KR101608687B1

KR101608687B1 - 사이클릭 리포펩티드를 함유하는 항산화 및 항노화용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101608687B1
Application number: KR1020090070527A
Authority: KR
Inventors: 김동현; 박준성; 장희경; 문은정; 유선혜; 김덕희; 김한곤
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2009-07-31
Filing date: 2009-07-31
Publication date: 2016-04-05
Also published as: KR20110012699A

Abstract

본 발명은 사이클릭 리포펩티드(Cyclic lipopeptide)를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 바실러스 속 (Bacillus sp.)에서 추출하여 얻은 사이클릭 리포펩티드인 이투린 A(Iturin A)와 서팩틴(Surfactin)을 함유함으로써 항산화 및 항노화 효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.

사이클릭 리포펩티드(Cycliclipo peptide), 이투린 A(Iturin A), 서팩틴(Surfactin), 항산화, 항노화

Description

사이클릭 리포펩티드를 함유하는 항산화 및 항노화용 화장료 조성물{Cosmetic composition containing cyclic lipopeptide for antioxidant and antiaging}

본 발명은 사이클릭 리포펩티드를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 바실러스 속(Bacillus sp.)에서 추출하여 얻은 사이클릭 리포펩티드(Cyclicl ipopeptide)인 이투린 A(Iturin A)와 서팩틴(Surfactin)을 함유함으로써 항산화 및 항노화 효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.

인간의 피부는 나이가 들어감에 따라 여러 가지 내적, 외적 요인에 의해 변화를 겪는다. 즉, 내적으로는 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고, 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 면역 단백질 및 생체 구성 단백질들의 생합성이 줄어들게 되며, 외적으로는 오존층 파괴로 인하여 태양 광선 중 지표에 도달하는 자외선의 함량이 증가하게 되고 환경 오염이 더욱 심화됨에 따라 자유 라디칼 및 활성 유해 산소 등이 증가함으로써, 피부의 두께가 감소하고, 주름이 증가되며, 탄력이 감소될 뿐 아니라 피부 혈색도 칙칙하게 안좋게 되고, 피부트러블이 자주 발생하며, 기미와 주근깨 및 검버섯 또한 증가하는 등 여러 가지 변화를 일으키게 된다.

노화가 진행될수록 피부를 구성하는 물질인 콜라겐, 엘라스틴, 히알루론산, 및 당단백질의 함유량 및 배열이 변하거나 감소하는 증상들이 나타나게 되고, 자유 라디칼 및 활성 유해 산소에 의한 산화적 스트레스를 받게 된다. 또한 노화가 진행되거나 자외선에 의해서, 피부를 구성하는 대부분의 세포에서는, 염증을 일으킨다고 알려져 있는 전염증성 사이토카인(proinflammatory cytokine)을 생성하는 효소인 사이클로옥시게나제-2(Cox-2, cyclooxygenase)의 생합성이 증가하고, 이들 염증성 인자에 의해 피부조직을 분해하는 효소인 매트릭스 메탈로프로테아제(MMP, Matrix metalloproteinase)의 생합성이 증가하며, iNOS(inducible nitric oxide synthase)에 의한 NO(nitric oxide)생성이 증가하는 것으로 알려져 있다. 즉 자연적으로 진행되는 내인성 노화에 따른 세포 활성의 감소 및 미세염증에 의해 기질물질의 생합성이 감소되고, 여러 가지 유해 환경에 의한 스트레스의 증가 및 태양 광선에 의한 활성 산소 종의 증가와 같은 외적 요인에 의해 분해 및 변성이 가속화되어 피부기질이 파괴되고 얇아지면서 피부 노화의 제반 증상들이 나타나게 된다. 따라서, 이러한 노화의 현상들을 방지하고, 개선시킬 수 있는 활성성분에 대하여 많은 연구가 행해지고 있는 것이 현실이다.

이에 본 발명자들은 바실러스 속(Bacillu sp.)에서 추출한 사이클릭 리포펩티드인 이투린 A, 서팩틴의 피부 관련 효능을 연구하던 중 이들 사이클로 리포펩티드가 피부 항산화, 항노화 효과가 우수한 것을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서 본 발명은 바실러스 속(Bacillus sp.)에서 추출하여 얻은 사이클릭 리포펩티드를 함유함으로써 항산화 및 항노화 효과를 갖는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 이투린 A 및 서팩틴 중에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 의한 화장료 조성물은 바실러스 속(Bacillus sp.)에서 추출하여 얻은 사이클릭 리포펩티드인 이투린 A와 서팩틴을 함유함으로써 항산화 효능 및 MMP-1 발현 억제 효과를 나타내며, 이 두 가지 활성의 복합 상승 작용으로 우수한 피부 주름 개선 효과를 제공할 수 있다.

본 발명이 제공하는 화장료 조성물은 사이클릭 리포펩티드인 이투린 A 및 서팩틴 중 1종 이상을 유효성분으로 함유한다. 상기 유효성분은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~30중량%의 양으로 함유된다. 함량이 0.0001중량% 미만이면 상기 성분의 사용에 따른 항산화 및 항노화 효과 등을 얻을 수 없고, 함량이 30중량% 초과이면 함량 증가에 비해 효과의 증가가 크지 않기 때문이다.

본 발명에서 사용되는 이투린 A는 이투린계 항생 물질군에 속해 있으며 보통 이투린계 항생물질은 바실러스 속(Bacillus sp.)으로부터 생산되는 항진균성 항생물질로서 7개의 α-아미노산과 1개의 β-아미노산이 결합한 환상의 구조를 가진다. 또 β-아미노산은 메틸렌의 수에 따라 탄소수를 달리하여 동일한 항생물질이라도 여러 분자량을 가지는데 이 때 탄소수가 증가할수록 항진균 활성이 증가된다는 보고가 있다. 그 중 이투린 A는 7개의 아미노산(3개의 Asn, 각 1개의 Gln, Pro, Ser, Tyr)과 다양한 개수의 특징적인 소수성 지방산 사슬(Ser-β-아미노산)을 가지고 있으며 소수성 지방산 사슬의 개수에 따라 분자량이 1,043 ~ 1,085의 범위에서 다양하게 존재한다.

본 발명에서 사용되는 서팩틴 또한 강력한 계면활성을 능력을 가지고 있으며 일반적으로 항생물질로 사용이 된다. 그 구조는 일반적으로 7개의 아미노산(L-아스파라진, L-류신, 글리신, L-류신, L-발린 및 2개의 D-류신)과 소수성 지방산 사슬을 13개~15개 가지고 있다.

본원발명의 상기 이투린 A 및 서팩틴을 함유한 화장료 조성물은 항산화 효능 및 MMP-1 발현 억제 효과가 있으며, 상기 두 가지 활성의 복합 상승 작용으로 우수한 피부 주름 개선 효과를 기대할 수 있다.

본 발명에서 사용되는 이투린 A 및 서팩틴은 그 사용에 있어서 특별히 제한되지 않으며, 예를 들면, 화장료 조성물 이외에도 건강 식품의 첨가물 및 약제 조성물 등에 사용될 수 있다.

이하, 실시예 및 시험예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명이 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.

[시험예 1] 항산화 효과 시험(DCF-da)

HaCaT 세포를 96-공 평판에 1.5 X 10⁴ 세포/공(well)로 넣고, 24시간 후 이투린 A(YM 케미컬(YM Chemical) 제품), 서팩틴(YM 케미컬(YM Chemical) 제품) 각각을 50ppm 씩 DMEM 배지에 녹여 처리하였다. 이 때 비타민 C를 100μM 또는 200μM 처리한 것을 양성 대조군으로 사용하였고, 아무것도 처리하지 않은 것을 음성 대조군으로 사용하였다. 이 때 처리시간은 3시간 정도로 하며 이후 HBSS로 세척하였다. 그 후, DCF 50μM(in HBSS)을 세포에 처리하고, 37℃에서 빛을 차단한 상태로 20분 반응시켰다. HBSS로 2회 세척하고 HBSS를 100μL 넣은 상태에서 형광(485nm/535nm, 0.1s)을 측정하였다. 그 후 상기 샘플들에 UVB를 30mJ로 80초간 처리하고 2시간 후 다시 측정하여 초기값과 비교하였다. 상기의 실험 결과는 도 1에 나타내었다.

도 1의 결과를 보면, 이투린 A 또는 서팩틴을 처리하였을 때 UV를 처리한 후의 형광값의 비율이 공지된 항산화제인 비타민 C와 유사한 정도로 나타난 것을 확인할 수 있다.

따라서, 이투린 A 및 서팩틴은 우수한 항산화 효과를 제공할 수 있음을 알 수 있다.

[시험예 2] 콜라게나제 발현 억제 효능 측정

이투린 A와 서팩틴의 콜라게나제 발현 억제능을 레티노산(Retinoic acid)과 비교하여 측정하였다. 콜라게나제의 발현 정도가 낮을수록 콜라게나제의 발현 억제능이 높고, 피부내의 콜라겐의 분해가 적게 일어나며, 따라서 생성되는 주름의 양이 적어진다. 또한 레티노산은 항산화 물질로서 피부의 표피 세포를 재생시켜 피부의 노화를 방지하는 기능이 있는 것으로 알려진 물질이다.

시험은 2.5%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Media) 배지가 들어 있는 96공 평판배양기(96-well microtiter plate)에 인간의 섬유아세포를 5,000 세포/공(well)이 되도록 넣고, 90% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그 후 무혈청 DMEM 배지에서 24시간 배양한 다음, 무혈청 DMEM 배지에 녹여진 상기 이투린 A(YM 케미컬(YM Chemical) 제품)와 서팩틴(YM 케미컬(YM Chemical) 제품)은 1ppm 수준의 농도로 처리하고 레티노산은 10μM 농도로 24시간 동안 처리한 후, 세포배양액을 채취하였다.

채취한 세포배양액을 상업적으로 이용 가능한 콜라게나제 측정기구(미국 아 머샴파마샤 사)를 이용하여 콜라게나제 생성 정도를 측정하였다. 먼저 1차 콜라게나제 항체가 균일하게 도포된 96-공 평판(96-well plate)에 채취된 세포 배양액을 넣고 3시간 동안 항원-항체 반응을 항온조에서 실시하였다.

3시간 후 발색단이 결합된 2차 콜라겐 항체를 96-공 평판(96-well plate)에 넣고 다시 15분간 반응시켰다. 15분 후 발색유발물질을 넣어 실온에서 15분간 발색을 유발시키고, 다시 1M 황산을 넣어 반응(발색)을 중지시키면 반응액의 색깔은 노란색을 띄며 반응 진행의 정도에 따라 노란색의 정도가 다르게 나타났다.

노란색을 띠는 96-공 평판(96-well plate)의 흡광도를 흡광계를 이용하여 405nm에서 측정하였고, 하기 수학식 1에 의해 콜라게나제의 합성정도를 계산하였다. 이때 조성물을 처리하지 않은 군에서 채취된 세포 배양액의 반응 흡광도를 대조군으로 하였다. 즉, 비처리군에서의 콜라게나제의 발현정도를 100으로 하고, 이에 대비하여 조성물을 처리한 군에서의 콜라게나제의 발현정도를 구하였으며, 결과는 표 1과 도 2에 나타내었다.

물질	콜라게나제 발현 정도(%)
UVB 무처리군	100
UVB 40mJ 조사	152
레티노산	83
이투린 A	89
서팩틴	120

상기 표 1에서 보면, 본 발명에 의한 이투린 A와 서팩틴은 시험관내(in vitro)에서 음성 대조군인UVB 조사군 샘플에 비해 콜라게나제의 발현을 상당히 억제한다는 것을 확인할 수 있으며 이투린 A의 경우는 양성 대조군인 레티노산과 유사한 수준의 높은 MMP-1 발현 억제 효능을 보여줌을 확인할 수 있다.

본 발명의 이투린 A 또는 서팩틴을 함유하는 조성물의 제형예를 하기에서 설명하지만, 본 발명의 화장료 조성물이 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.

[제형예 1] 영양화장수

이투린 A 또는 서팩틴을 함유하는 영양 화장수를 하기 표 2에 기재된 조성으로 제조하였다.

성분	함량 (중량%)
이투린 A 및 서팩틴 중 1종 이상	5.0
스쿠알란	5.0
밀납	4.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	1.5
유동파라핀	0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.0
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
카르복시비닐폴리머	0.1
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량
합계	100

[제형예 2] 유연화장수

이투린 A 또는 서팩틴을 함유하는 유연 화장수를 하기 표 3에 기재된 조성으로 제조하였다.

성분	함량 (중량%)
이투린 A 및 서팩틴 중 1종 이상	5.0
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	2.0
프로필렌글리콜	2.0
카르복시비닐폴리머	0.1
PEG 12 노닐페닐에테르	0.2
폴리솔베이트 80	0.4
에탄올	10.0
트리에탄올아민	0.1
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량
합계	100

[제형예 3] 영양크림

이투린 A 또는 서팩틴을 함유하는 영양크림을 하기 표 4에 기재된 조성으로 제조하였다.

성분	함량 (중량%)
이투린 A 및 서팩틴 중 1종 이상	5.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	0.5
PEG60 경화피마자유	2.0
유동파라핀	10.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프락트리글리세라이드	5.0
글리세린	5.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량
합계	100

[제형예 4] 마사지크림

이투린 A 또는 서팩틴을 함유하는 마사지크림을 하기 표 5에 기재된 조성으로 제조하였다.

성분	함량 (중량%)
이투린 A 및 서팩틴 중 1종 이상	5.0
밀납	10.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	0.8
PEG60 경화피마자유	2.0
유동파라핀	40.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프락트리글리세라이드	4.0
글리세린	5.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량
합계	100

[제형예 5] 팩

이투린 A 또는 서팩틴을 함유하는 팩을 하기 표 6에 기재된 조성으로 제조하였다.

성분	함량 (중량%)
이투린 A 및 서팩틴 중 1종 이상	5.0
폴리비닐알콜	13.0
소듐카르복시메틸셀룰로오스	0.2
글리세린	5.0
알란토인	0.1
에탄올	6.0
PEG 12 노닐페닐에테르	0.3
폴리솔베이트 60	0.3
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량
합계	100

도 1은 HaCaT 세포에 이투린 A, 서팩틴 및 비타민 C를 처리한 경우에 있어서의 DCF da 실험 결과를 나타낸 것이다.

도 2는 이투린 A와 서팩틴의 콜라게나제 발현 억제능을 레티노산과 비교하여 측정한 결과를 나타낸 것이다.

Claims

이투린 A 및 서팩틴 중에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 함유하는 피부 노화 억제용 화장료 조성물.
제 1항 있어서, 상기 유효성분은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~30중량%의 양으로 함유되는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 1항 있어서, 상기 조성물은 UV에 의한 피부 노화 또는 손상을 개선함을 특징으로 하는 화장료 조성물.
이투린 A 및 서팩틴 중에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.