KR102301603B1 - Composition Improving Wrinkles Of Skin Comprising Ginseng Leaf Extract - Google Patents
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Abstract
본 발명은 인삼 경엽의 알코올 추출물을 수득하는 단계; 및 상기 알코올 추출물에서 에틸아세테이트 분획물을 제거하는 단계;를 포함하는 제조방법에 의해 수득된 인삼 경엽 추출물을 포함하는 피부의 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 화장료 조성물은 콜라겐 합성능이 우수할 뿐 아니라, 세포 독성이 낮고 제형 안정성이 우수하여 피부 주름 개선, 피부 탄력 개선 또는 피부 재생 용도로 사용할 수 있다.The present invention comprises the steps of obtaining an alcohol extract of ginseng leaves; and removing the ethyl acetate fraction from the alcohol extract; provides a cosmetic composition for improving skin wrinkles, comprising a ginseng leaf extract obtained by a manufacturing method comprising a. The cosmetic composition of the present invention has excellent collagen synthesis ability, low cytotoxicity, and excellent formulation stability, so that it can be used for improving skin wrinkles, improving skin elasticity, or regenerating skin.
Description
본 발명은 인삼 경엽 추출물을 포함하는 피부의 주름 개선용 조성물 및 이의 제조 방법에 관한 것이다. The present invention relates to a composition for skin wrinkle improvement comprising a ginseng leaf extract and a method for preparing the same.
피부는 연령이 높아짐에 따라 노화 현상이 심화된다. 피부가 오랜 기간에 걸쳐 햇빛에 노출되면 표피와 진피 조직에 변화가 일어나게 되어 주름살이 증가하고 피부가 두꺼워지며 탄력이 없어지고, 또한 거칠어져 반점이 된다. 이와 같은 피부 노화는 콜라겐의 합성을 증진시킴으로써 지연시킬 수 있으므로, 콜라겐의 합성을 증진시키면서도 생체에 안전한 물질을 개발하는 연구가 활발히 진행되고 있다.As the skin ages, the aging phenomenon intensifies. Skin exposed to sunlight for a long period of time When exposed, changes occur in the epidermis and dermis tissue, and wrinkles increase, the skin thickens and loses elasticity, and becomes rough and spots. Since such skin aging can be delayed by promoting the synthesis of collagen, research to develop a material that is safe for the body while enhancing the synthesis of collagen is being actively conducted.
콜라겐은 세포외 기질(extracellular matrix)의 주요 구성 성분이며, 피부의 섬유아세포에서 생성되는 주요 기질 단백질이다. 또한, 생체 단백질 총 중량의 약 30%를 차지하는 중요한 단백질로서 견고한 3중 나선 구조로 되어있다. 콜라겐은 피부, 건(tendon), 뼈 및 치아의 유기물질의 대부분을 형성하는데, 특히 뼈와 피부에 함량이 높다. 대부분의 다른 체내 구조물에서는 섬유상 봉입체로서 존재한다. Collagen is a major component of the extracellular matrix and is a major matrix protein produced by fibroblasts of the skin. In addition, it is an important protein accounting for about 30% of the total weight of biological proteins and has a strong triple helix structure. Collagen forms most of the organic matter of the skin, tendons, bones and teeth, and the content is particularly high in bones and skin. It exists as a fibrous inclusion body in most other body structures.
콜라겐의 주된 기능으로는 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력과 조직의 결합력, 세포 접착의 지탱, 세포 분할과 분화(유기체의 성장 혹은 상처 치유시)의 유도 등이 알려져 있다. 또한 근래에 들어 피부 노화에 대한 광범위한 연구가 이루어지면서 피부에서 콜라겐의 중요한 기능이 밝혀지고 있다. 예를 들면, 콜라겐은 연령 및 자외선 조사에 의한 광노화에 의해 감소하며, 이는 피부의 주름 형성과 밀접한 연관이 있다고 알려져 있다. 또한 콜라겐은 상처 치유에 있어서 중요한 역할을 담당하며, 손상된 상피에서 콜라겐의 합성을 촉진시켜서 상처를 신속하고 흉터 없이 회복시킬 수 있다. 상기한 바와 같이 콜라겐 합성 촉진에 의해 콜라겐 대사가 활발해지면 진피 매트릭스의 성분이 증가되어 주름개선, 탄력증진, 피부강화 및 상처치유의 효과를 기대할 수 있다.The main functions of collagen are known as mechanical firmness of the skin, resistance of connective tissue and tissue bonding, support of cell adhesion, and induction of cell division and differentiation (in the case of growth of an organism or wound healing). In addition, in recent years, extensive research on skin aging has been made, revealing the important function of collagen in the skin. For example, collagen decreases with age and photoaging by UV irradiation, which is known to be closely related to the formation of wrinkles in the skin. In addition, collagen plays an important role in wound healing, and promotes the synthesis of collagen in the damaged epithelium, so that the wound can be repaired quickly and without scarring. As described above, when collagen metabolism is activated by promoting collagen synthesis, the components of the dermal matrix are increased, so that the effects of wrinkle improvement, elasticity enhancement, skin strengthening and wound healing can be expected.
이러한 효과를 얻기 위하여 종래에는 콜라겐의 피부 주름 개선 효과를 이용하기 위하여 화장품에 콜라겐을 배합한 제품들이 출시되어 있으나, 이들 화장품은 콜라겐을 피부 표면에 도포하는 것으로서, 고분자인 콜라겐의 경피흡수가 어려워 주름 개선 작용을 기대할 수 없으므로 본질적인 피부 기능 개선이라고 말할 수 없었다.In order to obtain this effect, conventionally, products containing collagen in cosmetics have been released to take advantage of the skin wrinkle improvement effect of collagen. However, these cosmetics apply collagen to the skin surface. Since an improvement action cannot be expected, it cannot be said that it is an essential skin function improvement.
따라서, 피부 자체에서 콜라겐 합성을 촉진할 수 있는 물질에 대한 관심이 높아졌으며, 종래에 콜라겐 합성을 촉진할 수 있는 물질로는 레티노산(retinoic acid), TGF(transforming growth factor), 클로렐라 추출물 등이 알려져 있다. 그러나, 레티노산은 불안정하고 피부 적용시 자극, 발적 등의 안정성 문제로 사용량의 제한이 있으며, 클로렐라 추출물 등은 효과가 미미하여 실질적으로 피부의 콜라겐 합성 촉진에 의한 피부 기능 개선 효과를 기대할 수 없다. 따라서, 생체에 안전하고 기존의 콜라겐 합성 촉진 물질보다 효과가 높은 새로운 콜라겐 합성 촉진제의 개발이 요구되고 있다.Therefore, interest in substances capable of promoting collagen synthesis in the skin itself has increased, and conventionally, as substances capable of promoting collagen synthesis, retinoic acid, transforming growth factor (TGF), chlorella extract, and the like have been used. is known However, retinoic acid is unstable and there is a limitation in the amount of use due to stability problems such as irritation and redness when applied to the skin, and the effect of chlorella extract and the like is insignificant. Therefore, there is a demand for the development of a new collagen synthesis promoter that is safe for the living body and has a higher effect than the existing collagen synthesis promoter.
이와 같은 피부 주름을 억제하거나, 진행 속도를 완화시키기 위하여, 레티놀, 레티노이드, 비타민 C, 플라보노이드, 토코페롤 등의 여러 가지 피부 보호 성분이 함유된 화장료 또는 피부 보호제가 개발되고 있으나, 이와 같은 화장료 또는 피부 보호제는 최종적인 제형에 있어서 역가가 떨어져 그 효능이 경미하고, 피부 자극이 심한 문제점을 지니고 있다. 따라서, 피부 주름을 감소시킴으로써 피부 노화를 개선할 수 있는 효능을 나타내는 물질의 개발에 대한 필요성은 여전히 존재한다.In order to suppress such skin wrinkles or to alleviate the progression rate, cosmetics or skin protectants containing various skin protecting ingredients such as retinol, retinoid, vitamin C, flavonoids, and tocopherol have been developed, but such cosmetics or skin protectants In the final formulation, the potency is lowered, the efficacy is mild, and the skin irritation is severe. Therefore, there is still a need for the development of a substance that can improve skin aging by reducing skin wrinkles.
인삼 경엽에는 인삼 뿌리 못지 않게 진세노사이드 함유량이 높은 것으로 알려져 있으나, 구체적인 성분, 이를 추출하기 위한 추출법 및 효능 등 인삼 경엽 추출물 전반에 관한 연구가 미흡한 실정이다. 본 발명자들은 인삼 경엽에 다량 함유된 클로로필 등 색소 성분을 비롯한 안정성 저해 물질을 효율적으로 제거함으로써 콜라겐 합성능이 우수한 추출물을 수득할 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하였다.Ginseng leaves are known to have as high a ginsenoside content as ginseng roots, but research on overall ginseng leaf extracts, including specific components, extraction methods and efficacy for extracting them, is insufficient. The present inventors have found that an extract having excellent collagen synthesis ability can be obtained by efficiently removing stability-inhibiting substances including pigment components such as chlorophyll contained in large amounts in ginseng leaves, and completed the present invention.
본 발명은 콜라겐 합성능이 우수하여 피부 주름 개선, 피부 탄력 개선 또는 피부 재생 용도로 사용할 수 있는 인삼 경엽 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.An object of the present invention is to provide a cosmetic composition comprising a ginseng leaf extract that can be used for improving skin wrinkles, improving skin elasticity, or regenerating skin due to its excellent collagen synthesis ability.
본 발명은 상기 인삼 경엽 추출물의 제조 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.An object of the present invention is to provide a method for preparing the ginseng leaf extract.
본 발명의 일 양태는 인삼 경엽의 알코올 추출물을 수득하는 단계; 및 상기 알코올 추출물에서 에틸아세테이트 분획물을 제거하는 단계;를 포함하는 제조방법에 의해 수득된 인삼 경엽 추출물을 포함하는 피부의 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.One aspect of the present invention comprises the steps of obtaining an alcohol extract of ginseng leaves; and removing the ethyl acetate fraction from the alcohol extract; provides a cosmetic composition for improving skin wrinkles, comprising a ginseng leaf extract obtained by a manufacturing method comprising a.
본 발명의 일 양태는 인삼 경엽의 알코올 추출물을 수득하는 단계; 및 상기 알코올 추출물에서 에틸아세테이트 분획물을 제거하는 단계;를 포함하는 제조방법에 의해 수득된 인삼 경엽 추출물을 포함하는 피부의 탄력 개선용 화장료 조성물을 제공한다.One aspect of the present invention comprises the steps of obtaining an alcohol extract of ginseng leaves; And removing the ethyl acetate fraction from the alcohol extract; provides a cosmetic composition for improving skin elasticity comprising a ginseng leaf extract obtained by a manufacturing method comprising a.
본 발명의 일 양태는 인삼 경엽의 알코올 추출물을 수득하는 단계; 및 상기 알코올 추출물에서 에틸아세테이트 분획물을 제거하는 단계;를 포함하는 제조방법에 의해 수득된 인삼 경엽 추출물을 포함하는 피부 재생용 화장료 조성물을 제공한다.One aspect of the present invention comprises the steps of obtaining an alcohol extract of ginseng leaves; And removing the ethyl acetate fraction from the alcohol extract; provides a cosmetic composition for skin regeneration comprising a ginseng leaf extract obtained by a manufacturing method comprising a.
본 발명의 일 양태는 인삼 경엽의 알코올 추출물을 수득하는 단계; 및 상기 알코올 추출물에서 에틸아세테이트 분획물을 제거하는 단계;를 포함하는 인삼 경엽 추출물의 제조 방법을 제공한다.One aspect of the present invention comprises the steps of obtaining an alcohol extract of ginseng leaves; and removing the ethyl acetate fraction from the alcohol extract.
본 발명의 화장료 조성물은 콜라겐 합성능이 우수할 뿐 아니라, 세포 독성이 낮고 제형 안정성이 우수하여 피부 주름 개선, 피부 탄력 개선 또는 피부 재생 용도로 사용할 수 있다.The cosmetic composition of the present invention has excellent collagen synthesis ability, low cytotoxicity, and excellent formulation stability, so that it can be used for improving skin wrinkles, improving skin elasticity, or regenerating skin.
도 1은 본 발명의 일 구현예로서, 실시예 1 및 비교예 1 내지 6의 추출물의 각 처리농도에 따른 프로콜라겐 I형 합성 증가율을 나타낸다.
도 2는 본 발명의 일 구현예로서, 실시예 1 및 비교예 4의 추출물에 대하여 원심분리를 수행한 후 침전물 형성 여부를 확인한 사진이다. 1 shows the increase rate of procollagen type I synthesis according to each treatment concentration of the extracts of Example 1 and Comparative Examples 1 to 6 as an embodiment of the present invention.
2 is a photograph confirming whether a precipitate is formed after centrifugation is performed on the extracts of Example 1 and Comparative Example 4 as an embodiment of the present invention.
이하, 본 발명에 대한 이해를 돕기 위하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail to help the understanding of the present invention.
본 명세서 및 청구범위에서 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.The terms or words used in the present specification and claims should not be construed as being limited to their ordinary or dictionary meanings, and the inventor may properly define the concept of the term in order to best describe his invention. It should be interpreted as meaning and concept consistent with the technical idea of the present invention based on the principle that there is.
1. 인삼 경엽 추출물의 제조1. Preparation of ginseng leaf extract
본 발명의 일 양태는 인삼 경엽의 알코올 추출물을 수득하는 단계; 및 상기 알코올 추출물에서 에틸아세테이트 분획물을 제거하는 단계;를 포함하는 인삼 경엽 추출물의 제조 방법을 제공한다.One aspect of the present invention comprises the steps of obtaining an alcohol extract of ginseng leaves; and removing the ethyl acetate fraction from the alcohol extract.
본 발명에서 '인삼 경엽'은 인삼 새싹, 인삼잎 및 인삼줄기를 모두 포함하는 의미로 사용될 수 있다. 따라서, 상기 인삼 경엽은 인삼 새싹, 인삼잎 및 인삼줄기로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함할 수 있다. In the present invention, the term 'ginseng leaf' may be used to include all of ginseng sprouts, ginseng leaves, and ginseng stems. Accordingly, the ginseng leaves may include at least one selected from the group consisting of ginseng sprouts, ginseng leaves and ginseng stems.
본 발명에서 '추출물'은 원료로부터 임의의 방법으로 추출된 물질을 의미하며, 이렇게 추출된 추출액, 이로부터 얻을 수 있는 농축액, 상기 농축액의 건조물 및 분말을 제한 없이 모두 포함하는 의미로 사용된다.In the present invention, the term 'extract' refers to a material extracted from a raw material by any method, and is used in the meaning of including, without limitation, the extracted extract, the concentrate obtainable therefrom, the dried product and the powder of the concentrate.
상기 추출물은 원료 또는 이의 건조물로부터 추출하여 얻을 수 있으며, 상기 추출물의 원료는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다.The extract may be obtained by extraction from a raw material or a dried product thereof, and the raw material of the extract may be used without limitation, such as cultivated or commercially available ones.
상기 추출물을 원료로부터 추출하여 수득할 때, 추출 방법으로는 용매 추출법, 초음파 추출법, 여과법 및 환류 추출법 등 종래 알려진 통상적인 추출 방법을 모두 사용할 수 있으며, 바람직하게는 용매 추출법이나 환류 추출법을 이용함으로써 제조할 수 있다. 상기 추출 과정은 수회 반복할 수 있으며, 이후에 농축 또는 동결건조 등의 단계를 추가적으로 거칠 수 있다. 구체적으로, 수득한 추출물을 감압 농축하여 농축액을 얻고, 상기 농축액을 동결건조시킨 후 분쇄기를 이용하여 고농도의 추출 분말을 제조할 수 있다. 추출물은 추출물을 추가적으로 분획하여 얻은 분획물도 포함한다. When the extract is obtained by extracting from the raw material, as the extraction method, all conventional known extraction methods such as solvent extraction, ultrasonic extraction, filtration, and reflux extraction may be used, and preferably prepared by using a solvent extraction method or reflux extraction method can do. The extraction process may be repeated several times, and thereafter, a step such as concentration or freeze-drying may be additionally performed. Specifically, the obtained extract is concentrated under reduced pressure to obtain a concentrate, and after freeze-drying the concentrate, a high concentration extract powder can be prepared by using a grinder. The extract also includes a fraction obtained by further fractionating the extract.
본 발명에서, 상기 인삼 경엽의 알코올 추출시 사용되는 알코올은 에탄올 또는 에탄올 수용액일 수 있다. 또한, 상기 에탄올 수용액은 5%(v/v) 내지 99%(v/v) 에탄올 수용액, 또는 5%(v/v) 내지 90%(v/v) 에탄올 수용액, 또는 25%(v/v) 내지 85%(v/v) 에탄올 수용액, 또는 30%(v/v) 내지 80%(v/v) 에탄올 수용액, 또는 60%(v/v) 내지 80%(v/v) 에탄올 수용액일 수 있으나, 이에 한정하지 아니한다. In the present invention, the alcohol used for alcohol extraction of the ginseng leaves may be ethanol or an aqueous ethanol solution. In addition, the ethanol aqueous solution is 5% (v / v) to 99% (v / v) ethanol aqueous solution, or 5% (v / v) to 90% (v / v) ethanol aqueous solution, or 25% (v / v) ) to 85% (v/v) aqueous ethanol solution, or 30% (v/v) to 80% (v/v) aqueous ethanol solution, or 60% (v/v) to 80% (v/v) aqueous ethanol solution However, the present invention is not limited thereto.
상기 알코올은 인삼 경엽 대비 중량비로 1 내지 20배 첨가될 수 있고, 바람직하게는 3배 내지 18배 첨가될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 5배 내지 15배 첨가될 수 있으나, 이에 한정하지 않는다. 상기 알코올을 하한값 미만으로, 즉 중량 기준으로 인삼 경엽보다 적은 양으로 투입하면 인삼 경엽으로부터 추출하고자 하는 유효성분이 충분히 추출되지 않을 수 있다.The alcohol may be added 1 to 20 times by weight relative to the ginseng leaves, preferably 3 to 18 times, and more preferably 5 to 15 times, but is not limited thereto. If the alcohol is added below the lower limit, that is, in an amount smaller than that of ginseng leaves by weight, the active ingredient to be extracted from the ginseng leaves may not be sufficiently extracted.
추출은 0℃ 내지 100℃에서 실시될 수 있고, 바람직하게는 10℃ 내지 50℃에서 실시될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 10℃ 내지 35℃에서 실시될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 추출은 12시간 내지 36시간 동안 실시될 수 있고, 바람직하게는 15시간 내지 30시간 동안 실시될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 20시간 내지 25시간 동안 실시될 수 있으나, 이에 한정하지 않는다. 추출은 1회 내지 8회 실시될 수 있고, 바람직하게는 1회 내지 6회 실시될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 1회 내지 5회 실시될 수 있으나, 이에 한정하지 않으며, 추출물은 각 추출에서 얻어진 단독 추출물 또는 각 추출에서 얻어진 추출물들의 혼합 추출물일 수 있다.Extraction may be carried out at 0 °C to 100 °C, preferably at 10 °C to 50 °C, more preferably at 10 °C to 35 °C, but is not limited thereto. The extraction may be carried out for 12 hours to 36 hours, preferably for 15 hours to 30 hours, and more preferably for 20 hours to 25 hours, but is not limited thereto. The extraction may be performed 1 to 8 times, preferably 1 to 6 times, and more preferably 1 to 5 times, but is not limited thereto, and the extract obtained in each extraction It may be a single extract or a mixed extract of extracts obtained in each extraction.
인삼 경엽, 특히 인삼잎에는 클로로필과 같은 색소를 비롯해 추출물의 안정성을 저해하는 물질이 다량 함유되어 있는데, 본 발명에서는 상기 인삼 경엽의 알코올 추출물에서 용매를 모두 제거하여 농축물을 수득하고, 상기 농축물을 정제수에 용해시킨 후, 여기에 에틸아세테이트를 가하여 용매 분획을 수행함으로써 에틸아세테이트에 용해되는 클로로필을 비롯한 안정성 저해 물질을 효율적으로 제거할 수 있다.Ginseng leaves, especially ginseng leaves, contain a large amount of substances that inhibit the stability of the extract, including pigments such as chlorophyll. In the present invention, all solvents are removed from the alcohol extract of the ginseng leaves to obtain a concentrate, After dissolving in purified water, ethyl acetate is added thereto to perform solvent fractionation, whereby stability-inhibiting substances including chlorophyll dissolved in ethyl acetate can be efficiently removed.
상기 에틸아세테이트 분획은 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막 또는 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)를 이용하는 등 통상의 방식에 의할 수 있으며, 이에 특별히 제한되지 않는다. The ethyl acetate fraction may be prepared by a conventional method, such as using an ultrafiltration membrane having a constant molecular weight cut-off value or various chromatography (prepared for separation according to size, charge, hydrophobicity or affinity), and in particular, not limited
예를 들어, 상기 에틸아세테이트 분획물을 제거하는 단계는 a) 상기 알코올 추출물에서 알코올을 포함하는 용매를 제거하여 농축물을 수득하는 단계; b) 정제수에 상기 농축물을 용해시키는 단계; c) 상기 용액에 에틸아세테이트를 20:1 내지 2:1의 중량비로 혼합하는 단계; 및 d) 상기 c) 단계에서 얻어진 결과물로부터 물층만을 분리하여 물 분획물을 수득하는 단계를 포함하여 이루어질 수 있다. For example, the step of removing the ethyl acetate fraction may include: a) removing a solvent containing alcohol from the alcohol extract to obtain a concentrate; b) dissolving the concentrate in purified water; c) mixing ethyl acetate with the solution in a weight ratio of 20:1 to 2:1; and d) separating only the water layer from the result obtained in step c) to obtain a water fraction.
상기 알코올 추출물과 에틸아세테이트의 중량비는 20:1 내지 2:1, 또는 15:1 내지 3:1, 또는 10:1 내지 4:1일 수 있다. 알코올 추출물과 에틸아세테이트를 상기 중량비로 하여 에틸아세테이트 분획을 수행함으로써, 추출물의 안정성 저해 물질을 선택적으로 제거하고, 추출물 내 유효 성분의 함유량을 더욱 증가시킬 수 있다. 구체적으로, 피부 주름 개선, 피부 탄력 개선 또는 피부 재생 효과를 갖는 화장료 조성물의 제조시에, 상기와 같이 알코올 추출물과 에틸아세테이트의 중량비를 조절함으로써 추출물의 안정성 저해 물질만 효과적으로 제거되고, 피부의 주름 개선, 피부의 탄력 개선 또는 피부 재생 효과를 갖는 유효성분들의 비율을 높일 수 있다.The weight ratio of the alcohol extract and ethyl acetate may be 20:1 to 2:1, or 15:1 to 3:1, or 10:1 to 4:1. By performing ethyl acetate fractionation by using the alcohol extract and ethyl acetate in the above weight ratio, substances that inhibit the stability of the extract can be selectively removed, and the content of the active ingredient in the extract can be further increased. Specifically, in the preparation of a cosmetic composition having skin wrinkle improvement, skin elasticity improvement or skin regeneration effect, only substances that inhibit the stability of the extract are effectively removed by adjusting the weight ratio of the alcohol extract and ethyl acetate as described above, and the skin wrinkle improvement , it is possible to increase the ratio of active ingredients having an effect of improving skin elasticity or regenerating the skin.
또한, 예를 들어, 상기 b) 단계에서 상기 농축물과 정제수는, 상기 a) 단계에서 제거된 용매와 대략 동량의 정제수를 투여 후 용해시킴으로써 용액을 형성할 수 있다.In addition, for example, the concentrate and purified water in step b) may form a solution by dissolving approximately the same amount of purified water as the solvent removed in step a) after administration.
2. 인삼 경엽 추출물을 포함하는 화장료 조성물2. Cosmetic composition comprising ginseng leaf extract
본 발명의 일 양태는 인삼 경엽의 알코올 추출물을 수득하는 단계; 및 상기 알코올 추출물에서 에틸아세테이트 분획물을 제거하는 단계;를 포함하는 제조방법에 의해 수득된 인삼 경엽 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.One aspect of the present invention comprises the steps of obtaining an alcohol extract of ginseng leaves; And removing the ethyl acetate fraction from the alcohol extract; provides a cosmetic composition comprising a ginseng leaf extract obtained by a manufacturing method comprising a.
본 발명에서 '화장료 조성물'은 피부의 주름 개선, 피부의 탄력 개선 또는 피부 재생을 위해 사용되는 조성물일 수 있다.In the present invention, the 'cosmetic composition' may be a composition used to improve skin wrinkles, improve skin elasticity, or regenerate skin.
상기 인삼 경엽 추출물의 제조 방법은 상기 "1. 인삼 경엽 추출물의 제조"에서 언급한 것과 동일하므로 기재를 생략한다.The preparation method of the ginseng leaf extract is the same as that described in "1. Preparation of the ginseng leaf extract", so the description will be omitted.
본 발명의 화장료 조성물은 상기 인삼 경엽 추출물을 화장료 조성물 총중량에 대하여 0.0001 내지 10 중량%, 또는 0.001 내지 5 중량%, 또는 0.01 내지 3 중량%, 또는 0.1 내지 2 중량%, 또는 0.5 내지 1.5 중량% 포함할 수 있다.The cosmetic composition of the present invention comprises 0.0001 to 10% by weight, or 0.001 to 5% by weight, or 0.01 to 3% by weight, or 0.1 to 2% by weight, or 0.5 to 1.5% by weight of the ginseng leaf extract based on the total weight of the cosmetic composition can do.
본 발명의 화장료 조성물은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 기제, 보조제 및 첨가제를 사용하여 액체 또는 고체 형태로 제조될 수 있다. 액체 또는 고체 형태의 화장품으로는, 예를 들면 이에 한정되지는 않으나 화장수, 크림제, 로션제, 입욕제 등의 형태를 포함할 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may be prepared in liquid or solid form using bases, adjuvants and additives commonly used in the cosmetic field. Cosmetics in liquid or solid form, for example, but not limited thereto, may include, but are not limited to, the form of a lotion, cream, lotion, bathing agent, and the like.
화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 기제, 보조제 및 첨가제는 특별히 제한되지 않으며, 예를 들면 물, 알코올, 프로필렌글리콜, 스테아르산, 글리세롤, 세틸알코올, 유동 파라핀 등이 있다. Bases, adjuvants and additives commonly used in the cosmetic field are not particularly limited, and examples thereof include water, alcohol, propylene glycol, stearic acid, glycerol, cetyl alcohol, liquid paraffin, and the like.
본 발명의 화장료 조성물은 인삼 경엽 추출물뿐만 아니라, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may include not only ginseng leaf extract, but also ingredients commonly used in cosmetic compositions, for example, conventional adjuvants such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and fragrances, and carriers. may include
본 발명의 화장료 조성물은 본 기술분야에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may be prepared in any formulation conventionally prepared in the art, for example, a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant-containing cleansing , oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation, spray, etc., but is not limited thereto. More specifically, it may be prepared in the form of a flexible lotion, a nourishing lotion, a nourishing cream, a massage cream, an essence, an eye cream, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a pack, a spray, or a powder.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide may be used as a carrier component. can
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component, and in particular, in the case of a spray, additional chlorofluorohydrocarbon, propane / May contain propellants such as butane or dimethyl ether.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸아세테이트, 벤질알코올, 벤질벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.When the formulation of the present invention is a solution or emulsion, a solvent, solubilizer or emulsifier is used as a carrier component, for example, water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1 ,3-butylene glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or fatty acid ester of sorbitan.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a suspension, as a carrier component, a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystals Adult cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracanth may be used.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a surfactant-containing cleansing agent, as carrier components, aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, imidazolinium derivative, methyltaurate, sarcosinate, fatty acid amide ether sulfate, alkyl amidobetaine, fatty alcohol, fatty acid glyceride, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, lanolin derivative, or ethoxylated glycerol fatty acid ester may be used.
본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 피부 재생 효과가 우수한 화장료 조성물은 통상적인 사용 방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may be used alone or in overlapping application, or may be used in overlapping application with other cosmetic compositions other than the present invention. In addition, the cosmetic composition having excellent skin regeneration effect according to the present invention can be used according to a conventional method of use, and the number of times of use can be varied according to the skin condition or taste of the user.
본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클린징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.When the cosmetic composition of the present invention is a soap, surfactant-containing cleansing or surfactant-free cleansing formulation, it may be applied to the skin and then wiped off, removed, or washed off with water. As a specific example, the soap is liquid soap, powder soap, solid soap, and oil soap, the surfactant-containing cleansing formulation is a cleansing foam, cleansing water, cleansing towel, and cleansing pack, and the surfactant-free cleansing formulation is a cleansing cream , cleansing lotion, cleansing water, and cleansing gel, but not limited thereto.
이하, 본 발명을 제조예 및 실시예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of Preparation Examples and Examples.
단, 하기 제조예, 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 제조예 및 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.However, the following Preparation Examples and Examples are only for illustrating the present invention, and the content of the present invention is not limited by the following Preparation Examples and Examples.
실시예 1Example 1
1-1. 인삼잎줄기의 에탄올 추출1-1. Ethanol extraction of ginseng leaf stem
인삼잎줄기 분말(한국인삼공사) 100g에 에탄올 70%(v/v) 수용액을 원물 대비 10배가 되도록 첨가하여 상온에서 8시간 동안 3회 추출한 후 감압농축을 통해 추출물 내 에탄올을 제거하여 약 100g 정도의 에탄올 수용액 추출물을 수득하였다.To 100 g of ginseng leaf stem powder (Korea Ginseng Corporation), a 70% (v/v) aqueous solution of ethanol was added so as to be 10 times larger than the original, extracted three times at room temperature for 8 hours, and then concentrated under reduced pressure to remove the ethanol in the extract to about 100 g An ethanol aqueous solution extract was obtained.
1-2. 에탄올 추출물로부터 에틸아세테이트 분획물의 제거1-2. Removal of ethyl acetate fraction from ethanol extract
상기 추출물을 400 메쉬 필터로 1차 여과한 후 6,000rpm으로 원심분리하였다. 원심분리한 후 고형물은 제거하였고, 남은 상층액을 1um 필터로 2차 여과하였다. 여과물을 감압농축기로 완전히 농축 후 수득한 인삼잎줄기 농축물 약 3.2g을 정제수 96.8g에 용해하여 인삼잎줄기 농축물 희석액 100g을 제조하였다. 인삼잎줄기 농축물 희석액과 에틸아세테이트의 중량비가 10:1이 되도록 상기 인삼잎줄기 농축물 희석액에 에틸아세테이트 10g을 첨가하고, 혼합물에서 물층만을 분리하여 감압농축하여 실시예 1의 물 분획물을 수득하였다.The extract was first filtered through a 400 mesh filter and then centrifuged at 6,000 rpm. After centrifugation, the solid was removed, and the remaining supernatant was second filtered with a 1um filter. After the filtrate was completely concentrated with a vacuum concentrator, about 3.2 g of the ginseng leaf stem concentrate obtained was dissolved in 96.8 g of purified water to prepare 100 g of a diluted ginseng leaf stem concentrate. 10 g of ethyl acetate was added to the diluted ginseng leaf stem concentrate so that the weight ratio of the diluted ginseng leaf stem concentrate and ethyl acetate was 10:1, and only the water layer was separated from the mixture and concentrated under reduced pressure to obtain the water fraction of Example 1. did.
비교예 1 내지 4Comparative Examples 1 to 4
인삼잎줄기의 에탄올 추출시, 인삼잎줄기 분말에 물, 에탄올 30%(v/v) 수용액, 에탄올 50%(v/v) 수용액을 각각 처리하여 추출물을 수득한 다음, 상기 에틸아세테이트 분획물 제거 단계를 수행하지 않은 것을 제외하고는, 상기 실시예 1과 동일한 방식으로 물 추출물의 농축물(비교예 1), 에탄올 30%(v/v) 수용액 추출물의 농축물(비교예 2), 에탄올 50%(v/v) 수용액 추출물의 농축물(비교예 3) 및 에탄올 70%(v/v) 수용액 추출물의 농축물(비교예 4)을 제조하였다.During ethanol extraction of ginseng leaf stems, water,
비교예 5Comparative Example 5
1-1. 인삼잎줄기의 물 추출1-1. Water extraction of ginseng leaf stem
인삼잎줄기 분말(한국인삼공사) 100g에 물을 원물 대비 10배가 되도록 첨가하여 상온에서 8시간 3회 추출하여 물 추출물을 수득하였다.Water was added to 100 g of ginseng leaf stem powder (Korea Ginseng Corporation) so as to be 10 times larger than the original, and extracted three times for 8 hours at room temperature to obtain a water extract.
1-2. 물 추출물로부터 에틸아세테이트 분획물의 제거1-2. Removal of ethyl acetate fraction from water extract
상기 실시예 1에서 적용한 것과 동일한 방식으로, 상기 물 추출물에 대하여 에틸아세테이트 분획물 제거를 수행하여 비교예 5의 물 분획물을 수득하였다. In the same manner as applied in Example 1, the ethyl acetate fraction was removed from the water extract to obtain a water fraction of Comparative Example 5.
비교예 6Comparative Example 6
상기 실시예 1과 동일한 방식으로 인삼잎줄기의 에탄올 추출물을 수득한 다음, 상기 에탄올 추출물로부터 에틸아세테이트 분획물의 제거시, 인삼잎줄기 농축물 3.2g을 정제수 96.8g에 용해하여 인삼잎줄기 농축물 희석액 100g을 제조하고, 인삼잎줄기 농축물 희석액과 에틸아세테이트의 중량비를 1:1이 되도록 상기 인삼잎줄기 농축물 희석액에 에틸아세테이트 100g을 첨가한 다음, 혼합물에서 물층만을 회수하되, 동일한 분획 공정을 총 2회 실시한 것을 제외하고는, 상기 실시예 1과 동일한 방식으로 비교예 6의 물 분획물을 수득하였다. An ethanol extract of ginseng leaf stem was obtained in the same manner as in Example 1, and then, when the ethyl acetate fraction was removed from the ethanol extract, 3.2 g of the ginseng leaf stem concentrate was dissolved in 96.8 g of purified water to dilute the ginseng leaf stem concentrate. 100 g was prepared, and 100 g of ethyl acetate was added to the diluted ginseng leaf stem concentrate so that the weight ratio of the diluted ginseng leaf stem concentrate and ethyl acetate was 1:1, and only the water layer was recovered from the mixture, but the same fractionation process was followed. A water fraction of Comparative Example 6 was obtained in the same manner as in Example 1, except that it was carried out twice in total.
실험예 1Experimental Example 1
피부섬유아세포(fibroblast) (ATCC, USA)를 24웰 플레이트에 1x105씩 분주한 후 DMEM:F12 혼합배지에 10% 소혈청을 함유시킨 후 37℃, 5% CO2배양기에서 배양하였다. 24시간이 지난 후 실시예 및 비교예를 각각 10 ㎍/㎖ 또는 100 ㎍/㎖ 농도로 처리하였으며, 양성대조군으로는 L-ascrobic acid를 100 ㎍/㎖ 농도로 처리하였다. 시료 처리 24시간 후 상층액만을 분리하여 상층액 내의 프로콜라겐형(I) ELISA 키트(procollagen type(I)) (Takara, Japan)를 이용하여 프로콜라겐(procollagen)의 증감 여부를 관찰하였다. Skin fibroblasts (ATCC, USA) were aliquoted at 1x10 5 in a 24-well plate, and 10% bovine serum was added to a DMEM:F12 mixed medium, and then cultured at 37° C., 5% CO 2 in an incubator. After 24 hours, Examples and Comparative Examples were treated at a concentration of 10 μg/ml or 100 μg/ml, respectively, and as a positive control, L-ascrobic acid was treated at a concentration of 100 μg/ml. After 24 hours of sample treatment, only the supernatant was separated and the increase or decrease of procollagen in the supernatant was observed using a procollagen type (I) ELISA kit (Takara, Japan).
무처리군 대비 프로콜라겐 I형 합성 증가량(%)을 계산하고 이를 표 1 및 도 1에 나타낸다. The increase (%) of procollagen type I synthesis compared to the untreated group was calculated and is shown in Table 1 and FIG. 1 .
(㎍/㎖)Throughput
(μg/ml)
프로콜라겐 I형 합성 증가량(%)compared to the untreated group
Increased amount of procollagen type I synthesis (%)
(에탄올70%수용액추출+EA분획제거.추출물:EA 중량비=10:1)Example 1
(Ethanol 70% aqueous solution extraction + EA fraction removal. Extract: EA weight ratio = 10:1)
(물 추출)Comparative Example 1
(water extraction)
(에탄올30%수용액추출)Comparative Example 2
(
(에탄올50%수용액추출)Comparative Example 3
(
(에탄올70%수용액추출)Comparative Example 4
(Extraction of 70% ethanol solution)
(물추출+EA분획제거)Comparative Example 5
(water extraction + EA fraction removal)
(에탄올70%수용액추출+EA분획제거.추출물:EA 중량비=1:1, 분획 공정 2회 진행) Comparative Example 6
(Ethanol 70% aqueous solution extraction + EA fraction removal. Extract: EA weight ratio = 1:1, fractionation process proceeded twice)
상기 비교예 1 내지 6 및 실시예 1의 콜라겐 합성능을 확인한 결과, 실시예의 경우 비교예에 비해서 콜라겐 합성능이 크게 향상된 것을 확인할 수 있다.As a result of confirming the collagen synthesis ability of Comparative Examples 1 to 6 and Example 1, it can be seen that the collagen synthesis ability of Examples is significantly improved compared to Comparative Examples.
특히, 비교예 6과 같이, 추출 농축물 희석액과 에틸 아세테이트의 중량비를 거의 동등하게 적용하여 2회 정도 반복 분획한 경우에도, 프로콜라겐 합성 증가량이 높지 않은 것을 확인할 수 있다. 이는, 본 발명에서 에틸 아세테이트는 클로로필을 비롯한 안정성 저해 물질을 제거하기 위한 목적으로 사용되는 것으로서 추출 농축물 희석액에 대하여 일정 중량비 이상으로 첨가하여 반복적으로 분획을 진행하는 경우 추출물에 함유된 진세노사이드 등 유효성분 또한 제거되기 때문으로 여겨진다. In particular, as in Comparative Example 6, it can be seen that the increase in procollagen synthesis is not high even when the fractionation is repeated twice by applying almost the same weight ratio of the extract concentrate diluent and ethyl acetate. This is that, in the present invention, ethyl acetate is used for the purpose of removing stability-inhibiting substances including chlorophyll. When fractionation is repeatedly performed by adding more than a certain weight ratio to the dilution of the extract concentrate, ginsenosides contained in the extract, etc. It is believed that this is because the active ingredient is also removed.
또한, 실시예 1과 비교예 4의 추출물에서 각각 100ml를 취한 후 3000rpm, 3분 조건하에 원심분리를 수행한 후, 용매를 제거하고 침전물만 분리한 결과를 사진 촬영하여 도 2에 나타냈다. 상기 결과에서, 실시예 1(도 2A)의 추출물은 침전물이 형성되지 않은 반면, 비교예 4(도 2B)의 경우 침전물이 형성되었다. 따라서, 실시예 1에 따르면 클로로필을 비롯한 안정성 저해 물질이 제거되고 원료의 안정성이 향상된 것을 확인할 수 있는 반면, 비교예 4의 경우 그렇지 않았다.In addition, after taking 100 ml of each of the extracts of Example 1 and Comparative Example 4, centrifugation was performed under 3000 rpm and 3 minutes conditions, the solvent was removed, and the result of separating only the precipitate was photographed and shown in FIG. 2 . From the above results, the extract of Example 1 (FIG. 2A) did not form a precipitate, whereas in Comparative Example 4 (FIG. 2B), a precipitate was formed. Therefore, according to Example 1, it can be confirmed that the stability-inhibiting substances including chlorophyll are removed and the stability of the raw material is improved, whereas in Comparative Example 4, this was not the case.
<제조예 1> 화장료 조성물의 제조<Preparation Example 1> Preparation of a cosmetic composition
<1-1> 에센스의 제조<1-1> Preparation of essence
실시예 1의 분획물을 이용하여 하기 표 2에 기재된 함량(중량부)에 따라 에센스를 제조하였다.Using the fraction of Example 1, an essence was prepared according to the content (parts by weight) shown in Table 2 below.
<1-2> 유연화장수의 제조<1-2> Manufacture of softened lotion
실시예 1의 분획물을 유효성분으로 함유하는 유연화장수는 하기 표 3과 같이 제조하였다.Softening lotion containing the fraction of Example 1 as an active ingredient was prepared as shown in Table 3 below.
<1-3> 영양 크림의 제조<1-3> Preparation of nourishing cream
실시예 1의 분획물을 유효성분으로 함유하는 영양크림은 하기 표 4의 조성과 같이 제조하였다. Nutrient cream containing the fraction of Example 1 as an active ingredient was prepared as shown in Table 4 below.
<1-4> 로션의 제조<1-4> Preparation of lotion
실시예 1의 분획물을 유효성분으로 함유한 로션을 하기 표 5의 조성과 같이 제조하였다. A lotion containing the fractions of Example 1 as an active ingredient was prepared as shown in Table 5 below.
Claims (8)
상기 알코올은 에탄올 또는 에탄올 수용액이고,
상기 에탄올 수용액은 5%(v/v) 내지 99%(v/v) 에탄올 수용액인 화장료 조성물.4. The method according to any one of claims 1 to 3,
The alcohol is ethanol or an aqueous ethanol solution,
The ethanol aqueous solution is 5% (v / v) to 99% (v / v) ethanol aqueous solution cosmetic composition.
상기 알코올 수용액 추출물과 에틸아세테이트를 10:1의 중량비로 혼합한 후 물 층을 분리하는 단계;를 포함하는 인삼 경엽의 수용성 분획물의 제조 방법.obtaining an alcohol aqueous solution extract of ginseng leaves; and
A method for producing a water-soluble fraction of ginseng leaves, comprising the step of mixing the alcohol aqueous solution extract and ethyl acetate in a weight ratio of 10:1 and then separating the water layer.
상기 알코올은 에탄올 또는 에탄올 수용액이고,
상기 에탄올 수용액은 5%(v/v) 내지 99%(v/v) 에탄올 수용액인 제조 방법.7. The method of claim 6,
The alcohol is ethanol or an aqueous ethanol solution,
The ethanol aqueous solution is 5% (v / v) to 99% (v / v) ethanol aqueous solution.
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
AMND | Amendment | ||
E601 | Decision to refuse application | ||
AMND | Amendment | ||
X701 | Decision to grant (after re-examination) | ||
GRNT | Written decision to grant |