KR102206231B1 - 인간 리보솜 단백질 s3의 dna 손상 복구 및 피부 손상 복구 효능을 가진 도메인의 펩타이드 서열을 포함하는 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 Leu-Gly-Ile-Lys-Val-Lys-Ile-Met의 서열을 가지는 펩타이드를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 펩타이드 조성물은 인간 리보솜 단백질 S3의 DNA 복구 도메인 서열을 함유하여, 피부 세포에 독성이 없으며, 자외선 등에 의한 DNA 손상의 복구 능력을 높이고, 피부 주름을 개선하며, 콜라겐의 생성을 증가시키고, 항염 또는 염증 매개 인자 발현 억제 효과 및 피부 세포 재생 효과를 나타내는 등 다양하고 우수한 효과를 나타낸다. 따라서, 본 발명의 펩타이드를 포함하는 조성물은 기능성 화장품 조성물로서 효과적으로 사용될 수 있다.

Description

인간 리보솜 단백질 S3의 DNA 손상 복구 및 피부 손상 복구 효능을 가진 도메인의 펩타이드 서열을 포함하는 조성물 {A composition comprising a peptide sequence of a domain having DNA damage repair and skin damage repair effect in human ribosomal protein S3}

본 발명은 인간 리보솜 단백질 S3의 DNA 손상 복구 및 피부 손상 복구 도메인의 펩타이드 서열을 포함하는 조성물에 관한 것이다.

인체의 피부 조직은 바깥쪽부터 표피, 진피, 피하지방의 층으로 나누어져 있으며, 인체를 외부로부터 보호해준다. 피부가 노화되는 원인으로는 내인성 노화와 외인성 노화가 있는데, 내인성 노화는 시간이 흐름에 따라 일어나는 노화 현상이며, 외인성 노화는 태양광의 자외선에 의해 피부가 손상을 입어 생기는 광노화와 활성산소에 의해 일어나는 노화가 존재한다. 자외선에 노출되어 피부에 손상이 일어나면 콜라겐을 분해하는 효소인 콜라게네이즈(collagenase)가 매우 증가하여 콜라겐이 분해되므로 주름이 더 많이 생성되게 된다. 또한 자외선에 노출되면 인체의 세포내의 DNA는 손상이 일어나게 되며, 손상이 일어난 DNA는 복구 기작을 통하여 손상을 복구하게 된다. 자외선에 의한 이러한 작용들은 피부 노화뿐만 아니라 질병의 원인이 된다.

이와 관련하여 많은 연구 개발들이 이루어지고 있는데, 이 중 피부 주름 개선 화장품은 매우 중요한 카테고리로 분류된다. 화장료 조성물과 관련하여 펩타이드를 포함하는 조성물에 대한 연구도 활발하게 진행되고 있으며, 피부상태 개선 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도에 관한 대한민국 등록특허 제10-1719355호, SV82 폴리펩타이드 및 이를 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 및 탄력 유지용 화장료 조성물에 관한 대한민국 등록특허 제10-16133021호, 페길화된 피부주름개선 기능성 펜타펩타이드 유도체에 관한 대한민국 등록특허 제10-1315056호 등 여러 선행기술들이 존재한다.

한편, 펩타이드를 포함하는 의약 조성물과 관련하여서는 항염증 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도에 관한 대한민국 등록특허 제10-1928075호, 퇴행성 디스크 치료 및 예방 등 여러 용도에서 사용이 가능한 펩타이드에 관한 대한민국 등록특허 제10-0983182호, 세포투과성을 갖는 R12-Grim19 융합 펩타이드 및 이를 유효성분으로 함유하는 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 대한민국 등록특허 제10-1948934호 등의 선행기술이 존재한다.

이와 같이, 펩타이드를 포함하는 조성물과 관련한 연구들이 활발하게 이루어지고 있지만, 피부 주름 형성의 개선뿐만 아니라 자외선에 의한 피부 질병 및 염증을 개선할 수 있는 우수하고 과학적인 펩타이드 조성물에 대한 요구는 여전히 높은 실정이다.

이에 본 발명자는 인간 리보솜 단백질 S3의 복구와 관련된 도메인 펩타이드에 대해 연구한 결과, 자외선에 의한 DNA 손상 복구, 주름 개선, 염증 방지, 세포 재생 등의 효과를 가지는 펩타이드를 밝혀내어, 이를 포함하는 우수한 노화 방지 및 피부 주름 개선 효과를 가진 조성물을 제공하는 것을 본 발명의 목적으로 한다.

상기 과제를 달성하기 위하여, 본 발명은 Leu-Gly-Ile-Lys-Val-Lys-Ile-Met의 서열을 가지는 펩타이드를 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

여기서, 상기 펩타이드는 인간 리보솜 단백질 S3의 182 내지 189번 아미노산으로부터 유래한 것일 수 이다.

상기 펩타이드는 DNA 손상 복구, 콜라겐 생성 증가, 염증 방지, 세포 재생, 피부 주름 개선 및 피부 노화 방지 중 하나 이상의 효과를 나타낼 수 있다.

상기 펩타이드는 MMP-1(matrix metalloproteinase-1)의 발현을 감소시킬 수 있다.

상기 펩타이드는 COL1A1 유전자 및 COL3A1 유전자 중 하나 이상의 발현을 증가시킬 수 있다.

상기 화장료 조성물에서 펩타이드는 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.5 내지 10 중량%로 포함될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 화장수, 에센스, 로션, 크림, 클렌징, 앰플, 팩, 젤, 연고, 파우더, 비누, 바디 제품, 오일, 립스틱, 파운데이션, 패치 또는 분무제의 제형일 수 있다.

본 발명의 펩타이드 화장료 또는 약학적 조성물은 인간 리보솜 단백질 S3의 DNA 복구 도메인 서열을 함유하여, 피부 세포에 독성이 없으며, 자외선 등에 의한 DNA 손상의 복구 능력을 높이고, 피부 주름을 개선하며, 콜라겐의 생성을 증가시키고, 항염 또는 염증 매개 인자 발현 억제 효과 및 피부 세포 재생 효과를 나타내는 등 다양하고 우수한 효과를 나타낸다. 따라서, 본 발명의 펩타이드를 포함하는 조성물은 기능성 화장품 또는 의약 분야에 있어서 효과적으로 사용될 수 있다.

도 1은 다양한 시료들을 사용하여 손상된 DNA가 복구되는 비율을 확인한 결과이다.
도 2는 보다 구체화된 시료들을 사용하여 손상된 DNA가 복구되는 비율을 확인한 결과이다.
도 3은 시료를 배양액에 혼합하여 24시간 동안 배양한 후의 CPDs 감소율을 나타낸 결과이다.
도 4는 시료에 따른 MMP-1(matrix metalloproteinase-1)의 발현율을 측정한 결과이다.
도 5는 시료에 따른 COL1A1 및 COL3A1 발현율 측정 결과를 나타낸 결과이다.
도 6은 시료에 따른 염증 매개 인자 발현율을 측정한 결과이다.
도 7은 시료에 따른 세포 재생율을 측정한 결과이다.

본 명세서에서 펩타이드는 달리 지시되지 않는 한 일반적으로 사용되는 3문자 또는 1문자 아미노산 코드를 사용한다. 예를 들어, 아미노산은 3문자 코드(예를 들어, Leu, Gly 등) 또는 1문자 코드(예를 들어, L, G 등)로 표시될 수 있다.

인간 리보솜 단백질 S3(human rpS3)은 사람의 세포에서 다양한 역할을 하는 것으로 알려져 있으며, 본 발명자는 연구를 통해 인간 리보솜 단백질 S3이 DNA 손상을 복구하는 기능을 가지고 있는 것을 확인하였다. 또한, 더 나아가 인간 리보솜 단백질 S3에서 DNA 손상 복구(DNA damage repair)를 담당하는 도메인은 아미노산(amino acid) 144번부터 189번 사이에 있다는 것을 밝혀냈으며, 특히, 아미노산 180번부터 189번 사이, 그 중에서도 182번부터 189번 아미노산에 DNA 손상 복구 도메인의 핵심 서열이 있는 것을 확인하였다.

이에, 본 발명은 DNA 손상 복구는 물론, 피부 주름 개선, 콜라겐 생성 증가, 염증 방지, 세포 재생 등의 효과도 가진 인간 리보솜 단백질 S3의 펩타이드 서열을 포함하는 화장료 조성물 또는 약학적 조성물을 제공하며, 보다 구체적으로는 Leu-Gly-Ile-Lys-Val-Lys-Ile-Met(LGIKVKIM)의 서열을 가지는 펩타이드를 포함하는 화장료 조성물 또는 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 상기 서열을 가지는 펩타이드는 하기 화학식 1로 나타낼 수 있다.

[화학식 1]

본 발명에서, 상기 펩타이드를 구성하는 각각의 아미노산 잔기는 천연 또는 비-천연 아미노산 잔기일 수 있으며, 본 발명에 따른 펩타이드는 예를 들어, 통상적으로 사용되는 고체상 펩타이드 합성법(Solid Phase Peptide Synthesis) 방법을 이용하여 C-terminal부터의 합성을 통해 제조하거나, 또는 생체 내의 단백질을 추출한 다음 단백질 분해효소로 처리하여 원하는 단편을 얻는 방법, 또는 유전자 재조합과 단백질 발현시스템을 이용하여 제조할 수 있다.

본 발명에서 상기 펩타이드는 MMP-1(matrix metalloproteinase-1)의 발현을 저해하는 능력을 가지며, COL1A1 유전자 및 COL3A1 유전자의 발현을 증가시키는 능력을 가진다.

본 발명에 따른 펩타이드를 포함하는 조성물은 상기 펩타이드를 유효성분으로 포함함으로써 다양한 효과를 나타내며, 특히 DNA 손상 복구, 콜라겐 생성 증가, 염증 방지, 세포 재생, 피부 주름 개선, 피부 노화 방지 등에 있어서 우수한 효과를 가진다. 특히, 콜라게네이즈 합성 억제 및 콜라겐 생성 증가 효과로 인해 피부 주름 개선 및 노화 방지에 있어 우수한 효과를 가진다.

본 발명에서 상기 펩타이드는 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.5 내지 10 중량%로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 0.5 내지 5 중량%, 보다 바람직하게는 0.5 내지 2 중량%로 포함될 수 있다. 함량이 0.5 중량% 미만일 경우에는 효과가 미미하며, 10 중량%을 초과하는 경우에는 사용량에 따른 경제성 저하, 또는 응집화(aggregation)의 문제점이 발생할 수 있다.

본 발명의 펩타이드를 포함하는 화장료는 이미 알려진 화장료 제조방법에 의해 제조할 수 있고, 일반적인 피부 화장료에 한정되지 않으며 의약부외품, 외용 의약품에도 적용할 수 있다. 본 발명에 따른 화장료 조성물은 화장품 업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 형태의 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 화장수, 에센스, 로션, 크림, 클렌징, 앰플, 팩, 젤, 연고, 파우더, 비누, 바디 제품, 오일, 립스틱, 파운데이션, 패치, 분무제 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 제형이 크림 또는 젤인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 분무제인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 하이드록사이드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아마이드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 분무제인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로 하이드로카본, 프로판/부탄 또는 다이메틸에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예를 들어, 물, 에탄올, 아이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸아세테이트, 벤질알코올, 벤질벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 아이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록사이드, 벤토나이트, 한천 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포석신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아마이드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세라이드, 지방산 다이에탄올아마이드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

상기한 각 제형에 있어서, 상기 기재한 성분들 이외의 기타 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적절하게 선정하여 배합할 수 있다.

또한, 본 발명은 Leu-Gly-Ile-Lys-Val-Lys-Ile-Met의 서열을 가지는 펩타이드를 포함하는 항염증 효과를 나타내는 약학적 조성물을 제공하며, 본 발명에서 사용되는 용어 '항염증'은 염증을 치료, 예방 또는 개선하는 것을 의미한다. 여기서, 상기 염증은 외부 감염원(박테리아, 곰팡이, 바이러스, 다양한 종류의 알레르기 유발 물질 등)에 의한 감염, 상처, 수술, 화상, 동상, 전기자극 또는 화학물질 등에 의하여 유발되는 질환을 말하며, 상기 질환으로는 피부염, 염증성 장 질환, 위궤양, 대장염, 방광염, 비염, 편도염 또는 천식 등이 있으나, 이에 특별히 제한되지는 않는다.

본 발명의 항염증 효과를 가진 펩타이드는 세포독성을 나타내지 않으며, 염증 매개 인자들인 TNF-α, IL-6, iNOS, GM-CSF 등의 발현을 억제할 수 있다. 따라서, 본 발명의 상기 펩타이드를 포함하는 약학적 조성물은 염증을 예방, 치료 또는 개선하기 위한 용도로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 본 발명의 펩타이드와 함께 항염증 효과를 갖는 추가적인 유효성분을 하나 이상 함유할 수 있다.

상기 항염증용 약학적 조성물에서 상기 펩타이드는 약학적 조성물 총 중량에 대하여 0.5 내지 10 중량%로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 0.5 내지 5 중량%, 보다 바람직하게는 0.5 내지 2 중량%로 포함될 수 있다. 상기 펩타이드의 함량이 0.5 중량% 미만일 경우 항염증 효과가 미미하고, 10 중량%를 초과하는 경우에는 사용량에 따른 경제성 저하 또는 제형상의 안정성이 확보되지 않는 등의 문제가 발생할 수 있다.

다만, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.

이하. 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니며, 본 발명은 후술하는 특허청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.

실시예 1: 펩타이드의 제조

본 발명의 펩타이드는 통상의 고체상 펩타이드 합성법을 이용하여 합성하였다.

발명의 펩타이드 합성을 위해 N-히드록시벤조트리아졸과 N,N'-디시클로헥실카보디이미드를 이용하여 합성을 시작하였으며, Fmoc으로 보호된 레진을 이용하여 정해진 순서에 따라 아미노산을 합성하였으며, 합성한 펩타이드 물질은 역상(reverse) HPLC를 이용하여 정제하고 동결건조기를 이용하여 건조하는 방법으로 순도 95% 이상의 펩타이드를 얻었다.

이 펩타이드의 정확한 성분확인을 위하여 Elemental Analyzer(EA1112, CE Instrument, Italy)로 원소분석을 한 결과, 펩타이드의 원소별 함유량이 아미노산 서열로부터 계산하여 얻은 원소별 함유량과 일치하므로 정확한 아미노산 서열을 가짐을 확인하였다.

실험예 1: 리보솜 단백질 S3의 DNA 손상 복구 도메인 서열을 지닌 펩타이드 의 확인

본 출원인은 오랜 연구를 통해 리보솜 단백질 S3에서 자외선 등에 의한 DNA의 손상을 복구하는 도메인은 아미노산(amino acid) 144번부터 189번 사이에 있다는 것을 밝혀내었으며, 지속적인 연구를 통해 아미노산 180번부터 189번(Gly-Val-Leu-Gly-Ile-Lys-Val-Lys-Ile-Met) 사이에 DNA 손상 복구 도메인의 핵심 서열이 있다는 것을 밝혀내었다. 이에 밝혀진 위 서열 부근에서 단백질의 2차 구조에 따라 6조각의 펩타이드를 나누었고 퓨린기가 제거된 손상 DNA를 이 펩타이드들과 반응시켜 손상된 DNA가 복구되는 비율을 확인하였다. 한편, 음성 대조군으로는 어떤 물질도 처리하지 않았고, 양성 대조군으로는 APE1 효소를 처리하였다. 적절한 반응 완충액과 30분간 반응시킨 후, 그 결과를 표 1 및 도 1에 나타내었다. 잘린 DNA는 하기 식에 의해 산출되었다.

잘린 DNA (%) = (잘린 DNA 양) / (퓨린기가 제거된 전체 DNA 양) X 100

시료	잘린 DNA (%)
No (음성 대조군)	1
APE1 (양성 대조군)	76.34
P1 (133-143)	4.95
P2 (144-153)	15.82
P3 (154-163)	3.03
P4 (164-170)	2.97
P5 (171-179)	9.31
P6 (180-189)	49.08

상기 표 1에서와 같이, 아미노산 180번 내지 189번 사이의 펩타이드인 P6번 서열에서 손상된 DNA를 복구하는 효과가 있음을 확인하였다. 이에 표 2 및 도 2에 나타난 바와 같이, 펩타이드 P6의 아미노산 길이를 보다 줄여 복구 효과를 확인하였다.

시료	잘린 DNA (%)
No (음성 대조군)	9.05
APE1 (양성 대조군)	96.13
P1	26.03
P2	49.64
P3	10.68
P4	13.63
P5	41.79
P6	79.73
A8 (182-189)	84.82
A7 (183-189)	45.04

상기 표 2에서와 같이, 8개의 아미노산 서열을 지닌 A8 펩타이드에서 양성 대조군 수준의 손상된 DNA를 복구하는 효과가 있음을 확인하였다.

실험예 2: 자외선에 의한 세포 내 DNA 손상 복구 효과

자외선에 의한 세포 내 DNA 손상에 대한 시료의 DNA 복구 효과를 확인하기 위하여 사람의 각질형성세포(keratinocyte)인 HaCaT 세포를 반지름 35mm의 세포배양 플레이트에 10⁵개씩 넣고 24시간 동안 배양하였다. 이후, 배양액을 제거한 후 이 각질형성세포에 자외선 B(UV-B) 램프(F15T8, 15W, Sankyo Denki, Japan)를 이용하여 자외선 15mJ/cm²을 조사한 후, 각각의 플레이트에 시료를 배양액에 혼합하여 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 DNA를 추출하여 점블럿 실험(dot blotting assay)를 통해 자외선에 의해 형성된 시클로부탄 피리미딘이량체(CPDs)의 감소량을 정량하였다. 점들의 양은 세포의 유전체DNA로 양을 보정하였으며, 24시간 후의 CPDs의 양을 비교하여 자외선 조사 직후의 CPDs 양을 100으로 고정하여 상대적인 값을 계산하여 얻을 수 있었고, 그 결과를 표 3 및 도 3에 나타내었다. 대조군으로는 리보솜 단백질 S3 유래 다른 위치의 펩타이드를 사용하였다.

CPDs 감소율 (%) = (24시간 때의 CPDs 양) / (0시간 때의 CPDs 양) X 100

그룹	처리농도(w/v%)	CPDs 감소율 (%)
미처리	0	1.3
펩타이드 대조군	1	1.1
A8	1	37.8
A8	0.5	29.6
A8	0.25	12.2

상기 표 3의 결과에서 보여지는 바와 같이, 시료를 처리한 군은 CPDs의 감소율이 증가하였으며 이는 처리 농도와 비례하였다.

따라서, 본 발명의 펩타이드는 자외선에 의한 세포 내 DNA 손상의 복구 효과가 우수하다는 것을 확인할 수 있다.

실험예 3: 콜라게네이즈 합성 억제 효과를 통한 피부 주름 개선 효과

사람 피부의 주성분인 콜라겐 단백질을 분해하여 피부의 노화를 촉진하는 것으로 알려진 효소인 콜라게네이즈의 합성 억제 효과를 측정하기 위하여 사람의 섬유아세포(fibroblast)인 CDK-986sk 세포를 이용하여 시료의 자외선에 의한 콜라게네이즈 합성의 억제능을 측정하였다. 섬유아세포를 반지름 35mm의 세포배양 플레이트에 10⁵개씩 넣고 24시간 동안 배양하였다. 이후, 배양액을 제거한 후 이 섬유아세포에 자외선 20mJ/cm²을 조사한 후, 각각의 플레이트에 1mM 농도로 시료를 배양액에 혼합하여 24시간 동안 배양하였으며, '대조군'으로는 리보솜 단백질 S3 유래 다른 위치의 펩타이드를 사용하였다. 배양된 세포의 RNA를 이용하여 qRT-PCR(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction)을 통해 대표적인 콜라게네이즈인 MMP-1(matrix metalloproteinase-1)의 발현율을 확인하였다. 각각의 발현양을 세포유지 유전자(housekeeping gene)로 보정한 후, 대조군과 실험군을 비교하였으며, MMP-1의 발현율은 아래의 식에 의해 산출하였고, 그 결과를 표 4 및 도 4에 나타내었다.

MMP-1 발현율 = (시료 MMP-1 발현 양) / (미처리 MMP-1 발현 양)

그룹	처리농도(w/v%)	콜라게네이즈 발현율
No	-	1.00
UV	-	14.66
UV + A8	1	5.28
UV + 대조군	1	15.03

상기 표 4에서 확인되는 바와 같이, 1mM로 펩타이드를 처리한 시료에서 자외선에 의한 MMP-1 콜라게네이즈 발현 증가의 감소 효과를 확인할 수 있었다.

실험예 4: 콜라겐 생성 증가 효과

사람 피부의 주름 형성을 줄여줄 수 있는 콜라겐의 생성 비교를 위하여 '음성 대조군'으로는 리보솜 단백질 S3 유래 다른 위치의 펩타이드를 사용하였으며, '양성 대조군'으로는 아데노신(Adenosine)을 사용하였다. 섬유아세포를 반지름 35mm의 세포배양 플레이트에 10⁵개씩 넣고 24시간 동안 배양하였다. 여기에 1mM의 시료를 포함한 배양액을 이용하여 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포의 RNA를 이용하여 qRT-PCR을 통해 콜라겐 유전자들의 발현을 확인하였다. 각각의 발현양을 세포유지 유전자(housekeeping gene)로 보정한 후, 대조군과 실험군을 비교하였으며, 콜라겐 유전자들의 발현율은 아래의 식에 의해 산출되었고, 그 결과를 표 5 및 도 5에 나타내었다.

콜라겐 유전자 발현율 (%) = (시료 콜라겐 유전자 발현 양) / (미처리 콜라겐 유전자 발현 양)

시험물질	처리농도(w/v%)	COL1A1 발현율
No	-	1
P3 (음성 대조군)	1	1.09
A8 (실험군)	1	1.69
Adenosine (양성 대조군)	1	1.30
시험물질	처리농도(w/v%)	COL3A1 발현율
No	-	1
P3 (음성 대조군)	1	1.00
A8 (실험군)	1	1.31
Adenosine (양성 대조군)	1	1.37

상기 표 5의 결과에서 보여지는 것과 같이, 본 발명에 따른 펩타이드는 대조군에 비해 콜라겐 생성능을 증가시킴을 확인하였다.

실험예 5: 염증 매개 인자 발현 억제효과

대식세포인 RAW264.7 세포를 반지름 35mm의 세포배양 플레이트에 분주한 뒤 24시간 동안 배양하였다. 12시간 동안 기아상태를 유지한 후, 시료와 LPS 100 ng/mL을 처리하고 6시간 동안 배양하였다. 배양된 세포의 RNA를 이용하여 qRT-PCR을 통해 염증 매개 인자들의 유전자 발현율을 확인하였다. 각각의 발현양을 세포유지 유전자(housekeeping gene)로 보정한 후, 대조군과 실험군을 비교하였으며, 콜라겐 유전자들의 발현율은 아래의 식에 의해 산출하였고, 그 결과를 표 6 및 도 6에 나타내었다.

염증 매개 인자 발현율 = (시료 염증 매개 인자 발현 양) / (미처리 유전자 발현 양)

유전자	그룹	처리농도(w/v%)	발현율
TNF-α	No	-	1.00
	LPS	-	2.19
	LPS+A8	0.5	1.29
IL-6	No	-	1.00
	LPS	-	20.39
	LPS+A8	0.5	10.34
iNOS	No	-	1.00
	LPS	-	1.44
	LPS+A8	0.5	0.90
GM-CSF	No	-	1.00
	LPS	-	10.29
	LPS+A8	0.5	4.07

상기 표 6과 같이 시료를 처리한 군에서 모든 염증 매개 인자들의 발현율이 억제되는 것을 확인할 수 있었다.

실험예 6: 피부세포의 재생 효과 확인

상기 펩타이드의 피부 재생 효과를 확인하기 위하여 상처 치료 실험(wound healing assay)을 수행하였다. 사람의 각질세포(keratinocyte)인 HaCaT 세포를 6웰 플레이트에 배양하였다. 플레이트에 가득 자란 세포에 스크래치를 내어 세포간의 거리를 준 뒤 시료를 처리하여 48시간 동안 배양하였다. 각각 24시간과 48시간에서 세포가 재생된 정도를 측정하여 하기 표 7 및 도 7에 그 결과를 나타내었다.

그룹	처리농도(w/v%)	세포 재생율 (%)
		24시간	48시간
No	-	28.87	75.22
A8	1	58.93	98.59
A8	5	61.65	100.00

상기 표 7의 결과에서 보여지는 바와 같이, 시료를 처리한 군은 세포 재생율이 48시간 동안 대조군에 비하여 증가함을 확인하였다. 이를 통해 본 발명의 펩타이드는 피부 세포 재생 효과가 우수함을 확인하였다.

<110> KIM, Joon <120> A composition comprising a peptide sequence of a domain having DNA damage repair and skin damage repair effect in human ribosomal protein S3 <130> DPPKP201900046 <140> 10-2019-0080035 <141> 2019-07-03 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> a peptide sequence of a domain having DNA damage repair and skin damage repair effect in human ribosomal protein S3 <400> 1 Leu Gly Ile Lys Val Lys Ile Met 1 5

Claims (7)

1. Leu-Gly-Ile-Lys-Val-Lys-Ile-Met의 서열을 가지는 펩타이드를 포함하는 화장료 조성물.
2. 제 1 항에 있어서,
   상기 펩타이드는 인간 리보솜 단백질 S3의 182 내지 189번 아미노산으로부터 유래한 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
3. 제 1 항에 있어서,
   상기 펩타이드는 DNA 손상 복구, 콜라겐 생성 증가, 염증 방지, 세포 재생, 피부 주름 개선 및 피부 노화 방지 중 하나 이상의 효과를 가지는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
4. 제 1 항에 있어서,
   상기 펩타이드는 MMP-1(matrix metalloproteinase-1)의 발현을 감소시키는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
5. 제 1 항에 있어서,
   상기 펩타이드는 COL1A1 유전자 및 COL3A1 유전자 중 하나 이상의 발현을 증가시키는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
6. 제 1 항에 있어서,
   상기 펩타이드는 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.5 내지 10 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
7. 제 1 항에 있어서,
   화장수, 에센스, 로션, 크림, 클렌징, 앰플, 팩, 젤, 연고, 파우더, 비누, 바디 제품, 오일, 립스틱, 파운데이션, 패치 또는 분무제의 제형인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.

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