이클 후에 IKW에 따라 시각적으로 결정하였다 (1 내지 10으로 평가; 값이 보다 높을수록, 능력이 보다 우수함; 적어도 1의 차이는 유의함). 시험된 포뮬러에 대한 결과는 산술 평균으로서 표 2에 열거되어 있다. 보다 높은 값은 보다 우수한 세정력을 보여준다.
표 1에 따른 배합물에 첨가되는 상응하는 프로테아제 제제 (개별 프로테아제, V1 및 V2) 또는 그의 혼합물 (M1; 프로테아제 V1:V2의 질량 비가 2:3임)의 양은 형성 시의 총 프로테아제 양이 0.24 wt%이도록 하였다.
표 2: 크렘 브륄레에 대한 세정력
V1: 베이스 + 1. 프로테아제: (서열식별번호: 3에 따른 효소)
V2: 베이스 + 2. 프로테아제 (서열식별번호: 2에 따른 넘버링을 사용한 하기 아미노산 치환 G116V, S126L, P127Q, 및 S128A를 갖는 아미노산 서열을 갖고, 그 외에는 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 프로테아제)
M1: 베이스 + V1에 따른 효소 및 V2에 따른 효소의, wt% 단위의 프로테아제 함량을 기준으로 하여 2:3 비의 혼합물
표 2에 명백한 바와 같이, 제1 프로테아제 (V1)는 차 오염물에 관한 경우에 매우 우수한 세정력을 나타내는 반면에, 크렘 브륄레에 관한 경우에 세정력은 단지 보통이다. 대조적으로, 제2 프로테아제 (V2)는 크렘 브륄레에 관한 경우에 우수한 성능을 갖는 반면에, 차에 관한 경우에는 단지 보통인 것이 명백하다.
표 2에서, 2종의 상이한 프로테아제의 조합물은 세정력의 상당한 개선을 생성시키는 것 (M1)이 분명히 명백하다.
실시예 2: 우유에 대한 세정력
보쉬(Bosch) SMS86 식기세척기에서, 우유의 오염물을 함유하는 차이나 플레이트를 고체 식기세척 정제를 사용하여 40℃ ("젠틀(Gentle) 40" 프로그램) 및 21˚ dH에서 세척하였다. 표 1에 따른 배합물에 첨가되는 상응하는 프로테아제 제제 (개별 프로테아제, V1 및 V2) 또는 그의 혼합물 (M1; 프로테아제 V1:V2의 질량 비가 5:1임)의 양을 형성 시의 총 프로테아제 양이 0.24 wt%이도록 하였다. 우유 오염물은 마이크로웨이브 오븐에서 1.5%의 지방 함량을 갖는 우유를 태움으로써 생성시켰다.
표 3: 우유에 대한 세정력
V1: 베이스 + 1. 프로테아제: (서열식별번호: 3에 따른 효소)
V2: 베이스 + 2. 프로테아제 (서열식별번호: 2에 따른 넘버링을 사용한 하기 아미노산 치환 G116V, S126L, P127Q, 및 S128A를 갖는 아미노산 서열을 갖고, 그 외에는 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 프로테아제)
M1: 베이스 + V1에 따른 효소 및 V2에 따른 효소의, wt% 단위의 프로테아제 함량을 기준으로 하여 5:1 비의 혼합물
표 3에서, 본 발명에 따른 조합물은 우유에 대한 보다 높은 세정력으로 이어지는 것이 분명히 명백하다.
SEQUENCE LISTING
<110> Henkel AG & Co. KGaA
<120> Reinigungsmittel enthaltend Proteasen
<130> PT031816PCT
<150> 102014212639.8
<151> 2014-06-30
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 269
<212> PRT
<213> Bacillus lentus
<400> 1
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 2
<211> 269
<212> PRT
<213> Bacillus alkalophilus
<400> 2
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Asn Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 3
<211> 269
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> variant of subtilisin 309
<400> 3
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Arg Arg Val Gln Ala Pro Thr Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Ala Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asp Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Arg Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
Claims (13)
- 적어도 1종의 제1 프로테아제 및 1종의 제2 프로테아제를 포함하며, 여기서
a. 제1 프로테아제는, 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1에 명시된 아미노산 서열과 동일하고, 서열식별번호: 1에 따른 넘버링을 사용한 S9R, A15T, V66A, N212D 및 Q239R로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함하고,
b. 제2 프로테아제는, 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 2에 명시된 아미노산 서열과 동일하고, 서열식별번호: 2에 따른 넘버링을 사용한 하기 위치 116, 126, 127, 128, 및 160 중 1개, 2개, 3개, 또는 4개에서의 적어도 1개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것
을 특징으로 하는 세정제. - 제1항에 있어서, 제1 프로테아제가, 하기 아미노산 치환의 조합 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 세정제.
S9R+V66A+N212D+Q239R, S9R+A15T+N212D+Q239R, S9R+A15T+V66A+Q239R, S9R+A15T+V66A+N212D, A15T+V66A+N212D+Q239R; S9R+A15T+V66A, S9R+A15T+N212D, S9R+A15T+Q239R, S9R+N212D+Q239R, S9R+V66A+N212D, S9R+V66A+Q239R, A15T+V66A+N212D, A15T+V66A+Q239R, A15T+N212D+Q239R, V66A+N212D+Q239R; S9R+A15T, S9R+V66A, S9R+N212D, S9R+ Q239R, A15T+V66A, A15T+N212D, A15T+Q239R, V66A+N212D, V66A+Q239R, 및 N212D+Q239R - 제1항 또는 제2항에 있어서, 제1 프로테아제가 서열식별번호: 3에 따른 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 세정제.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 제2 프로테아제가, 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 2에 명시된 아미노산 서열과 동일하고, 서열식별번호: 2에 따른 넘버링을 사용한 아미노산 치환 G116V, S126L, P127Q 및/또는 S128A 중 적어도 1개, 복수, 또는 모두를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 세정제.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 제1 프로테아제 및 제2 프로테아제를 10:1 내지 1:10의 질량 비로 함유하는 것을 특징으로 하는 세정제.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 프로테아제 각각의 중량 분율이 상응하는 활성 단백질을 기준으로 하여 세정제의 총 중량 중 1x10-8 내지 5 wt%, 0.001 내지 2 wt%, 0.005 내지 1.5 wt%, 0.01 내지 1 wt%, 또는 0.01 내지 0.5 wt%인 것을 특징으로 하는 세정제.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 빌더, 계면활성제, 중합체, 표백제, 표백 촉매, 표백 활성화제, 비-프로테아제 효소, 부식 억제제, 유리 부식 억제제, 붕해 부형제, 부취제 및 퍼퓸 담체로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 추가의 성분 또는 적어도 2종의 추가의 성분을 포함하는 것을 특징으로 하는 세정제.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 식기세척제 또는 기계 식기세척제인 것을 특징으로 하는 세정제.
- 제8항에 있어서,
(1) 기계 식기세척제가 고체 형태로 존재하고/거나,
(2) 기계 식기세척제가 사전배분된 형태로 존재하고/거나,
(3) 기계 식기세척제가 공간적으로 서로 분리된 복수의 조성물을 포함하는 것
을 특징으로 하는 세정제. - 제1항 또는 제2항에 따른 세정제를 사용하는 기계 식기세척 방법.
- 제1항 또는 제2항에 따른 세정제를, 식기세척 프로그램을 실행하면서, 주요 세척 사이클을 시작하기 전에, 또는 주요 세척 사이클의 과정 동안에 자동 식기세척기의 내부에 분배하는 것을 특징으로 하는, 자동 식기세척기에서 식기를 세정하는 방법.
- 세정제 또는 기계 식기세척제의 세정력을 개선시키기 위한, 제1 프로테아제 및 제2 프로테아제의 조합물이며,
a. 제1 프로테아제는, 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 1에 명시된 아미노산 서열과 동일하고, 서열식별번호: 1에 따른 넘버링을 사용한 S9R, A15T, V66A, N212D 및 Q239R로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함하고,
b. 제2 프로테아제는, 전체 길이에 걸쳐 서열식별번호: 2에 명시된 아미노산 서열과 동일하고, 서열식별번호: 2에 따른 넘버링을 사용한 위치 116, 126, 127, 128, 및 160 중 1개, 2개, 3개, 또는 4개에서의 적어도 1개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것
을 특징으로 하는 조합물. - 삭제
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