KR102177634B1 - A preprocessing kit for molecular diagnosis - Google Patents

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Abstract

본 발명은 분자진단용 전처리 키트에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 하나의 밀봉된 봉투 내에 다수의 실험용기, 마이크로 칩, 일회용 스포이트, 시료분쇄튜브, 다수의 팁 및 상기 다수의 실험용기와 마이크로 칩이 고정되어 있는 실험플레이트를 포함하되, 상기 실험플레이트는, 일정한 두께의 플라스틱판으로 이루어지고, 상면 일 측에는 다수 개의 실험용기를 눕힌 상태로 끼워서 고정할 수 있는 용기고정부가 구비되고, 타 측에는 마이크로 칩을 삽입하여 고정할 수 있는 칩안착부가 형성되며, 상기 용기고정부의 하부에는 다수 개의 실험용기를 수직으로 세워서 고정할 수 있는 용기세움부가 구비되어 질병이 발생한 현장에서 신속하고 용이하게 PCR 기반의 분자진단을 위한 전처리과정을 수행할 수 있는 분자진단용 전처리 키트에 관한 것이다.The present invention relates to a pretreatment kit for molecular diagnosis, and more particularly, a plurality of experimental containers, microchips, disposable dropper, sample crushing tubes, a plurality of tips, and the plurality of test containers and microchips are fixed in one sealed bag. Including the experimental plate, wherein the test plate is made of a plastic plate of a certain thickness, and a container fixing part is provided on one side of the upper surface to fix a plurality of test containers in a laid state, and a microchip is inserted on the other side. A chip mounting part that can be fixed is formed, and a container stand part capable of fixing a plurality of experimental containers vertically is provided at the bottom of the container fixing part, so that PCR-based molecular diagnosis can be performed quickly and easily at the site of disease. It relates to a pretreatment kit for molecular diagnosis capable of performing the pretreatment process for.

Description

분자진단용 전처리 키트{A preprocessing kit for molecular diagnosis}A preprocessing kit for molecular diagnosis

본 발명은 분자진단용 전처리 키트에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 실험플레이트, 실험용기, 마이크로 칩, 일회용 스포이트, 시료분쇄튜브 및 일회용 스포이트 팁 등이 하나의 포장봉투 내에 구비되어 질병이 발생한 현장에서 신속하고 용이하게 PCR 등의 분자진단을 위한 전처리과정을 수행할 수 있도록 한 분자진단용 전처리 키트에 관한 것이다.The present invention relates to a pretreatment kit for molecular diagnosis, and more particularly, an experiment plate, an experiment container, a microchip, a disposable dropper, a sample crushing tube, and a disposable dropper tip are provided in one packaging bag, so that it is quickly and at the site of a disease. The present invention relates to a pretreatment kit for molecular diagnosis that allows easy pretreatment for molecular diagnosis such as PCR.

분자진단은 체외진단의 하나로서, 질병의 원인이 되는 박테리아, 바이러스 등의 핵산(DNA와 RNA 또는 이들의 변형체)을 검출하여 변원의 원인 및 감염 여부를 검출하는 방법이다. Molecular diagnosis is a method of detecting the cause of mutation and infection by detecting nucleic acids (DNA and RNA or their variants) such as bacteria and viruses that cause diseases.

이러한 분자진단 과정은 크게 세 가지 단계로 구성되며 순서대로, 세포에서 순수한 DNA 또는 RNA를 얻기 위한 전처리 과정, 중합효소 연쇄반응(PCR)을 이용한 유전자 증폭과정 및 증폭 산물을 분석하여 질병의 원인 및 감염 여부를 검출하는 과정이다. This molecular diagnosis process is largely composed of three steps, in order, the pretreatment process to obtain pure DNA or RNA from cells, the gene amplification process using polymerase chain reaction (PCR), and the analysis of the amplification products to cause disease and infection. This is the process of detecting whether or not.

즉, 극소량의 유전자를 이용하여 질병의 원인이나 감염 여부를 검출하기 위해서는 유전자를 증폭하여야 한다. 중합효소 연쇄반응(Polymerase Chain Reaction: PCR)은 유전물질을 반복적으로 가열 및 냉각하여 핵산의 특정 염기서열을 갖는 부위를 연쇄적으로 복제하여 그 특정 염기서열 부위를 갖는 유전물질을 기하급수적으로 증폭할 수 있는 기술이다. 특히 PCR은 핵산의 특정영역을 시험관 또는 마이크로 칩 내에서 대량으로 증폭할 수 있기 때문에 실험실뿐만 아니라 현장에서도 사용할 수 있다. That is, in order to detect the cause of a disease or infection by using a very small amount of genes, a gene must be amplified. Polymerase Chain Reaction (PCR) repeatedly heats and cools genetic material to sequentially replicate a site having a specific nucleotide sequence of a nucleic acid, thereby amplifying the genetic material having that specific nucleotide sequence exponentially. It is a technology that can be. In particular, PCR can be used not only in the laboratory but also in the field because it can amplify a specific region of a nucleic acid in large quantities in a test tube or microchip.

그리고 PCR을 이용하여 유전자를 증폭하기 위해서는 우선 유전자 증폭의 대상이 되는 목표 유전자를 확보해야 한다. PCR 전처리 과정은 목표 유전자를 확보하는 과정으로서, 세포, 박테리아 또는 바이러스 같은 생물학적 시료로부터 목표 유전자를 포함하는 핵산을 추출하는 기술이다. In addition, in order to amplify a gene using PCR, first, a target gene to be amplified must be secured. The PCR pretreatment process is a process of securing a target gene, and is a technique of extracting a nucleic acid containing a target gene from a biological sample such as a cell, bacteria, or virus.

예를 들어, 대한민국 등록특허 10-0454869호에서는, 다음과 같은 방법으로 목표 유전자를 확보하고 있다. 1) 동물세포를 배양한 후 세포가 들어 있는 혼탁액을 원심분리하여 세포들을 회수한다. 2) 회수한 세포들에 세포 용해 버퍼를 300㎕ 첨가하였다. 3) 세포 용해 버퍼를 첨가한 후 70℃에서 5분간 방치하였다. 4) 용해 단계에서 변성된 단백질 등이 엉켜있는 것을 풀어주어 필터에 잘 통과할 수 있도록 하기 위해 용해된 세포들을 2-3회 피펫팅(pipetting) 하였다. 5) 용해된 세포들을 실리카(silica) 막으로 된 필터에 옮긴 후, 13,000 rpm에서 1분간 원심분리 하여 용액은 버리고 다시 한 번 원심분리한다. 6) 필터에 세척 버퍼를 500㎕ 첨가하여 원심분리한다. 효율을 높이기 위하여 용액을 버리고 다시 한 번 원심분리하여 완전히 세척 버퍼를 제거한다. 7) 필터에 용출 버퍼를 200㎕ 첨가하여 원심분리하고 더 많은 양의 게놈 DNA를 얻기 위하여 용출된 용액을 다시 한번 필터에서 원심분리한다.For example, in Korean Patent Registration No. 10-0454869, a target gene is secured in the following manner. 1) After culturing the animal cells, collect the cells by centrifuging the turbid solution containing the cells. 2) 300 µl of cell lysis buffer was added to the recovered cells. 3) After adding the cell lysis buffer, it was allowed to stand at 70° C. for 5 minutes. 4) In the lysis step, the lysed cells were pipetted 2-3 times to release the entangled proteins and the like so that they could pass through the filter well. 5) After transferring the dissolved cells to a filter made of a silica membrane, centrifuge at 13,000 rpm for 1 minute, discard the solution, and centrifuge again. 6) 500 µl of washing buffer was added to the filter and centrifuged. To increase the efficiency, the solution is discarded and centrifuged again to completely remove the washing buffer. 7) 200 µl of elution buffer was added to the filter and centrifuged. In order to obtain a larger amount of genomic DNA, the eluted solution was centrifuged again on the filter.

이와 같이 종래의 PCR 전처리 과정은, 크게 세 단계로 이루어지며 순서대로, 시료준비단계, 추출단계 및 농축단계로 이루어진다. 먼저, 시료준비단계는 핵산이 포함된 생물학적 시료를 준비하는 과정으로, 식물, 육류, 씨앗 등 대상이 되는 시료를 파쇄하여 균질화하는 과정이다. 즉, 동식물 시료를 최대한 잘게 파쇄하고, 덜 깨진 조직이나 핵산 추출시 문제를 야기하는 파편(Debris) 등을 분리하기 위해 상층액을 생물학적 시료로 사용한다. 추출단계는 용해 버퍼(Lysis buffer)를 이용하여 세포벽을 파괴해서 핵산이 누출되도록 하는 과정이다. Lysis buffer는 용해 버퍼로서, 세포벽을 파괴하기 위해서 사용하는 완충 용액이다. 또한, 희석 완충액이 추가로 주입될 수 있다. 희석 완충액은 핵산이 포함된 혼합물의 농도를 희석하여 PCR 저해물질의 농도를 낮추는 것이다. 그리고 농축단계는 필터 등을 이용하여 핵산의 농도를 높이는 것으로, 원심분리기를 이용하는 방법, 마그넷 비드를 이용한 방법, 주사기와 필터를 이용한 방법 등 다양한 방법이 사용되고 있다. 예를 들어, 필터를 사용하는 방법은 1) 용해된 세포를 필터에 옮겨 핵산을 고정하는 단계; 2) 필터를 세척하는 단계; 및 3) 필터로부터 핵산을 회수하는 단계로 구성된다. 끝으로 추출된 핵산에 Primer, DNA Polymerase 등이 포함된 PCR용 마스터 혼합물(master mix)을 혼합하면 PCR를 이용하여 핵산을 증폭할 수 있는 준비과정이 완료되게 된다. As described above, the conventional PCR pretreatment process is largely composed of three steps and, in order, consists of a sample preparation step, an extraction step, and a concentration step. First, the sample preparation step is a process of preparing a biological sample containing nucleic acids, and is a process of homogenizing by crushing a target sample such as plants, meat, and seeds. That is, the supernatant is used as a biological sample in order to crush animal and plant samples as finely as possible and to separate less broken tissues or debris that cause problems when extracting nucleic acids. The extraction step is a process in which nucleic acids are leaked by destroying the cell wall using a Lysis buffer. Lysis buffer is a lysis buffer and is a buffer solution used to destroy the cell wall. In addition, a dilution buffer may be additionally injected. The dilution buffer decreases the concentration of PCR inhibitors by diluting the concentration of the mixture containing the nucleic acid. In addition, the concentration step is to increase the concentration of nucleic acids using a filter or the like, and various methods such as a method using a centrifuge, a method using a magnetic bead, a method using a syringe and a filter, etc. are used. For example, a method of using a filter includes the steps of: 1) transferring the lysed cells to a filter to fix the nucleic acid; 2) washing the filter; And 3) recovering the nucleic acid from the filter. Finally, if the extracted nucleic acid is mixed with a PCR master mix containing Primer, DNA Polymerase, etc., the preparation process for amplifying the nucleic acid using PCR is completed.

그러나 종래의 PCR 전처리 공정은 대부분 실험실에서 이루어지기 때문에 반응 용기를 사용한다. 그리고 반응 용기에 시료나 버퍼를 주입 및 추출하기 위해는 피펫(pipette)을 사용한다. 주로 실험실에서 사용하는 피펫은 정량 주입이 가능하고 사용이 편리하다는 장점이 있으나 크기가 크고 고가이기 때문에 일회용으로 사용할 수 없다는 단점이 있다. However, since most of the conventional PCR pretreatment process is performed in a laboratory, a reaction vessel is used. In addition, a pipette is used to inject and extract samples or buffers into the reaction vessel. Pipettes mainly used in laboratories have the advantage that they can be metered and are convenient to use, but they have a disadvantage that they cannot be used for single use because they are large and expensive.

이와 같이, 실험실에서 이루어지는 분자진단은 비교적 정확성은 높지만 환자의 혈액 등에서 채취한 시료를 대형 검사시설이 갖춘 실험실로 이송해야 하는 문제점이 있다. 반면에 최근에 빈발한 패혈증, 뇌수막염, 폐렴, 결핵, 인플루엔자 등의 질병은 감염 속도가 빠르고 광범위한 지역으로 확산하기 때문에 현장에서 신속하게 진단할 필요성이 증대되고 있다. As described above, the molecular diagnosis performed in a laboratory is relatively accurate, but there is a problem in that a sample taken from a patient's blood or the like must be transferred to a laboratory equipped with a large test facility. On the other hand, diseases such as sepsis, meningitis, pneumonia, tuberculosis, and influenza, which are frequent in recent years, have a high rate of infection and spread to a wide area, so the need for rapid diagnosis in the field is increasing.

이에 따라 분자진단에 필요한 각종 기구와 시약을 소형화하고 일회용으로 하여 질병이 발생하고 있는 현장에서 신속하게 분자진단을 수행할 수 있도록 하는 PCR용 전처기 키트의 개발이 요청되고 있다.Accordingly, there is a demand for the development of a pre-preparative kit for PCR that enables rapid molecular diagnosis in the field where diseases are occurring by miniaturizing and disposable various instruments and reagents required for molecular diagnosis.

대한민국 등록특허 10-0454869호Korean Patent Registration No. 10-0454869

본 발명의 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 본 발명의 주된 목적은 실험플레이트, 실험용기, 마이크로 칩, 일회용 스포이트, 시료분쇄튜브 및 일회용 스포이트 팁 등이 하나의 포장봉투 내에 구비되어 질병이 발생한 현장에서 신속하고 용이하게 PCR 등의 분자진단을 위한 전처리과정을 수행할 수 있도록 한 분자진단용 전처리 키트를 제공하는 것이다.In order to solve the problems of the prior art of the present invention, the main object of the present invention is to provide an experiment plate, an experiment vessel, a microchip, a disposable dropper, a sample crushing tube, and a disposable dropper tip, etc., in one packaging bag to cause diseases. It is to provide a pretreatment kit for molecular diagnosis so that the pretreatment process for molecular diagnosis such as PCR can be performed quickly and easily in the field.

이러한 본 발명의 목적을 달성하기 위한 수단으로서, 본 발명에 따른 분자진단용 전처리 키트는, As a means for achieving the object of the present invention, the pretreatment kit for molecular diagnosis according to the present invention,

다수의 실험용기, 마이크로 칩, 일회용 스포이트, 시료분쇄튜브, 다수의 팁 및 상기 다수의 실험용기와 마이크로 칩이 고정되어 있는 실험플레이트를 포함하는 분자진단용 전처리 키트에 있어서, In the pretreatment kit for molecular diagnosis comprising a plurality of experimental containers, microchips, disposable dropper, sample crushing tube, a plurality of tips, and an experiment plate to which the plurality of experimental containers and microchips are fixed,

상기 실험플레이트는, 일정한 두께의 플라스틱 판으로 이루어지고, 상면 일 측에는 다수 개의 실험용기를 눕혀서 끼워 고정할 수 있는 용기고정부가 구비되고, 타 측에는 마이크로 칩을 삽입하여 고정할 수 있는 칩안착부가 형성되며, 상기 용기고정부의 하부에는 다수 개의 실험용기를 수직으로 세워서 고정할 수 있는 용기세움부가 구비되는 것을 특징으로 한다.The test plate is made of a plastic plate having a certain thickness, and a container fixing part is provided on one side of the upper surface to fix a plurality of test containers by lying down, and a chip seating part is formed on the other side to be fixed by inserting a microchip. , In the lower part of the container fixing part, it is characterized in that a container erecting part capable of vertically fixing a plurality of experimental containers is provided.

상기 실험용기는 원통형으로 이루어진 용기본체와 상기 용기본체의 개방된 상단에 나사 결합하는 뚜껑으로 이루어지되, 상기 용기본체에는 시료에 포함된 세포벽을 파괴하기 위한 용해 버퍼, PCR 저해물질을 희석하기 위한 희석 완충액 및 PCR용 마스터 혼합액 등이 각각 들어있다.The experimental container consists of a cylindrical container body and a lid screwed to the open top of the container body, and the container body has a lysis buffer for destroying the cell wall contained in the sample, and a dilution for diluting the PCR inhibitor. Each contains buffer and PCR master mixture.

상기 마이크로 칩은, 사각형으로 이루어진 기판으로 이루어지되, 상기 기판에는 하나의 시료챔버와 다수의 시약챔버 그리고 하나의 시료챔버와 다수의 시약챔버를 연결하는 다수의 혼합채널이 형성되고, 상기 기판의 하면에는 하나의 시료챔버, 다수의 시약챔버 및 다수의 혼합채널의 개방된 하단을 폐쇄하는 밀봉필름이 부착되고, 상기 기판의 상면에는 상기 시약챔버의 상부에 형성된 다수의 시약주입구와 상기 시료챔버의 개방된 상단을 폐쇄하는 스티커가 부착된다. The microchip is made of a rectangular substrate, and the substrate includes one sample chamber and a plurality of reagent chambers, and a plurality of mixing channels connecting one sample chamber and a plurality of reagent chambers, and the lower surface of the substrate A sealing film that closes the open bottom of one sample chamber, a plurality of reagent chambers, and a plurality of mixing channels is attached to the substrate, and a plurality of reagent injection ports formed on the upper surface of the reagent chamber and the opening of the sample chamber are on the upper surface of the substrate. A sticker is attached to close the top.

상기 일회용 스포이트는 일정 길이의 고무관과, 상기 고무관이 직선상태를 유지하도록 지지하는 본체와, 상기 본체에 일체로 형성되고 상기 고무관의 특정 부분을 가압하도록 형성된 복수 개의 탄성가압부를 포함한다. The disposable dropper includes a rubber tube of a predetermined length, a body supporting the rubber tube to maintain a straight state, and a plurality of elastic pressing portions integrally formed with the body and formed to press a specific portion of the rubber tube.

상기 시료분쇄튜브는, 일정한 크기로 이루어진 플라스틱튜브와, 상기 플라스틱튜브의 내부로 삽입되고 선단에는 지름이 확대된 분쇄부가 형성되고 상단에는 일정한 길이로 손잡이가 형성되는 분쇄봉을 포함한다. The sample pulverizing tube includes a plastic tube having a certain size, and a pulverizing rod inserted into the plastic tube and having a pulverizing portion having an enlarged diameter at a tip thereof and a handle having a predetermined length at the top.

상기 용기고정부는 원통형 실험용기의 상단부와 하단부를 각각 고정할 수 있도록 상부로 돌출되게 형성된 다수 개의 상부고정부와 하부고정부의 쌍으로 이루어지되, 상기 상부고정부는 상단이 개방된 원호형으로 이루어지고, 상기 하부고정부는 실험용기의 하단부가 끼워질 수 있는 환형으로 이루어지며, 상기 상부고정부와 하부고정부 사이에는 일정한 크기로 관통부가 형성되어 상기 상부고정부와 하부고정부에 탄성을 갖도록 한다.The container fixing part is made of a pair of a plurality of upper fixing part and a lower fixing part formed to protrude upward so as to fix the upper part and the lower part of the cylindrical test container, respectively, and the upper fixing part has an arc shape with an open top. , The lower fixing part is made of an annular shape into which the lower part of the test container can be inserted, and a through part is formed between the upper fixing part and the lower fixing part to have a certain size so as to have elasticity in the upper fixing part and the lower fixing part.

상기 칩안착부는 상기 마이크로 칩이 들어갈 수 있도록 일정한 깊이로 형성된 안착홈과, 상기 안착홈에 삽입된 상기 마이크로 칩의 일 측면을 고정할 수 있도록 상기 안착홈의 일측에 복수 개의 고정돌기가 수직으로 돌출되고, 상기 안착홈의 타측에는 상기 마이크로 칩을 안착홈에 삽입할 때 좌우로 일정 거리 이동하고 상단부에는 상기 마이크로 칩 쪽으로 일정 길이 돌출되게 걸림턱이 형성된 탄성돌기를 포함한다. The chip mounting portion has a mounting groove formed to a certain depth to allow the microchip to enter, and a plurality of fixing protrusions vertically protruding from one side of the mounting groove to fix one side of the microchip inserted into the mounting groove And, the other side of the mounting groove includes an elastic protrusion formed with a locking protrusion so as to move a certain distance left and right when the microchip is inserted into the mounting groove, and protrude a certain length toward the microchip at the upper end.

상기 용기세움부는, 상기 용기고정부의 하부에 형성되고 상기 실험플레이트의 외측으로 일정 길이 돌출되게 형성되며 상기 실험용기의 하단부가 일정 깊이 들어갈 수 있도록 일정 크기의 원통으로 이루어진 다수 개의 고정통으로 이루어진다.The container standing part is formed under the container fixing part, is formed to protrude to the outside of the test plate for a certain length, and consists of a plurality of fixing cylinders of a certain size so that the lower end of the test container can enter a certain depth.

상기 시료챔버는 상기 기판을 관통하도록 형성되고, 상기 시료챔버에 주입되는 시료가 다수의 시약챔버로 이송되는 동안에 시료가 넘치지 않을 정도의 크기로 이루어지고, 상기 다수의 시약챔버는 상기 기판의 하면에서 일정한 깊이의 홈을 형성하며, 상기 기판의 상면에는 일정한 깊이의 홈을 형성하여 상기 다수의 시약챔버에 시약을 주입할 수 있는 다수의 시약주입구를 형성한다. The sample chamber is formed to pass through the substrate, and the sample chamber is formed to a size such that the sample does not overflow while the sample injected into the sample chamber is transferred to a plurality of reagent chambers, and the plurality of reagent chambers are formed from a lower surface of the substrate. A groove having a predetermined depth is formed, and a groove having a predetermined depth is formed on the upper surface of the substrate to form a plurality of reagent injection ports through which reagents can be injected into the plurality of reagent chambers.

상기 혼합채널은 상기 기판의 하면에 일정한 폭과 길이의 홈을 형성하여 이루어지되, 상기 시약챔버와 유사한 폭과 높이를 갖는 홈으로 이루어지고 상기 시약챔버와 연결되어 상기 시료챔버 쪽으로 일정한 길이 연장되는 혼합채널부와, 상기 혼합채널부에 비해 작은 지름과 높은 높이를 갖는 홈으로 이루어지고 상기 시료챔버와 연결되고 상기 시약챔버 쪽으로 일정 길이 연장되어 상기 혼합채널부와 연결되는 협소채널부가 형성되고, 상기 혼합채널부와 협소채널부 사이에는 일정한 높이와 폭으로 단턱이 형성된다. The mixing channel is formed by forming a groove of a certain width and length on the lower surface of the substrate, and consists of a groove having a width and height similar to that of the reagent chamber, and is connected to the reagent chamber to extend a certain length toward the sample chamber. A channel portion and a narrow channel portion formed of a groove having a smaller diameter and a higher height than the mixing channel portion, connected to the sample chamber, extending a predetermined length toward the reagent chamber, and connected to the mixing channel portion, and the mixing Steps are formed with a constant height and width between the channel portion and the narrow channel portion.

상기 기판의 하면에 부착된 밀봉필름의 표면은 친수성 처리된 것을 특징으로 한다. The surface of the sealing film attached to the lower surface of the substrate is characterized in that the hydrophilic treatment.

상기 밀봉필름은 상기 시료챔버, 다수의 시약챔버 및 다수의 혼합채널을 폐쇄하고 있는 밀봉필름의 표면이 부분적으로 친수성 처리된다.In the sealing film, the surface of the sealing film closing the sample chamber, the plurality of reagent chambers, and the plurality of mixing channels is partially hydrophilic.

상기 밀봉필름은 나노 탄소나 탄소튜브와 같이 열전달율이 우수한 소재가 포함된 고분자물질로 이루어진다. The sealing film is made of a polymer material including a material having excellent heat transfer rate, such as nano carbon or carbon tube.

상기 시료분쇄튜브는, 일정한 크기로 이루어지고 하단이 폐쇄된 고무튜브와, 상기 고무튜브의 내측면에 일체로 부착되어 있는 다수 개의 분쇄포와, 상기 고무튜브의 상단에 형성된 개구부에 설치되고 일정한 지름의 원통형 본체를 포함한다.The sample pulverizing tube includes a rubber tube having a certain size and a closed lower end, a plurality of grinding cloths integrally attached to the inner side of the rubber tube, and installed in an opening formed at the upper end of the rubber tube and having a predetermined diameter. It includes a cylindrical body.

본 발명에 따르면, 상기 시료분쇄튜브를 이용하여 식물, 육류, 씨앗 등 대상이 되는 시료를 파쇄하여 균질화할 수 있고, 다수 개의 실험용기 및 일회용 스포이트를 이용하여 분쇄된 시료에 용해 완충액 및 희석액 완충액을 순서대로 주입하여 핵산을 추출할 수 있으며, 핵산이 추출된 시료에 PC 반응을 위한 마스터 혼합물을 주입하고, 마스터 혼합액이 혼합된 시료를 마이크로 칩의 시료챔버에 주입하면 주입과 동시에 다수의 혼합채널을 통해 서로 다른 시약이 들어 있는 다수의 시약챔버로 이송되어 시료와 시약이 반응하여 PCR 기반의 분자진단을 현장에서 신속하고 용이하게 수행할 수 있는 효과가 있다. According to the present invention, target samples such as plants, meat, seeds, etc. can be crushed and homogenized using the sample crushing tube, and a lysis buffer and a dilution buffer are added to the pulverized sample using a plurality of laboratory containers and disposable dropper. Nucleic acid can be extracted by sequentially injecting, and if the master mixture for PC reaction is injected into the sample from which the nucleic acid is extracted, and the sample mixed with the master mixture is injected into the sample chamber of the microchip, a number of mixing channels are opened simultaneously with injection. Through this, it is transferred to a plurality of reagent chambers containing different reagents, and the sample and reagent react, thereby enabling rapid and easy PCR-based molecular diagnosis in the field.

또한, 본 발명은 다수 개의 실험용기를 사용할 때 실험플레이트의 용기세움부에 수직으로 세운 상태로 사용할 수 있어 현장에서 분자진단 전처리과정을 신속하고 용이하게 수행할 수 있는 효과가 있다.In addition, the present invention can be used vertically on the container stand of the test plate when using a plurality of test vessels, there is an effect that can quickly and easily perform the pretreatment process for molecular diagnosis in the field.

또한, 본 발명에 따른 마이크로 칩은 하나의 시료챔버에 주입되는 시료가 밀폐된 다수의 혼합채널을 통해 다수의 시약챔버로 이송되기 때문에 단일시료에 대한 신뢰성이 향상되어 다중진단이 가능하게 되는 효과가 있다.In addition, since the microchip according to the present invention is transferred to a plurality of reagent chambers through a plurality of sealed mixing channels, a sample injected into one sample chamber is improved, thereby improving the reliability of a single sample, thereby enabling multiple diagnosis. have.

또한, 본 발명에 따른 다수의 실험용기, 마이크로 칩, 일회용 스포이트, 시료분쇄튜브, 다수의 팁 및 상기 다수의 실험용기와 마이크로 칩이 고정되어 있는 실험플레이트는 모두 일회용으로 이루어지고 또 하나의 밀봉봉투에 들어있기 때문에 현장에서 편리하게 사용할 수 있는 효과가 있다. In addition, a plurality of experimental vessels, microchips, disposable dropper, sample crushing tube, a plurality of tips, and the experimental plate to which the plurality of experimental vessels and microchips are fixed according to the present invention are all made for one-time use, and another sealed bag Because it is contained in, there is an effect that can be used conveniently in the field.

도 1은 본 발명에 따른 분자진단용 전처리 키트의 바람직한 실시 예를 보여주는 사시도,
도 2는 도 1에 도시된 분자진단용 전처리 키트의 사용상태를 보여주는 사용상태도,
도 3은 본 발명에 따른 실험플레이트의 일 예를 보여주는 평면도,
도 4는 도 3에 도시된 실험플레이트의 사시도,
도 5는 본 발명에 따른 마이크로 칩의 일예를 보여주는 사시도,
도 6은 도 5에 도시된 마이크로 칩의 평면도,
도 7은 도 5에 도시된 마이크로 칩의 단면도,
도 8은 본 발명에 따른 시료분쇄튜브의 일 예를 보여주는 사시도,
도 9는 본 발명에 따른 시료분쇄튜브의 다른 실시 예를 보여주는 사시도,
도 10은 도 9에 도시된 시료분쇄튜브의 단면도,
도 11은 본 발명에 따른 일회용 스포이트의 일예를 보여주는 사시도,
도 12은 도 11에 도시된 일회용 스포이트의 분해사시도,
도 13은 본 발명에 따른 분자진단용 전처리 키트를 이용한 전처리공정의 일예를 보여주는 설명도
도 14는 본 발명에 따른 핵산농축튜브의 일 예를 보여주는 사시도이다.1 is a perspective view showing a preferred embodiment of a pretreatment kit for molecular diagnosis according to the present invention,
2 is a use state diagram showing a state of use of the pretreatment kit for molecular diagnosis shown in FIG. 1;
3 is a plan view showing an example of an experiment plate according to the present invention,
4 is a perspective view of the experiment plate shown in FIG. 3,
5 is a perspective view showing an example of a microchip according to the present invention,
6 is a plan view of the microchip shown in FIG. 5;
7 is a cross-sectional view of the microchip shown in FIG. 5;
8 is a perspective view showing an example of a sample pulverizing tube according to the present invention,
9 is a perspective view showing another embodiment of a sample pulverizing tube according to the present invention,
10 is a cross-sectional view of the sample pulverizing tube shown in FIG. 9;
11 is a perspective view showing an example of a disposable dropper according to the present invention,
12 is an exploded perspective view of the disposable dropper shown in FIG. 11,
13 is an explanatory diagram showing an example of a pretreatment process using a pretreatment kit for molecular diagnosis according to the present invention
14 is a perspective view showing an example of a nucleic acid enrichment tube according to the present invention.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술 되는 실시 예를 통해 설명될 것이다. 그러나 본 발명은 여기에서 설명되는 실시 예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 단지, 본 실시 예는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 본 발명의 기술적 사상을 용이하게 실시할 수 있을 정도로 상세히 설명하기 위하여 제공되는 것이다. 또한, 본 발명의 실시 예를 설명함에 있어, 관련된 공지 구성 또는 기능에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 실시 예에 대해 이해를 방해한다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명은 생략한다.Advantages and features of the present invention, and a method of achieving the same will be described through embodiments to be described later in detail together with the accompanying drawings. However, the present invention is not limited to the embodiments described herein and may be embodied in other forms. However, this embodiment is provided to explain in detail enough to be able to easily implement the technical idea of the present invention to those of ordinary skill in the art. In addition, in describing an embodiment of the present invention, if it is determined that a detailed description of a related well-known configuration or function interferes with understanding of an embodiment of the present invention, a detailed description thereof will be omitted.

도 1은 본 발명에 따른 분자진단용 전처리 키트의 바람직한 실시 예를 보여주는 사시도이고, 도 2는 도 1에 도시된 분자진단용 전처리 키트의 사용상태를 보여주는 사시도이다.1 is a perspective view showing a preferred embodiment of a pretreatment kit for molecular diagnosis according to the present invention, and FIG. 2 is a perspective view showing a state of use of the pretreatment kit for molecular diagnosis shown in FIG. 1.

도시된 바와 같이, 본 발명의 분자진단용 전처리 키트(1)는, 크게 실험플레이트(2), 다수의 실험용기(3), 마이크로 칩(5), 일회용 스포이트(6), 시료분쇄튜브(7) 및 다수의 팁(8)을 포함한다. As shown, the pretreatment kit (1) for molecular diagnosis of the present invention is largely a test plate (2), a plurality of test containers (3), microchips (5), disposable dropper (6), sample crushing tube (7) And a plurality of tips 8.

바람직하게 다수의 실험용기(3)와 마이크로 칩(5)은 상기 실험플레이트(2)에 고정된 상태로 도시되지 않은 밀봉봉투에 넣어서 제공된다. 그리고 상기 일회용 스포이트(6), 시료분쇄튜브(7) 및 다수의 팁(8)은 각각 별도로 포장한 후 상기 밀봉봉투에 넣어진 상태로 제공될 수 있다.Preferably, a plurality of test containers 3 and microchips 5 are provided in a sealed bag (not shown) while being fixed to the test plate 2. In addition, the disposable dropper 6, the sample pulverizing tube 7 and the plurality of tips 8 may be separately packaged and then provided in a state of being put in the sealing bag.

상기 실험플레이트(2)는, 사각형으로 이루어진 플라스틱 판(21)으로서, 상면 일 측에는 3개의 실험용기(3)를 눕힌 상태로 끼워 고정할 수 있는 용기고정부(23)가 구비된다. 또한, 타 측에는 마이크로 칩(4)을 삽입하여 고정할 수 있는 칩안착부(24)가 형성된다. The test plate 2 is a plastic plate 21 made of a square, and is provided with a container fixing part 23 on one side of the upper surface that can be fixed by inserting the three test containers 3 lying down. Further, on the other side, a chip seating portion 24 capable of inserting and fixing the microchip 4 is formed.

그리고 상기 용기고정부(23)의 하부에는 3개의 실험용기(3)를 세워서 고정할 수 있도록 용기세움부(25)가 구비된다. 상기 용기세움부(25)는 도 2에서 보는 바와 같이, 실험용기(3)의 하단부를 끼워서 수직으로 세워 고정한 상태로 실험을 수행할 수 있도록 한다. In addition, a container erecting part 25 is provided at the lower portion of the container fixing part 23 so as to erect and fix the three experimental containers 3. As shown in Fig. 2, the container erecting unit 25 is mounted vertically by inserting the lower end of the test container 3 so that the experiment can be performed in a fixed state.

상기 실험용기(3)는 원통형으로 이루어진 용기본체(31)와, 상기 용기본체(31)의 개방된 상단에 나사 결합하는 뚜껑(32)으로 이루어진다. 상기 용기본체(31)의 바닥면은 하부로 일정한 곡률로 만곡되게 돌출되어 바닥에 남은 용액을 추출하기 용이하게 한다. 상기 3개의 용기본체(31)에는 완충액과 마스터 믹스가 들어있다. 예를 들어, 첫 번째 실험용기(3a)에는 세포벽을 파괴하는 용해 버퍼가 들어 있고, 두 번째 실험용기(3b)에는 희석 완충액이 들어 있다. 그리고 세 번째 실험용기(3c)에는 핵산 증폭에 사용되는 일정량의 마스터 믹스가 들어 있다.The experimental container 3 is composed of a container body 31 made of a cylindrical shape, and a lid 32 that is screwed to the open top of the container body 31. The bottom surface of the container body 31 protrudes downward to be curved at a constant curvature to facilitate extraction of the solution remaining on the bottom. The three container bodies 31 contain a buffer solution and a master mix. For example, a lysis buffer that destroys cell walls is contained in the first experimental vessel (3a), and a dilution buffer is contained in the second experimental vessel (3b). And the third experiment vessel (3c) contains a certain amount of the master mix used for nucleic acid amplification.

도 5 내지 도 7을 참조하면, 상기 마이크로 칩(5)은, 사각형으로 이루어진 기판(51)을 포함한다. 그리고 상기 기판(51)에는 하나의 시료챔버(53)와 다수의 시약챔버(55) 그리고 하나의 시료챔버(53)와 다수의 시약챔버(55)를 연결하는 다수의 혼합채널(54)이 형성된다. 또한, 상기 기판(51)의 하면에는 하나의 시료챔버(53), 다수의 시약챔버(55) 및 다수의 혼합채널(54)의 개방된 하단을 폐쇄하는 밀봉필름(62)이 부착된다. 따라서 상기 시약챔버(55)에는 다수의 시약이 주입된다. 그리고 상기 시료챔버(53)에 주입된 시료는 다수의 혼합채널(45)을 통해 다수의 시약챔버(55)로 이송된다. 그리고 시료는 상기 시약챔버(55) 내의 시약과 혼합된 후 상기 혼합채널(54)에서 반응하게 된다.5 to 7, the microchip 5 includes a substrate 51 formed in a square shape. In addition, a plurality of mixing channels 54 connecting one sample chamber 53 and a plurality of reagent chambers 55 and one sample chamber 53 and a plurality of reagent chambers 55 are formed on the substrate 51. do. Further, a sealing film 62 is attached to the lower surface of the substrate 51 to close the open lower ends of one sample chamber 53, a plurality of reagent chambers 55, and a plurality of mixing channels 54. Therefore, a plurality of reagents are injected into the reagent chamber 55. In addition, the samples injected into the sample chamber 53 are transferred to the plurality of reagent chambers 55 through the plurality of mixing channels 45. Then, the sample is mixed with the reagent in the reagent chamber 55 and then reacted in the mixing channel 54.

상기 시료분쇄튜브(7)는, 도 8에서 보는 바와 같이, 생물학적 시료를 준비할 때 사용하는 것으로, 식물, 육류, 씨앗 등 대상이 되는 시료를 파쇄하기 위한 것이다. 이를 위해서, 상기 시료분쇄튜브(7)는, 일정한 크기로 이루어진 플라스틱튜브(71)와, 상기 플라스틱튜브(71)의 내부로 삽입되고 선단의 지름이 확대되는 분쇄봉(72)을 포함한다. 따라서 상기 플라스틱(7)의 내부에 일정량의 시료(고기조각이나 패치)와 완충액을 넣고 상기 분쇄봉(72)을 이용하여 누르거나 문질러서 시료를 분쇄한다. The sample crushing tube 7 is used to prepare a biological sample, as shown in FIG. 8, and is for crushing a target sample such as plants, meat, and seeds. To this end, the sample pulverizing tube 7 includes a plastic tube 71 having a predetermined size, and a pulverizing rod 72 that is inserted into the plastic tube 71 and has an enlarged tip diameter. Therefore, a certain amount of a sample (meat pieces or patches) and a buffer solution are put inside the plastic 7 and the sample is crushed by pressing or rubbing it using the grinding rod 72.

이어, 상기 일회용 스포이트(6)는 도 11 및 도 12에서 보는 바와 같이, 종래의 피펫을 대신에 사용하는 것으로, 시료를 마이크로 칩(5)에 주입할 때 사용할 수 있다. 종래의 피펫은 반복적으로 사용하도록 된 것이어서 여러 실험용기에 넣어서 사용하는 과정에 서로 다른 시약과 반응을 일으키는 문제가 있다. 그러나 상기 일회용 스포이트(6)는 일회용이므로 반복 사용에 의한 오염을 방지할 수 있다. 이를 위해, 일회용 정량 스포이트(6)는 일정 길이의 고무관(61)과, 상기 고무관(61)의 특정한 부분을 가압하도록 이루어진 2개의 탄성가압부(67)(68)를 포함한다. Next, as shown in FIGS. 11 and 12, the disposable dropper 6 uses a conventional pipette instead, and can be used when injecting a sample into the microchip 5. Conventional pipettes are intended to be used repeatedly, and thus, there is a problem that reactions with different reagents occur in the process of being put into several experimental containers and used. However, since the disposable dropper 6 is disposable, contamination due to repeated use can be prevented. To this end, the disposable quantitative dropper 6 includes a rubber tube 61 of a predetermined length, and two elastic pressing parts 67 and 68 made to press a specific portion of the rubber tube 61.

따라서 상기 고무관(61)의 선단에 팁(8)을 끼우고 두 개의 탄성가압부(67) (68) 중 어느 하나를 선택하여 손가락으로 눌러 고무관(61)의 일부를 압축시킨 상태에서, 그 선단에 결합한 팁(8)을 용액 속에 담근 채로 상기 탄성가압부를 놓으면, 상기 고무관(61)의 압축된 부위가 원래의 형태로 복귀하면서 형성된 흡입력에 의해서 일정량의 용액이 팁(8)의 내부로 유입된다. 그리고 탄성가압부(67)(68)를 다시 손가락으로 누르면 고무관(61)의 일부가 압축되면서 내부에 형성되는 공기압에 의해 팁(8) 내부에 있던 용액이 밖으로 배출하게 된다. 이때 탄성가압부(67)(68)에 의해 가압되는 고무관(61)의 면적이 일정하므로 일정량의 시료나 시약을 주입 또는 추출할 수 있게 된다.Therefore, in a state in which a tip 8 is inserted into the tip of the rubber tube 61 and one of the two elastic pressing parts 67 and 68 is selected and pressed with a finger to compress a part of the rubber tube 61, the tip When the elastic pressurized part is placed while the tip 8 coupled to it is immersed in the solution, a certain amount of the solution is introduced into the inside of the tip 8 by the suction force formed while the compressed part of the rubber tube 61 returns to its original shape. . Further, when the elastic pressing parts 67 and 68 are pressed again with a finger, a part of the rubber tube 61 is compressed, and the solution inside the tip 8 is discharged to the outside by air pressure formed therein. At this time, since the area of the rubber tube 61 pressed by the elastic pressing parts 67 and 68 is constant, a certain amount of a sample or reagent can be injected or extracted.

따라서 본 발명의 분자진단용 전처리 키트(1)를 사용하면, 현장에서 분자진단을 위한 PCR을 수행할 수 있다. 즉, 상기 시료분쇄튜브(7)를 이용하여 식물, 육류, 씨앗 등 대상이 되는 시료를 파쇄하여 균질화하고, 3개의 실험용기(3)와 일회용 스포이트(6)를 사용하여 시료에 용해 완충액과 희석액 완충액을 순서대로 주입하여 핵산을 추출할 수 있다. 그리고 추출된 핵산에 PC 반응을 위한 마스터 믹서를 주입하고, 일회용 스포이트(6)를 이용하여 상기 마이크로 칩(5)의 하나의 시료챔버(53)에 시료를 주입하면, 다수의 혼합채널(54)을 통해 다수의 시약챔버(55)로 이송되게 된다. 이때, 상기 시약챔버(55)는 일정 파장 대의 광에 반응하여 형광을 발광하는 형광염료가 포함된다. 이와 같이 형광염료가 포함된 시약과 목표 유전자 그리고 DNA Polymerase 등이 포함된 마스터 믹서가 혼합되면, PCR을 수행할 수 있는 모든 준비가 완료된다. Therefore, if the pretreatment kit 1 for molecular diagnosis of the present invention is used, PCR for molecular diagnosis can be performed in the field. That is, the sample pulverization tube (7) is used to crush and homogenize the target sample such as plants, meat, seeds, etc., and the lysis buffer and diluent are added to the sample by using three experimental containers (3) and a disposable dropper (6). Nucleic acid can be extracted by sequentially injecting buffer solutions. Then, when a master mixer for PC reaction is injected into the extracted nucleic acid, and a sample is injected into one sample chamber 53 of the microchip 5 using a disposable dropper 6, a plurality of mixing channels 54 It is transferred to a plurality of reagent chambers 55 through. At this time, the reagent chamber 55 contains a fluorescent dye that emits fluorescence in response to light of a predetermined wavelength. When the reagent containing the fluorescent dye and the master mixer containing the target gene and DNA polymerase are mixed, all preparations for PCR are completed.

더욱 구체적으로, 상기 실험플레이트(2)는 도 3 및 도 4에서 보는 바와 같이, 일정한 두께의 플라스틱 판(21)으로 이루어지고, 그 상면에는 3개의 실험용기(3)를 눕혀서 끼워 고정할 수 있는 용기고정부(23)와, 하나의 마이크로 칩(4)을 삽입하여 고정할 수 있는 칩안착부(24)와, 상기 용기고정부(23)에 고정된 실험용기(3)를 꺼내서 고정할 수 있는 용기세움부(25)가 형성된다. More specifically, the test plate 2 is made of a plastic plate 21 of a certain thickness, as shown in Figs. 3 and 4, and can be fixed by laying three test containers 3 on the upper surface. The container fixing part 23, the chip seating part 24 that can be fixed by inserting one microchip 4, and the experimental container 3 fixed to the container fixing part 23 can be taken out and fixed. A container standing part 25 is formed.

바람직하게, 상기 용기고정부(23)는 원통형 실험용기(3)의 상단부와 하단부를 각각 고정할 수 있도록 상부로 일정 높이 돌출되게 형성된 상부고정부(231)와 하부고정부(232)로 이루어진다. 상기 상부고정부(231)는 상단이 개방된 원호형으로 이루어지고, 상기 하부고정부(232)는 실험용기(3)의 하단부를 끼울 수 있도록 환형으로 이루어진다. 상부고정부(231)와 하부고정부(232) 사이에는 관통부(233)가 형성되어 상부고정부(231)를 구성하는 좌우 원호형의 고정편이 좌우로 일정 간격 움직일 수 있는 탄성을 갖도록 하고, 상기 하부고정부(232)는 전후로 일정 간격 움직일 수 있는 탄성을 갖도록 한다. 따라서 상기 실험용기(231)의 하단부를 상기 하부정부(232)에 끼우고 실험용기(231)의 상단부는 상부고정부(231)의 상단에 형성된 개구부(234)를 통해 하부로 밀어서 삽입하여 고정할 수 있다. Preferably, the container fixing part 23 is made of an upper fixing part 231 and a lower fixing part 232 formed to protrude at a certain height upward so as to fix the upper and lower ends of the cylindrical experimental container 3, respectively. The upper fixing part 231 has an arc shape with an open top, and the lower fixing part 232 has an annular shape so that the lower end of the experiment container 3 can be inserted. A penetrating part 233 is formed between the upper fixing part 231 and the lower fixing part 232 so that the left and right arc-shaped fixing pieces constituting the upper fixing part 231 have elasticity that can move left and right at regular intervals, The lower fixing part 232 has elasticity that can move back and forth at a predetermined interval. Therefore, the lower end of the test container 231 is inserted into the lower part 232, and the upper end of the test container 231 is pushed downward through the opening 234 formed at the upper end of the upper fixing part 231 to be fixed. I can.

그리고 상기 칩안착부(24)는 상기 마이크로 칩(5)이 들어갈 수 있도록 일정한 깊이로 형성된 안착홈(241)으로 이루어진다. 그리고 상기 안착홈(241)의 일측에는 마이크로 칩(5)의 일 측면을 고정하는 고정돌기(242)가 돌출되어 있고, 타측에는 상기 마이크로 칩(5)을 안착홈(241)에 삽입할 때 좌우로 일정 거리 이동하는 탄성돌기(243)가 형성되어 있다. 또한, 상기 탄성돌기(243)의 상단부에는 상기 마이크로 칩(5) 쪽으로 일정 길이 돌출되게 걸림턱(245)이 형성되고, 이 두 개의 고정돌기(242) 사이에는 원호형의 홈(245)이 형성되어 마이크로 칩(5)을 안착홈(241)에서 꺼낼 때 손가락이 약간 들어갈 수 있도록 한다. 또한, 상기 탄성돌기(243)의 하단에는 관통부(247)가 형성되어 상기 탄성돌기(243)이 탄성을 갖도록 한다. In addition, the chip mounting portion 24 is formed of a mounting groove 241 formed to a predetermined depth so that the microchip 5 can be inserted. In addition, a fixing protrusion 242 for fixing one side of the microchip 5 is projected on one side of the mounting groove 241, and the other side is left and right when inserting the microchip 5 into the mounting groove 241 An elastic protrusion 243 that moves a certain distance is formed. In addition, a locking protrusion 245 is formed at the upper end of the elastic protrusion 243 to protrude a predetermined length toward the microchip 5, and an arc-shaped groove 245 is formed between the two fixing protrusions 242 When the microchip 5 is removed from the mounting groove 241, the finger can be slightly inserted. In addition, a through portion 247 is formed at the lower end of the elastic protrusion 243 so that the elastic protrusion 243 has elasticity.

그리고 상기 용기세움부(25)는, 상기 용기고정부(23)의 하부에 형성되고 상기 실험플레이트(2)의 외측으로 일정 길이 돌출되게 형성되는 3개의 원통형 고정통(251)으로 이루어진다. 상기 고정통(251)은 실험용기(3)의 하단부가 일정 깊이 들어갈 수 있는 크기의 원통으로 이루어진다. 본 명세서와 도면에서는 3개의 실험용기(3)와 하나의 마이크로 칩(5)이 도시되어 있으나 이것으로 한정되지는 않는다. 즉, 실험플레이트(2)에 고정할 수 있는 실험용기(3)나 마이크로 칩(5)의 수는 본 명세서나 도면에 있는 것으로 한정되지 않는다. And the container erecting part 25 is formed in the lower portion of the container fixing part 23 and is made of three cylindrical fixing cylinders 251 formed to protrude a predetermined length to the outside of the test plate (2). The fixed cylinder 251 is made of a cylinder having a size that allows the lower end of the experimental vessel 3 to enter a predetermined depth. In the present specification and drawings, three experimental vessels 3 and one microchip 5 are shown, but the present invention is not limited thereto. That is, the number of the experimental vessels 3 or microchips 5 that can be fixed to the experiment plate 2 is not limited to those in the specification or drawings.

이어서, 상기 마이크로 칩(5)은 도 6 및 7에서 보는 바와 같이, 투명한 고분자재료로 이루어진 일정한 두께의 기판(51)을 포함한다. 상기 기판(51)에는 하나의 시료챔버(53)와 5개의 시약챔버(55) 그리고 상기 하나의 시료챔버(53)와 5개의 시약챔버(55)를 연결하는 5개의 혼합채널(54)가 형성된 기판(51)을 포함한다. 바람직하게 상기 시료챔버(53)는 기판(51)을 상하로 관통하여 이루어진다. 그리고 상기 시약챔버(55)는 기판(51)의 하면에 일정한 깊이로 원형 홈을 형성하여 이루어진다. 또한, 상기 혼합채널(54)은 기판(51)의 하면에 일정한 폭과 길이의 홈을 형성하여 이루어진다. Subsequently, the microchip 5 includes a substrate 51 of a predetermined thickness made of a transparent polymer material, as shown in FIGS. 6 and 7. The substrate 51 has one sample chamber 53 and five reagent chambers 55, and five mixing channels 54 that connect the one sample chamber 53 and the five reagent chambers 55. It includes a substrate 51. Preferably, the sample chamber 53 penetrates the substrate 51 vertically. In addition, the reagent chamber 55 is formed by forming a circular groove at a predetermined depth on the lower surface of the substrate 51. In addition, the mixing channel 54 is formed by forming a groove having a predetermined width and length on the lower surface of the substrate 51.

그리고 기판(51)의 상면에는 시료를 주입할 수 있도록 시료주입구(53a)가 형성된다. 상기 시료주입구(53a)는 시료챔버(53)의 개방된 상단에 의해 형성된다. 그리고 다수의 시약챔버(55)에 시약을 주입할 수 있도록 다수의 시약주입구(55a)가 형성된다. 상기 시약주입구(55a)는 기판(51)의 상면에 일정한 폭과 깊이로 원형 홈을 형성하여 이루어진다. 이때, 시약주입구(54a)의 지름은 시약챔버(55)의 지름보다 작게 형성되고 깊이는 상기 시약챔버(55)와 연통하도록 한다. 따라서 상기 시약주입구(54a)와 시약챔버(55) 사이에는 일정한 폭으로 단턱(55b)이 형성된다. In addition, a sample injection port 53a is formed on the upper surface of the substrate 51 to inject a sample. The sample injection port 53a is formed by an open upper end of the sample chamber 53. In addition, a plurality of reagent injection ports 55a are formed to inject reagents into the plurality of reagent chambers 55. The reagent injection port 55a is formed by forming a circular groove with a predetermined width and depth on the upper surface of the substrate 51. At this time, the diameter of the reagent injection port 54a is formed smaller than the diameter of the reagent chamber 55 and the depth is communicated with the reagent chamber 55. Accordingly, a stepped step 55b is formed with a constant width between the reagent injection port 54a and the reagent chamber 55.

그리고 상기 시료챔버(53)는 시약챔버(55)에 비해 상대적으로 큰 지름으로 이루어진다. 예를 들어, 시료챔버(53)를 통해 주입되는 시료가 다수의 시약챔버(55)로 공급되는 동안에 시료챔버(53)로 주입되는 시료가 넘치지 않을 정도의 크기로 이루어진다. 그리고 다수의 시약챔버(55)는 근접하게 일렬로 배열되고, 다수의 혼합채널(54)은 다수의 시약챔버(55)와 하나의 시료챔버(54)를 연결할 수 있도록 형성된다. In addition, the sample chamber 53 has a relatively large diameter compared to the reagent chamber 55. For example, while the sample injected through the sample chamber 53 is supplied to the plurality of reagent chambers 55, the sample injected into the sample chamber 53 does not overflow. In addition, a plurality of reagent chambers 55 are arranged in close proximity, and a plurality of mixing channels 54 are formed to connect the plurality of reagent chambers 55 and one sample chamber 54.

또한, 상기 혼합채널(54)은 혼합채널부(541)와 협소채널부(542)의 두 부분으로 구분된다. 상기 혼합채널부(541)는 시약챔버(55)와 유사한 폭과 높이를 갖는 홈으로 이루어지고 상기 시약챔버(55)와 연결되어 시료챔버(54) 쪽으로 일정한 길이 연장된다. 상기 협소채널부(542)는 상기 혼합채널부(541)에 비해 작은 지름과 높은 높이를 갖는 홈으로 이루어지고 상기 시료챔버(53)와 연결되고 시약챔버(53) 쪽으로 일정 길이 연장되어 혼합채널부(541)이 연결된다. 그리고 평면도에서 볼 때 상기 혼합채널부(541)는 직선으로 이루어지는데 상기 협소채널부(542)의 일부는 일정한 각도로 구부러진다. 그리고 상기 혼합채널부(541)와 협소채널부(542) 사이에는 일정한 높이와 폭으로 단턱(543)이 형성된다. In addition, the mixed channel 54 is divided into two parts: a mixed channel part 541 and a narrow channel part 542. The mixing channel portion 541 is formed of a groove having a width and height similar to that of the reagent chamber 55 and is connected to the reagent chamber 55 to extend a predetermined length toward the sample chamber 54. The narrow channel portion 542 is formed of a groove having a smaller diameter and a higher height than the mixing channel portion 541, is connected to the sample chamber 53, and extends a predetermined length toward the reagent chamber 53 541 is connected. In addition, when viewed in plan view, the mixed channel portion 541 is formed in a straight line, and a part of the narrow channel portion 542 is bent at a predetermined angle. In addition, a stepped step 543 is formed between the mixed channel portion 541 and the narrow channel portion 542 with a predetermined height and width.

따라서 상기 시료챔버(53)에 주입되는 시료는 협소채널부(542)와 혼합채널부(541)를 거쳐 다수의 시약챔버(55)로 이송된다. 그리고 상기 혼합채널부(541)에서는 시약챔버(55)에서 공급되는 시약과 시료챔버(53)에서 공급되는 시료가 혼합되어 반응하게 된다. 반면에 상기 혼합채널부(541) 내의 혼합액은 상기 협소채널부(542)로 인해서 시료챔버(53)로 역류하지 않게 된다. 즉, 협소채널부(542)는 지름이 상대적으로 적고 시료챔버(53)의 내부에는 일정량의 시료가 남아 있기 때문에 혼합채널부(541) 내의 혼합액은 시료챔버(53)로 역류하지 못하게 된다. Accordingly, the sample injected into the sample chamber 53 is transferred to the plurality of reagent chambers 55 through the narrow channel portion 542 and the mixing channel portion 541. In the mixing channel part 541, the reagent supplied from the reagent chamber 55 and the sample supplied from the sample chamber 53 are mixed and reacted. On the other hand, the mixed liquid in the mixing channel part 541 does not flow back into the sample chamber 53 due to the narrow channel part 542. That is, since the narrow channel portion 542 has a relatively small diameter and a certain amount of sample remains inside the sample chamber 53, the mixed liquid in the mixing channel portion 541 cannot flow back into the sample chamber 53.

이어서, 상기 기판(51)의 하면에는 밀봉필름(52)이 접착된다. 상기 밀봉필름(52)은 기판(51)의 하면에 부착된 다수의 시약챔버(55)와 혼합채널(54) 그리고 하나의 시료챔버(53)의 개방된 하단을 폐쇄하는 역할을 한다. 또한, 상기 밀봉필름(52)은 박막 필름으로 이루어져 그 하부에 설치되는 PCR 장치의 히터부의 열과 냉기를 상기 시약챔버(55)와 혼합채널(54)로 신속하게 전달하는 역할도 수행한다. 이를 위해 상기 밀봉필름(52)은 열전달효율이 우수한 금속이나 고분자물질로 이루어지거나 나노 탄소 또는 탄소튜브를 포함하는 고분자물질로 이루어진다. 아울러, 상기 밀봉필름(52)은 시료챔버(53)에 주입된 시료를 무동력으로 다수의 혼합채널(54)을 통해 다수의 시약챔버(55)로 신속하게 이송하는 역할도 수행한다.Subsequently, a sealing film 52 is adhered to the lower surface of the substrate 51. The sealing film 52 serves to close a plurality of reagent chambers 55 and mixing channels 54 attached to the lower surface of the substrate 51 and an open lower end of one sample chamber 53. In addition, the sealing film 52 is made of a thin film and serves to quickly transfer heat and cold air from the heater unit of the PCR device installed under the film to the reagent chamber 55 and the mixing channel 54. To this end, the sealing film 52 is made of a metal or polymer material having excellent heat transfer efficiency, or a polymer material including nano carbon or carbon tube. In addition, the sealing film 52 also serves to quickly transfer the sample injected into the sample chamber 53 to the plurality of reagent chambers 55 through the plurality of mixing channels 54 without power.

이를 위해 상기 밀봉필름(52)의 표면은 친수성을 갖도록 처리되어야 한다. 즉, 통상의 플라스틱제의 밀봉필름(52)은 그 표면이 소수성을 띠거나 +전하로 대전 된 상태이기 때문에 -전하를 갖는 시료를 시료챔버(53)에 주입할 때 신속하게 이송되지 않거나 불균등하게 분배되는 문제가 있다. 이러한 문제를 해결하기 위해서 종래에는 기판(51)을 경사지게 기울이거나 펌프 또는 원심력 등의 동력을 이용하여 시료를 이송하였으나 구조가 복잡해지는 문제가 있었다. 그러나 본 발명은 밀봉필름(52)은 화학적 처리, 자외선 조사, 플라즈마 처리 등의 방법으로 그 표면이 친수성을 갖도록 처리하여 무동력으로 시료를 이송할 수 있게 된다. To this end, the surface of the sealing film 52 must be treated to have hydrophilicity. That is, since the surface of the sealing film 52 made of a conventional plastic is hydrophobic or charged with + charge, it is not transferred quickly or unevenly when a sample having a charge is injected into the sample chamber 53. There is a problem of being distributed. In order to solve this problem, conventionally, the substrate 51 is tilted obliquely or the sample is transferred using a power such as a pump or centrifugal force, but there is a problem that the structure becomes complicated. However, in the present invention, the sealing film 52 is treated so that its surface is hydrophilic by chemical treatment, ultraviolet irradiation, plasma treatment, or the like, so that the sample can be transferred without power.

한편, 밀봉필름(52)은 플라즈마 처리를 이용하여 친수성을 갖도록 처리할 수 있으나 공기 중에 노출되면 친수성의 효과가 오래가지 못한다. 또한, 친수성 처리된 밀봉필름(52)은 접착제가 잘 붙지 않기 때문에 기판(51)의 하면에 밀봉필름(52)이 부착할 수 없는 문제가 있다. 이에 따라, 본 발명의 마이크로 칩(5)에서는, 상기 기판(51)의 하면에 밀봉필름(21)을 접착한 다음 플라즈마 처리를 한다. 그러면 상기 시료챔버(53)의 시료주입구(53a)와 다수의 시약주입구(55a)를 통해 플라즈마가 기판(51)의 하면에 부착된 밀봉필름(21)의 표면을 친수성으로 처리하게 된다. 즉, 상기 시료챔버(53), 다수의 시약챔버(55) 및 다수의 혼합채널(54)을 폐쇄하고 있는 밀봉필름의 표면만을 친수성으로 처리할 수 있다. 그리고 플라즈마 처리된 마이크로 칩(5)은 알루미늄으로 이루어진 기밀봉투에 보관하여 유통함으로써 외기와 접촉하지 않도록 하여 친수성의 효과가 유지될 수 있도록 한다. On the other hand, the sealing film 52 can be treated to have hydrophilicity by using plasma treatment, but the effect of hydrophilicity does not last long when exposed to air. In addition, since the hydrophilic-treated sealing film 52 does not adhere well to the adhesive, there is a problem that the sealing film 52 cannot be attached to the lower surface of the substrate 51. Accordingly, in the microchip 5 of the present invention, after bonding the sealing film 21 to the lower surface of the substrate 51, plasma treatment is performed. Then, the surface of the sealing film 21 attached to the lower surface of the substrate 51 is hydrophilically treated by plasma through the sample injection port 53a and the plurality of reagent injection ports 55a of the sample chamber 53. That is, only the surface of the sealing film closing the sample chamber 53, the plurality of reagent chambers 55, and the plurality of mixing channels 54 may be treated with hydrophilicity. In addition, the plasma-treated microchip 5 is stored and distributed in an airtight bag made of aluminum so that it does not come into contact with the outside air, so that the hydrophilic effect can be maintained.

그리고 상기 기판(51)의 하면에는 시료챔버(53), 다수의 시약챔버(55) 및 혼합채널(54)을 따라 일정한 높이로 돌출부(58)가 형성된다. 또한, 이들을 감싸도록 사각 형으로 돌출부(59)도 형성된다. 이들 돌출부(58)(59)는 밀봉필름(52)과 기판(51) 사이의 접촉면적을 최소화하여 밀봉필름(52)을 쉽게 접착할 수 있게 한다. 또한, 상기 기판(51)의 상면에는 시료주입구(53a)와 다수의 시약주입구(55a)를 폐쇄하는 스티커(57)가 설치될 수 있다. Further, on the lower surface of the substrate 51, a protrusion 58 is formed at a predetermined height along the sample chamber 53, the plurality of reagent chambers 55, and the mixing channel 54. In addition, a protrusion 59 is also formed in a square shape to surround them. These protrusions 58 and 59 minimize the contact area between the sealing film 52 and the substrate 51 so that the sealing film 52 can be easily adhered. In addition, a sticker 57 may be installed on the upper surface of the substrate 51 to close the sample injection port 53a and the plurality of reagent injection ports 55a.

이와 같이, 상기 마이크로 칩(5)은 하나의 시료챔버(53)에 주입되는 단일시료가 밀봉필름(52)의 친수성으로 처리된 표면을 통해 다수의 시약챔버(55)에 신속하게 분주할 수 있다. 또한, 시료가 밀폐된 혼합채널(84)을 통해 분주되기 때문에 시료를 분주하는 과정에서 피펫이나 팁을 사용하지 않고 외기와도 접촉하지 않기 때문에 다른 시약이나 이물질이 유입되지 않아서 단일시료에 대한 신뢰도가 높아진다. In this way, the microchip 5 can be quickly dispensed into a plurality of reagent chambers 55 through the surface of the sealing film 52 treated with the hydrophilicity of a single sample injected into one sample chamber 53. . In addition, since the sample is dispensed through the sealed mixing channel 84, no pipette or tip is used during the dispensing of the sample, and no other reagents or foreign substances are introduced, so the reliability of a single sample is not possible. It gets higher.

한편, 상기 다수의 시약챔버(55)에는 시약주입구(55a)를 통해 시약이 주입된다. 예를 들어, 시약에는 형광염료나 프로브 등을 포함된다. 그리고 상기 시약챔버(55)에 주입된 시약은 동결 건조하여 시약챔버(55)의 바닥 즉, 밀봉필름(52)의 표면에 고착될 수 있다. 이때, 다수의 시약챔버(55)에 서로 다른 시약을 주입하는 작업은 정밀성이 요구되므로 전문가에 의해 실험실에서 이루어질 수 있다. 따라서 현장에서는 채취된 시료를 상기 시료챔버(53)에 주입하는 것만으로 서로 다른 시약과 시료를 반응시킬 수 있게 된다.Meanwhile, a reagent is injected into the plurality of reagent chambers 55 through a reagent injection port 55a. For example, reagents include fluorescent dyes and probes. In addition, the reagent injected into the reagent chamber 55 may be freeze-dried and adhered to the bottom of the reagent chamber 55, that is, the surface of the sealing film 52. At this time, since the operation of injecting different reagents into the plurality of reagent chambers 55 requires precision, it can be performed in a laboratory by an expert. Therefore, in the field, it is possible to react different reagents and samples by simply injecting the collected samples into the sample chamber 53.

이어서, 상기 시료분쇄튜브(7)는 생물학적 시료를 준비할 때 사용하는 것으로, 식물, 육류, 씨앗 등 대상이 되는 시료를 분쇄 또는 파쇄하기 위한 것이다. 이를 위해 상기 시료분쇄튜브(7)는, 일정한 크기로 이루어진 플라스틱튜브(71)와, 상기 플라스틱튜브(71)의 내부로 삽입되고 선단이 지름이 확대되는 분쇄봉(72)을 포함한다. 즉, 상기 분쇄봉(72)의 선단에는 지름이 확대되어 시료를 분해할 수 있도록 한 분쇄부(721)가 형성되고 상단에는 손가락으로 잡을 수 있는 손잡이(722)가 일체로 형성된다. 그리고 손잡이(722)의 하단에는 지름을 확대되어 분쇄과정에서 시료가 튀는 것을 차단하는 차단부(723)가 형성된다. 따라서 상기 플라스틱(7)의 내부에 일정량의 시료(고기조각이나 패치)와 완충액을 넣고 분쇄봉(72)을 상하로 이동하여 찧거나 좌우로 문질러서 시료를 분쇄할 수 있다. 그러나 분쇄봉(72)은 크기가 작고 비교적 약하기 때문에 시료가 충분히 분쇄되지 않고 사용이 다소 불편한 단점이 있다.Subsequently, the sample pulverizing tube 7 is used to prepare a biological sample, and is for pulverizing or crushing a target sample such as plants, meat, and seeds. To this end, the sample pulverizing tube 7 includes a plastic tube 71 having a predetermined size, and a pulverizing rod 72 inserted into the plastic tube 71 and having an enlarged tip diameter. That is, at the tip of the pulverizing rod 72, a pulverizing portion 721 having an enlarged diameter so that the sample can be decomposed is formed, and a handle 722 that can be held by a finger is integrally formed at the top. In addition, a blocking portion 723 is formed at the lower end of the handle 722 to block splashing of the sample during the grinding process by expanding the diameter. Therefore, a certain amount of a sample (meat pieces or patches) and a buffer solution are put inside the plastic 7 and the grinding rod 72 can be crushed by moving the grinding rod 72 up and down, or rubbing it left and right. However, since the grinding rod 72 is small in size and relatively weak, the sample is not sufficiently ground and it is somewhat inconvenient to use.

도 9 및 도 10에는 시료분쇄튜브(7)의 다른 실시 예가 도시되어 있다. 도시된 바와 같이, 본 실시 예의 시료분쇄튜브(7)는 일정한 크기로 이루어지고 하단이 폐쇄된 고무튜브(73)와, 상기 고무튜브(73)의 내측면에 일체로 부착된 다수 개의 분쇄포(74)와, 상기 고무튜브(73)의 상단에 형성된 개구부에 설치되는 일정한 지름의 원통형 본체(75)를 포함한다. 그리고 상기 원통형 본체(75)는 상하로 관통되어 시료를 넣거나 추출할 수 있도록 되어 있고 그 상단에는 뚜껑(76)이 설치되어 있다. 바람직하게 상기 원통형 본체(75)의 외주면에는 일정한 길이로 원형 홈(752)이 형성된다. 그리고 상기 원통형 본체(75)에 끼워진 고무튜브(73)의 외주면에는 상기 원형 홈(752)에 대응하게 고정링(753)이 설치되어 상기 고무튜브(73)가 쉽게 빠지지 않도록 한다.9 and 10 show another embodiment of the sample pulverizing tube 7. As shown, the sample pulverizing tube 7 of this embodiment has a rubber tube 73 having a certain size and a closed bottom, and a plurality of pulverizing cloths integrally attached to the inner side of the rubber tube 73 ( 74), and a cylindrical body 75 having a constant diameter installed in an opening formed at the upper end of the rubber tube 73. In addition, the cylindrical body 75 penetrates up and down so as to insert or extract a sample, and a lid 76 is installed on the upper end thereof. Preferably, a circular groove 752 is formed on the outer circumferential surface of the cylindrical body 75 with a predetermined length. In addition, a fixing ring 753 is installed on the outer circumferential surface of the rubber tube 73 fitted in the cylindrical body 75 to correspond to the circular groove 752 so that the rubber tube 73 does not come off easily.

즉, 본 실시 예의 시료분쇄튜브(7)는 종래의 플라스틱 튜브(71)를 고무튜브(73)로 교체하고, 분쇄봉(72) 대신에 상기 고무튜브(73)의 내부에 다수 개의 분쇄포(74)를 부착한 것을 특징으로 한다. 이때 상기 분쇄포(74)는 거칠거칠한 표면을 갖고 있다. 예를 들어, 상기 분쇄포(74)는 금속이나 합성섬유를 직조하여 휘어지는 성질을 가지면서 표면이 거칠거칠한 섬유로 이루어지거나 고무나 세라믹 또는 가요성 플라스틱판의 표면에 다이아몬드나 유릿가루 등의 경도가 높은 가루를 부착하여 꺼칠꺼칠한 표면을 갖도록 한다. That is, the sample pulverizing tube 7 of this embodiment replaces the conventional plastic tube 71 with the rubber tube 73, and instead of the pulverizing rod 72, a plurality of pulverizing cloths ( 74) is attached. At this time, the grinding cloth 74 has a rough surface. For example, the pulverized cloth 74 is made of fibers with a rough surface while having the property of bending by weaving metal or synthetic fibers, or hardness such as diamond or glass on the surface of a rubber, ceramic or flexible plastic plate. Attach high powder to make it a rough surface.

따라서 상기 고무튜브(73)의 내부에 일정량의 시료와 완충액을 넣고 두 개의 손가락으로 고무튜브(73)의 양쪽면을 잡고 누르면서 문지르면 분쇄포(74) 사이에 있는 시료가 분쇄된다. 특히, 본 실시 예의 시료분쇄튜브(7)는 손가락의 강한 힘으로 시료를 누르거나 문지를 수 있기 때문에 시료를 신속하고 충분하게 분쇄할 수 있다. Therefore, a certain amount of a sample and a buffer solution are put inside the rubber tube 73 and rubbed while holding both sides of the rubber tube 73 with two fingers, and the sample between the grinding cloth 74 is crushed. Particularly, since the sample pulverizing tube 7 of the present embodiment can press or rub the sample with a strong force of a finger, the sample can be pulverized quickly and sufficiently.

이하에서는 도 13을 참조하여 본 발명에 따른 분자진단용 전처리 키트(1)의 사용방법에 대해서 설명한다.Hereinafter, a method of using the pretreatment kit 1 for molecular diagnosis according to the present invention will be described with reference to FIG. 13.

전술한 바와 같이, 본 발명의 분자진단용 전처리 키트(1)는 하나의 밀봉된 봉투 안에 실험플레이트(2), 3개의 실험용기(3), 마이크로 칩(5), 일회용 스포이트(6), 시료분쇄튜브(7) 및 2개의 팁(8)이 들어 있기 때문에 편리하게 휴대하여 질병이 발생한 현장에서 분자진단을 위한 PCR를 수행할 수 있다. As described above, the pretreatment kit (1) for molecular diagnosis of the present invention is a test plate (2), three test containers (3), microchips (5), disposable dropper (6), sample pulverization in one sealed bag. Since the tube 7 and the two tips 8 are included, it is convenient to carry, and PCR for molecular diagnosis can be performed at the site of the disease.

먼저, 상기 시료분쇄튜브(7)를 사용하여 식물, 육류, 씨앗 등 대상이 되는 시료(조직, 패치)를 분쇄한다. 즉, 플라스틱 튜브(71)에 시료와 완충액을 넣고 분쇄봉(72)으로 찧거나 문질러서 시료를 분해하고 균질화할 수 있다. 또한, 도 9 및 도 10에 도시된 바와 같이, 고무튜브(73)에 시료와 완충액을 넣고 손가락으로 고무튜브(73)의 양쪽면을 문지르면 내측면에 부착된 분쇄포(74) 사이에 있는 시료가 으깨어지고 부서져서 분쇄되고 균질화될 수 있다.First, a target sample (tissue, patch) such as plants, meat, seeds, etc. is pulverized using the sample pulverizing tube 7. That is, the sample and the buffer solution are put in the plastic tube 71 and crushed or rubbed with the grinding rod 72 to decompose and homogenize the sample. In addition, as shown in FIGS. 9 and 10, when a sample and a buffer solution are put in the rubber tube 73 and rubbing both sides of the rubber tube 73 with a finger, the sample between the grinding cloth 74 attached to the inner surface Can be crushed and broken, ground and homogenized.

이어, 첫 번째 실험용기(31)를 용기세움부(25)의 첫 번째 고정통(251a)에 수직으로 세우고, 뚜껑(32)을 개방한 다음, 덜 깨진 조직이나 핵산 추출시 문제를 야기하는 파편(Debris) 등을 제거되도록 시료분쇄튜브(7)의 상등액을 일정량 추출하여 상기 첫 번째 실험용기(3a)에 주입한다. 이때, 상기 실험용기(32a)에는 세포벽을 파괴하여 핵산이 노출되도록 하는 용해 버퍼(Lysis buffer)가 들어 있다. Subsequently, the first experimental container 31 is vertically mounted on the first fixing container 251a of the container holder 25, the lid 32 is opened, and then less broken tissue or fragments causing problems when extracting nucleic acids. A certain amount of the supernatant of the sample pulverizing tube 7 is extracted to remove (Debris), etc., and injected into the first experimental vessel 3a. At this time, the test vessel 32a contains a Lysis buffer that destroys the cell wall to expose nucleic acids.

이어서 두 번째 실험용기(3b)를 용기세움부(25)의 두 번째 고정통(251b)에 수직으로 세우고, 핵산과 용해버퍼가 포함된 혼합물의 일정량을 추출하여 상기 실험용기(3b)에 주입한다. 이때, 상기 실험용기(3b)에는 희석 완충액(Direct lysis buffer(DLB)이 들어 있어 PCR 저해물질의 농도를 낮춰준다. 반대로 두 번째 실험용기(3b)에 들어있는 희석액의 일정량을 추출하여 핵산과 용해버퍼가 들어 있는 첫 번째 실험용기(3a)에 주입하는 것도 가능하다.Next, the second experimental vessel 3b is vertically mounted on the second fixing vessel 251b of the vessel holder 25, and a certain amount of the mixture containing the nucleic acid and the dissolution buffer is extracted and injected into the experimental vessel 3b. . At this time, the experiment container 3b contains a direct lysis buffer (DLB) to lower the concentration of the PCR inhibitor. Conversely, a certain amount of the dilution solution contained in the second test container 3b is extracted and dissolved with nucleic acids. It is also possible to inject into the first experimental container 3a containing the buffer.

그리고 세 번째 실험용기(3c)를 용기세움부(25)의 세 번째 고정통(251c)에 수직으로 세우고, 희석 완충액으로 희석된 시료의 일정량을 추출하여 세 번째 실험용기(3c)에 주입한다. 이때 세 번째 실험용기(3c)에는 PCR용 마스터 혼합물(master mix)이 들어있다. 마스터 혼합물은 PCR에 필요한 Primer, DNA Polymerase 등이 포함된 혼합액이다. 이때, 마스터 혼합물이 동결건조된 상태일 수 있다. Then, the third experiment vessel (3c) is placed vertically on the third fixing vessel (251c) of the vessel holder (25), and a certain amount of the sample diluted with the dilution buffer is extracted and injected into the third experimental vessel (3c). At this time, the third experimental vessel (3c) contains a master mix for PCR. The master mixture is a mixture containing Primer, DNA Polymerase, etc. necessary for PCR. At this time, the master mixture may be in a freeze-dried state.

끝으로 시료와 동력 건조된 마스터 혼합물이 충분히 혼합된 시료의 일정량을 일회용 스포이트(6)를 이용하여 일정량 추출하여 시험플레이트(2)의 안착홈(241)에 안착되어 있는 마이크로 칩(5)의 하나의 시료챔버(63)에 주입한다. 그러면 상기 시료챔버(53)에 시료를 주입하는 동시에 다수의 혼합채널(54)을 통해 다수의 시약챔버(55)로 시료가 이송된다. 그리고 각 시약챔버(55)의 바닥에 고착된 시약들이 용해되어 시료와 반응하게 된다. 이때, 시약과 시료의 혼합물은 다수의 혼합채널(54)에 충전되지만 협소채널부(542)에 의해 시료챔버(53)로 역류되는 않는다. Finally, a certain amount of the sample in which the sample and the power-dried master mixture are sufficiently mixed is extracted using a disposable dropper (6), and one of the microchips (5) seated in the mounting groove (241) of the test plate (2). In the sample chamber 63 of. Then, while the sample is injected into the sample chamber 53, the sample is transferred to the plurality of reagent chambers 55 through the plurality of mixing channels 54. In addition, the reagents fixed on the bottom of each reagent chamber 55 are dissolved and reacted with the sample. At this time, the mixture of the reagent and the sample is filled in the plurality of mixing channels 54 but does not flow back into the sample chamber 53 by the narrow channel portion 542.

이와 같이, 각 시약챔버(55)와 혼합채널(54)에 시료가 충전되면, 기판(51)의 표면에 스티커(57)를 부착하여 주입구를 밀폐시킨 상태에서, 도시되지 않은 가열 냉각 사이클을 수행하기 위한 PCR 장치에 상기 마이크로 칩(5)을 장착하여 목표 유전자를 대량으로 증폭하게 된다. 그리고 증폭된 유전자와 반응한 형광염료에서 발광하는 형광을 측정하고 별도의 분석과정을 통해 질병의 종류와 유무를 진단할 수 있다. In this way, when the sample is filled in each reagent chamber 55 and the mixing channel 54, a heating/cooling cycle (not shown) is performed while sealing the injection port by attaching a sticker 57 to the surface of the substrate 51. The microchip 5 is mounted on the PCR device to amplify a target gene in large quantities. In addition, the fluorescence emitted from the fluorescent dye reacted with the amplified gene is measured, and the type and presence of a disease can be diagnosed through a separate analysis process.

한편, 상기 시료분쇄튜브(7)를 이용하여 분쇄하고 용해 버퍼(Lysis buffer)로 세포벽을 파괴하여 노출한 핵산의 농도가 매우 낮은 경우에는 별도의 핵산 농축과정을 거칠 필요가 있다. On the other hand, when the concentration of the exposed nucleic acid is very low by grinding using the sample pulverization tube 7 and breaking the cell wall with a Lysis buffer, a separate nucleic acid concentration process needs to be performed.

도 14는 본 발명에 따른 핵산농축튜브(9)의 일 예가 도시되어 있다. 도시된 바와 같이, 상기 핵산농축튜브(9)는 시료를 빨아올리는 흡수재(91)가 충전된 제1 튜브(92)와, 시료를 빨아올리는 동시에 시료에 포함된 이물질을 분리제거하는 여과흡수재(93)가 충전된 제2 튜브(94), 상기 제1 튜브(92)와 제2 튜브(94) 사이에 개재되고 상기 흡수재(91)와 여과흡수재(93)에 긴밀하게 밀착되어 시료에 포함된 핵산을 흡착하여 고정하는 흡착필터(95)를 포함하여 이루어진다. 이때 상기 흡착필터(95)는 다공성 박막으로 필름으로, 시료에 포함된 핵산과 특이하게 결합하는 유리 섬유(glass fiber)나 실리카 막(silica membrane)으로 이루어진다. 즉, 상기 흡착필터(95)는 시료에 포함된 염, 단백질 및 기타 세포 내 화학물질과는 결합하지 않고 핵산에만 특이적으로 결합한다. 14 shows an example of a nucleic acid enrichment tube 9 according to the present invention. As shown, the nucleic acid concentration tube 9 includes a first tube 92 filled with an absorbent 91 for sucking up a sample, and a filter absorber 93 for separating and removing foreign substances contained in the sample while sucking up the sample. ) Filled second tube 94, interposed between the first tube 92 and the second tube 94, and in close contact with the absorbent material 91 and the filter absorbent material 93 to contain nucleic acids contained in the sample It comprises an adsorption filter 95 for adsorbing and fixing. At this time, the adsorption filter 95 is a porous thin film and is made of a glass fiber or a silica membrane that specifically binds to nucleic acids contained in the sample. That is, the adsorption filter 95 specifically binds only to nucleic acids without binding to salts, proteins, and other intracellular chemical substances contained in the sample.

따라서 용해 완충액을 주입하여 핵산이 노출된 시료에 소정량의 결합 완충액(Binding buffer)을 주입한다. 상기 결합 완충액은 시료 내의 핵산이 흡착필터(95)에 특이적으로 결합할 수 있게 한다. 그리고 핵산이 포함된 시료가 들어 있는 실험용기에 본 발명에 따른 핵산농축튜브(9)의 하단부가 잠기도록 꽂아 넣고 일정 시간 기다리면, 상기 핵산농축튜브(9)에 충전된 여과흡수재(93)와 흡수재(91)가 실험용기 내의 시료를 흡수하여 상부로 빨아올린다. 그리고 상부로 올라가는 시료는 여과흡수재(93)를 통과하는 과정에서 시료에 포함된 덜 깨진 조직이나 파편 등 기타 이물질이 제거되고, 상기 흡착필터(95)를 통과하는 동안에 시료에 포함된 핵산이 특이적으로 흡착되어 고정된다. 그리고 시료에 포함된 나머지 지방이나 단백질, 염(salt), 화학물질 등은 시료와 함께 상부로 이송되어 흡수재(91)에 흡수된다. Therefore, by injecting a lysis buffer, a predetermined amount of a binding buffer is injected into the sample exposed to the nucleic acid. The binding buffer allows the nucleic acids in the sample to specifically bind to the adsorption filter 95. In addition, after inserting the lower end of the nucleic acid enrichment tube 9 according to the present invention so that the lower end of the nucleic acid enrichment tube 9 according to the present invention is submerged and wait for a certain time, the filter absorber 93 and the absorber filled in the nucleic acid enrichment tube 9 (91) absorbs the sample in the test container and sucks it up. In addition, in the process of passing through the filter absorbent material 93, other foreign substances such as less broken tissues or debris included in the sample are removed from the sample rising upward, and the nucleic acid contained in the sample is specific while passing through the adsorption filter 95. Is adsorbed and fixed. In addition, the remaining fats, proteins, salts, chemicals, etc. contained in the sample are transferred to the top together with the sample and absorbed by the absorbent material 91.

그런 다음 상기 핵산농축튜브(9)를 일정량의 세척 완충액(Washing buffer)이 들어 있는 실험용기에 삽입하고 일정 시간 방치하면, 세척 완충액이 여과흡수재(93)와 흡수재(91)에 흡수되어 상부로 이송되면서 여과흡수재(93)와 흡착필터(95)에 있는 염(Salt), 단백질, 지방, 기타 화학물질을 흡수재(91)로 이송하게 된다. 이때, 상기 흡착필터(95)에 흡착되어 있는 핵산은 세척 완충액에 의해 분리되지 않기 때문에 결국 상기 흡착필터(95)에는 순수하게 핵산만 남게 된다.Then, when the nucleic acid concentration tube 9 is inserted into an experimental container containing a certain amount of washing buffer and left for a certain period of time, the washing buffer is absorbed by the filter absorbent material 93 and the absorbent material 91 and transferred to the top. As a result, salt, protein, fat, and other chemical substances in the filter absorbent material 93 and the adsorption filter 95 are transferred to the absorbent material 91. At this time, since the nucleic acid adsorbed on the adsorption filter 95 is not separated by the washing buffer solution, only pure nucleic acid remains in the adsorption filter 95.

이어, 핵산이 고정된 핵산농축튜브(95)를 건조한 다음, 건조된 흡착필터(95)를 분리하여 Elution Buffer가 들어 있는 실험용기에 일정 시간 담가 놓으면 상기 흡착필터(95)에 고정된 핵산을 분리되게 된다. Elution buffer는 흡착필터(95)에 부착되어 있는 핵산을 분리시키는 완충액이다. Subsequently, after drying the nucleic acid concentration tube 95 on which the nucleic acid is fixed, the dried adsorption filter 95 is separated and immersed in an experiment container containing the elution buffer for a certain period of time to separate the nucleic acid fixed on the adsorption filter 95 It will be. The elution buffer is a buffer solution for separating nucleic acids attached to the adsorption filter 95.

상술한 바와 같이, 본 발명의 분자진단용 전처리 키트(1)를 사용하면, 현장에서 분자진단 전처리과정을 신속하고 용이하게 수행할 수 있는 효과가 있다. 즉, 상기 시료분쇄튜브를 이용하여 식물, 육류, 씨앗 등 대상이 되는 시료를 파쇄하여 균질화할 수 있고, 다수 개의 실험용기 및 일회용 스포이트를 이용하여 분쇄된 시료에 용해 완충액 및 희석액 완충액을 순서대로 주입하여 핵산을 추출할 수 있다. 그리고 핵산이 추출된 시료에 PCR 반응을 위한 마스터 혼합물을 주입하고, 마스터 혼합액이 혼합된 시료를 마이크로 칩의 시료챔버에 주입하면 주입과 동시에 다수의 혼합채널을 통해 서로 다른 시약이 들어 있는 다수의 시약챔버로 이송되어 시료와 시약이 반응함으로써 PCR 기반의 분자진단을 위한 전처리과정을 신속하고 용이하게 수행할 수 있는 효과가 있다. As described above, when the pretreatment kit 1 for molecular diagnosis of the present invention is used, it is possible to quickly and easily perform the pretreatment process for molecular diagnosis in the field. That is, target samples such as plants, meat, seeds, etc. can be crushed and homogenized using the sample crushing tube, and the lysis buffer and the dilution buffer are sequentially injected into the pulverized sample using a plurality of experimental containers and disposable droppers. Thus, nucleic acids can be extracted. In addition, if a master mixture for PCR reaction is injected into a sample from which nucleic acids have been extracted, and a sample mixed with the master mixture is injected into the sample chamber of the microchip, multiple reagents containing different reagents through multiple mixing channels at the same time as injection. As the sample and reagent react by being transferred to the chamber, there is an effect that the pretreatment process for PCR-based molecular diagnosis can be quickly and easily performed.

또한, 본 발명은 다수 개의 실험용기를 사용할 때 실험플레이트의 용기세움부에 수직으로 세운 상태로 사용할 수 있고, 상기 시료분쇄튜브와 일회용 스포이트 및 다수의 팁을 일회용으로 사용하기 때문에 현장에서 분자진단을 위한 전처리과정을 용이하게 수행할 수 있다. In addition, the present invention can be used vertically on the container stand of the test plate when a plurality of test containers are used, and since the sample crushing tube, disposable dropper, and a plurality of tips are used for single use, molecular diagnosis is possible in the field. The pretreatment process for can be easily performed.

또한, 상기 마이크로 칩은 하나의 시료챔버에 주입되는 시료가 밀폐된 다수의 혼합채널을 통해 다수의 시약챔버로 이송되기 때문에 단일시료에 대한 신뢰성이 향상되어 다중진단이 가능하고, 상기 마이크로 칩의 하면에 부착되는 밀봉필름은 친수성 처리되어 시료를 무동력으로 신속하고 균등하게 분주할 수 있는 효과가 있다.In addition, since the microchip is transferred to a plurality of reagent chambers through a plurality of sealed mixing channels through a plurality of sealed mixing channels, the reliability of a single sample is improved and multiple diagnosis is possible. The sealing film attached to is treated with hydrophilicity, so that the sample can be dispensed quickly and evenly without power.

아울러, 본 발명은 다수의 실험용기, 마이크로 칩이 실험플레이트에 고정된 상태로 하나의 밀봉 봉투로 포장되고, 일회용 스포이트, 시료분쇄튜브 및 다수의 팁은 각각 낱개로 포장한 후 상기 밀봉 봉투에 포장되어 있어 운반이나 보관 중에 오염되는 것을 방지할 수 있다. In addition, the present invention is packaged in a single sealing bag with a plurality of experimental containers and microchips fixed to the test plate, and a disposable dropper, sample crushing tube, and a plurality of tips are individually packaged and then packaged in the sealing bag. It can prevent contamination during transportation or storage.

이상에서 본 발명에 관한 구체적인 실시 예에 관하여 설명하였으나, 전술된 실시 예는 모든 면에서 예시적인 것이며, 한정적인 것이 아닌 것으로 이해되어야 하며, 본 발명의 범위는 상세한 설명보다는 후술될 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 그 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다. 그리고 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여, 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야 한다. 따라서 본 명세서에 기재된 실시 예와 도면에 도시된 구성은 본 발명의 가장 바람직한 실시 예에 불과하고, 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것을 아니므로, 본 출원시점에서 이들을 대체할 수 있는 균등한 변형 예들이 있을 수 있음을 이해해야 한다. Although the specific embodiments of the present invention have been described above, the above-described embodiments are illustrative in all respects, and should be understood as not limiting, and the scope of the present invention is determined by the claims to be described later rather than the detailed description. It is shown, and all changes or modified forms derived from the meaning and scope of the claims and their equivalent concepts should be interpreted as being included in the scope of the present invention. In addition, terms or words used in the present specification and claims should not be construed as limited to their usual or dictionary meanings, and the inventor shall appropriately define the concept of terms in order to describe his own invention in the best way. Based on the principle that it is possible, it should be interpreted as a meaning and concept consistent with the technical idea of the present invention. Therefore, the embodiments described in the present specification and the configurations shown in the drawings are only the most preferred embodiments of the present invention, and do not represent all the technical ideas of the present invention, and thus equivalent modifications that can replace them at the time of application It should be understood that there may be examples.

1: 분자진단용 전처리 복장 2: 실험플레이트
3: 실험용기 5: 마이크로 칩
6: 일회용 스포이트 7: 시료분쇄튜브
8: 팁 9: 핵산농축튜브
23: 용기고정부 24: 칩안착부
25: 용기세움부 31: 용기본체
32: 뚜껑 51: 기판
52: 밀봉필름 53: 시료챔버
54: 혼합채널 55: 시약챔버
55a: 시약주입구 57: 스티커
58,59: 돌출부 71: 플라스틱튜브
72: 분쇄 봉 73: 고무튜브
74: 분쇄로 61: 고무관
67,68: 탄성가압부 91: 흡수재
92: 제1 튜브 93: 여과흡수재
94: 제2 튜브 95: 흡착필터
231: 상부고정부 232: 하부고정부
233: 관통부 241: 안착홈
242: 고정 돌기 243: 탄성돌기
251: 고 정통 541: 혼합채널부
542: 협소채널부 543: 단턱1: Pre-treatment clothes for molecular diagnosis 2: Experiment plate
3: laboratory container 5: microchip
6: Disposable dropper 7: Sample grinding tube
8: Tip 9: Nucleic Acid Concentration Tube
23: container fixing unit 24: chip seating unit
25: container building unit 31: container body
32: lid 51: substrate
52: sealing film 53: sample chamber
54: mixing channel 55: reagent chamber
55a: reagent injection port 57: sticker
58,59: protrusion 71: plastic tube
72: grinding rod 73: rubber tube
74: grinding furnace 61: rubber tube
67,68: elastic pressing unit 91: absorbent material
92: first tube 93: filter absorbent
94: second tube 95: adsorption filter
231: upper fixed government 232: lower fixed government
233: through portion 241: seating groove
242: fixing protrusion 243: elastic protrusion
251: high authentic 541: mixed channel unit
542: narrow channel portion 543: stepped

Claims (17)

다수의 실험용기, 마이크로 칩, 일회용 스포이트, 시료분쇄튜브, 다수의 팁 및 상기 다수의 실험용기와 마이크로 칩이 고정되는 실험플레이트를 포함하는 분자진단용 전처리 키트에 있어서,
상기 실험플레이트는, 일정한 두께의 플라스틱판으로 이루어지고, 상면 일 측에는 다수 개의 실험용기를 눕힌 상태로 끼워서 고정할 수 있는 용기고정부가 구비되며, 타 측에는 마이크로 칩을 삽입하여 고정할 수 있는 칩안착부가 형성되고, 상기 용기고정부의 하부에는 다수 개의 실험용기를 수직으로 세워서 고정할 수 있는 용기세움부가 구비된 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.In the pretreatment kit for molecular diagnosis comprising a plurality of experimental vessels, microchips, disposable dropper, sample crushing tube, a plurality of tips, and an experimental plate to which the plurality of experimental vessels and microchips are fixed,
The test plate is made of a plastic plate of a certain thickness, and a container fixing part is provided on one side of the upper surface to fix a plurality of test containers in a lying state, and a chip seating part capable of inserting and fixing a microchip on the other side A pretreatment kit for molecular diagnosis, characterized in that a container erecting part is provided at a lower portion of the container fixing part to fix a plurality of experimental containers vertically. 삭제delete 제1항에 있어서,
상기 마이크로 칩은, 사각형으로 이루어진 기판으로 이루어지되, 상기 기판에는 하나의 시료챔버와 다수의 시약챔버 그리고 하나의 시료챔버와 다수의 시약챔버를 연결하는 다수의 혼합채널이 형성되고, 상기 기판의 하면에는 하나의 시료챔버, 다수의 시약챔버 및 다수의 혼합채널의 개방된 하단을 폐쇄하는 밀봉필름이 부착되는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method of claim 1,
The microchip is made of a rectangular substrate, and the substrate includes one sample chamber and a plurality of reagent chambers, and a plurality of mixing channels connecting one sample chamber and a plurality of reagent chambers, and the lower surface of the substrate A pretreatment kit for molecular diagnosis, characterized in that a sealing film that closes the open bottom of one sample chamber, a plurality of reagent chambers, and a plurality of mixing channels is attached to the sample chamber. 제1항에 있어서,
상기 일회용 스포이트는 일정 길이의 고무관과, 상기 고무관이 직선상태를 유지하도록 지지하는 본체와, 상기 본체에 일체로 형성되고 상기 고무관의 특정 부분을 가압하도록 형성된 복수 개의 탄성가압부를 포함하는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method of claim 1,
The disposable dropper comprises a rubber tube of a predetermined length, a body supporting the rubber tube to maintain a straight state, and a plurality of elastic pressing parts integrally formed with the body and formed to press a specific portion of the rubber tube. Pretreatment kit for molecular diagnostics. 제1항에 있어서,
상기 시료분쇄튜브는, 일정한 크기로 이루어진 플라스틱튜브와, 상기 플라스틱튜브의 내부로 삽입되고 선단에는 지름이 확대된 분쇄부가 형성되고 상단에는 일정한 길이로 손잡이가 형성되는 분쇄 봉을 포함하는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method of claim 1,
The sample pulverizing tube comprises a plastic tube having a certain size, and a pulverizing rod inserted into the plastic tube and having a pulverizing portion having an enlarged diameter at its tip and a handle having a constant length at the top. Pretreatment kit for molecular diagnostics. 삭제delete 삭제delete 제1항에 있어서,
상기 용기세움부는, 상기 용기고정부의 하부에 형성되고 상기 실험플레이트의 외측으로 일정 길이 돌출되게 형성되며 상기 실험용기의 하단부가 일정 깊이 들어갈 수 있도록 일정 크기의 원통으로 이루어진 다수 개의 고정통로 이루어지는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method of claim 1,
The container stand is formed in a lower portion of the container fixing part, is formed to protrude a certain length to the outside of the test plate, and comprises a plurality of fixing cylinders of a certain size so that the lower end of the test container can enter a certain depth. Pretreatment kit for molecular diagnosis. 제3항에 있어서,
상기 시료챔버는 상기 기판을 관통하도록 형성되고, 상기 시료챔버에 주입되는 시료가 다수의 시약챔버로 이송되는 동안에 시료가 넘치지 않을 정도의 크기로 이루어지고, 상기 다수의 시약챔버는 상기 기판의 하면에서 일정한 깊이의 홈을 형성하며, 상기 기판의 상면에는 일정한 깊이의 홈을 형성하여 상기 다수의 시약챔버에 시약을 주입할 수 있는 다수의 시약주입구를 형성되는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method of claim 3,
The sample chamber is formed to pass through the substrate, and the sample chamber is formed to a size such that the sample does not overflow while the sample injected into the sample chamber is transferred to a plurality of reagent chambers, and the plurality of reagent chambers are formed from a lower surface of the substrate. A pretreatment kit for molecular diagnosis, characterized in that a groove of a predetermined depth is formed, and a groove of a predetermined depth is formed on the upper surface of the substrate to form a plurality of reagent injection ports through which reagents can be injected into the plurality of reagent chambers. 제9항에 있어서,
상기 혼합채널은 상기 기판의 하면에 일정한 폭과 길이의 홈을 형성하여 이루어지되, 상기 시약챔버와 같은 지름과 높이를 갖는 홈으로 이루어지고 상기 시약챔버와 연결되어 상기 시료챔버 쪽으로 일정한 길이 연장되는 혼합채널부와, 상기 혼합채널부에 비해 작은 지름과 높은 높이를 갖는 홈으로 이루어지고 상기 시료챔버와 연결되고 상기 시약챔버 쪽으로 일정 길이 연장되어 상기 혼합채널부와 연결되는 협소채널부가 형성되고, 상기 혼합채널부와 협소채널부 사이에는 일정한 높이와 폭으로 단턱이 형성되는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method of claim 9,
The mixing channel is formed by forming a groove of a predetermined width and length on the lower surface of the substrate, and is formed of a groove having the same diameter and height as the reagent chamber, and is connected to the reagent chamber to extend a predetermined length toward the sample chamber. A channel portion and a narrow channel portion formed of a groove having a smaller diameter and a higher height than the mixing channel portion, connected to the sample chamber, extending a predetermined length toward the reagent chamber, and connected to the mixing channel portion, and the mixing Pretreatment kit for molecular diagnosis, characterized in that a stepped step is formed with a constant height and width between the channel portion and the narrow channel portion. 삭제delete 제1 항에 있어서,
상기 다수의 실험용기, 마이크로 칩, 일회용 스포이트, 시료분쇄튜브, 다수의 팁 및 상기 다수의 실험용기와 마이크로 칩이 고정되어 있는 실험플레이트는 하나의 밀봉봉투에 수납되어 포장되는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method of claim 1,
The plurality of test containers, microchips, disposable dropper, sample crushing tube, a plurality of tips, and the test plate to which the plurality of test containers and microchips are fixed are accommodated and packaged in a single sealing bag. Pretreatment kit. 삭제delete 제3 항에 있어서, 상기 밀봉필름은 상기 기판의 하면에 부착된 상태로 친수성 처리하는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The pretreatment kit for molecular diagnosis according to claim 3, wherein the sealing film is hydrophilic while being attached to the lower surface of the substrate. 삭제delete 삭제delete 제1 항에 있어서,
상기 실험용기에 들어갈 수 있는 크기로 이루어지고 길이방향으로 연결되는 제1 및 제2 튜브와, 상기 제1 튜브의 내부에 충전되고 반응시료에 들어 있는 시료를 빨아올리는 흡수재와, 상기 제2 튜브의 내부에 충전되고 시료를 빨아올리는 동시에 시료에 포함된 이물질을 분리제거하는 여과흡수재와, 상기 제1 튜브와 제2 튜브 사이에 개재되고 상기 흡수재와 여과흡수재에 밀착되어 시료에 포함된 핵산을 흡착하여 고정하는 흡착필터를 포함하되, 상기 흡착필터는 다공성 박막의 필름으로서, 시료에 포함된 핵산과 특이하게 결합하는 유리 섬유(glass fiber)나 실리카 막(silica membrane)으로 이루어져서 시료에 포함된 염, 단백질 및 기타 세포 내 화학물질과는 결합하지 않고 핵산에만 특이적으로 결합하는 핵산농축튜브를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트,The method of claim 1,
First and second tubes having a size that can fit into the experiment vessel and connected in a longitudinal direction, an absorbent material filled inside the first tube and sucking up a sample contained in the reaction sample, and the second tube. A filter absorbent material that is filled inside and sucks up the sample and separates and removes foreign substances contained in the sample, and the nucleic acid contained in the sample is adsorbed by being interposed between the first tube and the second tube and in close contact with the absorbent material and the filter absorbent material. Including an adsorption filter to be fixed, wherein the adsorption filter is a porous thin film film, consisting of a glass fiber or silica membrane that specifically binds to the nucleic acid contained in the sample, so that salts and proteins included in the sample And a nucleic acid enrichment tube that specifically binds only to nucleic acids without binding to other intracellular chemical substances,
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