KR102320247B1 - 평면견을 포함하는 피부 이식용 생체 막 - Google Patents

평면견을 포함하는 피부 이식용 생체 막 Download PDF

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Abstract

본 발명은 피부 세포의 생존능과 부착능이 우수한 평면견을 이용한 피부 이식용 생체막, 이의 이식방법 및 이를 포함하는 피부 손상 치료제에 관한 것이다. 본 발명의 골든실크 품종의 누에에 의하여 생산된 평면견을 포함하는 피부 이식용 생체막을 이용하면, 피부에 자극과 부작용을 거의 유발하지 않으면서, 피부세포에 잘 부착되는 성질을 통해 피부 결손 부위에 잘 이식될 수 있다. 이식된 피부 이식용 생체막은 생체 적합성이 뛰어나며, 피부의 재생과 보호에 효과적이므로, 의료업계 또는 제약업계에서 널리 사용될 수 있다.

Description

평면견을 포함하는 피부 이식용 생체 막{Biomembrane for skin graft comprising silk matrix}
본 발명은 피부 세포의 생존능과 부착능이 우수한 평면견을 이용한 피부 이식용 생체막, 이의 이식방법 및 이를 포함하는 피부 손상 치료제에 관한 것이다.
실크는 다양한 곤충들에 의해 생성되는 천연 중합체로, 필라멘트 코어 단백질, 실크 피브로인 및 비-필라멘트형 단백질인 세리신으로 이루어진 접착제-유사 코팅을 포함한다.
실크는 보다 구체적으로는 네 겹의 세리신(sericin) 층과 두 겹의 피브로인(fibrion) 층으로서 한 쌍으로 구성된다. 실크 파이버는 우수한 강도와 광택, 촉감을 바탕으로 최고의 의류용 직물소재로 널리 이용되어 왔다. 최근 들어 실크를 용해하여 용액으로 제조한 후 이를 다시 필름, 효소 고정화 지지체, 섬유 코팅제, 하이드로겔, 의료용 생체 재료, 파우더 형태로 재생하여 화장품 소재, 섬유 소재와 바이오 산업에 응용하려는 연구가 활발하게 진행되어 오고 있다.
세리신은 실크글루(silk glue)라고도 불리며, 1865년 E. 크래머가 누에고치 섬유에서 분리하여 비단을 뜻하는 라틴어 sercum 및 그리스어 serikon을 따서 이를 세리신으로 명명하였다. 천연의 실크 생사의 거칠고 딱딱한 느낌은 세리신이 부착되어 있기 때문인데, 이 생사를 정련을 하게 되면 세리신이 녹아 없어져서 견사특유의 부드럽고 반짝이는 감촉이 된다. 세리신은 인간이 가지고 있는 필수 아미노산과 거의 유사한 18종 이상의 풍부한 아미노산을 함유하고 있으며, 대부분 아미노산이 하이드록실, 카복실 또는 아미노기를 포함하는 고 극성 사슬을 가지고 있다. 세리신을 구성하는 주요 아미노산 중 세린과 아스파르트 산의 함량은 일반적으로 각각 33.4 %와 16.7 %로, 세리신은 높은 세린 함량으로 인해 친수성이 뛰어나며 생 분해성이므로 친환경 제품 군에 속한다. 세리신을 포함하는 주된 아미노산은 세린, 글리신 및 글루탐산이고, 곁사슬 히드록실, 카르복실 및 아미노기는 다른 가교 또는 공중 합체와의 가교 결합, 공중합 및 블렌딩을 용이하게 한다. 보다 구체적으로는 인체가 가지고 있는 단백질 성분과 매우 흡사한 18종 (알라닌(Alanine), 글리신(Glycine), 발린(Valine), 루신(Leucine), 아이소루신(Isolucine), 트레오닌(Threonine), 세린(Serine), 프로린(Proline), 아스파틱 엑시드(Aspartic acid), 메시오닌(Methionine), 4하이드로프로린(4 Hydroxyproline), 글루타믹 엑시드(Glutamic acid), 페닐알라닌(Phenylalanine), 라이신(Lysine), 히스티딘(Histidine), 하이드록시라이신(Hydroxylysine), 타이로신(Tyrosine), 시스틴(Cystine)) 의 단백질과 콜라겐으로 구성이 되어있다.
피브로인은 견을 이루고 있는 섬유상 단백질로서, 삼각 단면을 갖고 있으며 생사의 경우 2가닥의 피브로인을 세리신이 감싸고 있다. 피브로인은 글리신, 알라닌, 세린, 티로신 등의 아미노산이 주가 되어 약 10여 종의 아미노산으로 구성되어 있고, 폴리펩티드의 사슬이 거의 쇄상으로 뻗쳐 규칙적으로 배열되어 결정과 배향이 잘 발달되어 있다.
피부 조직은 화상, 외상, 탈색소(예, 백반증(vitiligo)) 등 다양한 형태의 손상의 대상이 될 수 있다. 이식은 종종 이러한 피부 손상을 복구하는 데 사용된다. 그러나, 이식 기술은 일반적으로 공여 부위, 특히 환자에게서 제거되는 다량의 조직, 및/또는 보다 작은 공여 샘플들로부터 이식 조직의 보다 큰 부분을 형성하기 위한 실험실 설비를 사용한 비싸고 복잡한 배양 방법을 포함한다.
따라서, 이러한 피부 조직을 대체할 수 있으며, 부작용이 적은 다양한 피부 이식용 천연 소재에 대한 필요성이 대두되고 있다.
이에 본 발명자들은 인체가 가지고 있는 단백질 성분과 흡사한 단백질 성분을 포함하면서, 부작용이 적은 피부 이식용 천연소재를 개발하기 위한 연구를 하였다. 그 결과, 누에 품종 중 골든실크 종에 의하여 생산된 평면견이 피부 세포에 대한 생존능과 부착능이 우수한 것을 입증하여 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 골든실크 품종의 누에에 의하여 생산된 평면견(silk matrix)을 포함하는 피부 이식용 생체막, 이의 이식방법 및 이를 포함하는 피부 손상 치료제를 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 골든실크 품종의 누에에 의하여 생산된 평면견(silk matrix)을 포함하는 피부 이식용 생체막을 제공한다.
또한, 본 발명은 골든실크 품종의 누에에 의하여 생산된 평면견(silk matrix)을 피부 이식부위에 이식하는 단계를 포함하는, 개체의 피부 이식 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 피부 이식용 생체막을 포함하는 피부 손상 치료제를 제공한다.
본 발명의 골든실크 품종의 누에에 의하여 생산된 평면견을 포함하는 피부 이식용 생체막을 이용하면, 피부에 자극과 부작용을 거의 유발하지 않으면서, 피부세포에 잘 부착되는 성질을 통해 피부 결손 부위에 잘 이식될 수 있다. 이식된 피부 이식용 생체막은 생체 적합성이 뛰어나며, 피부의 재생과 보호에 효과적이므로, 의료업계 또는 제약업계에서 널리 사용될 수 있다.
도 1은 백옥잠과 골든실크 누에로부터 생산한 평면견을 나타낸 도이다.
도 2는 백옥잠과 골든실크 누에로부터 생산한 평면견의 앞면과 뒷면에 대한 피부 세포의 생존능을 측정한 도이다(G-F: 골든실크 평면견의 앞면, G-B: 골든실크 평면견의 뒷면, B-F:백옥잠 평면견의 앞면, B-B: 백옥잠 평면견의 뒷면).
도 3은 백옥잠과 골든실크 누에로부터 생산한 평면견의 앞면과 뒷면에 대한 피부 세포의 부착능을 측정한 도이다(G-F: 골든실크 평면견의 앞면, G-B: 골든실크 평면견의 뒷면, B-F:백옥잠 평면견의 앞면, B-B: 백옥잠 평면견의 뒷면).
도 4는 백옥잠과 골든실크 누에로부터 생산한 평면견의 앞면과 뒷면에서 자란 세포를 주사전자현미경을 통해 관찰한 도이다(G-F: 골든실크 평면견의 앞면, G-B: 골든실크 평면견의 뒷면, B-F:백옥잠 평면견의 앞면, B-B: 백옥잠 평면견의 뒷면).
본 발명은 골든실크 품종의 누에에 의하여 생산된 평면견(silk matrix)을 포함하는 피부 이식용 생체막을 제공한다.
본 발명에 있어서, 누에는 특정한 유전자구성, 동일한 염색체구조 및 염색체수에 의해 특정 지어지는 생물집단으로 나비목 누에나방과(Bombycidae)에 속하며 예부터 실내에서 사육되고 그 고치로 생실을 만들어 사용하는 곤충이다.
본 발명에 있어서, 상기 골든실크 품종은 농식품부 훈령에 근거하여 누에장려품종으로 2006년에 지정된 누에의 한 품종으로써, 황색실크를 생산하는 특징이 있는 것일 수 있고, 교배조합명은 잠311 X 잠312 일 수 있다.
한마리의 누에가 생산하는 일반적인 누에고치의 경우 피브로인으로 75%, 세리신으로 25% 구성되어 있는 반면 본 발명의 상기 평면견은 피브로인으로 60 내지 65%, 세리신으로 35 내지 40% 구성되어 있는 것 일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 평면견은 평면견을 제조하는 공정 중 평판을 움직이는 각도, 시간 및 누에 수에 따라 두께와 크기를 다르게 제조할 수 있고, 물리적으로 절단하여 두께를 얇게 제작할 수 있다. 따라서, 본 발명의 평면견은 두께와 크기를 용도에 따라 다양하게 제조할 수 있는 장점이 있다.
본 발명의 피부 이식용 생체막으로 사용하는데 있어서 상기 평면견의 두께는 바람직하게 0.01 내지 2mm일 수 있으며, O.01mm 미만일 경우, 평면견이 너무 얇아 생체막이 쉽게 찢어질 수 있고, 2mm를 초과하는 경우, 평면견이 너무 두꺼워서 생체막 피부 이식 후 피부로부터 탈락의 가능성이 높은 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 평면견은 용도에 맞춰 크기를 조절하여 사용할 수 있으며, 패킹 또는 멸균처리 또는 약품처리를 추가적으로 하여 사용하는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 평면견은 생체 적합성이 높은 것일 수 있으며, 피부 세포, 특히 섬유아세포에서 세포의 생존률이 우수하며, 피부 세포에 대한 부착능이 우수한 것일 수 있다. 상기 피부 세포에 대한 우수한 생존률과 피부 세포에 대한 우수한 부착능은 피부 결손 부위에 효과적으로 이식되도록 하는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 평면견은 앞면과 뒷면으로 구분되며, 평면견의 뒷면이 앞면에 비해, 피부 세포의 생존능이 우수하게 나타나고, 세포 부착능이 우수하여, 평면견의 뒷면을 피부 결손부위에 이식시, 효과적으로 이식되는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 평면견의 앞면은 평면견 제조시, 누에가 놓여있는 면을 의미한다.
본 발명에 있어서, 상기 평면견의 뒷면은 평면견 제조시 평면견 제조장치 쪽 면을 의미한다.
본 발명에 있어서, 상기 피부 이식용 생체막은 골든실크 품종의 누에가 생산하는 평면견을 그대로 이용함으로써, 실크 펩타이드인 세리신과 피브로인을 모두 포함하며, 제조가 용이하고, 경제적인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 피부 이식용 생체막을 이용하면, 상기 평면견의 섬유아세포에 대한 우수한 생존능과 부착능을 바탕으로, 이식된 피부에 피부 재생효과, 피부 화상 진행 억제효과 등을 나타내는 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 골든실크 품종의 누에에 의하여 생산된 평면견(silk matrix)을 피부 이식부위에 이식하는 단계를 포함하는, 개체의 피부 이식 방법을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 피부 이식부위는 질병 또는 외상에 의해 손상된 부위일 수 있으며, 바람직하게는 찰과상(abrasion), 절개(incision), 열상(laceration), 피부결출(skin avulsion), 피부타박(skin bruise), 천자부상(puncture wound) 및 수술에 의한 피부절제 군에서 선택되는 1종 이상의 원인에 의해 손상된 부위일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 평면견을 피부 이식부위에 이식하는 단계는 평면견의 뒷면을 피부 이식부위에 부착하는 단계일 수 있으며, 평면견의 뒷면을 피부이식부위에 부착하면 높은 피부세포 생존능 및 피부세포 부착능을 바탕으로 피부에 효과적으로 이식될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 개체의 피부 이식 방법은 평면견(silk matrix)을 피부 이식부위에 이식하는 단계의 전 또는 후에, 다른 피부 손상 치료약물을 투여하는 단계를 더 포함할 수 있으며, 상기 다른 피부 손상 치료약물은 피부 손상 치료에 효과적인 약물이면 제한없이 사용될 수 있으며, 항생제, 항진균제, 항염제 및 면역억제제로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있고, 바람직하게는 항생제, 항진균제, 항염제 및 면역억제제로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 외용제일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 개체는 인간 또는 동물일 수 있으며, 바람직하게는 포유류일 수 있고, 더욱 바람직하게는 개, 돼지, 소, 말, 양, 마우스, 랫트, 토끼 및 고양이로 이루어진 군으로부터 선택된 1종일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 피부 이식 방법을 이용하면, 손상된 피부를 외부 환경으로부터 효과적으로 보호하고, 피부 재생 및 화상 진행 억제를 통해 효과적으로 치유할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 피부 이식용 생체막을 포함하는 피부 손상 치료제를 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 피부 손상은 찰과상(abrasion), 절개(incision), 열상(laceration), 피부결출(skin avulsion), 피부타박(skin bruise), 천자부상(puncture wound) 및 수술에 의한 피부절제 군에서 선택되는 1종 이상이 원인일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 피부 손상 치료는 피부의 손상이 심각한 부위에 피부 이식용 생체막을 이식하여 상처 부위를 덮어 손상 부위의 체액 손실을 막아주고, 상처 부위에 흉터가 남지 않도록 하는 것이다.
본 발명에 있어서, 상기 피부 손상 치료제는 단독 또는 다른 치료제와 병용하여 사용될 수 있으며, 상기 다른 치료제는 피부 손상 치료에 효과적인 약물이면 제한없이 사용될 수 있으며, 항생제, 항진균제, 항염제 및 면역억제제로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있고, 바람직하게는 항생제, 항진균제, 항염제 및 면역억제제로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 외용제일 수 있다.
중복되는 내용은 본 명세서의 복잡성을 고려하여 생략하며, 본 명세서에서 달리 정의되지 않은 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것이다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 평면견의 제조
누에를 이용한 평면견 제조장치(등록특허,10-1883838)를 이용하여, 평면견을 제작하였다. 백색 고치를 짓는 백옥잠 품종과 노란색 고치를 짓는 골든실크 품종을 이용하여 A4 용지 크기(210 X 297 mm2)의 평면견을 제작하였으며, 평면견 제작을 위해 각 30마리의 누에를 사용하였다. 구체적으로, 평판위에 누에 30마리를 놓고 평판을 지면을 기준으로 20˚의 각도까지 서서히 기울인 후, 1시간 뒤에 다시 서서히 반대방향으로 기울여 주는 방식으로 하여 누에가 움직이면서 토사하도록 하여 평면견을 제작하였다. 제작된 평면견의 두께는 0.7mm정도였으며, 제작된 평면견은 도 1에 나타내었다.
도 1에 나타낸 바와 같이, 평면견 제작시 누에가 놓여있는 면을 평면견의 '앞면'으로 정의하였으며, 평면견 제조장치 쪽 면을 평면견의 '뒷면'으로 정의하였다.
실시예 2. 평면견에 대한 섬유아세포의 생존능 확인
평면견의 피부 이식용 소재로써, 화상과 같은 원인으로 손상된 피부세포에 대한 재생성을 평가하기 위해, 실시예 1에서 제조한 평면견에 대한 섬유아세포의 생존능을 측정하였다. 구체적으로, 실시예 1에서 제조한 평면견을 121℃에서 15분간 오토클레이브(Autoclave)를 이용하여 멸균하고, 60℃에서 건조하였다. 그 후, 각 멸균, 건조된 평면견을 1 X 1cm2로 자르고, 평면견 제조시 누에가 놓여있는 면을 앞면으로 하여, 앞면 또는 뒷면으로 구분하고 48 웰 플레이트에 넣은 다음, 여기에 각 웰 당 1.5 X 105개의 L929세포를 시딩(seeding)하였다. 시딩한 세포를 총 6일간 배양하였으며, 3일마다 배지를 교체해주었다. 배양된 L929 세포의 세포수를 측정하기 위해 MTT assay를 실시하였으며, 배양된 세포에 MTT assay solution을 처리하고 450nm에서 흡광도를 측정하였다. MTT 측정 결과는 시료의 흡광도를 골든실크 뒷면에 배양한 시료를 기준으로 백분율로 표시하였으며, 도 2에 나타내었다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 평면견 앞면과 뒷면의 섬유아세포 생존능을 비교하였을 때, 뒷면에서 더 많은 세포가 생존한 것을 확인하였으며, 골든실크 품종으로 제작한 평면견과 백옥잠 품종으로 제작한 평면견의 섬유아세포 생존능을 비교한 결과 골든실크 품종으로 제작한 평면견에서 더 많은 세포가 생존한 것을 확인하였다.
이러한 결과로부터, 골든실크 품종으로 제작한 평면견이 다른 품종 평면견에 비해 섬유아세포의 생존률이 가장 높으며, 골든실크 품종으로 제작한 평면견의 뒷면을 피부에 적용하였을 때, 섬유아세포의 생존률이 가장 우수하여 피부 재생에 효과적인 것을 확인하였다.
실시예 3. 평면견에 대한 섬유아세포의 부착능 확인
평면견에 대한 피부세포의 부착능을 확인하기 위한 실험을 실시하였다. 구체적으로, 상기와 같은 방법으로 웰 당 1.5 X 105개의 L929세포를 6일간 배양한 평면견을 웰 플레이트에서 꺼내 PBS 버퍼로 3회 워싱(washing) 후, 트립신을 처리하여 평면견에 부착된 세포를 떼어내고, 떼어낸 세포수를 계수하였다. 또한, 웰 당 1.5 X 105개의 L929세포를 6일간 배양한 평면견을 Kamovsky's 고정액으로 하루동안 고정시킨 다음, 0.05M Cacodylate 버퍼로 10분씩 3회 워싱하였다. 그 후 1% 오스민산으로 4℃에서 120분간 후고정을 실시하였다. 그 다음 50% 에탄올로 20 내지 40분간 2회 워싱하고, 75% 에탄올로 20 내지 40분간 1회 워싱하고, 90% 에탄올로 20 내지 40분간 1회 워싱하고, 95% 에탄올로 20 내지 40분간 1회 워싱하고, 100% 에탄올로 20 내지 40분간 2회 워싱하고, amylacetate로 20 내지 40분간 2회 워싱하였다. 이 후, 크리스탈 포인트 드라이어로 검체를 말린 후, 주사전자현미경(SEM)으로 세포의 형태를 관찰하였다. 세포 계수 결과를 도 3에 나타내었으며, 평면견에 부착된 세포의 형태를 주사전자현미경으로 관찰한 사진을 도 4에 나타내었다.
도 3 및 도 4에 나타낸 바와 같이, 평면견 앞면과 뒷면에 대한 섬유아세포의 세포부착능을 비교하였을 때, 뒷면에서 더 많은 세포가 잘 부착하는 것을 확인하였으며, 골든실크 품종으로 제작한 평면견과 백옥잠 품종으로 제작한 평면견의 세포 부착능을 비교한 결과 골든실크 품종으로 제작한 평면견에서 더 많은 세포가 부착되어 있는 것을 확인하였다. 특히, 골든실크 품종의 뒷면에서는 다른 실험군 대비 2배 이상의 현저히 많은 세포가 계수된 것을 확인하였다.
이러한 결과로부터, 골든실크 품종으로 제작한 평면견의 뒷면에 세포가 가장 잘 부착하는 것을 확인하였다. 본 실시예에서 확인한 우수한 세포 부착능과 실시예 2에서 확인한 우수한 세포 생존능으로부터, 골든실크 품종으로 제작한 평면견이 다른 품종에 의한 평면견에 비해 피부 이식용 소재로 우수하며, 피부에 적용시 평면견 뒷면을 적용하는 것이 가장 효과적인 것을 확인하였다.
이상, 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의해 정의된다고 할 것이다

Claims (8)

  1. 섬유아세포의 생존율 증가 및 섬유아세포의 부착을 유도하는 것을 특징으로 하며, 골든실크 품종의 누에에 의하여 생산된 평면견(silk matrix) 뒷면을 포함하는 피부 이식용 생체막.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 섬유아세포의 생존율 증가 및 섬유아세포의 부착을 유도하는 것을 특징으로 하는, 골든실크 품종의 누에에 의하여 생산된 평면견(silk matrix) 뒷면을 포함하는 피부 이식용 생체막을 피부 이식부위에 이식하는 단계를 포함하는, 인간을 제외한 동물의 피부 이식 방법.
  5. 삭제
  6. 제4항에 있어서, 상기 동물은 개, 돼지, 소, 말, 양, 마우스, 랫트, 토끼 및 고양이로 이루어진 군으로부터 선택된 1종인 것을 특징으로 하는, 인간을 제외한 동물의 피부 이식 방법.
  7. 제1항에 따른 피부 이식용 생체막을 포함하는 피부 손상 치료제.
  8. 제7항에 있어서, 상기 피부 손상은 찰과상(abrasion), 절개(incision), 열상(laceration), 피부결출(skin avulsion), 피부타박(skin bruise), 천자부상(puncture wound) 및 수술에 의한 피부절제 군에서 선택되는 1종 이상이 원인인, 피부 손상 치료제.
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101573838B1 (ko) 2014-06-13 2015-12-07 대한민국 누에고치를 이용한 인공 생체막 및 이의 제조방법
KR101602797B1 (ko) * 2015-10-21 2016-03-11 대한민국 평면견을 이용한 인공 생체막 및 이의 제조방법
JP2016210695A (ja) 2015-04-30 2016-12-15 ポーラ化成工業株式会社 皮膚外用剤
JP2016208863A (ja) * 2015-04-30 2016-12-15 ポーラ化成工業株式会社 線維芽細胞の伸長促進方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101182914B1 (ko) * 2010-06-03 2012-09-13 한국신발피혁연구소 상처 보호 부재 및 그 제조 방법

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101573838B1 (ko) 2014-06-13 2015-12-07 대한민국 누에고치를 이용한 인공 생체막 및 이의 제조방법
JP2016210695A (ja) 2015-04-30 2016-12-15 ポーラ化成工業株式会社 皮膚外用剤
JP2016208863A (ja) * 2015-04-30 2016-12-15 ポーラ化成工業株式会社 線維芽細胞の伸長促進方法
KR101602797B1 (ko) * 2015-10-21 2016-03-11 대한민국 평면견을 이용한 인공 생체막 및 이의 제조방법

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
국립농업과학원, "누에고치 단백질을 이용한 의료용 실크 소재 개발", 농촌진흥청 차세대바이오그린21사업(2015.2)

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