KR20190095079A - A preprocessing kit for molecular diagnosis - Google Patents

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Abstract

The present invention relates to a pretreatment kit for molecular diagnosis. More particularly, the present invention relates to a pretreatment kit for molecular diagnosis which can perform a pretreatment process for PCR-based molecular diagnosis quickly and easily at a site of the disease by comprising: a plurality of experimental containers in one sealed bag; microchips; a disposable dropping pipette; a sample grinding tube; multiple tips; and an experimental plate on which the plurality of experimental containers and microchips are fixed. The experimental plate is formed of a plastic plate of a constant thickness. One side of an upper surface is provided with a container fixing unit into which the plurality of experimental containers are inserted horizontally and fixed, and the other side is formed with a chip seating unit into which the microchips are inserted and fixed. A lower portion of the container fixing unit is provided with a container upright unit in which the plurality of experimental containers can be fixed vertically.

Description

분자진단용 전처리 키트{A preprocessing kit for molecular diagnosis}A preprocessing kit for molecular diagnosis

본 발명은 분자진단용 전처리 키트에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 실험플레이트, 실험용기, 마이크로 칩, 일회용 스포이트, 시료분쇄튜브 및 일회용 스포이트용 팁 등이 하나의 포장봉투 내에 구비되어 질병이 발생한 현장에서 신속하고 용이하게 PCR 등의 분자진단을 위한 전처리과정을 수행할 수 있도록 한 분자진단용 전처리 키트에 관한 것이다.The present invention relates to a molecular diagnostic pretreatment kit, and more specifically, an experimental plate, an experimental container, a microchip, a disposable dropper, a sample grinding tube, and a disposable dropper tip are provided in one packaging bag, so that the disease can be promptly performed on the spot. The present invention relates to a pre-treatment kit for molecular diagnosis, which enables to easily perform a pre-treatment process for molecular diagnosis such as PCR.

분자진단은 체외진단의 하나로서, 질병의 원인이 되는 박테리아, 바이러스 등의 핵산(DNA와 RNA 또는 이들의 변형체)을 검출하여 변원의 원인 및 감염 여부를 검출하는 방법이다. Molecular diagnostics is an in vitro diagnostic method that detects the causes of infection and infection by detecting nucleic acids (DNA and RNA or variants thereof) such as bacteria and viruses that cause diseases.

이러한 분자진단 과정은 크게 세 가지 단계로 구성되며 순서대로, 세포에서 순수한 DNA 또는 RNA를 얻기 위한 전처리 과정, 중합효소 연쇄반응(PCR)을 이용한 유전자 증폭과정 및 증폭 산물을 분석하여 질병의 원인 및 감염 여부를 검출하는 과정이다. This molecular diagnosis process consists of three major steps, in order to obtain the pure DNA or RNA in the cell, the pre-treatment process, gene amplification process using polymerase chain reaction (PCR), and analysis of the amplification products. It is a process of detecting whether or not.

즉, 극소량의 유전자를 이용하여 질병의 원인이나 감염 여부를 검출하기 위해서는 유전자를 증폭하여야 한다. 중합효소 연쇄반응(Polymerase Chain Reaction: PCR)은 유전물질을 반복적으로 가열 및 냉각하여 핵산의 특정 염기서열을 갖는 부위를 연쇄적으로 복제하여 그 특정 염기서열 부위를 갖는 유전물질을 기하급수적으로 증폭할 수 있는 기술이다. 특히 PCR은 핵산의 특정영역을 시험관 또는 마이크로 칩 내에서 대량으로 증폭할 수 있기 때문에 실험실뿐만 아니라 현장에서도 사용할 수 있다. In other words, the gene must be amplified in order to detect the cause of the disease or the presence of an infection using a very small amount of the gene. Polymerase Chain Reaction (PCR) is a method of repeatedly heating and cooling genetic material to serially replicate a region having a specific sequence of a nucleic acid to exponentially amplify the genetic material having a specific sequence region. It is a technology that can. In particular, PCR can be used in the field as well as in the laboratory because it can amplify a large amount of a specific region of the nucleic acid in vitro or in a microchip.

그리고 PCR을 이용하여 유전자를 증폭하기 위해서는 우선 유전자 증폭의 대상이 되는 목표 유전자를 확보해야 한다. PCR 전처리 과정은 목표 유전자를 확보하는 과정으로서, 세포, 박테리아 또는 바이러스 같은 생물학적 시료로부터 목표 유전자를 포함하는 핵산을 추출하는 기술이다. In order to amplify a gene using PCR, first, a target gene to be amplified should be secured. PCR pretreatment is a process of obtaining a target gene and extracting a nucleic acid containing the target gene from biological samples such as cells, bacteria or viruses.

예를 들어, 대한민국 등록특허 10-0454869호에서는, 다음과 같은 방법으로 목표 유전자를 확보하고 있다. 1) 동물세포를 배양한 후 세포가 들어 있는 혼탁액을 원심분리하여 세포들을 회수한다. 2) 회수한 세포들에 세포 용해 버퍼를 300㎕ 첨가하였다. 3) 세포 용해 버퍼를 첨가한 후 70℃에서 5분간 방치하였다. 4) 용해 단계에서 변성된 단백질 등이 엉켜있는 것을 풀어주어 필터에 잘 통과할 수 있도록 하기 위해 용해된 세포들을 2-3회 피펫팅(pipetting) 하였다. 5) 용해된 세포들을 실리카(silica) 막으로 된 필터에 옮긴 후, 13,000 rpm에서 1분간 원심분리 하여 용액은 버리고 다시 한 번 원심분리한다. 6) 필터에 세척 버퍼를 500㎕ 첨가하여 원심분리한다. 효율을 높이기 위하여 용액을 버리고 다시 한 번 원심분리하여 완전히 세척 버퍼를 제거한다. 7) 필터에 용출 버퍼를 200㎕ 첨가하여 원심분리하고 더 많은 양의 게놈 DNA를 얻기 위하여 용출된 용액을 다시 한번 필터에서 원심분리한다.For example, in Republic of Korea Patent No. 10-0454869, the target gene is secured by the following method. 1) After culturing the animal cells, the cells are collected by centrifugation of the suspension containing the cells. 2) 300 µl of cell lysis buffer was added to the recovered cells. 3) After adding the cell lysis buffer, it was allowed to stand at 70 ℃ for 5 minutes. 4) Pipet the lysed cells 2-3 times to release the denatured protein, etc. in the lysis step so that it can pass through the filter. 5) Transfer the lysed cells to a filter made of silica membrane, centrifuge for 1 minute at 13,000 rpm, discard the solution and centrifuge again. 6) Centrifuge by adding 500 µl wash buffer to the filter. To increase efficiency, discard the solution and centrifuge once again to remove the wash buffer completely. 7) Centrifuge by adding 200 μl of elution buffer to the filter and centrifuge the eluted solution once again in the filter to obtain a greater amount of genomic DNA.

이와 같이 종래의 PCR 전처리 과정은, 크게 세 단계로 이루어지며 순서대로, 시료준비단계, 추출단계 및 농축단계로 이루어진다. 먼저, 시료준비단계는 핵산이 포함된 생물학적 시료를 준비하는 과정으로, 식물, 육류, 씨앗 등 대상이 되는 시료를 파쇄하여 균질화하는 과정이다. 즉, 동식물 시료를 최대한 잘게 파쇄하고, 덜 깨진 조직이나 핵산 추출시 문제를 야기하는 파편(Debris) 등을 분리하기 위해 상층액을 생물학적 시료로 사용한다. 추출단계는 용해 버퍼(Lysis buffer)를 이용하여 세포벽을 파괴해서 핵산이 누출되도록 하는 과정이다. Lysis buffer는 용해 버퍼로서, 세포벽을 파괴하기 위해서 사용하는 완충 용액이다. 또한, 희석 완충액이 추가로 주입될 수 있다. 희석 완충액은 핵산이 포함된 혼합물의 농도를 희석하여 PCR 저해물질의 농도를 낮추는 것이다. 그리고 농축단계는 필터 등을 이용하여 핵산의 농도를 높이는 것으로, 원심분리기를 이용하는 방법, 마그넷 비드를 이용한 방법, 주사기와 필터를 이용한 방법 등 다양한 방법이 사용되고 있다. 예를 들어, 필터를 사용하는 방법은 1) 용해된 세포를 필터에 옮겨 핵산을 고정하는 단계; 2) 필터를 세척하는 단계; 및 3) 필터로부터 핵산을 회수하는 단계로 구성된다. 끝으로 추출된 핵산에 Primer, DNA Polymerase 등이 포함된 PCR용 마스터 혼합물(master mix)을 혼합하면 PCR를 이용하여 핵산을 증폭할 수 있는 준비과정이 완료되게 된다. As described above, the conventional PCR pretreatment process is composed of three steps, and in order, the sample preparation step, the extraction step, and the concentration step. First, the sample preparation step is a process of preparing a biological sample containing a nucleic acid, a process of crushing and homogenizing the target sample such as plants, meat, seeds. In other words, the supernatant is used as a biological sample to separate the flora and fauna samples as finely as possible and to separate debris, which causes problems when extracting less broken tissue or nucleic acid. The extraction step is a process in which the nucleic acid is leaked by breaking the cell wall using a Lysis buffer. Lysis buffer is a lysis buffer that is used to destroy cell walls. In addition, dilution buffer may be further injected. Dilution buffer is to reduce the concentration of PCR inhibitors by diluting the concentration of the mixture containing the nucleic acid. In addition, the concentration step is to increase the concentration of nucleic acid using a filter, etc., various methods such as a method using a centrifuge, a method using a magnet bead, a method using a syringe and a filter are used. For example, a method of using a filter may comprise the steps of: 1) transferring lysed cells to a filter to fix nucleic acid; 2) washing the filter; And 3) recovering the nucleic acid from the filter. Finally, if the extracted nucleic acid is mixed with a master mix (master mix) containing Primer, DNA Polymerase, etc., the preparation process for amplifying the nucleic acid using PCR is completed.

그러나 종래의 PCR 전처리 공정은 대부분 실험실에서 이루어지기 때문에 반응 용기를 사용한다. 그리고 반응 용기에 시료나 버퍼를 주입 및 추출하기 위해는 피펫(pipette)을 사용한다. 주로 실험실에서 사용하는 피펫은 정량 주입이 가능하고 사용이 편리하다는 장점이 있으나 크기가 크고 고가이기 때문에 일회용으로 사용할 수 없다는 단점이 있다. However, since the conventional PCR pretreatment process is mostly performed in a laboratory, a reaction vessel is used. A pipette is then used to inject and extract the sample or buffer into the reaction vessel. Pipettes used mainly in the laboratory have the advantage of being able to inject and convenient to use, but they are disadvantageous in that they cannot be used for single use because they are large and expensive.

이와 같이, 실험실에서 이루어지는 분자진단은 비교적 정확성은 높지만 환자의 혈액 등에서 채취한 시료를 대형 검사시설이 갖춘 실험실로 이송해야 하는 문제점이 있다. 반면에 최근에 빈발한 패혈증, 뇌수막염, 폐렴, 결핵, 인플루엔자 등의 질병은 감염 속도가 빠르고 광범위한 지역으로 확산하기 때문에 현장에서 신속하게 진단할 필요성이 증대되고 있다. As such, the molecular diagnosis made in the laboratory has a relatively high accuracy, but there is a problem in that a sample taken from the blood of the patient needs to be transferred to a laboratory equipped with a large testing facility. On the other hand, recently frequent diseases such as sepsis, meningitis, pneumonia, tuberculosis and influenza are rapidly spreading to a wide range of areas, and the need for rapid diagnosis in the field is increasing.

이에 따라 분자진단에 필요한 각종 기구와 시약을 소형화하고 일회용으로 하여 질병이 발생하고 있는 현장에서 신속하게 분자진단을 수행할 수 있도록 하는 PCR용 전처기 키트의 개발이 요청되고 있다.Accordingly, there is a demand for the development of a pre-processor kit for PCR, which is capable of miniaturizing various instruments and reagents necessary for molecular diagnosis and making one-time use, so that molecular diagnosis can be performed quickly in the field where a disease occurs.

대한민국 등록특허 10-0454869호Republic of Korea Patent Registration 10-0454869

본 발명의 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 본 발명의 주된 목적은 실험플레이트, 실험용기, 마이크로 칩, 일회용 스포이트, 시료분쇄튜브 및 일회용 스포이트용 팁 등이 하나의 포장봉투 내에 구비되어 질병이 발생한 현장에서 신속하고 용이하게 PCR 등의 분자진단을 위한 전처리과정을 수행할 수 있도록 한 분자진단용 전처리 키트를 제공하는 것이다.In order to solve the problems of the prior art of the present invention, the main object of the present invention is to provide a test plate, an experimental container, a microchip, a disposable dropper, a sample grinding tube and a tip for a disposable dropper in one packaging bag, so that the disease is prevented. It is to provide a pre-treatment kit for molecular diagnostics so that the pre-treatment process for molecular diagnostics such as PCR can be performed quickly and easily at the generated site.

이러한 본 발명의 목적을 달성하기 위한 수단으로서, 본 발명에 따른 분자진단용 전처리 키트는, As a means for achieving the object of the present invention, the molecular diagnostic pretreatment kit according to the present invention,

다수의 실험용기, 마이크로 칩, 일회용 스포이트, 시료분쇄튜브, 다수의 팁 및 상기 다수의 실험용기와 마이크로 칩이 고정되어 있는 실험플레이트를 포함하는 분자진단용 전처리 키트에 있어서, In the pre-treatment kit for molecular diagnostics comprising a plurality of lab vessels, microchips, disposable dropper, sample grinding tube, a plurality of tips, and a plurality of lab vessels and the test plate is fixed to the microchip,

상기 실험플레이트는, 일정한 두께의 플라스틱 판으로 이루어지고, 상면 일 측에는 다수 개의 실험용기를 눕혀서 끼워 고정할 수 있는 용기고정부가 구비되고, 타 측에는 마이크로 칩을 삽입하여 고정할 수 있는 칩안착부가 형성되며, 상기 용기고정부의 하부에는 다수 개의 실험용기를 수직으로 세워서 고정할 수 있는 용기세움부가 구비되는 것을 특징으로 한다.The test plate is made of a plastic plate of a constant thickness, one side of the upper surface is provided with a container fixing portion that can be fixed by laying a plurality of test containers, the other side is formed with a chip seat that can be fixed by inserting a microchip The lower part of the container fixing part is characterized in that it is provided with a container upright portion which can be fixed by standing a plurality of experimental containers vertically.

상기 실험용기는 원통형으로 이루어진 용기본체와 상기 용기본체의 개방된 상단에 나사 결합하는 뚜껑으로 이루어지되, 상기 용기본체에는 시료에 포함된 세포벽을 파괴하기 위한 용해 버퍼, PCR 저해물질을 희석하기 위한 희석 완충액 및 PCR용 마스터 혼합액 등이 각각 들어있다.The experiment container consists of a container body made of a cylindrical body and a cap screwed to the open top of the container body, the container body is a lysis buffer for destroying the cell wall contained in the sample, dilution to dilute the PCR inhibitor Buffer and a master mixture for PCR.

상기 마이크로 칩은, 사각형으로 이루어진 기판으로 이루어지되, 상기 기판에는 하나의 시료챔버와 다수의 시약챔버 그리고 하나의 시료챔버와 다수의 시약챔버를 연결하는 다수의 혼합채널이 형성되고, 상기 기판의 하면에는 하나의 시료챔버, 다수의 시약챔버 및 다수의 혼합챔버의 개방된 하단을 폐쇄하는 밀봉필름이 부착되고, 상기 기판의 상면에는 상기 시약챔버의 상부에 형성된 다수의 시약주입구와 상기 시료챔버의 개방된 상단을 폐쇄하는 스티커가 부착된다. The microchip is formed of a quadrangle substrate, and a plurality of mixing channels connecting one sample chamber and a plurality of reagent chambers and one sample chamber and a plurality of reagent chambers are formed on the substrate. One sample chamber, a plurality of reagent chambers and a sealing film for closing the open lower end of the plurality of mixing chambers are attached, the upper surface of the substrate a plurality of reagent inlet formed in the upper portion of the reagent chamber and the opening of the sample chamber A sticker is attached to close the top.

상기 일회용 스포이트는 일정 길이의 고무관과, 상기 고무관이 직선상태를 유지하도록 지지하는 본체와, 상기 본체에 일체로 형성되고 상기 고무관의 특정 부분을 가압하도록 형성된 복수 개의 탄성가압부를 포함한다. The disposable dropper includes a rubber tube of a predetermined length, a main body for supporting the rubber tube to maintain a straight state, and a plurality of elastic pressing parts formed integrally with the main body and configured to press a specific portion of the rubber tube.

상기 시료분쇄튜브는, 일정한 크기로 이루어진 플라스틱튜브와, 상기 플라스틱튜브의 내부로 삽입되고 선단에는 지름이 확대된 분쇄부가 형성되고 상단에는 일정한 길이로 손잡이가 형성되는 분쇄봉을 포함한다. The sample grinding tube includes a plastic tube having a predetermined size, and a grinding rod inserted into the plastic tube and having a pulverized portion having an enlarged diameter at its tip and a handle having a predetermined length at the top thereof.

상기 용기고정부는 원통형 실험용기의 상단부와 하단부를 각각 고정할 수 있도록 상부로 돌출되게 형성된 다수 개의 상부고정부와 하부고정부의 쌍으로 이루어지되, 상기 상부고정부는 상단이 개방된 원호형으로 이루어지고, 상기 하부고정부는 실험용기의 하단부가 깨워질 수 있는 환형으로 이루어지며, 상기 상부고정부와 하부고정부 사이에는 일정한 크기로 관통부가 형성되어 상기 상부고정부와 하부고정부에 탄성을 갖도록 한다.The container fixing part is composed of a pair of a plurality of upper fixing part and the lower fixing part formed to protrude upward to fix the upper end and the lower end of the cylindrical experimental container, respectively, and the upper fixing part is formed in an arc shape with an open top. The lower fixing part is formed in an annular shape in which the lower end of the test container can be woken up, and a penetration part is formed in a predetermined size between the upper fixing part and the lower fixing part to have elasticity in the upper fixing part and the lower fixing part.

상기 칩안착부는 상기 마이크로 칩(5)이 들어갈 수 있도록 일정한 깊이로 형성된 안착홈과, 상기 안착홈에 삽입된 상기 마이크로 칩의 일 측면을 고정할 수 있도록 상기 안착홈의 일측에 복수 개의 고정돌기가 수직으로 돌출되고, 상기 안착홈의 타측에는 상기 마이크로 칩을 안착홈에 삽입할 때 좌우로 일정 거리 이동하고 상단부에는 상기 마이크로 칩 쪽으로 일정 길이 돌출되게 걸림턱이 형성된 탄성돌기를 포함한다. The chip seating portion has a plurality of fixing protrusions on one side of the seating groove so as to fix one side of the seating groove formed in a predetermined depth so that the microchip 5 can enter, and the microchip inserted into the seating groove. Protruding vertically, the other side of the seating groove is moved to the left and right a certain distance when the microchip is inserted into the seating groove and the upper end includes an elastic projection formed with a locking projection to protrude a predetermined length toward the microchip.

상기 용기세움부는, 상기 용기고정부의 하부에 형성되고 상기 실험플레이트의 외측으로 일정 길이 돌출되게 형성되며 상기 실험용기의 하단부가 일정 깊이 들어갈 수 있도록 일정 크기의 원통으로 이루어진 다수 개의 고정통으로 이루어진다.The container riser is formed in the lower portion of the container fixing portion and is formed to protrude a predetermined length to the outside of the test plate, and consists of a plurality of fixed cylinders of a predetermined size cylinder so that the lower end portion of the test container can enter a predetermined depth.

상기 시료챔버는 상기 기판을 관통하도록 형성되고, 상기 시료챔버에 주입되는 시료가 다수의 시약챔버로 이송되는 동안에 시료가 넘치지 않을 정도의 크기로 이루어지고, 상기 다수의 시약챔버는 상기 기판의 하면에서 일정한 깊이의 홈을 형성하며, 상기 기판의 상면에는 일정한 깊이의 홈을 형성하여 상기 다수의 시약챔버에 시약을 주입할 수 있는 다수의 시약주입구를 형성한다.  The sample chamber is formed to penetrate the substrate, and the sample chamber is sized such that the sample does not overflow while the sample injected into the sample chamber is transferred to the plurality of reagent chambers, and the plurality of reagent chambers are formed on the bottom surface of the substrate. A groove having a constant depth is formed, and a groove having a predetermined depth is formed on the upper surface of the substrate to form a plurality of reagent inlets for injecting reagents into the plurality of reagent chambers.

상기 혼합채널은 상기 기판의 하면에 일정한 폭과 길이의 홈을 형성하여 이루어지되, 상기 시약챔버와 유사한 폭과 높이를 갖는 홈으로 이루어지고 상기 시약챔버와 연결되어 상기 시료챔버 쪽으로 일정한 길이 연장되는 혼합채널부와, 상기 혼합채널부에 비해 작은 지름과 높은 높이를 갖는 홈으로 이루어지고 상기 시료챔버와 연결되고 상기 시액챔버 쪽으로 일정 길이 연장되어 상기 혼합채널부와 연결되는 협소채널부가 형성되고, 상기 혼합채널부와 협소채널부 사이에는 일정한 높이와 폭으로 단턱이 형성된다. The mixing channel is formed by forming a groove having a predetermined width and length on the lower surface of the substrate, the mixing channel being formed with a groove having a width and height similar to that of the reagent chamber and connected to the reagent chamber to extend a predetermined length toward the sample chamber. A narrow channel portion formed of a channel portion and a groove having a smaller diameter and a higher height than the mixing channel portion and connected to the sample chamber and extending a predetermined length toward the reagent chamber to be connected to the mixing channel portion, wherein the mixing Steps are formed between the channel portion and the narrow channel portion at a constant height and width.

상기 기판의 하면에 부착되어 밀봉필름의 표면은 친수성 처리된 것을 특징으로 한다. The surface of the sealing film is attached to the lower surface of the substrate is characterized in that the hydrophilic treatment.

상기 밀봉필름은 상기 시료챔버, 다수의 시약챔버 및 다수의 혼합채널을 폐쇄하고 있는 밀봉필름의 표면이 부분적으로 친수성 처리된다. The sealing film is partially hydrophilized on the surface of the sealing film closing the sample chamber, the plurality of reagent chambers, and the plurality of mixing channels.

상기 밀봉필름은 나노 탄소나 탄소튜브와 같이 열전달율이 우수한 소재가 포함된 고분자물질로 이루어진다. The sealing film is made of a polymer material including a material having excellent heat transfer rate such as nano carbon or carbon tube.

상기 시료분쇄튜브는, 일정한 크기로 이루어지고 하단이 폐쇄된 고무튜브와, 상기 고무튜브의 내측면에 일체로 부착되어 있는 다수 개의 분쇄포)와, 상기 고무튜브의 상단에 형성된 개구부에 설치되고 일정한 지름의 원통형 본체를 포함한다.The sample pulverization tube, the rubber tube is made of a constant size and the bottom is closed, a plurality of crushing cloth is integrally attached to the inner surface of the rubber tube), and installed in the opening formed on the upper end of the rubber tube A cylindrical body of diameter.

본 발명에 따르면, 상기 시료분쇄튜브를 이용하여 식물, 육류, 씨앗 등 대상이 되는 시료를 파쇄하여 균질화할 수 있고, 다수 개의 실험용기 및 일회용 스포이트를 이용하여 분쇄된 시료에 용해 완충액 및 희석액 완충액을 순서대로 주입하여 핵산을 추출할 수 있으며, 핵산이 추출된 시료에 PC 반응을 위한 마스터 혼합물을 주입하고, 마스터 혼합액이 혼합된 시료를 마이크로 칩의 시료챔버에 주입하면 주입과 동시에 다수의 혼합채널을 통해 서로 다른 시약이 들어 있는 다수의 시약챔버로 이송되어 시료와 시약이 반응하여 PCR 기반의 분자진단을 현장에서 신속하고 용이하게 수행할 수 있는 효과가 있다. According to the present invention, the sample crushing tube can be homogenized by crushing a target sample such as plants, meat, seeds, and the like using a lysis buffer and a dilution buffer in a pulverized sample using a plurality of experimental containers and disposable droppers. Nucleic acid can be extracted by injecting in sequence, and injecting the master mixture for PC reaction into the sample from which the nucleic acid is extracted, and injecting the sample mixed with the master mixture into the sample chamber of the microchip, multiple mixing channels It is transferred to a plurality of reagent chambers containing different reagents through the reaction between the sample and the reagents has the effect that can quickly and easily perform the molecular diagnostics based on PCR.

또한, 본 발명은 다수 개의 실험용기를 사용할 때 실험플레이트의 용기세움부에 수직으로 세운 상태로 사용할 수 있어 현장에서 분자진단 전처리과정을 신속하고 용이하게 수행할 수 있는 효과가 있다.In addition, the present invention can be used in a vertical state in the container standing portion of the test plate when using a plurality of test containers there is an effect that can quickly and easily perform the molecular diagnostic pretreatment process in the field.

또한, 본 발명에 따른 마이크로 칩은 하나의 시료챔버에 주입되는 시료가 밀폐된 다수의 혼합채널을 통해 다수의 시약챔버로 이송되기 때문에 단일시료에 대한 신뢰성이 향상되어 다중진단이 가능한 효과가 있다.In addition, the microchip according to the present invention has the effect that the multi-diagnosis is possible because the sample injected into one sample chamber is transferred to a plurality of reagent chambers through a plurality of sealed mixing channels.

또한, 본 발명에 따른 다수의 실험용기, 마이크로 칩, 일회용 스포이트, 시료분쇄튜브, 다수의 팁 및 상기 다수의 실험용기와 마이크로 칩이 고정되어 있는 실험플레이트는 모두 일회용으로 이루어지고 또 하나의 밀봉봉투에 들어있기 때문에 현장에서 편리하게 사용할 수 있는 효과가 있다. In addition, the plurality of test containers, microchips, disposable dropper, sample grinding tube, a plurality of tips and the test plate to which the plurality of test containers and microchips are fixed according to the present invention are all disposable and one sealing bag Because it is contained in the effect can be used conveniently in the field.

도 1은 본 발명에 따른 분자진단용 전처리 키트의 바람직한 실시 예를 보여주는 사시도,
도 2는 도 1에 도시된 분자진단용 전처리 키트의 사용상태를 보여주는 사용상태도,
도 3은 본 발명에 따른 실험플레이트의 일 예를 보여주는 평면도,
도 4는 도 3에 도시된 실험플레이트의 사시도,
도 5는 본 발명에 따른 마이크로 칩의 일예를 보여주는 사시도,
도 6은 도 5에 도시된 마이크로 칩의 평면도,
도 7은 도 5에 도시된 마이크로 칩의 단면도,
도 8은 본 발명에 따른 시료분쇄튜브의 일 예를 보여주는 사시도,
도 9는 본 발명에 따른 시료분쇄튜브의 다른 실시 예를 보여주는 사시도,
도 10은 도 9에 도시된 시료분쇄튜브의 단면도,
도 11은 본 발명에 따른 일회용 스포이트의 일예를 보여주는 사시도,
도 12은 도 11에 도시된 일회용 스포이트의 분해사시도,
도 13은 본 발명에 따른 분자진단용 전처리 키트를 이용한 전처리공정의 일예를 보여주는 설명도
도 14는 본 발명에 따른 핵산농축튜브의 일 예를 보여주는 사시도이다.1 is a perspective view showing a preferred embodiment of the molecular diagnostic pretreatment kit according to the present invention,
Figure 2 is a use state showing the state of use of the molecular diagnostic pretreatment kit shown in Figure 1,
3 is a plan view showing an example of an experimental plate according to the present invention;
4 is a perspective view of the experimental plate shown in FIG.
5 is a perspective view showing an example of a microchip according to the present invention;
6 is a plan view of the microchip shown in FIG.
7 is a cross-sectional view of the microchip shown in FIG.
8 is a perspective view showing an example of a sample grinding tube according to the present invention;
9 is a perspective view showing another embodiment of a sample grinding tube according to the present invention;
10 is a cross-sectional view of the sample grinding tube shown in FIG.
11 is a perspective view showing an example of a disposable dropper according to the present invention;
12 is an exploded perspective view of the disposable dropper shown in FIG. 11,
13 is an explanatory diagram showing an example of a pretreatment process using a molecular diagnostic pretreatment kit according to the present invention.
14 is a perspective view showing an example of a nucleic acid enrichment tube according to the present invention.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술 되는 실시 예를 통해 설명될 것이다. 그러나 본 발명은 여기에서 설명되는 실시 예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 단지, 본 실시 예는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 본 발명의 기술적 사상을 용이하게 실시할 수 있을 정도로 상세히 설명하기 위하여 제공되는 것이다. 또한, 본 발명의 실시 예를 설명함에 있어, 관련된 공지 구성 또는 기능에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 실시 예에 대해 이해를 방해한다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명은 생략한다.Advantages and features of the present invention, and a method for achieving the same will be described in detail with reference to the accompanying drawings. However, the present invention is not limited to the embodiments described herein and may be embodied in other forms. However, this embodiment is provided to explain in detail enough to easily implement the technical idea of the present invention to those skilled in the art. In addition, in describing the embodiments of the present invention, when it is determined that the detailed description of the related well-known configuration or function interferes with the understanding of the embodiments of the present invention, the detailed description thereof will be omitted.

도 1은 본 발명에 따른 분자진단용 전처리 키트의 바람직한 실시 예를 보여주는 사시도이고, 도 2는 도 1에 도시된 분자진단용 전처리 키트의 사용상태를 보여주는 사시도이다.1 is a perspective view showing a preferred embodiment of the molecular diagnostic pretreatment kit according to the present invention, Figure 2 is a perspective view showing a state of use of the molecular diagnostic pretreatment kit shown in FIG.

도시된 바와 같이, 본 발명의 분자진단용 전처리 키트(1)는, 크게 실험플레이트(2), 다수의 실험용기(3), 마이크로 칩(5), 일회용 스포이트(6), 시료분쇄튜브(7) 및 다수의 팁(8)을 포함한다. As shown, the molecular diagnostic pretreatment kit 1 of the present invention is largely an experimental plate (2), a plurality of experimental containers (3), microchips (5), disposable dropper (6), sample grinding tube (7) And a plurality of tips 8.

바람직하게 다수의 실험용기(3)와 마이크로 칩(5)은 상기 실험플레이트(2)에 고정된 상태로 도시되지 않은 밀봉봉투에 넣어서 제공된다. 그리고 상기 일회용 스포이트(6), 시료분쇄튜브(7) 및 다수의 팁(8)은 각각 별도로 포장한 후 상기 밀봉봉투에 넣어진 상태로 제공될 수 있다.Preferably, a plurality of experimental vessels 3 and microchips 5 are provided in a sealed bag not shown in a fixed state to the experimental plate 2. The disposable dropper 6, the sample grinding tube 7, and the plurality of tips 8 may be provided in a state of being enclosed in the sealing bag after separately packaging.

상기 실험플레이트(2)는, 사각형으로 이루어진 플라스틱 판(21)으로서, 상면 일 측에는 3개의 실험용기(3)를 눕힌 상태로 끼워 고정할 수 있는 용기고정부(23)가 구비된다. 또한, 타 측에는 마이크로 칩(4)을 삽입하여 고정할 수 있는 칩안착부(24)가 형성된다. The test plate (2), a plastic plate 21 made of a square, the upper surface side is provided with a container fixing portion 23 that can be fixed to the three test vessels (3) laid in a lying state. In addition, the chip seat portion 24 which can be fixed by inserting the microchip 4 is formed on the other side.

그리고 상기 용기고정부(23)의 하부에는 3개의 실험용기(3)를 세워서 고정할 수 있도록 용기세움부(25)가 구비된다. 상기 용기세움부(25)는 도 2에서 보는 바와 같이, 실험용기(3)의 하단부를 끼워서 수직으로 세워 고정한 상태로 실험을 수행할 수 있도록 한다. And the lower portion of the container fixing portion 23 is provided with a container upright portion 25 to be fixed by standing three experimental containers (3). As shown in FIG. 2, the container upright portion 25 allows the experiment to be carried out in a vertically fixed state by inserting a lower end portion of the experimental container 3.

상기 실험용기(3)는 원통형으로 이루어진 용기본체(31)와, 상기 용기본체(31)의 개방된 상단에 나사 결합하는 뚜껑(32)으로 이루어진다. 상기 용기본체(31)의 바닥면은 하부로 일정한 곡률로 만곡되게 돌출되어 바닥에 남은 용액을 추출하기 용이하게 한다. 상기 3개의 용기본체(31)에는 완충액과 마스터 믹스가 들어있다. 예를 들어, 첫 번째 실험용기(3a)에는 세포벽을 파괴하는 용해 버퍼가 들어 있고, 두 번째 실험용기(3b)에는 희석 완충액이 들어 있다. 그리고 세 번째 실험용기(3c)에는 핵산 증폭에 사용되는 일정량의 마스터 믹스가 들어 있다.The experimental container 3 is made of a container body 31 made of a cylindrical shape, and a lid 32 screwed to the open top of the container body 31. The bottom surface of the container body 31 is protruded to be curved with a constant curvature to the bottom to facilitate the extraction of the remaining solution on the bottom. The three container bodies 31 contain a buffer and a master mix. For example, the first experimental container 3a contains a lysis buffer that destroys the cell wall, and the second experimental container 3b contains a dilution buffer. And the third experimental container (3c) contains a certain amount of the master mix used for nucleic acid amplification.

도 5 내지 도 7을 참조하면, 상기 마이크로 칩(5)은, 사각형으로 이루어진 기판(51)을 포함한다. 그리고 상기 기판(51)에는 하나의 시료챔버(53)와 다수의 시약챔버(55) 그리고 하나의 시료챔버(53)와 다수의 시약챔버(55)를 연결하는 다수의 혼합채널(54)이 형성된다. 또한, 상기 기판(51)의 하면에는 하나의 시료챔버(53), 다수의 시약챔버(55) 및 다수의 혼합챔버(54)의 개방된 하단을 폐쇄하는 밀봉필름(62)이 부착된다. 따라서 상기 시약챔버(55)에는 다수의 시약이 주입된다. 그리고 상기 시료챔버(53)에 주입된 시료는 다수의 혼합채널(45)을 통해 다수의 시약챔버(55)로 이송된다. 그리고 시료는 상기 시약챔버(55) 내의 시약과 혼합된 후 상기 혼합채널(45)에서 반응하게 된다.5 to 7, the microchip 5 includes a substrate 51 made of a quadrangle. In addition, one substrate chamber 53, a plurality of reagent chambers 55, and a plurality of mixing channels 54 connecting one sample chamber 53 and a plurality of reagent chambers 55 are formed on the substrate 51. do. In addition, a sealing film 62 is attached to the lower surface of the substrate 51 to close the open lower ends of one sample chamber 53, a plurality of reagent chambers 55, and a plurality of mixing chambers 54. Therefore, a plurality of reagents are injected into the reagent chamber 55. The sample injected into the sample chamber 53 is transferred to the plurality of reagent chambers 55 through the plurality of mixing channels 45. The sample reacts with the reagent in the reagent chamber 55 and then reacts in the mixing channel 45.

상기 시료분쇄튜브(7)는, 도 8에서 보는 바와 같이, 생물학적 시료를 준비할 때 사용하는 것으로, 식물, 육류, 씨앗 등 대상이 되는 시료를 파쇄하기 위한 것이다. 이를 위해서, 상기 시료분쇄튜브(7)는, 일정한 크기로 이루어진 플라스틱튜브(71)와, 상기 플라스틱튜브(71)의 내부로 삽입되고 선단의 지름이 확대되는 분쇄봉(72)을 포함한다. 따라서 상기 플라스틱(7)의 내부에 일정량의 시료(고기조각이나 패치)와 완충액을 넣고 상기 분쇄봉(72)을 이용하여 누르거나 문질러서 시료를 분쇄한다. As shown in FIG. 8, the sample crushing tube 7 is used to prepare a biological sample, and is used to crush a target sample such as a plant, meat, or seed. To this end, the sample grinding tube 7 includes a plastic tube 71 having a predetermined size, and a grinding rod 72 is inserted into the plastic tube 71 and the diameter of the tip is expanded. Therefore, a predetermined amount of sample (meat pieces or patches) and a buffer solution are put into the plastic 7 and the sample is crushed by pressing or rubbing using the grinding rod 72.

이어, 상기 일회용 스포이트(6)는 도 11 및 도 12에서 보는 바와 같이, 종래의 피펫을 대신에 사용하는 것으로, 시료를 마이크로 칩(5)에 주입할 때 사용할 수 있다. 종래의 피펫은 반복적으로 사용하도록 된 것이어서 여러 실험용기에 넣어서 사용하는 과정에 서로 다른 시약과 반응을 일으키는 문제가 있다. 그러나 상기 일회용 스포이트(6)는 일회용이므로 반복 사용에 의한 오염을 방지할 수 있다. 이를 위해, 일회용 정량 스포이트(6)는 일정 길이의 고무관(61)과, 상기 고무관(61)의 특정한 부분을 가압하도록 이루어진 2개의 탄성가압부(67)(68)를 포함한다. Subsequently, the disposable dropper 6 may be used to inject a sample into the microchip 5 by using a conventional pipette as shown in FIGS. 11 and 12. Conventional pipettes are intended to be used repeatedly so that there is a problem of reacting with different reagents in the process of using them in various experimental containers. However, since the disposable dropper 6 is disposable, it is possible to prevent contamination by repeated use. To this end, the disposable dose dropper 6 includes a rubber tube 61 of a predetermined length and two elastic pressing portions 67 and 68 configured to press a specific portion of the rubber tube 61.

따라서 상기 고무관(61)의 선단에 팁(8)을 끼우고 두 개의 탄성가압부(67) (68) 중 어느 하나를 선택하여 손가락으로 눌러 고무관(61)의 일부를 압축시킨 상태에서, 그 선단에 결합한 팁(8)을 용액 속에 담근 채로 상기 탄성가압부를 놓으면, 상기 고무관(61)의 압축된 부위가 원래의 형태로 복귀하면서 형성된 흡입력에 의해서 일정량의 용액이 팁(8)의 내부로 유입된다. 그리고 탄성가압부(67)(68)를 다시 손가락으로 누르면 고무관(61)의 일부가 압축되면서 내부에 형성되는 공기압에 의해 팁(8) 내부에 있던 용액이 밖으로 배출하게 된다. 이때 탄성가압부(67)(68)에 의해 가압되는 고무관(61)의 면적이 일정하므로 일정량의 시료나 시약을 주입 또는 추출할 수 있게 된다.Therefore, the tip 8 is inserted into the tip of the rubber tube 61, and any one of the two elastic pressing parts 67 and 68 is selected and pressed with a finger to compress a part of the rubber tube 61. When the elastic pressurizing part is placed while the tip 8 coupled to it is placed in the solution, a predetermined amount of solution is introduced into the tip 8 by the suction force formed while the compressed portion of the rubber tube 61 returns to its original form. . And when pressing the elastic pressing unit 67, 68 again with a finger, a portion of the rubber tube 61 is compressed and the solution inside the tip 8 is discharged out by the air pressure formed therein. In this case, since the area of the rubber tube 61 pressurized by the elastic pressing parts 67 and 68 is constant, a certain amount of sample or reagent can be injected or extracted.

따라서 본 발명의 분자진단용 전처리 키트(1)를 사용하면, 현장에서 분자진단을 위한 PCR을 수행할 수 있다. 즉, 상기 시료분쇄튜브(7)를 이용하여 식물, 육류, 씨앗 등 대상이 되는 시료를 파쇄하여 균질화하고, 3개의 실험용기(3)와 일회용 스포이트(6)를 사용하여 시료에 용해 완충액과 희석액 완충액을 순서대로 주입하여 핵산을 추출할 수 있다. 그리고 추출된 핵산에 PC 반응을 위한 마스터 믹서를 주입하고, 일회용 스포이트(6)를 이용하여 상기 마이크로 칩(5)의 하나의 시료챔버(53)에 시료를 주입하면, 다수의 혼합채널(54)을 통해 다수의 시약챔버(55)로 이송되게 된다. 이때, 상기 시약챔버(55)는 일정 파장 대의 광에 반응하여 형광을 발광하는 형광염료가 포함된다. 이와 같이 형광염료가 포함된 시약과 목표 유전자 그리고 DNA Polymerase 등이 포함된 마스터 믹서가 혼합되면, PCR을 수행할 수 있는 모든 준비가 완료된다. Therefore, using the molecular diagnostic pretreatment kit (1) of the present invention, it is possible to perform PCR for molecular diagnostics in the field. That is, the sample crushing tube 7 is homogenized by crushing the target sample such as plants, meat, seeds, etc., and using the three experimental containers 3 and the disposable dropper 6 to dissolve the buffer and the diluent in the sample. Nucleic acids can be extracted by sequentially injecting buffers. Injecting the master mixer for the PC reaction to the extracted nucleic acid, and injecting a sample into one sample chamber 53 of the microchip 5 using a disposable dropper 6, a plurality of mixing channels 54 It is transferred to the plurality of reagent chambers 55 through. At this time, the reagent chamber 55 includes a fluorescent dye for emitting fluorescence in response to light of a predetermined wavelength band. As such, when the reagent containing the fluorescent dye and the master mixer including the target gene and DNA polymerase are mixed, all preparations for PCR can be completed.

더욱 구체적으로, 상기 실험플레이트(2)는 도 3 및 도 4에서 보는 바와 같이, 일정한 두께의 플라스틱 판(21)으로 이루어지고, 그 상면에는 3개의 실험용기(3)를 눕혀서 끼워 고정할 수 있는 용기고정부(23)와, 하나의 마이크로 칩(4)을 삽입하여 고정할 수 있는 칩안착부(24)와, 상기 용기고정부(23)에 고정된 실험용기(3)를 꺼내서 고정할 수 있는 용기세움부(25)가 형성된다. More specifically, the test plate 2 is made of a plastic plate 21 of a constant thickness, as shown in Figures 3 and 4, the upper surface of the three test vessels (3) can be fixed by laying down The container fixing part 23, the chip mounting part 24 which can insert and fix one microchip 4, and the test container 3 fixed to the container fixing part 23 can be taken out and fixed. The container riser 25 is formed.

바람직하게, 상기 용기고정부(23)는 원통형 실험용기(3)의 상단부와 하단부를 각각 고정할 수 있도록 상부로 일정 높이 돌출되게 형성된 상부고정부(231)와 하부고정부(232)로 이루어진다. 상기 상부고정부(231)는 상단이 개방된 원호형으로 이루어지고, 상기 하부고정부(232)는 실험용기(3)의 하단부를 깨울 수 있도록 환형으로 이루어진다. 상부고정부(231)와 하부고정부(232) 사이에는 관통부(233)가 형성되어 상부고정부(231)를 구성하는 좌우 원호형의 고정편이 좌우로 일정 간격 움직일 수 있는 탄성을 갖도록 하고, 상기 하부고정부(232)는 전후로 일정 간격 움직일 수 있는 탄성을 갖도록 한다. 따라서 상기 실험용기(231)의 하단부를 상기 하부정부(232)에 끼우고 실험용기(231)의 상단부는 상부고정부(231)의 상단에 형성된 개구부(234)를 통해 하부로 밀어서 삽입하여 고정할 수 있다. Preferably, the container fixing part 23 is composed of an upper fixing part 231 and a lower fixing part 232 formed to protrude a predetermined height upward to fix the upper end and the lower end of the cylindrical experimental container 3, respectively. The upper fixing part 231 is made of an arc-shaped open top, the lower fixing part 232 is formed in an annular shape to wake the lower end of the experimental container (3). A penetrating portion 233 is formed between the upper fixing portion 231 and the lower fixing portion 232 so that the left and right arc-shaped fixing pieces constituting the upper fixing portion 231 have elasticity capable of moving at a predetermined interval from side to side. The lower fixing portion 232 has an elasticity that can move back and forth a predetermined interval. Therefore, the lower end of the experimental container 231 is inserted into the lower part 232 and the upper end of the experimental container 231 is pushed downward through the opening 234 formed at the upper end of the upper fixing part 231 to be fixed. Can be.

그리고 상기 칩안착부(24)는 상기 마이크로 칩(5)이 들어갈 수 있도록 일정한 깊이로 형성된 안착홈(241)으로 이루어진다. 그리고 상기 안착홈(241)의 일측에는 마이크로 칩(5)의 일 측면을 고정하는 고정돌기(242)가 돌출되어 있고, 타측에는 상기 마이크로 칩(5)을 안착홈(241)에 삽입할 때 좌우로 일정 거리 이동하는 탄성돌기(243)가 형성되어 있다. 또한, 상기 탄성돌기(243)의 상단부에는 상기 마이크로 칩(5) 쪽으로 일정 길이 돌출되게 걸림턱(245)이 형성되고, 이 두 개의 고정돌기(242) 사이에는 원호형의 홈(245)이 형성되어 마이크로 칩(5)을 안착홈(241)에서 꺼낼 때 손가락이 약간 들어갈 수 있도록 한다. 또한, 상기 탄성돌기(243)의 하단에는 관통부(247)가 형성되어 상기 탄성돌기(243)이 탄성을 갖도록 한다. And the chip seat 24 is made of a seating groove 241 formed to a predetermined depth so that the micro chip (5) can enter. And one side of the seating groove 241 is a fixing protrusion 242 for fixing one side of the microchip 5 protrudes, the other side when the microchip 5 is inserted into the seating groove 241 left and right The elastic protrusions 243 moving at a predetermined distance are formed. In addition, a latching jaw 245 is formed at an upper end of the elastic protrusion 243 to protrude a predetermined length toward the microchip 5, and an arc-shaped groove 245 is formed between the two fixing protrusions 242. When the microchip 5 is taken out of the seating groove 241 to allow the finger to enter slightly. In addition, a through part 247 is formed at a lower end of the elastic protrusion 243 to allow the elastic protrusion 243 to have elasticity.

그리고 상기 용기세움부(25)는, 상기 용기고정부(23)의 하부에 형성되고 상기 실험플레이트(2)의 외측으로 일정 길이 돌출되게 형성되는 3개의 원통형 고정통(251)으로 이루어진다. 상기 고정통(251)은 실험용기(3)의 하단부가 일정 깊이 들어갈 수 있는 크기의 원통으로 이루어진다. 본 명세서와 도면에서는 3개의 실험용기(3)와 하나의 마이크로 칩(5)이 도시되어 있으나 이것으로 한정되지는 않는다. 즉, 실험플레이트(2)에 고정할 수 있는 실험용기(3)나 마이크로 칩(5)의 수는 본 명세서나 도면에 있는 것으로 한정되지 않는다. And the container upholstery portion 25 is formed in the lower portion of the container fixing portion 23 and consists of three cylindrical fixing cylinder 251 is formed to protrude a predetermined length to the outside of the test plate (2). The fixed cylinder 251 is made of a cylinder sized to enter a predetermined depth of the lower end of the experimental container (3). In the present specification and drawings, three lab vessels 3 and one microchip 5 are illustrated, but are not limited thereto. That is, the number of the test vessel 3 or the microchip 5 that can be fixed to the test plate 2 is not limited to that in the present specification or drawings.

이어서, 상기 마이크로 칩(5)은 도 6 및 7에서 보는 바와 같이, 투명한 고분자재료로 이루어진 일정한 두께의 기판(51)을 포함한다. 상기 기판(51)에는 하나의 시료챔버(53)와 5개의 시약챔버(55) 그리고 상기 하나의 시료챔버(53)와 5개의 시약챔버(55)를 연결하는 5개의 혼합챔버(54)가 형성된 기판(51)을 포함한다. 바람직하게 상기 시료챔버(53)는 기판(51)을 상하로 관통하여 이루어진다. 그리고 상기 시약챔버(55)는 기판(51)의 하면에 일정한 깊이로 원형 홈을 형성하여 이루어진다. 또한, 상기 혼합채널(54)은 기판(51)의 하면에 일정한 폭과 길이의 홈을 형성하여 이루어진다. Subsequently, the microchip 5 includes a substrate 51 having a constant thickness made of a transparent polymer material, as shown in FIGS. 6 and 7. One substrate chamber 53 and five reagent chambers 55 and five mixing chambers 54 connecting the one sample chamber 53 and five reagent chambers 55 are formed on the substrate 51. It includes a substrate 51. Preferably, the sample chamber 53 penetrates up and down the substrate 51. The reagent chamber 55 is formed by forming a circular groove at a predetermined depth on the lower surface of the substrate 51. In addition, the mixing channel 54 is formed by forming a groove having a predetermined width and length on the lower surface of the substrate 51.

그리고 기판(51)의 상면에는 시료를 주입할 수 있도록 시료주입구(53a)가 형성된다. 상기 시료주입구(53a)는 시료챔버(53)의 개방된 상단에 의해 형성된다. 그리고 다수의 시약챔버(55)에 시약을 주입할 수 있도록 다수의 시약주입구(55a)가 형성된다. 상기 시약주입구(55a)는 기판(51)의 상면에 일정한 폭과 깊이로 원형 홈을 형성하여 이루어진다. 이때, 시약주입구(54a)의 지름은 시약챔버(55)의 지름보다 작게 형성되고 깊이는 상기 시약챔버(55)와 연통하도록 한다. 따라서 상기 시약주입구(54a)와 시약챔버(55) 사이에는 일정한 폭으로 단턱(55b)이 형성된다. The sample inlet 53a is formed on the upper surface of the substrate 51 to inject the sample. The sample inlet 53a is formed by an open upper end of the sample chamber 53. A plurality of reagent inlets 55a are formed to inject reagents into the plurality of reagent chambers 55. The reagent inlet 55a is formed by forming a circular groove with a predetermined width and depth on the upper surface of the substrate 51. At this time, the diameter of the reagent inlet (54a) is formed smaller than the diameter of the reagent chamber 55 and the depth to communicate with the reagent chamber (55). Therefore, the step 55b is formed between the reagent inlet 54a and the reagent chamber 55 at a predetermined width.

그리고 상기 시료챔버(53)는 시약챔버(55)에 비해 상대적으로 큰 지름으로 이루어진다. 예를 들어, 시료챔버(53)를 통해 주입되는 시료가 다수의 시약챔버(55)로 공급되는 동안에 시료챔버(53)로 주입되는 시료가 넘치지 않을 정도의 크기로 이루어진다. 그리고 다수의 시약챔버(55)는 근접하게 일렬로 배열되고, 다수의 혼합채널(54)은 다수의 시약챔버(55)와 하나의 시료챔버(54)를 연결할 수 있도록 형성된다. The sample chamber 53 has a relatively large diameter compared to the reagent chamber 55. For example, while the sample injected through the sample chamber 53 is supplied to the plurality of reagent chambers 55, the sample injected into the sample chamber 53 is large enough not to overflow. In addition, the plurality of reagent chambers 55 are arranged in close proximity to each other, and the plurality of mixing channels 54 are formed to connect the plurality of reagent chambers 55 and one sample chamber 54.

또한, 상기 혼합채널(54)은 혼합채널부(541)와 협소채널부(542)의 두 부분으로 구분된다. 상기 혼합채널부(541)는 시약챔버(55)와 유사한 폭과 높이를 갖는 홈으로 이루어지고 상기 시약챔버(55)와 연결되어 시료챔버(54) 쪽으로 일정한 길이 연장된다. 상기 협소채널부(542)는 상기 혼합채널부(541)에 비해 작은 지름과 높은 높이를 갖는 홈으로 이루어지고 상기 시료챔버(53)와 연결되고 시액챔버(53) 쪽으로 일정 길이 연장되어 혼합채널부(541)이 연결된다. 그리고 평면도에서 볼 때 상기 혼합채널부(541)는 직선으로 이루어지는데 상기 협소채널부(542)의 일부는 일정한 각도로 구부러진다. 그리고 상기 혼합채널부(541)와 협소채널부(542) 사이에는 일정한 높이와 폭으로 단턱(543)이 형성된다. In addition, the mixed channel 54 is divided into two parts, the mixed channel portion 541 and the narrow channel portion 542. The mixing channel part 541 is formed of a groove having a width and a height similar to that of the reagent chamber 55, and is connected to the reagent chamber 55 to extend a predetermined length toward the sample chamber 54. The narrow channel part 542 is formed of a groove having a smaller diameter and a higher height than the mixing channel part 541, is connected to the sample chamber 53, and extends a predetermined length toward the reagent chamber 53 so that the mixed channel part is 542. 541 is connected. In addition, in the plan view, the mixing channel part 541 is formed in a straight line, and a part of the narrow channel part 542 is bent at a predetermined angle. A stepped 543 is formed between the mixed channel part 541 and the narrow channel part 542 at a constant height and width.

따라서 상기 시료챔버(53)에 주입되는 시료는 협소채널부(542)와 혼합채널부(541)를 거쳐 다수의 시약챔버(55)로 이송된다. 그리고 상기 혼합채널부(541)에서는 시약챔버(55)에서 공급되는 시약과 시료챔버(53)에서 공급되는 시료가 혼합되어 반응하게 된다. 반면에 상기 혼합채널부(541) 내의 혼합액은 상기 협소채널부(542)로 인해서 시료챔버(53)로 역류하지 않게 된다. 즉, 협소채널부(542)는 지름이 상대적으로 적고 시료챔버(53)의 내부에는 일정량의 시료가 남아 있기 때문에 혼합채널부(541) 내의 혼합액은 시료챔버(53)로 역류하지 못하게 된다. Therefore, the sample injected into the sample chamber 53 is transferred to the plurality of reagent chambers 55 through the narrow channel portion 542 and the mixing channel portion 541. In the mixing channel part 541, the reagent supplied from the reagent chamber 55 and the sample supplied from the sample chamber 53 are mixed and reacted. On the other hand, the mixed liquid in the mixing channel part 541 does not flow back into the sample chamber 53 due to the narrow channel part 542. That is, since the narrow channel portion 542 has a relatively small diameter and a certain amount of sample remains inside the sample chamber 53, the mixed liquid in the mixed channel portion 541 does not flow back to the sample chamber 53.

이어서, 상기 기판(51)의 하면에는 밀봉필름(52)이 접착된다. 상기 밀봉필름(52)은 기판(51)의 하면에 부착되어 다수의 시약챔버(55)와 혼합채널(54) 그리고 하나의 시료챔버(53)의 개방된 하단을 폐쇄하는 역할을 한다. 또한, 상기 밀봉필름(52)은 박막 필름으로 이루어져 그 하부에 설치되는 PCR 장치의 히터부의 열과 냉기를 상기 시약챔버(55)와 혼합채널(54)로 신속하게 전달하는 역할도 수행한다. 이를 위해 상기 밀봉필름(52)은 열전달효율이 우수한 금속이나 고분자물질로 이루어지거나 나노 탄소 또는 탄소튜브를 포함하는 고분자물질로 이루어진다. 아울러, 상기 밀봉필름(52)은 시료챔버(53)에 주입된 시료를 무동력으로 다수의 혼합채널(54)을 통해 다수의 시약챔버(55)로 신속하게 이송하는 역할도 수행한다.Subsequently, the sealing film 52 is adhered to the lower surface of the substrate 51. The sealing film 52 is attached to the lower surface of the substrate 51 and serves to close the open lower ends of the plurality of reagent chambers 55, the mixing channel 54, and one sample chamber 53. In addition, the sealing film 52 is made of a thin film and also serves to quickly transfer the heat and cold of the heater portion of the PCR device installed below the reagent chamber 55 and the mixing channel 54. To this end, the sealing film 52 is made of a metal or polymer material having excellent heat transfer efficiency or made of a polymer material including nano carbon or carbon tube. In addition, the sealing film 52 also serves to quickly transfer the sample injected into the sample chamber 53 to the plurality of reagent chambers 55 through the plurality of mixing channels 54 with no power.

이를 위해 상기 밀봉필름(52)의 표면은 친수성을 갖도록 처리되어야 한다. 즉, 통상의 플라스틱제의 밀봉필름(52)은 그 표면이 소수성을 띠거나 +전하로 대전 된 상태이기 때문에 -전하를 갖는 시료를 시료챔버(53)에 주입할 때 신속하게 이송되지 않거나 불균등하게 분배되는 문제가 있다. 이러한 문제를 해결하기 위해서 종래에는 기판(51)을 경사지게 기울이거나 펌프 또는 원심력 등의 동력을 이용하여 시료를 이송하였으나 구조가 복잡해지는 문제가 있었다. 그러나 본 발명은 밀봉필름(52)은 화학적 처리, 자외선 조사, 플라즈마 처리 등의 방법으로 그 표면이 친수성을 갖도록 처리하여 무동력으로 시료를 이송할 수 있게 된다. To this end, the surface of the sealing film 52 should be treated to have hydrophilicity. That is, since the sealing film 52 made of ordinary plastic is hydrophobic or positively charged, its surface is not quickly transferred or unevenly when the sample having the charge is injected into the sample chamber 53. There is a problem with distribution. In order to solve this problem, conventionally, the substrate 51 is tilted inclined or the sample is transferred using a power such as a pump or centrifugal force, but there is a problem in that the structure becomes complicated. However, in the present invention, the sealing film 52 is treated such that the surface has hydrophilicity by chemical treatment, ultraviolet irradiation, plasma treatment, etc., so that the sample can be transported without force.

한편, 밀봉필름(52)은 플라즈마 처리를 이용하여 친수성을 갖도록 처리할 수 있으나 공기 중에 노출되면 친수성의 효과가 오래가지 못한다. 또한, 친수성 처리된 밀봉필름(52)은 접착제가 잘 붙지 않기 때문에 기판(51)의 하면에 밀봉필름(52)이 부착할 수 없는 문제가 있다. 이에 따라, 본 발명의 마이크로 칩(5)에서는, 상기 기판(51)의 하면에 밀봉필름(21)을 접착한 다음 플라즈마 처리를 한다. 그러면 상기 시료챔버(53)의 시료주입구(53a)와 다수의 시약주입구(55a) 를 통해 플라즈마가 기판(51)의 하면에 부착된 밀봉필름(21)의 표면을 친수성으로 처리하게 된다. 즉, 상기 시료챔버(53), 다수의 시약챔버(55) 및 다수의 혼합채널(54)을 폐쇄하고 있는 밀봉필름의 표면만을 친수성으로 처리할 수 있다. 그리고 플라즈마 처리된 마이크로 칩(5)은 알루미늄으로 이루어진 기밀봉투에 보관하여 유통함으로써 외기와 접촉하지 않도록 하여 친수성의 효과가 유지될 수 있도록 한다. Meanwhile, the sealing film 52 may be treated to have hydrophilicity by using plasma treatment, but when exposed to air, the effect of hydrophilicity does not last long. In addition, the hydrophilic sealing film 52 has a problem that the sealing film 52 cannot be attached to the lower surface of the substrate 51 because the adhesive does not adhere well. Accordingly, in the microchip 5 of the present invention, the sealing film 21 is adhered to the lower surface of the substrate 51 and then subjected to plasma treatment. The surface of the sealing film 21 attached to the lower surface of the substrate 51 is hydrophilically treated by the plasma through the sample inlet 53a and the plurality of reagent inlets 55a of the sample chamber 53. That is, only the surface of the sealing film closing the sample chamber 53, the plurality of reagent chambers 55, and the plurality of mixing channels 54 may be hydrophilically treated. In addition, the plasma-treated microchip 5 is kept in a hermetically sealed bag made of aluminum so as not to come into contact with the outside air so that the hydrophilic effect can be maintained.

그리고 상기 기판(51)의 하면에는 시료챔버(53), 다수의 시약챔버(55) 및 혼합채널(54)을 따라 일정한 높이로 돌출부(58)가 형성된다. 또한, 이들을 감싸도록 사각 형으로 돌출부(59)도 형성된다. 이들 돌출부(58)(59)는 밀봉필름(52)과 기판(51) 사이의 접촉면적을 최소화하여 밀봉필름(52)을 쉽게 접착할 수 있게 한다. 또한, 상기 기판(51)의 상면에는 시료주입구(53a)와 다수의 시약주입구(55a)를 폐쇄하는 스티커(57)가 설치될 수 있다. A protrusion 58 is formed on the lower surface of the substrate 51 at a predetermined height along the sample chamber 53, the plurality of reagent chambers 55, and the mixing channel 54. In addition, protrusions 59 are also formed in a rectangular shape so as to surround them. These protrusions 58 and 59 minimize the contact area between the sealing film 52 and the substrate 51 to facilitate the adhesion of the sealing film 52. In addition, the upper surface of the substrate 51 may be provided with a sticker 57 for closing the sample inlet (53a) and a plurality of reagent inlet (55a).

이와 같이, 상기 마이크로 칩(5)은 하나의 시료챔버(53)에 주입되는 단일시료가 밀봉필름(52)의 친수성으로 처리된 표면을 통해 다수의 시약챔버(55)에 신속하게 분주할 수 있다. 또한, 시료가 밀폐된 혼합채널(84)을 통해 분주되기 때문에 시료를 분주하는 과정에서 피펫이나 팁을 사용하지 않고 외기와도 접촉하지 않기 때문에 다른 시약이나 이물질이 유입되지 않아서 단일시료에 대한 신뢰도가 높아진다. As such, the microchip 5 may rapidly dispense a single sample injected into one sample chamber 53 into a plurality of reagent chambers 55 through a hydrophilic surface of the sealing film 52. . In addition, since the sample is dispensed through the sealed mixing channel 84, the pipette or tip is not used in the process of dispensing the sample, and no contact with external air is introduced, so that no other reagents or foreign substances are introduced. Increases.

한편, 상기 다수의 시약챔버(55)에는 시약주입구(55a)를 통해 시약이 주입된다. 예를 들어, 시약에는 형광염료나 프로브 등을 포함된다. 그리고 상기 시약챔버(55)에 주입된 시약은 동결 건조하여 시약챔버(55)의 바닥 즉, 밀봉필름(52)의 표면에 고착될 수 있다. 이때, 다수의 시약챔버(55)에 서로 다른 시약을 주입하는 작업은 정밀성이 요구되므로 전문가에 의해 실험실에서 이루어질 수 있다. 따라서 현장에서는 채취된 시료를 상기 시료챔버(53)에 주입하는 것만으로 서로 다른 시약과 시료를 반응시킬 수 있게 된다.Meanwhile, reagents are injected into the plurality of reagent chambers 55 through a reagent inlet 55a. For example, reagents include fluorescent dyes, probes, and the like. The reagent injected into the reagent chamber 55 may be freeze-dried and adhered to the bottom of the reagent chamber 55, that is, the surface of the sealing film 52. In this case, the operation of injecting different reagents into the plurality of reagent chambers 55 may be performed in the laboratory by an expert because precision is required. Therefore, in the field, it is possible to react different reagents and samples by simply injecting the collected sample into the sample chamber 53.

이어서, 상기 시료분쇄튜브(7)는 생물학적 시료를 준비할 때 사용하는 것으로, 식물, 육류, 씨앗 등 대상이 되는 시료를 분쇄 또는 파쇄하기 위한 것이다. 이를 위해 상기 시료분쇄튜브(7)는, 일정한 크기로 이루어진 플라스틱튜브(71)와, 상기 플라스틱튜브(71)의 내부로 삽입되고 선단이 지름이 확대되는 분쇄봉(72)을 포함한다. 즉, 상기 분쇄봉(72)의 선단에는 지름이 확대되어 시료를 분해할 수 있도록 한 분쇄부(721)가 형성되고 상단에는 손가락으로 잡을 수 있는 손잡이(722)가 일체로 형성된다. 그리고 손잡이(722)의 하단에는 지름을 확대되어 분쇄과정에서 시료가 튀는 것을 차단하는 차단부(723)가 형성된다. 따라서 상기 플라스틱(7)의 내부에 일정량의 시료(고기조각이나 패치)와 완충액을 넣고 분쇄봉(72)을 상하로 이동하여 찧거나 좌우로 문질러서 시료를 분쇄할 수 있다. 그러나 분쇄봉(72)은 크기가 작고 비교적 약하기 때문에 시료가 충분히 분쇄되지 않고 사용이 다소 불편한 단점이 있다.Subsequently, the sample grinding tube 7 is used to prepare a biological sample, and is used to grind or crush a target sample such as a plant, meat, or seed. To this end, the sample grinding tube 7 includes a plastic tube 71 having a predetermined size, and a grinding rod 72 inserted into the plastic tube 71 and having a tip end thereof enlarged in diameter. That is, the tip of the grinding rod 72 is enlarged in diameter to form a crushing portion 721 for disassembling the sample, the upper end of the handle 722 is formed integrally with the fingers. And the lower end of the handle 722 is formed a blocking portion 723 is enlarged diameter to block the splashing of the sample during the grinding process. Therefore, a certain amount of sample (meat pieces or patches) and buffer are put into the plastic 7, and the sample can be crushed by moving the grinding rod 72 up and down, or by rubbing from side to side. However, since the grinding rod 72 is small in size and relatively weak, there is a disadvantage in that the sample is not sufficiently crushed and somewhat inconvenient to use.

도 9 및 도 10에는 시료분쇄튜브(7)의 다른 실시 예가 도시되어 있다. 도시된 바와 같이, 본 실시 예의 시료분쇄튜브(7)는 일정한 크기로 이루어지고 하단이 폐쇄된 고무튜브(73)와, 상기 고무튜브(73)의 내측면에 일체로 부착된 다수 개의 분쇄포(74)와, 상기 고무튜브(73)의 상단에 형성된 개구부에 설치되는 일정한 지름의 원통형 본체(75)를 포함한다. 그리고 상기 원통형 본체(75)는 상하로 관통되어 시료를 넣거나 추출할 수 있도록 되어 있고 그 상단에는 뚜껑(76)이 설치되어 있다. 바람직하게 상기 원통형 본체(75)의 외주면에는 일정한 길이로 원형 홈(752)이 형성된다. 그리고 상기 원통형 본체(75)에 끼워진 고무튜브(73)의 외주면에는 상기 원형 홈(752)에 대응하게 고정링(753)이 설치되어 상기 고무튜브(73)가 쉽게 빠지지 않도록 한다.9 and 10 show another embodiment of a sample grinding tube 7. As shown, the sample grinding tube (7) of the present embodiment is made of a predetermined size and the bottom of the rubber tube 73 is closed, a plurality of crushing cloth integrally attached to the inner surface of the rubber tube (73) 74 and a cylindrical body 75 having a constant diameter installed in an opening formed at an upper end of the rubber tube 73. And the cylindrical body 75 is penetrated up and down so that the sample can be put or extracted, the top of the lid 76 is provided. Preferably, the outer circumferential surface of the cylindrical body 75 is formed with a circular groove 752 to a predetermined length. In addition, a fixing ring 753 is installed on the outer circumferential surface of the rubber tube 73 fitted to the cylindrical main body 75 so as to prevent the rubber tube 73 from being easily removed.

즉, 본 실시 예의 시료분쇄튜브(7)는 종래의 플라스틱 튜브(71)를 고무튜브(73)로 교체하고, 분쇄봉(72) 대신에 상기 고무튜브(73)의 내부에 다수 개의 분쇄포(74)를 부착한 것을 특징으로 한다. 이때 상기 분쇄포(74)는 거칠거칠한 표면을 갖고 있다. 예를 들어, 상기 분쇄포(74)는 금속이나 합성섬유를 직조하여 휘어지는 성질을 가지면서 표면이 거칠거칠한 섬유로 이루어지거나 고무나 세라믹 또는 가요성 플라스틱판의 표면에 다이아몬드나 유릿가루 등의 경도가 높은 가루를 부착하여 꺼칠꺼칠한 표면을 갖도록 한다.  That is, the sample grinding tube 7 of the present embodiment replaces the conventional plastic tube 71 with the rubber tube 73, and instead of the grinding rod 72, a plurality of grinding cloths (the inside of the rubber tube 73) 74) is attached. At this time, the crushed cloth 74 has a rough surface. For example, the pulverizing cloth 74 is made of a fiber having a rough surface while bending the metal or synthetic fibers, or the hardness of diamond or glass powder on the surface of the rubber, ceramic or flexible plastic sheet Attach a high powder to have a dull surface.

따라서 상기 고무튜브(73)의 내부에 일정량의 시료와 완충액을 넣고 두 개의 손가락으로 고무튜브(73)의 양쪽면을 잡고 누르면서 문지르면 분쇄포(74) 사이에 있는 시료가 분쇄된다. 특히, 본 실시 예의 시료분쇄튜브(7)는 손가락의 강한 힘으로 시료를 누르거나 문지를 수 있기 때문에 시료를 신속하고 충분하게 분쇄할 수 있다. Therefore, a predetermined amount of sample and a buffer solution are put into the rubber tube 73, and both fingers of the rubber tube 73 are rubbed while pressing and holding the two surfaces of the rubber tube 73 to crush the sample between the grinding cloths 74. In particular, the sample grinding tube 7 of the present embodiment can press or rub the sample with a strong force of the finger, so that the sample can be crushed quickly and sufficiently.

이하에서는 도 13을 참조하여 본 발명에 따른 분자진단용 전처리 키트(1)의 사용방법에 대해서 설명한다.Hereinafter, a method of using the molecular diagnostic pretreatment kit 1 according to the present invention will be described with reference to FIG. 13.

전술한 바와 같이, 본 발명의 분자진단용 전처리 키트(1)는 하나의 밀봉된 봉투 안에 실험플레이트(2), 3개의 실험용기(3), 마이크로 칩(5), 일회용 스포이트(6), 시료분쇄튜브(7) 및 2개의 팁(8)이 들어 있기 때문에 편리하게 휴대하여 질병이 발생한 현장에서 분자진단을 위한 PCR를 수행할 수 있다. As described above, the molecular diagnostic pretreatment kit 1 of the present invention includes a test plate 2, three test vessels 3, a microchip 5, a disposable dropper 6, and a sample grinding in one sealed bag. Since the tube 7 and the two tips 8 are contained, it is convenient to carry and perform PCR for molecular diagnosis at the site of the disease.

먼저, 상기 시료분쇄튜브(7)를 사용하여 식물, 육류, 씨앗 등 대상이 되는 시료(조직, 패치)를 분쇄한다. 즉, 플라스틱 튜브(71)에 시료와 완충액을 넣고 분쇄봉(72)으로 찧거나 문질러서 시료를 분해하고 균질화할 수 있다. 또한, 도 9 및 도 10에 도시된 바와 같이, 고무튜브(73)에 시료와 완충액을 넣고 손가락으로 고무튜브(73)의 양쪽면을 문지르면 내측면에 부착된 분쇄포(74) 사이에 있는 시료가 으깨어지고 부서져서 분쇄되고 균질화될 수 있다.First, the sample grinding tube 7 is used to grind a sample (tissue, patch), such as a plant, meat, or seed. That is, the sample and the buffer solution may be put in the plastic tube 71, and the sample may be decomposed and homogenized by crushing or rubbing with the grinding rod 72. In addition, as shown in Figures 9 and 10, the sample and the buffer solution in the rubber tube 73, rub the both sides of the rubber tube 73 with a finger, the sample between the crushed cloth 74 attached to the inner surface It can be crushed and broken to break up and homogenize.

이어, 첫 번째 실험용기(31)를 용기세움부(25)의 첫 번째 고정통(251a)에 수직으로 세우고, 뚜껑(32)을 개방한 다음, 덜 깨진 조직이나 핵산 추출시 문제를 야기하는 파편(Debris) 등을 제거되도록 시료분쇄튜브(7)의 상등액을 일정량 추출하여 상기 첫 번째 실험용기(3a)에 주입한다. 이때, 상기 실험용기(32a)에는 세포벽을 파괴하여 핵산이 노출되도록 하는 용해 버퍼(Lysis buffer)가 들어 있다. Subsequently, the first experimental container 31 is placed perpendicular to the first fixed container 251a of the container assembly 25, the lid 32 is opened, and the fragments causing problems when extracting less broken tissue or nucleic acid. Extract the supernatant of the sample grinding tube 7 so as to remove the debris, etc., and inject it into the first experimental container 3a. At this time, the experimental container (32a) contains a lysis buffer (Lysis buffer) to destroy the cell wall to expose the nucleic acid.

이어서 두 번째 실험용기(3b)를 용기세움부(25)의 두 번째 고정통(251b)에 수직으로 세우고, 핵산과 용해버퍼가 포함된 혼합물의 일정량을 추출하여 상기 실험용기(3b)에 주입한다. 이때, 상기 실험용기(3b)에는 희석 완충액(Direct lysis buffer(DLB)이 들어 있어 PCR 저해물질의 농도를 낮춰준다. 반대로 두 번째 실험용기(3b)에 들어있는 희석액의 일정량을 추출하여 핵산과 용해버퍼가 들어 있는 첫 번째 실험용기(3a)에 주입하는 것도 가능하다.Subsequently, the second experimental container 3b is placed perpendicular to the second fixed container 251b of the container forming unit 25, and a predetermined amount of the mixture containing the nucleic acid and the dissolution buffer is extracted and injected into the experimental container 3b. . At this time, the experimental vessel (3b) contains a dilution buffer (Direct lysis buffer (DLB) to reduce the concentration of the PCR inhibitors.) On the contrary, by extracting a predetermined amount of the diluent contained in the second experimental vessel (3b) to dissolve with nucleic acid It is also possible to inject into the first experimental container 3a containing the buffer.

그리고 세 번째 실험용기(3c)를 용기세움부(25)의 세 번째 고정통(251c)에 수직으로 세우고, 희석 완충액으로 희석된 시료의 일정량을 추출하여 세 번째 실험용기(3c)에 주입한다. 이때 세 번째 실험용기(3c)에는 PCR용 마스터 혼합물(master mix)이 들어있다. 마스터 혼합물은 PCR에 필요한 Primer, DNA Polymerase 등이 포함된 혼합액이다. 이때, 마스터 혼합물이 동결건조된 상태일 수 있다. And the third experimental container (3c) is placed perpendicular to the third fixed container (251c) of the container tank 25, and a predetermined amount of the sample diluted with dilution buffer is extracted and injected into the third experimental container (3c). At this time, the third experimental container (3c) contains a master mix (master mix) for PCR. The master mixture is a mixture containing Primer, DNA Polymerase, etc. necessary for PCR. At this time, the master mixture may be in a lyophilized state.

끝으로 시료와 동력 건조된 마스터 혼합물이 충분히 혼합된 시료의 일정량을 일회용 스포이트(6)를 이용하여 일정량 추출하여 시험플레이트(2)의 안착홈(241)에 안착되어 있는 마이크로 칩(5)의 하나의 시료챔버(63)에 주입한다. 그러면 상기 시료챔버(53)에 시료를 주입하는 동시에 다수의 혼합채널(54)을 통해 다수의 시약챔버(55)로 시료가 이송된다. 그리고 각 시약챔버(55)의 바닥에 고착된 시약들이 용해되어 시료와 반응하게 된다. 이때, 시약과 시료의 혼합물은 다수의 혼합채널(54)에 충전되지만 협소채널부(542)에 의해 시료챔버(53)로 역류되는 않는다. Finally, a certain amount of the sample sufficiently mixed with the sample and the power-dried master mixture is extracted using a single-use dropper 6 and one of the microchips 5 seated in the seating groove 241 of the test plate 2. Is injected into the sample chamber (63). Then, the sample is injected into the sample chamber 53 and the sample is transferred to the plurality of reagent chambers 55 through the plurality of mixing channels 54. Then, the reagents fixed on the bottom of each reagent chamber 55 are dissolved to react with the sample. At this time, the mixture of the reagent and the sample is filled in the plurality of mixing channels 54 but is not flowed back to the sample chamber 53 by the narrow channel portion 542.

이와 같이, 각 시약챔버(55)와 혼합채널(54)에 시료가 충전되면, 기판(51)의 표면에 스티커(57)를 부착하여 주입구를 밀폐시킨 상태에서, 도시되지 않은 가열 냉각 사이클을 수행하기 위한 PCR 장치에 상기 마이크로 칩(5)을 장착하여 목표 유전자를 대량으로 증폭하게 된다. 그리고 증폭된 유전자와 반응한 형광염료에서 발광하는 형광을 측정하고 별도의 분석과정을 통해 질병의 종류와 유무를 진단할 수 있다. As described above, when the sample is filled in each of the reagent chambers 55 and the mixing channel 54, a sticker 57 is attached to the surface of the substrate 51 to seal the inlet, thereby performing a heating and cooling cycle (not shown). The microchip 5 is mounted on a PCR device for amplifying a large amount of a target gene. In addition, by measuring the fluorescence emitted from the fluorescent dye reacted with the amplified gene and through a separate analysis process it is possible to diagnose the type and presence of the disease.

한편, 상기 시료분쇄튜브(7)를 이용하여 분쇄하고 용해 버퍼(Lysis buffer)로 세포벽을 파괴하여 노출한 핵산의 농도가 매우 낮은 경우에는 별도의 핵산 농축과정을 거칠 필요가 있다. On the other hand, when the concentration of the nucleic acid exposed by crushing using the sample grinding tube 7 and breaking the cell wall with Lysis buffer is very low, it is necessary to go through a separate nucleic acid concentration process.

도 14는 본 발명에 따른 핵산농축튜브(9)의 일 예가 도시되어 있다. 도시된 바와 같이, 상기 핵산농축튜브(9)는 시료를 빨아올리는 흡수재(91)가 충전된 제1 튜브(92)와, 시료를 빨아올리는 동시에 시료에 포함된 이물질을 분리제거하는 여과흡수재(93)가 충전된 제2 튜브(94), 상기 제1 튜브(92)와 제2 튜브(94) 사이에 개재되고 상기 흡수재(91)와 여과흡수재(93)에 긴밀하게 밀착되어 시료에 포함된 핵산을 흡착하여 고정하는 흡착필터(95)를 포함하여 이루어진다. 이때 상기 흡착필터(95)는 다공성 박막으로 필름으로, 시료에 포함된 핵산과 특이하게 결합하는 유리 섬유(glass fiber)나 실리카 막(silica membrane)으로 이루어진다. 즉, 상기 흡착필터(95)는 시료에 포함된 염, 단백질 및 기타 세포 내 화학물질과는 결합하지 않고 핵산에만 특이적으로 결합한다. 14 shows an example of a nucleic acid enrichment tube 9 according to the present invention. As shown, the nucleic acid enrichment tube 9 includes a first tube 92 filled with an absorbent 91 that sucks up a sample, and a filter absorber 93 that separates and removes foreign substances contained in the sample while sucking up the sample. The nucleic acid contained in the sample is interposed between the second tube 94, the first tube 92 and the second tube 94 filled with the c) and is in close contact with the absorbent material 91 and the filter absorbent material 93. Adsorption filter (95) for adsorbing and fixing is made. In this case, the adsorption filter 95 is a porous thin film made of glass fiber or silica membrane that specifically binds to a nucleic acid included in a sample. That is, the adsorption filter 95 does not bind to salts, proteins, and other intracellular chemicals contained in the sample, but specifically binds only to the nucleic acid.

따라서 용해 완충액을 주입하여 핵산이 노출된 시료에 소정량의 결합 완충액(Binding buffer)을 주입한다. 상기 결합 완충액은 시료 내의 핵산이 흡착필터(95)에 특이적으로 결합할 수 있게 한다. 그리고 핵산이 포함된 시료가 들어 있는 실험용기에 본 발명에 따른 핵산농축튜브(9)의 하단부가 잠기도록 꽂아 넣고 일정 시간 기다리면, 상기 핵산농축튜브(9)에 충전된 여과흡수재(93)와 흡수재(91)가 실험용기 내의 시료를 흡수하여 상부로 빨아올린다. 그리고 상부로 올라가는 시료는 여과흡수재(93)를 통과하는 과정에서 시료에 포함된 덜 깨진 조직이나 파편 등 기타 이물질이 제거되고, 상기 흡착필터(95)를 통과하는 동안에 시료에 포함된 핵산이 특이적으로 흡착되어 고정된다. 그리고 시료에 포함된 나머지 지방이나 단백질, 염(salt), 화학물질 등은 시료와 함께 상부로 이송되어 흡수재(91)에 흡수된다. Therefore, a lysis buffer is injected to inject a predetermined amount of binding buffer into the sample to which the nucleic acid is exposed. The binding buffer allows the nucleic acid in the sample to specifically bind to the adsorption filter 95. When the lower end of the nucleic acid concentration tube 9 according to the present invention is inserted into an experimental container containing a sample containing nucleic acid and waits for a predetermined time, the filter absorbent material 93 and the absorbent material filled in the nucleic acid concentration tube 9 are absorbed. (91) absorbs the sample in the experimental container and sucks it upwards. In the process of passing through the filter absorbent 93, less broken tissue or debris and other foreign substances included in the sample are removed, and the nucleic acid contained in the sample is specific while passing through the adsorption filter 95. Is fixed by adsorption. The remaining fats, proteins, salts, chemicals, etc. contained in the sample are transferred to the upper portion together with the sample and absorbed by the absorbent material 91.

그런 다음 상기 핵산농축튜브(9)를 일정량의 세척 완충액(Washing buffer)이 들어 있는 실험용기에 삽입하고 일정 시간 방치하면, 세척 완충액이 여과흡수재(93)와 흡수재(91)에 흡수되어 상부로 이송되면서 여과흡수재(93)와 흡착필터(95)에 있는 염(Salt), 단백질, 지방, 기타 화학물질을 흡수재(91)로 이송하게 된다. 이때, 상기 흡착필터(95)에 흡착되어 있는 핵산은 세척 완충액에 의해 분리되지 않기 때문에 결국 상기 흡착필터(95)에는 순수하게 핵산만 남게 된다.Then, the nucleic acid concentration tube (9) is inserted into an experimental container containing a certain amount of washing buffer (Washing buffer) and left for a certain time, the washing buffer is absorbed by the filter absorbent 93 and the absorbent 91 and transferred to the upper portion. The salt (Salt), protein, fat, and other chemicals in the filtration absorbent 93 and the adsorption filter 95 are transferred to the absorbent 91. At this time, since the nucleic acid adsorbed on the adsorption filter 95 is not separated by the washing buffer, only the nucleic acid remains purely in the adsorption filter 95.

이어, 핵산이 고정된 핵산농축튜브(95)를 건조한 다음, 건조된 흡착필터(95)를 분리하여 Elution Buffer가 들어 있는 실험용기에 일정 시간 담가 놓으면 상기 흡착필터(95)에 고정된 핵산을 분리되게 된다. Elution buffer는 흡착필터(95)에 부착되어 있는 핵산을 분리시키는 완충액이다. Subsequently, the nucleic acid condensation tube 95 having the nucleic acid fixed therein is dried, and the dried adsorption filter 95 is separated and soaked in an experimental container containing an Elution Buffer for a predetermined time to separate the nucleic acid fixed to the adsorption filter 95. Will be. Elution buffer is a buffer for separating the nucleic acid attached to the adsorption filter (95).

상술한 바와 같이, 본 발명의 분자진단용 전처리 키트(1)를 사용하면, 현장에서 분자진단 전처리과정을 신속하고 용이하게 수행할 수 있는 효과가 있다. 즉, 상기 시료분쇄튜브를 이용하여 식물, 육류, 씨앗 등 대상이 되는 시료를 파쇄하여 균질화할 수 있고, 다수 개의 실험용기 및 일회용 스포이트를 이용하여 분쇄된 시료에 용해 완충액 및 희석액 완충액을 순서대로 주입하여 핵산을 추출할 수 있다. 그리고 핵산이 추출된 시료에 PCR 반응을 위한 마스터 혼합물을 주입하고, 마스터 혼합액이 혼합된 시료를 마이크로 칩의 시료챔버에 주입하면 주입과 동시에 다수의 혼합채널을 통해 서로 다른 시약이 들어 있는 다수의 시약챔버로 이송되어 시료와 시약이 반응함으로써 PCR 기반의 분자진단을 위한 전처리과정을 신속하고 용이하게 수행할 수 있는 효과가 있다. As described above, using the molecular diagnostic pretreatment kit (1) of the present invention, there is an effect that can quickly and easily perform the molecular diagnostic pretreatment process in the field. That is, the sample grinding tube can be homogenized by crushing the target sample such as plants, meat, seeds, etc., and injecting the lysis buffer and the diluent buffer into the pulverized sample using a plurality of experimental containers and disposable droppers in order. Nucleic acids can be extracted. Injecting the master mixture for the PCR reaction into the sample extracted nucleic acid, and injecting the sample mixed with the master mixture to the sample chamber of the microchip, a plurality of reagents containing different reagents through a plurality of mixing channels at the same time as the injection The sample and the reagent reacted by being transferred to the chamber have the effect of quickly and easily performing the pretreatment process for PCR-based molecular diagnosis.

또한, 본 발명은 다수 개의 실험용기를 사용할 때 실험플레이트의 용기세움부에 수직으로 세운 상태로 사용할 수 있고, 상기 시료분쇄튜브와 일회용 스포이트 및 다수의 팁을 일회용으로 사용하기 때문에 현장에서 분자진단을 위한 전처리과정을 용이하게 수행할 수 있다. In addition, the present invention can be used in a vertical position in the container upright portion of the test plate when using a plurality of test containers, molecular diagnostics in the field because the sample grinding tube and disposable dropper and a plurality of tips are used for single use The pretreatment process can be easily performed.

또한, 상기 마이크로 칩은 하나의 시료챔버에 주입되는 시료가 밀폐된 다수의 혼합채널을 통해 다수의 시약챔버로 이송되기 때문에 단일시료에 대한 신뢰성이 향상되어 다중진단이 가능하고, 상기 마이크로 칩의 하면에 부착되는 밀봉필름은 친수성 처리되어 시료를 무동력으로 신속하고 균등하게 분주할 수 있는 효과가 있다.In addition, since the microchip is transferred to a plurality of reagent chambers through a plurality of mixed channels in which a sample is injected into one sample chamber, reliability of a single sample is improved, and multi-diagnosis is possible. The sealing film attached to the hydrophilic treatment has the effect of dispensing the sample quickly and evenly with no power.

아울러, 본 발명은 다수의 실험용기, 마이크로 칩이 실험플레이트에 고정된 상태로 하나의 밀봉 봉투로 포장되고, 일회용 스포이트, 시료분쇄튜브 및 다수의 팁은 각각 낱개로 포장한 후 상기 밀봉 봉투에 포장되어 있어 운반이나 보관 중에 오염되는 것을 방지할 수 있다. In addition, the present invention is a plurality of test containers, microchips are packaged in a single sealed bag in a fixed state on the test plate, disposable dropper, sample grinding tube and a plurality of tips are each individually packed after packing in the sealed bag It can prevent contamination during transportation or storage.

이상에서 본 발명에 관한 구체적인 실시 예에 관하여 설명하였으나, 전술된 실시 예는 모든 면에서 예시적인 것이며, 한정적인 것이 아닌 것으로 이해되어야 하며, 본 발명의 범위는 상세한 설명보다는 후술될 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 그 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다. 그리고 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여, 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야 한다. 따라서 본 명세서에 기재된 실시 예와 도면에 도시된 구성은 본 발명의 가장 바람직한 실시 예에 불과하고, 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것을 아니므로, 본 출원시점에서 이들을 대체할 수 있는 균등한 변형 예들이 있을 수 있음을 이해해야 한다. Although specific embodiments of the present invention have been described above, the above-described embodiments are to be understood in all respects as illustrative and not restrictive, and the scope of the present invention is defined by the appended claims rather than the detailed description. It should be construed that all changes or modifications shown and derived from the meaning and scope of the claims and equivalent concepts thereof are included in the scope of the present invention. And the terms or words used in this specification and claims are not to be construed as limiting in their usual or dictionary meanings, and the inventors will appropriately define the concept of terms in order to best describe their invention. Based on the principle that it can, it should be interpreted as meaning and concept corresponding to the technical idea of the present invention. Therefore, the embodiments described in the present specification and the configuration shown in the drawings are only the most preferred embodiments of the present invention, and do not represent all of the technical idea of the present invention, so that equivalent modifications may be substituted for them at the time of the present application. It should be understood that there may be examples.

1: 분자진단용 전처리 복장 2: 실험플레이트
3: 실험용기 5: 마이크로 칩
6: 일회용 스포이트 7: 시료분쇄튜브
8: 팁 9: 핵산농축튜브
23: 용기고정부 24: 칩안착부
25: 용기세움부 31: 용기본체
32: 뚜껑 51: 기판
52: 밀봉필름 53: 시료챔버
54: 혼합채널 55: 시약챔버
55a: 시약주입구 57: 스티커
58,59: 돌출부 71: 플라스틱튜브
72: 분쇄 봉 73: 고무튜브
74: 분쇄로 61: 고무관
67,68: 탄성가압부 91: 흡수재
92: 제1 튜브 93: 여과흡수재
94: 제2 튜브 95: 흡착필터
231: 상부고정부 232: 하부고정부
233: 관통부 241: 안착홈
242: 고정 돌기 243: 탄성돌기
251: 고 정통 541: 혼합채널부
542: 협소채널부 543: 단턱1: Pretreatment Clothing for Molecular Diagnostics 2: Experiment Plate
3: container 5: microchip
6: Disposable dropper 7: Sample grinding tube
8: Tip 9: nucleic acid enrichment tube
23: container fixing 24: chip seat
25: container container 31: container body
32: lid 51: substrate
52: sealing film 53: sample chamber
54: mixing channel 55: reagent chamber
55a: reagent inlet 57: sticker
58, 59: protrusion 71: plastic tube
72: grinding rod 73: rubber tube
74: grinding furnace 61: rubber tube
67, 68: elastic pressing unit 91: absorbent material
92: first tube 93: filter absorbing material
94: second tube 95: adsorption filter
231: upper fixation 232: lower fixation
233: through part 241: seating groove
242: fixing projections 243: elastic projections
251: high authentic 541: mixing channel portion
542: narrow channel portion 543: step

Claims (17)

다수의 실험용기, 마이크로 칩, 일회용 스포이트, 시료분쇄튜브, 다수의 팁 및 상기 다수의 실험용기와 마이크로 칩이 고정되어 있는 실험플레이트를 포함하는 분자진단용 전처리 키트에 있어서,
상기 실험플레이트는, 일정한 두께의 플라스틱판으로 이루어지고, 상면 일 측에는 다수 개의 실험용기를 눕힌 상태로 끼워서 고정할 수 있는 용기고정부가 구비되고, 타 측에는 마이크로 칩을 삽입하여 고정할 수 있는 칩안착부가 형성되며, 상기 용기고정부의 하부에는 다수 개의 실험용기를 수직으로 세워서 고정할 수 있는 용기세움부가 구비되는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.In the pre-treatment kit for molecular diagnostics comprising a plurality of lab vessels, microchips, disposable dropper, sample grinding tube, a plurality of tips, and a plurality of lab vessels and the test plate is fixed to the microchip,
The test plate is made of a plastic plate of a constant thickness, the upper surface is provided with a container fixing portion that can be fixed by inserting a plurality of test containers in a lying state on one side, and a chip seat that can be fixed by inserting a microchip on the other side Is formed, the lower portion of the container fixing portion is a molecular diagnostic pre-treatment kit, characterized in that the container upset portion is provided that can be fixed by standing vertically a plurality of experimental containers. 제1항에 있어서,
상기 실험용기는 원통형으로 이루어진 용기본체와 상기 용기본체의 개방된 상단에 결합하는 뚜껑으로 이루어지되, 상기 용기본체에는 시료에 포함된 세포벽을 파괴하기 위한 용해 버퍼, PCR 저해물질을 희석하기 위한 희석 완충액 및 PCR용 마스터 혼합액 등이 각각 들어있는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method of claim 1,
The experimental container is made of a cylindrical container body and a lid coupled to the open top of the container body, the container body has a lysis buffer for destroying the cell wall contained in the sample, dilution buffer for diluting PCR inhibitors And a master mixed solution for PCR, respectively. 제1항에 있어서,
상기 마이크로 칩은, 사각형으로 이루어진 기판으로 이루어지되, 상기 기판에는 하나의 시료챔버와 다수의 시약챔버 그리고 하나의 시료챔버와 다수의 시약챔벌을 연결하는 다수의 혼합채널이 형성되고, 상기 기판의 하면에는 하나의 시료챔바, 다수의 시약챔버 및 다수의 혼합챔버의 개방된 하단을 폐쇄하는 밀봉필름이 부착되는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method of claim 1,
The microchip is formed of a quadrangle substrate, and a plurality of mixing channels connecting one sample chamber and a plurality of reagent chambers and one sample chamber and a plurality of reagent chambers are formed on the substrate. The pre-treatment kit for molecular diagnosis, characterized in that the sealing film is attached to close the open bottom of one sample chamber, a plurality of reagent chambers and a plurality of mixing chambers. 제1항에 있어서,
상기 일회용 스포이트는 일정 길이의 고무관과, 상기 고무관이 직선상태를 유지하도록 지지하는 본체와, 상기 본체에 일체로 형성되고 상기 고무관의 특정 부분을 가압하도록 형성된 복수 개의 탄성가압부를 포함하는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method of claim 1,
The disposable dropper may include a rubber tube having a predetermined length, a main body for supporting the rubber tube to maintain a straight state, and a plurality of elastic pressing parts formed integrally with the main body and configured to press a specific portion of the rubber tube. Pretreatment kit for molecular diagnosis. 제1항에 있어서,
상기 시료분쇄튜브는, 일정한 크기로 이루어진 플라스틱튜브와, 상기 플라스틱튜브의 내부로 삽입되고 선단에는 지름이 확대된 분쇄부가 형성되고 상단에는 일정한 길이로 손잡이가 형성되는 분쇄 봉을 포함하는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method of claim 1,
The sample grinding tube, characterized in that it comprises a plastic tube made of a constant size, the grinding rod is inserted into the inside of the plastic tube and the end is formed with a crushing portion is enlarged in diameter and the handle is formed at a constant length at the top Pretreatment kit for molecular diagnosis. 제1항에 있어서,
상기 용기고정부는 원통형 실험용기의 상단부와 하단부를 각각 고정할 수 있도록 상부로 돌출되게 형성된 다수 개의 상부고정부와 하부고정부의 쌍으로 이루어지되, 상기 상부고정부는 상단이 개방된 원호형으로 이루어지고, 상기 하부고정부는 실험용기의 하단부가 깨워질 수 있는 환형으로 이루어지며, 상기 상부고정부와 하부고정부 사이에는 일정한 크기로 관통부가 형성되어 상기 상부고정부와 하부고정부에 탄성을 갖도록 하는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method of claim 1,
The container fixing part is composed of a pair of a plurality of upper fixing part and the lower fixing part formed to protrude upward to fix the upper end and the lower end of the cylindrical experimental container, respectively, and the upper fixing part is formed in an arc shape with an open top. The lower fixing part is formed in an annular shape in which the lower end of the test container can be woken up, and a penetration part is formed in a predetermined size between the upper fixing part and the lower fixing part so as to have elasticity in the upper fixing part and the lower fixing part. Molecular diagnostic pretreatment kit. 제6항에 있어서,
상기 칩안착부는 상기 마이크로 칩이 들어갈 수 있도록 일정한 깊이로 형성된 안착홈과, 상기 안착홈에 삽입된 상기 마이크로 칩의 일 측면을 고정할 수 있도록 상기 안착홈의 일측에 복수 개의 고정돌기가 수직으로 돌출되고, 상기 안착홈의 타측에는 상기 마이크로 칩을 안착홈에 삽입할 때 좌우로 일정 거리 이동하고 상단부에는 상기 마이크로 칩 쪽으로 일정 길이 돌출되게 걸림턱이 형성된 탄성돌기를 포함하는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method of claim 6,
The chip seating portion may have a seating groove formed at a predetermined depth to allow the microchip to enter, and a plurality of fixing protrusions may protrude vertically on one side of the seating groove so as to fix one side of the microchip inserted into the seating groove. The other side of the seating groove is moved to the left and right a predetermined distance when the microchip is inserted into the seating groove and the upper end includes a molecular projection characterized in that it comprises an elastic projection formed with a locking projection protruding a predetermined length toward the microchip. Kit. 제7항에 있어서,
상기 용기세움부는, 상기 용기고정부의 하부에 형성되고 상기 실험플레이트의 외측으로 일정 길이 돌출되게 형성되며 상기 실험용기의 하단부가 일정 깊이 들어갈 수 있도록 일정 크기의 원통으로 이루어진 다수 개의 고정통로 이루어지는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method of claim 7, wherein
The container upsetting part is formed at a lower portion of the container fixing part, is formed to protrude a predetermined length to the outside of the test plate, and comprises a plurality of fixed cylinders formed of a cylinder of a predetermined size so that the lower end of the test container can enter a predetermined depth. Molecular diagnostic pretreatment kit. 제3항에 있어서,
상기 시료챔버는 상기 기판을 관통하도록 형성되고, 상기 시료챔버에 주입되는 시료가 다수의 시약챔버로 이송되는 동안에 시료가 넘치지 않을 정도의 크기로 이루어지고, 상기 다수의 시약챔버는 상기 기판의 하면에서 일정한 깊이의 홈을 형성하며, 상기 기판의 상면에는 일정한 깊이의 홈을 형성하여 상기 다수의 시약챔버에 시약을 주입할 수 있는 다수의 시약주입구를 형성되는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method of claim 3,
The sample chamber is formed to penetrate the substrate, and the sample chamber is sized such that the sample does not overflow while the sample injected into the sample chamber is transferred to the plurality of reagent chambers, and the plurality of reagent chambers are formed on the bottom surface of the substrate. Forming a groove of a constant depth, the upper surface of the substrate is formed a groove of a predetermined depth, a plurality of reagent inlet for injecting the reagent into the plurality of reagent chambers, characterized in that the pre-treatment kit for molecular diagnostics. 제9항에 있어서,
상기 혼합채널은 상기 기판의 하면에 일정한 폭과 길이의 홈을 형성하여 이루어지되, 상기 시약챔버와 유사하여진 지름과 높이를 갖는 홈으로 이루어지고 상기 시약챔버와 연결되어 상기 시료챔버 쪽으로 일정한 길이 연장되는 혼합채널부와, 상기 혼합채널부에 비해 작은 지름과 높은 높이를 갖는 홈으로 이루어지고 상기 시료챔버와 연결되고 상기 시액챔버 쪽으로 일정 길이 연장되어 상기 혼합채널부와 연결되는 협소채널부가 형성되고, 상기 혼합채널부와 협소채널부 사이에는 일정한 높이와 폭으로 단턱이 형성되는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method of claim 9,
The mixing channel is formed by forming a groove having a predetermined width and length on the lower surface of the substrate, the groove having a diameter and height similar to that of the reagent chamber and connected to the reagent chamber to extend a predetermined length toward the sample chamber. A narrow channel portion formed of a mixing channel portion and a groove having a smaller diameter and a higher height than the mixing channel portion and connected to the sample chamber and extending a predetermined length toward the reagent chamber to be connected to the mixing channel portion, Pretreatment kit for molecular diagnostics, characterized in that the step is formed between the mixing channel portion and the narrow channel portion with a constant height and width. 제10항에 있어서,
상기 기판의 상면에는 상기 시약챔버의 상부에 형성된 다수의 시약주입구와 상기 시료챔버의 개방된 상단을 폐쇄하기 위한 스티커가 부착되는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method of claim 10,
And a sticker for closing a plurality of reagent inlets formed on an upper portion of the reagent chamber and an open upper end of the sample chamber on an upper surface of the substrate. 제1 항에 내지 제11 항 중 어느 하나의 항에 있어서,
상기 다수의 실험용기, 마이크로 칩, 일회용 스포이트, 시료분쇄튜브, 다수의 팁 및 상기 다수의 실험용기와 마이크로 칩이 고정되어 있는 실험플레이트는 하나의 밀봉봉투에 수납되어 포장되는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method according to any one of claims 1 to 11,
The plurality of test vessels, microchips, disposable dropper, sample grinding tube, a plurality of tips and the plurality of test vessels and the test plate to which the microchips are fixed are stored in one sealed bag and packaged for molecular diagnosis Pretreatment kit. 제2 항, 제9 항 내지 제 11항 중 어느 하나의 항에 있어서,
상기 기판의 하면에 부착되어 밀봉필름의 표면은 친수성 처리된 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method according to any one of claims 2 and 9 to 11,
The surface of the sealing film is attached to the lower surface of the substrate, the molecular diagnostic pretreatment kit, characterized in that the hydrophilic treatment. 제13 항에 있어서,
상기 밀봉필름은 상기 기판의 하면에 부착된 상태로 진공플라즈마 처리하여 상기 시료챔버, 다수의 시약챔버 및 다수의 혼합채널을 폐쇄하고 있는 밀봉필름의 표면이 부분적으로 친수성 처리되는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트.The method of claim 13,
The sealing film is subjected to vacuum plasma treatment while attached to a lower surface of the substrate, and the surface of the sealing film closing the sample chamber, the plurality of reagent chambers, and the plurality of mixing channels is partially hydrophilic. Pretreatment kit. 제14 항에 있어서,
상기 밀봉필름은 나노탄소나 탄소튜브와 같이 열전달율이 우수한 소재가 포함된 고분자물질로 이루어지는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트,The method of claim 14,
The sealing film is a molecular diagnostic pretreatment kit, characterized in that made of a polymeric material containing a material having excellent heat transfer rate, such as nano carbon or carbon tube, 제11 항에 있어서,
상기 시료분쇄튜브는, 일정한 크기로 이루어지고 하단이 폐쇄된 고무튜브와, 상기 고무튜브의 내측면에 일체로 부착되어 있는 다수 개의 분쇄포와, 상기 고무튜브의 상단에 형성된 개구부에 설치되고 일정한 지름의 원통형 본체를 포함하는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트,The method of claim 11, wherein
The sample pulverization tube is made of a constant size and closed rubber bottom, a plurality of crushing cloth is integrally attached to the inner surface of the rubber tube, and installed in the opening formed on the upper end of the rubber tube of a constant diameter Pretreatment kit for molecular diagnosis, characterized in that it comprises a cylindrical body, 제1 항 내지 제5 항 중 어느 하나의 항에 있어서,
상기 반응용기에 들어갈 수 있는 크기로 이루어지고 길이방향으로 연결되는 제1 및 제2 튜브와, 상기 제1 튜브의 내부에 충전되어 상기 방응시료에 들어 있는 시료를 빨아올리는 흡수재와, 상기 제2 튜브의 내부에 충전되고 시료를 빨아올리는 동시에 시료에 포함된 이물질을 분리제거하는 여과흡수재와, 상기 제1 튜브와 제2 튜브 사이에 개재되고 상기 흡수재와 여과흡수재에 긴밀하게 밀착되어 시료에 포함된 핵산을 흡착하여 고정하는 흡착필터를 포함하되, 상기 흡착필터는 다공성 박막의 필름으로서, 시료에 포함된 핵산과 특이하게 결합하는 유리 섬유(glass fiber)나 실리카 막(silica membrane) 등으로 이루어져서 시료에 포함된 염, 단백질 및 기타 세포 내 화학물질과는 결합하지 않고 핵산에만 특이적으로 결합하는 핵산농축튜브를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 분자진단용 전처리 키트,The method according to any one of claims 1 to 5,
A first and a second tube having a size to fit into the reaction vessel and connected in a longitudinal direction, an absorbent material filled in the first tube to suck up the sample contained in the anticorrosive sample, and the second tube Nucleic acid contained in the sample is filled in the inside of the sample and absorbs the sample and at the same time separates and removes foreign matter contained in the sample, interposed between the first tube and the second tube and in close contact with the absorber and the filter absorber It includes an adsorption filter for adsorbing and fixed, wherein the adsorption filter is a film of a porous thin film, made of glass fiber or silica membrane that specifically binds to the nucleic acid contained in the sample, and included in the sample. It further comprises a nucleic acid enrichment tube that does not bind to salts, proteins, and other intracellular chemicals, but specifically to nucleic acids. Molecular diagnostic pretreatment kit,
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