KR102186526B1 - Manufacturing method of feed additive for potentiating immune response using slaughter blood, feed additive for livestock manufactured therefrom, and feed comprising the same - Google Patents

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Abstract

본 발명은 가축의 혈액으로부터 분리한 혈장을 한외여과 공정을 통하여 처리하여 면역 증강 단백질을 효과적으로 분리, 농축함으로써 면역 활성 기능이 증강된 사료첨가제를 대량 생산할 수 있는 방법과 이에 따라 제조된 사료첨가제 및 이를 포함하는 가축용 사료에 관한 것이다. 이를 위해 본 발명은 도축 혈액을 이용하여 면역 증강용 사료첨가제를 제조하는 방법으로서, 돼지의 도축 혈액을 수거하여 항응고제를 첨가한 후 혼합하는 단계(S1); 상기 도축 혈액을 원심분리하여 혈장을 수득하는 단계(S2); 상기 혈장을 한외여과하여 분자량 200 킬로달톤(kDa)을 초과하는 물질을 제거한 여액을 수득하는 1차 여과단계(S3); 상기 여액을 한외여과하여 분자량 100 킬로달톤(kDa) 초과~200 킬로달톤(kDa) 이하의 제1 분획물과, 분자량 100 킬로달톤(kDa) 이하의 제2 분획물로 분리하여 각각 수득하는 2차 여과단계(S4); 및 상기 제1 및 제2 분획물로부터 각각 고형분을 분리하여 수득하는 단계(S5);를 포함하는 것을 특징으로 하는 도축 혈액을 이용한 면역 증강용 사료첨가제의 제조방법과, 상기 방법으로 제조된 사료첨가제 및 이를 포함하는 가축용 사료를 제공한다. 이에 따라 본 발명은 도축 혈액 폐기에 따른 비용 절감과 환경오염 방지 및 사료용 항생제의 비용을 절감하고 항생제 남용을 예방하며, 새로운 단백질 사료 자원으로서 가축의 생산성 증대와 축산물의 품질 향상에도 기여할 수 있다.The present invention is a method for mass-producing feed additives with enhanced immune activity by effectively separating and concentrating immune enhancing proteins by treating plasma separated from livestock blood through an ultrafiltration process, and feed additives prepared accordingly and It relates to feed for livestock containing. To this end, the present invention is a method of preparing a feed additive for enhancing immunity using slaughter blood, comprising the steps of collecting the slaughter blood of pigs, adding an anticoagulant, and mixing (S1); Centrifuging the slaughtered blood to obtain plasma (S2); A first filtration step (S3) of ultrafiltration of the plasma to obtain a filtrate from which a material having a molecular weight exceeding 200 kilodaltons (kDa) is removed; Secondary filtration step obtained by ultrafiltration of the filtrate to separate a first fraction having a molecular weight of more than 100 kilodaltons (kDa) to 200 kilodaltons (kDa) or less and a second fraction having a molecular weight of 100 kilodaltons (kDa) or less (S4); And a step (S5) of separating and obtaining solids from the first and second fractions, respectively; and a method for preparing a feed additive for enhancing immunity using slaughtered blood, and a feed additive prepared by the method. Provide feed for livestock containing this. Accordingly, the present invention can reduce the cost of slaughter blood disposal, prevent environmental pollution, reduce the cost of feed antibiotics, prevent antibiotic abuse, and contribute to increase the productivity of livestock as a new protein feed resource and improve the quality of livestock products.

Description

도축 혈액을 이용한 면역 증강용 사료첨가제의 제조방법, 이에 따라 제조된 사료 첨가제 및 이를 포함하는 가축용 사료{MANUFACTURING METHOD OF FEED ADDITIVE FOR POTENTIATING IMMUNE RESPONSE USING SLAUGHTER BLOOD, FEED ADDITIVE FOR LIVESTOCK MANUFACTURED THEREFROM, AND FEED COMPRISING THE SAME}Manufacturing method of feed additives for enhancing immunity using slaughter blood, feed additives prepared accordingly, and feed for livestock containing the same. THE SAME}

본 발명은 돼지의 도축 혈액으로부터 분리한 혈장을 한외여과 공정을 통하여 처리하여 면역 증강 단백질을 효과적으로 분리, 농축함으로써 면역 활성 기능이 증강된 사료첨가제를 대량 생산할 수 있는 방법과 이에 따라 제조된 사료첨가제 및 이를 포함하는 가축용 사료에 관한 것이다.The present invention is a method for mass-producing feed additives with enhanced immune activation function by effectively separating and concentrating immune enhancing proteins by treating plasma separated from pig slaughter blood through an ultrafiltration process, and feed additives prepared accordingly, and It relates to feed for livestock containing this.

동물성 사료는 식물성 사료와 달리 단백질 공급 능력이 높고 영양적인 측면에서도 아미노산 조성이 우수하여 고급 단백질 식품을 생산하는데 효율적인 사료 자원이다.Animal feed, unlike vegetable feed, has high protein supply ability and excellent amino acid composition in terms of nutrition, making it an efficient feed resource for producing high-quality protein food.

현재 국내에서 생산 공급되고 있는 동물성 사료는 어분을 대표로하여 육골분, 수지박, 우모분, 가금 도축부산물(계육분), 혈분, 단세포 단백질 등이 있으나, 최근 배합 사료의 원료 공급 능력 감소로 동물성 단백질 사료 국내 생산량과 사용량이 감소하고 있다.Animal feeds currently produced and supplied in Korea include meat and bone meal, resin meal, feather meal, poultry slaughter by-products (chicken meal), blood meal, and single cell protein, as representative fish meal. Domestic production and consumption of feed are decreasing.

여기에 광우병 발생으로 동물성 단백질 사료의 동물 질병에 대한 부정적 시각이 확대되면서 유럽에서는 반추동물뿐만 아니라 비반추 동물에게까지 영향을 미치고 있어 동물성 단백질 사료의 자원적 가치가 심각하게 위협을 받고 있다.In addition, as the outbreak of mad cow disease expands negative views on animal diseases of animal protein feed, it is affecting not only ruminants but also non-ruminants in Europe, and the resource value of animal protein feed is seriously threatened.

다행히 우리나라에서 광우병이 발생되지 않아 비반추 동물성 사료를 급여하는데 대한 영향은 아직 크게 미치지 않고 있지만 축산물 소비자들의 입장에서는 경계심을 늦추지 않고 있어 단백질 자원의 확보는 더욱더 어려워지고 있다.Fortunately, because mad cow disease has not occurred in Korea, the impact on feeding non-ruminant animal feed has not yet been greatly affected, but as livestock consumers are not slowing down, it is becoming more difficult to secure protein resources.

더욱이 유럽을 중심으로 식물성 단백질 자원의 수요가 급증하면서 이마저 가격이 폭등하고 있어 새로운 단백질 사료 자원 개발에 대한 요구가 계속 높아지고 있다.Moreover, as the demand for vegetable protein resources is increasing rapidly, mainly in Europe, the price is also skyrocketing, and the demand for the development of new protein feed resources continues to increase.

일반적으로 영양상태가 불량한 가축들은 저항력이 저하되어 질병에 잘 걸리고 사망률이 높으며 영양상태가 양호한 가축은 병균에 대한 저항력이 강하다는 것은 오래전부터 알려져 온 사실이다.It has been known for a long time that livestock with poor nutritional status generally suffer from diseases due to decreased resistance and high mortality, and that livestock with good nutritional status have strong resistance to pathogens.

그러므로 영양 상태가 면역체계에 영향을 미친다고 생각하고 이를 뒷받침하는 많은 임상적 역학적 연구들이 많이 있다. 영양-면역-감염의 상호 관계는 매우 복잡하고 여기에 관계되는 변인들은 아주 다양하다.Therefore, there are many clinical epidemiologic studies that believe that nutritional status affects the immune system and support it. The nutrition-immune-infection relationship is very complex, and the variables involved are very diverse.

영양 불량인 가축들은 대체적으로 축사 내부의 환경이 좋지 않고 이러한 가축들에게 질병에 대한 감염은 항상 수반되는 문제이다. 즉, 영양 불량, 면역 능력 저하, 감염은 서로 영향 받으며 축사 내부 환경이 기본적인 원인이 된다고 생각된다. 영양 불량인 가축은 질병에 걸리기 쉽고 또한 질병에 걸리면 영양 상태를 더욱 악화시키는 악순환이 계속된다.Malnutrition livestock generally have a bad environment inside the barn, and infection with diseases is always an accompanying problem for these livestock. In other words, malnutrition, decreased immunity, and infection are affected by each other, and the environment inside the shed is thought to be the basic cause. Poorly malnourished livestock are susceptible to disease, and a vicious cycle continues to worsen nutritional status when diseased.

상업적으로 이용 가능한 다클론 항체(Polyclonal antibody)는 대개 쥐, 토끼, 양, 염소, 말, 돼지, 소 등의 포유동물을 면역화 시킨 후 이들 동물의 혈청으로부터 얻어진다. 그러나 이들 항체는 산업적 규모로 제조될 수 없기 때문에 비용 면에서 효율적이지 못하다는 단점이 있다. 왜냐하면 혈액, 즉 혈청을 얻기가 용이하지 않으며 혈액을 수집하는데 많은 주의를 기울여야 하기 때문이다. Commercially available polyclonal antibodies are usually obtained from the sera of mammals such as mice, rabbits, sheep, goats, horses, pigs, and cattle after immunization. However, since these antibodies cannot be manufactured on an industrial scale, they have a disadvantage in that they are not cost effective. This is because it is difficult to obtain blood, that is, serum, and a lot of attention must be paid to collecting blood.

최근 생후 며칠 후에 분비되는 포유동물의 초유가 항원 특징적 항체라는 관점에서 주목을 받고 있다. 그러나 이러한 방법도 항체를 생산하는데 있어서 초유가 생산되는 기간이 극히 며칠에 불과하고 순수 분리하는 과정이 매우 복잡하기 때문에 극히 제한적이다. Recently, colostrum from mammals secreted a few days after birth is attracting attention from the viewpoint of antigen-specific antibodies. However, this method is also extremely limited in producing antibodies, since the production period of colostrum is only a few days and the pure separation process is very complicated.

국내 돼지 도축물량은 연간 1천 2백만 두로서 방혈되는 혈액양은 36,000톤에 달한다. 이를 처리하기 위하여 도축장 1개소 당 1억 원의 연간 비용이 소요되며 이것은 도축장의 순소득에 악영향을 미치는 주요 요인으로 지목되고 있다. The domestic pig slaughter volume is 12 million heads per year, and the amount of blood bleeding reaches 36,000 tons. To deal with this, an annual cost of 100 million won per slaughterhouse is required, which is pointed out as a major factor that adversely affects the net income of the slaughterhouse.

도축 혈액은 면역물질의 주요 보고이며 생리활성물질이 다량으로 함유되어있어 다양하게 이용될 수 있다. 항체의 공급이 편리하고 대규모 생산이 가능하다면 제약뿐만 아니라 식품, 화장품 산업 등에서 항체 사용을 촉진할 수 있기 때문에 특별한 응용을 통하여 다량의 항체를 제조하는 것이 바람직하다고 할 수 있다. Slaughter blood is a major report of immune substances and can be used in various ways because it contains a large amount of physiologically active substances. If the supply of antibodies is convenient and large-scale production is possible, it can be said that it is desirable to produce a large amount of antibodies through special applications because it can promote the use of antibodies not only in pharmaceuticals, but also in food and cosmetics industries.

한편, 폐기되는 도축 부산물인 가축 혈액을 활용하고자 하는 종래 기술로는, 대한민국 공개특허 제10-2008-0040296호에, 가축의 혈액을 멸균 및 가공 처리하여 유기물 및 무기물과 미생물 제제를 혼용하여 인간과 동물의 철분 결핍과 빈혈의 예방 및 치료가 가능한 농수축산물의 생산을 위한 비료 및 사료에 관한 기술이 개시되어 있다.On the other hand, as a conventional technology to utilize livestock blood, which is a waste slaughter by-product, in Korean Patent Application Laid-Open No. 10-2008-0040296, the blood of livestock is sterilized and processed to mix organic and inorganic substances and microbial preparations. A technology related to fertilizer and feed for the production of agricultural and livestock products capable of preventing and treating iron deficiency and anemia in animals is disclosed.

또한, 대한민국 공개특허 제10-2013-0031402호에, 가축 혈액을 멸균 건조하여 만든 혈분을 버섯 폐배지에 첨가하여 진균류를 배양한 고체 배양물을 미분쇄하여 제조된 혈분첨가 진균류 배양물을 포함하는 면역증강용 사료첨가제 조성물이 개시되어 있으며, 대한민국 공개특허 제10-2014-0111759호에는, 수거된 도축 혈액을 초음파 처리하여 분해하는 전처리 단계; 상기 전처리 단계에서 분해된 도축 혈액에 효소분해 발효제를 투입하는 효소분해 단계; 및 상기 효소분해 단계를 거친 도축 혈액을 고액 분리하는 고액분리 단계를 포함하는 도축 혈액을 이용한 아미노산 액비와 단백질 건조 사료의 제조방법이 개시되어 있다. In addition, Korean Patent Laid-Open No. 10-2013-0031402 includes a blood component-added fungus culture prepared by pulverizing a solid culture obtained by culturing fungi by adding blood meal prepared by sterilizing livestock blood to mushroom waste medium. A feed additive composition for enhancing immunity is disclosed, and Korean Patent Application Laid-Open No. 10-2014-0111759 includes a pretreatment step of decomposing the collected slaughter blood by ultrasonic treatment; An enzymatic decomposition step of injecting an enzymatic decomposition fermenting agent into the slaughtered blood degraded in the pretreatment step; And a solid-liquid separation step of separating the slaughtered blood that has undergone the enzymatic decomposition step, and a method for producing an amino acid liquid manure and protein dry feed using slaughtered blood is disclosed.

나아가, 대한민국 등록특허 제10-1573712호에는, 수거된 도축 혈액을 담아 교반하며 발효제를 첨가한 후 가열하여 도축 혈액 내의 포함된 단백질을 발효시켜 아미노산으로 전환시주는 발효 단계; 발효 도축 혈액을 교반시키며 고온의 스팀을 직접 분사하여 발효 도축혈액 내에 포함된 아미노산을 복수 기공을 가지는 부정형 덩어리 형태로 증숙시키는 증숙 단계; 증숙된 부정형의 아미노산 덩어리와 잔류 수분을 분리하는 탈수 단계; 탈수된 부정형 아미노산 덩어리를 과립 또는 펠릿 형태의 입상 상태로 가압 성형하는 성형 단계; 및 성형된 입상아미노산을 열풍 및 마이크로웨이브를 조사하여 건조하는 건조 단계;를 포함하는 도축 혈액을 이용한 입상아미노산 사료 및 비료 제조방법이 개시되어 있다.Furthermore, Korean Patent Registration No. 10-1573712 includes a fermentation step in which the collected slaughter blood is contained, stirred, and then heated to ferment the protein contained in the slaughtered blood to convert it into amino acids; A steaming step of agitating the fermented slaughtered blood and directly spraying hot steam to steam amino acids contained in the fermented slaughtered blood into an amorphous mass having multiple pores; A dehydration step of separating the steamed amorphous amino acid mass and residual moisture; Molding step of pressing the dehydrated amorphous amino acid mass into a granular state in the form of granules or pellets; And a drying step of drying the molded granular amino acid by irradiation with hot air and microwaves; a method for producing a granular amino acid feed and fertilizer using slaughtered blood is disclosed.

대한민국 공개특허 제10-2008-0040296호(2008년 5월 8일 공개)Republic of Korea Patent Publication No. 10-2008-0040296 (published on May 8, 2008) 대한민국 공개특허 제10-2013-0031402호(2013년 3월 29일 공개)Republic of Korea Patent Publication No. 10-2013-0031402 (published on March 29, 2013) 대한민국 공개특허 제10-2014-0111759호(2014년 9월 22일 공개)Republic of Korea Patent Publication No. 10-2014-0111759 (published on September 22, 2014) 대한민국 등록특허 제10-1573712호(2015년 12월 11일 공고)Korean Patent Registration No. 10-1573712 (announced on December 11, 2015)

본 발명은 도축 부산물로서 폐기되는 돼지의 혈액으로부터 면역 증강 단백질을 효과적으로 분리, 농축하여 면역 활성 기능이 증강된 사료첨가제 및 가축용 사료를 대량으로 제조할 수 있도록 함으로써, 환경오염을 방지하고 가축생산성 증대와 축산물의 품질 향상에 기여할 수 있는 사료첨가제의 제조방법, 이에 따라 제조된 사료첨가제 및 이를 포함하는 가축용 사료를 제공하는 것을 목적으로 한다.The present invention prevents environmental pollution and increases livestock productivity by effectively separating and concentrating immune enhancing proteins from the blood of pigs that are discarded as slaughter by-products to produce feed additives with enhanced immune activity and feed for livestock in large quantities. It is an object of the present invention to provide a method of manufacturing a feed additive that can contribute to the improvement of the quality of livestock and livestock products, a feed additive prepared accordingly, and feed for livestock containing the same.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 도축 혈액을 이용하여 면역 증강용 사료첨가제를 제조하는 방법으로서, 돼지의 도축 혈액을 수거하여 항응고제를 첨가한 후 혼합하는 단계(S1); 상기 도축 혈액을 원심분리하여 혈장을 수득하는 단계(S2); 상기 혈장을 한외여과하여 분자량 200 킬로달톤(kDa)을 초과하는 물질을 제거한 여액을 수득하는 1차 여과단계(S3); 상기 여액을 한외여과하여 분자량 100 킬로달톤(kDa) 초과~200 킬로달톤(kDa) 이하의 제1 분획물과, 분자량 100 킬로달톤(kDa) 이하의 제2 분획물로 분리하여 각각 수득하는 2차 여과단계(S4); 및 상기 제1 및 제2 분획물로부터 각각 고형분을 분리하여 수득하는 단계(S5);를 포함하며, 상기 제2 분획물의 고형분은, 상기 2차 여과단계(S4)에서 수득된 제2 분획물에, 아세톤과 1.6 M 염산을 8:2 (v/v)의 비율로 혼합한 산성 아세톤(acidic acetone)을 첨가하여 단백질을 변성(denaturation)시킨 후 원심분리하여 침전물을 수득하고, 상기 침전물에 증류수를 첨가하여 단백질을 재생(renaturation)시킨 후 감압 증류하여 잔류 아세톤을 제거함으로써 수득하는 것을 특징으로 하는 도축 혈액을 이용한 면역 증강용 사료첨가제의 제조방법을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention is a method of manufacturing a feed additive for enhancing immunity using slaughter blood, comprising the steps of collecting the slaughter blood of pigs, adding an anticoagulant, and mixing (S1); Centrifuging the slaughtered blood to obtain plasma (S2); A first filtration step (S3) of ultrafiltration of the plasma to obtain a filtrate from which a material having a molecular weight exceeding 200 kilodaltons (kDa) is removed; Secondary filtration step obtained by ultrafiltration of the filtrate to separate a first fraction having a molecular weight of more than 100 kilodaltons (kDa) to 200 kilodaltons (kDa) or less and a second fraction having a molecular weight of 100 kilodaltons (kDa) or less (S4); And a step (S5) of separating and obtaining a solid content from the first and second fractions, respectively, wherein the solid content of the second fraction is, in the second fraction obtained in the second filtration step (S4), acetone And 1.6 M hydrochloric acid in a ratio of 8:2 (v/v), acidic acetone was added to denature the protein, followed by centrifugation to obtain a precipitate, and distilled water was added to the precipitate. It provides a method for producing a feed additive for enhancing immunity using slaughtered blood, characterized in that obtained by removing residual acetone by distilling under reduced pressure after protein regeneration (renaturation).

여기서 상기 제조방법은, 상기 제1 분획물의 고형분을, 0.9% 농도(w/v) 염화나트륨(NaCl) 용액을 이용하여 농도 10% (w/v)로 조절하여 액상 형태의 사료첨가제로 제조하는 단계(S6);를 더 포함할 수 있다. Here, the manufacturing method is a step of preparing a liquid feed additive by adjusting the solid content of the first fraction to a concentration of 10% (w/v) using a 0.9% concentration (w/v) sodium chloride (NaCl) solution. (S6); may further include.

또한, 상기 제조방법은, 상기 제2 분획물의 고형분을, 0.9% 농도(w/v) 염화나트륨(NaCl) 용액을 이용하여 농도 25% (w/v)로 조절하여 액상 형태의 사료첨가제로 제조하는 단계(S6‘);를 더 포함할 수 있다.In addition, the manufacturing method is prepared by adjusting the solid content of the second fraction to a concentration of 25% (w/v) using a 0.9% concentration (w/v) sodium chloride (NaCl) solution to prepare a liquid feed additive. Step (S6'); may further include.

또한, 본 발명은 상기 방법에 따라 제조된 사료첨가제를 제공한다. In addition, the present invention provides a feed additive prepared according to the method.

또한, 본 발명은 상기 사료첨가제를 포함하는 가축용 사료를 제공한다.In addition, the present invention provides a feed for livestock containing the feed additive.

본 발명에 따르면, 가축의 도축과정에서 대량으로 발생, 폐기되는 도축 혈액으로부터 면역 단백질을 효과적으로 회수, 농축하여 질병 예방 효과가 있는 면역 증강용 사료 첨가제 및 이를 포함하는 가축용 사료를 제조할 수 있어, 도축 혈액 폐기에 따른 비용 절감과 환경오염 방지 및 사료용 항생제의 비용을 절감하고 항생제 남용을 예방하며, 새로운 단백질 사료 자원으로서 가축의 생산성 증대와 축산물의 품질 향상에도 기여할 수 있는 우수한 효과가 있다.According to the present invention, by effectively recovering and concentrating immune proteins from slaughter blood that is generated and discarded in large quantities in the slaughtering process of livestock, it is possible to prepare a feed additive for enhancing immunity and feed for livestock containing the same, It has an excellent effect that can contribute to increase the productivity of livestock and improve the quality of livestock as a new protein feed resource, reducing the cost of slaughter blood disposal, preventing environmental pollution, reducing the cost of antibiotics for feed, and preventing antibiotic abuse.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 도축 혈액을 이용한 면역 증강용 사료첨가제의 제조방법을 설명하기 위한 순서도.
도 2는 본 발명의 다른 실시예에 따른 도축 혈액을 이용한 면역 증강용 사료첨가제의 제조방법을 설명하기 위한 순서도.
도 3은 육계의 사양 실험에 사용된 계사의 형태 및 조건을 나타낸 사진.
도 4는 돼지 혈장 중 고형분 함량을 분석하여 나타낸 그래프.
도 5는 돼지 혈장의 건조 전후의 구성 성분을 분석하여 나타낸 그래프.
도 6은 돼지 혈장 내에 존재하는 펩타이드의 분자량을 분석하여 나타낸 그래프.
도 7은 전반기 육계 사육 체중을 측정한 자료.
도 8은 후반기 육계 사육 체중을 측정한 자료.
도 9는 육계 사육 전반에 걸친 사료 요구량을 조사한 자료.
도 10은 육계 사양 실험의 실제 모습을 촬영한 사진.
1 is a flow chart illustrating a method of manufacturing a feed additive for enhancing immunity using slaughtered blood according to an embodiment of the present invention.
Figure 2 is a flow chart illustrating a method of manufacturing a feed additive for enhancing immunity using slaughtered blood according to another embodiment of the present invention.
3 is a photograph showing the form and conditions of a cage used in a broiler specification experiment.
Figure 4 is a graph showing the analysis of the solid content in pig plasma.
5 is a graph showing the analysis of constituents of pig plasma before and after drying.
Figure 6 is a graph showing the molecular weight analysis of the peptide present in pig plasma.
Figure 7 is a data measured by the weight of broiler breeding in the first half.
Figure 8 is data obtained by measuring the weight of broiler breeding in the second half.
Figure 9 is a data survey of feed requirements throughout broiler breeding.
10 is a photograph of the actual state of the broiler specification experiment.

본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예들에 한정되지 않는다. 본 발명에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 또한, 다르게 정의되지 않는 한 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미가 있다. 이하, 본 발명에 따른 도축 혈액을 이용한 면역 증강용 사료첨가제의 제조방법에 대한 실시예를 들어 구체적으로 설명한다.The present invention may be implemented in various different forms and is not limited to the embodiments described herein. The terms used in the present invention are only used to describe specific embodiments, and are not intended to limit the present invention. In addition, unless otherwise defined, all terms, including technical or scientific terms, used herein have the same meaning as commonly understood by a person of ordinary skill in the art to which the present invention belongs. Hereinafter, an embodiment of a method for preparing a feed additive for enhancing immunity using slaughtered blood according to the present invention will be described in detail.

도 1 및 도 2는 각각 본 발명의 일 실시예에 따른 도축 혈액을 이용한 면역 증강용 사료첨가제의 제조방법을 설명하기 위한 순서도이다.1 and 2 are flowcharts each illustrating a method of manufacturing a feed additive for enhancing immunity using slaughtered blood according to an embodiment of the present invention.

도 1 및 도 2를 참조하면, 본 발명에 따른 도축 혈액을 이용한 면역 증강용 사료첨가제의 제조방법은, 도축 혈액 수거 단계(S1), 혈장 수득 단계(S2), 1차 한외여과 단계(S3), 2차 한외여과 단계(S4), 및 고형분 수득 단계(S5)를 포함한다. 1 and 2, the method of manufacturing a feed additive for enhancing immunity using slaughtered blood according to the present invention includes a slaughter blood collection step (S1), a plasma acquisition step (S2), and a first ultrafiltration step (S3). , A second ultrafiltration step (S4), and a solid content obtaining step (S5).

1. 도축 혈액 수거 단계(S1)1. Slaughter Blood Collection Step (S1)

도축장으로부터 폐기되는 돼지의 도축 혈액을 수거하는 단계이다. 도축 혈액은 수거되는 즉시 항응고제로서 EDTA를 첨가한 후 서서히 혼합한다. 도축 혈액에 첨가하는 EDTA는 최종 농도가 0.5% (w/v)가 되도록 하는 것이 바람직하다. 항응고제가 혼합된 도축 혈액은 다음 단계 처리 전까지 이송 등의 필요에 따라 냉동, 냉장 또는 실온 보관될 수 있다. 다만, 미생물의 번식이나 단백질의 변성을 방지하기 위해 냉동 또는 냉장 저장하는 것이 바람직하나, 냉동 및 해동 시의 비용 등을 감안할 때 냉장 저장하는 것이 경제적인 면에서 바람직하다. This is the step of collecting slaughter blood from pigs that are discarded from the slaughterhouse. As soon as the slaughtered blood is collected, EDTA is added as an anticoagulant and then slowly mixed. It is desirable that the final concentration of EDTA added to slaughtered blood is 0.5% (w/v). Slaughter blood mixed with anticoagulants can be frozen, refrigerated or stored at room temperature as needed, such as transport, until the next stage of processing. However, in order to prevent the propagation of microorganisms or denaturation of proteins, it is preferable to store them frozen or refrigerated, but in view of the economical aspect, it is preferable to store them refrigerated in consideration of the cost of freezing and thawing.

2. 혈장 수득 단계(S2)2. Plasma obtaining step (S2)

상기 단계(S1)에서 준비된 도축 혈액으로부터 혈장을 분리하거 수득하는 단계이다. 도축 혈액을 원심분리하면 혈장과 혈구가 대략 5:5의 부피비로 분리되는데, 이 중 혈장만을 구분하여 수득한다. 원심분리에는 연속식 튜브 타입 원심분리기가 사용될 수 있으며, 약 12,000rpm으로 연속 원심 분리하는 것이 바람직하다. This is a step of separating and obtaining plasma from the slaughtered blood prepared in step (S1). When the slaughtered blood is centrifuged, plasma and blood cells are separated in a volume ratio of approximately 5:5, of which only plasma is obtained separately. A continuous tube type centrifuge may be used for centrifugation, and it is preferable to perform continuous centrifugation at about 12,000 rpm.

3. 1차 한외여과 단계(S3)3. The first ultrafiltration step (S3)

상기 단계(S2)에서 수득한 혈장을 한외여과(ultrafiltration)하여 일정한 분자량을 초과하는 물질을 제거한 여액을 수득하는 단계이다. 1차 한외여과막의 분획분자량(Molecular Weight of Cut-off)을 200 킬로달톤(kDa)으로 하여 분자량 200 kDa을 초과하는 물질을 제거한 여액을 분리하여 수득한다. This is a step of obtaining a filtrate from which substances exceeding a certain molecular weight are removed by ultrafiltration of the plasma obtained in step (S2). The first ultrafiltration membrane was obtained by separating a filtrate from which a material having a molecular weight exceeding 200 kDa was removed by setting the Molecular Weight of Cut-off to 200 kilodaltons (kDa).

4. 2차 한외여과 단계(S4) 4. Second ultrafiltration step (S4)

상기 단계(S3)에서 수득한 여액을 2차적으로 한외 여과하여 특정한 분자량 범위의 물질을 분리하여 수득하는 단계이다. 2차 한외 여과막의 분획분자량을 100 kDa하여 분자량 100 kDa 초과~200 kDa 이하의 물질(제1 분획물)과 분자량 100 kDa 이하의 물질(제2 분획물)로 분리하여 각각 수득한다(제2 분획물).In this step, the filtrate obtained in step (S3) is secondarily ultra-filtered to separate and obtain a substance having a specific molecular weight range. The fractional molecular weight of the secondary ultrafiltration membrane is 100 kDa, and each is obtained by separating into a material having a molecular weight of more than 100 kDa to 200 kDa (first fraction) and a material having a molecular weight of 100 kDa or less (second fraction) (second fraction).

5. 고형분 수득 단계(S5)5. Solid content acquisition step (S5)

상기 단계(S4)에서 얻어진 제1 분획물(분자량 100 kDa 초과~200 kDa 이하) 및 제2 분획물(분자량 100 kDa 이하)로부터 각각 고형분을 분리하여 수득하는 단계이다. 고형분 분리를 위해 침전, 원심분리, 농축, 건조 등의 방법들이 사용될 수 있다. This is a step of separating and obtaining solids from the first fraction (molecular weight of more than 100 kDa to 200 kDa or less) and the second fraction (molecular weight of 100 kDa or less) obtained in step (S4). Methods such as precipitation, centrifugation, concentration, and drying may be used to separate the solids.

예를 들어, 제2 분획물의 고형분은 상기 2차 한외여과 단계(S4)에서 수득된 제2 분획물(분자량 100 킬로달톤 이하)에 아세톤과 1.6 M 염산을 8:2 (v/v)의 비율로 혼합한 산성 아세톤(acidic acetone)을 첨가하여 단백질을 변성(denaturation)시킨 후 12,000.rpm에서 연속 원심 분리하여 침전물을 수득하고, 상기 침전물에 소량의 증류수를 첨가하여 단백질을 재생(renaturation)시킨 후 감압 증류기에서 증류하여 잔류 아세톤을 제거함으로써 수득할 수 있다. For example, the solid content of the second fraction is acetone and 1.6 M hydrochloric acid in a ratio of 8:2 (v/v) to the second fraction (molecular weight 100 kilodalton or less) obtained in the second ultrafiltration step (S4). After denaturing the protein by adding the mixed acidic acetone, continuous centrifugation at 12,000.rpm to obtain a precipitate, and a small amount of distilled water was added to the precipitate to regenerate the protein, and then reduced pressure. It can be obtained by distilling in a still to remove residual acetone.

6. 사료첨가제 제조단계(S6, S6‘)6. Feed additive manufacturing step (S6, S6')

한편, 본 발명에 따른 도축 혈액을 이용한 면역 증강용 사료첨가제의 제조방법은 사료첨가제 제조단계(S6, S6‘)을 더 포함할 수 있다.On the other hand, the method of manufacturing a feed additive for enhancing immunity using slaughter blood according to the present invention may further include a feed additive manufacturing step (S6, S6').

예를 들어, 제1 분획물의 고형분은 0.9% 농도(w/v) 염화나트륨(NaCl) 용액을 이용하여 농도 10% (w/v)로 조절하여 액상 형태의 사료첨가제로 제조할 수 있다(S6).For example, the solid content of the first fraction can be prepared as a liquid feed additive by adjusting the concentration to 10% (w/v) using a 0.9% concentration (w/v) sodium chloride (NaCl) solution (S6). .

제2 분획물의 고형분의 경우는, 0.9% 농도(w/v) 염화나트륨(NaCl) 용액을 이용하여 농도 25% (w/v)로 조절하여 액상 형태의 사료첨가제로 제조할 수 있다(S6‘).In the case of the solid content of the second fraction, it can be prepared as a liquid feed additive by adjusting the concentration to 25% (w/v) using a 0.9% concentration (w/v) sodium chloride (NaCl) solution (S6'). .

본 발명에 따른 도축 혈액을 이용한 면역 증강용 사료첨가제의 제조방법은, 상기 사료첨가제 제조단계(S6, S6‘)를 통해 제조된 사료첨가제를 일정 무게 단위로 나누어 포장하는 제품포장단계를 더 포함할 수 있다. The method of manufacturing a feed additive for enhancing immunity using slaughter blood according to the present invention further includes a product packaging step of dividing the feed additive prepared through the feed additive manufacturing step (S6, S6') into a predetermined weight unit and packaging it. I can.

또한, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기한 방법으로 제조된 사료첨가제를 가축용 배합사료 등에 혼합하여 사료 첨가제를 포함하는 가축용 사료를 제조할 수 있다. In addition, according to an embodiment of the present invention, it is possible to prepare a feed for livestock containing the feed additive by mixing the feed additive prepared by the above-described method into a blended feed for livestock.

이하, 본 발명에 따른 도축 혈액을 이용한 면역 증강용 사료첨가제에 대한 실시예를 들어 더욱 구체적으로 설명하기로 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, examples of the feed additive for enhancing immunity using slaughter blood according to the present invention will be described in more detail. However, the following examples are only for illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not limited thereto.

<실시예 1> 제1 분획물을 이용한 면역 증강용 사료첨가제의 제조<Example 1> Preparation of feed additive for enhancing immunity using the first fraction

수거한 돼지의 도축 혈액에 최종 농도가 0.5% (w/v)가 되도록 EDTA를 첨가하였다. 상기 도축 혈액을 연속식 튜브 타입 원심분리기를 사용하여 12,000rpm으로 원심분리하여 혈장과 혈구로 분리한 후 혈장만을 구분하여 수득하였다. 수득한 혈장을 1차로 한외여과하여 분자량 200 킬로달톤을 초과하는 물질을 제거한 여액만 분리하여 수득하였다. 수득한 여액을 분획분자량 100 킬로달톤의 한외여과막을 이용하여 분자량 100 킬로달톤 초과~200 킬로달톤 이하의 물질(제1 분획물)과, 분자량 100 킬로달톤 이하의 물질(제2 분획물)로 각각 분리하여 수득하였다. 이후, 상기 제1 분획물을 농축, 건조하여 고형분을 분리, 수득하였다. 상기 고형분을, 0.9% 농도(w/v) 염화나트륨 용액을 이용하여 농도 10% (w/v)로 조절하여 액상 형태의 사료첨가제를 제조하였다. EDTA was added to the collected pig slaughter blood so that the final concentration was 0.5% (w/v). The slaughtered blood was centrifuged at 12,000 rpm using a continuous tube type centrifuge, separated into plasma and blood cells, and then obtained by separating only plasma. The obtained plasma was first ultra-filtered to obtain only the filtrate from which a substance having a molecular weight exceeding 200 kilodalton was removed. The obtained filtrate was separated into a material having a molecular weight of more than 100 kilodaltons and less than 200 kilodaltons (the first fraction) and a material having a molecular weight of 100 kilodaltons or less (the second fraction) using an ultrafiltration membrane having a molecular weight cutoff of 100 kilodaltons. Obtained. Thereafter, the first fraction was concentrated and dried to separate and obtain a solid. The solid content was adjusted to a concentration of 10% (w/v) using a 0.9% concentration (w/v) sodium chloride solution to prepare a feed additive in a liquid form.

<실시예 2> 제2 분획물을 이용한 면역 증강용 사료첨가제의 제조<Example 2> Preparation of a feed additive for enhancing immunity using the second fraction

상기 실시예 1에서 수득한 분자량 100 킬로달톤 이하의 물질(제2 분획물)에 아세톤과 1.6 M 염산을 8:2 (v/v)의 비율로 혼합한 산성 아세톤을 첨가한 후 연속 원심분리하여 침전물을 수득하고, 상기 침전물에 증류수를 첨가한 후 감압 증류하여 잔류 아세톤을 제거함으로써 고형분을 수득하였다. 상기 고형분을 0.9% 농도(w/v) 염화나트륨 용액을 이용하여 농도 25% (w/v)로 조절하여 액상 형태의 사료첨가제를 제조하였다. Acetone and 1.6 M hydrochloric acid in a ratio of 8:2 (v/v) were added to the material (second fraction) having a molecular weight of 100 kilodaltons or less obtained in Example 1, followed by continuous centrifugation to precipitate a precipitate. And distilled water was added to the precipitate, followed by distillation under reduced pressure to remove residual acetone to obtain a solid content. The solid content was adjusted to a concentration of 25% (w/v) using a 0.9% concentration (w/v) sodium chloride solution to prepare a feed additive in a liquid form.

<실험예><Experimental Example>

1. 시험 내용 및 방법1. Test content and method

가. 분자량의 결정 end. Determination of molecular weight

MALDI-TOF를 이용하여 단백질 분자량을 결정하였다. Protein molecular weight was determined using MALDI-TOF.

나. 돼지의 사양 실험I. Pig specification experiment

안성 죽산의 일괄 2,000두 돼지 사육 농장에서 본 실험을 진행하였다. 1주일에 8두의 모돈이 분만하여 모돈으로부터 이유된 자돈을 일주에 약 90두씩 공시하였고, 1반복에 대조구 30두 총 3반복 실험을 진행하였다. 그리하여 대조구 90두와 제1 분획물을 이용한 사료첨가제 투여구 90두, 그리고 제1 분획물을 이용한 사료첨가제 투여구 90두로 총 270두의 이유 자돈으로 본 실험을 진행하였다. This experiment was conducted at a batch of 2,000 pigs breeding farm in Juksan, Anseong. Eight sows were delivered per week, and about 90 piglets weaned from sows were disclosed per week, and a total of 30 control animals were tested in 3 replicates. Thus, this experiment was carried out with a total of 270 weaned piglets with 90 control heads, 90 heads for feed additive administration using the first fraction, and 90 heads for feed additive administration using the first fraction.

(1) 포유 자돈에 대한 급여(1) Salary for piglets

포유 자돈에 대한 투여는 자돈이 태어나고 1시간 이내로 3ml을 급여하였고 7일령까지 매일 3ml씩 주사기로 강제 급여하여 25일령 이유시까지 설사 빈도와 체중을 측정하였다. As for the administration of piglets, 3ml was given within 1 hour after the piglets were born, and 3ml was forcibly administered by syringe every day until 7 days of age, and diarrhea frequency and weight were measured until weaning at 25 days of age.

(2) 포유 모돈에 대한 급여(2) Salary for sows

포유 모돈에 대한 투여는 분만 2주전부터 사료 톤당 2kg을 급여하여 분만 후 포유 시까지 사료 톤당 4kg을 급여하였다. For the administration of sows, 2 kg per ton of feed was fed from 2 weeks before delivery, and 4 kg per ton of feed was fed until lactation after delivery.

다. 육계의 사양 실험All. Broiler specification experiment

일반 시중에 판매되는 사료를 급여하였으며 총 300수의 육계 병아리를 대상으로 본 실험을 수행하였다. 제1 분획물을 이용한 사료첨가제 투여구, 제2 분획물을 이용한 사료첨가제 투여구, 대조구로 20수씩 분리 사육하여 5회 반복, 32일령까지 사육하여 체중과 사료 효율을 조사하였다. 계사 환경은 하우스 계사로서 충청남도 서산시에 있는 에스씨아이 주식회사 부속 실험 농장에서 실시하였으며 계사의 형태 및 조건은 도 3에 나타낸 바와 같다. 육계 사양 실험의 실제 모습은 도 10의 사진과 같다.Commercially available feed was fed, and this experiment was performed on a total of 300 broiler chicks. The feed additive administration group using the first fraction, the feed additive administration group using the second fraction, and the control group were separated and reared in 20 numbers, repeated 5 times, and reared up to 32 days of age to investigate the weight and feed efficiency. The cage environment was carried out at an experimental farm attached to SCI Co., Ltd. in Seosan City, Chungcheongnam-do as a house cage, and the form and conditions of the cage are as shown in FIG. 3. The actual state of the broiler specification experiment is shown in the photograph of FIG. 10.

2. 시험 결과2. Test result

가. 돼지 혈액의 구성 분포end. Distribution of the composition of pig blood

도축 돼지 혈액은 홍주 미트(충청남도 홍성군 소재)로부터 제공받았으며, 처리 과정은 도축된 돼지 목에서 혈액을 직접 받은 후 EDTA를 최종 농도 0.5% (w/v)가 되도록 첨가한 다음 서서히 혼합하고, 아이스박스에 담아 실험실로 이송 분석하였다. 돼지 혈액을 4,000rpm으로 5분간 회분식(batch type)으로 원심분리하여 혈장과 혈구로 분리하여 분석한 결과, 혈구와 혈장이 거의 5:5 부피비로 나타났다.Slaughtered pig blood was provided from Hongju Meat (Hongseong-gun, Chungcheongnam-do), and in the process of processing, EDTA was added to a final concentration of 0.5% (w/v) after receiving blood directly from the neck of the slaughtered pig, and then slowly mixed and iceboxed. And transferred to the laboratory for analysis. Porcine blood was centrifuged at 4,000 rpm for 5 minutes in a batch type, separated into plasma and blood cells, and analyzed. As a result, blood cells and plasma were almost 5:5 by volume.

도 4는 돼지 혈장 중 고형분 함량을 분석한 자료이며, 도 5는 돼지 혈장의 건조 전후의 구성성분을 분석한 자료이다. 혈장 중 고형분 함량은 8.9 중량%였으며 수분함량은 91.1 중량%이었다. 그리고 단백질 함량은 7.59 중량%이었다. FIG. 4 is data obtained by analyzing the solid content in pig plasma, and FIG. 5 is data obtained by analyzing components of pig plasma before and after drying. The solid content in plasma was 8.9% by weight and the water content was 91.1% by weight. And the protein content was 7.59% by weight.

도 6은 돼지 혈장 내에 존재하는 펩타이드의 분자량을 조사한 자료이다. 중량 기준으로 5 kDa 미만이 2.538%였으며, 5~10 kDa은 0.054%, 10~30 kDa은 0.019%, 30~50 kDa은 0.054%, 50~100 kDa는 90.393%, 100~200 kDa는 4.03%, 200 kDa 이상은 2.365%이었다. 6 is data obtained by examining the molecular weight of peptides present in pig plasma. By weight, less than 5 kDa was 2.538%, 5 to 10 kDa is 0.054%, 10 to 30 kDa is 0.019%, 30 to 50 kDa is 0.054%, 50 to 100 kDa is 90.393%, and 100 to 200 kDa is 4.03% , 200 kDa or more was 2.365%.

혈액 1톤을 원심분리하여 혈장에서 분자량 100~200 kDa 사이의 단백질을 수득한 결과 1.78kg의 건조 물량을 획득할 수 있었고, 분자량 100 kDa이하 단백질은 40.46kg을 획득할 수 있었다. 1 ton of blood was centrifuged to obtain a protein having a molecular weight of 100 to 200 kDa in plasma, and as a result, a dry amount of 1.78 kg could be obtained, and a protein having a molecular weight of 100 kDa or less could obtain 40.46 kg.

100 kDa 이하 분자량을 가진 펩타이드는 거의 대부분이 Albumin 계열이었고([표 1]), 100~200 kDa의 분자량을 가진 펩타이드는 거의 대부분이 γ-Globulin 계열의 Ig G, Ig A, Ig D, Ig E이었다([표 2]).Most of the peptides with a molecular weight of 100 kDa or less were of Albumin ([Table 1]), and most of the peptides with a molecular weight of 100 to 200 kDa were of the γ-Globulin family of Ig G, Ig A, Ig D, and Ig E. Was ([Table 2]).

그룹group 단백질 종류Protein type 분자량Molecular Weight 기능function AlbuminsAlbumins TransthyretinTransthyretin 55~6555~65 Thyroxin과 Triidothyronin의 이송경로Transport route of Thyroxin and Triidothyronin AlbuminAlbumin 6767 삼투압 유지: 지방산, 빌리루빈, 담즙산, 스테로이드호르몬, 약성분과 무기 이온들의 이송 경로Osmotic pressure maintenance: transport path of fatty acids, bilirubin, bile acids, steroid hormones, pharmaceutical ingredients and inorganic ions

α1-Globulins


α1-Globulins
Antitrypsin Antitrypsin 5151 트립신과 다른 단백질 분해 효소 억제Inhibition of trypsin and other proteolytic enzymes
AntichymotrypsinAntichymotrypsin 58~6858~68 키모트립신 억제Inhibition of chymotrypsin ProthrombinProthrombin 7272 트롬빈 전구체, 응집인자IIThrombin precursor, aggregation factor II TranscortinTranscortin 5151 Cortisol과 Corticosterone과 Progesterone 이송Cortisol, Corticosterone, and Progesterone transport Thytoxin-binding globulinThytoxin-binding globulin 5454 Iodothyronins 이송Transfer of Iodothyronins
α2-Globulins

α2-Globulins
Antithrombin IIIAntithrombin III 5858 혈액응고 억제Inhibit blood clotting
PlasminogenPlasminogen 9090 Plasmin 전구체, 혈전 파괴Plasmin precursor, destroying blood clots Vitamin D-binding proteinVitamin D-binding protein 52~5952~59 Calciaol(Vitamin D3) 이송Calciaol (Vitamin D3) transfer
β-Globulins

β-Globulins
TransferrinTransferrin 8080 철 이송Iron transfer
Sex hormone binding globulinSex hormone binding globulin 6565 Testoterone과 Estradiol 이송 Testoterone and Estradiol transfer TranscobalaminTranscobalamin 3838 Vitamin B12 이송Vitamin B12 transfer

그룹group 단백질 종류Protein type 분자량Molecular Weight 기능function
γ-Globulins

γ-Globulins
Ig GIg G 150150 후천 항체Acquired antibodies
Ig AIg A 162162 점막보호 항체Mucosal protective antibody Ig DIg D 172172 β-lymphocyte receptorsβ-lymphocyte receptors Ig EIg E 196196 Reagins(즉각반응항체)Reagins (immediate reaction antibodies) α2-Globulinsα2-Globulins CeruloplaminCeruloplamin 135135 구리 이송Copper conveying β-Globulinsβ-Globulins C-reactive proteinC-reactive protein 110110 보완작용Complementation

표 3은 분만 2주전부터 이유 시까지 첨가물을 모돈에게 급여하면서 포유 자돈에게 생후 1시간 이내에 3ml을 급여하여 생후 7일령까지 매일 3ml을 주사기로 급여한 결과를 나타낸 자료이다.Table 3 is the data showing the results of feeding 3ml to sows within 1 hour after birth while feeding sows with additives from 2 weeks before delivery to weaning, and feeding 3ml daily with a syringe until 7 days of age.

투여구Administration 대조구Control 제1 분획물 사료첨가제1st fraction feed additive 제2 분획물 사료첨가제Second fraction feed additive 생시두수Fresh Bean Count 30±0.630±0.6 30±0.630±0.6 30±0.530±0.5 생시체중(kg)Raw weight (kg) 1.43±0.131.43±0.13 1.42±0.121.42±0.12 1.42±0.131.42±0.13 폐사두수Number of dead heads 0.5±0.20.5±0.2 1.2±0.81.2±0.8 2±1.32±1.3 이유두수Number of reasons 29.5±0.529.5±0.5 28.6±0.4128.6±0.41 27±1.327±1.3 이유체중(kg)Weaning weight (kg) 11.4±1.0811.4±1.08 10.24±1.2810.24±1.28 9.83±1.39.83±1.3 설사 두수Diarrhea 1.2±0.51.2±0.5 1.8±0.81.8±0.8 3±1.23±1.2

각 처리구마다 포유 개시 두수를 약 30두로 조절한 후 초기 체중을 측정한 결과 제1 분획물을 이용한 사료첨가제 투여구는 1.43±0.13kg, 제2 분획물을 이용한 사료첨가제 투여구는 1.42±0.12kg, 대조구는 1.42±0.13kg이었다. 이유시까지 폐사 두수는 제1 분획물을 이용한 사료첨가제 투여구(0.5±0.2), 제2 분획물을 이용한 사료첨가제 투여구(1.2±0.8), 대조구(2±1.3) 순으로 나타났다. 이유체중 또한 제1 분획물을 이용한 사료첨가제 투여구와 제2 분획물을 이용한 사료첨가제 투여구, 대조구가 각각 11.4±1.08kg, 10.24±1.28kg, 9.83±1.3kg 순으로 나타났고 설사두수도 각각 1.2±0.5, 1.8±0.8, 3±1.2 순으로 조사되었다. As a result of measuring the initial weight after adjusting the number of start feeding heads to about 30 heads for each treatment group, the feed additive administration group using the first fraction was 1.43±0.13kg, the feed additive administration group using the second fraction 1.42±0.12kg, the control group 1.42 It was ±0.13 kg. The number of dead heads until weaning was in the order of feed additive administration group using the first fraction (0.5±0.2), feed additive administration group using the second fraction (1.2±0.8), and control (2±1.3). Weaning weight was also 11.4±1.08kg, 10.24±1.28kg, 9.83±1.3kg respectively in the order of the feed additive administration group using the first fraction, the feed additive administration group using the second fraction, and the number of diarrhea heads respectively 1.2±0.5 , 1.8±0.8, 3±1.2 in order.

제1 분획물을 이용한 사료첨가제 투여구의 폐사율이 다른 투여구보다 낮았으며, 이유 체중 또한 다른 투여구보다 높고, 설사 두수가 현저하게 적었다. The mortality rate of the feed additive-administered group using the first fraction was lower than that of the other administration groups, the weaning weight was also higher than that of the other administration groups, and the number of diarrhea was significantly less.

도 7은 전반기 육계 사육 체중을 측정한 자료이다. 입추 후 2주간 육계의 체중을 측정한 자료로서 제1 분획물을 이용한 사료첨가제 투여구와 제2 분획물을 이용한 사료첨가제 투여구, 그리고 대조구의 14일령 체중은 각각 352.31g. 316.42g, 307.75g 순으로 나타났다. 7 is data obtained by measuring the weight of broiler breeding in the first half. The weight of broilers was measured for 2 weeks after the intestine. The feed additive administration group using the first fraction, the feed additive administration group using the second fraction, and the 14-day-old weight of the control group, respectively, were 352.31 g. It appeared in the order of 316.42g and 307.75g.

도 8은 후반기 육계 사육 체중을 측정한 자료로서, 35일령에 제1 분획물을 이용한 사료첨가제 투여구, 제2 분획물을 이용한 사료첨가제 투여구와 대조구가 각각 1,697.51g, 1,698.08g과 1,432.63g 순으로 나타났다. Figure 8 is the data of measuring the weight of broiler breeding in the second half, at 35 days of age, the feed additive administration group using the first fraction, the feed additive administration group using the second fraction, and the control group were respectively 1,697.51g, 1,698.08g and 1,432.63g.

도 9는 육계 사육 전반에 걸친 사료 요구량을 조사한 자료이다. 제1 분획물을 이용한 사료첨가제 투여구, 제2 분획물을 이용한 사료첨가제 투여구와 대조구가 각각 1.528kg, 1.52kg, 1.705kg를 나타내었다. Figure 9 is the data of the survey of feed requirements throughout the broiler breeding. The feed additive administration group using the first fraction, the feed additive administration group using the second fraction, and the control group showed 1.528kg, 1.52kg, and 1.705kg, respectively.

상기 결과에 따르면, 육계를 초기에 입추했을 때 낮선 환경에 대한 스트레스로 인하여 질병에 노출될 위험성이 높아 면역 글로부린 많이 함유되어 있는 제1 분획물을 이용한 사료첨가제가 많은 효과를 나타내는 것으로 판단된다. According to the above results, it is judged that the feed additive using the first fraction containing a large amount of immunoglobulin exhibits a lot of effects when the broiler is initially incubated, due to the high risk of exposure to diseases due to stress on the environment.

그러나 후반기에 갈수록 면역 단백질보다 일반 단백질원으로 많이 함유되어있는 제2 분획물을 이용한 사료첨가제 투여구와 제1 분획물을 이용한 사료첨가제 투여구 사이에는 차이가 전혀 없었지만 대조구와는 현저한 차이를 보였다. However, in the latter half of the year, there was no difference at all between the feed additive administration group using the second fraction and the feed additive administration group using the first fraction, but there was a remarkable difference from the control group.

이에 따라 육계의 초기 사육에는 제1 분획물을 이용한 사료첨가제를 급여하고 후반기에는 제2 분획물을 이용한 사료첨가제를 급여하는 것이 바람직하다고 볼 수 있다.Accordingly, it can be seen that it is desirable to feed the feed additive using the first fraction in the initial breeding of broilers and feed the feed additive using the second fraction in the second half.

이와 같이, 본 발명은 가축의 도축과정에서 대량으로 발생, 폐기되는 도축 혈액으로부터 단백질을 효과적으로 회수, 농축하여 질병 예방 효과가 있는 면역 증강용 사료첨가제 및 이를 포함하는 가축용 사료를 제조할 수 있어, 도축 혈액 폐기에 따른 비용 절감과 환경오염 방지 및 사료용 항생제의 비용을 절감하고 항생제 남용을 예방할 수 있을 뿐만 아니라, 새로운 단백질 사료 자원으로서 가축의 생산성 증대와 축산물의 품질 향상에도 기여할 수 있다. As described above, the present invention effectively recovers and concentrates protein from slaughter blood that is generated and discarded in a large amount during the slaughter process of livestock, thereby producing a feed additive for enhancing immunity and a feed for livestock including the same, Not only can it reduce the cost of slaughter blood disposal, prevent environmental pollution, reduce the cost of antibiotics for feed, and prevent antibiotic abuse, but also contribute to increase the productivity of livestock and improve the quality of livestock products as a new protein feed resource.

이상, 본 발명의 바람직한 실시예를 설명하였지만, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 기술자라면 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것 변형할 수 있음을 알 수 있을 것이다. 따라서 본 발명의 범위는 기재된 실시예에 한정되는 것이 아니고, 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 다양하게 수정 및 변형할 수 있으며, 그러한 수정예 또는 변형예들은 본 발명의 범위에 속한다고 하여야 할 것이다.In the above, preferred embodiments of the present invention have been described, but those skilled in the art to which the present invention pertains can be modified in that they can be implemented in other specific forms without changing the technical spirit or essential features of the present invention. You will see that there is. Therefore, the scope of the present invention is not limited to the described embodiments, and various modifications and variations can be made without departing from the spirit and scope of the present invention, and such modifications or variations are to be said to belong to the scope of the present invention. .

Claims (6)

도축 혈액을 이용하여 면역 증강용 사료첨가제를 제조하는 방법으로서,
돼지의 도축 혈액을 수거하여 항응고제를 첨가한 후 혼합하는 단계(S1);
상기 도축 혈액을 원심분리하여 혈장을 수득하는 단계(S2);
상기 혈장을 한외여과하여 분자량 200 킬로달톤(kDa)을 초과하는 물질을 제거한 여액을 수득하는 1차 여과단계(S3);
상기 여액을 한외여과하여 분자량 100 킬로달톤(kDa) 초과~200 킬로달톤(kDa) 이하의 제1 분획물과, 분자량 100 킬로달톤(kDa) 이하의 제2 분획물로 분리하여 각각 수득하는 2차 여과단계(S4); 및
상기 제1 및 제2 분획물로부터 각각 고형분을 분리하여 수득하는 단계(S5);를 포함하며,
상기 제2 분획물의 고형분은,
상기 2차 여과단계(S4)에서 수득된 제2 분획물에, 아세톤과 1.6 M 염산을 8:2 (v/v)의 비율로 혼합한 산성 아세톤(acidic acetone)을 첨가하여 단백질을 변성(denaturation)시킨 후 원심분리하여 침전물을 수득하고, 상기 침전물에 증류수를 첨가하여 단백질을 재생(renaturation)시킨 후 감압 증류하여 잔류 아세톤을 제거함으로써 수득하는 것을 특징으로 하는 도축 혈액을 이용한 면역 증강용 사료첨가제의 제조방법.
As a method of manufacturing a feed additive for enhancing immunity using slaughter blood,
Collecting pig slaughter blood, adding an anticoagulant, and mixing (S1);
Centrifuging the slaughtered blood to obtain plasma (S2);
A first filtration step (S3) of ultrafiltration of the plasma to obtain a filtrate from which a material having a molecular weight exceeding 200 kilodaltons (kDa) is removed;
Secondary filtration step obtained by ultrafiltration of the filtrate to separate a first fraction having a molecular weight of more than 100 kilodaltons (kDa) to 200 kilodaltons (kDa) and a second fraction having a molecular weight of 100 kilodaltons (kDa) or less (S4); And
Including; separating and obtaining solids from the first and second fractions, respectively (S5),
The solid content of the second fraction,
To the second fraction obtained in the second filtration step (S4), acidic acetone obtained by mixing acetone and 1.6 M hydrochloric acid in a ratio of 8:2 (v/v) was added to denature the protein. Preparation of a feed additive for immunity enhancement using slaughter blood, characterized in that obtained by centrifugation to obtain a precipitate, and distilling under reduced pressure to remove residual acetone after adding distilled water to the precipitate to regenerate protein. Way.
청구항 1에 있어서,
상기 제1 분획물의 고형분을,
0.9% 농도(w/v) 염화나트륨(NaCl) 용액을 이용하여 농도 10% (w/v)로 조절하여 액상 형태의 사료첨가제로 제조하는 단계(S6);를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 도축 혈액을 이용한 면역 증강용 사료첨가제의 제조방법.
The method according to claim 1,
The solid content of the first fraction,
Slaughter blood, characterized in that it further comprises: preparing a feed additive in a liquid form by adjusting the concentration to 10% (w/v) using a 0.9% concentration (w/v) sodium chloride (NaCl) solution (S6) Method for producing a feed additive for enhancing immunity using.
청구항 1에 있어서,
상기 제2 분획물의 고형분을,
0.9% 농도(w/v) 염화나트륨(NaCl) 용액을 이용하여 농도 25% (w/v)로 조절하여 액상 형태의 사료첨가제로 제조하는 단계(S6‘);를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 도축 혈액을 이용한 면역 증강용 사료첨가제의 제조방법.
The method according to claim 1,
The solid content of the second fraction,
Slaughter, characterized in that it further comprises: preparing a feed additive in a liquid form by adjusting the concentration to 25% (w/v) using a 0.9% concentration (w/v) sodium chloride (NaCl) solution (S6'); A method of manufacturing a feed additive for enhancing immunity using blood.
삭제delete 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항의 제조방법에 따라 제조된 사료 첨가제.Feed additive prepared according to the manufacturing method of any one of claims 1 to 3. 청구항 5의 사료 첨가제를 포함하는 가축용 사료.Animal feed comprising the feed additive of claim 5.
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