KR102301961B1 - 아밀로이드 접합체 및 그의 용도 및 방법 - Google Patents
아밀로이드 접합체 및 그의 용도 및 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR102301961B1 KR102301961B1 KR1020187024580A KR20187024580A KR102301961B1 KR 102301961 B1 KR102301961 B1 KR 102301961B1 KR 1020187024580 A KR1020187024580 A KR 1020187024580A KR 20187024580 A KR20187024580 A KR 20187024580A KR 102301961 B1 KR102301961 B1 KR 102301961B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- peptide
- pharmaceutical composition
- klh
- cysaβ
- conjugate
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 80
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims abstract description 32
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 claims description 68
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 32
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 26
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 206010002022 amyloidosis Diseases 0.000 claims description 18
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 claims description 16
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 16
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 15
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 14
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims description 13
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- QWJIUYWHYILJMQ-UHFFFAOYSA-N 2-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)butanoic acid Chemical compound CCC(C(O)=O)N1C(=O)C=CC1=O QWJIUYWHYILJMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 208000005145 Cerebral amyloid angiopathy Diseases 0.000 claims description 5
- 201000002832 Lewy body dementia Diseases 0.000 claims description 5
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims description 5
- 201000004810 Vascular dementia Diseases 0.000 claims description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 5
- 201000008319 inclusion body myositis Diseases 0.000 claims description 5
- 208000009829 Lewy Body Disease Diseases 0.000 claims description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 4
- FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 Chemical compound C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 claims 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract description 40
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 abstract description 15
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 abstract description 15
- 230000004044 response Effects 0.000 abstract description 7
- 101000729818 Bacillus licheniformis Glutamate racemase Proteins 0.000 abstract 1
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 80
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 12
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 11
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 11
- 108010064397 amyloid beta-protein (1-40) Proteins 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 108010064539 amyloid beta-protein (1-42) Proteins 0.000 description 9
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 9
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 8
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 7
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 7
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 229940024545 aluminum hydroxide Drugs 0.000 description 4
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 3
- 108010065395 Neuropep-1 Proteins 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEDQMTWEYFBOIK-ACZMJKKPSA-N Asp-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XEDQMTWEYFBOIK-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- KGHLGJAXYSVNJP-WHFBIAKZSA-N Asp-Ser-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O KGHLGJAXYSVNJP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- XWKPSMRPIKKDDU-RCOVLWMOSA-N Asp-Val-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O XWKPSMRPIKKDDU-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 2
- 230000007082 Aβ accumulation Effects 0.000 description 2
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 2
- 101100512078 Caenorhabditis elegans lys-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 2
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 2
- 241000272201 Columbiformes Species 0.000 description 2
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 2
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 2
- YMUFWNJHVPQNQD-ZKWXMUAHSA-N Gly-Ala-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN YMUFWNJHVPQNQD-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- YSDLIYZLOTZZNP-UWVGGRQHSA-N Gly-Leu-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CN YSDLIYZLOTZZNP-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- IDQNVIWPPWAFSY-AVGNSLFASA-N His-His-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O IDQNVIWPPWAFSY-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- XOEDPXDZJHBQIX-ULQDDVLXSA-N Leu-Val-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XOEDPXDZJHBQIX-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- -1 MDP-butyl ester Chemical compound 0.000 description 2
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 2
- CYZBFPYMSJGBRL-DRZSPHRISA-N Phe-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CYZBFPYMSJGBRL-DRZSPHRISA-N 0.000 description 2
- MQWISMJKHOUEMW-ULQDDVLXSA-N Phe-Arg-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 MQWISMJKHOUEMW-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- VGNYHOBZJKWRGI-CIUDSAMLSA-N Ser-Asn-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO VGNYHOBZJKWRGI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UNUZEBFXGWVAOP-DZKIICNBSA-N Tyr-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O UNUZEBFXGWVAOP-DZKIICNBSA-N 0.000 description 2
- PIFJAFRUVWZRKR-QMMMGPOBSA-N Val-Gly-Gly Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)NCC([O-])=O PIFJAFRUVWZRKR-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 108010008685 alanyl-glutamyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 2
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 2
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 2
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 2
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 2
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LXPAYSRLFXJBQQ-NXCWWGNDSA-N (2s)-2-[[(2s)-4-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-3-[2,3-di(hexadecanoyloxy)propylsulfanyl]-2-(hexadecanoylamino)propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CSCC(OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC LXPAYSRLFXJBQQ-NXCWWGNDSA-N 0.000 description 1
- GHAXTSRJNHYMFC-SANMLTNESA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-(octadecylamino)propanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 GHAXTSRJNHYMFC-SANMLTNESA-N 0.000 description 1
- UGXDVELKRYZPDM-XLXQKPBQSA-N (4r)-4-[[(2s,3r)-2-[[(2r)-2-[(2r,3r,4r,5r)-2-acetamido-4,5,6-trihydroxy-1-oxohexan-3-yl]oxypropanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-5-amino-5-oxopentanoic acid Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@@H]([C@H](O)[C@H](O)CO)[C@@H](NC(C)=O)C=O UGXDVELKRYZPDM-XLXQKPBQSA-N 0.000 description 1
- SLKDGVPOSSLUAI-PGUFJCEWSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine zwitterion Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC SLKDGVPOSSLUAI-PGUFJCEWSA-N 0.000 description 1
- GMRQFYUYWCNGIN-ZVUFCXRFSA-N 1,25-dihydroxy vitamin D3 Chemical compound C1([C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@@H](CCCC(C)(C)O)C)=CC=C1C[C@@H](O)C[C@H](O)C1=C GMRQFYUYWCNGIN-ZVUFCXRFSA-N 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010091916 2,3-bis(palmitoyloxy)-2-propyl-N-palmitoyl-cysteinyl-seryl-seryl-asparaginyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 1
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 1
- 229940046168 CpG oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 1
- 108091029430 CpG site Proteins 0.000 description 1
- LBOLGUYQEPZSKM-YUMQZZPRSA-N Cys-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)N LBOLGUYQEPZSKM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N Dehydroepiandrosterone Natural products C1C(O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067889 Dementia with Lewy bodies Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 102100020715 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Human genes 0.000 description 1
- 101710162577 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Proteins 0.000 description 1
- KSOBNUBCYHGUKH-UWVGGRQHSA-N Gly-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CN KSOBNUBCYHGUKH-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 101000619708 Homo sapiens Peroxiredoxin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108010058647 Klebsiella pneumoniae glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 1
- 102100035304 Lymphotactin Human genes 0.000 description 1
- CQRGINSEMFBACV-WPRPVWTQSA-N Met-Val-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O CQRGINSEMFBACV-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010027906 Monocytosis Diseases 0.000 description 1
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 1
- 241000187481 Mycobacterium phlei Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 102100022239 Peroxiredoxin-6 Human genes 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- WBPFYNYTYASCQP-CYDGBPFRSA-N Val-Val-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N WBPFYNYTYASCQP-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- 241000710959 Venezuelan equine encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 241000607447 Yersinia enterocolitica Species 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 229940086737 allyl sucrose Drugs 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- WXNRAKRZUCLRBP-UHFFFAOYSA-N avridine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(CCCN(CCO)CCO)CCCCCCCCCCCCCCCCCC WXNRAKRZUCLRBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950010555 avridine Drugs 0.000 description 1
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000012916 chromogenic reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N dehydroepiandrosterone Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M dimethyl(dioctadecyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 description 1
- KDQPSPMLNJTZAL-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogenphosphate dihydrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O KDQPSPMLNJTZAL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 229940040731 human interleukin-12 Drugs 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 description 1
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 108010019677 lymphotactin Proteins 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229940055036 mycobacterium phlei Drugs 0.000 description 1
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229960002847 prasterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- BBMHARZCALWXSL-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogenphosphate monohydrate Chemical compound O.[Na+].OP(O)([O-])=O BBMHARZCALWXSL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000000277 virosome Substances 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940098232 yersinia enterocolitica Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1767—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2872—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against prion molecules, e.g. CD230
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/03—Peptides having up to 20 amino acids in an undefined or only partially defined sequence; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0007—Nervous system antigens; Prions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01F—COMPOUNDS OF THE METALS BERYLLIUM, MAGNESIUM, ALUMINIUM, CALCIUM, STRONTIUM, BARIUM, RADIUM, THORIUM, OR OF THE RARE-EARTH METALS
- C01F7/00—Compounds of aluminium
- C01F7/02—Aluminium oxide; Aluminium hydroxide; Aluminates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4711—Alzheimer's disease; Amyloid plaque core protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Geology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
본 발명은, Aβ40에 대항한 효과적이고 특이적인 면역반응(생산된 항체는 Aβ42에 유의적으로 결합하지 않으면서 Aβ40에 특이적이다)을 가능하게 하거나 야기하는 것 외에도, CysAβ(33-40) 펩티드와 KLH를 또한 포함하고 상기 요소들이 또한 펩티드가 수송 단백질에 결합될 수 있도록 하는 다른 가교결합제에 의해 결합 또는 접합된 기타 접합체에 의해 야기된 면역반응에 비해서 상기 반응을 증가시키는 약학적 조성물에 관한 것이다.
Description
본 발명은 생화학 분야, 보다 구체적으로는 단백질 접합(protein conjugation) 부문의 분야에 관한 것이다. 추가로, 본 발명은 아밀로이드 질병(amyloid diseases)의 치료시 의학 및 수의학 분야에서 응용성을 갖는다.
아밀로이드 질병, 근본적으로는 알츠하이머병(Alzheimer's disease) 환자의 능동 또는 수동 면역화를 위해 유용한 다수의 접합체(conjugate)가 선행 기술에서 설명되었다. 상기 선행 기술의 대부분은 환자에서 적합한 면역반응이 발생될 수 있도록 하는 펩티드 또는 수송 단백질의 선택에 집중되고 있으며, 사용되는 가교결합제에는 크게 중점을 두거나 연관성을 두지 않는다는 것이 지적되어야 한다. 상기 가교결합제(crosslinking agent)는, 흔히 이용가능하거나 지금까지 공지된 모든 것들의 목록의 형태로 표현되어 있는데 이는 이들 중 어느 것이라도 동등한 방식으로 사용될 수 있음을 시사하거나, 단순히 언급조차도 되어있지 않다.
예를 들면, 공개번호 ES2246105의 스페인 특허출원은 단백질 데이터 뱅크(Protein Data Bank)에서 수탁번호 4BED를 갖는 Aβ33-40 펩티드와 수송 단백질 키홀 림펫 헤모시아닌(transport protein keyhole limpet hemocyanin, 이하, KLH)에 의해 형성된 접합체를 이용한 환자의 능동 면역화에 의한 아밀로이드 질병, 특히 알츠하이머병의 예방 또는 치료를 개시하고 있다. 이후에 아밀로이드 질병, 특히 알츠하이머병의 예방 또는 치료를 위한 수동 면역화 방법에서 사용되는 항체를 생성하기 위한 상기 접합체의 용도(예를 들면, 상기 접합체를 이용하여 포유류 또는 조류를 면역화시킴으로써)가 또한 고려되어 있다. 상기 특허 문헌은 사용되는 가교결합제를 명시하고 있지 않다.
본 발명자들이 인지하고 있고 가교결합제가 접합체에서 생성되는 면역반응에서 중요한 것으로 고려되는 유일한 선행 기술 문헌은 공개번호 WO2005/072777의 PCT 특허출원이다. 상기 문헌은 가교결합제 LPA에 기반한 환자의 능동 또는 수동 면역화를 위한 접합체를 개시하고 있으며, 이와 관련하여 환자에서 적합한 면역반응을 발생하기에 적절한, 동시에 2 개의 펩티드와 결합하거나 2 개의 펩티드를 갖는 그의 능력이 강조되어 있다. LPA-기반 접합체의 일반적 설명 내에서, 사용되는 펩티드는 Aβ42 또는 Aβ40 C-말단 단편일 수 있는 것으로 고려되며, 단편 33-42, 35-42, 36-42, 37-42, 38-42 및 39-42이 구체적으로 언급되고 예시되어 있다. 추가로, 상기 문헌은 수송 단백질은 KLH일 수 있다고 언급하고 있다. 상기 동일 문헌은 상이한 가교결합제(N-석신이미딜 3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트, 흔히 SPDP로서 공지됨)를 사용하여 기타 접합체들을 생성하는 것을 설명하고 있다.
발명의 간단한 설명
광범위하고도 철저한 실험 후에, 본 발명자들은 놀랍게도 그의 각 분자가 펩티드를 수송 단백질에 결합시키는 헤테로이작용성 가교결합제인 말레이미도부티르산 N-하이드록시석신이미드 에스테르(Maleimidobutyric acid N-hydroxysuccinimide ester, 이하, SM)를 CysAβ(33-40) 펩티드(SEQ ID NO:1, 서열번호 1) 및 KLH 접합체를 제조하기 위한 가교결합제로서 사용하면, 마찬가지로 펩티드가 수송 단백질에 결합될 수 있도록 하는 SPDP와 같은 선행 기술의 기타 호모- 또는 헤테로이작용성 가교결합제를 사용하여 생성한 접합체에 의해 발생된 면역반응에 비해서 향상된 면역반응이 발생되도록 할 수 있는 접합체가 생성된다는 것을 발견하였다. 이러한 향상은 본 명세서의 실시예 1 내지 4 에 명백하게 나타내어져 있다. 또한, 상기 실시예들은 상기 신규 접합체 또는 상기 접합체를 포함하는 약학적 조성물이 다음을 생성한다는 것을 보여준다:
- (예방용 또는 치료용) 백신 치료와 연관된 부작용의 최소화를 목적으로 가능한 한 특이적인 면역반응;
- 환자의 효과적인 면역화의 보장 및 면역원성 접합체의 필요 투여량 감소를 목적으로 하는 최상의 가능한 면역반응.
따라서, 제 1 양상에서, 본 발명은 가교결합제가 SM임을 특징으로 하는 접합체에 관한 것이다.
다른 양상에서, 본 발명은 본 발명의 접합체를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 추가 양상에서, 의약품, 보다 구체적으로는 아밀로이드 질병의 치료 또는 예방용 의약품을 제조하기 위한 상기 접합체의 용도가 고려된다.
본 발명과 관련된 또 다른 양상은 의약품으로서 사용하기 위한, 보다 구체적으로는 아밀로이드 질병의 치료 또는 예방에서 사용하기 위한 본 발명의 접합체를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
추가로, 본 발명은 또한 본 발명의 접합체를 포함하는 조성물의 전달에 의한 아밀로이드 질병의 치료 또는 예방 방법에 관한 것이다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 본 발명의 접합체의 사용에 기반한 항체의 제조 방법에 관한 것이다.
정의
본원에서 사용되는 바와 같이, "아밀로이드 질병(amyloid disease)" 및 그의 복수형은 β-아밀로이드 축적과 연관된 질병을 의미한다. 상기 축적은 근본적으로 뇌 속에서 발생하여 질병, 그 중에서도 알츠하이머병, 파킨슨병, 대뇌 아밀로이드 혈관병증, 아밀로이드 기원의 혈관성 치매 및 루이소체 치매(dementia with Lewy bodies)를 야기할 수 있다. β-아밀로이드 축적은 또한 근본적으로 골격근에서 발생하여 봉입체 근염을 야기할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "수동 면역화(passive immunization)" 및 그의 복수형은 환자에게 면역을 부여하려는 의도로 항체 또는 그의 단편을 상기 환자에게 전달하는 것을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "능동 면역화(active immunization)" 및 그의 복수형은 면역원으로서 작용하는 펩티드(접합체의 형태)를 환자에게 전달하는 것을 의미하는 것으로, 즉 상기 펩티드는 상기 환자에게 면역을 부여하려는 의도로 항체 발생을 가능하게 한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "애주번트(adjuvant)" 및 그의 복수형은 환자에서 면역반응을 증가시키거나 향상시키거나 또는 달리 조절하기 위해 본 발명의 접합체와 조합될 수 있는 면역조절성 물질을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "환자(patient)" 및 그의 복수형은 아밀로이드 질병의 치료 또는 예방을 목적으로 본 발명의 접합체 또는 이를 포함하는 조성물이 투여될 수 있는 임의의 포유류, 바람직하게는 인간을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "CysAβ(33-40)"은 N-말단에 시스테인이 첨가된 Aβ40(SEQ ID NO:2, 서열번호 2)의 위치 33번 내지 40번의 서열을 의미한다. 상기 서열은 서열번호 1로 반영되고, CGLMVGGVV이다.
설명
본 발명의 제 1 양상은 접합체의 각 성분(상기 적어도 하나의 펩티드 각각과 KLH)을 연결하는 가교결합제가 말레이미도부티르산 N-하이드록시석신이미드 에스테르(SM)임을 특징으로 하는, 적어도 하나의 CysAβ(33-40) 펩티드(서열번호 1)와 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH)을 포함하는 접합체에 관한 것이다.
상기 접합체는, Aβ40에 대항한 효과적이고 특이적인 면역반응(생성된 항체는 Aβ42에 유의적으로 결합하지 않으면서 Aβ40에 특이적이다)을 가능하게 하거나 야기하는 것 외에도, CysAβ(33-40) 펩티드(서열번호 1)와 KLH를 또한 포함하고 상기 요소들이 또한 펩티드가 수송 단백질에 결합될 수 있도록 하는 다른 가교결합제에 의해 결합 또는 접합된 기타 접합체에 의해 야기된 면역반응에 비해서 상기 반응을 증가시킨다.
제 2 양상에서, 본 발명은 본 발명의 접합체를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
바람직한 구현예에서, 조성물은 1 종이상의 애주번트(adjuvant)를 포함하며, 바람직하게는 미넬랄 염(예컨대, 수산화알루미늄, 인산알루미늄 또는 인산칼슘), 미립자 및 계면활성제[예컨대, 비이온성 블록 중합체 계면활성제, 비로좀(virosome), 사포닌, 수막구균 외막 단백질(프로테오좀), 면역자극 복합체, 코클레이트(cochleate), 디메틸 디옥타데실 암모늄 브로마이드, 아브리딘(avridine), 비타민 A 또는 비타민 E], 세균 생성물[예컨대, 마이코박테리움 플레이(Mycobacterium phlei)의 세포벽 골격, 무라밀 디펩티드(muramyl dipeptide) 및 트리펩티드(트레오닐-MDP, MDP-부틸 에스테르, 디팔미토일 포스파티딜에탄올아민 MTP), 모노포스포릴 지질 A, 클렙시엘라 뉴모니애(Klebsiella pneumoniae) 당단백질, 보르데텔라 페르투시스(Bordetella pertussis), 바실러스 칼메트 게랑(Bacillus Calmette-Guerin), 브이. 콜레라(V. Cholerae) 및 이. 콜라이(E. coli) 열-불안정성 장내독소, 트레할로스 디미콜레이트(trehalose dimicolate), CpG 올리고데옥시뉴클레오티드], 호르몬 및 사이토킨(예를 들면, 인터류킨-2, 인터페론 α, 인터페론-β, 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자, 데하이드로에피안드로스테론, Flt3 리간드, 1,25 디하이드록시비타민 D3, 인터류킨-1, 인터류킨-6, 인터류킨-12, 인간 성장 호르몬, β-마이크로글로불린 및 림포탁틴), 단일 항원 작제물(예컨대, 라이신 핵에 결합된 다수의 펩티드 항원 또는 헬퍼 T-세포 에피토프에 결합되고 N-말단에서 팔미토일화된 세포독성 T-세포 에피토프), 폴리음이온(polyanions)(예컨대, 덱스트란 또는 이중가닥 폴리뉴클레오티드), 폴리아크릴릭(예컨대, 폴리메틸메타크릴레이트 또는 알릴 슈크로스와 가교결합된 아크릴산), 담체[예컨대, 파상풍 톡소이드, 디프테리아 톡소이드, B 혈청군 수막구균 외막 단백질(프로테오좀), 슈도모나스(Pseudomonas) 외독소 A, 콜레라 독소 B 서브유닛, 열-불안정 돌연변이 장내독소성 이. 콜라이 장내독소, B형 간염 바이러스 핵, 콜레라 독소 A 융합 단백질, CpG 디뉴클레오티드, 열 쇼크 단백질 또는 지방산], 생 벡터(예컨대, 백시니아 바이러스, 카나리아두 바이러스, 아데노바이러스, 약독화된 살모넬라 티피(Salmonella typhi), 바실러스 칼메트 게랑, 스트렙토코커스 고르도니(Streptococcus gordonni), 단순포진 바이러스, 백신-유도된 폴리오바이러스, 리노바이러스, 베네수엘라 말 뇌염 바이러스, 예르시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica), 리스테리아 모노사이토게네스(Listeria monocytogenes), 시겔라(Shigella), 보르데텔라 페르투시스(Bordetella pertussis) 또는 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae), 비히클[예컨대, 유중수 에멀젼(예를 들면, 완전 프로인트 애주번트(Freund's adjuvant) 또는 불완전 프로인트 애주번트와 같은 미네랄 오일; 식물성 오일; 스쿠알렌 또는 스쿠알란); 스쿠알렌, Tween-80과 Span 85의 혼합물과 같은 수중유 에멀젼; 리포좀; 또는 예를 들면, 락타이드와 글리콜라이드, 폴리포스파존, 베타-글루칸 또는 프로테이노이드의 생분해성 중합체 미소구체]; 기타(예컨대, N-아세틸-글루코사민-3-일-아세틸-L-알라닐-D-이소글루타민, 감마 인슐린 및 수산화알루미늄, 트랜스제닉(transgenic) 식물, 인간 수지상 세포, 리소포스파티딜글리세롤, 스테아릴-타이로신 또는 트리팔미토일 펜타펩티드) 또는 그의 조합으로부터 선택되는 하나 이상의 애주번트를 추가로 포함한다.
본 발명의 제 2 양상의 바람직한 구현예에서, 상기 애주번트는 수산화알루미늄이고, 보다 바람직하게는 수산화알루미늄 겔이다. 따라서, 본 발명의 제2 양상의 바람직한 구현예는 i) 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH)에 연결된 적어도 하나의 CysAβ(33-40) 펩티드(서열번호 1)를 포함하는 접합체 및 ii) 수산화알루미늄 겔을 포함하고 여기서 상기 접합체의 각 CysAβ(33-40) 펩티드를 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH)에 연결시키는 가교결합제가 말레이미도부티르산 N-하이드록시석신이미드 에스테르(SM)인 조성물, 바람직하게는 약학적 조성물에 관한 것이다.
실시예 5 에 나타낸 바와 같이, 상기 바람직한 조성물의 수산화알루미늄 겔로의 접합체의 흡착율(adsorption rate)은 pH에 의해 좌우된다는 것을 주지한다. 사실, 흡착율은 더 낮은 pH-값에서 증가한다. pH 7.4 에서 pH 7.2 또는 심지어 7.0 으로의 감소는 유의적인 더 높은 흡착율을 야기하지 않는다. pH 6.8 에서의 흡착은 대략 90 %의 흡착율을 나타낸다. pH 6.0 에서 흡착율이 가장 높다. 200 ㎍/mL 순(net) 펩티드를 기준으로 한 접합체 농도 및 pH 6 에서 접합체의 7 %는 여전히 유리 상태이다.
이러한 분석들에 근거하여, 약학적 조성물의 면역원성 능력을 증가시키기 위해서는, 5.8 내지 7.0 의 pH 값을 사용하여 애주번트로의 접합체의 흡착율을 증가시키고 그의 면역원성 능력(immunogenic capacity)을 유의적으로 증가시켜야 한다.
따라서, 본 발명의 제 2 양상의 또 다른 바람직한 구현예는, i) 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH)에 연결된 적어도 하나의 CysAβ(33-40) 펩티드(서열번호 1)를 포함하는 접합체 및 ii) 수산화알루미늄 겔을 포함하는 조성물, 바람직하게는 약학적 조성물에 관한 것이며, 여기서 상기 접합체의 각 CysAβ(33-40) 펩티드를 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH)에 연결시키는 가교결합제는 말레이미도부티르산 N-하이드록시석신이미드 에스테르(SM)이고 상기 조성물의 pH는 5.8 내지 7.0, 바람직하게는 6.2 내지 7.0, 더욱 바람직하게는 5.8 내지 6.2 의 범위이다.
본 발명의 제 2 양상의 추가의 바람직한 구현예들 또는 그의 바람직한 구현예들 중 어느 것에서, 약학적 조성물 중의 CysAβ(33-40) 펩티드(서열번호 1)의 양은 적어도 100 ㎍, 바람직하게는 적어도 150 ㎍, 더욱 바람직하게는 150 ㎍ 내지 400 ㎍, 보다 더욱 바람직하게는 160 ㎍ 내지 240 ㎍, 보다 더욱 바람직하게는 약 200 ㎍이다.
본 발명의 제 2 양상의 다른 추가의 바람직한 구현예들 또는 그의 바람직한 구현예들 중 어느 것에서, 약학적 조성물에 존재하는 KLH-SM-CysAβ(33-40) 접합체는 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH) 단백질당 적어도 45 개의 CysAβ(33-40) 펩티드(서열번호 1)의 비를 포함한다.
본 발명의 제 2 양상의 또 다른 추가의 바람직한 구현예들 또는 그의 바람직한 구현예들 중 어느 것에서, 약학적 조성물은 바람직하게는 1 또는 1.2 ml의 유리 앰풀에 함유된다.
상기 반영된 바와 같이, 본 발명의 제 2 양상의 조성물(수산화알루미늄 겔이 사용될 경우) 중에서 수산화알루미늄 겔으로의 접합체의 흡착율은 pH에 의해 좌우된다는 것을 다시 주지한다. 게다가, 놀랍게도, 일단 약학적 조성물이 제조되면 pH는 약학적 조성물의 저장 동안 증가하여, 이러한 증가가 7.0 초과 또는 바람직하게는 6.8 초과의 pH 값에 도달할 경우 흡착율을 감소시킨다. 약학적 조성물의 면역원성 능력에 명백하게 영향을 주는 이러한 문제점을 감소시키기 위해, 약학적 조성물의 pH를 약학적 조성물의 제조 시점에서 5.5 내지 6.5, 바람직하게는 5.8 내지 6.2, 더욱 바람직하게는 5.9 내지 6.1 의 범위로 조정하여, 저장이 조성물의 면역원성 능력에 영향을 주지 않거나 최소로 영향을 주도록 하는 것이 중요하다.
따라서, 본 발명의 제 2 양상의 또 다른 바람직한 구현예는 다음 단계들을 포함하는, 약학적 조성물의 제조 방법에 관한 것이다:
a. 말레이미도부티르산 N-하이드록시석신이미드 에스테르(SM)를 pH 7.0 내지 9.0 에서 완충액 중의 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH)을 포함하는 용액에 첨가하는 단계;
b. 바람직하게는 약 6.6 내지 7.0 의 pH에서 0.02 M Na-포스페이트-완충액을 사용하여 단계 a)의 용액으로부터 과량의 말레이미도부티르산 N-하이드록시석신이미드 에스테르를 제거하는 단계,
c. DMSO 중의 CysAβ(33-40) 펩티드(서열번호 1)를 6.6 내지 7.0의 pH에서 단계 b)의 용액에 첨가하여 접합체를 생성하는 단계;
d. 바람직하게는 6.6 내지 7.0 의 pH에서 0,01 M PBS-완충액을 사용하여 단계 c)로부터 얻은 용액에서 유리 펩티드를 제거하는 단계;
e. 임의로, 단계 d)의 용액을 바람직하게는 약 0.2 ㎛의 필터를 사용하여 여과하는 단계;
f. 단계 d)의 용액의 pH를 5.5 내지 6.5, 바람직하게는 5.8 내지 6.2, 더욱 바람직하게는 5.9 내지 6.1, 보다 더욱 바람직하게는 약 6.0 의 pH 범위로 조정하는 단계; 및
g. 일단 pH가 조정되었으면, 수산화알루미늄 겔을 단계 f)의 용액에 첨가하는 단계.
제 3 양상에서, 본 발명은 의약품을 제조하기 위한 본 발명의 접합체의 용도를 개시한다. 바람직하게는 상기 조성물은 본 발명의 제 2 양상 또는 그의 바람직한 구현예들 중 어느 것에서 확인된 조성물이다. 또한, 바람직한 구현예에서 상기 의약품은 아밀로이드 질병, 더욱 바람직하게는 알츠하이머병, 파킨슨병, 대뇌 아밀로이드 혈관병증, 아밀로이드 기원의 혈관성 치매, 봉입체 근염 및 루이소체 치매로부터 선택된 아밀로이드 질병의 치료 또는 예방에서 사용하기 위한 것이다. 가장 바람직한 구현예에서, 상기 의약품은 알츠하이머병의 예방 또는 치료를 위해 사용된다.
제 4 양상에서, 본 발명은 본 발명의 접합체를 포함하는 조성물의 치료적 유효량의 전달을 포함하는, 아밀로이드의 질병의 치료 또는 예방이 필요한 환자에서 아밀로이드 질병을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다. 바람직하게는 상기 조성물은 본 발명의 제 2 양상 또는 그의 바람직한 구현예들 중 어느 것에서 확인된 조성물이다. 또한, 바람직한 구현예에서 상기 아밀로이드 질병은 알츠하이머병, 파킨슨병, 대뇌 아밀로이드 혈관병증, 아밀로이드 기원의 혈관성 치매, 봉입체 근염 및 루이소체 치매로부터 선택된 아밀로이드 질병, 보다 더욱 바람직하게는 알츠하이머병이다.
최종 양상에서, 본 발명은 포유류(mammals) 또는 조류(birds)를 본 발명의 접합체를 포함하는 조성물로 면역화하기 위한 면역화 단계를 포함함을 특징으로 하는, 항체의 제조 방법을 개시한다. 바람직하게는, 상기 조성물은 본 발명의 제 2 양상 또는 그의 바람직한 구현예들 중 어느 것에서 확인된 조성물이다. 이러한 방법에서 사용되는 포유류는 반추동물, 말과, 토끼류, 영장류(바람직하게는 인간) 또는 충분한 양의 항체를 추출하거나 수득하기에 적합한 양의 혈청을 수득할 수 있도록 하는 임의의 기타 포유류인 것으로 고려된다. 본 발명의 방법에서 사용되는 조류는 임의의 가금-유사 조류, 물새, 비둘기류(pigeons, doves) 또는 충분한 양의 항체를 추출하거나 수득하기에 적합한 양의 혈청을 수득할 수 있도록 하는 임의의 기타 조류인 것으로 고려된다. 추가로, 본 발명의 최종 양상의 방법에 의해 수득된 또는 수득가능한 항체의 보호뿐만 아니라 알츠하이머병, 파킨슨병, 대뇌 아밀로이드 혈관병증, 아밀로이드 기원의 혈관성 치매, 봉입체 근염 및 루이소체 치매로부터 선택된 아밀로이드 질병, 보다 더욱 바람직하게는 알츠하이머병의 치료에서 사용하기 위한 약학적 조성물을 제조하기 위한 그의 용도가 고려된다.
따라서, 본 발명은 선행 기술의 기타 가교결합제를 사용하여 생성한 접합체에 비해서 더 큰 면역반응을 발생할 수 있도록 하는 가교결합제 SM을 사용하여 생성한 접합체 및 이를 포함하는 조성물을 제공한다.
게다가, 본 발명의 상기 접합체 또는 상기 접합체를 포함하는 조성물에 의해 발생된 면역반응은 Aβ40에 대해 특이적인데, 즉 항-Aβ42 항체를 생성없이 항-Aβ40 특이항체가 생성될 수 있도록 한다.
보다 충분히 이해하기 위해, 본 발명을 예로서 제시된 첨부된 도면 및 예시적인 비제한적 실시예를 참조로 하여 이하 더욱 상세히 설명한다.
실시예 1. KLH-SM-CysAβ(33-40) 접합체의 제조.
이러한 접합체를 제조하기 위해, KLH를 수송 단백질로서, SM을 가교결합제로서, 그리고 CysAβ(33-40)(서열번호 1)를 면역원성 펩티드(N-말단에 시스테인이 첨가된 아밀로이드 펩티드의 잔기 33 번 내지 40 번)로서 사용하였다.
결합은 KLH의 이용가능한 라이신 잔기와 펩티드의 N-말단 단부에 첨가된 시스테인 사이에서 일어났다. 이러한 경우에, KLH에 대한 가교결합제의 결합을 첫째로 수행하였고(KLH 활성화 단계), 두번째 단계에서는 면역원성 펩티드를 활성화된 KLH에 첨가하여 접합이 일어날 수 있도록 하였다.
상기를 위해 수행된 프로토콜은 다음과 같다:
· 100 mg의 SM을 680 ㎕의 무수 DMSO에 용해시켜 SM의 250 mM 모액을 제조하였다. 상기 모액의 분취액을 제조하고 -20 ℃에서 저장하였다.
· KLH를 PBS/5 mM EDTA pH 7.4 에 5 mg/mL의 농도로 용해시켰다. .
· 16 ㎕의 SM 모액을 접합된 KLH의 각 밀리리터마다 첨가하였다.
· 상기 용액을 실온에서 온화한 교반하에 2 시간 30 분 동안 정치시켜 반응되게 하였다.
· 그 다음, 반응 완충액을 교환하여 반응 부산물 및 과량의 미반응 SM을 제거하였다. 이러한 목적을 위해, PD10 컬럼(GE Healthcare; 참조번호 17-0851-01)을 다음과 같이 사용하였다:
o 단계 a): 컬럼을 25 mL(5 mL, 5 배) PBS(80 mM 인산수소나트륨 이수화물, 20 mM 인산이수소나트륨 일수화물, 100 mM 염화나트륨)/5 mM EDTA pH 7.4 로 평형화시켰다.
o 단계 b): 2.5 mL의 이미 반응된 용액을 상기 컬럼에 첨가하고, 상기 용액을 정치시켜 투과되도록 하고 용출액(eluate)을 폐기하였다.
o 단계 c): 3.5 mL의 PBS를 컬럼에 첨가하고 용출물을 모았다.
o 단계 d): 컬럼을 상기 단계 a)에서 설명한 바와 같이 25 mL(5 mL, 5 배)의 5 mM EDTA pH 7.4 로 재평형화시켰다.
o 단계 b) 내지 단계 d)를 반응된 용액의 용적에 따라서 필요할 때마다 반복하였다. 그 후, 컬럼을 평형화되게 하였다.
o 단계 e): 컬럼을 다른 경우에도 동일한 펩티드 접합체와 함께 동일한 방식으로 사용하기 위해 4 ℃에서 저장하였다. 프로토콜 이전 행한다.
그 다음, 활성화된 KLH와 혼합될 펩티드를 계산하였다. 이를 위해, KLH 내의 활성 부위(활성화된 KLH 용액을 디티오트레이톨로 처리하기 전과 후에 343 nm에서 흡광도를 측정하고 필요한 전환을 수행하는 것에 기반하여 선행 기술에 공지된 방법에 따라서 측정함) 외에도, 펩티드의 분자량과 KLH의 분자량 둘 다를 고려하였다. 예를 들면, 1724 개의 활성 부위를 갖는 10 mg의 KLH의 경우:
10/6725000(KLH의 평균 분자량)= 1.48×10-6 mmol의 KLH
1.48×10-6 mmol의 KLH×1724 개의 활성 부위= 모든 활성 부위를 포괄하기 위해 필요한 2.55×10-3 mmol의 펩티드.
접합 반응을 촉진하기 위해 3 배 펩티드 과량을 배치하였다:
2.55×10-3×3= 7.65×10-3 mmol의 필요한 펩티드.
7.65×10-3×펩티드의 분자량(834.4 Da)= 필요한 펩티드의 mg(6.38 mg의 펩티드)(필요한 전환 계수를 적용함).
· 일단 펩티드/활성화된 KLH 비(즉, SM이 결합된 KLH)가 결정되면, 다음 반응물을 제조하였다: 적합한 비율의, SM을 갖는 활성화된 KLH와 펩티드의 혼합물. 이를 위해, 펩티드를 DMSO 중에서 6 mg/mL로 제조하고 활성화된 KLH에 천천히 첨가하였다. 최종 반응물 중의 DMSO의 비율은 30 %를 초과하지 않아야 한다. 어떠한 경우라도 비율이 그보다 높다면, DMSO의 양이 30 % 미만의 값으로 감소될 때까지 PBS/5 mM EDTA pH 7.4 를 첨가한다.
· 상기 용액을 실온에서 온화한 교반하에 2 시간 30 분 동안 정치시켜 반응되게 하였다.
· 마지막으로, 수득된 용액을 4 ℃에서 저장하였다. KLH와 접합되지 않아서 유리 상태인 펩티드는 제거될 수 있거나 제거되지 않을 수 있다. 상기 유리 펩티드가 제거되지 않을 경우, 최종 생성물 중의 펩티드 농도는 본래의 KLH에 결합되는 펩티드뿐만 아니라 반응에서 사용된 총 펩티드 및 최종 반응 용적에 의해 결정된다.
실시예 2. 상이한 가교결합제들을 사용하여 생성한 KLH-가교결합제-CisAβ(33-40) 접합체들의 면역반응의 비교.
본 경우에는, 다음 접합체들을 사용하여 마우스(그룹당 4 마리)에서 발생시킨 면역반응 강도를 비교하였다:
· KLH-SM-CysAβ(33-40)(실시예 1 에 따라 제조됨).
· KLH-SPDP-CysAβ(33-40): 본 접합체는 선행 기술에서 통상적으로 사용되는 가교결합제인 석신이미딜 3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(SPDP)를 사용하고 실시예 1(필요한 변용을 도입함)에 기재된 프로토콜과 매우 유사하고 선행 기술에 공지된 프로토콜에 의해서 제조된다.
면역반응 강도 시험을 BALB/c 스트레인(strain) 마우스에서 수행하였다. 수행한 프로토콜은 다음과 같았다:
1. 1차 접종 1주 전에, 연구에 참여한 모든 마우스로부터 채혈하여 면역전(pre-immune) 혈청을 수득하였다.
2. 각 마우스가 배정된 그룹에 따라서(상이한 분석된 그룹에 대해서는 표 1을 참조), 각 마우스에게 3 주 연속 주 1 회로 상응하는 백신을 접종하였다.
3. 3 차 주사한지 1 주 후에, 연구에 참여한 각 마우스로부터 다시 채혈하여 혈청에서 수득된 반응을 측정하였다.
그룹 | 수송 단백질 | 가교결합제 | 애주번트 |
1 | KLH, 제조사 1 | SM | Alhydrogel®(수산화알루미늄 겔) |
2 | KLH, 제조사 1 | SPDP | Alhydrogel®(수산화알루미늄 겔) |
3 | KLH, 제조사 2 | SM | Alhydrogel®(수산화알루미늄 겔) |
4 | KLH, 제조사 2 | SM | 없음 |
5 | KLH, 제조사 2 | SPDP | Alhydrogel®(수산화알루미늄 겔) |
6 | KLH, 제조사 3 (GMP) | SM | Alhydrogel®(수산화알루미늄 겔) |
표 1 에 나타낸 각 그룹의 마우스에게 투여된 펩티드 용량은 하기를 포함한 표 2에 반영되어 있다.
그룹 | 총 펩티드 용량(유리 펩티드와 KLH-결합된 펩티드의 합) (㎍) |
KLH-결합된 펩티드 용량
(㎍) |
1 | 120 | 40 |
2 | 120 | 40 |
3 | 120 | 40 |
4 | 120 | 40 |
5 | 120 | 40 |
6 | 60 | 60 |
표 3 은 관찰된 면역반응의 증가(면역전 반응과 관련하여 치료 요법을 종료한지 1 주 후에 증가된 면역반응의 배수)와 함께, (본 실시예에 설명된 치료 또는 백신접종 요법을 종료한 후 그 다음 주에 수득된 마우스로부터의 혈청을 분석함으로써) 상이한 그룹들마다 수득된 면역반응 강도 결과를 표 형식으로 요약하여 나타낸다. 선행 기술에 공지된 프로토콜에 따라서 간접 ELISA에 의해 각 마우스로부터 수득된 혈청에 대해 면역반응을 측정하였으며, 이와 관련하여 ELISA 플레이트를 Aβ40 펩티드와 함께 체질하였음(sieved)이 지적되어야 한다. 일단 상응하는 세척 단계, 차단 단계, 후속적 세척 단계, 분석하고자 하는 혈장/혈청(plasma/serum)(1:30 희석율로 시작하는 1:3 일련의 희석율) 샘플과 함께 항온배양하는 단계 및 추가 세척 단계를 수행한 후, 각 웰을 항-마우스 IgG(H+L) 항체 HRP(2 차 항체 희석율은 pH 8 에서 비히클 용액 중에서 1:2000 이었다)와 함께 항온배양하였다. 상기 항체와 함께 항온배양하고 웰을 세척한 후, 웰당 100 ㎕의 ABTS 용액(디암모늄 2,2'-아지노비스-[3-에틸벤조티아졸린설포네이트]; Roche; 참조번호: 102 946 001)과 함께 ABTS 완충액(Roche; 참조번호: 11 112 597 001) 중의 0.375 mg/mL를 첨가하여 플레이트를 발색시켰다. 이러한 기질은 2 차 항체에 결합된 퍼옥시다제와 반응시 녹색으로 변하였다. 색상 강도는 플레이트에 결합된 항체의 양에 의해 좌우되었다. 반응물을 실온에서 암실에서 55 분 동안 항온배양한 다음, 흡광도를 405 nm에서 ELISA 플레이트 리더에서 판독하였다. 수득된 흡광도 결과를 GraphPad Prism 3.02 프로그램으로 분석하였다. "1부위 경쟁(One Site Competition)" 수학식을 분석을 위해 사용하였다:
곡선의 변곡점, 즉 관찰된 최대 효과의 50 %가 산출되는 점인 EC50 데이터를 상기 언급한 분석으로부터 수득하였다. 본 경우에, 이는 웰 내에 존재하는 펩티드의 50 %가 혈청에 존재하는 항체에 결합되는 혈청 희석율로서 해석되었다.
그룹 | 3 회 접종 후 EC 50 | EC 50 의 증가(배수) |
1 | 12974.95 | 716.33 |
2 | 580.35 | 32.04 |
3 | 6325.50 | 349.22 |
4 | 924.97 | 51.07 |
5 | 1.87 | 0.10 |
6 | 5056.00 | 279.14 |
표 3 에 나타낸 결과 및 각각의 연구 그룹에서 사용된 접합체의 견지에서, 다음과 같이 결론지어질 수 있다:
· 수송 단백질로서 사용된 상이한 KLH들(상이한 제조사로부터의 것들)은, 면역반응에 대해 특정 효과를 가짐에도 불구하고, 면역반응의 크기를 결정하는데 있어서 적절한 것으로 나타나지 않았다(그룹 1, 그룹 3, 그룹 4 및 그룹 6, 즉 EC50의 증가가 50 이상인 그룹들에서의 높은 면역반응 대비 그룹 2 및 그룹 5, 즉 EC50의 증가가 50 미만인 그룹들에서의 약한 또는 존재하지 않는 면역반응).
· 높은 면역반응의 수득과 약한 또는 존재하지 않는 면역반응의 수득 간의 차이는 사용된 가교결합제에 있다. 수득된 실험 결과에 근거하여, SM이 사용된 접합체는 SPDP가 사용된 접합체에서 관찰된 면역반응보다 유의적으로 더 큰 면역반응을 발생하는 것으로 추론된다. 사실, 가교결합제 SM을 갖는 접합체로 처리된 그룹들은 높은 면역반응이 발생되도록 할 수 있는 반면에 SPDP가 사용된 접합체로 처리된 그룹들은 훨씬 약하거나 존재하지 않는 면역반응을 나타냈다.
· 상기한 것 외에도, 그룹 4 에서 수득된 결과들은 SM을 사용하여 생성한 접합체의 반응이, 심지어 애주번트의 사용 없이도, SPDP를 사용하여 생성한 접합체에 대해 관찰된 반응보다 더욱 크다는 것을 명백하게 보여주는 바, 그룹 4 에서 수득된 결과들이 강조되어야 한다.
상기한 것은 KLH-가교결합제-CysAβ(33-40) 접합체를 제조하기 위한 가교결합제로서의 SM의 사용이 상기 접합체가 애주번트와 함께 사용되던지 애주번트 없이 사용되던지 간에 놀랍게도 더 큰 면역반응을 갖는 백신을 제공함을 보여준다.
실시예 3. 상이한 가교결합제들을 사용하여 생성한 KLH-가교결합제-CysAβ(33-40) 접합체들의 접합 정도(KLH에 대한 펩티드 결합)의 비교
실시예 2 의 경우와 마찬가지로, 다음 접합체들에 대해서 접합 정도 또는 수송 단백질(KLH)의 분자당 결합된 펩티드의 수를 비교하였다:
· KLH-SM-CysAβ(33-40)(실시예 1 에 따라서 제조됨).
· KLH-SPDP-CysAβ(33-40)(실시예 2 에 따라서 제조됨).
표 4 는 수행된 수송 단백질에 대한 펩티드 결합의 실험에서 수득된 실험 결과를 표 형식으로 요약하여 나타낸다.
수송 단백질 | 가교결합제 | 각 KLH 분자에 결합된 펩티드 분자의 수 |
KLH, 제조사 1 | SM | 81 |
KLH, 제조사 1 | SPDP | 35/33 |
KLH, 제조사 2 | SM | 70/68 |
KLH, 제조사 2 | SPDP | 44/31 |
표 4 에서 보이는 바와 같이, 이러한 상이한 제조사들로부터의 KLH는 결합면에서 수득된 결과에는 효과가 없었다. 그에 반해, SM이 결합 수의 2 배 이상을 수득할 수 있도록 하였다는 점, 즉 가교결합제로서 SM을 사용함으로써 펩티드 분자 수의 2 배가 각 KLH 분자에 결합한다는 점을 고려하면, 가교결합제는 확실히 수득된 결과에 현저한 효과가 있었다. 사용된 펩티드가 가교결합제와의 반응을 위해 N-말단에 시스테인을 혼입한다는 점을 고려하면, 이러한 결과는 놀랍고도 예상치 못한 것이다. 선행 기술에 따르면, 상기 시스테인의 혼입은 펩티드 접합이 선행 기술에 공지된 가교결합제들 중 어느 것에 대해서도 동등하고 효율적이 되도록 해야 한다. 그러나, 본 경우에 SM은 SPDP보다 더욱 효율적인 접합 반응을 가능하게 하는 것으로 관찰되었다.
이러한 결합 결과들은 실시예 2 에 나타낸 결과들의 일부분(즉, 면역반응 유도 및 후속적인 항체 생성에서 관찰된 향상의 일부분)을 설명할 수 있도록 하였다. 그럼에도 불구하고, 상기 면역반응 결과들은 수득된 결합 결과로 완전히 동화될 수 없으며, 이는 또한 상기 수득된 결과들의 견지에서 놀라운 것이며 가교결합제가 수송 단백질에 대한 더 큰 펩티드 결합을 매개하는 것뿐만 아니라 면역반응의 증가에 기여한다는 것을 시사한다.
실시예 4. 토끼에서의 면역반응 검정 및 생성된 항체의 특이성.
KLH-SM-CysAβ(33-40) 접합체를 포함하는 백신의 역가(potency) 검정을 토끼에서 수행하였다. 본 경우에는, 토끼에게 200 ㎍의 총 결합된 펩티드를 백신접종하였으며, 여기서 상기 200 ㎍은 수송 단백질에 결합된 것이다(예비 연구에 따른 선택된 용량). 애주번트로서 2 % Alhydrogel®(수산화알루미늄 겔)을 사용하여 각 토끼에게 미리 특정된 용량을 갖는 백신 1 mL를 접종하였다.
백신접종 프로토콜을 실시하기 1 주일 전 및 이를 종료한지 1 주일 후 3 주 연속 채혈 동안 백신을 주 1 회 피하 주사함으로써 동물들을 미리 표기된 용량으로 처리하였다.
생성된 항체의 역가 측정 및 항체의 특이성의 분석을 선행 기술에 공지되어 있고 실시예 2 에서 간략히 나타낸 프로토콜에 따르되 다음과 같은 차이를 가지고 ELISA에 의해 수행하였다:
· ELISA 플레이트를 특이적 항체가 검출될 예정인지 또는 각각 Aβ40 펩티드 또는 Aβ42 펩티드에 결합하는 항체가 검출될 예정인지에 따라서 Aβ40 펩티드 또는 Aβ42 펩티드(서열번호 3 으로서 포함됨)와 함께 체질(sieved)하였다.
· 분석된 혈청 중의 항체의 존재를 검출하기 위해 사용된 항체는 항-토끼 IgG(H+L) HRP(Invtrogen; 참조번호 65-6120)(2 차 항체 희석율은 pH 8 의 비히클 용액 중에서 1:2000 이다)였다.
발색 시약은 실시예 2 에 나타낸 것이였으며, 따라서 플레이트도 또한 405 nm에서 판독하였고 동일한 수학식을 본 결과에 적용하였다. 곡선의 변곡점, 즉 관찰된 최대 효과의 50 %가 산출되는 점인 EC50 데이터를 분석으로부터 수득하였다. 실시예 2 에 나타낸 바와 같이, 상기 결과는 웰 내에 존재하는 펩티드의 50 %가 혈청에 존재하는 항체에 결합하는 혈청 희석율로서 해석되었다.
상기 언급한 역가 측정 프로토콜에 따라서, 수득된 모든 샘플을 역가 측정하여 Aβ40 펩티드 항체 및 Aβ42 펩티드 항체를 검출하였다. 수득된 결과는 표 5 및 표 6 에 표 형태로 나타낸다.
토끼 식별번호 | 면역전 EC 50 | 3 회 접종 후 EC 50 | EC 50 의 증가(배수) |
71 | 36.17 | 47406 | 1310.64 |
72 | 7.483 | 4021 | 537.35 |
73 | 14.07 | 73421 | 5218.27 |
74 | 4.482 | 12467 | 2781.57 |
75 | 45.48 | 5173 | 113.74 |
76 | 20.5 | 98381 | 4799.07 |
토끼 식별번호 | 면역전 EC 50 | 3 회 접종 후 EC 50 | EC 50 의 증가(배수) |
71 | 53.88 | 0.049 | 0.00 |
72 | 29.24 | 0.069 | 0.00 |
73 | 22.49 | 2.761 | 0.12 |
74 | 24.05 | 15.49 | 0.64 |
75 | 73.18 | 0.063 | 0.00 |
76 | 23.37 | 34.04 | 1.46 |
표 5 및 표 6에 나타낸 것들에 근거하여, 본 발명의 접합체(KLH-SM-CysAβ(33-40))가 토끼에서 높은 면역반응을 수득할 수 있도록 할뿐만 아니라 상기 반응이 Aβ40에 대해 특이적이라는 것(Aβ42에 대한 유의적인 채액성 반응(humoral response) 없이), 즉 Aβ42에 결합하지 않는 면역반응에서 항-Aβ40 특이적 항체가 생성된다는 것이 추론된다.
실시예 1 내지 실시예 4 에 포함된 결과들은 본 명세서에서 상기 설명된 기술적 이점 및 효과를 증명하고 확인시켜 주며, 가교결합제로서의 SM의 사용이 선행 기술의 다른 가교결합제가 사용될 경우에 비해서 더 큰 면역반응을 발생하는 KLH-가교결합제-CysAβ(33-40) 접합체가 생성되도록 함을 증명한다. 게다가, KLH-SM-CisAβ(33-40) 접합체는 마우스 및 토끼에서 Aβ40에 대해 특이적인(Aβ42에 대한 유의적인 채액성 반응 없는) 높은 면역반응이 발생될 수 있도록 하며, 즉 Aβ42에 결합하지 않는 항-Aβ40 특이적 항체가 상기 면역반응에서 생성된다. 상기 실시예들은 포유류, 바람직하게는 인간에서의 아밀로이드 질병, 바람직하게는 알츠하이머병의 치료에 있어서 본 발명의 접합체의 유용성을 입증한다.
실시예 5. 수산화알루미늄 겔로의 KLH-SM-CysAβ(33-40) 접합체의 흡착 연구
1.35 mg/ml, 펩티드는 접합체 KLH-SM-CysAβ(33-40)14.4 mg/ml 에 상당한다.
본 연구들에서는, 흡착율에 미치는 접합체 농도의 영향뿐만 아니라 흡착율에 미치는 pH의 영향을 결정하였다. 첫번째 실험에서는, 정의된 양의 수산화알루미늄(0.35 %는 단일 용량당 1.25 mg Al의 허용된 용량에 상응한다) 및 정의된 pH 7.4(생리학적 pH)에서 상이한 농도의 접합체의 흡착율을 시험하였다. 생리학적 시험 조건(pH 7.4)에서 12 % 내지 18 % 유리 접합체가 상청액에서 검출되었다. 펩티드 양을 100 ㎍ 펩티드로 감소시키는 것은 더 높은 흡착율을 산출하지 않았다.
두번째 연구에서는, 흡착율에 미치는 pH의 영향을 결정하였다. pH를 정의된 접합체 농도(100 ㎍, 150 ㎍ 및 220 ㎍ 순 펩티드/mL를 기준으로 함)에서 변화시켰다(pH 6.0 내지 pH 7.4). 상기 나타낸 결과로 설명되는 바와 같이, 흡착율은 pH에 의해 좌우된다. 사실, 흡착율은 낮은 pH-값에서 증가한다(표들을 참조): pH 7.4 에서 pH 7.2 또는 심지어 7.0 으로의 감소는 유의적인 더 높은 흡착율을 야기하지 않는다. pH 6.8 에서의 흡착은 대략 90 %의 흡착율을 나타낸다. pH 6.0 에서 흡착율이 가장 높다. 200 ㎍/mL 순 펩티드를 기준으로 한 접합체 농도 및 pH 6 에서, 접합체의 7 %는 여전히 유리 상태이다.
상기 분석들에 근거하여, 본 발명의 약학적 조성물의 면역원성 능력을 증가시키기 위해서는, 바람직하게는 5.8 내지 7.0 의 pH 값을 사용하여 애주번트로의 접합체의 흡착율을 증가시켜야 한다.
본 발명을 바람직한 구현예들과 관련하여 설명하였지만, 이러한 구현예들은 본 발명을 한정하는 것으로 간주되지 않아야 하며, 본 발명은 하기 청구범위의 가장 광의적인 해석에 의해 정의될 것이다.
<110> ARACLON BIOTECH, S.L.
<120> Amyloid conjugate and uses and methods thereof
<130> 1500077
<150> ES 201630173
<151> 2016-02-15
<160> 3
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Abeta fragment with cysteine added at the N-terminus
<400> 1
Cys Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val
1 5
<210> 2
<211> 40
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile
20 25 30
Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val
35 40
<210> 3
<211> 42
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile
20 25 30
Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala
35 40
Claims (19)
- 삭제
- 삭제
- i) 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH)에 연결된 적어도 하나의 CysAβ(33-40) 펩티드(서열번호 1)의 접합체 및 ii) 수산화알루미늄 겔을 포함하는 약학적 조성물로서, 상기 접합체의 각 CysAβ(33-40) 펩티드를 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH)에 연결시키는 가교결합제가 말레이미도부티르산 N-하이드록시석신이미드 에스테르(SM)이고, 상기 조성물의 pH가 5.8 내지 7.0 의 범위인, 아밀로이드 질병의 치료 또는 예방용 약학적 조성물.
- 제3항에 있어서, 상기 조성물의 pH가 6.2 내지 7.0 의 범위인, 약학적 조성물.
- 제3항에 있어서, 상기 조성물의 pH가 5.8 내지 6.2 의 범위인, 약학적 조성물.
- 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학적 조성물 중의 CysAβ(33-40) 펩티드(서열번호 1)의 양이 적어도 100 ㎍인, 약학적 조성물.
- 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학적 조성물 중의 CysAβ(33-40) 펩티드(서열번호 1)의 양이 적어도 150 ㎍인, 약학적 조성물.
- 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학적 조성물 중의 CysAβ(33-40) 펩티드(서열번호 1)의 양이 150 ㎍ 내지 400 ㎍인, 약학적 조성물.
- 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학적 조성물 중의 CysAβ(33-40) 펩티드(서열번호 1)의 양이 160 ㎍ 내지 240 ㎍인, 약학적 조성물.
- 제3항에 있어서, 상기 접합체가 차례로 각각의 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH) 1 개에 대하여 적어도 45 개의 비로 연결된 CysAβ(33-40) 펩티드(서열번호 1)를 포함하는, 약학적 조성물.
- 제3항에 따른 약학적 조성물을 포함하는 유리 앰풀.
- 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 약학적 조성물의 제조 방법으로서,
a. 말레이미도부티르산 N-하이드록시석신이미드 에스테르(SM)를 pH 7.0 내지 9.0 에서 완충액 중의 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH)을 포함하는 용액에 첨가하는 단계;
b. 단계 a)의 용액으로부터 과량의 말레이미도부티르산 N-하이드록시석신이미드 에스테르를 제거하는 단계,
c. DMSO 중의 CysAβ(33-40) 펩티드(서열번호 1)를 6.6 내지 7.0의 pH에서 단계 b)의 용액에 첨가하여 접합체를 생성하는 단계;
d. 단계 c)로부터 얻은 용액에서 유리 펩티드(free peptide)를 제거하는 단계;
e. 임의로, 단계 d)의 용액을 여과하는 단계;
f. 단계 d) 또는 e)의 용액의 pH를 5.8 내지 6.2 의 pH 범위로 조정하는 단계; 및
g. 일단 pH가 조정되었으면, 수산화알루미늄 겔을 단계 f)의 용액에 첨가하는 단계
를 포함하는 방법. - 제12항에 있어서, 단계 b)의 과량을 6.6 내지 7.0 의 pH에서 0.02 M Na-포스페이트-완충액을 사용하여 제거하는, 방법.
- 제12항에 있어서, 단계 d)의 유리 펩티드를 6.6 내지 7.0 의 pH에서 0.01 M PBS-완충액을 사용하여 제거하는, 방법.
- 제12항에 있어서, 용액을 단계 e)에서 0.2 ㎛의 필터를 사용하여 여과하는, 방법.
- 제12항에 있어서, 단계 f)의 pH를 6.0 의 pH 범위로 조정하는, 방법.
- 삭제
- 제3항에 있어서, 아밀로이드 질병이 알츠하이머병, 파킨슨병, 대뇌 아밀로이드 혈관병증, 아밀로이드 기원의 혈관성 치매, 봉입체 근염 및 루이소체 치매로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 약학적 조성물.
- 제18항에 있어서, 아밀로이드 질병이 알츠하이머병인, 약학적 조성물.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
ES201630173A ES2571055B1 (es) | 2016-02-15 | 2016-02-15 | Conjugado amiloide y usos y procedimientos del mismo |
ESP201630173 | 2016-02-15 | ||
PCT/EP2017/053242 WO2017140656A1 (en) | 2016-02-15 | 2017-02-14 | Amyloid conjugate and uses and methods thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20180118126A KR20180118126A (ko) | 2018-10-30 |
KR102301961B1 true KR102301961B1 (ko) | 2021-09-14 |
Family
ID=55970560
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020187024580A KR102301961B1 (ko) | 2016-02-15 | 2017-02-14 | 아밀로이드 접합체 및 그의 용도 및 방법 |
Country Status (22)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20190030127A1 (ko) |
EP (1) | EP3390426B1 (ko) |
JP (1) | JP6689993B2 (ko) |
KR (1) | KR102301961B1 (ko) |
CN (1) | CN108633278B (ko) |
AU (1) | AU2017221070B2 (ko) |
BR (1) | BR112018016016A2 (ko) |
CA (1) | CA3012417C (ko) |
CL (1) | CL2018002004A1 (ko) |
CO (1) | CO2018007557A2 (ko) |
DK (1) | DK3390426T3 (ko) |
ES (2) | ES2571055B1 (ko) |
IL (1) | IL260639B2 (ko) |
MX (1) | MX2018008885A (ko) |
MY (1) | MY184763A (ko) |
PL (1) | PL3390426T3 (ko) |
PT (1) | PT3390426T (ko) |
RU (1) | RU2712750C1 (ko) |
SG (1) | SG11201806158YA (ko) |
SI (1) | SI3390426T1 (ko) |
WO (1) | WO2017140656A1 (ko) |
ZA (1) | ZA201804842B (ko) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010136487A1 (en) | 2009-05-26 | 2010-12-02 | Araclon Biotech S.L. | Albumin-amyloid peptide conjugates and uses thereof |
WO2015128287A1 (en) | 2014-02-28 | 2015-09-03 | Affiris Ag | Pcsk9 vaccines |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8173127B2 (en) * | 1997-04-09 | 2012-05-08 | Intellect Neurosciences, Inc. | Specific antibodies to amyloid beta peptide, pharmaceutical compositions and methods of use thereof |
ES2246105B1 (es) * | 2003-05-08 | 2007-03-01 | Araclon Biotech, S.L. | Uso de anticuerpos para el tratamiento de enfermedades amiloideas. |
JP4764830B2 (ja) * | 2003-12-17 | 2011-09-07 | ワイス・エルエルシー | 免疫原性ペプチド担体コンジュゲートおよびその生産法 |
WO2005072777A2 (en) * | 2004-01-28 | 2005-08-11 | Curix Aps | Conjugates of amyloid proteins as vaccines for amyloid-related diseases |
CA2607868A1 (en) * | 2005-05-05 | 2006-11-16 | Merck & Co., Inc. | Peptide conjugate compositions and methods for the prevention and treatment of alzheimer's disease |
AU2007335254A1 (en) * | 2006-12-21 | 2008-06-26 | Monash University | Identification of candidate vaccine antigens from Dichelobacter nodosus |
AT506819B1 (de) * | 2008-06-12 | 2011-06-15 | Affiris Forschungs Und Entwicklungs Gmbh | Vakzin zur behandlung von alzheimer-krankheit |
MX2011000975A (es) * | 2008-07-25 | 2011-05-25 | Abbott Lab | Analogos de peptido b amiloide, oligomeros de los mismos, procedimientos para preparar y composiciones que comprenden dichos analogos u oligomeros, y sus usos. |
EP2391379B1 (en) * | 2009-01-30 | 2017-08-02 | Alphabeta AB | Compound and method for treatment of alzheimer's disease |
MA34084B1 (fr) * | 2010-03-29 | 2013-03-05 | Novartis Ag | Composition comprenant le peptide amyloïde bêta 1-6 couplé à une particule de type virus et un adjuvant |
US20130164217A1 (en) * | 2011-12-21 | 2013-06-27 | Meso Scale Technologies, Llc | Method of diagnosing, preventing and/or treating dementia & related disorders |
-
2016
- 2016-02-15 ES ES201630173A patent/ES2571055B1/es active Active
-
2017
- 2017-02-14 JP JP2018537651A patent/JP6689993B2/ja active Active
- 2017-02-14 EP EP17705112.5A patent/EP3390426B1/en active Active
- 2017-02-14 RU RU2018126395A patent/RU2712750C1/ru active
- 2017-02-14 AU AU2017221070A patent/AU2017221070B2/en active Active
- 2017-02-14 SG SG11201806158YA patent/SG11201806158YA/en unknown
- 2017-02-14 CN CN201780011191.3A patent/CN108633278B/zh active Active
- 2017-02-14 WO PCT/EP2017/053242 patent/WO2017140656A1/en active Application Filing
- 2017-02-14 MY MYPI2018702695A patent/MY184763A/en unknown
- 2017-02-14 KR KR1020187024580A patent/KR102301961B1/ko active IP Right Grant
- 2017-02-14 PL PL17705112T patent/PL3390426T3/pl unknown
- 2017-02-14 PT PT177051125T patent/PT3390426T/pt unknown
- 2017-02-14 CA CA3012417A patent/CA3012417C/en active Active
- 2017-02-14 SI SI201730100T patent/SI3390426T1/sl unknown
- 2017-02-14 BR BR112018016016-4A patent/BR112018016016A2/pt unknown
- 2017-02-14 ES ES17705112T patent/ES2747899T3/es active Active
- 2017-02-14 DK DK17705112.5T patent/DK3390426T3/da active
- 2017-02-14 MX MX2018008885A patent/MX2018008885A/es unknown
-
2018
- 2018-07-17 IL IL260639A patent/IL260639B2/en unknown
- 2018-07-18 CO CONC2018/0007557A patent/CO2018007557A2/es unknown
- 2018-07-18 ZA ZA2018/04842A patent/ZA201804842B/en unknown
- 2018-07-24 CL CL2018002004A patent/CL2018002004A1/es unknown
- 2018-08-14 US US16/103,810 patent/US20190030127A1/en not_active Abandoned
-
2020
- 2020-04-22 US US16/855,263 patent/US20200246430A1/en not_active Abandoned
-
2022
- 2022-02-24 US US17/679,723 patent/US20220184178A1/en active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010136487A1 (en) | 2009-05-26 | 2010-12-02 | Araclon Biotech S.L. | Albumin-amyloid peptide conjugates and uses thereof |
WO2015128287A1 (en) | 2014-02-28 | 2015-09-03 | Affiris Ag | Pcsk9 vaccines |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Kensil et al. | Structural and immunological characterization of the vaccine adjuvant QS-21 | |
AU4877799A (en) | Formulation | |
TW202039587A (zh) | 供合成胜肽免疫原作為免疫刺激劑的人工混雜t輔助細胞抗原決定位 | |
US20150306194A1 (en) | Method for treating a synucleiopathy | |
CA2875162C (en) | Immunogenic compounds comprising hiv gp41 peptide coupled to crm197 carrier protein | |
EP1694358A2 (en) | Vaccine comprising il-12 or il-23 for treatment of autoimmune diseases | |
TW202039556A (zh) | 針對降鈣素基因相關胜肽(Cgrp)的胜肽免疫原及其用於預防和治療偏頭痛的製劑 | |
KR102301961B1 (ko) | 아밀로이드 접합체 및 그의 용도 및 방법 | |
JP5960064B2 (ja) | ヒトプロガストリンペプチドに対する免疫原性組成物 | |
NZ744411B2 (en) | Amyloid conjugate and uses and methods thereof | |
CN115594770B (zh) | 一种针对人TNFα分子的类风湿关节炎治疗性疫苗的构建 | |
JP2001505763A (ja) | Hiv p―17ペプチドフラグメント、それを含有する組成物並びにその製造及び使用方法 | |
Siegrist et al. | Antigen-presentation systems, immunomodulators, and immune responses to vaccines | |
WO2017189448A1 (en) | Bivalent immunogenic conjugate for malaria and typhoid |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
E902 | Notification of reason for refusal | ||
E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
GRNT | Written decision to grant |