KR102309707B1 - 소 초유 효소 처리물, 그 제조방법, 조성물 및 식품 - Google Patents
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Abstract
소 초유를 β-갈락토시다아제와 접촉시키는 단계를 포함하여 이루어지는 소 초유 효소 처리물의 제조방법, 상기 소 초유 효소 처리물을 포함하여 이루어지는 의약 조성물 등을 제공한다. 상기 소 초유 효소 처리물은 암 및 감염증 등의 질병의 치료, 예방, 개선, 소멸 유지에 유용하다.
Description
본 발명은 암 및 감염증 등의 질병의 치료 및 예방에 유용한, 소 초유 효소 처리물을 포함하여 이루어지는 의약 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다.
대식 세포는 체내 노폐물의 처리나, 미생물, 바이러스 등의 병원체나 종양 세포에 대한 방어 기능을 담당하고 있다. 또한, T 세포에 항원 제시와 인터류킨 1의 생산을 통해 세포성 면역의 이펙터로서의 기능도 가지고 있다. 따라서 암이나 감염증 등의 치료와 예방에 대식 세포를 활성화시키는 것이 중요하며, 대식 세포의 활성화로 암이나 감염증의 치료 및 예방을 할 수 있다.
대식 세포를 활성화하는 인자로서, 예컨대 인터페론을 들 수 있으며, 그 임상 응용도 시도되고 있다. 또한, 어떤 종류의 다당류가 면역 부활 활성을 갖는 것으로 알려져 있으며, 이들 중 일부는 항바이러스제나 항암제로의 개발이 기대되는 것이다(특허문헌 1 또는 2).
인간 혈청 효소 처리물(β-갈락토시다아제 또는 β-갈락토시다아제와 시알리다아제)이 대식 세포 활성화 작용을 갖는다는 것은 특허문헌 3에 기재가 있다.
본 발명은 암 및 감염증 등의 질병 치료, 예방, 개선, 소멸 유지 등에 유용한, 소 초유 효소 처리물, 그 제조방법, 이를 포함하여 이루어지는 조성물 및 각종 제품을 제공하고자 하는 것이다.
본 발명자들은 예의 검토한 결과, 소 초유를 특정 효소, 즉 β-갈락토시다아제, 또는 β-갈락토시다아제 및 시알리다아제와 접촉시켜 효소 처리하면 뛰어난 대식 세포 활성화 작용을 나타내는 것을 발견하고, 더욱 검토를 거듭하여 본 발명을 완성했다.
즉, 본 발명은,
[1] 소 초유를 β-갈락토시다아제와 접촉시키는 단계를 포함하여 이루어지는, 소 초유 효소 처리물의 제조방법,
[2] 소 초유를 시알리다아제와 접촉시키는 단계를 더 포함하여 이루어지는, 상기 [1] 기재의 제조방법,
[3] 상기 [1] 또는 [2] 기재의 제조방법에 의해 얻어지는, 소 초유 효소 처리물,
[4] 1회 투여용으로 0.02μg ~ 40mg, 바람직하게는 0.02μg ~ 20mg, 보다 바람직하게는 0.2μg ~ 20mg, 보다 바람직하게는 2μg ~ 20mg, 보다 바람직하게는 20μg ~ 20mg, 보다 바람직하게는 200μg ~ 10mg, 보다 바람직하게는 200μg ~ 2mg 범위의 단백질을 포함하는 상기 [3] 기재의 소 초유 효소 처리물,
[5] 상기 [3] 또는 [4] 기재의 소 초유 효소 처리물을 포함하여 이루어지는 의약 조성물,
[6] 항암용 또는 항감염증용인, 상기 [5] 기재의 의약 조성물,
[7] 상기 [3] 또는 [4] 기재의 소 초유 효소 처리물을 포함하여 이루어지는 식품용 조성물,
[8] 상기 [7] 기재의 식품용 조성물을 포함하여 이루어지는 식품,
에 관한 것이다.
본 발명의 소 초유 효소 처리물은 뛰어난 대식 세포 활성화 작용, 특히 장관 대식 세포의 활성화 작용을 가지기 때문에, 암이나 감염증 등의 질병의 치료 및 예방에 유용하며, 항암제, 항감염증제 등으로 사용할 수 있다.
또한, 상기 소 초유 효소 처리물을 사용하면 상기 질병의 예방, 개선, 소멸 유지 등에 유용한 의약부외품, 및 식품용 조성물 및 식품을 제공할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 소 초유 효소 처리물은 소 초유를 β-갈락토시다아제, 또는 β-갈락토시다아제 및 시알리다아제로 처리함으로써 제조할 수 있기 때문에, 간편하고 비용이 저렴하다는 장점이 있다.
도 1은 기엠자 염색한 대식 세포의 모양을 나타내는 도면 대용 사진이다.
도 2는 각 검체의 0.5% 옵소닌화 SRBC를 사용한 대식 세포 탐식능 활성에 대한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 전기영동 결과를 나타내는 도면 대용 사진이다.
도 2는 각 검체의 0.5% 옵소닌화 SRBC를 사용한 대식 세포 탐식능 활성에 대한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 전기영동 결과를 나타내는 도면 대용 사진이다.
<소 초유>
본 발명에서 사용하는 소 초유는 송아지 분만 후 어미 소가 10일째까지 분비하는 유즙을 말하며, 바람직하게는 7일째까지, 더욱 바람직하게는 5일째까지 분비하는 유즙이다. 본 발명에서, 소 초유는 홀스타인(Holstein) 종, 흑모화(Japanese Black) 종 등 소의 종류에 관계없이 어떤 종의 것이라도 사용할 수 있다.
<효소>
본 발명에서 사용하는 β-갈락토시다아제는, 특별한 제한 없이 주지의 어느 종류의 것도 사용할 수 있다. 그와 같은 것으로는, 예를 들어 대장균(Escherichia coli)에서 유래한 것, 소 간장(bovine liver)에서 유래한 것 등을 들 수 있다. 시판된 것으로, 예를 들어 화광순약공업(주)(Waco Pure Chemical Industries, Ltd.)의 카탈로그 No. 072-04141, 시그마-알드리치사의 G1875 등을 들 수 있다.
본 발명에서 β-갈락토시다아제는 단독으로 사용될 수도 있고, 2종 이상을 조합하여 사용할 수도 있다.
본 발명에서 사용하는 시알리다아제는, 특별한 제한없이 주지의 어느 종류의 것도 사용할 수 있다. 그와 같은 것으로는, 예를 들어 웰치균(Clostridium perfringenes)에서 유래한 것, 연쇄상 구균(Streptococcus 6646K)에서 유래한 것, 콜레라균(Vibrio cholerae)에서 유래한 것, 아스로박터·우레아파시엔스(Arthrobacter ureafaciens)에서 유래한 것 등을 들 수 있다. 시판된 것으로, 예를 들면 시그마-알드리치사의 제품번호(Sigma Prod. Nos.) N2876, N2133, N2904, N3001, N5631, 생화학 바이오 비즈니스사(SEIKAGAKU BIOBUSINESS CORPORATION)의 코드번호(Code Number) 120052, 바이로랩스(BioLabs)사의 카탈로그 번호(Catalog #) P0720L, P0720S 등을 들 수 있다.
본 발명에서 시알리다아제는 단독으로 사용될 수도 있고, 2종 이상을 조합하여 사용할 수도 있다.
<효소 처리>
본 발명에서 소 초유와, β-갈락토시다아제 또는 시알리다아제와의 접촉(효소 처리)은, 각각 충분한 양의 효소를 사용하여 충분한 시간 접촉시킴으로써 더 이상 실질적으로 효소 반응이 진행하지 않는 정도까지 실시하는 것이 바람직하다. 이와 같은 목적에는, 효소의 종류에 따라 다르지만, 예컨대 β-갈락토시다아제로 화광순약공업(주)의 카탈로그 No. 072-04141을 사용하는 경우, 소 초유 100μl에 대해 효소를 65mU 사용하면 충분하다. 또한, 예를 들어 시알리다아제로서 시그마-알드리치사의 제품 번호(N2876)를 사용하는 경우, 소 초유 100μl에 대해 효소를 65mU 사용하면 충분하다. 이 경우의 효소 처리 시간은 3시간 실시하면 충분하다.
효소 처리는 임의의 용기 내에서 이들 효소를 소 초유에 첨가하여 실시할 수 있지만, 선택적으로 소 초유 중의 총 단백질 농도를 조정하기 위해 이 분야에서 통상적으로 사용되는 완충액을 첨가할 수도 있다. 그러한 완충액으로는 생리 식염수, 인산 완충 생리 식염수(SPB), 링거액 등을 들 수 있다.
효소 처리 온도는 효소가 활성을 나타내는 온도이면 특별히 제한은 없지만, 통상적으로 효소가 높은 활성을 나타내는 37 ℃ 부근의 온도이다.
효소 처리는 가열(열처리)에 의해 효소를 불활성화시킴으로써 종료한다. 관련 열처리는 효소를 불활성화시킬 수 있는 한 특별히 제한되지 않지만, 예를 들면 60 ℃ 부근의 온도에서 약 10분간 가열함으로써 실시할 수 있다.
열처리 후 검체는 선택적으로 농축될 수도 있다. 상기 농축은 상용 기기, 예컨대 원심 농축기(예: 밀리포아(MILLIPORE)사 제조 10000 MWCO YM-10)를 사용하여 수행할 수 있다.
또한, 효소 처리는 고체상으로 고정한 효소(고정화 효소)를 사용하여 행할 수도 있다. 효소를 고체상으로 고정시키는 방법은 당업자에게 알려져 있으며, 예를 들면, β-갈락토시다아제 및/또는 시알리다아제를 브롬화시안(cyanogen bromide)과 같은 커플링제에 의해, 아가로스 비드에 고정할 수 있다. 그와 같은 고정화 효소로는, 예를 들면 고정화 β-갈락토시다아제 G3M(모비테크(MoBiTec)사, # A3102), 뉴라미니다아제 아가로스(neuraminidase agarose) 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens)(웰치균) 유래 (시그마-알드리치 사 제조, 제품번호: N5254 ) 등이 시판되고 있다. 고정화 효소를 사용하는 장점은, 효소 처리 후 효소를 열처리에 의해 불활성화시키지 않고 회수할 수 있다는 것, 및 그와 같은 회수에 의해 불순물(열처리에 의해 불활성화된 효소 등의 단백질 등)의 존재를 줄일 수 있다는 것이다.
<소 초유 효소 처리물>
이렇게 얻어진 본 발명의 소 초유 효소 처리물은, 또한 동결 건조하여 고체 내지 분말 형태로 할 수도 있다. 이러한 소 초유 효소 처리물은 암이나 감염증 등의 질병 치료, 예방, 개선, 소멸 유지 등에 유용한, 새로운 조성물이다.
<의약 조성물, 의약품>
본 발명의 소 초유 효소 처리물은, 그대로 또는 적절히 약학적으로 허용될 수 있는 보조제(담체)를 배합하여 의약 조성물로 제조할 수 있다. 이러한 약학적으로 허용될 수 있는 보조제로는, 이 분야에서 통상적으로 사용되는 것을 모두 적합하게 사용할 수 있으며, 구체적인 예로는, 예컨대 희석제, 안정제, 보존제, 완충제, 부형제, 결합제, 방부제, 붕해제, 활택제, 향미제 등을 들 수 있다. 이러한 보조제는 의약 조성물의 제형에 따라 적절히 배합된다.
본 발명의 의약 조성물은 적당한 제형으로 제제화하여 의약품으로 할 수 있다. 그와 같은 제형으로는 특별히 제한되지 않으며, 경구 제제로도 비경구 제제로도 할 수 있다. 비경구 제제로는 주사제, 수액제, 점비제(코약), 점이제(귀약), 좌약, 경장영양제 등을 들 수 있다. 예를 들면, 주사제로는 정맥내 주사, 피하 주사, 피내 주사, 근육내 주사, 복강내 주사 등의 투여 형태의 것을 들 수 있으며, 이 중 근육내 주사가 바람직하다. 한편, 경구 제제로서는, 산제, 과립제, 정제(설하 정제 등 포함), 캡슐제, 환제, 장용제, 내용액제(현탁제, 유제, 시럽제 등을 포함), 흡입제 등을 들 수 있다.
본 발명의 소 초유 효소 처리물의 투여량은 투여 대상의 연령, 성별, 체중 및 증상, 투여 방법 등에 따라 다르지만, 전형적인 예로는, 예를 들면 본 소 초유 효소 처리물에 포함되는 단백질의 총량으로 1회 투여 당, 체중 1kg 당, 약 0.02μg 이상, 바람직하게는 약 0.2μg 이상, 보다 바람직하게는 약 2μg 이상, 보다 바람직하게는 약 20μg 이상, 보다 바람직하게는 약 200μg 이상이고, 또한 약 40mg 이하, 바람직하게는 약 20mg 이하, 보다 바람직하게는 약 13mg 이하, 보다 바람직하게는 약 10mg 이하, 보다 바람직하게는 2mg 이하이다. 바람직한 투여량의 범위로는, 예를 들면 약 0.02μg ~ 약 40mg, 바람직하게는 약 0.02μg ~ 약 20mg, 보다 바람직하게는 약 0.2μg ~ 약 20mg, 보다 바람직하게는 약 2μg ~ 약 20mg, 보다 바람직하게는 약 20μg ~ 약 20mg, 보다 바람직하게는 약 200μg ~ 약 10mg, 보다 바람직하게는 약 200μg ~ 약 2mg이다. 다른 바람직한 범위로는 약 1mg ~ 약 40mg, 바람직하게는 약 2mg ~ 약 20mg, 더욱 바람직하게는 약 3mg ~ 약 13mg의 범위에 있는 것이 좋다. 또한, 본 명세서에서 단백질의 양은, 파장 570nm에서의 흡광도에 의해 결정한 단백질 농도를 기초로 산정하는 것이다.
본 발명의 의약 조성물을, 상기와 같이 1회당 투여량으로 투여하는 경우의 전형적인 투여 간격 및 투여 횟수로는 1 ~ 2회/일 이다. 또한, 투여량 및 투여 간격은 의약 조성물에 포함된 단백질의 총량을 기준으로 투여되는 단백질의 총량이 동등하게되는 범위 내에서 적절하게 변경될 수 있다.
본 발명의 의약 조성물은 대식 세포 활성화 작용을 가진다. 따라서, 본 발명의 의약 조성물은 이러한 작용에 의해 치료 또는 예방할 수 있는 질병의 치료제 또는 예방제로서 사용될 수 있다. 이와 같은 질병으로는 암이나 감염증을 들 수 있다.
암으로는, 암종(carcinoma), 육종(sarcoma), 기타 악성종양(malignant tumor) 등을 포함하며, 예를 들면, 피부암, 기관지암, 폐암, 비소세포 폐암, 유방암, 난소암, 혀암, 인두암, 식도암, 위암, 소장암, 대장암, 직장암, 결장암, 간암, 췌장암, 신장암, 신장세포암, 방광암, 전립선암, 자궁암, 자궁경부암, 윌름스 종양(Wilms' tumor), 악성 흑색종, 수막종, 신경아종, 뼈육종, 카포시 육종(Kaposi sarcoma), 림프종, 백혈병 등을 들 수 있다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 용어 「암」은 이들 악성 종양 외에도 그 전이도 포함하는 것이다.
또한, 감염증으로는, 예를 들면 바이러스 감염증, 세균 감염증 등을 들 수 있으며, 구체적으로는 HIV 감염증, 에이즈 외에 B형 간염, C형 간염, 헤르페스, 인플루엔자, 폐렴, 결핵, EB 바이러스 감염증 등을 들 수 있다.
본 발명의 의약 조성물은 다른 항암제나 항감염증제와 함께 병용할 수 있다. 병용하는 경우에는 상기 다른 약제의 효능, 효과, 투여량을 고려하여 본 발명의 의약 조성물의 투여량을 적절히 조절한다.
<의약부외품>
본 발명의 소 초유 효소 처리물은 상기와 같은 의약품으로뿐만 아니라 의약부외품으로 제조할 수도 있다. 해당 의약부외품에는 필요에 따라 상기 보조제 등을 배합할 수 있다. 또한, 의약부외품은 용액 형태, 현탁액 형태, 시럽 형태, 과립 형태, 크림 형태, 페이스트 형태, 젤리 형태 등의 다양한 형태로 제조될 수 있으며, 필요에 따라 원하는 형상으로 성형할 수도 있다. 의약부외품으로 사용하는 경우의 소 초유 효소 처리물 사용량은, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 상기 의약품의 경우의 투여량을 참고하여 적절히 설정할 수 있다.
<식품용 조성물, 식품>
본 발명의 소 초유 효소 처리물은, 필요에 따라 상기 보조제나, 감미료, 향신료, 조미료, 방부제, 보존료, 살균제, 산화 방지제 등의 식품에 통상적으로 사용되는 각종 첨가제를 적절히 배합함으로써 식품용 조성물로 제조할 수 있고, 더욱이 상기 식품용 조성물을 더욱 가공하여 이를 포함하여 이루어지는 식품으로 제조할 수 있다. 상기 식품용 조성물 또는 식품은, 용액 형태, 현탁액 형태, 시럽 형태, 과립 형태, 크림 형태, 페이스트 형태, 젤리 형태 등의 다양한 형태로 제조될 수 있고, 필요에 따라 원하는 형상으로 성형할 수도 있다. 또한, 상기 식품은, 빵, 국수, 과자, 음료, 수프, 가공 식품 등 다양한 형태를 취할 수 있다. 식품용 조성물 및 식품의 제조는 모두 통상적인 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 소 초유 효소 처리물은 상기와 같은 질병에 효과를 나타내는 것이므로, 본 발명의 식품용 조성물 및 식품은 이러한 질병의 예방, 개선, 소멸 유지 등에 효과를 발휘할 수 있다. 이 경우, 본 발명의 식품용 조성물 또는 식품에의 소 초유 효소 처리물의 사용량은, 특별히 제한되는 것은 아니지만, 상기 의약품의 경우에 있어서 투여량을 참고하여 적절히 설정할 수 있다. 소 초유 효소 처리물의 사용량에 대한 바람직한 구체 예로는, 예를 들면 1회의 식사 기준으로, 체중 1kg 당 약 1mg ~ 약 40mg, 바람직하게는 약 2mg ~ 약 20mg, 더욱 바람직하게는 약 3mg ~ 약 13mg의 범위이다.
본 발명의 식품은, 소위 건강식품, 건강음료, 특정 보건용 식품, 기능성 식품, 영양보조식품(보충제)이거나, 기타 사람 이외의 동물에 대한 사료일 수 있다.
이와 같은 본 발명의 의약품, 의약부외품 및 식품은 활성 성분인 소 초유 효소 처리물을 소화관내, 바람직하게는 구강내 또는 장관 내에서 흡수시키는 형태 (예를 들어, 상술한 설하 정제나 장용제의 형태)인 것이 바람직하다. 구강내 또는 장관 내의 대식 세포를 직접 활성화하는 효과를 기대할 수 있기 때문이다. 특히, 장관 관련 림프조직(GALT: gut-associated lymphoid tissue)에는 그 파이어 판(Payer's patch)에 체내 최대라고 하는 풍부한 수의 대식 세포가 존재하는 것으로 알려져있다.
실시예
실시예에 따라 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이들에만 한정되는 것은 아니다.
1. 소 초유 효소 처리물의 제조(1)
고체 소 초유(Now Foods의 「Colostrum Powder」) 1mg을, 1ml의 1×PBS에 용해하고, 그 초유액 100μl에 β-갈락토시다아제(화광순약공업(주) 제조, 카탈로그 No.072-04141, 10mU/μl) 6.5μl, 시알리다아제(시그마-알드리치사 제조, N2876, 10mU/μl) 6.5μl, 및 100mM SPB(15.601g의 NaH2PO4·2H2O 및 35.814g의 Na2HPO4·12H2O를 500ml의 증류수에 용해하여 200mM SPB(pH7.0)를 제조하고, 이를 희석하여 100mM SPB로 함) 87μl를 넣고 37 ℃에서 3시간 동안 배양하였다. 배양 후, 100mM SPB를 200μl 더 가하여 60 ℃에서 10분간 열처리하였다. 열처리 후, 마이크로콘(MICROCON)(10000MWCO YM-10, 밀리포아사)으로 농축하고, 단백질 농도를 파장 570nm에서의 흡광도 측정에 의해 결정한 결과(BSA(Bovine Serum Albumin, SIGMA, A4503)에 대해 작성한 검량선을 사용), 1.08μg/μl이었다(검체 1).
상기 검체 1을 100mM SPB를 사용하여 희석하여 단백질 농도가 각각 1ng/10μl(검체 1-1), 10ng/10μl(검체 1-2), 100ng/10μl(검체 1-3)인 각 검체를 준비했다.
한편, 효소 처리하기 전의 초유에 대해 단백질 농도를 동일한 방법으로 결정한 결과, 14.41μg/μl이었다(비교검체 1). 상기 비교검체 1을 100mM의 SPB를 사용하여 희석하여 단백질 농도가 각각 1ng/10μl(비교검체 1-1), 10ng/10μl(비교검체 1-2), 100ng/10μl(비교검체 1-3)인 각 검체를 제조하였다.
2. 대식 세포 탐식능 활성(1)
쥐(8주령, ICR계 암컷, 일본 에스엘씨(주)(Japan SLC, Inc.))를 경추 탈골시키고, 복부의 외피를 벗기고 내장을 손상하지 않도록 하여, 복강에 인산완충생리식염수(PBS: 0.01M의 인산나트륨, 0.9%의 NaCl 및 5 단위/ml의 헤파린을 함유)를 10ml를 주입했다. 복부를 1분 정도 가볍게 두드린 후, 복강액을 회수하고 복막 세포를 수집했다. 회수한 복강액을 원심분리(1500rpm, 4 ℃, 15분)한 후, 상층액을 버리고 RPMI 배지를 첨가, 피펫팅했다. Burker-Turk형 혈구 계산판으로 세포 수를 측정하고, 1.0×106 cells/ml가 되도록 RPMI 배지를 더 첨가하여 조정했다. 또한, RPMI 배지는 다음과 같은 방법으로 제조하였다. 즉, 클린벤치 내에서 분말 배지(GIBCO사 제조, 카탈로그 번호: 856846)를 정제수 900ml에 용해한 후, 2g의 NaHCO3를 더 용해시켰다. 혼합물을 1N HCl로 pH7.2로 조정한 후, 정제수를 사용하여 전량을 1000ml로 하였다. 이렇게 얻은 용액을 필터(밀리포아, SLGVJ13SL)로 여과한 것을 RPMI 배지로 하고, 사용시까지 4 ℃에서 보관하였다.
멸균한 커버글라스(마츠나미(MATSUNAMI), micro cover glass, No.1)를 웰마다 3장씩 넣은 24웰 플레이트(TPP, 92024)에, 위에서 얻은 대식 세포 용액을 500 μl/well(5.0×105 cells/well) 분배하여 넣고, 각 웰에 RPMI 배지 500 μl/well을 더 부가하여, 전체적으로 1 ml/well이 되도록 하였다. 상기 플레이트를 37 ℃에서 1시간 배양한 후, 각 웰 내의 액을 버리고 RPMI 배지 1ml로 각 웰을 2회 세척하였다. 세척 후, RPMI 배지 1ml를 각 웰에 더 부가하여 37 ℃에서 15 시간 동안 배양하였다.
배양 후, 각 웰에 위에서 제조한 검체 1-1 ~ 1-3 및 비교검체 1-1 ~ 1-3을 각각 10μl 부가했다. 37 ℃에서 3시간 동안 배양하여 대식 세포를 자극했다. 배양 후, 각 웰의 용액 부분을 파기하고, 0.5% 옵소닌화 SRBC(양 적혈구, (주)일본생물재료센터) 1ml을 넣고 37 ℃에서 90분 동안 배양하여 대식 세포에 탐식시켰다. 탐식 후, 순차적으로 1/5 × PBS, 1 × PBS, 1 × PBS를 사용하여 커버글라스를 세척하고 약 30분간 공기 건조했다. 공기 건조 후, 각 커버글라스를 메탄올(관동화학(주), 25183-2B)에 1분 정도 침지시켜 메탄올 고정했다. 상기 고정 후, 다시 약 30분간 공기건조하고, PBS로 20배 희석한 기엠자액(시그마, A1327)으로 1시간 염색했다. 염색 후 수돗물로 커버글라스의 뒷면부터 세척하고 하룻밤 공기 건조시켰다.
공기 건조시킨 후, 슬라이드글라스(마츠나미, micro slide glass, S2215)에 커버글라스를 뒤집어 부착하였다. 광학 현미경(니콘사, ECLIPSE E200)으로 커버글라스 1장당 9점 사진을 촬영하고, 관찰되는 전체 대식 세포 수, 탐식된 SRBC 수, 탐식한 대식 세포의 수를 계산하고, 9점 분의 측정값을 합산하여, 측정된 전체 대식 세포 중 SRBC를 탐식한 대식 세포의 비율에, 하나의 대식 세포의 평균 탐식 수를 곱한 값을 섭식지수(ingestion index)로 산출하였다. 또한, 참고로 도 1에 「탐식하고 있는 대식 세포」및 「탐식된 SRBC」의 모습을 나타내는, 기엠자 염색 후의 사진을 나타낸다. 기엠자 염색에 의해 대식 세포는 자색 구체로, SRBC는 투명 구체로 관찰되고 있다. 대식 세포에 접촉하고 있는 SRBC를 탐식된 SRBC, SRBC에 접촉하고 있는 대식 세포를 탐식한 대식 세포로 하여, 섭식지수를 산출했다.
각 검체에 대하여, 각각의 커버글라스 마다 2 내지 3의 섭식지수를 산출하고 그 평균값을 구했다. 콘트롤로서, 검체 또는 비교검체 대신에 RPMI 배지를 이용하여 상기와 동일한 작업을 실시했다. 또한, 2개의 섭식지수를 구한 것은 비교검체 1-1 및 비교검체 1-2이며, 나머지에 대해서는 3개의 섭식지수를 산출했다.
결과를 표 1(옵소닌화 SRBC를 사용한, 쥐 복강 대식 세포 탐식능 활성) 및 도 2에 나타낸다.
|
|
시험에 제공된 단백질 양 (ng) |
섭식지수 (평균값) |
| 콘트롤 | 0 | 18.99 |
| 비교검체 1-1 | 1 | 17.12 |
| 비교검체 1-2 | 10 | 17.96 |
| 비교검체 1-3 | 100 | 19.45 |
| 검체 1-1 | 1 | 21.60 |
| 검체 1-2 | 10 | 23.46 |
| 검체 1-3 | 100 | 24.54 |
3. 장관 대식 세포의 탐식능 활성
(각 샘플의 제조)
LPS 샘플은 LPS(Lipopolysaccharide, from Escherichia coli) (시그마사 제조, L2755)를 100mM PBS(pH = 7.0)로 100μg/ml로 희석하여 제조하였다. 상기 LPS 샘플은 문헌(Seminars Immunopathology, 31 (2), 178-84, 2009)에 기재된 바와 같이 장관 대식 세포를 활성화하는 것이다.
혈청 샘플은 미처리 사람 혈청을 100mM PBS(pH = 7.0)로 100μg/ml로 희석하여 제조하였다.
사람 혈청 효소 처리물 샘플은, 특허문헌 3(국제공개 제2013/038997호)의 방법에 따라 사람 혈청을 상기 소 초유에 대한 방법과 동일한 방법으로 처리하여 얻은 사람 혈청 효소 처리물을, 100mM PBS(pH = 7.0)로 100μg/ml로 희석하여 제조 하였다.
초유 샘플은 미처리 소 초유를 100mM PBS(pH = 7.0)로 100μg/ml로 희석하여 제조하였다.
소 초유 효소 처리물 샘플은 소 초유 효소 처리물을 100mM PBS(pH = 7.0)로 100μg/ml로 희석하여 제조하였다.
(배지의 제조)
RPMI 배지 17ml에 콜라게나제 D(collagenase D)(Roche, 11088858001) 2ml 및 디엔에이스 I(DNaseI)(Roche, 11284932001) 1ml를 녹여 37 ℃로 가열하여, 콜라게나제 배지(collagenase medium)를 제조하였다.
(탐식능 활성의 측정)
C57BL/6 암컷 쥐(7 주령)에 20mg/ml의 클로랄 수화물(시그마, A2374) 400μl를 복강 투여하여 마취하였다. 쥐의 오른쪽 복부를 가르고 장을 노출시켜 각 샘플 (1mg/kg)을 투여한 후 복부를 닫았다. 투여 1시간 후 다시 복부를 갈라 장을 노출시키고, 비표지 OVA 단백질(시그마, A5503-1G) 및 AF488 표지 OVA 단백질(라이프 테크놀로지, O34781)을 투여하고, 복부를 닫았다. 투여 1시간 후, 쥐를 경추 탈골시켜 장을 꺼냈다. 꺼낸 장을 손상되지 않도록 하고 지방 및 파이어 판을 제거하고 PBS로 세척하였다. 장을 2cm 정도 절단하여 37 ℃로 가열한 FACS 완충액(인산완충생리식염수(PBS: 0.01M의 인산나트륨, 0.9 %의 NaCl 및 5 단위/ml의 헤파린을 함유) 41.98ml에 FBS(비활성화됨)(GIBCO사 제조, 10437) 5ml와, EDTA(나카라이테스크사(Nacalai Tesque, Inc.) 제조, 15111-45,500mM) 1ml와, HEPES(MP사 제조, 1688449, 1M) 1ml와, 피루빈산나트륨(GIMCO사 제조, 11360-070, 100mM) 500μl와, 황산폴리믹신 B(GIMCO사 제조, 21850-029, 25mg/ml) 20μl와, 페니실린·스트렙토마이신(GIMCO사 제조, 15140-122, 10,000U/ml) 500μl) 50ml에 넣고 37 ℃의 인큐베이터에서, 교반기로 20분간 교반하였다(250rpm 정도).
교반 후, 장을 꺼내어 PBS 30ml로 3회 세척하였다. 10 % FBS·RPMI 배지를 넣은 직경 10cm의 접시에 장을 옮겼다. 콜라게나제 배지 4ml를 넣고 장를 절단했다. 콜라게나제 배지 11ml를 추가하고 가만히 두었다. 떠있는 거품과 지방을 흡인기로 제거하였다. 바이알 중 조직편을 플라스크로 옮기고, 콜라게나제 배지 5ml로 바이알을 세척하고 세척액을 플라스크에 옮겼다. 플라스크를 37 ℃의 인큐베이터에 넣어 내용물을 1시간 교반하였다. 교반 후 플라스크에 0.5M EDTA(pH=8.0, PBS로 제조) 400μl를 부가하여 5분간 더 교반하였다. 교반 후, 셀 스트레이너(팔콘(FALCON), 352360)가 올려진 튜브에 상층액을 옮겼다. 한편, 조직 파편에 37 ℃로 가열한 FACS 완충액 10ml를 가하고, 현탁했다. 현탁액 전체를 셀 스트레이너를 통과시키고, 위에 남은 데브리스(debris)를 짜내었다. 여과액을 20 ℃, 1800rpm으로 10분간 원심 분리를 걸었다. 원심 분리 후, 상층액을 제거하고 세포를 분산시켰다. 세포를 40 % 퍼콜(percoll) 10ml로 현탁하고, 현탁액을 튜브에 옮겨 모세관을 사용하여 75 % 퍼콜 5ml를 하부에 넣고, 20 ℃, 2000rpm에서 튜브를 20분간 원심 분리에 걸었다. 원심 분리 후, 튜브 상부로부터 40 % 퍼콜을 흡인기로 7ml 정도 제거하였다. 제거 후, 6ml 정도를 FACS 완충액 5ml가 들어간 튜브에 가하여, FACS 완충액을 전량이 14ml가 되도록 더 가하고, 20 ℃, 1800rpm에서 튜브를 10분간 원심 분리에 걸었다. 원심 분리 후, 상층액을 제외하고 FACS 완충액 2ml를 넣고 현탁하여 1ml를 다른 튜브로 옮겼다. 튜브를 20 ℃, 1500rpm에서 3분간 원심 분리에 걸었다.
원심 분리 후, 상층액을 제거하고 FACS 완충액 2ml를 가한 후, 퍼시픽(PacificTM) 항 쥐 F4/80 항체(anti-mouse F4/80 Antibody)(바이오레전드(Biolegend), 123124), PE/cy7 항 쥐/사람 CD11b 항체(PE/cy7 anti-mouse/human CD11b Antibody)(바이오레전드, 101216), CD16/32 항체(CD16/32 Anti-body)(BD, 553141)를 넣고 4 ℃에서 반응시켰다. 15분 후, 상층액을 제거하고 세척용 버퍼(wash buffer) 2ml를 넣고, 20 ℃, 1500rpm에서 3분간 원심분리하였다. 원심분리 후, 1μg/ml의 7-아미노악티노마이신 D(시그마, A9400) 용액 200μl를 가하고, 유동세포분석법으로 장관 대식 세포의 탐식활성을 측정했다.
(결과)
결과는 표 2와 같다. 초유 효소 처리물은 혈청 효소 처리물에 비해 장관의 난백알부민(OVA) 양성 대식 세포의 탐식능 활성을 더욱 증가시켰다.
| 샘플 | LPS | 혈청 | 혈청 효소 처리물 |
초유 | 초유 효소 처리물 |
| 투여량(mg/kg) | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| OVA 양성 대식 세포(%) | 26.9 | 2.6 | 7.2 | 4.5 | 25.5 |
4. 초유 효소 처리물과 혈청 효소 처리물의 활성 단백질(HPA 양성)의 분자량
(검체의 제조)
마커 1로는, Novex(등록상표) Sharp Pre-stained Protein Standard (InvitrogenTM, 745065)를 사용하였다.
혈청은, 미처리 사람 혈청을 100mM PBS(pH = 7.0)로 1mg/ml로 희석하여 사용하였다.
혈청 효소 처리물은, 상기와 동일한 방법으로 얻은 사람 혈청 효소 처리물을 100mM PBS(pH = 7.0)로 1mg/ml로 희석하여 사용하였다.
마커 2로는, WIDE-VIEW Prestained Protein Size Marker III(와코(Wako)사 제조, 230-02461)을 사용하였다.
초유는, 미처리 소 초유를 100mM PBS(pH = 7.0)로 1mg/ml로 희석하여 사용하였다.
초유 효소 처리물은, 소 초유 효소 처리물을 100mM PBS(pH = 7.0)로 1mg/ml로 희석하여 사용하였다.
상기 각 검체를 증류수로 1μg/μl로 제조하여, 각 검체 5μl와 샘플 버퍼(950μl의 Laemmli Sample Buffer (BIO-RAD사 제조, 161-0737)에 50μl의 2-메르캅토에탄올(시그마사 제조, A2029)를 추가함) 5μl를 혼합하고 100 ℃에서 10분간 열처리하여 영동용 샘플을 얻었다.
영동 겔(XV PANTERA GEL, DRC, NXV-381D20)을 영동 조(ERICA-MP, DRC, XVE-0MPC)에 세팅하고 영동 버퍼(고속 SDS-PAGE 영동 버퍼(DRC사 제조, NXV-BUFPTG)를 1000ml의 증류수로 용해하여 제조)로 영동 조를 채웠다. 준비된 겔의 각 웰(well)에 각 영동용 샘플을 적용하고, 300V에서 영동했다. 각 영동 샘플의 적용량은 레인 1이 10μl, 레인 2와 3이 1μl, 레인 4, 5, 6이 5μl 였다. 영동 종료 후, 겔 상부를 잘라 전사장치(MINICA-MP, DRC, XVE-0MPB)에 세팅했다. 메탄올(관동화학(주), 25183-2B)에 1분간 침지시킨 PVDF막(BIO-RAD, 162-0177)을 겔 상에 놓고, 47V에서 1시간 전사를 행했다.
전사 후 막을 TBS-T(8.0g의 NaCl, 0.2g의 KCL 및 3.0g의 H2NC(CH2OH)3를 1000ml의 증류수에 용해하여 pH7.4로 조정하고, 이에 1ml 폴리옥시에틸렌(20) 소르 비탄 모노라우레이트(Sorbitan monolaurate)(와코사 제조, 167-11515)를 첨가하여 제조)로 10분간 3회 세척하였다. 막을 블로킹 용액(100mg의 BSA(bovine serum albumin, 시그마, A4503)를 10ml의 TBS-T로 용해시켜 제조)에 담그고 1 시간 동안 실온에서 진탕했다. 막을 TBS-T로 10분간 3회 세척하고 일차 항체 HPA(10μl의 HPA 렉틴(Helix Pomatia biotin conjyugate로부터의 냉동건조분말, Lectin(시그마사 제조, L6512) 1mg을 1ml의 100mM SPB(pH7.0)로 용해하여 획득)을 10ml의 TBS-T로 희석하여 제조)에 담그고 1시간 동안 실온에서 진탕했다. 막을 TBS-T로 10 분간 3회 세척하고, 이차 항체 스트렙토아비딘(2μl의 스트렙토아비딘(GE 헬스케어사 제조, RPN-1231)을 10ml의 TBS-T로 희석하여 제조)에 담가 1시간 실온에서 진탕했다. 막을 TBS-T로 10분간 3회 세척하였다.
플라스틱 용기 내에서 막과 ECL용액(1ml의 검출시약 1(ECL Western Blotting Detection Reagents, GE 헬스케어사 제조, RPN2106V1)에 1ml의 검출시약 2(ECL Western Blotting Detection Reagents, GE 헬스케어사 제조, RPN2106V2)를 가하여 제조)을 1분간 반응시켜 루미큐브(Lumicube)(리포닉스(주)(Liponics, Inc.), 5003)에 의해 촬영했다. 촬영 후 막을 TBS-T로 10분간 3회 세척하고, CBB 염색액(PAGE Blue 83, 코스모바이오(주)(COSMO BIO CO., LTD.), 423406)에 10분간 담가 단백질의 밴드를 관찰했다(도 3). 그 결과로부터 혈청효소 처리물에서의 활성 단백질(HPA 양성)의 분자량은 70, 55, 51, 17 kDa로 확인된 반면, 초유 효소 처리물에서의 활성 단백질(HPA 양성)의 분자량은 245, 82 kDa로 확인되었다.
5. 소 초유 효소 처리물의 제조(2)
시알리다아제를 사용하지 않은 것을 제외하고는, 소 초유 효소 처리물 제조(1)와 동일하게 처리하여 단백질 농도가 각각 10ng/10μl(검체 2-1), 100ng/10μl(검체 2-2)인 각 검체를 제조하였다. 포지티브 컨트롤로서 LPS가 1μg/10μl인 검체를 제조하였다.
6. 대식 세포 탐식능 활성(2)
상기 검체를 사용하여 대식 세포 탐식능 활성(1)과 동일하게 하여 섭식지수를 구하였다. 결과를 표 3(옵소닌화 SRBC를 사용한, 쥐 복강 대식 세포 탐식능 활성)에 나타낸다.
| 시험에 제공된 단백질 양 (ng) | 섭식지수(평균값) | |
| 콘트롤 | 0 | 16.17 |
| 포지티브 콘트롤(LPS) | 1000 | 21.24 |
| 검체 2-1 | 10 | 26.52 |
| 검체 2-2 | 100 | 22.31 |
본 발명에 따르면, 암 및 감염증 등의 질병 치료, 예방, 개선, 소멸 유지 등에 유용한, 소 초유 효소 처리물 및 그 제조방법을 제공할 수 있다.
1 탐식하고 있는 대식 세포
2 탐식된 SRBC
3 대식 세포
2 탐식된 SRBC
3 대식 세포
Claims (8)
1회 투여용으로 0.02μg ~ 40mg/kg 범위의 단백질을 포함하고, 대식세포 활성화 작용을 갖는 소 초유 효소 처리물의 제조방법에 있어서,
소 초유의 총 단백질 농도를 조정하기 위하여 필요한 양의 완충 용액 존재 하에 소 초유를 β-갈락토시다아제와 접촉시키는 단계를 포함하는 것인, 소 초유 효소 처리물의 제조방법.
소 초유의 총 단백질 농도를 조정하기 위하여 필요한 양의 완충 용액 존재 하에 소 초유를 β-갈락토시다아제와 접촉시키는 단계를 포함하는 것인, 소 초유 효소 처리물의 제조방법.
청구항 1에 있어서,
소 초유를 시알리다아제와 접촉시키는 단계를 더 포함하여 이루어지는, 제조방법.
소 초유를 시알리다아제와 접촉시키는 단계를 더 포함하여 이루어지는, 제조방법.
청구항 1 또는 청구항 2의 제조방법에 의해 얻어지는, 소 초유 효소 처리물.
삭제
삭제
삭제
청구항 3의 소 초유 효소 처리물을 포함하여 이루어지는, 식품용 조성물.
청구항 7의 식품용 조성물을 포함하여 이루어지는 식품.
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Citations (1)
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|---|---|---|---|---|
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