KR102221255B1

KR102221255B1 - Vaccine composition for treating tuberculosis comprising Mycobacterium anyangense strain

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Publication number: KR102221255B1
Application number: KR1020190087522A
Authority: KR
Inventors: 이길수; 김형준; 김성순; 김성한; 이성경; 김범준; 국윤호; 김병준
Original assignee: 대한민국(질병관리청장); 서울대학교산학협력단
Priority date: 2019-07-19
Filing date: 2019-07-19
Publication date: 2021-03-02
Also published as: KR20210010090A

Abstract

본 발명은 마이코박테리움 안얀젠스(Mycobacterium anyangense) 균주를 포함하는 결핵치료용 백신 조성물에 관한 것으로,
본 발명의 일 측면에서 제공되는 마이코박테리움 안얀젠스(Mycobacterium anyangense) 균주 기반 결핵 치료용 백신 조성물은 현재 결핵 백신으로 사용되고 있는 M. bovis BCG에 비해 안전성이 우수하며, 치료제 단독처리 그룹에 비해 결핵 치료효과가 우수하므로, 치료백신 후보물질로 더욱 우수한 치료효과를 확보할 수 있는 효과가 있다.The present invention relates to a vaccine composition for treating tuberculosis comprising a Mycobacterium anyangense strain,
The vaccine composition for the treatment of tuberculosis based on Mycobacterium anyangense strain provided in one aspect of the present invention has superior safety compared to M. bovis BCG, which is currently used as a tuberculosis vaccine, and compared to the group treated with the treatment alone. Since the treatment effect is excellent, there is an effect of securing a more excellent treatment effect as a therapeutic vaccine candidate material.

Description

Vaccine composition for treating tuberculosis comprising Mycobacterium anyangense strain}

본 발명은 마이코박테리움 안얀젠스(Mycobacterium anyangense) 균주를 포함하는 결핵치료용 백신 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a vaccine composition for treating tuberculosis comprising a Mycobacterium anyangense strain.

결핵은 마이코박테리움 튜버큘로시스(Mycobacterium tuberculosis) 박테리아에 의해 야기되는 전염력이 높은 감염성 질환이며, WHO에서 정한 3대 감염질환 중 하나로 높은 발병률과 사망률을 나타내고 있다. 전 세계적으로 약 6천만명의 활동성 결핵 환자가 있으며 매년 5천만 내지는 1억여명이 결핵에 감염되는 것으로 추정되고, 적어도 매년 900만명의 결핵 신환자가 발생하며, 150만 명 이상이 결핵으로 사망한다고 알려졌다. 결핵 발병률(incidence rate)은 인구 10만명 당 146명, 결핵 사망률은 인구 10만명 당 49명으로 단일 감염병 중에서 가장 많은 사망 원인을 차지하고 있어, 세계적으로 심각한 보건 문제로 남아 있다. 최근에는 약제내성을 나타내는 난치성 결핵환자의 증가와 HIV 감염증가로 인해 발병 양상은 더욱 심각해지는 추세이다. 현재 HIV 감염자의 약 50%인 1,500만 여명이 결핵균에 동시에 감염되어 있으며, 결핵균이 HIV 증식을 촉진하여 다른 기회 감염균보다 기대수명(life expectancy)을 2분의 1로 단축시켜, HIV 감염자에게는 더욱 위협이 되고 있다. 또한 HIV 양성 결핵환자의 경우 결핵에 의한 사망률이 3배 이상 높고 치료 효과는 2배 정도 낮다고 보고되었다.Tuberculosis is a highly contagious infectious disease caused by Mycobacterium tuberculosis bacteria, and it is one of the three major infectious diseases determined by the WHO and has a high incidence and mortality rate. There are about 60 million active TB patients worldwide, and it is estimated that 50 million to 100 million people are infected with tuberculosis every year, at least 9 million new cases of tuberculosis occur annually, and more than 1.5 million people die from tuberculosis. The incidence rate of tuberculosis is 146 per 100,000 people, and the mortality rate of tuberculosis is 49 per 100,000 people, accounting for the most death among single infectious diseases, which remains a serious health problem worldwide. In recent years, due to the increasing number of refractory tuberculosis patients showing drug resistance and the increase in HIV infection, the outbreak pattern is becoming more serious. Currently, about 50% of HIV-infected people, or 15 million people, are simultaneously infected with Mycobacterium tuberculosis, and Mycobacterium tuberculosis promotes HIV growth, shortening the life expectancy by half compared to other opportunistic infections, which is more threatening to HIV-infected people. Has become. In addition, in the case of HIV-positive tuberculosis patients, it was reported that the mortality rate from tuberculosis was more than three times and the treatment effect was twice as low.

우리나라의 결핵균 감염률은 약 40%로 약 2천만명이 결핵균에 감염되었을 것으로 추정되고 있다. 이 가운데 약 10%인 200만 명은 일생에 한번은 결핵 환자가 될 것으로 예상된다. 우리나라에서 전염병으로 사망하는 사람의 60%가량이 결핵으로 그 심각성을 유추할 수 있으며, 이는 21세기 국가보건 및 복지에 심각한 문제로 대두되고 있다. 특히 우리나라는 고병원성인 베이징과(Beijing family)의 결핵균이 많다. 베이징 균주는 다른 결핵균과 달리 병원성과 전염력이 높으며 다제내성 결핵의 발생이나 재활성화 결핵의 발생 빈도가 매우 높다. 한국 내 결핵균의 유전자 지문을 통해 베이징과의 하나가 우점적으로 존재한 것으로 나타났으며, 이 유전자형은 총 결핵균의 18.4%를 차지하는 것으로 나타났다.The rate of infection with Mycobacterium tuberculosis in Korea is about 40%, and it is estimated that about 20 million people have been infected with Mycobacterium tuberculosis. Of these, about 10%, or 2 million, are expected to become tuberculosis patients at least once in their lifetime. About 60% of people who die from infectious diseases in Korea can infer the severity of tuberculosis, which has emerged as a serious problem for national health and welfare in the 21st century. In particular, there are many tuberculosis bacteria of the Beijing family, which are highly pathogenic in Korea. Unlike other Mycobacterium tuberculosis, the Beijing strain is highly pathogenic and infectious, and the incidence of multidrug-resistant tuberculosis and reactivation tuberculosis is very high. Genetic fingerprinting of Mycobacterium tuberculosis in Korea revealed that the one with Beijing was predominantly present, and this genotype accounted for 18.4% of the total Mycobacterium tuberculosis.

한편, 베이징과에 속하며 한국에서 발생한 전염성이 강한 결핵균은 K 균주(K strain)라 명명되고 있고, 한국형 고병원성 결핵균인 K 균주는 마우스 감염시 초기 선천면역을 극복할 수 있는 특이적 병인기전을 나타내며 이는 결핵균 표준 균주인 H37Rv 균주 감염량의 10배에 해당되는 성장속도를 나타내었다. 한국형 고병원성 결핵균인 K 균주 감염에 의한 마우스의 폐사는 결핵균 표준 균주인 H37Rv 균주 감염에 의한 마우스의 폐사보다 2배이상 빠르며, 감염 후 폐사 시기의 균수는 거의 동일한 것으로 보아 감염 후기에는 숙주의 면역반응에 의한 면역병리가 병인기전으로서 매우 중요할 것으로 생각되기에 선천면역보다는 예방백신 등을 통한 후천면역을 특이적으로 올려주는 것이 한국형 고병원성 결핵균인 K 균주를 방어하는 핵심 요소일 것으로 판단되었다.On the other hand, Mycobacterium tuberculosis, which belongs to the Peking family and is highly infectious in Korea, is named K strain, and the K strain, a highly pathogenic tuberculosis bacteria in Korea, represents a specific pathogenesis mechanism capable of overcoming the initial innate immunity when infected with mice. It showed a growth rate corresponding to 10 times the infection amount of the H37Rv strain, the standard strain of Mycobacterium tuberculosis. The death of mice caused by infection with the Korean-type highly pathogenic M. tuberculosis K strain is more than twice as fast as that of mice infected with the H37Rv strain, the standard M. tuberculosis strain, and the number of bacteria at the time of death after infection is almost the same. As the immune pathology caused by it is considered to be very important as a pathogenesis mechanism, it was judged that the specific boosting of acquired immunity through preventive vaccines rather than innate immunity would be a key factor in defending the K strain, a highly pathogenic tuberculosis bacteria in Korea.

현재, 결핵은 주로 마이코박테리움 보비스(Mycobacterium bovis)의 비독성 균주인 바실러스 칼메트-구에린(BCG:Bacillus Calmette-Guerin)의 생균을 이용하여 예방하고 있다(대한민국 공개특허 제10-2019-0014398호). 그러나, BCG의 안전성 및 효능은 지역과 나라, 인종에 따라 논란이 있으며, 미국과 같은 몇몇 국가에서는 BCG의 사용이 제한되고 있다. 또한, BCG는 HIV에 감염되거나 면역이 저하된 어린이들에게 사용하기에는 적합하지 못한 것으로 알려져 있다. 이에, BCG를 대체할 보다 안전하고 효과가 우수한 새로운 백신의 개발이 요구되고 있다.Currently, tuberculosis is mainly prevented using live bacteria of Bacillus Calmette-Guerin (BCG: Bacillus Calmette-Guerin), a non-toxic strain of Mycobacterium bovis (Republic of Korea Patent Publication No. 10-2019- 0014398). However, the safety and efficacy of BCG is controversial by region, country, and race, and the use of BCG is restricted in some countries, such as the United States. In addition, BCG is known to be unsuitable for use in HIV-infected or immunocompromised children. Accordingly, there is a need to develop a new vaccine that is safer and more effective to replace BCG.

따라서, 본 발명자는 안전하면서도 결핵균을 효과적으로 치료할 수 있는 백신을 개발하기 위한 연구를 계속한 결과, 신속생장 비결핵항산균인 마이코박테리움 안얀젠스(Mycobacterium anyangense, KCTC29443) 균주 자체 혹은 이를 활용한 조성물이 우수한 결핵 치료 효과를 나타냄을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다. Therefore, as a result of continuing research to develop a vaccine that is safe and capable of effectively treating Mycobacterium tuberculosis, the inventors of the present invention have found that Mycobacterium anyangense , a fast-growing non-TB mycobacterium, KCTC29443) The present invention was completed by confirming that the strain itself or a composition using it exhibits excellent tuberculosis treatment effect.

본 발명의 일 측면에서의 목적은,Objects in one aspect of the present invention,

현재 결핵 백신으로 사용되고 있는 M.bovis BCG에 비해 안전성이 우수하고 치료제 단독처리에 비해 결핵 치료효과가 우수한 결핵 치료용 백신 조성물, 결핵 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.It is to provide a vaccine composition for tuberculosis treatment and a pharmaceutical composition for tuberculosis treatment, which has superior safety compared to M.bovis BCG, which is currently used as a tuberculosis vaccine, and has excellent tuberculosis treatment effect compared to treatment alone.

상기 목적을 달성하기 위하여,To achieve the above object,

본 발명의 일 측면은 마이코박테리움 안얀젠스(Mycobacterium anyangense) 균주를 포함하는 결핵 치료용 백신 조성물을 제공한다.One aspect of the present invention provides a vaccine composition for treating tuberculosis comprising a Mycobacterium anyangense strain.

또한, 본 발명의 다른 일 측면은, 마이코박테리움 안얀젠스(Mycobacterium anyangense) 균주를 포함하는 결핵 치료용 약학적 조성물을 제공한다.In addition, another aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for treating tuberculosis comprising a Mycobacterium anyangense strain.

본 발명의 일 측면에서 제공되는 마이코박테리움 안얀젠스(Mycobacterium anyangense) 균주 기반 결핵 치료용 백신 조성물은 현재 결핵 백신으로 사용되고 있는 M.bovis BCG에 비해 안전성이 우수하고 치료제 단독처리에 비해 결핵 치료효과가 우수하므로, 치료백신 후보물질로 더욱 우수한 치료효과를 확보할 수 있는 효과가 있다. The vaccine composition for treating tuberculosis based on Mycobacterium anyangense strain provided in one aspect of the present invention has superior safety compared to M.bovis BCG, which is currently used as a tuberculosis vaccine, and has a tuberculosis treatment effect compared to treatment alone. As is excellent, there is an effect of securing a more excellent therapeutic effect as a candidate material for a therapeutic vaccine.

도 1은 C57BL/6 마우스를 100-200CFU가 되도록 공기감염을 이용해 결핵균을 감염시킨 후, PBS, 비교예 1(1×10⁶ CFU), 실시예 1(1×10⁶ CFU) 및 실시예 2(1×10⁷ CFU) 에서 준비한 균주를 2주 간격으로 2번 접종하고, 동시에 2주동안 항결핵제 이소니아지드(isoniazid, INH)를 투여한 뒤, 1일 후 폐조직에서 측정된 결핵균 CFU 를 나타내는 그래프이다.
도 2는 C57BL/6 마우스를 100-200CFU가 되도록 공기감염을 이용해 결핵균을 감염시킨 후, PBS, 비교예 1(1×10⁶ CFU), 실시예 1(1×10⁶ CFU) 및 실시예 2(1×10⁷ CFU) 에서 준비한 균주를 2주 간격으로 2번 접종하고, 동시에 2주 동안 항결핵제를 투여한 후 3주차에 결핵 백신면역효과 관련 IFN-γ 발현량을 배지만 처리한 경우, ConA를 처리한 경우, PPD를 처리한 경우를 나누어 비교 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 C57BL/6 마우스를 100-200CFU가 되도록 공기감염을 이용해 결핵균을 감염시킨 후, PBS, 비교예 1(1×10⁶ CFU), 실시예 1(1×10⁶ CFU) 및 실시예 2(1×10⁷ CFU) 에서 준비한 균주를 2주 간격으로 2번 접종하고, 동시에 2주 동안 항결핵제를 투여한 후 9주차에 Healthy area/Whole area(좌측 그래프)와 Granuloma caseous scoring(우측 그래프)를 나타낸 그래프이다.
도 4는 도 3의 조건과 같이 마우스에 결핵균을 호흡기로 감염시키고, 백신 및 항결핵제 처리 후 9주 뒤, 폐 조직을 H&E로 염색하여 조직병리학적으로 분석한 결과를 나타낸 도이다.
도 5는 배지별 성장곡선 비교결과를 나타내는 그래프이다.
도 6은 누드 마우스의 조직에서 안전성과 관련된 생존양을 비교한 결과를 나타내는 그래프이다.1 is a C57BL/6 mouse after infection with Mycobacterium tuberculosis using air infection to a concentration of 100-200 ^{CFU, PBS, Comparative Example 1 (1 × 10 6} CFU), Example 1 (1 × 10 ⁶ CFU) and Example 2 (1×10 ⁷ CFU) is a graph showing the Mycobacterium tuberculosis CFU measured in lung tissue 1 day after inoculation of the strain prepared in 2 weeks at intervals of 2 weeks and administration of the antituberculosis agent isoniazid (INH) for 2 weeks at the same time. .
2 shows C57BL/6 mice after infection with Mycobacterium tuberculosis using air infection to a concentration of 100-200 ^{CFU, PBS, Comparative Example 1 (1×10 6} CFU), Example 1 (1×10 ⁶ CFU) and Example 2 When the strain prepared in (1×10 ⁷ CFU) was inoculated twice at intervals of two weeks, and an anti-tuberculosis drug was administered for two weeks at the same time, and then the tuberculosis vaccine immune effect-related IFN-γ expression level was only treated at the third week, ConA was administered. In the case of treatment, it is a graph showing the result of comparative evaluation by dividing the case of PPD treatment.
3 is a C57BL/6 mouse after infecting Mycobacterium tuberculosis using air infection to a concentration of 100-200 ^{CFU, PBS, Comparative Example 1 (1 × 10 6} CFU), Example 1 (1 × 10 ⁶ CFU) and Example 2 The strain prepared in (1×10 ⁷ CFU) was inoculated twice at intervals of 2 weeks, and antituberculosis drugs were administered at the same time for 2 weeks, and then Healthy area/Whole area (left graph) and Granuloma caseous scoring (right graph) at 9 weeks. This is the graph shown.
4 is a diagram showing the results of histopathological analysis by infecting mice with Mycobacterium tuberculosis in the respiratory tract as shown in the conditions of FIG. 3 and staining lung tissue with H&E 9 weeks after treatment with a vaccine and an anti-tuberculosis agent.
5 is a graph showing a comparison result of growth curves for each medium.
6 is a graph showing the results of comparing the survival amount related to safety in the tissues of nude mice.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

결핵은 MTBC(Mycobacterium tuberculosis complex)의 체내 침입 및 증식에 의한 질환이다. 현재 M. bovis BCG 생균을 접종하여 인터페론 감마(Interferon gamma) 등을 유도함으로써 결핵 예방효과를 얻고 있다. M. bovis BCG는 결핵에 대한 유일한 백신이나 생장이 느리고 군집을 형성하는 특성이 있어 균주를 다루는데 어려움이 존재한다. 또한, 그 효과가 지역, 인종, 나이에 따라 다양하며, 성인에 대해서는 효과가 없는 것으로 알려져 있다. 이를 대체할 새로운 결핵백신이 개발되고 있으나, M. bovis BCG 및/또는 비결핵항산균을 매개로 유전자 재조합을 통해 개발을 시도하고 있어, 안정성 문제가 여전히 존재한다.Tuberculosis is a disease caused by invasion and proliferation of the Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC). Currently, M. bovis BCG is inoculated with live bacteria to induce interferon gamma, etc., thereby obtaining a tuberculosis prevention effect. M. bovis BCG is the only vaccine against tuberculosis, but it is difficult to deal with the strain due to its slow growth and community-forming properties. In addition, the effects vary according to region, race, and age, and are known to have no effect on adults. A new tuberculosis vaccine to replace this is being developed, but development is being attempted through genetic recombination via M. bovis BCG and/or non-tuberculosis mycobacterium, so stability problems still exist.

이러한 문제를 해결하고자, 본 발명의 일 측면은 마이코박테리움 안얀젠스(Mycobacterium anyangense) 균주를 포함하는 결핵 치료용 백신 조성물을 제공한다. 신속생장 비결핵항산균인 마이코박테리움 안얀젠스(Mycobacterium anyangense) 균주는 KCTC29443로 기탁된 것일 수 있다.In order to solve this problem, one aspect of the present invention provides a vaccine composition for treating tuberculosis comprising a Mycobacterium anyangense strain. The rapidly growing non-tuberculosis mycobacterium Mycobacterium anyangense strain may have been deposited as KCTC29443.

상기 마이코박테리움 안얀젠스(Mycobacterium anyangense) KCTC29443은, MTBC(Mycobacterium tuberculosis complex)에 의한 감염 시 체내에서의 증식과 이로 인한 결핵의 발병을 막기 위하여 사용되고 있는 M.bovis BCG 백신주를 대체할 수 있는 균주이다. 마이코박테리움 안얀젠스(Mycobacterium anyangense) KCTC29443 균 자체 또는 이를 활용한 면역자극 물질을 체내에 주입하여 면역반응을 유도하고, 이를 통해 결핵의 치료효과를 증대시킬 수 있다.The Mycobacterium anyangense KCTC29443 is a strain that can replace the M.bovis BCG vaccine strain, which is used to prevent the incidence of tuberculosis and proliferation in the body during infection by the Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC). to be. Mycobacterium anyangense (Mycobacterium anyangense) KCTC29443 itself or an immunostimulating substance using it is injected into the body to induce an immune response, and through this, the therapeutic effect of tuberculosis can be increased.

상기 마이코박테리움 안얀젠스(Mycobacterium anyangense) KCTC29443은 M.bovis BCG보다 생장이 빠르고, 재조합 유전자를 이용하지 않으므로 유전자 조작에 따른 기능 저하 가능성이 없고, 안전성도 우수하며, 생장시 군집을 형성하지 않아 생산 및 취급이 쉬운 이점이 있다. 단, 마이코박테리움 안얀젠스는 KCTC29443 균주 외 보고된 바가 없어 기탁된 균주의 특성으로 한정한다. The Mycobacterium anyangense KCTC29443 grows faster than M.bovis BCG and does not use a recombinant gene, so there is no possibility of functional degradation due to genetic manipulation, excellent safety, and does not form a cluster during growth. It has the advantage of being easy to produce and handle. However, Mycobacterium Anyanzens is limited to the characteristics of the deposited strain as there is no report other than the KCTC29443 strain.

한편, 상기 결핵은 한국형 고병원성 결핵균인 K 균주(Mycobacterium tuberculosis K strain)의 감염에 의해 발병된 결핵일 수 있다.Meanwhile, the tuberculosis may be tuberculosis caused by infection of the Korean-type highly pathogenic Mycobacterium tuberculosis K strain (Mycobacterium tuberculosis K strain).

보다 구체적으로, 상기 결핵은 안결핵, 피부 결핵, 신장 결핵, 부고환 결핵, 림프선 결핵, 후두 결핵, 중이 결핵, 장결핵, 다제내성 결핵, 폐결핵, 담결핵, 인후 결핵, 폐허증, 유방 결핵 및 척추 결핵으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.More specifically, the tuberculosis is ocular tuberculosis, cutaneous tuberculosis, renal tuberculosis, epididymis tuberculosis, lymphatic tuberculosis, laryngeal tuberculosis, middle ear tuberculosis, intestinal tuberculosis, multidrug resistant tuberculosis, pulmonary tuberculosis, cholangitis, throat tuberculosis, pulmonary hemorrhage, breast tuberculosis and spinal tuberculosis. It may be one or more selected from the group consisting of.

본 발명의 백신 조성물은 단독으로 투여 가능하지만 바람직하게는, 애쥬번트와 함께 투여할 수 있다. 애쥬번트는 면역세포의 초기 활성화 과정에서 비특이적으로 항원에 대한 면역 반응을 촉진하는 물질로, 숙주에게 면역원은 아니지만 면역계의 세포의 활성을 증대시킴으로써 면역을 강화하는 제제, 분자등을 의미한다(Warren et al., 1986, Annu.Rev.Immunol,. 4:369). 본 발명의 백신 조성물과 함께 투여되어 면역 반응을 증강시킬 수 있는 애쥬번트는 임의의 다양한 애쥬번트를 포함하며, 전형적인 애쥬번트로는 프로인트 애쥬번트(Freund adjuvant), 알룸 화합물(aluminum compound), 무라밀 디펩타이드(muramyl dipeptide), 포폴리싸카라이드(LPS), 모노포스포릴 리피드 A, 또는 쿠일 A등이 알려져 있다. 상기 애쥬번트는 백신 조성물과 동시에 투여되거나 시간 간격을 두고 순차적으로 투여될 수 있다.The vaccine composition of the present invention can be administered alone, but preferably, it can be administered together with an adjuvant. Adjuvant is a substance that non-specifically promotes an immune response to an antigen in the initial activation process of immune cells.It is not an immunogen to a host, but refers to an agent or molecule that enhances immunity by increasing the activity of cells in the immune system (Warren et al., 1986, Annu. Rev. Immunol,. 4:369). Adjuvants that can be administered together with the vaccine composition of the present invention to enhance the immune response include any of a variety of adjuvants, and typical adjuvants include Freund adjuvant, aluminum compound, and Mura. Wheat dipeptide (muramyl dipeptide), phospholipid (LPS), monophosphoryl lipid A, or kuyl A, and the like are known. The adjuvant may be administered simultaneously with the vaccine composition or may be sequentially administered at intervals of time.

또한, 본 발명의 백신 조성물은 추가적으로 용매, 부형제 등을 더 포함할 수 있다. 상기 용매에는 생리식염수, 증류수 등이 포함되며, 상기 부형제에는 알루미늄 포스페이트, 알루미늄 하이드록사이드 또는 알루미늄 포타슘 설페이트 등이 포함되나, 이에 제한되지 않으며, 본 발명이 속하는 분야에서 통상적으로 백신 제조에 사용하는 물질을 더 포함할 수 있다.In addition, the vaccine composition of the present invention may further include a solvent, an excipient, and the like. The solvent includes physiological saline, distilled water, and the like, and the excipient includes, but is not limited to, aluminum phosphate, aluminum hydroxide, or aluminum potassium sulfate, and is not limited thereto. It may further include.

본 발명의 백신 조성물은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 이용되는 방법으로 제조할 수 있다. 본 발명의 백신 조성물은 경구형 또는 비경구형 제제로 제조할 수 있고, 바람직하게는 비경구형 제제인 주사액제로 제조하며, 진피 내, 근육 내, 복막 내, 정맥 내, 피하 내, 비강 또는 경막 외(eidural) 경로로 투여할 수 있다.The vaccine composition of the present invention can be prepared by a method commonly used in the technical field to which the present invention belongs. The vaccine composition of the present invention can be prepared in an oral or parenteral formulation, and is preferably prepared as an injection solution as a parenteral formulation, and is intradermal, intramuscular, intraperitoneal, intravenous, subcutaneous, nasal or epidural ( eidural) route.

본 발명의 백신 조성물은 면역학적 유효량으로 투여한다. 상기 면역학적 유효량이란 결핵 치료효과를 나타낼 수 있을 정도의 충분한 양과 부작용이나 심각한 또는 과도한 면역반응을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 정확한 투여 농도는 투여될 특정 면역원에 따라 달라지며, 접종 대상자의 연령, 체중, 건강, 성별 환자의 약물에 대한 민감도, 투여 경로, 투여 방법 등 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있으며, 1회 내지 수회 투여가능 하다.The vaccine composition of the present invention is administered in an immunologically effective amount. The immunologically effective amount refers to an amount sufficient to exhibit the therapeutic effect of tuberculosis and an amount that does not cause side effects or serious or excessive immune reactions, and the exact dose concentration varies depending on the specific immunogen to be administered, and the age of the inoculation subject. , Body weight, health, sex, sensitivity of the patient to the drug, administration route, administration method, etc. can be easily determined by those skilled in the art according to well-known factors in the medical field, and can be administered once to several times.

또한, 본 발명의 다른 일 측면은 마이코박테리움 안얀젠스(Mycobacterium anyangense) 균주를 포함하는 결핵 치료용 약학적 조성물을 제공한다.In addition, another aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for treating tuberculosis comprising a Mycobacterium anyangense strain.

본 발명의 약학적 조성물은 마이코박테리움 안얀젠스(Mycobacterium anyangense) 균주와 함께 결핵의 치료 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 포함할 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may include one or more known active ingredients having a therapeutic effect of tuberculosis together with a Mycobacterium anyangense strain.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형체 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.The pharmaceutical composition of the present invention may further include an appropriate carrier, excipient, and diluent commonly used in the preparation of a pharmaceutical composition. Carriers, excipients and diluents that may be included in the pharmaceutical composition of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, gum acacia, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, Cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, and mineral oil. In the case of formulation, it is prepared using diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants that are usually used.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제는 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 것을 사용하는 것이 바람직하다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention may be formulated and used in the form of oral dosage forms such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc., external preparations, suppositories, and sterile injectable solutions according to a conventional method. I can. Suitable formulations known in the art are preferably those disclosed in Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and these solid preparations are prepared by mixing at least one or more excipients such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, gelatin, and the like. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used. Liquid preparations for oral administration include suspensions, liquid solutions, emulsions, syrups, etc.In addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents, various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives may be included. have. Preparations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories. As a base for suppositories, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin paper, glycerogelatin, and the like may be used.

본 발명의 조성물은 결핵의 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.The composition of the present invention can be used alone for the treatment of tuberculosis, or in combination with surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy, and methods of using a biological response modifier.

본 발명의 일 측면에서 제공되는 마이코박테리움 안얀젠스(Mycobacterium anyangense) 균주 기반 결핵 치료용 백신 조성물은 현재 결핵 백신으로 사용되고 있는 M. bovis BCG에 비해 안전성이 우수하고, 치료제 단독처리에 비해 결핵 치료효과가 우수하므로, 치료백신 후보물질로 더욱 우수한 치료효과를 확보할 수 있는 효과가 있으며, 이는 후술하는 실시예, 실험예에 의해 뒷받침된다. The vaccine composition for treating tuberculosis based on Mycobacterium anyangense strain provided in one aspect of the present invention has superior safety compared to M. bovis BCG, which is currently used as a tuberculosis vaccine, and is treated with tuberculosis compared to treatment alone. Since the effect is excellent, there is an effect of securing a more excellent therapeutic effect as a therapeutic vaccine candidate, which is supported by Examples and Experimental Examples described later.

이하, 본 발명을 실시예 및 실험예를 통해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail through examples and experimental examples.

단, 후술하는 실시예 및 실험예는 본 발명을 일 측면에서 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 이에 제한되는 것은 아니다.However, the examples and experimental examples to be described later are merely illustrative of the present invention in one aspect, and the present invention is not limited thereto.

<실시예 1> Live 마이코박테리움 안얀젠스 KCTC29443 준비<Example 1> Preparation of Live Mycobacterium Anyanzens KCTC29443

마이코박테리움 안얀젠스(M. anyangense) KCTC29443을 배양하여 준비하였다.Mycobacterium Anyangens ( M. anyangense ) was prepared by culturing KCTC29443.

<실시예 2> Heat-killed 마이코박테리움 안얀젠스 KCTC29443 준비<Example 2> Heat-killed Mycobacterium Anyanzens KCTC29443 preparation

Heat-killed 마이코박테리움 안얀젠스 KCTC29443는 고온의 열을 가해 생균을 사균화하여 제조하는 방법으로, live 마이코박테리움 안얀젠스 KCTC29443 균주를 고압증기멸균 방법 (121℃, 15분)을 통해 멸균한 후 PBS를 이용하여 최종 1 * 10⁸ CFU/ml 농도가 되도록 희석하여 준비하였다.Heat-killed Mycobacterium Anyanzens KCTC29443 It is a method of manufacturing by killing live bacteria by applying high temperature heat.After sterilizing live Mycobacterium Anyanzens KCTC29443 strain through an autoclave method (121℃, 15 minutes), the final 1 * 10 ⁸ It was prepared by diluting to a concentration of CFU/ml.

<비교예 1> <Comparative Example 1> Mycobacterium bovisMycobacterium bovis (( M. bovisM. bovis ) BCG 준비) BCG preparation

비교를 위해, 현재 결핵 백신으로 사용되고 있는 M. bovis BCG를 준비하였다. For comparison, M. bovis BCG, currently used as a tuberculosis vaccine, was prepared.

<실험예 1> 결핵균 치료효과 평가<Experimental Example 1> Mycobacterium tuberculosis treatment effect evaluation

본 발명에 따른 마이코박테리움 안얀젠스(M. anyangense) KCTC29443 균주의 결핵균 치료효과를 평가하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.The following experiment was performed to evaluate the therapeutic effect of Mycobacterium Anyangens (M. anyangense ) KCTC29443 strain according to the present invention on the treatment of Mycobacterium tuberculosis.

C57BL/6 마우스를 공기감염을 이용해 100-200CFU가 되도록 M.tuberculosis TBG-014 결핵균을 감염시키고, 4주 후에 항결핵제인 INH를 사용해 치료를 시작하였다(85 mg/L). 이와 동시에 PBS, 비교예 1, 실시예1 및 실시예2에서 준비한 균주를 이용하여 첫 번째 백신접종을 한 뒤 2주 후 2차 접종하였다. 보다 구체적으로, PBS, 실시예 1, 2, 비교예 1은 각각 마우스 측면에 피하주사 (flank skin subcutaneous injection) 방법으로 1 ml 주사기를 이용해 1회에 100 ul씩, 2주 간격으로 총 2회 (200 ul) 주사하였다. 주사 부위는 알코올로 소독 후 접종하였고, 주사 후 주사부위의 부풀어 오르는 것을 통해 접종여부를 확인하였다. C57BL/6 mice were infected with M.tuberculosis TBG-014 Mycobacterium tuberculosis so as to reach 100-200 CFU using air infection, and treatment was started with INH, an anti-tuberculosis drug, after 4 weeks (85 mg/L). At the same time, the first vaccination was performed using PBS, the strains prepared in Comparative Example 1, Example 1, and Example 2, followed by a second inoculation 2 weeks later. More specifically, PBS, Examples 1, 2, and Comparative Example 1 are each 100 ul at a time using a 1 ml syringe by a flak skin subcutaneous injection method on the side of the mouse, a total of 2 times at intervals of 2 weeks ( 200 ul) was injected. The injection site was sterilized with alcohol and then inoculated, and after injection, the inoculation was confirmed by swelling of the injection site.

상기 2차 접종 후 하루 뒤 마우스의 폐 내 결핵균 CFU를 측정하였으며, 그 결과를 도 1에 나타내었다. One day after the second inoculation, the Mycobacterium tuberculosis CFU in the lungs of the mouse was measured, and the results are shown in FIG. 1.

도 1은 C57BL/6 마우스를 100-200CFU가 되도록 공기감염을 이용해 결핵균을 감염시킨 후, PBS, 비교예 1(1×10⁶ CFU), 실시예 1(1×10⁶ CFU) 및 실시예 2(1×10⁷ CFU) 에서 준비한 균주를 2주 간격으로 2번 접종하고, 하루 뒤에 폐조직에서 측정된 결핵균 CFU 를 나타내는 그래프이다.1 is a C57BL/6 mouse after infection with Mycobacterium tuberculosis using air infection to a concentration of 100-200 ^{CFU, PBS, Comparative Example 1 (1 × 10 6} CFU), Example 1 (1 × 10 ⁶ CFU) and Example 2 (1×10 ⁷ CFU) is a graph showing the Mycobacterium tuberculosis CFU measured in lung tissue after inoculation twice at intervals of 2 weeks.

도 1에 나타난 바와 같이,As shown in Figure 1,

본 발명에 따른 live 마이코박테리움 안얀젠스 KCTC29443(실시예 1) 접종군은 heat-killed 마이코박테리움 안얀젠스 KCTC29443(실시예 2) 접종군 및 PBS 대조군에 비해 유의한 결핵균 억제능을 보이는 것으로 나타났다.It was found that the live Mycobacterium Anyanzens KCTC29443 (Example 1) inoculation group according to the present invention showed a significant M. tuberculosis inhibitory ability compared to the heat-killed Mycobacterium Anyanzens KCTC29443 (Example 2) inoculation group and the PBS control group. .

<실험예 2> 결핵 백신면역 관련 IFN-γ 발현량 평가<Experimental Example 2> Tuberculosis vaccine immunity-related IFN-γ expression level evaluation

상기 <실험예 1>과 동일한 과정을 통해 백신접종을 실시한 후, 마우스 내 결핵 백신면역 관련 Th1 사이토카인인 IFN-γ 발현량을 평가하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다.After vaccination was performed through the same procedure as in <Experimental Example 1>, the expression level of IFN-γ, a Th1 cytokine related to tuberculosis vaccine immunity in mice, was evaluated. The results are shown in FIG. 2.

도 2는 결핵 백신면역 관련 Th1 사이토카인인 IFN-γ 발현량을 비교 평가한 결과를 나타내는 그래프이다. 음성 대조군으로 세포 배양액 (DMEM)만을 처리한 Media only 그룹, 양성 대조군 ConA (concavalin A, 5 ug/ml), 결핵균 항원 PPD (purified protein derivatives, 5 ug/ml)는 결핵균에 재감염되는 경우 결핵에 대한 특이 반응을 측정하기 위한 항원으로 처리하였다.2 is a graph showing the results of comparative evaluation of the expression level of IFN-γ, a Th1 cytokine related to tuberculosis vaccine immunity. Media only group treated with cell culture medium (DMEM) only as negative control, positive control ConA (concavalin A, 5 ug/ml), and Mycobacterium tuberculosis antigen PPD (purified protein derivatives, 5 ug/ml) were It was treated with an antigen to measure a specific response.

도 2에 나타난 바와 같이,As shown in Figure 2,

본 발명에 따른 live 마이코박테리움 안얀젠스 KCTC29443(실시예 1), heat-killed 마이코박테리움 안얀젠스 KCTC29443(실시예 2) 접종 군은, 현재 결핵 백신으로 사용되고 있는 M. bovis BCG(비교예 1) 접종 군과 비교하여, 결핵 백신면역 관련 Th1 사이토카인인 IFN-γ 발현량이 상대적으로 증가하는 것으로 나타났다.Live Mycobacterium Anyanzens KCTC29443 (Example 1), heat-killed Mycobacterium Anyanzens KCTC29443 (Example 2) inoculation groups according to the present invention were M. bovis BCG (Comparative Example), which is currently used as a tuberculosis vaccine (Comparative Example) 1) Compared with the vaccinated group, the expression level of IFN-γ, a Th1 cytokine related to tuberculosis vaccine immunity, was relatively increased.

<실험예 3> Healthy area/Whole area 과 Granuloma caseous scoring 결과 비교<Experimental Example 3> Comparison of Healthy area/Whole area and Granuloma caseous scoring results

도 3은 C57BL/6 마우스를 100-200CFU가 되도록 공기감염을 이용해 결핵균을 감염시킨 후, PBS, 비교예 1(1×10⁶ CFU), 실시예 1(1×10⁶ CFU) 및 실시예 2(1×10⁷ CFU) 에서 준비한 균주를 2주 간격으로 2번 접종하고, 9주차에 Healthy area/Whole area(좌측 그래프)와 Granuloma caseous scoring(우측 그래프)를 나타낸 그래프이다.3 is a C57BL/6 mouse after infecting Mycobacterium tuberculosis using air infection to a concentration of 100-200 ^{CFU, PBS, Comparative Example 1 (1 × 10 6} CFU), Example 1 (1 × 10 ⁶ CFU) and Example 2 This is a graph showing the healthy area/Whole area (left graph) and Granuloma caseous scoring (right graph) at 9 weeks after the strain prepared in (1×10 ^{7 CFU) was inoculated twice at intervals of 2 weeks.}

Healthy area/Whole area는 결핵에 감염된 마우스 폐조직의 헤마톡실린과 에오신 (H&E)으로 염색된 슬라이드에서 육아종성 염증이 차지하는 비율을 제외한 비율을 비교한 결과로, 값이 클수록 면역억제가 더 높게 나타나는 것을 나타낸다. Granuloma caseous scoring은 육아종성 염증의 경우 건락괴사 (caseous necrosis)를 동반한 육아종의 경우 5점, 건락괴사 없이 육아종이 형성된 경우는 2.5점, 육아종성 염증이 나타나지 않은 경우 0점으로 각각 점수화한 것으로, 점수가 높을수록 염증의 정도와 범위가 높은 것을 의미한다. Healthy area/Whole area is the result of comparing the ratio of the slides stained with hematoxylin and eosin (H&E) in the lung tissue of the mouse infected with tuberculosis, excluding the proportion of granulomatous inflammation.The higher the value, the higher the immunosuppression. Indicates that. Granuloma caseous scoring scored 5 points for granuloma with caseous necrosis, 2.5 points for granuloma without caseous necrosis, and 0 points for granulomatous inflammation. The higher the score, the higher the degree and extent of inflammation.

그 결과, PBS 대조군에 비해 실시예1과 실시예2의 Healthy area/Whole area 수치가 높게 나타나고, Granuloma caseous scoring은 낮은 수치를 나타내어 유의하게 염증반응이 감소함을 확인하였다.As a result, it was confirmed that the healthy area/whole area values of Examples 1 and 2 were higher than that of the PBS control group, and the granuloma caseous scoring showed a lower value, so that the inflammatory response was significantly reduced.

<실험예 4> 폐조직의 H&E 분석을 통한 조직병리학적 분석<Experimental Example 4> Histopathological analysis through H&E analysis of lung tissue

도 4는 마우스에 결핵균을 호흡기로 감염 시키고 9주 후, 폐 조직을 H&E로 염색하여 조직병리학적으로 분석한 결과를 나타낸 도이다.Figure 4 is a diagram showing the results of histopathological analysis by staining lung tissue with H&E after 9 weeks of infecting mice with Mycobacterium tuberculosis by respiratory tract.

마우스 폐조직을 4% 파라포름알데하이드 용액(paraformaldehyde solution)에 넣어 H&E 분석업체인 한국실험병리에 의뢰하였다. 마우스 폐조직을 슬라이드로 제작하여 H&E 염색을 실시하고, Light microscope Olympus PROVIS AX70 (Tokyo, Japan) 현미경으로 관찰하여 사진을 찍어 NIS-Elements BR 4.50.00 software를 이용하여 분석하였다. 대식세포(Macrophage) 및 이의 변형된 형태인 유상피세포(epithelioid cells), 림프구(lymphocytes)의 응집으로 형성된 육아종(granuloma), 호중구(neutrophils)의 유입 등을 관찰하고, 육아종의 중앙에 건락괴사(caseous necrosis)가 형성되었는지 관찰하여 수치화하여 비교하였다. Mouse lung tissue was put in a 4% paraformaldehyde solution and requested to H&E analysis company, Korea Laboratory Pathology. Mouse lung tissue was prepared as a slide, subjected to H&E staining, observed with a light microscope Olympus PROVIS AX70 (Tokyo, Japan), and photographed, and analyzed using NIS-Elements BR 4.50.00 software. Macrophage and its modified form, epithelioid cells, granuloma formed by aggregation of lymphocytes, and influx of neutrophils were observed, and case necrosis in the center of the granuloma ( caseous necrosis) was observed and quantified and compared.

그 결과, 결핵감염이 없는 대조군에서는 육아종 형성이 관찰되지 않았고, PBS 그룹에서는 건락괴사(caseous necrosis)가 많이 나타나는 육아종 형성을 나타낸 반면, BCG 및 백신후보주 접종 그룹에서는 건락괴사(caseous necrosis)가 없거나 적은 육아종 형성을 나타내었다.As a result, granuloma formation was not observed in the control group without tuberculosis infection, and granulomatous formation was observed in the PBS group, whereas caseous necrosis was observed in the BCG and vaccine candidate vaccinated groups. There was less granuloma formation.

<실험예 5> 마이코박테리움 안얀젠스의 성장 속도 측정<Experimental Example 5> Measurement of the growth rate of Mycobacterium Anyanzens

도 5는 배양배지내 혈청성분의 유무에 따른 성장속도 측정 결과를 나타내었다. 혈청성분이 포함된 Middlebrook 7H9 broth (7H9 broth), 혈청성분이 포함되지 않은 LB broth, Sauton's broth, M9 broth에서 20일 동안 배양하며 배양액의 흡광도를 측정하였다. 신속 성장 결핵균인 Mycobacterium smegmatis (M. smegmatis)와 마이코박테리움 안얀젠스 KCTC29443은 혈청성분의 유무와 관계없이 유사한 신속성장 속도를 나타내었으며, 반면 대조균주인 M. bovis BCG는 혈청성분의 유무와 관련없이 지연된 성장 곡선을 나타내었다.5 shows the results of measuring the growth rate according to the presence or absence of serum components in the culture medium. The absorbance of the culture medium was measured by incubating for 20 days in Middlebrook 7H9 broth (7H9 broth) containing serum components, LB broth without serum components, Sauton's broth, and M9 broth. Rapid-growing Mycobacterium smegmatis ( M. smegmatis ) and Mycobacterium Anyanzens KCTC29443 showed similar rapid growth rates regardless of the presence or absence of serum components, whereas M. bovis BCG, the control strain, was related to the presence or absence of serum components. Delayed growth curve was shown without.

<실험예 6> 마이코박테리움 안얀젠스의 누드마우스를 이용한 안전성 평가<Experimental Example 6> Safety evaluation using a nude mouse of Mycobacterium Anyanzens

도 6은 면역이 약화된 누드 마우스에 M. bovis BCG와 마이코박테리움 안얀젠스 KCTC29443을 각각 정맥주사로 감염(1×10⁶ CFU/mouse)시킨 후 1일, 14일, 28일 후 마우스 간, 폐, 비장 조직 내의 결핵균 CFU를 측정하여 안전성을 평가하였다. 모든 장기에서 마이코박테리움 안얀젠스 KCTC29443이 M. bovis BCG에 비해 상대적으로 적은 CFU 결과를 나타내었으며, 특히 폐조직에서 낮은 CFU를 보였고, BCG대조군보다 누드마우스에서의 안전성이 높음을 확인하였다.Figure 6 shows the liver of mice 1, 14, and 28 days after ^{infection (1×10 6} CFU/mouse) intravenously with M. bovis BCG and Mycobacterium Anyanzens KCTC29443, respectively, in nude mice with weakened immunity. , The safety was evaluated by measuring the Mycobacterium tuberculosis CFU in lung and spleen tissues. In all organs, Mycobacterium Anyanzens KCTC29443 showed relatively lower CFU results compared to M. bovis BCG, particularly low CFU in lung tissue, and it was confirmed that the safety in nude mice was higher than that in the BCG control group.

Claims

A vaccine composition for treating tuberculosis comprising a strain of Mycobacterium anyangense.

The method of claim 1,
The Mycobacterium anyangense (Mycobacterium anyangense) strain is deposited as KCTC29443, a vaccine composition for the treatment of tuberculosis.

The method of claim 1,
The tuberculosis is tuberculosis caused by infection of the Korean-type highly pathogenic tuberculosis strain K (Mycobacterium tuberculosis K strain), a vaccine composition for treating tuberculosis.

The method of claim 1,
The tuberculosis is in the group consisting of ocular tuberculosis, cutaneous tuberculosis, kidney tuberculosis, epididymis tuberculosis, lymphatic tuberculosis, laryngeal tuberculosis, middle ear tuberculosis, intestinal tuberculosis, multidrug resistant tuberculosis, pulmonary tuberculosis, cholangiosclerosis, throat tuberculosis, pulmonary hemorrhage, breast tuberculosis, and spinal tuberculosis. Vaccine composition for the treatment of tuberculosis, characterized in that at least one selected.

Mycobacterium anyangense (Mycobacterium anyangense) a pharmaceutical composition for the treatment of tuberculosis comprising a strain.